CN105316249B - 一种枯草芽孢杆菌及微生物菌剂和它们在发酵腐熟中的应用 - Google Patents
一种枯草芽孢杆菌及微生物菌剂和它们在发酵腐熟中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，该枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013496。本发明还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂含有如上所述的枯草芽孢杆菌作为有效成分。本发明还提供了如上所述的枯草芽孢杆菌或如上所述的微生物菌剂在发酵腐熟中的应用。如上所述的枯草芽孢杆菌或如上所述的微生物菌剂能够用于农作物秸秆和园林绿化废弃物的发酵腐熟，本发明能够较大地提升对发酵腐熟的促进水平。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种枯草芽孢杆菌、一种微生物菌剂以及它们在发酵腐熟中的应用。
背景技术
秸秆是主指棉花秸秆、兼指其它农作物的茎秆，通常指小麦、水稻、玉米、薯类、油料、甘蔗和其它农作物在收获籽实后的剩余部分。秸秆中含有大量的有机质、氮、磷、钾和微量元素，是农业生产重要的有机肥源之一。据测定，秸秆的秆、叶、根中含有大量的氮、磷、钾有机原料，分析得出，每100公斤鲜秸秆中含氮0.48公斤，磷0.38公斤，钾1.67公斤，相当于2.4公斤氮肥，3.8公斤磷肥，3.4公斤钾肥。2500万吨的存积秸秆所含的养分就相当于30万吨尿素，普钙42万吨，硫酸钾53万吨。若将500公斤农作物秸秆还田，就相当于给土壤施入标准肥50公斤以上，土壤有机质含量可以提高0.03％左右，并且使土壤的容重减少、透水性、透气性、蓄水保墒能力增加，并可使土壤的团粒结构发生变化，保持疏松状态，有效缓解土壤易板结的问题。利用秸秆生产的秸秆生物肥料，肥效更高。据试验，每亩土地基施250公斤秸秆生物肥，其肥效相当于100公斤碳酸氢铵、50公斤过磷酸钙和20公斤的硫酸钾，而且还具有良好的生态效益，是无公害农业的重要肥料源。因此，秸秆通过综合利用作为肥料施入农田，是补充和平衡土壤养分、改良土壤的有效方法，对于促进土地生产良性循环、提高耕地基础地力和农业的可持续发展具有重要意义。
园林绿化废弃物是指在城市绿化美化进程中产生的枯枝、落叶、草屑、花败、断根和修剪下的枝叶等物质。随着城市的数量增多、面积增大和绿化程度的提高，园林绿化废弃物数量也在急剧增加。例如北京市2007年年产园林绿化废弃物236万吨。园林绿化废弃物如何处理已经成为各城市急待解决的问题之一。园林绿化废弃物相对于农作物秸秆更加难以处理，通常只能选择填埋。
微生物在适宜的条件下，能通过发酵腐熟将秸秆堆料或园林绿化废弃物堆料中的碳、氮、磷、钾等分解，形成简单有机物，从而进一步分解为作物可吸收的营养成分。但是，现有的微生物菌种的发酵腐熟效率仍然有待提高，特别是对园林绿化废弃物堆料的发酵腐熟效率急需提高。
发明内容
为了进一步提高微生物菌种的发酵腐熟效率，本发明的发明人经过多年反复的筛选，得到了一株具有非常优异的发酵腐熟效率的枯草芽孢杆菌，由此得到了本发明。本发明提供了一种枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌具有非常优异的发酵腐熟效率，尤其是对园林绿化废弃物堆料具有非常高的发酵腐熟效率。
本发明提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，该枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013496。
本发明还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂含有如上所述的枯草芽孢杆菌作为有效成分。
本发明还提供了如上所述的枯草芽孢杆菌或如上所述的微生物菌剂在发酵腐熟中的应用。
通过上述技术方案，本发明能够较大地提升发酵腐熟的效率，尤其是大大提高了对园林绿化废弃物堆料的发酵腐熟效率。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
生物材料保藏
本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是本发明的发明人从天津市静海县农峰科技园实验用地土壤中分离的纯培养物，其保藏编号为CCTCC NO：M2013496，保藏日期为2013年10月24日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址位于中国武汉武汉大学，分类命名为Bacillus subtilis。
本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是本发明的发明人从天津市静海县农峰科技园实验用地土壤中分离的纯培养物，其保藏编号为CCTCC NO：M2013495，保藏日期为2013年10月24日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址位于中国武汉武汉大学，分类命名为Bacillus licheniformis。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，该枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013496。
本发明提供的如上所述的枯草芽孢杆菌可以在常规的细菌培养基中存活并生长繁殖。例如，所述细菌培养基可以包括可溶性淀粉培养基、LB培养基和玉米粉培养基中的至少一种。优选情况下，所述细菌培养基含有30-250g/L的豆粉、20-120g/L的淀粉、0.2-4g/L的氯化钠、0.3-1g/L的碳酸钙、0.1-0.8g/L的磷酸二氢钾和3-15g/L的硫酸亚铁。
本发明如上所述的枯草芽孢杆菌是一株非常优异的秸秆发酵腐熟菌，能够非常高效快速地进行秸秆的腐熟发酵。
为了长期保存所述的枯草芽孢杆菌，可将枯草芽孢杆菌保存在甘油保存液中，保存温度为-85℃至-20℃。
本发明还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂含有如上所述的枯草芽孢杆菌外，还含有其它菌株和辅料。
其中，该微生物菌剂中的枯草芽孢杆菌的含量没有特别的要求，可以为微生物发酵腐熟领域常规的含量，例如，相对于1g的微生物菌剂，所述枯草芽孢杆菌的含量为106-1011CFU；更优选地，相对于1g的微生物菌剂，所述枯草芽孢杆菌的含量为108-109CFU。
其中，在本发明特别优选的一种实施方式中，该微生物菌剂还含有地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013495；且所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：(0.05-0.2)。在该优选实施方式中，所述枯草芽孢杆菌和所述地衣芽孢杆菌能够发挥协同作用，本发明的微生物菌剂能够取得更好的腐熟发酵效果。
其中，该微生物菌剂还可以含有辅料。其中，该微生物菌剂中的辅料的含量没有特别的要求，例如，相对于109CFU的所述枯草芽孢杆菌，辅料的含量可以为0.01-100g，优选为0.1-10g。
其中，所述辅料可以含有分散剂、营养剂和惰性载体中的至少一种。
其中，该微生物菌剂中的分散剂、营养剂和惰性载体的含量没有特别的要求，例如，相对于109CFU的所述枯草芽孢杆菌，辅料的含量可以为0.01-100g，优选为0.1-10g。
所述分散剂可以为能够促使物料颗粒均匀分散于介质中形成稳定悬浮体系的物质，例如可以包括聚羧酸盐、木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、二烷基磺基丁二酸钠、烷基芳基磺酸钠、聚氧乙烯烷基苯基醚、三聚磷酸钠、聚氧乙烯烷基芳基磷酯、聚氧乙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯烷基芳基聚合物、聚乙二醇烷基苯基醚壬基酚聚氧乙烯醚、磺化甲醛萘基钠、曲拉通100和吐温80中的至少一种。
所述营养剂可以为能够为枯草芽孢杆菌的生长提供碳源的物质，例如可以包括草炭、大豆粉、大米、小麦、糊精、胶原、葡萄糖和淀粉中的至少一种。
所述惰性载体可以为提供负载基质但具有惰性的物质，例如可以包括碳酸钙、黄土、硅藻土、膨润土、滑石粉、云母粉、高岭土和方解石粉中的至少一种。
其中，本发明的微生物菌剂中还可以含有选自保存剂、润湿剂、引诱剂、胶囊化剂、结合剂、乳化剂、染料、紫外线保护剂、缓冲剂和流平剂中的至少一种。
其中，所述微生物菌剂的剂型没有特别的要求，可以为常规使用的各种微生物菌剂的剂型，例如可以为粉剂和/或颗粒剂。
其中，优选情况下，所谓微生物菌剂为颗粒剂，所述辅料含有草炭、胶原、三聚磷酸钠、碳酸钙和淀粉；相对于109CFU的所述枯草芽孢杆菌，草炭的含量为0.3-3g，胶原的含量为0.01-0.1g，三聚磷酸钠的含量为碳酸钙的含量为0.1-0.5g，淀粉的含量为0.1-1g。
本发明如上所述的微生物菌剂可以使用保藏编号为CCTCC NO.M2013496的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，通过常规的微生物菌剂制备方法制备得到，例如，可以将保藏编号为CCTCC NO.M2013496的枯草芽孢杆菌在液态细菌培养基中进行培养，然后将培养液与辅料混合均匀。
其中，细菌培养基可以为常规使用的细菌培养基，例如可以包括可溶性淀粉培养基、LB培养基和玉米粉培养基中的至少一种。可溶性淀粉培养基可以含有10-30g/L的可溶性淀粉、0.5-2g/L的KNO3、0.1-1g/L的K2HPO4、0.1-1g/L的MgSO4和0.1-1g/L的NaCl；LB培养基可以含有5-20g/L的蛋白胨、3-7g/L的酵母提取物和3-7g/L的NaCl；玉米粉培养基可以含有10-30g/L的玉米粉。优选情况下，所述细菌培养基含有30-250g/L的豆粉、20-120g/L的淀粉、0.2-4g/L的氯化钠、0.3-1g/L的碳酸钙、0.1-0.8g/L的磷酸二氢钾和3-15g/L的硫酸亚铁。
其中，培养的过程可以包括平板划线活化、一级种子培养、二级种子培养和三级扩大培养。例如，培养的过程可以包括：(1)将保存的斜面菌种用平板划线法活化；(2)从平板上挑取单菌落，并扩大培养制成10-50mL的一级种子；(3)将一级种子按照5-30倍的扩大培养倍数进行二级扩大培养制成二级种子；(4)将二级种子按照5-30倍的扩大培养倍数进行三级扩大培养。
其中，活化和各级培养的条件可以包括：温度为30-37℃，pH值为7.2-7.6,培养时间为8-20h，通风量为8-10m3/h，需要搅拌或摇动时的转速为200-300r/min。
其中，将培养液与辅料混合的条件可以包括：混合的温度可以为10-35℃，混合的时间可以为10-30分钟。其中，混合完成后可以静置1-10小时。其中，将培养液与辅料混合后，可以将混合后的物料进行干燥、粉碎或制粒，以方便储藏、运输和使用。
其中，在本发明特别优选的一种实施方式中，该微生物菌剂还含有地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013495；且所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：(0.05-0.2)。该优选实施方式中的微生物菌剂可以将保藏编号为CCTCCNO.M2013496的枯草芽孢杆菌和保藏编号为CCTCC NO.M2013495的地衣芽孢杆菌在液态细菌培养基中进行培养，然后将培养液与辅料混合均匀。例如，可以将所述枯草芽孢杆菌的二级种子液和所述地衣芽孢杆菌的二级种子液混合，然后按照5-30倍的扩大培养倍数进行三级扩大培养；然后将培养液与辅料混合均匀。
本发明还提供了如上所述的枯草芽孢杆菌或如上所述的微生物菌剂在发酵腐熟中的应用。
其中，所述应用可以为在农作物秸秆的发酵腐熟中的应用。
其中，所述农作物的秸秆包括但不限于小麦、水稻、玉米、薯、油菜、棉花和甘蔗中的至少一种。
其中，在使用时，可以将如上所述的枯草芽孢杆菌的培养液或如上所述的微生物菌剂与待发酵腐熟的秸秆混合。其中，相对于每kg秸秆，所述的枯草芽孢杆菌的用量可以为106-1011CFU，优选为108-109CFU。其中，可以在秸秆中加入尿素溶液提高N元素的含量；所述尿素溶液可以为0.5-3重量％的尿素水溶液；尿素溶液的添加量使得添加后的物料中的C/N比可以为25-30。
其中，所述应用可以为在园林绿化废弃物的发酵腐熟中的应用。
其中，所述园林绿化废弃物可以包括但不限于枯枝、落叶、草屑、花败、断根和修剪下的枝叶中的至少一种。
其中，在使用时，可以将如上所述的枯草芽孢杆菌的培养液或如上所述的微生物菌剂与待发酵腐熟的园林绿化废弃物混合。其中，相对于每kg园林绿化废弃物，所述的枯草芽孢杆菌的用量可以为106-1011CFU，优选为108-109CFU。其中，可以在秸秆中加入尿素溶液提高N元素的含量；所述尿素溶液可以为0.5-3重量％的尿素水溶液；尿素溶液的添加量使得添加后的物料中的C/N比可以为25-30。
其中，待发酵腐熟的秸秆和/或待发酵腐熟的园林绿化废弃物可以在临使用前进行粉碎，粉碎后的物料的粒径可以为1-8cm。
以下，通过实施例进一步举例详细说明本发明，但是本发明的范围并不限制于以下实施例中。
实施例1
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌的培养和微生物菌剂的制备。
将保藏编号为CCTCC NO：M2013496的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的斜面菌种在LB平板(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物、5g/L的NaCl和3g/L的琼脂糖，pH值7.4，以下相同)上划线，并在37℃下培养15小时，从平板上挑取单菌落，接种于25mL的LB液体培养基(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物和5g/L的NaCl，pH值7.4，以下相同)中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到一级种子，将20mL一级种子加入500mL的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到二级种子，将2L的二级种子加入50L的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的搅拌下且10m3/h的通风量下培养15小时，得到培养液。采用血球板计数法测得培养液中的菌体浓度为109CFU/mL。
将1重量份的草炭、0.05重量份的胶原、0.005重量份的三聚磷酸钠、0.3重量份的碳酸钙和0.5重量份的淀粉混合得到辅料。将50L上述培养液与50kg辅料混合，并且将混合后的物料干燥至总重量为75kg，然后制粒为直径约3mm左右的颗粒，即得到本发明的微生物菌剂。
对比例1
从北京世纪阿姆斯生物技术股份有限公司购得地欣复合微生物肥料AMMS0703，取该肥料1g，加入10mL生理盐水，浸泡10分钟后匀浆，将匀浆液用纱布过滤，将滤液接种于LB平板上，37℃下培养12h后，挑取芽孢杆菌的单菌落，并且用16S rDNA法鉴别芽孢杆菌的分类，得到一株枯草芽孢杆菌。
将上述枯草芽孢杆菌的斜面菌种在LB平板(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物、5g/L的NaCl和3g/L的琼脂糖，pH值7.4，以下相同)上划线，并在37℃下培养15小时，从平板上挑取单菌落，接种于25mL的LB液体培养基(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物和5g/L的NaCl，pH值7.4，以下相同)中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到一级种子，将20mL一级种子加入500mL的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到二级种子，将2L的二级种子加入50L的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的搅拌下且10m3/h的通风量下培养18小时，得到培养液。采用血球板计数法测得培养液中的菌体浓度为109CFU/mL。
将1重量份的草炭、0.05重量份的胶原、0.005重量份的三聚磷酸钠、0.3重量份的碳酸钙和0.5重量份的淀粉混合得到辅料。将50L上述培养液与50kg辅料混合，并且将混合后的物料干燥至总重量为75kg，然后制粒为直径约3mm左右的颗粒，即得到本对比例的微生物菌剂。
对比例2
从美国ATCC购得一株枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌的货号为6633。
将上述枯草芽孢杆菌的斜面菌种在LB平板(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物、5g/L的NaCl和3g/L的琼脂糖，pH值7.4，以下相同)上划线，并在37℃下培养15小时，从平板上挑取单菌落，接种于25mL的LB液体培养基(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物和5g/L的NaCl，pH值7.4，以下相同)中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到一级种子，将20mL一级种子加入500mL的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到二级种子，将2L的二级种子加入50L的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的搅拌下且10m3/h的通风量下培养20小时，得到培养液。采用血球板计数法测得培养液中的菌体浓度为109CFU/mL。
将1重量份的草炭、0.05重量份的胶原、0.005重量份的三聚磷酸钠、0.3重量份的碳酸钙和0.5重量份的淀粉混合得到辅料。将50L上述培养液与50kg辅料混合，并且将混合后的物料干燥至总重量为75kg，然后制粒为直径约3mm左右的颗粒，即得到本对比例的微生物菌剂。
测试实施例1
本测试实施例使用玉米秸秆的堆积发酵来测试实施例1和对比例1-2的微生物菌剂的发酵腐熟的效果。
将玉米秸秆粉碎为3-5cm长的段，用1重量％的尿素水溶液调节碳氮比为27，加水调节含水量为65重量％。将调节含水量之后的1000kg的秸秆堆垛成宽2米，高1.6米的堆垛，在堆垛时均匀加入微生物菌剂，相对于每kg的玉米秸秆，微生物菌剂的加入量为2g(3.3×108CFU)；然后开始发酵腐熟。
发酵腐熟开始第1周内，每日下午4点测定堆内20cm处温度，按照文献(王玉万等，木质纤维素固体基质发酵物中半纤维素、纤维素和木质素的定量测定分析程序，微生物学报，1987，13，82-87)中的方法，测定发酵腐熟开始第7、14、21和28天时玉米秸秆中半纤维素、纤维素和木质素的含量。发酵腐熟开始第19-28天时，按照文献(张聿柏等，香蕉茎秆堆肥化处理腐熟度评价研究，中国农学通报，2009年09期)中的测定方法，测定玉米秸秆的C/N比。以上得到的结果如表1、表2和表3所示：
表1
根据表1的数据可见，本发明的枯草芽孢杆菌菌株的发酵升温速度较快，因而能够更快地启动发酵腐熟的进行。
表2
根据表2的数据可见，本发明的枯草芽孢杆菌菌株在降解半纤维素、纤维素和木质素时，具有更快的降解速度，并能达到更彻底的降解程度。
表3
根据3的数据可见，本发明的枯草芽孢杆菌菌株能够将玉米秸秆的C/N比降低到更低的数值，也就是能将玉米秸秆的发酵腐熟进行得更彻底。
测试实施例2
本测试实施例使用园林绿化废弃物的堆积发酵来测试实施例1和对比例1-2的微生物菌剂的发酵腐熟的效果。其中，使用的园林绿化废弃物为作为绿篱的黄杨修剪下的枝叶。
将修剪下的黄杨枝叶粉碎为粒径约1-4cm的大小，用1重量％的尿素水溶液调节碳氮比为27，加水调节含水量为65重量％。将调节含水量之后的1000kg的修剪下的黄杨枝叶堆垛成宽2米，高1.6米的堆垛，在堆垛时均匀加入微生物菌剂，相对于每kg的修剪下的黄杨枝叶，微生物菌剂的加入量为2g(3.3×108CFU)；然后开始发酵腐熟。
发酵腐熟开始第1周内，每日下午4点测定堆内20cm处温度，发酵腐熟开始第30-39天时，按照文献(张聿柏等，香蕉茎秆堆肥化处理腐熟度评价研究，中国农学通报，2009年09期)中的测定方法，测定发酵腐熟中的黄杨枝叶的C/N比。以上得到的结果如表4和表5所示：
表4
根据表4的数据可见，本发明的枯草芽孢杆菌菌株的发酵升温速度较快，因而能够更快地启动发酵腐熟的进行。
表5
根据5的数据可见，本发明的枯草芽孢杆菌菌株能够将黄杨枝叶的C/N比降低到更低的数值，也就是能将黄杨枝叶的发酵腐熟进行得更彻底。
实施例2
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养和微生物菌剂的制备。
将保藏编号为CCTCC NO：M2013496的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的斜面菌种在LB平板(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物、5g/L的NaCl和3g/L的琼脂糖，pH值7.4，以下相同)上划线，并在37℃下培养15小时，从平板上挑取单菌落，接种于25mL的LB液体培养基(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物和5g/L的NaCl，pH值7.4，以下相同)中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到一级种子，将20mL一级种子加入500mL的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到枯草芽孢杆菌的二级种子。
将保藏编号为CCTCC NO：M2013495的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的斜面菌种在LB平板(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物、5g/L的NaCl和3g/L的琼脂糖，pH值7.4，以下相同)上划线，并在37℃下培养15小时，从平板上挑取单菌落，接种于25mL的LB液体培养基(含有10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母提取物和5g/L的NaCl，pH值7.4，以下相同)中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到一级种子，将20mL一级种子加入500mL的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的摇床上培养15小时，得到地衣芽孢杆菌的二级种子。
将2L的枯草芽孢杆菌的二级种子和0.2L地衣芽孢杆菌二级种子混合，然后加入60L的LB液体培养基中，在37℃下250r/min的搅拌下且10m3/h的通风量下培养15小时，得到培养液。采用血球板计数法测得培养液中的总菌体浓度为109CFU/mL。使用基于16S rDNA的核酸定量法测得培养液中，所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：0.1。
将1重量份的草炭、0.05重量份的胶原、0.005重量份的三聚磷酸钠、0.3重量份的碳酸钙和0.5重量份的淀粉混合得到辅料。将50L上述培养液与50kg辅料混合，并且将混合后的物料干燥至总重量为75kg，然后制粒为直径约3mm左右的颗粒，即得到本发明的微生物菌剂。
实施例3
按照实施例2的方法制备微生物菌剂，不同的是，将1.2L的枯草芽孢杆菌的二级种子和1.2L地衣芽孢杆菌二级种子混合，然后进行三级扩大培养。
在本实施例中，使用基于16S rDNA的核酸定量法测得培养液中，所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：0.9。
测试实施例3
本测试实施例使用玉米秸秆的堆积发酵来测试实施例1和实施例2-3的微生物菌剂的发酵腐熟的效果。
将玉米秸秆粉碎为3-5cm长的段，用1重量％的尿素水溶液调节碳氮比为27，加水调节含水量为65重量％。将调节含水量之后的1000kg的秸秆堆垛成宽2米，高1.6米的堆垛，在堆垛时分别均匀加入实施例1和实施例2-3的微生物菌剂，相对于每kg的玉米秸秆，微生物菌剂的加入量为2g(3.3×108CFU)；然后开始发酵腐熟。
按照文献(张聿柏等，香蕉茎秆堆肥化处理腐熟度评价研究，中国农学通报，2009年09期)中的测定方法，测定玉米秸秆的C/N比。以上得到的结果如表6所示：
表6
根据表6的数据可见，在优选该微生物菌剂还含有地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013495；且所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：(0.05-0.2)的情况下，本发明所述枯草芽孢杆菌和所述地衣芽孢杆菌能够发挥协同作用，本发明的微生物菌剂能够取得更好的腐熟发酵效果。
测试实施例4
本测试实施例使用园林绿化废弃物的堆积发酵来测试实施例1和实施例2-3的微生物菌剂的发酵腐熟的效果。其中，使用的园林绿化废弃物为作为绿篱的黄杨修剪下的枝叶。
将修剪下的黄杨枝叶粉碎为粒径约1-4cm的大小，用1重量％的尿素水溶液调节碳氮比为27，加水调节含水量为65重量％。将调节含水量之后的1000kg的修剪下的黄杨枝叶堆垛成宽2米，高1.6米的堆垛，在堆垛时分别均匀加入实施例1和实施例2-3的微生物菌剂，相对于每kg的修剪下的黄杨枝叶，微生物菌剂的加入量为2g(3.3×108CFU)；然后开始发酵腐熟。
按照文献(张聿柏等，香蕉茎秆堆肥化处理腐熟度评价研究，中国农学通报，2009年09期)中的测定方法，测定发酵腐熟中的黄杨枝叶的C/N比。以上得到的结果如表7所示：
表7
根据表7的数据可见，在优选该微生物菌剂还含有地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013495；且所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：(0.05-0.2)的情况下，本发明所述枯草芽孢杆菌和所述地衣芽孢杆菌能够发挥协同作用，本发明的微生物菌剂能够取得更好的腐熟发酵效果。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
Claims (9)
1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其特征在于：该枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013496。
2.一种微生物菌剂，其特征在于：该微生物菌剂含有如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌作为有效成分。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于：相对于1g的微生物菌剂，所述枯草芽孢杆菌的含量为106-1011CFU。
4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于：相对于1g的微生物菌剂，所述枯草芽孢杆菌的含量为108-109CFU。
5.根据权利要求2-4中任意一项所述的微生物菌剂，其特征在于：该微生物菌剂还含有地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO.M2013495；且所述枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的CFU比为1：(0.05-0.2)。
6.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌或权利要求2-5中任意一项所述微生物菌剂在发酵腐熟中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述应用为在农作物秸秆的发酵腐熟中的应用。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述应用为在园林绿化废弃物的发酵腐熟中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述园林绿化废弃物包括枯枝、落叶、草屑、花败、断根和修剪下的枝叶中的至少一种。
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