CN104789503B - 一种具有杀虫效果的秸秆腐解菌剂及其应用 - Google Patents

一种具有杀虫效果的秸秆腐解菌剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有杀虫效果的秸秆腐解菌剂及其应用。本发明所提供的秸秆腐解菌剂，它的活性成分是由黑曲霉、拟康氏木霉、鲜绿青霉、解木聚糖梭菌、枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌杀虫变种和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种组成。利用本发明提供的秸秆腐熟菌剂对玉米秸秆和油菜秸秆有快速分解效果，可使玉米秸秆的总分解率达63.4％，可使油菜秸秆的总分解率达60.1％；本发明提供的秸秆腐熟菌剂还能够减少土壤害虫，在玉米秸秆还田的土壤中，可使土壤害虫的减少率达80.3％，在油菜秸秆还田的土壤中，可使土壤害虫的减少率达83.5％。本发明提供的秸秆腐熟菌剂对农作物有显著增产效果，可使玉米增产为17.3％，可使水稻增产16.2％。

Description

一种具有杀虫效果的秸秆腐解菌剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物领域中一种具有杀虫效果的秸秆腐解菌剂及其应用。
背景技术
秸秆还田作为一项培肥地力的增产措施在我国受到普遍重视，既能有效防止秸秆焚烧带来的环境污染，又能增肥增产，还能节水和降低耕作成本，对农业可持续发展具有积极作用。秸秆还田有多种方式，其中各地大力推广、应用范围最广的就是将秸秆粉碎后直接还田。秸秆直接还田是将收获作物籽粒后的秸秆经粉碎后直接翻入土壤，能有效提高土壤有机质含量，增加土壤微生物活性，提高土壤肥力，但同时也为病虫害的生长和发育提供了良好的生长环境，尤其是在秸秆直接还田后减少中耕次数的条件下，为病虫害提供了相对稳定的生长发育环境。
此外农作物秸秆的主要成分结构致密，在自然状态下较难分解。因此，有针对性地强化破坏秸秆中的结构，才能实现秸秆的快速分解。目前大多数农作物秸秆还田腐解菌剂存在微生物代谢类型和功能单一、针对性不强和复配比例不当等问题，无法达到快速高效的秸秆腐解效果，难以大规模推广应用。
如何将农作物秸秆进行有效的处理，既强调秸秆腐解的效果，又达到防治虫害的目的，成为一个亟待解决的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何快速分解秸秆、抑制土壤害虫和/或增加作物产量。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种具有杀虫效果的秸秆腐解菌剂，该秸秆腐解菌剂可作为秸秆直接还田的菌剂。
本发明所提供的秸秆腐解菌剂，它的活性成分是由黑曲霉、拟康氏木霉、鲜绿青霉、解木聚糖梭菌、枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌杀虫变种和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种组成。
上述秸秆腐解菌剂中，所述黑曲霉具体可为黑曲霉ZM-8，黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)在中国典型培养物保藏中心的编号为CCTCC NO：M209125；所述拟康氏木霉具体可为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的编号为CGMCCNO.3.6608的拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)；所述鲜绿青霉具体可为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的编号为CGMCC NO.3.5933的鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)；所述解木聚糖梭菌具体可为在德国微生物菌种保藏中心的编号为DSM No.6555的解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)；所述枯草芽胞杆菌具体可为在中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心的编号为ACCC No.03189的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)；所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种具体可为在中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心的编号为ACCC No.01841的苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)；所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种具体可为在中国微生物菌种保藏管理委员会林业微生物中心的编号为CFCC No.1043的苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)。
上述秸秆腐解菌剂中，所述菌剂的活性成分中，所述黑曲霉、所述拟康氏木霉、所述鲜绿青霉、所述解木聚糖梭菌、所述枯草芽胞杆菌、所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种和所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种的菌落形成单位(cfu)数目比可为(2-3):(2-3):(2-3):(3-4):(3-4):(2-3):(2-3)，如1:(1-1.5):(1-1.5):(1.5-2):(1.5-2):(1-1.5):(1-1.5)，或1:1:1:2:2:1.5:1.5。
上述秸秆腐解菌剂中，所述菌剂的活性成分可为所述黑曲霉、所述拟康氏木霉、所述鲜绿青霉、所述解木聚糖梭菌、所述枯草芽胞杆菌、所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种和所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种经发酵培养后，或直接使用或浓缩使用或经载体吸附而制成的活菌制品。
上述秸秆腐解菌剂中，所述菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
上述秸秆腐解菌剂还可包括载体。所述载体可为固体载体和/或液体载体。所述固体载体为矿物材料、生物材料和/或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石、草炭土和硅藻土中的至少一种；所述生物材料为各类作物的秸秆、松壳、稻草、花生壳、玉米粉、豆粉、淀粉、草炭和动物的粪便中的至少一种；所述高分子化合物为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂为癸烷和/或十二烷。所述粘土具体可为凹凸棒粘土。所述凹凸棒粘土是一种以凹凸棒石为主要成分的粘土矿物，主要化学成分是水合镁铝硅酸盐，含有K、Na、Ca、Fe、Al、Mg、Mn、Ti等元素，具有独特的分散能力和吸附能力。
上述秸秆腐解菌剂中，所述载体具体可由凹凸棒粘土和食用菌渣按照2：3的质量比(干重)混合而成。其中，食用菌渣为用农作物秸秆、木屑等作为代料栽培原料制成培养基，待食用菌收获后培养基的剩余物。
上述秸秆腐解菌剂中，所述菌剂的活性成分的含量为1×108cfu-1×109cfu/g菌剂，如所述菌剂的活性成分的含量为1×108cfu/g菌剂。
上述秸秆腐解菌剂中，所述菌剂的微生物可以以活细胞的发酵液、被培养的活细胞、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。在本发明的一个实施例中，所述黑曲霉、所述拟康氏木霉、所述鲜绿青霉、所述解木聚糖梭菌、所述枯草芽胞杆菌、所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种和所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种可以以活细胞的发酵液、被培养的活细胞、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。
所述秸秆腐解菌剂具体可为下述至少一种菌剂：1)秸秆直接还田的菌剂；2)增加作物产量的菌剂：3)防治植物虫害的菌剂；4)提高秸秆分解率的菌剂。所述防治植物虫害可体现在抑制土壤害虫上。
本发明还提供了一种制备菌剂的方法，该方法包括将上述黑曲霉、上述拟康氏木霉、上述鲜绿青霉、上述解木聚糖梭菌、上述枯草芽胞杆菌、上述苏云金芽胞杆菌杀虫变种和上述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种按照所述比例混合，得到所述菌剂的活性成分。
上述制备菌剂的方法中，还包括将吸附载体和所述菌剂的活性成分混合，得到所述菌剂的步骤；所述菌剂中总菌体含量为1×108cfu-1×109cfu/g，如1×108cfu/g。
上述制备菌剂的方法中，所述吸附载体具体可由凹凸棒粘土粉和食用菌渣按照2：3的质量比(干重)混合而成。其中，食用菌渣可为用农作物秸秆、木屑等作为代料栽培原料制成培养基，待食用菌收获后培养基的剩余物。
上述制备菌剂的方法中，具体可用发酵培养基培养所述活性成分，采用的培养条件可为：培养温度30-35℃，培养时间为48-72小时；在本发明的一个实施例中，培养条件具体可为：培养温度30℃，培养时间为48-72小时。
上述秸秆腐解菌剂在制备提高农作物秸秆分解率和/或防治植物虫害和/或提高农作物产量的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
上述秸秆腐解菌剂在制备产品中的应用中，所述产品可为微生物肥料。所述微生物肥料可为复合微生物肥料和/或生物有机肥。所述复合微生物肥可为菌剂、营养物质和有机质复合而成的肥料，所述复合微生物肥既有微生物的作用，又有化肥的作用。所述生物有机肥可为菌剂和腐熟的有机肥复合而成的一类肥料。复合微生物肥料和/或生物有机肥的剂型可为颗粒剂。
本发明所提供的如下a、b或c中任一方法也属于本发明的保护范围：
a、提高土壤中秸秆分解率的方法，包括向土壤中施入所述菌剂，提高土壤中秸秆分解率；所述土壤为秸秆还田的土壤；
b、防治植物虫害的方法，包括向土壤中施入所述菌剂，防治植物虫害；所述土壤可为秸秆还田的土壤或未秸秆还田的土壤；
c、提高农作物产量的方法，包括向土壤中施入所述菌剂，提高农作物的产量；所述土壤可为秸秆还田的土壤或未秸秆还田的土壤；所述农作物可为玉米和/或水稻。
在本发明的实施例中，所述农作物秸秆可为玉米秸秆或油菜秸秆，所述提高农作物产量可为提高玉米产量或提高水稻产量。
实验证明，本发明提供的秸秆腐熟菌剂能快速腐解玉米秸秆和油菜秸秆，菌剂施用20天就有显著的效果：施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂20天后玉米秸秆的总分解率为63.4％，为未施用菌剂玉米秸秆对照的总分解率的2.07倍；施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂20天后油菜秸秆的总分解率为60.1％，为未施用菌剂油菜秸秆对照的总分解率的2.17倍。本发明提供的秸秆腐熟菌剂还能够减少土壤害虫，施用10天就有显著的杀虫效果：在玉米秸秆还田的土壤中，施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂10天后土壤害虫密度为33个/m2，未施用菌剂10天后土壤害虫密度为165个/m2，以未施用菌剂的土壤害虫密度为对照，施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂10天后土壤害虫的减少率为80.3％；在油菜秸秆还田的土壤中，施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂10天后土壤害虫密度为26个/m2，未施用菌剂10天后土壤害虫密度为158个/m2，以未施用菌剂的土壤害虫密度为对照，施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂10天后土壤害虫的减少率为83.5％。本发明提供的秸秆腐熟菌剂还可提高农作物产量，对玉米和水稻均有显著的增产效果，在玉米秸秆还田的土壤中，施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂的玉米产量为663千克/亩，未施用菌剂的玉米产量为565千克/亩，作物增产率为17.3％；在油菜秸秆还田的土壤中，施用本发明的提供的秸秆腐熟菌剂的水稻产量为653千克/亩，未施用菌剂的水稻产量为562千克/亩，作物增产率为16.2％。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用的黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125于2009年6月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国武汉武汉大学)。在下文中简称黑曲霉ZM-8。
下述实施例中所用的拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCCNO.3.6608于2003年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，自该保藏日起公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心获得该菌株。
下述实施例中所用的鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933于2002年11月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，自该保藏日起公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心获得该菌株。
下述实施例中所用的解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555(即解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555T)为DSMZ产品，记载该菌株的相关文献为Chamkha M1,Garcia JL,Labat M.Metabolism of cinnamic acids by someClostridiales and emendation of the descriptions of Clostridium aerotolerans,Clostridium celerecrescens and Clostridium xylanolyticum.Int J Syst EvolMicrobiol.2001Nov；51(Pt 6):2105-11。
下述实施例中所用的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189于1978年6月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心(简称ACCC，地址：北京市海淀区中关村南大街12号，中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，邮编100081)，自该保藏日起公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心获得该菌株。
下述实施例中所用的苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCCNo.01841于2008年1月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心(简称ACCC，地址：北京市海淀区中关村南大街12号，中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，邮编100081)，自该保藏日起公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心获得该菌株。
下述实施例中所用的苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043于2003年8月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会林业微生物中心(中国林业微生物菌种保藏管理中心，简称CFCC，)，自该保藏日起公众可从中国林业微生物菌种保藏管理中心获得该菌株。
下述实施例中所用的培养基如下：
1号培养基(查氏培养基)：溶质及其浓度为：NaNO33g/L，K2HPO41g/L，KCl 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，FeSO40.01g/L，蔗糖20g/L，琼脂15g/L；溶剂为水；pH7.0±0.1。121℃高压灭菌15min。
2号培养基(PDA培养基)：去皮的马铃薯200g切成小块，加入1L蒸馏水煮沸30分钟，过滤，向滤液中加入葡萄糖和琼脂各15g，用蒸馏水定容至1L，pH7.0±0.1，121℃高压灭菌15min。
3号培养基(Mandels改良营养盐液)：溶质及其浓度为：(NH4)2SO42g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，KH2PO40.1g/L，玉米秸秆粉2g/L；溶剂为水；pH7.0±0.1。121℃高压灭菌15min。
4号培养基(PCS改良培养基)：溶质及其浓度为：蛋白胨5g/L，酵母粉1g/L，玉米秸秆粉5g/L，NaCl 5g/L，K2HPO41g/L，MgSO4·7H2O 0.35g/L，CaCO33g/L；溶剂为水；pH7.2±0.1。121℃高压灭菌15min。
5号培养基(LB改良培养基)：溶质及其浓度为：胰蛋白胨10g/L，酵母浸膏5g/L，NaCl 8g/L；溶剂为水；pH 7.0。121℃高压灭菌15min。
下述实施例中所述的吸附载体由凹凸棒粘土粉和食用菌渣按照2：3的质量比(干重)混合而成。其中，凹凸棒粘土粉的粒径为0.10-0.15mm，为安徽省明光市国星凹土有限公司产品；食用菌渣为用农作物秸秆、木屑等作为代料栽培原料制成培养基，待食用菌收获后培养基的剩余物，食用菌渣粒径大小为2.00-3.00mm。
实施例1、菌剂的制备
1、活化
1.1、将黑曲霉ZM-8接种在1号培养基上，置于30℃培养箱培养3天，得到活化的黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125。
1.2、将拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.3.6608和鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933分别接种在2号培养基上，置于30℃培养箱培养3天，分别得到活化的拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.3.6608和鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933。
1.3、将解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189分别接种于装有100ml 4号培养基的250ml三角瓶中，置于30℃培养箱静置培养3天，分别得到活化的解木聚糖梭菌(Clostridiumxylanolyticum)DSM No.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189。
1.4、将苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCCNo.1043分别接种于装有25ml 5号培养基的250ml三角瓶中，30℃、150rpm(旋转半径20mm)振荡培养2天，分别得到活化的苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCCNo.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriaeShvetsova)CFCC No.1043。
2、扩大培养
将步骤1中1.1和1.2活化的黑曲霉ZM-8、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCC NO.3.6608和鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCCNO.3.5933分别接入三个装有3号培养基的发酵罐、步骤1中1.3活化的解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCCNo.03189分别接入两个装有4号培养基的发酵罐和步骤1中1.4活化的苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillusthuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043分别接入两个装有5号培养基的发酵罐，均在30℃进行静止逐级扩大培养，扩大培养过程中接种量为5％-10％(体积百分比含量)，分别得到黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125发酵液(10×109cfu/ml)(简称黑曲霉ZM-8发酵液)、拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCCNO.3.6608发酵液(10×109cfu/ml)(简称拟康氏木霉发酵液)、鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCC NO.3.5933发酵液(10×109cfu/ml)(简称鲜绿青霉发酵液)、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555发酵液(10×109cfu/ml)(简称解木聚糖梭菌发酵液)和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189发酵液(10×109cfu/ml)(简称枯草芽胞杆菌发酵液)、苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841发酵液(10×109cfu/ml)(简称苏云金芽胞杆菌杀虫变种发酵液)和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)ACCC CFCCNo.1043发酵液(10×109cfu/ml)(简称苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种发酵液)。
3、菌剂的制备
3.1、菌剂A的制备
将按照步骤2得到的苏云金芽胞杆菌杀虫变种发酵液和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种发酵液的菌落形成单位(cfu)数目比为1:1的比例进行混合得到发酵混合液A。该发酵混合液A中，苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae)CFCC No.1043的含量均为5×109cfu/ml。将吸附载体和上述发酵混合液A混合，保持总含水量为75％(质量百分比)，30℃静止培养3天待充分吸附后，35℃通风自然干燥得到菌剂A，菌剂A中的活性成分的含量为1×108cfu/g菌剂，菌剂A的活性成分为：苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillusthuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae)CFCC No.1043。所述菌剂A中，苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillusthuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae)CFCC No.1043的菌落形成单位(cfu)数目比为1:1。
3.2、菌剂B的制备
按照步骤2得到的黑曲霉ZM-8发酵液、拟康氏木霉发酵液、鲜绿青霉发酵液、解木聚糖梭菌发酵液和枯草芽胞杆菌发酵液的菌落形成单位(cfu)数目比为1:1:1:1:1的比例进行混合得到发酵混合液B。该发酵混合液B中，黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125、拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.3.6608、鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933、解木聚糖梭菌(Clostridiumxylanolyticum)DSM No.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189的含量均为2×109cfu/ml。将吸附载体和上述发酵混合液B混合，保持总含水量为75％(质量百分比)，30℃静止培养3天待充分吸附后，35℃通风自然干燥得到菌剂B，菌剂B中的活性成分的含量为1×108cfu/g菌剂，菌剂B的活性成分为：黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125、拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.3.6608、鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933、解木聚糖梭菌(Clostridiumxylanolyticum)DSM No.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189。所述菌剂B中，黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125、拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.3.6608、鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189的菌落形成单位(cfu)数目比为1:1:1:1:1。
3.3、菌剂C的制备
将按照步骤2得到的黑曲霉ZM-8发酵液、拟康氏木霉发酵液、鲜绿青霉发酵液、解木聚糖梭菌发酵液、枯草芽胞杆菌发酵液、苏云金芽胞杆菌杀虫变种发酵液和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种发酵液进行混合得到发酵混合液C。该发酵混合液C中，黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCC NO.3.6608和鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCCNO.3.5933的含量均为1×109cfu/ml，解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSMNo.6555和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189的含量均为2×109cfu/ml，苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043的含量均为1.5×109cfu/ml。将吸附载体和上述发酵混合液C混合，保持总含水量为75％(质量百分比)，30℃静止培养3天待充分吸附后，35℃通风自然干燥得到菌剂C，菌剂C中的活性成分的含量为1×108cfu/g菌剂，菌剂C的活性成分为：黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125、拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.3.6608、鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO.3.5933、解木聚糖梭菌(Clostridiumxylanolyticum)DSM No.6555、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189、苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043。所述菌剂C中，黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO：M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCC NO.3.6608、鲜绿青霉(Penicillium visidicatum)CGMCCNO.3.5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No.6555、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)ACCC No.03189、苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillusthuringiensis)ACCC No.01841和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043的菌落形成单位(cfu)数目比为1:1:1:2:2:1.5:1.5。
实施例2、不同菌剂对玉米秸秆和油菜秸秆的腐解及土壤杀虫效果
田间试验在四川省成都市都江堰天马镇进行，玉米秸秆的腐解及土壤杀虫效果实验和油菜秸秆的腐解及土壤杀虫效果实验的实验设计方法相同，均如下：实验采用随机区组设计，设置3个重复区，每个重复区随机设置4个处理区，分别为对照处理区、菌剂A处理区、菌剂B处理区和菌剂C处理区。每个处理区的面积均为0.5亩。
本实施例中，秸秆的总分解率＝(处理前秸秆质量-处理后秸秆质量)/处理前秸秆质量×100％。实验重复三次，取平均值。
本实施例中，检测土壤中的害虫数量按鳞翅目昆虫虫卵数量计算，土壤中虫卵的形态鉴定参考文献“G.L.Le Cafo,B.R.Flaherty,赵龙章.一些仓储害虫卵的描述(鞘翅目和鳞翅目)[J].植物检疫参考资料,1981,(2):28-34.”，土壤中虫卵的检测方法参考文献“林建平,潘品福,诸建武等.4种寄生虫虫卵检测方法比较[J].浙江预防医学,2004,16(9):23.”。
检测土壤中的虫卵数量采用改进的饱和亚硫酸钠溶液漂浮法，操作步骤如下：
实验重复三次，取平均值。
准确取土壤1(土壤深度为地下10cm)1.0g，放于锥形瓶内，加入少量亚硝酸钠饱和溶液(溶质及其浓度为亚硝酸钠720g/L，溶剂为水，pH自然)混匀，再加亚硝酸钠饱和溶液至青霉素瓶口，放置洁净载玻片一张，使载玻片恰好与液面接触，静置15分钟，提起载玻片迅速翻转，在低倍镜(10×10或10×40)下检测虫卵并计数。
将上述土壤1分别替换为土壤2(土壤深度为地下20cm)和土壤3(土壤深度为地下30cm)，其它步骤均相同。
所述检测土壤中的虫卵数量为土壤1、土壤2和土壤3中的各虫卵数量的平均值。
本实施例中，田间实验土壤湿度为16％-18％，气温为20-30℃。
1、不同菌剂对玉米秸秆的腐解及土壤杀虫效果实验
1.1、对照处理区
将玉米秸秆粉碎至粒径为2-5cm后不加菌剂，轻翻使秸秆位于距地表0-15cm的土壤层，1个月后种植玉米成单19号(四川省农业科学院作物研究所产品)。玉米种植后第10天测定不同深度土壤层(10cm、20cm和30cm)中的害虫虫卵数量，玉米种植后第20天测定玉米秸秆的总分解率，玉米成熟后测定玉米的亩产量。
1.2、菌剂A处理区
将玉米秸秆粉碎至粒径为2-5cm后按每亩菌剂A 15Kg均匀撒入，将其轻翻使秸秆位于距地表0-15cm的土壤层，1个月后种植玉米成单19号(四川省农业科学院作物研究所产品)。玉米种植后第10天测定不同深度土壤层(10cm、20cm和30cm)中的害虫虫卵数量，玉米种植后第20天测定玉米秸秆的总分解率，玉米成熟后测定玉米的亩产量。
1.3、菌剂B处理区
除将1.2中的菌剂A替换为菌剂B，其它步骤均相同。
1.4、菌剂C处理区
除将1.2中的菌剂A替换为菌剂C，其它步骤均相同。
除1.1中土壤中不施菌剂、1.2-1.4中穴施菌剂的种类不同外，各处理的其它操作均相同。
分别计算上述4个处理中土壤的害虫虫卵数量和玉米产量。以未腐熟玉米秸秆为对照，分别计算4个处理中玉米秸秆的总分解率。实验结果见表1。
结果表明，施用实施例1制备的菌剂C后玉米秸秆的总分解率达63.4％，为对照处理区玉米秸秆的总分解率的2.07倍；与对照处理区相比，施用实施例1制备的菌剂C的土壤害虫减少率达80.3％，玉米产量增加率17.3％，表明菌剂C既能显著增加玉米秸秆在大田中的分解率，又能高效防虫，增加作物产量。
表1.不同菌剂对玉米秸秆的腐解及土壤杀虫效果
2、不同菌剂对油菜秸秆的腐解及土壤杀虫效果实验
2.1、对照处理区
将油菜秸秆粉碎至粒径为2-5cm后不加菌剂，轻翻使秸秆位于距地表0-15cm的土壤层，1个月后种植水稻。水稻种植后第10天测定不同深度土壤层(10cm、20cm和30cm)中的害虫虫卵数量，水稻种植后第20天测定油菜秸秆的总分解率，水稻成熟后测定水稻的亩产量。
2.2、菌剂A处理区
将油菜秸秆粉碎至粒径为2-5cm后按每亩菌剂A 15Kg均匀撒入，将其轻翻使秸秆位于距地表0-15cm的土壤层，1个月后种植水稻。水稻种植后第10天测定不同深度土壤层(10cm、20cm和30cm)中的害虫虫卵数量，水稻种植后第20天测定油菜秸秆的总分解率，水稻成熟后测定水稻的亩产量。
2.3、菌剂B处理区
除将2.2中的菌剂A替换为菌剂B，其它步骤均相同。
2.4、菌剂C处理区
除将2.2中的菌剂A替换为菌剂C，其它步骤均相同。
除2.1中土壤中不施菌剂、2.2-2.4中穴施菌剂的种类不同外，各处理的其它操作均相同。
分别计算上述4个处理中土壤的害虫虫卵数量和水稻产量。以未腐熟油菜秸秆为对照，分别计算4个处理中油菜秸秆的总分解率。实验结果见表2。
结果表明，施用实施例1制备的菌剂C后油菜秸秆的总分解率达60.1％，为对照处理区油菜秸秆的总分解率的2.17倍；与对照处理区相比，施用实施例1制备的菌剂C的土壤害虫减少率达83.5％，水稻产量增加率16.2％，表明菌剂C既能显著增加油菜秸秆在大田中的分解率，又能高效防虫，增加作物产量。
表2.不同菌剂对油菜秸秆的腐解及土壤杀虫效果

Claims (9)

1.菌剂，它的活性成分是由黑曲霉、拟康宁木霉、鲜绿青霉、解木聚糖梭菌、枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌杀虫变种和苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种组成；
所述黑曲霉为黑曲霉ZM-8（Aspergillus niger ZM-8）CCTCC NO.M209125、所述拟康宁木霉为拟康宁木霉（Trichoderma koningiopsis）CGMCC NO.3.6608、所述鲜绿青霉为鲜绿青霉（Penicillium viridicatum）CGMCC NO.3.5933、所述解木聚糖梭菌为解木聚糖梭菌（Clostridium xylanolyticum）DSM No.6555、所述枯草芽胞杆菌为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）ACCC No. 03189、所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种为苏云金芽胞杆菌杀虫变种ACCC No. 01841和所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种为苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（Bacillus thuringiensis subsp. galleriae）CFCC No.1043；
所述菌剂的活性成分中，所述黑曲霉、所述拟康宁木霉、所述鲜绿青霉、所述解木聚糖梭菌、所述枯草芽胞杆菌、所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种和所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种的菌落形成单位数目比为1:1:1:2:2:1.5:1.5。
2.制备权利要求1所述菌剂的方法，包括将权利要求1中所述黑曲霉、所述拟康宁木霉、所述鲜绿青霉、所述解木聚糖梭菌、所述枯草芽胞杆菌、所述苏云金芽胞杆菌杀虫变种和所述苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种按照权利要求1中所述菌落形成单位数目比混合，得到所述菌剂的活性成分，将所述菌剂的活性成分与菌剂载体混合，得到所述菌剂。
3.权利要求1所述菌剂在提高农作物秸秆分解率和/或防治植物虫害和/或提高农作物产量中的应用。
4.权利要求1所述菌剂在制备提高农作物秸秆分解率和/或防治植物虫害和/或提高农作物产量的产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述产品为微生物肥料。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述微生物肥料为复合微生物肥料和/或生物有机肥。
7.提高土壤中秸秆分解率的方法，包括向土壤中施入权利要求1所述菌剂，提高土壤中秸秆分解率；所述土壤为秸秆还田的土壤。
8.防治植物虫害的方法，包括向土壤中施入权利要求1所述菌剂，防治植物虫害。
9.提高农作物产量的方法，包括向土壤中施入权利要求1所述菌剂，提高农作物的产量。
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Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1724485A (zh) * 2005-06-15 2006-01-25 湖南大学 一种促进农业废物堆肥腐熟的活性添加剂及其应用
CN101928186A (zh) * 2010-03-02 2010-12-29 万光存 一种防治作物病虫害的复合微生物肥料及其制备方法
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