CN112725213B - 一种节杆菌及其作为腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及蔬菜秸秆的腐熟的技术，具体的说是一种节杆菌及其作为腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂的应用。节杆菌(Arthrobacter SP.)已于2020年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19486。所述节杆菌(Arthrobacter SP.)在腐熟蔬菜秸秆中的应用。本发明节杆菌由长期施用除草剂草甘膦的玉米地表层土分离获得，其摇床发酵3天降解草甘膦降解率89.7％；将该菌株与其他菌株混合作为高温腐熟剂，本发明高温腐熟剂有几种特殊菌株按特定比例混合互相协同作用，产品中含有纤维素酶、木质素过氧化氢酶、锰过氧化物酶和漆酶等，同时可以降解草甘膦抑制番茄青枯病。

Description

一种节杆菌及其作为腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂的应用
技术领域
本发明涉及蔬菜秸秆的腐熟的技术，具体的说是一种节杆菌及其作为腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂的应用。
背景技术
随着我国园艺产业的快速发展，蔬菜产量连年提高，蔬菜秸秆的产量仅次于水稻、玉米和小麦秸秆，已成为第四大农作物秸秆。但大部分秸秆被随意堆放丢弃、传播病菌、污染环境，同时造成大量营养物质的浪费。蔬菜秸秆中，约有一半的光合作用产物，其纤维素含量约30％，蛋白质含量约5％，此外，还有一定量的矿物质，如钙、磷等。微生物发酵可以将这些有机物分解为植物能够直接吸收利用的成分，实现蔬菜秸秆的资源化利用，加入秸秆腐熟剂可以加快秸秆分解，缩短腐熟时间。有研究发现番茄秸秆中存在化感物质，很难直接利用，但微生物腐熟剂在高温腐熟过程可以分解化感物质，提高番茄秸秆堆肥养分。
我国每年约产生畜禽粪便30亿吨，由于Cu、Zn、Cr、As等微量元素饲料添加剂的普遍使用，造成畜禽粪便中重金属含量超标。畜禽粪便的施用已经成为农田土壤重金属污染的重要来源。通过施肥进入农业土壤，对环境、动物及植物等造成不良的影响，并最终会随食物链影响人类健康。我国农药的使用量过大，且大多数的农药都具有一定的毒性，其结构也比较稳定，不容易被降解，对土壤和水资源造成了严重的污染，使人类的健康和生存环境都受到了威胁。基于以上原因，构建一组既能加快蔬菜秸秆腐熟又能降解土壤中残留的农药和重金属，同时还能防治蔬菜土传病害的高温菌群，作为腐熟蔬菜秸秆的功能菌种，生产腐熟剂，达到修复土壤的作用，在现阶段研究中尤其重要。
现有资料中申请号201510178913.7，名称“一种液体秸秆腐熟剂及制备和使用方法中记载，其主要活性微生物是：解淀粉芽孢杆菌和酿酒酵母，所述两种活性微生物相互协同并且无拮抗作用，其中所含有效菌数为2-5亿/ml，其中所述的解淀粉芽孢杆菌的有效活菌数占50-60％，酿酒酵母的有效活菌数占40-50％；所述的解淀粉芽孢杆菌和酿酒酵母分别经过：(1)试管菌种斜面培养，(2)摇瓶活化培养， (3)一级种子罐发酵以及(4)发酵罐发酵，得到解淀粉芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液，将上述解淀粉芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液按以下体积比混合复配后，得到液体秸秆腐熟剂，其中解淀粉芽孢杆菌发酵液50-60％，酿酒酵母发酵液40-50％；本发明可适用于小麦、水稻等农作物秸秆的快速腐熟。其菌种组成、生产工艺、产品剂型及应用方法与本专利不同；申请号201510067182.9名称，“一种秸秆腐熟菌剂及其制备方法和应用”中记载所述秸秆腐熟菌剂由枯草芽孢杆菌粉剂、长枝木霉粉剂和灰略红链霉菌粉剂复配组成，枯草芽孢杆菌粉剂5％～15％、长枝木霉粉剂50％～70％、灰略红链霉菌粉剂 25％～45％。通过固态发酵法分别制备枯草芽孢杆菌、长枝木霉、灰略红链霉菌的发酵菌体及其产物，干燥后粉碎成枯草芽孢杆菌粉剂、长枝木霉粉剂和灰略红链霉菌粉剂，混合后即得秸秆腐熟菌剂。所述秸秆腐熟菌剂可在制备秸秆腐熟降解剂中应用。上述文献中记载的腐熟剂第一种液体腐熟剂存在不易于储存运输的缺陷，第二种腐熟剂中构建的菌种是普通菌株，通过高温堆肥过程会灭活，只是腐熟秸秆的作用，没有生防功能。
发明内容
本发明目的在于提供一种节杆菌及其作为腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂的应用。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种节杆菌，节杆菌(Arthrobacter SP.)X-1已于2020年3 月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：中国北京，保藏编号为CGMCCNo.19486。
一种节杆菌的应用，所述节杆菌(Arthrobacter SP.)在腐熟蔬菜秸秆中的应用。
一种腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂，腐熟剂含所述节杆菌 (Arthrobacter SP.)。
所述腐熟剂为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、节杆菌 (Arthrobacter sp.)和黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。
所述节杆菌具体中国微生物菌种保藏管理中心保藏编号为CGMCC 19486的菌株。所述黄孢原毛平革菌具体辽宁省微生物菌种保藏管理中心保藏编号为LCCC 50656的菌株。所述枯草芽抱杆菌具辽宁省微生物菌种保藏管理中心保藏编号为LCCC 10262的菌株。
所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、为该菌株的发酵培养物、发酵培养浓缩物或发酵培养菌悬液；所述节杆菌(Arthrobacter SP.)为该菌株的发酵培养物、发酵培养浓缩物或发酵培养菌悬液；所述黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)为该菌株的发酵培养物、发酵培养浓缩物或发酵培养菌悬液。
所述腐熟剂中总活菌数为4.3-4.6×109CFU/g；所述腐熟剂中枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1。
所述黄孢原毛平革菌的发酵培养物为将活化后黄孢原毛平革菌接种(接种量为10wt％)至固体培养成分中，于40-45℃，发酵培养 72-84hr，待用；其中，固体培养成分为固体培养料与水的重量比为 1:0.6～0.7混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉550份-650 份，麸皮250份-350份，豆粕50份-150份，硫酸铵2份；
所述枯草芽孢杆菌或节杆菌的发酵培养物为将活化后枯草芽孢杆菌或节杆菌分别接种至固体培养成分中，而后分别于45-50℃，发酵培养72-84hr，待用；其中，固体培养成为固体培养料与水的重量比为1:0.6～0.7混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉200份-300份，麸皮300份-400份，稻壳100份-150份，豆粕200份-300 份，磷酸二氢钾1份，硫酸铵1.5份。
所述黄孢原毛平革菌的发酵培养物、草芽孢杆菌的发酵培养物和杆菌发酵培养物在55-60℃条件下干燥，而后按枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1的质量比混合即为腐熟剂。
上述发酵物中黄孢原毛平革菌数≥7×107CFU/g，枯草芽孢杆菌和节杆菌菌数合计≥4×109CFU/g。
一种腐熟剂的应用，所述腐熟剂在高温下腐熟蔬菜秸秆中的应用。
所述高温为45-50℃。
本发明所具有的优点：
本发明节杆菌由长期施用除草剂草甘膦的玉米地表层土分离获得，其摇床发酵3天降解草甘膦降解率89.7％；将该菌株与枯草芽孢杆菌和黄孢原毛平革菌发酵后混合即为高温腐熟剂，本发明高温腐熟剂有几种特殊菌株按特定比例混合互相协同作用，产品中含有纤维素酶、木质素过氧化氢酶、锰过氧化物酶和漆酶等，同时可以降解草甘膦抑制番茄青枯病；具体为：
1、本发明腐熟剂中由多种特定功能菌群构建，选用多株能够互相协同作用的耐高温菌种，加速蔬菜秸秆腐熟、降解土壤中残留的农药和重金属、防治蔬菜土传病，通过高温堆肥还可以消减番茄秸秆的化感作用。
2、本发明腐熟剂产品中纤维素酶、木质素过氧化氢酶、锰过氧化物酶和漆酶等酶系，可稳定，协同作用，有效促进秸秆中纤维素、半纤维素、木质素分解，加速秸秆矿物质化和腐殖化，使秸秆中的养分由无效态和缓效态变为有效态和速效态，利于植物吸收，改善土壤质量。
3、本发明腐熟剂构建菌群中的黄孢原毛平革菌该菌株表面含有丰富的胞外多糖，对重金属具有较强的吸附能力，同时黄孢原毛平革菌产生的木质素过氧化酶、锰过氧化物酶和漆酶能与重金属离子发生氧化还原、表面络合及离子交替换等作用，能有效去除重金属离子。其分泌的锰过氧化物酶、漆酶、木质素过氧化物酶等胞外酶可有效降解秸秆中的木质素,使原本被木质素包裹的纤维素、半纤维素释放出来，协同节杆菌快速降解秸秆；进而两种菌株混合可以产降解纤维素的纤维素酶，产品中纤维素酶酶活可达38.65U/mL，此节杆菌还可以降解除草剂草甘膦。
4、本发明腐熟剂构建菌群协同高温发酵可以有效去除蔬菜秸秆的化感作用；并且其在处理蔬菜秸秆中通过堆积发酵，所得产物可以为有机肥与土壤组成的系统中定殖能力强，经过高温堆肥后三株菌株总存活率可达83.7％，作为有机肥施肥时可以很好地发挥其生防作用。
附图说明
图1为本发明实施例提供的节杆菌的进化树。
图2为本发明实施例提供的枯草芽孢杆菌(LCCC 10262)抑制土传病害番茄青枯病效果图。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
本发明利用耐高温的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、节杆菌(Arthrobactersp.)、黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium) 作为生产菌种，以牛肉膏、蛋白胨为主要原料制成液体菌种，再分别接到以麸皮、玉米粉、稻壳和豆粕等为主要原料的固体培养料中培养，发酵产物经低温干燥后粉碎包装制成成品。本发明是利用耐高温的枯草芽孢杆菌、节杆菌和黄孢原毛平革菌的分解纤维素和生防作用，生产腐熟蔬菜秸秆的功能性微生物腐熟剂。本发明通过节杆菌的纤维素酶和黄孢原毛平革菌的木质素过氧化氢酶、锰过氧化物酶和漆酶作用，促进蔬菜秸秆中木质素、纤维素、半纤维素分解，加速秸秆矿物质化和腐殖化；利用枯草芽孢杆菌、节杆菌和黄孢原毛平革菌的生防功能来防治蔬菜土传病害、降解土壤中的残留农药和重金属。同时三株菌都是耐高温菌，可以通过高温堆肥去除蔬菜秸秆的化感作用，减少土壤污染，改善土壤质量，从而提高作物产量和品质。
实施例1节杆菌(Arthrobacter SP.)CGMCC No.19486的分离及鉴定
1、菌株的分离
称取1g土样加入到99mL无菌水中，180r/min摇床上振荡培养20min，进行10倍梯度稀释，以稀释分别为10-4、10-5、10-6用移液枪吸取100μL均匀涂布在牛肉膏固体平板上，置于45℃恒温培养箱内培养，24h后挑取单菌落。
将从土壤中分离得到菌株分别点接于羧甲基纤维素钠培养基上，置于45℃恒温箱培养24h后用1％的刚果红染色1h，5％NaCl脱色 1h，观察水解圈直径，筛选出产纤维素酶的菌株X-1。
接菌株X-1于100mL含100mg/L草甘膦无机盐培养液中,在 30℃及180r/min的恒温摇床中培养72h。吸取0.1mL上述发酵液于含200mg/L草甘膦无机盐培养液中，于培养30℃及180r/ min 72h,直至含300mg/L草甘膦。吸取0.1mL最后富集发酵液涂布于含100mg/L草甘膦无机盐培养基平板上,45℃培养,挑取长势良好的菌落。
2、菌株的鉴定
2.1、形态学鉴定
在牛肉膏平板上菌落光滑，圆形，表面凸起，呈乳白色，不透明，边缘整齐，菌体呈杆状，两端钝圆，无芽胞。
2.2、16S rDNA序列同源性分析
测序测得16SrDNA大部分序列为1427bp。登陆NCBI，使用BLAST在线将得到的16SrDNA序列提交进行BLAST在线分析。将测出的序列通过16SrDNA序列同源性比较，X-1与Arthrobacter sp的16SrDNA 序列相似性均达到99.9％。根据同源性比较结果，可以初步确认细菌 X-1为节杆菌(Arthrobacter sp)(参见图1)。
2.3、生理生化特征鉴定
即，节杆菌(Arthrobacter SP.)X-1已于2020年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No.19486。
实施例2
1)节杆菌降解草甘膦效果：将活化好的X-1种子接种于发酵培养基中，发酵瓶装液量为100mL/500mL，将发酵培养基初始pH为 6.0，于45℃、180r/min条件下培养72h，用HPLC测定草甘膦的残留量，计算降解率，降解率达89.7％。
所述发酵培养基：在灭完菌无机盐基础培养液中加入终浓度为100mg/L草甘膦。其中，无机盐培养基(g/L)为:MgSO4·7H2O 0.2g, CaCl2·2H2O 0.03g,FeSO4·7H2O 0.01g,KH2PO4 0.4g,Na2HPO4 0.6 g,MnSO4 0.02g,NH4NO3 1.0g,蒸馏水1L。调节pH为7.0。所述HPLC测定采用Kromasil-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相V(甲醇)∶V(水)＝70∶30，其中水中含有质量分数0.1％的磷酸；波长243nm；流速1mL/min；柱温30℃。
降解率＝(A0-A1)/A0×100％.A0是草甘膦原始含量峰面积，A1是降解后草甘膦含量峰面积。
2)枯草芽孢杆菌(LCCC 10262)抑制土传病害番茄青枯病：将按常规方法活化好的番茄青枯病病原菌发酵液均匀涂满平板，在平板中央放上牛津杯，在牛津杯里加入枯草芽孢杆菌发酵液，于45℃恒温箱中培养3天，测量抑菌圈直径，抑菌圈达10.49mm(参见图2)。
所述枯草芽孢杆菌发酵液为把活化好斜面枯草芽孢杆菌菌种接到常规细菌液体培养基中37℃发酵24小时。
实施例3腐熟剂的制备
1)菌株活化获得种子液：
①按常规现有技术将活化复壮好的黄孢原毛平革菌挑取一环菌种接种到由(每100mL水添加量)葡萄糖1.8、酵母膏1.5、磷酸二氢钾0.03、硫酸镁0.03、PH6.0组成的液体培养基中，42℃通风培养72hr，即得种子液待用。
②按常规现有技术将活化复壮好的枯草芽孢杆菌或节杆菌分别接种于液体培养基中，45℃摇瓶培养24hr；其中，液体培养基(每 100mL水添加量)：蛋白胨1,酵母膏0.5,氯化钠0.5，PH7.0，。
2)固体培养
①将上述获得种子液经镜检无杂菌后，按10wt％的接种量将上述获得种子液分别接种到适应的固体培养料中，发酵培养。
其中，黄孢原毛平革菌接种(10wt％)至固体培养成分中，于42℃，发酵培养72hr，待用；其中，固体培养成分为固体培养料与水的重量比为1:0.6混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉650份，麸皮250份，豆粕100份，硫酸铵2份；
枯草芽孢杆菌或节杆菌的分别接种(接种量分别为10wt％)至固体培养成分中，而后分别于45℃，发酵培养72hr，待用；其中，固体培养成为固体培养料与水的重量比为1:0.6混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉200份，麸皮400份，稻壳100份，豆粕300份，磷酸二氢钾1份，硫酸铵1.5份。
上述发酵后，黄孢原毛平革菌数7.1×107CFU/g，上述获得发酵液中枯草芽孢杆菌和节杆菌菌数合计为4.3×109CFU/g。
3)混配：将上述培养好发酵产物分别在55～60℃条件下干燥。彻底干燥(含水量低于35％)按枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1的质量比例配好后粉碎、包装制成成品。
上述成品纤维素酶酶活32.29U/mL。
实施例4：
1)菌株活化获得种子液：
①按常规现有技术将活化复壮好的黄孢原毛平革菌接种到由每 100mL水添加量葡萄糖2.0、酵母膏1.2、磷酸二氢钾0.03、硫酸镁 0.03、PH6.0组成的液体培养基中，42℃通风培养72hr，即得种子液待用。
②按常规现有技术将活化复壮好的枯草芽孢杆菌或节杆菌分别接种于液体培养基中，45℃摇瓶培养24hr；其中，液体培养基每 100mL水添加量：蛋白胨1.1,酵母膏0.4,氯化钠0.6，PH7.0，。
2)固体培养
①将上述获得种子液经镜检无杂菌后，按10wt％的接种量将上述获得种子液分别接种到适应的固体培养料中，发酵培养。
其中，黄孢原毛平革菌接种至固体培养成分中，于45℃，发酵培养72hr，待用；其中，固体培养成分为固体培养料与水的重量比为1:0.65混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉600份，麸皮 350份，豆粕50份，硫酸铵2份；
枯草芽孢杆菌或节杆菌的分别接种至固体培养成分中，而后分别于47℃，发酵培养72hr，待用；其中，固体培养成为固体培养料与水的重量比为1:0.65混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉250 份，麸皮350份，稻壳150份，豆粕250份，磷酸二氢钾1份，硫酸铵1.5份。
上述发酵液中黄孢原毛平革菌数7.5×107CFU/g，上述获得发酵液中枯草芽孢杆菌和节杆菌菌数合计为4.6×109CFU/g。
3)混配：将上述培养好发酵产物分别在55-60℃条件下干燥。彻底干燥后，按枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1的质量比例配好后粉碎、包装制成成品。
所述成品中纤维素酶酶活38.65U/mL。
实施例5：
1)菌株活化获得种子液：
①按常规现有技术将活化复壮好的黄孢原毛平革菌接种到由(每 100mL水添加量)葡萄糖2.5、酵母膏1.0、磷酸二氢钾0.03、硫酸镁0.03、PH6.0组成的液体培养基中，42℃通风培养72hr，即得种子液待用。
②按常规现有技术将活化复壮好的枯草芽孢杆菌或节杆菌分别接种于液体培养基中，45℃摇瓶培养24hr；其中，液体培养基每 100mL水添加量：蛋白胨0.9,酵母膏0.6,氯化钠0.4，PH7.0。
2)固体培养
①将上述获得种子液经镜检无杂菌后，按10wt％的接种量将上述获得种子液分别接种到适应的固体培养料中，发酵培养。
其中，黄孢原毛平革菌接种至固体培养成分中，于42℃，发酵培养72hr，待用；其中，固体培养成分为固体培养料与水的重量比为1:0.7混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉550份，麸皮 300份，豆粕150份，硫酸铵2份；
枯草芽孢杆菌或节杆菌的分别接种至固体培养成分中，而后分别于50℃，发酵培养72hr，待用；其中，固体培养成为固体培养料与水的重量比为1:0.7混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉300 份，麸皮300份，稻壳200份，豆粕200份，磷酸二氢钾1份，硫酸铵1.5份。
上述获得发酵液中黄孢原毛平革菌数7.2×107CFU/g，上述获得发酵液中枯草芽孢杆菌和节杆菌菌数合计为4.4×109CFU/g。
3)混配：将上述培养好发酵产物分别在55-60℃条件下干燥。彻底干燥后，枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1的按质量比例配好后粉碎、包装制成成品。
所述成品中纤维素酶酶活35.74U/mL。
实施例6
1)实验室：选取粗细与长度接近的番茄秸秆，将其裁成5cm 左右小段，称取25g放入40目尼龙网袋中，添加上述实施例4的腐熟剂和不添加腐熟剂的各三个重复，腐熟剂添加量为秸秆量的0.2％，埋入花盆5～10cm土层，每隔5天观察记载秸秆腐解度，同时采用失重率法进行腐熟效果测定(参见表1)。最后添加本腐熟剂比不加腐熟剂提前7-10天腐熟秸秆。
表1为添加或未添加腐熟剂处理秸秆的腐熟效果
2)大棚：每吨秸秆用腐熟剂2公斤
(1)开沟。在农作物种植前15-20天，在种植行下挖深20-30cm的沟，沟宽35-40cm.
(2)铺放秸秆。把秸秆填入沟内，铺均、踏实，秸秆填号厚度20cm 左右。沟两头要露出10cm的秸秆，以便浇水、通气。
(3)添加腐熟剂。秸秆填好踏实后把实施例4的腐熟剂均匀地撒在秸秆上，用铁锨轻轻排振，让腐熟剂可以漏入下一层部分；其中，腐熟剂的添加量为秸秆质量的0.2％。
(4)覆土。将开沟两边的图覆于秸秆上，覆土厚度25cm，形成种植垄。
(5)浇水。覆土后及时浇水，第一次的水量要足，使秸秆尽量吸足水。
(6)打孔、种植。浇水后4-5天必须打孔通气。打孔方法：顺种植垄方向以行距25-30，孔距20-25，用12号钢筋打2排孔，孔深以穿透秸秆为宜。打孔7-8天再浇一次水，然后种植或移栽定苗。浇水后如果孔被堵塞，要再打孔，如果采用地膜，在地膜上也要打孔。
(7)作物生长管理。在定植后2个月时间内要进行3次大水灌溉，平均20天灌溉一次，水是微生物分解秸秆的重要介质。浇水注意：晴浇阴不浇；晨浇晚不浇；进入11月份，要再上午9点以后14点 30之前浇，当天浇不完第二天这个时间段继续浇，浇水后3天防风降潮。
土壤养分检测：
(1)有机质检测：按照GB9834-88进行。使用腐熟剂的1年大棚30cm 土层有机质提高0.2％-0.3％。
(2)氮磷钾检测：方法参照《土壤中有效氮、磷、钾测定方法相关性研究》氮：全氮1年大棚不用腐熟剂的含量0.024％,用此腐熟剂的含量0.102％。磷：1年大棚不用腐熟剂的含量61.2mg/Kg，用此腐熟剂的含量73.8mg/Kg,增加20.6％。钾：1年大棚不用腐熟剂的含量223.5mg/Kg，用此腐熟剂的含量247.6mg/Kg,增加10.8％。
实施例7
进行去化感作用检测：试验共设置2组处理：一组用100.0g/L 番茄秸秆浸提液(浸提液为将番茄秸秆浸至水中)，另外一组用腐熟剂腐熟后浸提液，把番茄种子放入垫有纱布的培养皿中，分别加入 10mL上述两种不同浸提液，将种子均匀铺好后置于25℃恒温培养箱中培养。每组处理重复3次，每隔1天向培养皿中加入5.0mL 浸提液。每天记录各处理的发芽情况。经过腐熟剂高温腐熟后的浸提液番茄发芽率提高26.51％。
所述腐熟剂腐熟后浸提液把切成小段番茄秸秆和腐熟剂混匀在42℃发酵72hr，发酵结束后用水浸提；其中，腐熟剂(实施例4) 的添加量为秸秆质量的0.2％。

Claims (10)

1.一种节杆菌，其特征在于：节杆菌(Arthrobacter SP.)已于2020年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19486。
2.一种权利要求1所述节杆菌的应用，其特征在于：所述节杆菌(Arthrobacter SP.)在腐熟蔬菜秸秆中的应用。
3.一种腐熟蔬菜秸秆的腐熟剂，其特征在于：腐熟剂含权利要求1所述节杆菌(Arthrobacter SP.)。
4.按权利要求3所述的腐熟剂，其特征在于：所述腐熟剂为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、节杆菌(Arthrobacter sp.)和黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)。
5.按权利要求4所述的腐熟剂，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为该菌株的发酵培养物、发酵培养浓缩物或发酵培养菌悬液；所述节杆菌(ArthrobacterSP.)为该菌株的发酵培养物、发酵培养浓缩物或发酵培养菌悬液；所述黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)为该菌株的发酵培养物、发酵培养浓缩物或发酵培养菌悬液。
6.按权利要求4所述的腐熟剂，其特征在于：所述腐熟剂中总活菌数为4.3-4.6×109cfu/g；所述腐熟剂中枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1。
7.按权利要求6所述的腐熟剂，其特征在于：所述黄孢原毛平革菌的发酵培养物为将活化后黄孢原毛平革菌接种至固体培养成分中，于40-45℃，发酵培养72-84hr，待用；其中，固体培养成分为固体培养料与水的重量比为1:0.6～0.7混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉550份-650份，麸皮250份-350份，豆粕50份-150份，硫酸铵2份；
所述枯草芽孢杆菌或节杆菌的发酵培养物为将活化后枯草芽孢杆菌或节杆菌分别接种至固体培养成分中，而后分别于45-50℃，发酵培养72-84hr，待用；其中，固体培养成为固体培养料与水的重量比为1:0.6～0.7混合，所述固体培养料重量份数为：玉米粉200份-300份，麸皮300份-400份，稻壳100份-150份，豆粕200份-300份，磷酸二氢钾1份，硫酸铵1.5份。
8.按权利要求6所述的腐熟剂，其特征在于：所述黄孢原毛平革菌的发酵培养物、枯草芽孢杆菌的发酵培养物和节杆菌发酵培养物在55-60℃条件下干燥，而后按枯草芽孢杆菌：节杆菌：黄孢原毛平革菌＝1:1:1即为腐熟剂。
9.一种权利要求3所述的腐熟剂的应用，其特征在于：所述腐熟剂在高温下腐熟蔬菜秸秆中的应用。
10.按权利要求9所述的腐熟剂的应用，其特征在于：所述高温为45-50℃。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113801807B (zh) * 2021-07-06 2023-03-10 新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心) 一种诱导加工番茄系统抗性的促生菌剂及其应用
CN116333944B (zh) * 2023-05-11 2023-08-22 东北农业大学 一种节杆菌c2及其重组节杆菌在降解木质素中的应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4889807A (en) * 1984-12-12 1989-12-26 Institut National de la Recherche Aronomique Microorganisms of the Phanerochaete chrysosporium strain and their use
WO1992019719A1 (en) * 1991-05-03 1992-11-12 Zeneca Limited Glyphosate degrading bacteria
CN102174398A (zh) * 2010-12-14 2011-09-07 北京沃土天地生物科技有限公司 用于玉米秸秆还田的复合微生物菌剂及其制备方法和用途
CN102344303A (zh) * 2011-07-01 2012-02-08 辽宁省微生物科学研究院 微生物秸秆腐熟剂及其制备方法
CN103740693A (zh) * 2013-12-03 2014-04-23 中农绿康（北京）生物技术有限公司 一种秸秆腐熟剂及其制作方法
CN103966148A (zh) * 2014-06-03 2014-08-06 天津市农业资源与环境研究所 一种蔬菜废弃物腐熟菌剂及其使用方法和所制有机基质
CN103966150A (zh) * 2014-06-03 2014-08-06 天津市农业资源与环境研究所 一种农作物秸秆腐熟菌剂及其使用方法和效果

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4889807A (en) * 1984-12-12 1989-12-26 Institut National de la Recherche Aronomique Microorganisms of the Phanerochaete chrysosporium strain and their use
WO1992019719A1 (en) * 1991-05-03 1992-11-12 Zeneca Limited Glyphosate degrading bacteria
CN102174398A (zh) * 2010-12-14 2011-09-07 北京沃土天地生物科技有限公司 用于玉米秸秆还田的复合微生物菌剂及其制备方法和用途
CN102344303A (zh) * 2011-07-01 2012-02-08 辽宁省微生物科学研究院 微生物秸秆腐熟剂及其制备方法
CN103740693A (zh) * 2013-12-03 2014-04-23 中农绿康（北京）生物技术有限公司 一种秸秆腐熟剂及其制作方法
CN103966148A (zh) * 2014-06-03 2014-08-06 天津市农业资源与环境研究所 一种蔬菜废弃物腐熟菌剂及其使用方法和所制有机基质
CN103966150A (zh) * 2014-06-03 2014-08-06 天津市农业资源与环境研究所 一种农作物秸秆腐熟菌剂及其使用方法和效果

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1株草甘膦降解菌的分离鉴定及特性;韩丽珍等;贵州农业科学;第40卷(第12期);第139-142页 *

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