CN103999876A - 一种生物复合杀虫剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种生物复合杀虫剂及其制备方法与应用，通过将苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15接种于牛肉膏蛋白胨培养基培养，将卵孢白僵菌菌株NEAU30503接种于PDA培养基培养；然后再每100ml无菌水中分别加入1～2g吐温-60、5～10g茶皂素，充分溶解后，分别加入1×10¹³～2.5×10¹³个苏云金芽孢杆菌Bt-15芽孢、1×10¹³～2.5×10¹³个卵孢白僵菌菌株NEAU30503分生孢子，得到生物复合杀虫剂，该生物复合杀虫剂用于防治地老虎，绿色安全，持久高效，开辟了地老虎生物防治的新途径。

Description

一种生物复合杀虫剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于生物杀虫技术领域，尤其涉及一种生物复合杀虫剂及其制备方法与应用。

背景技术

地老虎是一类多食性害虫，是我国最重要的地下害虫类群之一，严重为害粮食作物、经济作物、油料作物、蔬菜等，给我国农业生产带来巨大损失，严重威胁我国粮食生产安全和农民的经济收入。上个世纪末“世界环境和发展大会”第21条决议提出“到2000年要在全球范围内控制化学农药的销售和使用，生物农药的产量达到60％”。我国政府也十分重视土地及水资源保护，将“绿色食品和生物农药发展”列入21世纪议程。因此生物农药生产已受到各国包括中国政府在内的高度重视，未来生物农药生产和使用将成为农业害虫防治的最主要措施之一。

我国加入WTO后，在国际农产品和食品贸易中，将面对国际绿色壁垒的严峻挑战，即苛刻的农药残留标准，此举导致我国对欧美日等国家的农产品出口受限。解决农药毒性超标的最佳途径就是用生物农药代替传统的高毒、高残留的化学农药。

目前，生产上对地老虎的防治仍以化学农药防治为主，虽然在适宜时期使用化学农药能较好控制地老虎的为害，但也带来了环境污染、农药残留、害虫易产生抗药性、安全性差等一系列问题，尤其不利于绿色食品和有机食品的生产，不利于我国农产品在国际市场的正常贸易。研制和开发生物农药是解决化学农药防治地老虎带来的负面影响的最主要途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物复合杀虫剂，旨在解决现有化学农药防治地老虎所带来的环境污染、农药残留、害虫易产生抗药性、安全性差等问题。

本发明的另一目的在于提供上述生物复合杀虫剂的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述生物复合杀虫剂在防治地老虎方面的应用。

本发明是这样实现的，一种生物复合杀虫剂，包括苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、卵孢白僵菌(Beauveriabrongniartii)以及助剂，所述助剂包括吐温-60、茶皂素；其中，100ml所述生物复合杀虫剂包括：

优选地，100ml所述生物复合杀虫剂包括：

优选地，所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15，于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9079。

优选地，所述卵孢白僵菌为卵孢白僵菌菌株NEAU30503，于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9080。

本发明进一步提供了一种生物复合杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15接种于牛肉膏蛋白胨培养基，在28℃培养48h后收菌计数；

(2)将卵孢白僵菌菌株NEAU30503接种于PDA培养基在28℃培养10d后收菌计数；

(3)每100ml无菌水中分别加入1～2g吐温-60、5～10g茶皂素，充分溶解后，分别加入1×10¹³～2.5×10¹³个苏云金芽孢杆菌Bt-15芽孢、1×10¹³～2.5×10¹³个卵孢白僵菌菌株NEAU30503分生孢子，得到生物复合杀虫剂。

本发明进一步提供了上述生物复合杀虫剂在防治地老虎方面的应用。

本发明克服现有技术的不足，提供一种生物复合杀虫剂，通过将苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、卵孢白僵菌(Beauveriabrongniartii)以及助剂混合得到，100ml混合物中，包括1×10¹³～2.5×10¹³个芽孢的苏云金芽孢杆菌、1×10¹³～2.5×10¹³个分生孢子的卵孢白僵菌、1～2g吐温-60以及5～10g茶皂素。

在本发明中，苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15，于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9079，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。苏云金芽孢杆菌Bt-15为从土壤中自行分离的苏云金芽孢杆菌菌株，对八字地老虎有较高的杀虫活性。卵孢白僵菌为卵孢白僵菌菌株NEAU30503，于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9080，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。卵孢白僵菌菌株NEAU30503为从土壤中感病致死的昆虫中分离而得，对高龄地老虎感病致死率高。

苏云金芽孢杆菌Bt-15和卵孢白僵菌菌株NEAU30503为发明的主要杀虫活性成份。其中苏云金芽孢杆菌Bt-15具有胃毒作用，八字地老虎在取食含有Bt-15芽孢的食物后，会在昆虫体肠道内增殖并释放一种对脊椎动物无毒的称为“内毒素”的蛋白晶体，并被肠道中蛋白酶水解成有毒性的蛋白毒素，与中肠上皮细胞刷状边膜上有高度亲和力的受体位点相结合，毒素分子插入中肠细胞膜形成孔洞，致使离子平衡破坏，细胞膨胀解体，最终导致虫体死亡。卵孢白僵菌菌株NEAU30503具有触杀作用，地老虎体壁接触到其分生孢子后，分生孢子萌发通过体壁穿透侵入体内血腔，吸收昆虫体液养分而生长，终至弥漫于虫体血液，妨碍血液循环；菌丝的代谢产物草酸盐类在血液中大量积累，引起血液理化性质的改变，使虫体代谢机能紊乱；并产生对昆虫有毒的毒素；最后虫体僵硬死亡。由于作用机理不同，苏云金杆菌具有胃毒作用，对低龄地老虎幼虫杀虫活性较高，而白僵菌具有触杀作用，对高龄地老虎杀虫活性较高，故本生物复合杀虫剂综合了类似于化学杀虫剂的胃毒和触杀作用，对地老虎防治时期范围更广。

此外，本发明助剂中的茶皂素是从山茶科植物的种子中提取的一种糖式化合物，它属皂素类，是一种天然非离子型表面活性剂，是水剂或可溶性粉剂农药的优良助剂，能改善农药的物理性能，提高药液在生物或植物体表的附着力，起到对农药的增效作用，同时可作为湿润剂和悬浮剂；其具有一定的杀虫作用，可直接作为生物农药。茶皂素在本发明的生物农药中，作为增效剂和悬浮剂，提高农药杀虫活性和农药悬浮性。

本发明生物复合杀虫剂主要用于八字地老虎、小地老虎的生物防治，一系列生物测定表明，该生物杀虫剂适于低龄期地上地老虎的防治和高龄期地下地老虎的防治，解决了苏云金杆菌对地老虎防治不佳以及防治手段匮乏的问题；同时其作为昆虫微生物农药，具有对人、畜、害虫天敌等有益生物安全的特点，不污染环境、无农药残留，有利于保持生态平衡和农业可持续发展，满足人们对安全、营养的绿色食品和有机食品的需求。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1苏云金芽孢杆菌Bt-15的分离与生物活性鉴定

从土壤中分离出50株苏云金芽孢杆菌(BT菌)，经过对八字地老虎幼虫的一系列生物测定试验，筛选出一株对八字地老虎生物活性最高的菌株Bt-15，生物测定其对小地老虎低龄幼虫也具有一定生物活性，测定结果如下表1所示：

表1：苏云金芽孢杆菌Bt-15对5日龄八字地老虎和小地老虎生物测定

实施例2卵孢白僵菌菌株NEAU30503的分离与生物活性鉴定

从土壤中感病死亡虫体中分离出一株卵孢白僵菌，经室内对八字地老虎、小地老虎低龄幼虫及其高龄幼虫生物测定，测定结果如下表2和表3所示。其对2种地老虎高龄幼虫杀虫活性很高，对其低龄幼虫也有较好的杀虫活性，将该卵孢白僵菌菌株命名为NEAU30503。

表2：卵孢白僵菌菌株NEAU30503对5～10日龄八字地老虎和小地老虎生物测定

表3：卵孢白僵菌菌株NEAU30503对4～5龄八字地老虎和小地老虎生物测定

实施例3

(1)将苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15接种于牛肉膏蛋白胨培养基(每1000ml培养基中，牛肉膏5g，蛋白胨10g，水1000ml，pH7.0～7.5)，在28℃培养48h后收菌计数；

(2)将卵孢白僵菌菌株NEAU30503接种于PDA培养基(每1000ml培养基中，去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g)在28℃培养10d后收菌计数；

(3)每100ml无菌水中分别加入2g吐温-60、10g茶皂素，充分溶解后，分别加入2.5×10¹³个苏云金芽孢杆菌Bt-15芽孢、2.5×10¹³个卵孢白僵菌菌株NEAU30503分生孢子，得到生物复合杀虫剂1。

实施例4

(1)将苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15接种于牛肉膏蛋白胨培养基，在28℃培养48h后收菌计数；

(2)将卵孢白僵菌菌株NEAU30503接种于PDA培养基在28℃培养10d后收菌计数；

(3)每100ml无菌水中分别加入1g吐温-60、5g茶皂素，充分溶解后，分别加入1×10¹³个苏云金芽孢杆菌Bt-15芽孢、1×10¹³个卵孢白僵菌菌株NEAU30503分生孢子，得到生物复合杀虫剂2。

效果实施例

将上述实施例3中制备的生物复合杀虫剂1喷洒在接虫盆栽大豆幼苗叶片上和幼苗根部土壤，统计八字地老虎和小地老虎的死亡率，叶片喷雾和根部土壤处理涉及参数和数据统计如下表4所示：

表4：复合生物杀虫剂盆栽大豆幼苗接虫防治试验

注：喷雾处理死亡率和校正死亡率为叶片喷雾处理后9d；根部土壤处理死亡率为处理后10d。

相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：

(1)大大降低土壤和农作物农药残留，无化学农药残留问题。

(2)防治目标害虫持效期长，优于化学农药。

(3)绿色安全，大大减少化学农药对人、畜、害虫天敌等有益生物的毒害作用。

(4)减少化学农药对环境的污染，有利于保持生态平衡。

(5)能满足绿色食品和有机食品生产的需要，有利于农业可持续性发展。

(6)解决了苏云金芽孢杆菌防治地老虎效果差的问题，开辟了地老虎生物防治的新途径。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种生物复合杀虫剂，其特征在于，包括苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、卵孢白僵菌(Beauveriabrongniartii)以及助剂，所述助剂包括吐温-60、茶皂素；其中，100ml所述生物复合杀虫剂包括：

2.如权利要求1所述的生物复合杀虫剂，其特征在于，100ml所述生物复合杀虫剂包括：

3.如权利要求2所述的生物复合杀虫剂，其特征在于，所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15，于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9079。

4.如权利要求3所述的生物复合杀虫剂，其特征在于，所述卵孢白僵菌为卵孢白僵菌菌株NEAU30503，于2014年4月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9080。

5.一种生物复合杀虫剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将苏云金芽孢杆菌菌株Bt-15接种于牛肉膏蛋白胨培养基，在28℃培养48h后收菌计数；

(2)将卵孢白僵菌菌株NEAU30503接种于PDA培养基在28℃培养10d后收菌计数；

(3)每100ml无菌水中分别加入1～2g吐温-60、5～10g茶皂素，充分溶解后，分别加入1×10¹³～2.5×10¹³个苏云金芽孢杆菌Bt-15芽孢、1×10¹³～2.5×10¹³个卵孢白僵菌菌株NEAU30503分生孢子，得到生物复合杀虫剂。

6.权利要求1～4任一项所述的生物复合杀虫剂在防治地老虎方面的应用。