CN105724435A

CN105724435A - 一种农用杀虫组合物及其应用

Info

Publication number: CN105724435A
Application number: CN201610184052.8A
Authority: CN
Inventors: 李肖宇; 梁小文; 王根豪; 严艺波; 吴俊杰; 石峥; 曾升华; 李英武
Original assignee: Jiangxi Tianren Ecology Co ltd
Current assignee: Jiangxi Tianren Ecology Co ltd
Priority date: 2016-03-28
Filing date: 2016-03-28
Publication date: 2016-07-06

Abstract

本发明涉及一种以苏云金杆菌和白僵菌作为主要活性成分的农用杀虫组合物及其应用，所述的农用杀虫组合物中含有活性药物组分，农药载体及辅助剂，其中所述活性药物组份中含有苏云金杆菌和白僵菌，且二者的重量份数配比为1∶1～6。本发明所述的农用杀虫组合物高效、低毒，对人畜和作物安全，既可以保护作物，又不伤害天敌，对生态环境影响小，符合当今农药的发展方向，因此所述农用杀虫组合物是一种极具发展潜力的绿色农药制剂。

Description

一种农用杀虫组合物及其应用

技术领域

本发明涉及农药领域，尤其是一种农用杀虫组合物及其应用。

背景技术

农业是国民经济的基础，是人类的衣食之源、生存之本，农业的发展状况直接影响着国民经济全局的发展。在农业生产中，害虫会严重影响农作物的生长，影响农业收获，给农民带来严重的经济损失，因此，对农作物害虫进行有效防治，对于保证农户的经济利益及粮食安全，具有重要意义。

目前危害农作物的害虫种类很多，其中主要是昆虫，鳞翅目害虫和鞘翅目害虫，如小菜蛾、棉铃虫、玉米螟、金龟子以及地下害虫蛴螬、蝼蛄等。现有技术中的农用杀虫剂可分为化学杀虫剂和生物杀虫剂，但是化学杀虫剂具有难降解、容易破坏生态系统的平衡的缺点。生物杀虫剂又包括细菌杀虫剂和真菌杀虫剂，真菌杀虫剂是一类寄生谱较广的昆虫病原真菌，是一种触杀性微生物杀虫剂。目前，研究利用的主要真菌杀虫剂所用的菌种有：白僵菌、绿僵菌、拟青霉、座壳孢菌和轮枝菌，尤其是白僵菌(beauveriabassiana)是一种广谱性的昆虫病原真菌，对700多种有害昆虫都能寄生，致病性强、适应性强，持效期长，但因为白僵菌的杀虫有效物质是活孢子，因此它对施药环境的要求较高，温度较高则自然死亡失效。单一使用白僵菌杀虫存在对施药环境要求高，一旦环境发生改变则会严重失效的缺点。

发明内容：

本发明的目的是提供一种广谱高效的农用杀虫组合物，用来解决现有技术中真菌杀虫剂杀虫效率对施药环境依赖性强的缺陷。

本发明提供了一种农用杀虫组合物，包括以下重量份的组分：

药物活性组分25～85份，所述药物活性组分包括重量比为1∶1～6的苏云金杆菌和白僵菌；

药物载体15～85份；

辅助剂0.1～25份。

优选的，所述的白僵菌选自生物保藏编号为CGMCCNO.7997或者CGMCCNO.7998限定的菌种中的一种或两种。

优选的，所述的白僵菌的制备方法包括以下步骤：

1)白僵菌菌种的活化；

2)将所述活化后的白僵菌接种于白僵菌液体培养基中进行液体发酵，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，得到白僵菌发酵液；

3)将所述步骤2)得到的白僵菌发酵液接种于白僵菌固体培养基中，铺盘，进行浅盘发酵，得到固体发酵白僵菌。

优选的，所述固体培养基1包括以下重量份的组分：麦麸40～80份，谷壳5～10份，玉米粉5～10份。

优选的，所述的苏云金杆菌的制备方法包括以下步骤：a)苏云金杆菌菌种的液体活化；b)将所述活化后的苏云金杆菌接种于苏云金杆菌液体培养基中进行液体发酵，当活菌总数达2～9亿/ml停止发酵，得到苏云金杆菌发酵液；c)将所述步骤b)得到的苏云金杆菌发酵液接种于苏云金杆菌固体培养基中，进行苏云金杆菌的固体发酵，得到固体发酵苏云金杆菌，所述固体发酵的接种量为5～15wt％。

优选的，所述的苏云金杆菌的制备方法在固体发酵结束后还包括干燥步骤，所述的干燥步骤为30～40℃干燥35～45h或者45～50℃干燥20～28h。

优选的，所述的苏云金固体培养基包括以下质量含量的组成：麸皮65％～75％，豆粕20％～30％，玉米粉2％～4％，KH₂PO₄0.1％～0.3％，MgSO₄0.04％～0.06％，CaCO₃1.5％～2.0％。

优选的，所述药物载体为惰性粉或有机溶剂；所述的惰性粉选自轻质碳酸钙、硅藻土、滑石粉、白炭黑、膨润土、硫酸钠、陶土和高岭土中的一种或几种；所述的有机溶剂选自甲苯、二甲苯、二甲基甲酰胺、石油芳烃和植物油中的一种或几种。

优选的，所述辅助剂包括农乳700，拉开粉和木质素磺酸钠中的一种。

本发明还提供一种苏云金杆菌和白僵菌复配农用杀虫组合物在农作物防虫害方面的应用。

本发明的有益效果：本发明提供的苏云金杆菌和白僵菌复配的农用杀虫组合物高效、低毒，对人畜和作物安全，既可以保护作物，又不伤害天敌，对生态环境影响小。实验结果表明，苏云金杆菌和白僵菌复配的农用杀虫组合物，防效最高可达90.4％，杀虫率和防效都远远高于单独使用白僵菌或苏云金杆菌。

生物保藏说明

球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，本发明所述的球孢白僵菌菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，生物保藏编号为CGMCCNO.7997或CGMCCNO.7998，保藏时间为2013年8月13日。

具体实施方式：

本发明提供了一种农用杀虫组合物，包括以下重量份的组分：药物活性组分25～85份，所述药物活性组分包括重量比为1∶1～6的苏云金杆菌和白僵菌；药物载体15～85份；辅助剂0.1～25份。

本发明提供的农用杀虫组合物包括25～85份药物活性组分，优选为35～75份，更优选的为45～65份。在本发明中，所述的药物活性组分包括重量比为1～1～6的苏云金杆菌和白僵菌，所述药物活性组分中，苏云金杆菌和白僵菌的重量比优选的为1:2～4，更优选的为1:3。

在本发明中，所述的白僵菌为选自生物保藏编号为CGMCCNO.7997或者CGMCCNO.7998限定的菌种中的一种或两种，在实施例中，可具体采用经过发酵后烘干粉碎得到的固体粉状白僵菌。

在本发明中，所述的白僵菌发酵优选包括以下步骤:

1)白僵菌菌种的活化；

2)白僵菌的液体发酵，将活化后的白僵菌接种于白僵菌液体培养基中进行液体发酵，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵得到白僵菌发酵液；

3)白僵菌的固体发酵，将步骤2)得到的白僵菌发酵液接种于白僵菌固体培养基中，铺盘，进行浅盘发酵得到固体发酵白僵菌。

本发明中白僵菌菌种的活化是将保藏的白僵菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，25-28℃培养8～12h进行活化培养。

本发明在白僵菌活化培养后优选的对其进行液体培养，所述白僵菌液体发酵所接种的液体培养基1的组成是本领域常规使用的白僵菌液体培养基，所述的液体培养基优选经120～130℃灭菌30-45min后使用。本发明对所述发酵的设备没有特殊的限制，采用本技术领域常规的发酵罐即可。

在本发明中，所述液体发酵的温度优选为25～28℃，更优选的为26～27℃；所述液体发酵的pH值优选为6.8-7.0，更优选的为6.9；罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选的为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选的为1V/V·min；所述液体发酵的时间优选为28-32小时，更优选的为30小时。

本发明优选在发酵30～32小时后每隔3～4小时检测发酵活菌总数，优选的，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，更优选的，当活菌总数达80～99亿/ml停止发酵，得到白僵菌发酵液。本发明所述的发酵活菌总数检测采用本领域常规采用的计数方法即可，例如显微计数、平板菌落计数、测定细胞重量等。

完成所述液体发酵后，本发明将得到的白僵菌发酵液接种于固体培养基中，进行浅盘发酵，得到固体发酵白僵菌。在本发明中，所述的固体培养基优选包括以下重量份的组分：麦麸40～80份，谷壳5～10份，玉米粉5～10份。本发明优选在所述固体培养基中加水，使固体培养基含水量为45％-55％，然后铺盘，进行浅盘发酵。

在本发明中，所述的固体发酵的温度优选为24～28℃，更优选的为25～27℃；所述固体发酵的湿度优选为40％-95％，更优选为55％～75％；所述固体发酵的时间优选为48～96小时。

完成所述固体发酵后，本发明优选将得到固体发酵培养基烘干、粉碎和过筛，得到固体粉状白僵菌。在本发明中，所述烘干的温度优选为60～80℃，更优选的在65～75℃；本发明优选将固体发酵培养基烘干至水分含量在25～35％之间。本发明对所述粉碎没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的粉碎的技术方案即可。在本发明中，所述过筛优选采用80～100目筛。

在本发明中所述的苏云金杆菌的制备方法优选包括以下步骤：

a)苏云金杆菌菌种的液体活化；

b)将所述活化后的苏云金杆菌接种于苏云金杆菌液体培养基中进行液体发酵，当活菌总数达2～9亿/ml停止发酵，得到苏云金杆菌发酵液；

c)将所述步骤b)得到的苏云金杆菌发酵液接种于苏云金杆菌固体培养基2中，进行苏云金杆菌的固体发酵，得到固体发酵苏云金杆菌。

本发明中苏云金杆菌菌种的活化是将保藏的苏云金杆菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，28～32℃培养8～12h进行活化培养。

本发明在将所述的苏云金杆菌活化培养后，优选的进行液体发酵培养，所述液体发酵培养优选的采用摇瓶培养的方式。在本发明中，所述的液体发酵培养基2为本领域常用的苏云金杆菌液体培养基，无其他特殊要求，所述的液体培养基优选经120～130℃灭菌30-45min后使用；所述液体发酵培养的温度优选的为28～32℃，更优选的为30℃；所述液体发酵培养的转速优选的为180～220r/min，更优选的为200r/min；所述液体发酵培养的湿度优选的为40％～70％，更优选的为55％。

本发明优选在发酵30～32小时后每隔3～4小时检测发酵活菌总数，优选的，当活菌总数达2～9亿/ml停止发酵，更优选的，当活菌总数达5～6亿/ml停止发酵，得到苏云金杆菌发酵液。本发明所述的发酵活菌总数检测采用本领域常规采用的计数方法即可，例如显微计数、平板菌落计数、测定细胞重量等。

本发明在苏云金杆菌液体发酵完成后，优选的对苏云金杆菌进行固体发酵，所述的苏云金杆菌的固体发酵的固体培养基2优选的包括以下质量含量的组分：麸皮65％～75％，豆粕20％～30％，玉米粉2％～4％，KH₂PO₄0.1％～0.3％，MgSO₄0.04％～0.06％，CaCO₃1.5％～2.0％，更优选的包括以下质量含量的组分：麸皮70％，豆粕25％，玉米粉3％，KH₂PO₄0.2％，MgSO₄0.05％，CaCO₃1.75％；

在本发明中，所述苏云金固体发酵的接种量优选的为5～15wt％，更优选的为10wt％，所述苏云金杆菌的固体发酵优选的在固体发酵室完成，所述的苏云金杆菌的固体发酵优选的包括两个阶段，分别为第一阶段固体发酵和第二阶段固体发酵；第一阶段固体发酵的时间优选为0～24h，更优选的为0～20h，第一阶段固体发酵发酵温度优选的为18～24℃，更优选的为20～22℃；第二阶段固体发酵的时间优选的为24～72h，更优选的为20～64h，第二阶段固体发酵的发酵温度优选的为24～31℃，更优选的为27～28℃。本发明优选的在苏云金杆菌完成两个阶段的固体发酵之后得到的固体发酵苏云金杆菌进行干燥，所述干燥的温度优选的为温度为30～40℃或者45～50℃，当干燥温度为30～40℃，所述干燥的时间为35～45h；当所述干燥温度为45～50℃是，所述干燥时间优选的为20～28h。

本发明在苏云金杆菌固体发酵培养干燥完成后，优选的对其进行粉碎和过筛，得到固体粉状苏云金杆菌。本发明对所述粉碎没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的粉碎的技术方案即可。在本发明中，所述过筛优选采用80～100目筛。

本发明提供的农用杀虫组合物包括15～85份药物载体，优选为30～70份，更优选为45～55份，最优选为50份。在本发明中，所述的药物载体优选为惰性粉或有机溶剂。具体的，所述惰性粉优选选自轻质碳酸钙、硅藻土、滑石粉、白炭黑、膨润土、硫酸钠、陶土和高岭土中的一种或几种，惰性粉具体的可为上述物质中的任意一种或者由上述物质中的两种、三种、四种、五种、六种、七种或八种以任意比例混合组成；所述有机溶剂优选选自甲苯、二甲苯、二甲基甲酰胺、石油芳烃和植物油中的一种或几种，具体的可为上述物质中的任意一种或者由上述物质中的两种、三种或四种以任意比例混合组成。本发明所述的药物载体使药物性状稳定，便于运输，亦可提高药物的药效。

本发明提供的农用杀虫组合物包括0.1～25份辅助剂，优选为5～20份，更优选为10～15份，最优选为13份。在本发明中，所述的辅助剂为一般市售辅助剂，无其他特殊要求，具体的可为农乳700，拉开粉，木质素磺酸钠中的一种，本发明中辅助剂的作用是稳定药物性状，提高药效。

本发明对农用杀虫组合物的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的组合物制备的技术方案即可；具体的，本发明将上述技术方案药物活性组分、药物载体和辅助剂混合后制备得到。

本发明所述的农用杀虫组合物可应用于农作物防虫害方面，提供了一种上述技术方案所述农用杀虫组合物在防治农作物虫害方面的应用，具体的可应用的农作物种类包括蔬菜、谷类作物、果树、水稻、茶树、甘蔗等，本发明所述的农用杀虫组合物可防治各类害虫和害螨，包括菜青虫、小菜蛾、棉铃虫、玉米螟、金龟子、红蜘蛛以及地下害虫蛴螬、蝼蛄等。

本发明所述的农用杀虫组合物的施药方法为本领域所熟知的施药方法，无其他特殊要求，具体的包括以下步骤：将本发明所述的农用杀虫组合物用水稀释得到1000～3000倍稀释液后，进行叶面喷洒。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

固体粉状白僵菌的制备:将保藏的白僵菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，28℃培养10h进行活化培养；活化培养后的白僵菌接种于121℃灭菌35min后的液体培养基中，在发酵罐中进行液体发酵，具体的发酵条件：温度为27℃；pH值为6.9；罐内压力为0.08MPa，发酵通气量为1V/V·min；发酵时间优选为32小时；在发酵30小时后检测发酵活菌总数，当活菌总数达到95亿/ml停止发酵，得到白僵菌发酵液；将得到的白僵菌发酵液接种于固体培养基中，具体的所述的固体培养基包括以下重量份的组分：麦麸55份，谷壳8份，玉米粉7份，在所述的固体培养基中加入蒸馏水，使固体培养基含水量为50％，然后铺盘，进行浅盘发酵，具体的发酵条件为：发酵温度为26℃，发酵湿度为65％，发酵时间为72小时；固体发酵结束后将得到的固体发酵的白僵菌75℃的条件下，烘干至固体发酵白僵菌的水分含量为30％，粉碎过90目筛，得到固体粉状白僵菌。

实施例2

固体粉状苏云金杆菌的制备:将保藏的苏云金杆菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，30℃培养10h进行活化培养；活化培养后的苏云金杆菌接种于121℃灭菌35min后的液体培养基中，进行液体发酵，具体的发酵条件：温度为30℃；发酵时间为32小时；在发酵24小时后检测发酵活菌总数，当活菌总数达到2亿/ml停止发酵，得到苏云金杆菌发酵液；将得到的苏云金杆菌发酵液接种于固体培养基中，具体的所述的固体培养基包括以下重量的组分：麸皮70％，豆粕25％，玉米粉3％，KH₂PO₄0.2％，MgSO₄0.05％，CaCO₃1.75％，苏云金杆菌接种量为10wt％，苏云金杆菌接种后在固体发酵室完成固体发酵，在0～24h，发酵温度为22℃，然后在24～72h，发酵温度为29℃，最后在72h～112h，温度为48℃进行干燥。干燥完成后，粉碎过80～100目筛得到固体粉末苏云金杆菌。

实施例3

一种农用杀虫组合物包括以下组分：实施例1中制备得到的固体白僵菌粉48.5份、实施例2中制备得到的苏云金杆菌15.8份，轻质碳酸钙25份，农乳700(辅助剂)3.1份混合，得到农用杀虫组合物。

实施例4

一种农用杀虫组合物包括以下组分：实施例1中制备得到的固体白僵菌粉，25份，1实施例2中制备得到的苏云金杆菌，8份，轻质碳酸钙(载体)，30份，白炭黑(载体)，36份，农乳700(辅助剂)，8份。

实施例5

一种农用杀虫组合物包括以下组分：实施例1中制备得到的固体白僵菌粉，60份，实施例2中制备得到的苏云金杆菌，15份，硅藻土(载体)，39份，植物油(载体)，6份。

实施例6

一种农用杀虫组合物包括以下组分：实施例1中制备得到的固体白僵菌粉20份，实施例2中制备得到的苏云金杆菌，20份，陶土(载体)，10份，拉开粉(辅助剂)，5份。

实施例7

一种农用杀虫组合物包括固体白僵菌粉，42份，实施例2中制备得到的苏云金杆菌，7份，膨润土(载体)，20份，白炭黑(载体)，24份，木质素磺酸钠(辅助剂)，5份。

实施例8

药效试验，试验在江西省进行，防治品种为大白菜，栽培管理良好，菜青虫发生中等偏重。将实验田均分为四个区域，区域1为对照组，只喷洒清水；区域2喷洒实施例3中所述的农药杀虫剂组合物2000倍稀释液；区域3喷洒不含苏云金杆菌，只含白僵菌及载体和辅助剂的农药，药物活性组分的浓度与区域2相同；区域4喷洒不含白僵菌，只含苏云金杆菌及载体和辅助剂的农药，药物活性组分的浓度与区域2和3相同；四个区域的用药量相同，用药后1天，3天，5天各调查一次活虫数，计算虫口减退率和防效，防效(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(100-对照组虫口减退率)*100。具体结果如表1所示，由表1的结果可知，区域2的虫口减退率最高，也就表明了本发明所述的农药杀虫剂组合物的杀虫效果最好，其初效及后效均好于同浓度的单独添加白僵菌或者苏云金杆菌。

表1农药杀虫剂组合物的杀虫(菜青虫)效果

由表1可以看出，本发明所提供的的农用杀虫组合物5天的虫口减退率可达85.3％，防效可达86.85％，其杀虫率和防效都远远高于单独使用白僵菌或苏云金杆菌。

实施例9(白僵菌和BT对红蜘蛛的效果高了，5天应该达不到80以上，建议调低一些，而白僵菌和BT对菜青虫等鳞翅目效果好些)

药效试验，试验在陕西省进行，防治品种为苹果树，管理良好，红蜘蛛发生中等偏重。将实验田均分为四个区域，区域1为对照组，只喷洒清水；区域2喷洒实施例4中所述的农药杀虫剂组合物1500倍稀释液；区域3喷洒不含苏云金杆菌，只含白僵菌及载体和辅助剂的农药，药物活性组分的浓度与区域2相同；区域4喷洒不含白僵菌，只含苏云金杆菌及载体和辅助剂的农药，药物活性组分的浓度与区域2和3相同；四个区域的用药量相同，用药后1天，3天，5天各调查一次活虫数，计算虫口减退率和防效，防效(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(100-对照组虫口减退率)*100。具体结果如表2所示，由表2的结果可知，区域2的虫口减退率最高，也就表明了本发明所述的农药杀虫剂组合物的杀虫效果最好，其初效及后效均好于同浓度的单独添加白僵菌或者苏云金杆菌。

表2农药杀虫剂组合物的杀虫(红蜘蛛)效果

由表2可以看出，本发明所提供的的农用杀虫组合物5天的虫口减退率可达89.3％，防效可达90.30％，其杀虫率和防效都远远高于单独使用白僵菌或苏云金杆菌。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种农用杀虫组合物，包括以下重量份的组分：

药物活性组分25～85份，所述药物活性组分包括重量比为1:1～6的苏云金杆菌和白僵菌；

药物载体15～85份；

辅助剂0.1～25份。

2.根据权利要求1所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述的白僵菌选自生物保藏编号为CGMCCNO.7997或者CGMCCNO.7998限定的菌种中的一种或两种。

3.根据权利要求1或2所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述的白僵菌的制备方法包括以下步骤：

1)白僵菌菌种的活化；

4.根据权利要求3所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述白僵菌固体培养基包括以下重量份的组分：麦麸40～80份，谷壳5～10份，玉米粉5～10份。

5.根据权利要求1所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述的苏云金杆菌的制备方法包括以下步骤：

a)苏云金杆菌菌种的液体活化；

c)将所述步骤b)得到的苏云金杆菌发酵液接种于苏云金杆菌固体培养基中，进行苏云金杆菌的固体发酵，得到固体发酵苏云金杆菌，所述固体发酵的接种量为5～15wt％。

6.根据权利要求5所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述的苏云金杆菌的制备方法在固体发酵结束后还包括干燥步骤，所述的干燥步骤为30～40℃干燥35～45h或者45～50℃干燥20～28h。

7.根据权利要求5所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述的固体培养基2包括以下质量含量的组分：麸皮65％～75％，豆粕20％～30％，玉米粉2％～4％，KH₂PO₄0.1％～0.3％，MgSO₄0.04％～0.06％，CaCO₃1.5％～2.0％。

8.根据权利要求1所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述药物载体为惰性粉或有机溶剂；

所述的惰性粉选自轻质碳酸钙、硅藻土、滑石粉、白炭黑、膨润土、硫酸钠、陶土和高岭土中的一种或几种；

所述的有机溶剂选自甲苯、二甲苯、二甲基甲酰胺、石油芳烃和植物油中的一种或几种。

9.根据权利要求1所述的农用杀虫组合物，其特征在于，所述辅助剂包括农乳700，拉开粉和木质素磺酸钠中的一种。

10.权利要求1～9任意一项所述的农用杀虫组合物在防治农作物虫害方面的应用。