CN108739804A - 球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法 - Google Patents

球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及球孢白僵菌分生孢子及其可湿性粉剂制备方法。本发明是以固态发酵中采用炭化介质作为生产技术的核心，主要用于生物农药球孢白僵菌分生孢子及其可湿性粉剂的生产和加工。(1)采用经过炭化处理的介质(稻壳)，具有多孔、持水性强的特点；(2)采用液体培养基的浓培养技术。球孢白僵菌浓营养培养液和固态发酵基质的质量比在2∶1～4∶1，所获得的发酵产品单位基质含孢量高，发酵效价可达到200亿分生孢子/g，有效成分在制剂中的质量百分比含量在20％～10％。本发明所涉及的生产方法使用炭化载体作为固态发酵介质，固态发酵后可以直接超微粉碎加工成制剂，免除先分离提纯，在制剂加工时再回填白炭黑等填充料的步骤，并可以达到免除固态发酵介质的灭菌环节，无固体废弃物排除等优点。

Description

球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，具体地说是以炭化介质替代固态发酵中的疏松纤维介质，从而简化了球孢白僵菌分生孢子及可湿性粉剂的生产过程。主要用于生物农药球孢白僵菌可湿性粉剂的生产。属于农业生物农药领域。
背景技术
球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种最常见的昆虫病原真菌，可以侵染700多种昆虫和螨类，在寄主虫体内大量繁殖，使体液发现机能发生变化，新陈代谢紊乱以致死亡。白僵菌的分布范围很广，从海拔几米至2000多米的高山均发现过白僵菌的存在，白僵菌的致病力强，对人畜作物安全，是国内外研究最多、应用最广的昆虫病原真菌之一。
白僵菌的侵染体是分生孢子，而目前大量生产用的分生孢子主要通过固态发酵获得，固态发酵介质是分生孢子生产过程中不可或缺的。根据固态发酵介质的不同，国内外发明了多种分生孢子生产工艺，如利用土壤，稻壳，麦麸，无纺布，大米，软木粒，窗纱，平板等作为固态发酵介质的生产工艺，已经开发成功的球孢白僵菌可湿性粉剂、颗粒剂及油悬浮剂等多种剂型。目前广泛应用的是以稻壳为固态发酵介质的分生孢子生产工艺。所用的介质均需灭菌，发酵后进行介质-分生孢子的分离提纯，分离过程中有大量的固体废弃物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种球孢白僵菌分生孢子的生产方法以制备可湿性粉剂，这种生产方法使用的固态发酵介质是经过炭化处理的。
本发明的技术方案是：
1.本发明所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于该制备方法是：将球孢白僵菌菌种经过接种培养成固体一级菌种，转接入摇瓶中进行液体培养再经发酵罐液体培养，其液体培养物与炭化介质混合后进行固态发酵，发酵产物经干燥，再添加乳化剂等混合粉碎或超微粉碎直接获得可湿性粉剂。
2.如权利要求1所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述球孢白僵菌为来自中国农业微生物菌种保藏管理中心保存的球孢白僵菌，保藏编号为ACCC32222。
3.本发明所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述液体时所用培养基的配方为：(质量百分比)蔗糖0.5％，米粉3％，玉米粉1％，麦麸3％，酵母粉1％，棉仁蛋白1％，硫酸铜0.02％，硫酸锌0.005％，硫酸亚铁0,005％，磷酸二氢钾0.2％，加纯净水至100％。
4.本发明所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述液体培养物与炭化介质混合后进行合固态发酵中所使用的炭化介质是：将富含纤维的稻壳等经过高温炭化的方法制备而成。
5.本发明所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述炭化介质在球孢白僵菌固态发酵基质中的添加质量百分比为30％～100％。
6.本发明所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述固态发酵过程球孢白僵菌浓营养培养物和炭化介质的质量比在2∶1～4∶1。
本发明具体实施方式
本发明的目的是这样实现的：对白僵菌可湿性粉剂生产中的所需的介质稻壳进行炭化处理，使用经过炭化的稻壳作为固态发酵的载体，炭化的稻壳保持稻壳的外型，但由于炭化后结构的变化，多孔性增加，吸水性增强，纤维结构减少或消失，具有很好的脆性，易粉碎。因此在固态发酵结束后，干燥好的固态发酵物连同发酵介质可以直接粉碎达到可湿性粉要求的细度320目，发酵产品中的炭化介质粉碎后作为填料的与加入的乳化剂等助剂一起直接加工成可湿性粉剂，实现了本专利的成产过程，从而避免了球孢白僵菌传统可湿性粉剂中先分离提纯获得可湿性粉剂，再进行填料回填进行可湿性粉剂的剂型加工方式。
1.白僵菌可湿性粉剂的制备
取球孢白僵菌ACCC 32222菌种(中国农业微生物菌种保藏管理中心保存)，在无菌环境中接入灭菌固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液加液体培养基，进行扩大菌种培养；48小时后，将其接种到发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；25～28℃培养18～24h后，收获其附近产物——液体培养液接种于经过炭化处理的稻壳中(炭化介质在球孢白僵菌固态发酵基质中的添加质量百分比为30％～100％。基质中其它成分为麦麸、保水剂等辅料，辅料也可以不加)，混合均匀后，进如25～28℃培养房进行固体发酵，发酵结束后产孢好固体培养物后进入35～38℃干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，按比例添加乳化剂等助剂，经负压超微粉碎机粉碎获得100～150亿个分生孢子/g的球孢白僵菌可湿性粉剂。
以上本发明所述液体培养基的配方为：(质量百分比)蔗糖0.5％，米粉3％，玉米粉1％，麦麸3％，酵母粉1％，棉仁蛋白1％，硫酸铜0.02％，硫酸锌0.005％，硫酸亚铁0,005％，磷酸二氢钾0.2％，加纯纯净水至100％。
工艺流程见附图1。
2.白僵菌可湿性粉剂的应用
上述球孢白僵菌可湿性粉剂使用方便，使用时用水稀释后可采用无人机喷雾；或稀释500～1000倍后采用常量喷雾。采用低容量技术喷雾时用水稀释倍数优选为20～30倍，常规技术喷雾时用水稀释倍数优选为500～800倍。
本发明所涉及微生物资源信息
球孢白僵菌ACCC 32222株系本实验室从2008年采自新疆伊犁自治州的马铃薯甲虫僵虫。菌种保存在中国农业微生物菌种保藏中心，保藏编号为：ACCC 32222，(见中国农业微生物菌种保藏管理中心编《中国农业菌种大全》，中国农业科技出版社，2014年，p342)。
附图说明
图1原生产工艺(介质非炭化)
图2本专利的生产方法(载体炭化)
本发明的有益效果为
本发明涉及球孢白僵菌分生孢子及其可湿性粉剂制备方法。本发明是以固态发酵中采用炭化介质作为生产技术的核心，主要用于生物农药球孢白僵菌分生孢子及其可湿性粉剂的生产和加工。(1)采用经过炭化处理的介质(稻壳)，具有多孔、持水性强的特点；(2)采用液体培养基的浓培养技术。球孢白僵菌浓营养培养液和固态发酵基质的质量比在2∶1～4∶1，所获得的发酵产品单位基质含孢量高，发酵效价可达到200亿分生孢子/g，有效成分在制剂中的质量百分比含量在20％～10％。本发明所涉及的生产方法具有工艺简单，无固体载体灭菌，无固体废弃物排放等优点。
具体实施方式：
下列实施例为了更好地理解发明实质，但是本发明的防治用途并不局限于此。实施例中的百分比是制剂中的质量百分比。
实施例1
——本发明制品的制备
以炭化稻壳为例，生产100亿/克球孢白僵菌分生孢子可湿性粉剂
1.取球孢白僵菌ACCC 32222株菌种(中国农业微生物菌种保藏管理中心保存)，在无菌环境中接入灭菌固体平板进行活化处理；
2.刮取活化好的菌种制成悬液加液体培养基，进行扩大菌种培养；48小时后，将其接种到发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵，25～28℃培养18～24h后的培养液为固形物含量10％～13％的培养液(又称：球孢白僵菌浓营养培养液)；
3.再将上述收获的球孢白僵菌浓营养培养液接种于经过炭化处理的稻壳中，球孢白僵菌浓营养培养液和发酵基质(炭化稻壳介质和辅料)的质量比在2∶1～4∶1混合均匀后，进培养房进行固体发酵25～28℃6～8天，固体培养物产孢好后进入35～38℃干燥房进行烘干处理；
4.待固体培养物彻底干燥后，按比例添加乳化剂等助剂，经负压超微粉碎机粉碎获得100～150亿个分生孢子/g的球孢白僵菌可湿性粉剂。
以上本发明所述液体培养基的配方为：蔗糖0.5％，米粉3％，玉米粉1％，麦麸3％，酵母粉1％，棉仁蛋白1％，硫酸铜0.02％，硫酸锌0.005％，硫酸亚铁0,005％，磷酸二氢钾0.2％，加纯净水至100％；固体发酵的原料及量：固形物含量10％～13％的培养液(70％～80％)/炭化稻壳(30％～20％)；混合后固体发酵6～8天，干燥，按总重添加，表面活性剂(B101)6％～8％、渗透剂T5％、分散剂sopa 5％和苦豆子粉10％。
以上炭化介质在球孢白僵菌固态发酵基质中的添加质量百分比为30％～100％。基质中其它成分为麦麸、保水剂等辅料，辅料也可以不加。
按配方要求，在密闭容器里使物料充分混合均匀；将混合后的产物，用旋风负压粉碎机或超微粉碎机进行粉碎至320目，经检验孢子数和湿润性能合格后，进行计量分装即得成品。
以上配方中：
表面活性剂：可用B-101为北京中环易达农业科技发展有限公司生产。
渗透剂T：市场有售。
分散剂sopa：市场有售。
苦豆子粉：为豆科植物苦豆子的种子粉碎物。种子秋季采收加工而成，市场有售
实施例2
——本发明的应用
该可湿性粉剂可用于防治稻水象甲/马铃薯甲虫等农林害虫，100～300g/亩兑水均匀喷雾防治马铃薯甲虫，药后8～10天防治效果达到80％。且在地面能看到大量僵虫，施菌一个月后调查入土马甲，土壤中也发现白僵菌寄生的入土马甲僵虫。说明白僵菌具有很好的持续防控效果。
本发明所述的方法也适用于球孢白僵菌其他菌株制备球孢白僵菌可湿性粉剂。

Claims (6)

1.一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于该制备方法是：将球孢白僵菌菌种经过接种培养成固体一级菌种，转接入摇瓶中进行液体培养再经发酵罐液体培养，其液体培养物与炭化介质的固态发酵基质混合后进行固态发酵，发酵产物经干燥，再添加乳化剂等混合粉碎或超微粉碎直接获得可湿性粉剂。
2.如权利要求1所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述球孢白僵菌为来自中国农业微生物菌种保藏管理中心保存的球孢白僵菌，保藏编号为ACCC32222。
3.如权利要求1所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述液体培养时所用培养基配方的质量百分比为：蔗糖0.5％，米粉3％，玉米粉1％，麦麸3％，酵母粉1％，棉仁蛋白1％，硫酸铜0.02％，硫酸锌0.005％，硫酸亚铁0,005％，磷酸二氢钾0.2％，加纯净水至100％。
4.如权利要求1所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述液体培养物与炭化介质混合后进行合固态发酵中所使用的炭化介质是：将富含纤维的稻壳等经过高温炭化的方法制备而成。
5.如权利要求1所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述炭化介质在球孢白僵菌固态发酵基质中的添加量的质量百分比为30％～100％。
6.如权利要求1所述一种球孢白僵菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于所述固态发酵过程球孢白僵菌浓营养培养物和炭化介质的固态发酵基质用量的质量比在2∶1～4∶1。
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