CN102687731A - 苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂 - Google Patents
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Abstract
苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，涉及一种混合生物农药。针对白僵菌和Bt防治的局限性，特别是微生物农药速效性差的弊病，本发明所述可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、3～5wt.%润湿剂、10～20wt.%分散剂、0.1～0.5wt.%紫外保护剂、50～60wt.%载体。本发明的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂具有活性高、效果稳定、持效期长、环境影响小、使用方便的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种混合生物农药，具体涉及一种含有细菌苏云金杆菌和真菌白僵菌的可湿性粉剂。
背景技术
白僵菌是一种肉座菌目（Hypocreales）虫草菌科（Cordycipitaceae）虫草属（Cordyceps）真菌，可寄生15目149科521属的700余种昆虫及蜱螨目的6科17种螨和蜱目寄主，引起昆虫中毒致死。白僵菌高孢粉是高效生物杀虫剂之一，由于无毒无味、无污染，已广泛应用于农林害虫防治中。国内应用白僵菌对近40多种农林害虫防治已获成功。但白僵菌防治效果受环境湿度影响较大，在相对湿度较低时，防治效果并不理想，且杀虫速度相对较慢，影响了其在农林害虫防治上的积极性。
苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）是世界上使用最广、产量最大的生物杀虫剂，但商品Bt制剂在生产防治上也存在速效性差、对高龄幼虫不敏感、田间迟效性短、易产生抗性等缺点，已成为影响Bt进一步成功推广的制约因素。
发明内容
针对白僵菌和Bt防治的局限性，特别是微生物农药速效性差的弊病，本发明提供一种活性高、效果稳定、持效期长、环境影响小、使用方便的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂。
本发明的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、3～5wt.%润湿剂、10～20wt.%分散剂、0.1～0.5wt.%紫外保护剂、50～60wt.%载体。
所述润湿剂为Morwet EFW、十二烷基硫酸钠、MF-5、TERWET1010、WLNO中的一种或几种的混合物。
所述分散剂为木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、TERSPERSE2020、Morwet D425、亚甲基双萘磺酸钠中的一种或几种的混合物。
所述载体为白炭黑、硅藻土、高岭土、凹凸棒土中的一种或几种的混合物。
所述紫外保护剂为糊精、黄原胶、荧光素钠、VC、纳米氧化锌中的一种或几种的混合物。
所述可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、0.5～2wt.% Morwet EFW、2～4wt.%十二烷基硫酸钠、8～10wt.%Morwet D425、8～10wt.%TERSPERSE2020、0.1～0.5wt.%黄原胶、50～60wt.%凹凸棒土。
所述可湿性粉剂由以下成份制成：13.7wt.%苏云金杆菌、6wt.%白僵菌、1wt.% Morwet EFW、3wt.%十二烷基硫酸钠、9wt.%Morwet D425、9wt.%TERSPERSE2020、0.3wt.%黄原胶、58wt.%凹凸棒土。
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所述苏云金杆菌为库斯塔克亚种，质量为50000IU/mg。
所述白僵菌为球孢白僵菌，质量为1000亿/g。
与现有技术相比，本发明具有以下突出的优点：
1、在助剂选择上，注重其与白僵菌和苏云金杆菌的生物相容性，选择助剂对白僵菌分生孢子萌发和菌丝日生长量及产孢没有影响或影响较小，同时对苏云金杆菌芽孢萌发没有影响或影响较小，为理想的助剂。
2、产品性能指标优良，白僵菌的孢子萌发率≥75.26%；苏云金杆菌芽孢平均萌发率为85.14%，润湿性<1min；质量悬浮率平均为72.73%，孢子平均悬浮率为75.13%，平均水分含量为2.56%；细度（过400目标准筛）≥ 98%；pH值为6.7；为合格的苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂。
3、本发明为苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，该剂型延长了贮存时间和持效期，扩大了防治谱，为开展无公害防治农林害虫提供了新的材料。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的苏云金杆菌白僵菌可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、3～5wt.%润湿剂、10～20wt.%分散剂、0.1～0.5wt.%紫外保护剂、50～60wt.%载体。
本实施方式中，所述苏云金杆菌为库斯塔克亚种（Bacillus thuringiensis subsp．kurstaki），质量为50000IU/mg。
本实施方式中，所述白僵菌为球孢白僵菌（Beauveria bassiana），质量为1000亿/g。
本实施方式中，所述润湿剂为Morwet EFW、十二烷基硫酸钠、MF-5、TERWET1010、WLNO中的一种或几种的混合物。
本实施方式中，所述分散剂为木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、TERSPERSE 2020、Morwet D425、亚甲基双萘磺酸钠中的一种或几种的混合物。
本实施方式中，所述载体为白炭黑、硅藻土、高岭土、凹凸棒土中的一种或几种的混合物。
本实施方式中，所述紫外保护剂为糊精、黄原胶、荧光素钠、VC、纳米氧化锌中的一种或几种的混合物。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，所述可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、0.5～2wt.% Morwet EFW、2～4wt.%十二烷基硫酸钠、8～10wt.%Morwet D425、8～10wt.%TERSPERSE 2020、0.1～0.5wt.%黄原胶、50～60wt.%凹凸棒土，制备方法如下：
（1）将苏云金杆菌、白僵菌、Morwet EFW、十二烷基硫酸钠、Morwet D425、TERSPERSE2020、黄原胶和凹凸棒土按上述比例混合均匀；
（2）原料预粉碎，过400目标准筛；
（3）质量检验，白僵菌的孢子萌发率≥75. 26%；苏云金杆菌芽孢萌发率为85.14%，润湿性< 1 min；质量悬浮率为72.73%，孢子悬浮率为75.13%，水分含量为2.56%；细度（过400目标准筛，平均粒度为13.76 μm）≥ 98%；pH值为6.7；为合格的苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂。
具体实施方式三：本实施方式的苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂，原料组成见表1。
表1原料配比 单位：质量百分数%
| 组份 | 配方I | 配方II | 配方Ⅲ | 配方Ⅳ |
| 苏云金杆菌原药 | 13.7 | 11 | 10.3 | 12.5 |
| 白僵菌孢子粉 | 6 | 13.3 | 11.5 | 8.2 |
| Morwet EFW | 1 | 1 | 1.2 | 0.8 |
| 十二烷基硫酸钠（k12） | 3 | 3 | 3.5 | 2.5 |
| Morwet D425 | 9 | 9 | 8.5 | 9.5 |
| TERSPERSE2020 | 9 | 9 | 9.5 | 8.5 |
| 黄原胶 | 0.3 | 0.3 | 0.2 | 0.4 |
| 凹凸棒土 | 58 | 53.4 | 55.3 | 57.6 |
具体实施方式四：本实施方式按照下述方法制备苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂：
一、制剂中的生物相容性试验
1、材料与方法
1.1供试材料
（1）菌株：白僵菌（质量1000亿/克；辽宁万恒生物制剂有限公司）；苏云金杆菌库斯塔克亚种（质量50000 IU/mg；湖北康欣农用公司）。
（2）载体：白炭黑、硅藻土、高岭土、凹凸棒土（盱眙华丰油田钻井液用材料厂提供）。
（3）润湿剂：Morwet EFW（阿克苏·诺贝尔公司）、十二烷基硫酸钠（k12）、MF-5、TERWET1010（亨斯迈公司提供）、WLNO。
（4）分散剂：木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、TERSPERSE2020（亨斯迈公司提供）、Morwet D425（阿克苏·诺贝尔公司）、亚甲基双萘磺酸钠（NNO）。
（5）紫外保护剂：糊精、黄原胶、荧光素钠、VC、纳米氧化锌（河北博奥纳米材料有限公司提供）。
以上其他试剂均为市售。
试验方法
1.2.1生物相容性测定
a、白僵菌孢子萌发测定：将5mg/ml载体、60μg /ml润湿剂和250μg/ml分散剂与融化的改良PDA培养基混合，灭菌后制成平板。取0.05ml 103个孢子/ml的孢子悬浮液均匀涂布于混合培养基平板上，以改良PDA作为对照，每个处理4个重复，放置于25±1℃黑暗培养，于72 h计算菌落数。
b、苏云金杆菌芽孢萌发测定：将5mg/ml载体、60μg /ml润湿剂和250μg/ml分散剂与融化的LB培养基混合，灭菌后制成平板。在超净工作台中，取出l ml细菌菌液，按系列浓度进行稀释，再取0.lml稀释液，均匀涂布于LB培养基平板上，每浓度设置3个重复，于29±1℃培养箱中培养24h左右，计数每皿中菌落数，以每个培养皿有30～300个菌落数为有效区间，检测苏云金杆菌原液中的活芽孢浓度作为对照。具体计算公式如下：活芽孢浓度（个/ml）=（皿内菌落数×稀释倍数）/皿内加入的菌液量（ml）。取孢子悬浮液均匀涂布在混合培养基平板上，以LB培养基作为对照，每个处理4个重复，放置于29±1℃黑暗培养，24h后计算菌落数。
c、白僵菌菌丝生长速率测定：在上述的混合培养基，用直径为10mm打孔器取生长旺盛、菌龄相同的白僵菌菌丝块，接种于混合培养基的平板中心，以PDA培养基平板作为对照，每个处理3个重复，间隔24h测一次菌落直径。菌落直径日增长量(mm/d) =直径/生长天数。
助剂的筛选
a、载体的筛选：根据载体的吸附量、流动性和经济性等角度来确定。
b、润湿剂和分散剂的选择：首先对所测试润湿剂及分散剂进行初筛，选择润湿时间＜1min，悬浮状况优良的分散剂，然后进行生物相容性测定，其中润湿时间按照GB/T5451-2001标准，通过目测观察分散状况，分散状况分为3个等级，分别为（1）分散好：水中呈云雾状自动分散，无可见颗粒下沉；（2）分散一般：在水中自动分散，有颗粒下沉，下沉颗粒可慢慢分散或轻摇后分散；（3）分散差：在水中不能自动分散，呈颗粒状下沉或絮状下沉，经剧烈摇动后才能分散。筛选出分散性能较好的分散剂，然后按如下方法进行测试：白僵菌和苏云金杆菌原药按照配方I和II所述比例添加，润湿剂和分散剂质量分数分别为4%和10%，其余成份以所选载体补足，分别加工成可湿性粉剂样品，测定润湿时间及悬浮率进行比较。
c、润湿剂和分散剂最优配比的筛选：对所选助剂种类和比例进行正交设计，确定二者的最佳使用比例。
d、紫外保护剂的筛选：将供试的保护剂添加到孢子悬浮液中，以不加紫外保护剂不经紫外灯照射的为对照一，以不加紫外保护剂，经紫外灯照射的为对照二，适量涂布到PDA平板及LB平板上，每个处理重复3次，用紫外灯（30 W，光强120 lx）照射后，置于25±1℃及29±1℃的培养箱中培养白僵菌72h及苏云金杆菌24h计算菌落数。
混配剂型加工
本实验采用配方I和II进行复配。经试验筛选出的各种助剂分别过400目标准筛，按比例加入到载体中搅拌均匀，然后将干燥过的高纯度的孢子粉及苏云金杆菌原药加入到混合物中，混合均匀后加工成混配的可湿性粉剂。
分别将苏云金杆菌原药和白僵菌孢子粉加入到相同的助剂，混合均匀，分别加工成苏云金杆菌和白僵菌单剂可湿性粉剂。
混配产品的性能测定
孢子萌发率测定，将孢子悬浮液接种到真菌营养液中，25±1℃，160r/min，20h后镜检统计活孢率。苏云金杆菌原药活芽孢的检测通过涂布平板29±1℃，24h计数。
润湿时间按GB/T5451-2001测定≤1min。悬浮率按GB/T14825-2006测定，≥75%。pH值按GB/T1600-93测定，细度通过激光粒径分布仪测定。
数据统计分析
实验数据采用SPSS16.0统计软件进行方差分析。采用Duncan’s新复极差法比较处理间的差异性（P=0.05），表中数字后边小写字母不同，表示在95%水平上显著性差异。
、结果与分析
2.1载体的筛选（表2）
表2 载体对白僵菌孢子萌发和生长速率的影响及苏云金杆菌芽孢萌发的影响
| 载体 | 菌落（个/皿） | 菌落直径日生长量（mm/d） | 苏云金杆菌芽孢含量1013cfu.g-1 |
| 对照 | 55±4.51a | 4.45±0.04a | 5.20±0.10a |
| 凹凸棒土 | 48±5.03ab | 4.29±0.07ab | 4.80±0.21a |
| 白炭黑 | 49±3.79ab | 4.02±0.27bc | 3.90±0.25bc |
| 高岭土 | 50±6.08ab | 3.98±0.09c | 4.10±0.21b |
| 硅藻土 | 45±4.36b | 3.86±0.14c | 3.50±0.40c |
实验结果表明：除了硅藻土对白僵菌分生孢子萌发与对照差异显著外，其余3种与对照差异不显著；从菌落直径日生长量来看，4种载体都有一定的影响，除凹凸棒土（4.29mm/d）与对照（4.45mm/d）差异不显著，其余3种差异显著，其中影响最大的为硅藻土（3.86mm/d）。因白僵菌的分生孢子是主要的侵染体，制剂主要应考虑对孢子的影响，载体可以在凹凸棒土、白炭黑、高岭土三者中选择。从对苏云金杆菌芽孢萌发来看，白炭黑、硅藻土、高岭土与对照差异显著，凹凸棒土差异不显著。综上，可作为混配制剂载体的是凹凸棒土。
润湿剂的筛选
实验结果表明Morwet EFW促进白僵菌分生孢子萌发，其余4种润湿剂均抑制孢子萌发；从菌落直径日生长量来看，MF-5有抑制作用（3.44mm/d）；润湿剂TERWET 1010对白僵菌的菌丝日生长量起促进作用，5种润湿剂对菌落生长影响与对照相比均不显著，但TERWET 1010起促进作用。润湿剂对苏云金杆菌芽孢的影响为Morwet EFW、k12和MF-5与对照差异不显著，润湿剂WLNO和TERWET1010与对照差异显著（表3）。综合分析可以选择k12、Morwet EFW和MF-5的一种或者两种作为混合制剂的湿润剂。
表3 润湿剂对白僵菌的孢子萌发菌丝日生长量及苏云金杆菌芽孢萌发的影响
| 润湿剂 | 浓度（μg/ml） | 菌落（个/皿） | 菌落直径日生长量（mm/d） | 苏云金杆菌芽孢含量/1013cfu.g-1 |
| Morwet EFW | 60 | 198±6.03a | 3.83±0.33ab | 3.50±0.66a |
| WLNO | 60 | 157±3.51c | 3.78±0.63ab | 0.00 ±0.00 b |
| MF-5 | 60 | 139±8.73d | 3.44±0.10bc | 3.70±0.50a |
| k12 | 60 | 151±7.57cd | 3.61±0.19b | 3.50±0.44a |
| TERWET 1010 | 60 | 145±5.51d | 4.44±0.25a | 0.00 ±0.00b |
| 对照 | － | 184±6.03b | 4.00±0.44ab | 4.10±0.40a |
2.3分散剂的初选
表4显示分散剂对白僵菌分生孢子萌发、菌丝日生长量和苏云金芽孢杆菌芽孢萌发都有一定的影响。Morwet D425和TERSPERSE 2020对Bt芽孢萌发与对照差异不显著（P>0.05），而NNO、木质素磺酸钠和木质素磺酸钙显著低于对照 （P<0.05）。
分散剂Morwet D425和TERSPERSE 2020对白僵菌分生孢子萌发起促进作用，但与对照差异不显著；木质素磺酸钠和木质素磺酸钙处理显著降低了分生孢子萌发；从菌落直径日生长量来看，5种分散剂对白僵菌分生孢子均有一定的影响。与对照相比，Morwet D425影响最大，显著抑制生长（2.17 mm/d）；木质素磺酸钙（4.17 mm/d）和木质素磺酸钠（4.20 mm/d）对白僵菌的菌丝日生长量起促进作用，但差异不显著；TERSPERSE2020和NNO分散剂与对照差异显著，其菌落日生长量分别为2.28和2.67mm/d。因白僵菌的分生孢子是主要的侵染体，制剂主要应该考虑对孢子的影响，综合分析可以考虑Morwet D425、TERSPERSE2020和木质素磺酸钠作为分散剂。
表4 分散剂对白僵菌萌发和菌丝日生长量及苏云金杆菌芽孢萌发的影响
2.4润湿剂和分散剂的细选
将初筛润湿剂（Morwet EFW、k12和MF-5）和分散剂（Morwet D425、木质素磺酸钠和TERSPERSE 2020）分别按照4%和10%的比例添加到白僵菌孢子粉和苏云金杆菌原药中，用载体补足至质量百分数100%，粉碎加工成可湿性粉剂，检测其润湿时间和悬浮率。根据润湿时间、悬浮状况和悬浮率筛选两种润湿剂（Morwet EFW和k12）和两种分散剂（Morwet D425和TERSPERSE 2020）作为筛选因素（表5），选择3个常用质量分数水平进行正交试验（表6），试验结果于表7。对表7数据进行方差分析结果于表8。白僵菌孢子粉和苏云金杆菌混配可湿性粉剂的较优配方为 A1B3C3D3，即：Morwet EFW1%、k12 3% Morwet D425 9% TERSPERSE 2020 9%，由方差分析，影响因素依次为C＞D＞B＞A。
表5 不同润湿剂和分散剂配制的可湿性粉剂润湿时间和悬浮率
| 配方 | Morwet EFW | k12 | MF-5 | Morwet D425 | 木质素磺酸钠 | TERSPERSE 2020 | 润湿时间/s | 悬浮状况 | 悬浮率% |
| 1 | + | – | – | + | – | – | 33 | 好 | 63.98 |
| 2 | + | – | – | – | + | – | 26 | 好 | 56.53 |
| 3 | + | – | – | – | – | + | 31 | 一般 | 62.00 |
| 4 | – | + | – | + | – | – | 61 | 一般 | 58.87 |
| 5 | – | + | – | – | + | – | 41 | 差 | 49.97 |
| 6 | – | + | – | – | – | + | 73 | 好 | 70.49 |
| 7 | – | – | + | + | – | – | 72 | 一般 | 53.43 |
| 8 | – | – | + | – | + | – | 69 | 差 | 43.33 |
| 9 | – | – | + | – | – | + | 98 | 差 | 55.29 |
表6 润湿剂和分散剂筛选的因素和水平
注：数据为4个因素的为质量分数。
表7 正交试验结果
表8 方差分析
| 来源 | SS | Df | MS | F | P |
| A（误差Error） | 4.0187 | 2 | 2.0094 | ||
| B | 97.3574 | 2 | 48.6787 | 24.2261 | <0.05 |
| C | 233.9302 | 2 | 116.9651 | 58.2104 | <0.05 |
| D | 216.7074 | 2 | 108.3537 | 53.9247 | <0.05 |
注：F0.01（2,2）=90:；F0.05(2,2)=19。
紫外保护剂的筛选（表9和10）
紫外线照射1 min后，VC、黄原胶与对照相比显著保护白僵菌分生孢子，纳米氧化锌与对照相比对白僵菌分生孢子保护作用不明显，而荧光素钠和糊精与对照1和2相比，未能对白僵菌分生孢子起保护作用；紫外照射2 min后，黄原胶与对照2差异显著，具有良好的保护作用，而糊精、VC、纳米氧化锌、荧光素钠保护作用不显著；紫外照射3min后黄原胶仍有保护作用，虽与对照1差异显著，但同时也与对照2差异显著，说明黄原胶在一定程度上保护紫外线照射，而VC、糊精、荧光素钠、纳米氧化锌与对照2相比，保护作用不明显。在紫外照射1min后，所选的保护剂对苏云金杆菌芽孢都有保护作用，荧光素钠保护作用明显，与对照1、2差异显著；糊精、黄原胶、纳米氧化锌与对照2相比保护作用不明显；紫外照射2 min后，荧光素钠、黄原胶、纳米氧化锌、糊精仍具有保护作用，而VC保护作用不显著；紫外照射3 min后，VC、黄原胶、荧光素钠具有保护作用，糊精基本失去保护作用。
基于上述结果，选用黄原胶作为混配制剂的紫外保护剂。经过进一步实验筛选，从经济和对制剂的保护性能选择，选择使用质量浓度0.3%黄原胶。
表9 紫外保护剂对苏云金杆菌及白僵菌孢子的保护效果
注：对照1：无保护剂无照射；对照2：无保护剂照射（下同）。
表10 不同浓度的紫外保护剂对苏云金杆菌和白僵菌的保护效果
2.6产品性能指标测定
根据上述研究结果配制苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂（表11），进行各项性能指标测定。白僵菌的萌发率≥75. 26%，Bt芽孢萌发率为85.14%，润湿性< 1 m in, 质量悬浮率72. 73%，孢子悬浮率75.13%，水分 2.56%，细度（过400目标准筛，平均粒度为13.76 μm）≥98%，pH 值为6.7。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合商品制剂要求。
表11 苏云金杆菌和白僵菌两种复配可湿性粉剂组份（质量百分数）
| 组份 | 配方I | 配方II |
| 苏云金杆菌原药 | 13.7 | 11 |
| 白僵菌孢子粉 | 6 | 13.3 |
| Morwet EFW | 1 | 1 |
| 十二烷基硫酸钠（k12） | 3 | 3 |
| Morwet D425 | 9 | 9 |
| TERSPERSE2020 | 9 | 9 |
| 黄原胶 | 0.3 | 0.3 |
| 凹凸棒土 | 58 | 53.4 |
三、应用实施例1：
1、材料与方法
1.1供试材料
a、供试昆虫：榆毒蛾（Ivela ochropoda Eversmann）2龄幼虫。
b、供试药剂：本实施方式的可湿性粉剂，以苏云金杆菌和白僵菌单剂为对照。
方法
采用叶浸法生物测定法。将采集的新鲜榆树叶洗净，分别浸渍于不同稀释倍数的混配剂1和2中10 s，取出阴干，然后放在相应的培养皿中。将榆毒蛾2龄幼虫置于培养皿中（直径d=90 mm，皿的底部放有湿润的滤纸，保持湿度）每皿10头，设置3个重复，以清水为对照，以苏云金杆菌单剂和白僵菌单剂400倍液作为对照，放置于室温23~28℃，隔天更换新鲜榆树叶，48 h后观察幼虫死亡情况，统计幼虫死亡数，计算死亡率和校正死亡率。
结果与分析
表12 苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂对榆毒蛾2龄幼虫毒力
两种苏云金杆菌和白僵菌单剂可湿性粉剂及其混剂对榆毒蛾2龄幼虫毒力见表12。24h、48h、72h和96h混剂对榆毒蛾2龄死亡率均高于清水和单剂对照，这表明苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂为合格的新剂型。
四、应用实施例2
1、材料与方法
1.1供试材料
a、供试昆虫：天幕毛虫（Malacosoma neustria testacea Motsch）1龄幼虫。
b、供试药剂：本发明可湿性粉剂，以苏云金杆菌和白僵菌单剂为对照。
方法
采用浸叶法生物测定法。将采集的新鲜稠李叶洗净，分别浸渍于不同稀释倍数的混配剂1和2中10 s，取出阴干，然后放在相应的培养皿中。挑取健康、大小一致的天幕毛虫1龄幼虫置于培养皿中（直径d=90 mm，皿底部放湿润的滤纸，保持湿度），每皿10头，设置3个重复，分别以清水、苏云金杆菌和白僵菌单剂400倍液作为对照，置于室温23~28℃，隔天更换新鲜稠李叶，分别于24、48、72和96 h观察幼虫死亡情况，统计幼虫死亡数，计算死亡率和校正死亡率。
结果与分析
表13 苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂配方Ⅰ对天幕毛虫1龄幼虫毒力
表14 苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂配方Ⅱ对天幕毛虫1龄幼虫毒力
表13和表14结果显示，苏云金杆菌·白僵菌可湿性粉剂对天幕毛虫1龄幼虫死亡率均高于对照；且随着作用时间延长死亡率越大，毒力越高。药后3 d，混剂毒力最高，其中混合剂型Ⅰ幼虫死亡率达73.33%，混合剂型Ⅱ幼虫死亡率达90.30%，高出白僵菌单剂和苏云金杆菌单剂46.97~49.40%、23.33~26.60%。上述数据结果表明，本实施方式的苏云金杆菌·白僵菌混剂混配有效，同时说明混配剂型Ⅱ的药效好于混配剂型Ⅰ的药效。
Claims (10)
1.一种苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、3～5wt.%润湿剂、10～20wt.%分散剂、0.1～0.5wt.%紫外保护剂、50～60wt.%载体。
2.根据权利要求1所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述润湿剂为Morwet EFW、十二烷基硫酸钠、MF-5、TERWET1010、WLNO中的一种或几种的混合物。
3.根据权利要求1所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述分散剂为木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、TERSPERSE2020、Morwet D425、亚甲基双萘磺酸钠中的一种或几种的混合物。
4.根据权利要求1所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述载体为白炭黑、硅藻土、高岭土、凹凸棒土中的一种或几种的混合物。
5.根据权利要求1所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述紫外保护剂为糊精、黄原胶、荧光素钠、VC、纳米氧化锌中的一种或几种的混合物。
6.根据权利要求1所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述可湿性粉剂由以下成份制成：10～14wt.%苏云金杆菌、4～14wt.%白僵菌、0.5～2wt.% Morwet EFW、2～4wt.%十二烷基硫酸钠、8～10wt.%Morwet D425、8～10wt.%TERSPERSE2020、0.1～0.5wt.%黄原胶、50～60wt.%凹凸棒土。
7.根据权利要求6所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述可湿性粉剂由以下成份制成：13.7wt.%苏云金杆菌、6wt.%白僵菌、1wt.% Morwet EFW、3wt.%十二烷基硫酸钠、9wt.%Morwet D425、9wt.%TERSPERSE2020、0.3wt.%黄原胶、58wt.%凹凸棒土。
8.根据权利要求6所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述可湿性粉剂由以下成份制成：11wt.%苏云金杆菌、13.3wt.%白僵菌、1wt.% Morwet EFW、3wt.%十二烷基硫酸钠、9wt.%Morwet D425、9wt.%TERSPERSE2020、0.3wt.%黄原胶、53.4wt.%凹凸棒土。
9.根据权利要求1、6、7或8所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述苏云金杆菌为库斯塔克亚种，质量为50000IU/mg。
10.根据权利要求1、6、7或8所述的苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂，其特征在于所述白僵菌为球孢白僵菌，质量为1000亿/g。
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