RU2428467C2 - Жидкие бактериальные инокулянты с повышенным сроком годности и повышенной стабильностью на семенах - Google Patents

Жидкие бактериальные инокулянты с повышенным сроком годности и повышенной стабильностью на семенах Download PDF

Info

Publication number
RU2428467C2
RU2428467C2 RU2007127833/10A RU2007127833A RU2428467C2 RU 2428467 C2 RU2428467 C2 RU 2428467C2 RU 2007127833/10 A RU2007127833/10 A RU 2007127833/10A RU 2007127833 A RU2007127833 A RU 2007127833A RU 2428467 C2 RU2428467 C2 RU 2428467C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
inoculant
bacteria
partially dehydrated
liquid
trehalose
Prior art date
Application number
RU2007127833/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2007127833A (ru
Inventor
Джереми Дэвид ПИРС (GB)
Джереми Дэвид Пирс
Мэри Энн КАРПЕНТЕР (GB)
Мэри Энн КАРПЕНТЕР
Original Assignee
Бекер Андервуд Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бекер Андервуд Инк. filed Critical Бекер Андервуд Инк.
Publication of RU2007127833A publication Critical patent/RU2007127833A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2428467C2 publication Critical patent/RU2428467C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A01C1/06—Coating or dressing seed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/27—Pseudomonas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения инокулянта, содержащего десикант, и к способу обработки семян, полученным инокулянтом. Способ получения препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий включает: получение жидкого инокулянта бактерий, выращенных по существу до стационарной фазы, где бактерии представляют собой бактерии одного или нескольких родов из Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas и Serratia; и добавление в количестве, достаточном для частичного обезвоживания жидкого инокулянта бактерий, обезвоживающей добавки, включающей десикант, к жидкому инокулянту бактерий для получения препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий, где десикант представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина, триэтиленгликоля и маннита, в количестве от примерно 5% до примерно 50% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий. Последующее нанесение полученного препарата частично обезвоженного инокулянта бактерий на сухой носитель позволит получить сухой сыпучий препарат инокулянта бактерий. Изобретение позволяет повысить выживание и стабильность бактерий в инокулянтах в упаковке и на семенах. 3 н. и 20 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к жидким инокулянтам. В частности, изобретение относится к способу повышения выживаемости и стабильности бактерий жидких инокулянтов в упаковке и при нанесении на семена.
Уровень техники
Известно, что различные микроорганизмы обладают полезным действием на растения. Эти микроорганизмы включают бактерии родов Rhizobium (включая Bradyrhizobium), Pseudomonas, Serratia, Bacillus (включая Paenibacillus), Pasteuria, Azotobacter, Enterobacter, Azospirillum, Methylobacterium, Cyanobacteria (сине-зеленые водоросли) и микоризные грибы. Такие микроорганизмы могут доставляться к растению посредством использования композиций инокулянтов. Способ получения композиций инокулянтов включает стадию ферментирования микроорганизмов, обычно в питательной среде.
Композиции инокулянтов могут наноситься прямо на семена растений или вноситься в борозду непосредственно перед посадкой семян. Инокуляция семян или почвы полезными микроорганизмами для повышения урожая введена в практику много лет назад. Однако зачастую наблюдались изменчивые и не согласующиеся между собой результаты, возможно, вследствие потери жизнеспособности бактерий или возможного изменения дозировки, обусловленной изменениями жизнеспособности инокулянтов.
При применении инокулянта во время посева, независимо вносится ли он в борозду или наносится на семена, у микроорганизмов инокулянта нет времени для адаптации к новой окружающей среде. В результате, микроорганизмы инокулянта могут иметь низкий показатель выживаемости.
В настоящее время для повышения жизнеспособности микроорганизмов в инокулянте при нанесении инокулянта на семена или во время их посадки в инокулянт добавляются вспомогательные компоненты, продлевающие срок выживаемости бактерий (экстендеры), на основе сахаров или полимеров. Поскольку экстендеры добавляются после расфасовки инокулянта, они не влияют на выживаемость или стабильность инокулянта в упаковке.
Кроме того, добавление экстендеров во время нанесения инокулянта на семена или во время посадки является трудоемким процессом и обычно должно выполняться конечными потребителями инокулянтов (например, фермерами) в неконтролируемой окружающей среде (например, в сарае или на сельскохозяйственном поле). Поэтому велика вероятность того, что экстендеры будут применены неправильно.
Для устранения проблем, связанных с добавлением экстендеров после приготовления инокулянта, добавление экстендеров осуществлялось в питательную среду перед стадией ферментации процесса получения жидкого инокулянта. Однако добавление экстендеров в оптимальном количестве перед ферментацией для повышения выживаемости микроорганизмов на семенах ингибирует их рост.
Таким образом, существует потребность в способе повышения выживаемости и стабильности микроорганизмов (например, бактерий) жидкого инокулянта в процессе хранения и повышения выживаемости и стабильности микроорганизмов жидкого инокулянта при нанесении его на семена.
Сущность изобретения
Одним вариантом осуществления настоящего изобретения является собой способ получения жидкого препарата инокулянта, содержащего десикант. Способ включает получение жидкого инокулянта бактерий, выращенных по существу до стационарной фазы. В полученный жидкий инокулянт добавляется компонент для осушительной (обезвоживающей) обработки, включающий в себя десикант, с получением препарата частично обезвоженного инокулянта.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения препарат частично осушенного инокулянта подвергается расфасовке и хранится.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения частично осушенный инокулянт наносится на семена.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 представляет графическое изображение выживаемости Bradyrhizobium japonicum («B. japonicum») в жидком бульоне, которая является функцией времени и температуры, представленные графики построены по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг. 2 представляет графическое изображение выживаемости B. japonicum в жидком бульоне, которая является функцией времени и температуры, представленные графики построены по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.3 представляет графическое изображение выживаемости В. japonicum на семенах, которая является функцией времени и температуры, представленные графики построены по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.4 представляет диаграмму выживаемости В. japonicum в жидком бульоне в зависимости от типа и количества десиканта, представленная диаграмма построена по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.5 представляет диаграмму выживаемости В. japonicum в жидком бульоне в зависимости от типа и количества десиканта, представленная диаграмма построена по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.6 представляет диаграмму выживаемости В. japonicum на семенах в зависимости от типа и количества десиканта, представленная диаграмма построена по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.7 представляет диаграмму выживаемости Pseudomonas fluorescens («P. fluorescent») в жидком бульоне в зависимости от типа и количества десиканта, представленная диаграмма построена по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Фиг.8 представляет диаграмму выживаемости S. proteamaculans («S. proteamaculans») в жидком бульоне в зависимости от типа и количества десиканта, представленная диаграмма построена по результатам нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения.
Подробное описание изобретения
Предоставлен способ получения жидкого инокулянта бактерий. Способ включает добавление десиканта в жидкий инокулянт после того, как бактерии выращены по существу до стационарной фазы. Добавление десиканта к инокулянту приводит к получению препарата частично обезвоженного инокулянта.
Способ может обеспечивать повышенную стабильность бактерий, когда препарат частично осушенного инокулянта находится «в упаковке» (т.е. помещен в упаковку) и когда препарат частично осушенного инокулянта нанесен на семена. Повышенная стабильность может приводить к повышенной выживаемости бактерий как в упаковке, так и на семенах.
Бактерии вводятся в жидкую питательную среду для получения бактериальной культуры. В жидкую питательную среду могут вводиться различные бактерии, включая, но без ограничения, Rhizobium (в том числе Bradyrhizobium), Pseudomonas, Serratia, Bacillus (в том числе Paenibacillus), Pasteuria, Azotobacter, Enterobacter, Azospirillum, Methylobacterium, Cyanobacteria (сине-зеленые водоросли). Для получения бактериальной культуры в жидкую питательную среды могут вводиться и другие микроорганизмы (например, микоризные грибы). Предпочтительные штаммы Rhizobium и Bradyrhizobium включают Bradyrhizobium japonicum, Rhizobium meliloti, Rhizobium leguminosarum biovar trifolii, Rhizobium leguminosarum biovar viceae и Rhizobium leguminosarum biovar phaseoli. Эти бактерии способны образовывать клубеньки на корнях бобовых растений. Хотя приведенное далее описание относится, главным образом, к композициям инокулянта Rhizobium, будет понятно, что аналогичные принципы применяются и при использовании других микроорганизмов.
Жидкая питательная среда, в которую вводятся бактерии, может представлять собой любую известную в данной области техники жидкую питательную среду, совместимую с выбранными бактериями. Например, YMB представляет собой среду, обычно используемую для Rhizobium. Состав YMB представлен в таблице 1.
Таблица 1
Характеристические свойства YMB
Дрожжевой экстракт 0,50 г/л
Маннит 10,0 г/л
К2НРО4 0,50 г/л
MgSO4·7H2O 0,2 г/л
NaCl 0,1 г/л
Вода 1 л
рН 6,8
После добавления бактерий в жидкую питательную среду бактериальная культура инкубируется (или ферментируется) для предоставления бактериям возможности роста до «по существу стационарной фазы». Значение термина «по существу стационарная фаза» включает период роста культуры от поздней «логарифмической фазы» до «стационарной фазы». Термин «логарифмическая фаза» означает фазу, которая имеет место после лаг-фазы в начале ферментации и представляет собой фазу, на которой обычно питательные вещества являются неограниченными и наблюдается экспоненциальный рост бактерий. Термин «стационарная фаза» означает фазу, которая имеет место после логарифмической фазы и представляет собой фазу, на которой рост бактерии по существу прекращается. Стационарная фаза обычно достигается, когда жидкая питательная среда по существу полностью расходуется. В данном описании среда, содержащая бактерии, которые инкубируются по существу до стационарной фазы, называется «жидким инокулянтом».
Обычно период инкубирования бактерий может составлять от 115 дней. Точнее, инкубационный период может составлять от 2 до 7 дней. В течение инкубационного периода жидкая питательная среда и бактерии могут аэрироваться и выдерживаться при температуре, подходящей для их роста. Аэрация может осуществляться с использованием инкубатора со встряхиванием, ферментационного реактора и других аналогичных устройств. Конкретные условия инкубации зависят от типа бактерий и типа используемой жидкой питательной среды. Например, B. japonicum может инкубироваться в питательной среде в инкубаторе со встряхиванием в течение примерно от 1 до 10 дней при температурах в интервале от примерно 20°С до примерно 35°С. Предпочтительно, B. japonicum инкубируется в течение примерно от 2 до 7 дней при температуре примерно 28°С для обеспечения возможности роста бактерий.
Количество бактерий в продолжении по существу стационарной фазы изменяется в зависимости от вида бактерий. Например, для Rhizobium бактерий общее количество бактерий в жидком инокулянте составляет от примерно 1 × 109/мл до примерно 1 × 1011/мл. Точнее, данный жидкий инокулянт включает примерно 1 × 1010/мл бактерий. Указанные количества являются примерными количествами, и подразумевается, что и эти другие количества также входят в область настоящего изобретения.
После достижения по существу стационарной фазы (т.е. после того, как бактериям была предоставлена возможность роста с экспоненциальным коэффициентом скорости роста) в жидкий инокулянт вводится компонент обезвоживающей обработки, включающий десикант, для получения препарата частично обезвоженного инокулянта. Термин «компонент обезвоживающей обработки» означает смесь десиканта и разбавителя, обычно воды. Термин «десикант» означает вещество, которое при добавлении к воде снижает активность воды (определяемую как парциальное давление водных паров на поверхности вещества, деленное на давление насыщенного пара). Считается, что снижение водной активности до уровня менее 0,995 эффективно для повышения выживаемости бактерий препарата частично обезвоженного инокулянта, находящегося в упаковке. Считается, что снижение водной активности до уровня менее 0,990, предпочтительно менее примерно 0,980, эффективно для повышения выживаемости бактерий в препарата частично обезвоженного инокулянта, нанесенного на семена.
Термин «десиканты», используемый в настоящем описании, может включать любое соединение или смесь соединений, которые могут классифицироваться как десиканты независимо от того, используется(ются) ли соединение или соединения в концентрациях, фактически обеспечивающих осушительное (обезвоживающее) действие на жидкий инокулянт, или нет. Примеры подходящих десикантов включают одно или несколько соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина и триэтиленгликоля. Другие подходящие десиканты включают, но без ограничения, невосстанавливающие сахара и спирты, относящиеся к группе сахаров (например, маннит).
Количество десиканта, вводимое в жидкий инокулянт, обычно составляет от примерно 5% до примерно 50% (мас./об.) препарата частично обезвоженного инокулянта. Когда десикантом является трегалоза, концентрация десиканта в препарате частично обезвоженного инокулянта предпочтительно составляет от примерно 10% до примерно 40% (мас./об.). Более предпочтительно, концентрация трегалозы в препарате частично обезвоженного инокулянта находится в интервале от примерно 20% до примерно 30% (мас./об.).
Компонент обезвоживающей обработки может включать смесь нескольких десикантов. На практике смеси могут представлять собой любое сочетание двух или большего количества десикантов, которые определены в описании. Например, компонент обезвоживающей обработки может включать смесь трегалозы и глицерина, смесь трегалозы и сахарозы или смеси сахарозы и триэтиленгликоля. Смесь трегалозы и глицерина может включать трегалозу в концентрациях от примерно 5% до примерно 40 (мас./об.) препарата частично обезвоженного инокулянта и глицерин в концентрациях от примерно 1% до примерно 10% (мас./об.) препарата частично обезвоженного инокулянта. Точнее, концентрации трегалозы и глицерина в смеси могут составлять примерно 20% и примерно 5% (мас./об.) препарата частично обезвоженного инокулянта соответственно.
Десикант может добавляться в жидкий инокулянт в то время, когда жидкий инокулянт еще находится в емкости в процессе инкубации (например, в ферментационном реакторе или инкубаторе со встряхиванием). Альтернативно, десикант может добавляться в жидкий инокулянт в процессе расфасовки.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения достаточное количество десиканта присутствует в, по меньшей мере, препарате частично обезвоженного инокулянта, посредством чего (1) повышается стабильность и выживаемость бактерий на последующих стадиях, таких как расфасовка и хранение, и (2) повышается стабильность и выживаемость бактерий на последующих стадиях, таких как нанесение на семена препарата частично обезвоженного инокулянта.
Препарат частично обезвоженного инокулянта может затем расфасовываться и отправляться на хранение. Упаковка может представлять собой любую стандартную упаковку, известную в данной области техники. Например, препарат частично обезвоженного инокулянта может расфасовываться в полиэтиленовые емкости.
После расфасовки препарат частично обезвоженного инокулянта может оправляться на хранение. Условия хранения могут включать охлаждение до температур окружающей среды и ниже до приемлемой относительной влажности. Предпочтительно, условия хранения включают температуру ниже примерно 35°С и относительную влажность ниже примерно 80%.
Препарат частично обезвоженного инокулянта может наноситься на различные семена. Например, препарат частично обезвоженного инокулянта может наноситься на семена бобовых растений. Бобовые растения образуют большую группу растений, включая экономически значимые овощные культуры, такие как соя, люцерна, арахис, горох, бобы и т.п. Бактерии препарата частично обезвоженного инокулянта могут заселять ризосферу и/или заражать корни растения, проникая в корешковые волоски, заселяя корни и образуя клубеньки. В результате такой симбиотической связи растения могут превращать газообразный азот в органические соединения азота посредством азотфиксации. Затем растения могут использовать эти органические соединения для роста.
Количество бактерий на семени во время нанесения препарата частично обезвоженного инокулянта на семя изменяется. Число бактерий на семени через 10 недель после нанесения препарата частично обезвоженного инокулянта на семя также может изменяться, но считается, что число незначительно отклоняется от исходного количества. Другими словами, не должно быть значительного снижения количества бактерий на семени по времени. Например, если количество бактерий на семени при нанесении препарата частично обезвоженного инокулянта на семя составляет, по меньшей мере, 6 × 105, количество бактерий на семени спустя примерно 10 недель предпочтительно составляет 1 × 105.
Предполагается, что для повышения стабильности и выживаемости бактерий в препарате частично обезвоженного инокулянта в упаковке и на семенах, перед нанесением частично обезвоженного инокулянта продукта на семена в препарат частично обезвоженного инокулянта может необязательно добавляться полимер. Полимер может добавляться перед стадией расфасовки или после стадией хранения. Полимер может включать поливинилпирролидон, полимеры алкилированного винилпирролидона, сополимеры винилпирролидона и винилацетата, сополимеры винилпирролидона и стирола, полимеры на основе поливинилового спирта и другие аналогичные полимеры. Концентрация полимера может составлять от примерно 1% до 25% (мас./об.) препарата частично обезвоженного инокулянта.
Хотя добавление десиканта к жидкому инокулянту для получения препарата частично обезвоженного инокулянта после достижения бактериями по существу стационарной фазы повышает стабильность бактерий без необходимого добавления экстендера во время посева, применение экстендера не исключено. На практике область изобретения также включает также нанесение на семена экстендеров после нанесения на семена препарата частично обезвоженного инокулянта. Экстендер может добавляться во время посадки или во время нанесения препарата частично обезвоженного инокулянта на семена. Экстендеры могут включать любые традиционно применяемые экстендеры, например, полученные на основе сахаров, смол, карбоксиметилцеллюлозы и полимеров.
Препарат частично обезвоженного инокулянта может наноситься на торф, глину и/или другие аналогичные сухие носители для получения сухого сыпучего (текучего) препарата инокулянта. Препарат частично обезвоженного инокулянта может наноситься распылением или другими известными способами.
Далее изобретение будет проиллюстрировано с помощью примеров, которые, однако, не следует рассматривать как ограничивающие область настоящего изобретения.
Пример 1. Оценка стабильности Bradyrhizobium japonicum в присутствии трегалозы и смеси глицерин/трегалоза.
B. japonicum культурируют в виброинкубаторе во встряхиваемых колбах с питательной средой в течение 7 дней при температуре 28°С для получения 7-дневного ферментационного бульона. Во встряхиваемых колбах объемом 250 мл приготавливают четыре компонента обезвоживающей обработки (см. таблицу 2). Приготавливают по два образца каждого компонента обезвоживающей обработки, таким образом, подготавливают всего 8 встряхиваемых колб объемом 250 мл с компонентами обезвоживающей обработки. В каждую такую встряхиваемую колбу добавляют по 50 мл семидневного ферментационного бульона. Содержимому всех колб дают возможность достичь состояния равновесия в течение дополнительных 7 дней при 28°С. После достижения состояния равновесия одну колбу из каждой пары с одинаковыми компонентами обезвоживающей обработки статически инкубируют при 28°С. Вторую колбу из каждой пары с одинаковыми компонентами обезвоживающей обработки статически инкубируют при 35°С.
Таблица 2
Обезвоживающая обработка. Влияние трегалозы и глицерина на стабильность B. japonicum.
Обработка Вода (г) Глицерин (г) Трегалоза (г) Символы на фигурах
Контроль: 0% трегалозы, 0% глицерина 50 0 0
Figure 00000001
20% трегалозы 30 0 20
Figure 00000002
5% глицерина 45 5 0
Figure 00000003
5% глицерина + 20% трегалозы 25 5 20
Figure 00000004
Из колб периодически отбирают пробные образцы и чашечным методом определяют общее количество жизнеспособных бактерий. Для чашечного определения количества жизнеспособных бактерий образцы сначала тщательно перемешивают и затем, используя калиброванную пипетку со стерильным наконечником, отбирают 1 мл образца и переносят его в опытную пробирку с 9 мл воды для обратного осмоса (RO), получая таким образом 10-1 разведение. Затем, используя 1000 мкл Rainin (калиброванный и установленный на 1000 мкл) и стерильные наконечники, из опытной пробирки 10-1 разведения отбирают 1000 мкл образца 10-1 разведения и переносят его в другую опытную пробирку, содержащую 9 мл RO воды, получая, таким образом, 10-2 разведение. Затем эти действия повторяют до 10-7 разведения, встряхивая опытные пробирки, содержащие разведения, и фламбируя их между каждым переносом.
Используя 100 мкл Rainin (калиброванный и установленный на 30 мкл) и стерильные наконечники, из опытной пробирки с 10-1 разведением отбирают образец объемом 30 мкл и три капли по 10 мкл капли переносят на чашку с питательным агаром, которая служит в качестве чашки выявления загрязнения. Питательный агар представляет собой агар Oxoid. Указанные действия повторяют для других разведений с тем отличием, что для 10-5, 10-6 и 10-7 разведений образцы помещают на стандартные чашки с питательной средой Congo Red Yeast Mannitol Agar («CRYMA» - см. таблицу 3).
Таблица 3
Состав питательной среды CRYMA-чашек
Ингредиент Количество
MgSО4 0,204 г
NaCl 0,1 г
K2HPO4 0,5 г
Дрожжевой экстракт (Difco) 0,4 г
Манит 10,0 г
Конго красный (0,25% раствор) 10 мл
Агар (BBL) 15 г
Чашкам дают возможность высохнуть перед инвертированием и инкубируют их при 28оС в течение 5 дней. По истечении 5 дней число колоний подсчитывают под микроскопом малого увеличения. Общее количество вычисляют по формуле «среднее значение × разбавление × 100».
Результаты определения выживаемости B. japonicum в жидком бульоне при 28°С, полученные при добавлении четырех различных компонентов обезвоживающей обработки, представлены на Фиг. 1. Результаты определения выживаемости бактерий B. japonicum в жидком бульоне при 35°С, полученные при добавлении четырех различных компонентов обезвоживающей обработки, представлены на Фиг. 2. Образец с добавлением 5% глицерина был испорчен в процессе испытания, и поэтому результат его испытания не представлен на Фиг. 2.
Результаты, представленные на Фиг. 1, показывают, что при 28°С добавление 20% трегалозы и смеси 20% трегалозы/5% глицерина обеспечивает хорошую выживаемость бактерий в жидком бульоне. Количество бактерий в контрольном образце начинает снижаться в течение периода времени в интервале примерно от 12 недель до 16 недель от начала эксперимента. В отличие от контрольного образца, в образце с 20% трегалозы и в образце со смесью 20% трегалозы/5% глицерина количество бактерий сохраняется на относительно постоянном уровне в указанный период времени и даже по истечении указанного периода времени.
Результаты, представленные на Фиг. 2, показывают, что при 35°С добавление 20% трегалозы обеспечивает хорошую выживаемость бактерий в жидком бульоне. Хотя количество бактерий в других образцах, включая контрольные образцы, значительно снижается в начале эксперимента, количество бактерий при добавлении 20% трегалозы остается относительно постоянным в течение всего эксперимента.
По истечении 10 недель из контрольного образца и образца, содержащего 20% трегалозы, отбирают пробы и наносят на семена сои. Семена выдерживают при 22°С. Периодически отбирают пробы и определяют количество выживших B. japonicum. Количество выживших бактерий на семенах определяют следующим способом.
Навеску семян сои массой 500 г помещают в чистый маркированный пластиковый пакет, который может герметично закрываться. Используя шприц объемом 2 мл или стерильные пипетки объемом 2 мл, отбирают 1,38 мл каждого образца и равномерно распределяют на поверхностях семян. Затем в пластиковый пакет, содержащий инокулированные семена, захватывают воздух окружающей среды. Сразу после этого пластиковый пакет герметично закрывают и встряхивают до тех пор, пока образец не покроет равномерно семена (приблизительно 30 секунд). Пластиковый пакет открывают и семена выдерживают в лабораторных условиях (21°С), защищая их от действия прямых солнечных лучей, до полного высыхания (приблизительно 10 минут). Используя сухой, протертый спиртом по всей длине шпатель в виде ложки, из пластикового мешочка произвольно отбирают 100 неповрежденных семян. Семена помещают в предварительно подготовленную бутыль со 100 мл разбавителя. Бутыль закрывают и сразу энергично встряхивают в течение приблизительно 1 минуты. Используя асептический способ, полученные в бутыли 100 мл суспензии последовательно разбавляют следующим образом: (1) сразу после встряхивания 100 мл суспензии из бутыли отбирают 1 мл суспензии бактерий в разбавителе и асептически переносят в первую пробирку с 9 мл RO воды, используемой в качестве разбавителя, получая, таким образом, 10-1 разведение; (2) суспензию 10-1 разведения встряхивают в течение 15 секунд; (3) сразу после встряхивания 1 мл суспензии 10-1 разведения переносят в другую пробирку с 9 мл RO воды, используемой в качестве разбавителя, с получением 10-2 разведения; (4) после этого суспензию 10-2 разведения встряхивают; (5) стадии (3) и (4) повторяют, с получением 10-3 и 10-4 разведения.
После этого чашки с агаровой средой, на которых производится подсчет колоний, снабжают ярлыком с указанием разведения суспензии используемой пробирки, описанием композиции обработки и датой посева. Для каждого разведения подготавливают по две чашки. Перед отбором образцов из пробирок с разбавленными суспензиями и посевом их на чашки с агаровой средой суспензии встряхивают. Затем, используя стандартные методы асептического пипетирования, из каждой пробирки разведения отбирают образцы объемом 100 мкл и распределяют их, вносят в центр каждой чашки с агаровой средой. Используя стерильный распределитель, образцы равномерно распределяют на поверхностях чашек. После этого чашки инкубируют в течение 7 дней при 28°С. После инкубирования подсчитывают и записывают число колониеобразующих единиц (CFU) в каждой чашке. Затем для каждой чашки для определения количества CFU из расчета на каждую чашку (CFU/чашка) проводят следующие вычисления: [Среднее число колоний × [указанное в ярлыке разведение × 10(а) × 100(b)}/100(c)], где (а) представляет собой поправочное значение для 0,1 мл/чашка, (b) представляет собой поправочный коэффициент для 100 мл в исходной суспензии, помещенной в бутыли, и (с) представляет собой поправочный коэффициент для количества семян в исходном образце.
Результаты определения выживаемости B. japonicum по истечении 10 недель представлены на Фиг. 3. Результаты показывают, что временной отрезок, в течение которого количество бактерий сохраняется на уровне свыше 1 × 105/семя, составляет для контрольного образца менее 1 недели, а для образца, содержащего 20% трегалозы, более 10 недель. Эти результаты показывают, что добавление трегалозы в концентрации 20% обеспечивает хорошее выживание бактерий при нанесении их на семена.
Пример 2. Оптимизация количества смеси трегалоза/ахароза, необходимой для стабилизации B. japonicum
Образцы препаратов приготавливают во встряхиваемых колбах в соответствии с методикой, описанной в примере 1. Компоненты, используемые для обезвоживающей обработки, для данного примера, представлены в таблице 4.
Таблица 4
Обезвоживающая обработка. Влияние трегалозы и сахарозы на стабильность B. japonicum
Обработка Вода (г) Трегалоза (г) Сахароза (г)
Контрольный образец 50 0 0
5 % трегалозы 45 5 0
10% трегалозы 40 10 0
20% трегалозы 30 20 0
30% трегалозы 20 30 0
40% трегалозы 10 40 0
5% сахарозы 45 0 5
10% сахарозы 40 0 10
20% сахарозы 30 0 20
30% сахарозы 20 0 30
Результаты определения выживаемости B. japonicum в жидком бульоне при 28°С с применением указанных добавок, представлены на Фиг. 4. Результаты определения выживаемости B. japonicum в жидком бульоне при 25°С с применением указанных добавок, представлены на Фиг. 5.
Результаты, представленные на Фиг. 4, показывают, что при инкубировании при 28°С добавление галактозы в концентрациях в интервале от 10% до 30% (мас./об.) является оптимальными для выживаемости бактерий в жидком бульоне. Результаты, представленные на Фиг. 4, также показывают, что добавление сахарозы в концентрациях в интервале от 5% до 10% (мас./об.) благоприятно для выживаемости бактерий в жидком бульоне, но не в такой же степени, как добавление трегалозы. Кроме того, результаты, представленные на Фиг. 4, показывают, что бактерии могут выживать при обработке с добавлением трегалозы в концентрации 40%, демонстрируя, что бактерии обладают потенциалом выживать в препарате, который является ингибиторным для микроорганизмов.
Результаты, представленные на Фиг.5, показывают, что при 35°С добавление трегалозы в концентрациях в интервале от 10% до 30% (мас./об.) является оптимальными для выживаемости бактерий в жидком бульоне. Результаты, представленные на Фиг.5, также показывают, что добавление сахарозы в концентрации 5% (мас./об.) благоприятно для выживаемости бактерий в жидком бульоне, но не в такой же степени, как добавление трегалозы.
По истечении 10 недель образцы препаратов с компонентами, представленными в таблице 4, наносят на семена сои. Семена инкубируют при 22°С. Образцы инокулянта на семенах отбирают непосредственно после нанесения препарата, затем через 6 дней, через 2 недели и через 4 недели. В образцах определяют количество бактерий В. japonicum. Способ определения выживаемости бактерий на семенах описан выше в примере 1. Результаты определения выживаемости бактерий на семенах представлены на Фиг.6.
Результаты, представленные на Фиг.6, показывают, что при 22°С добавление трегалозы в концентрациях в интервале от 20% до 30% (мас./об.) являются оптимальными для выживаемости бактерий при нанесении бактерий на семена.
Пример 3. Определение стабильности Serratia Proteamaculans и Pseudomonas Fluorescens в препарате жидкого бульона Serratia Proteamaculans ("S. Proteamaculans") выращивают в стандартной микробиологической среде (триптический соевый бульон (Tryptic soya broth - "TBS") половинной концентрации) в течение 24 часов при 22°С для приготовления бактериального бульона. Приготавливают компоненты обезвоживающей обработки, представленные в таблице 5. В каждую колбу, содержащую указанный компонент, добавляют 50 мл бактериального бульона. Содержимому всех колб дают возможность достичь состояния равновесия в течение дополнительных 3 дней в виброинкубатора при 22°С. Затем колбы удаляют из виброинкубатора для статического инкубирования при 28°С. Из колб периодически отбирают образцы и количество бактерий оценивают, получая последовательные разведения и высевая их на агаровую среду со стриптическим соевым бульоном половинной концентрации - "TSA".
Эти же действия выполняют для Pseudomonas fluorescens ("Р. fluorescens").
Таблица 5
Обезвоживающая обработка. Влияние добавления трегалозы, сахарозы и глицерина на стабильность S.Proteamaculaus и Р.fluorescens.
Обработка Вода (г) Трегалоза (г) Сахароза (г) Глицерин (г)
Контрольный образец 50 0 0 0
10% глицерина 40 0 0 10
20% глицерина 30 0 0 20
30% глицерина 20 0 0 30
10% трегалозы 40 10 0. 0
20% трегалозы 30 20 0 0
30% трегалозы 20 30 0 0
10% сахарозы 40 0 10 0
20% сахарозы 30 0 20 0
30% сахарозы 20 0 30 0
Результаты определения выживаемости P. fluorescens в жидкости при 28°С представлены на Фиг.7. Результаты показывают, что при 28°С добавление глицерина, трегалозы и сахарозы может улучшать выживаемость P. fluorescens.
Результаты определения выживаемости S. proteamaculans в жидкости при 28°С представлены на Фиг.8. Результаты показывают, что при добавлении в инокулянт 30% трегалозы, 10% сахарозы и 30% сахарозы количество выживших бактерий превосходит количество выживших бактерий в контрольном образце в течение периода времени, составляющем до 4 недель. Эти данные показывают, что введение указанных добавок может повысить выживаемость S. proteamaculans.
Квалифицированный специалист данной области техники будет представлять, что настоящее изобретение может осуществляться в различных альтернативных формах и конфигурациях. Приведенное выше подробное описание раскрытых вариантов осуществления изобретения представлено только с целью более четкого его разъяснения, и не подразумевает никаких ограничений.

Claims (23)

1. Способ получения препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий, где указанный способ включает:
получение жидкого инокулянта бактерий, выращенных по существу до стационарной фазы, где бактерии представляют собой бактерии одного или нескольких родов из Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas и Serratia; и
добавление в количестве, достаточном для частичного обезвоживания жидкого инокулянта, бактерий, обезвоживающей добавки, включающей десикант, к жидкому инокулянту бактерий для получения препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий, где десикант представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина, триэтиленгликоля и маннита, в количестве от примерно 5 до примерно 50% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий.
2. Способ по п.1, где бактерии представляют собой бактерии, выбранные из группы Bradyrhizobium japonicum, Serratia proteamaculans и Pseudomonas fluorescens.
3. Способ по п.1 или 2, где водная активность препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта составляет менее чем примерно 0,990.
4. Способ по п.1, где водная активность препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта составляет менее чем примерно 0,980.
5. Способ по п.1, где жидкий инокулянт получен введением бактерий в жидкую питательную среду с получением бактериальной культуры; и
инкубированием бактериальной культуры для обеспечения возможности роста бактерий до по существу стационарной фазы с получением таким образом жидкого инокулянта.
6. Способ по п.5, где инкубирование бактериальной культуры проводится в течение от примерно 2 дней до примерно 7 дней.
7. Способ по п.1, где десикант включает смесь двух или более соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина, триэтиленгликоля и маннита.
8. Способ по п.1, где десикант включает трегалозу.
9. Способ по п.8, где количество трегалозы составляет от примерно 10 до примерно 40% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
10. Способ по п.9, где количество трегалозы составляет от примерно 20 до примерно 30% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
11. Способ по п.7, где десикант включает смесь трегалозы и глицерина.
12. Способ по п. 11, где количество трегалозы составляет от примерно 5 до примерно 40% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта, и количество глицерина составляет от примерно 1 до примерно 10% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
13. Способ по п.12, где количество трегалозы составляет примерно 20% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта, и количество глицерина составляет примерно 5% (маc./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
14. Способ по п.1, где способ дополнительно включает расфасовку препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
15. Способ обработки семян, где способ включает:
получение жидкого инокулянта бактерий, выращенных по существу до стационарной фазы, где бактерии представляют собой бактерии одного или нескольких родов из Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas и Serratia;
добавление обезвоживающей добавки, включающей десикант, к жидкому инокулянту бактерий для получения препарата частично обезвоженного инокулянта бактерий, где десикант представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина, триэтиленгликоля и маннита, в количестве от примерно 5 до примерно 50% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий; и
нанесение на семена препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
16. Способ по п.15, где бактерии представляют собой бактерии рода Rhizobium.
17. Способ по п.15, где десикант включает трегалозу.
18. Способ по п.17, где количество трегалозы составляет от примерно 10 до примерно 40% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
19. Способ по п.18, где количество трегалозы составляет от примерно 20 до примерно 30% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта.
20. Способ по п.15 или 16, где семена включают семена бобового растения.
21. Способ по п.15 или 16, где число бактерий по истечении примерно 10 недель составляет более чем примерно 1×105 на семя.
22. Способ получения сухого сыпучего препарата инокулянта бактерий, где способ включает:
получение жидкого инокулянта бактерий, выращенных по существу до стационарной фазы, где бактерии представляют собой бактерии одного или нескольких родов из Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas и Serratia,
добавление обезвоживающей добавки, включающей десикант, к жидкому инокулянту бактерий для получения препарата частично обезвоженного инокулянта бактерий, где десикант представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина, триэтиленгликоля и маннита, в количестве от примерно 5 до примерно 50% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий; и
нанесение препарата частично обезвоженного инокулянта бактерий на сухой носитель для получения сухого сыпучего препарата инокулянта бактерий.
23. Способ по п.22, где сухой носитель представляет собой торф.
RU2007127833/10A 2004-12-23 2005-11-14 Жидкие бактериальные инокулянты с повышенным сроком годности и повышенной стабильностью на семенах RU2428467C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/020,714 2004-12-23
US11/020,714 US8011132B2 (en) 2004-12-23 2004-12-23 Enhanced shelf life and on seed stabilization of liquid bacterium inoculants

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2007127833A RU2007127833A (ru) 2009-01-27
RU2428467C2 true RU2428467C2 (ru) 2011-09-10

Family

ID=36615360

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007127833/10A RU2428467C2 (ru) 2004-12-23 2005-11-14 Жидкие бактериальные инокулянты с повышенным сроком годности и повышенной стабильностью на семенах

Country Status (13)

Country Link
US (2) US8011132B2 (ru)
EP (1) EP1827074B1 (ru)
JP (2) JP5587540B2 (ru)
CN (1) CN101106900B (ru)
AU (1) AU2005322518B2 (ru)
BR (1) BRPI0519258B1 (ru)
CA (1) CA2592139C (ru)
HU (1) HUE048726T2 (ru)
MX (1) MX2007007620A (ru)
NZ (1) NZ555671A (ru)
RU (1) RU2428467C2 (ru)
UA (1) UA94389C2 (ru)
WO (1) WO2006071369A2 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2514217C1 (ru) * 2012-11-29 2014-04-27 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохояйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) Биопрепарат под бобовую культуру жидкой формы на основе клубеньковых бактерий
RU2658994C2 (ru) * 2013-03-28 2018-06-26 Новозимс Биоаг А/С Композиции и способы усиления стабильности микробов
RU2739954C2 (ru) * 2015-09-11 2020-12-30 Новозимс Биоаг А/С Стабильные композиции с инокулянтом и способы их получения
RU2776948C2 (ru) * 2016-06-02 2022-07-29 Данстар Фермент Аг Композиция и способ улучшения развития растений

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008259495A (ja) * 2007-03-16 2008-10-30 Akita Prefectural Univ 農業方法、ヘアリーベッチ用根粒菌接種製剤、収穫作物
USH2271H1 (en) 2010-12-13 2012-07-03 James Thomas Sears Production and application of an aircraft spreadable, cyanobacterial based biological soil crust inoculant for soil fertilization, soil stablization and atmospheric CO2 drawdown and sequestration
CN104508118B (zh) 2012-06-01 2018-10-12 新叶共生有限公司 微生物发酵方法和组合物
WO2015085116A1 (en) 2013-12-04 2015-06-11 Newleaf Symbiotics, Inc. Methods and compositions for improving soybean yield
ES2602992B2 (es) 2013-12-04 2018-09-07 Newleaf Symbiotics, Inc. Composiciones y métodos para mejorar la producción de fruta
BR112016012883B1 (pt) 2013-12-04 2021-01-05 Newleaf Symbiotics, Inc. métodos e composições para aprimorar o rendimento de milho
EP4289274A3 (en) 2013-12-04 2024-03-06 Newleaf Symbiotics, Inc. Compositions for treating plants
MX2016011991A (es) 2014-03-17 2016-11-30 Newleaf Symbiotics Inc Composiciones y metodos para mejorar la produccion de tomate.
US10757946B2 (en) 2014-09-16 2020-09-01 Newleaf Symbiotic, Inc. Microbial inoculant formulations
WO2016069564A1 (en) 2014-10-27 2016-05-06 Newleaf Symbiotics, Inc. Methods and compositions for controlling corn rootworm
BR112018013111A2 (pt) * 2015-12-28 2018-12-11 Monsanto Technology Llc composição inoculante não aquosa, material de propagação de planta revestido, kit, planta, parte de planta, produto processado, cultura, e, método.
EP3397746A1 (en) 2015-12-28 2018-11-07 Novozymes BioAG A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
JP2017176067A (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 シーシーアイ株式会社 生菌製剤の製造方法、ならびに生菌製剤およびこれを用いた排水処理方法
CA3025912A1 (en) 2016-05-31 2017-12-07 Novozymes Bioag A/S Stable liquid inoculant compositions and coated plant propagation materials comprising same
WO2017210163A1 (en) 2016-05-31 2017-12-07 Novozymes Bioag A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
FR3052021B1 (fr) * 2016-06-02 2020-04-17 Danstar Ferment Ag Composition et methode pour ameliorer le developpement des plantes
JP2019530455A (ja) * 2016-10-14 2019-10-24 バイオプレパラティ、 スポル． エス．アール．オー 微生物ピシウム・オリガンドラムを含む生物学的抗真菌液体製品及び製造方法
WO2018118740A1 (en) 2016-12-20 2018-06-28 Novozymes Bioag A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
BR112019024738A2 (pt) 2017-05-26 2020-06-16 Novozymes Bioag A/S Uso de um ou mais óleos vegetais metilados, composição inoculante líquida, semente de planta revestida, kit, e, método
US20200093125A1 (en) 2017-05-26 2020-03-26 Novozymes Bioag A/S Stable inoculant compositions comprising paraffin oils/waxes
BR112019024760A2 (pt) 2017-05-26 2020-06-09 Novozymes Bioag As uso de dodecano, composição inoculante líquida, semente de planta revestida, kit, e, método.
CN109220066A (zh) * 2017-11-28 2019-01-18 卢梅雅 固氮蓝藻在提高甘薯种薯出苗质量中的应用
WO2019232410A1 (en) * 2018-05-31 2019-12-05 Basf Corporation Spray drying composition and related methods
CN109906862B (zh) * 2019-04-23 2021-08-24 国家林业和草原局桉树研究开发中心 黄花风铃木播种育苗方法
UA125194C2 (uk) * 2020-04-21 2022-01-26 Сергій Миколайович Абрамов Інокулянт для рослин

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4337077A (en) * 1980-09-09 1982-06-29 Rutherford Joseph P Agricultural inoculant composition
CA1278434C (en) 1985-04-25 1991-01-02 Alan Paau Bacterial agricultural inoculants
US4875921A (en) * 1985-04-25 1989-10-24 Agracetus Corporation Bacterial agricultural inoculants
CA1316859C (en) * 1985-12-06 1993-04-27 Dennis E. Mccabe Production of microbial field crop inoculants
GB8617496D0 (en) * 1986-07-17 1986-08-28 Agricultural Genetics Co Inoculant composition for crops
US5292507A (en) 1986-08-01 1994-03-08 Imperial Oil Limited Method of using polysaccharides to stabilize microorganisms for inoculating plant seeds
US5113619A (en) * 1989-01-30 1992-05-19 Leps Walter T Method of adhering bacteria to seed and composition therefor
FR2650294B1 (fr) 1989-07-28 1991-10-25 Rhone Poulenc Chimie Procede de traitement de peaux, et peaux obtenues
FR2655234B1 (fr) * 1989-12-06 1992-04-03 Seppic Sa Nouvelle poudre sechante, son utilisation pour le sechage de supports solides, en particulier de graines de semences.
SU1673973A1 (ru) 1990-07-21 1991-08-30 Киевский Государственный Университет Им.Т.Г.Шевченко Способ диагностики заболеваний растений, вызванных РSеUDомоNаS SYRINGae 1у серогруппы
US5695541A (en) * 1990-11-13 1997-12-09 Liphatech, Inc. Process for preparation of bacterial agricultural products
GB9125695D0 (en) * 1991-12-03 1992-01-29 Mastavac Limited Medical preparations
JP3168550B2 (ja) * 1992-12-02 2001-05-21 株式会社林原生物化学研究所 脱水剤およびそれを用いる含水物の脱水方法並びにその方法で得られる脱水物品
US6005100A (en) * 1992-12-02 1999-12-21 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seitbutsu Kagaku Kenkyujo Trehalose composition for prolonging product shelf life
US5275873A (en) * 1992-12-10 1994-01-04 E. I. Du Pont De Nemours And Company Ballistic structure
JP2660317B2 (ja) * 1993-12-10 1997-10-08 多木化学株式会社 蛍光性細菌の活性維持法及び保存法並びにこの培養物からなる微生物資材
US5697186A (en) * 1994-02-24 1997-12-16 Rutgers, The State University Of New Jersey Flocculated microbial inoculants for delivery of agriculturally beneficial microorganisms
JPH08143411A (ja) * 1994-11-24 1996-06-04 New Oji Paper Co Ltd シバの病害防除資材
DE69607056T2 (de) * 1995-05-10 2000-11-09 Kabushiki Kaisha Toshiba, Kawasaki Faserverstärktes keramisches Verbundmaterial und Methode zu seiner Herstellung
US6030683A (en) * 1996-04-23 2000-02-29 E. I. Du Pont De Nemours And Company Aramid ballistic structure
US5916029A (en) * 1996-06-26 1999-06-29 Liphatech, Inc. Process for producing seeds coated with a microbial composition
CN1089560C (zh) * 1997-10-08 2002-08-28 李小平 一种秸秆贮料复合接种剂及其生产方法
US6610531B1 (en) * 1998-09-24 2003-08-26 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Viable dried bacteria produced by drying in the presence of trehalose and divalent cation
CN1153665C (zh) * 2000-05-11 2004-06-16 泰金特瓦隆有限公司 装甲复合材料
US6855536B2 (en) * 2000-07-20 2005-02-15 University Of Tennessee Research Corp., Inc. Materials and methods for the enhancement of effective root nodulation in legumes
US20040102328A1 (en) * 2000-08-22 2004-05-27 Johnson Von Walter Thermo-stable bio-matrix
AR025644A1 (es) * 2000-09-12 2002-12-04 Sintesis Quimica S A I C Una composicion inoculante en base acuosa para semillas, y un metodo para conservar la composicion.
FR2819414A1 (fr) * 2001-01-15 2002-07-19 Cognis France Sa Preparations cosmetiques et/ou pharmaceutiques comprenant des extraits de plantes dites a resurrection
DE60212111T2 (de) * 2001-02-02 2007-01-04 Suntory Ltd. Verfahren zur herstellung von aktiver trockenhefe
CA2333834A1 (en) * 2001-02-05 2002-08-05 Blaine Muhr Seed inoculation system
US20030060496A1 (en) * 2002-08-15 2003-03-27 Merritt Douthitt Pruitt Inoculant tolerant fungcidal compositions
US20030228679A1 (en) * 2002-03-27 2003-12-11 Smith Donald L. Compositions and methods for increasing plant growth by inoculation with bacillus strains
JP2004035412A (ja) * 2002-06-28 2004-02-05 Mitsubishi Chemicals Corp オキセタン誘導体の製造方法
AR039365A1 (es) * 2002-11-08 2005-02-16 Magri Federico German Un metodo para la preparacion de un inoculante concentrado y composicion inoculante concentrada obtenida con dicho metodo
US6862971B2 (en) * 2002-12-17 2005-03-08 Texas Tech University Ballistic protection composite shield and method of manufacturing
US20050066805A1 (en) * 2003-09-17 2005-03-31 Park Andrew D. Hard armor composite
US8020343B2 (en) * 2004-12-23 2011-09-20 Becker Underwood Inc. Enhanced shelf life and on seed stabilization of liquid bacterium inoculants

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2514217C1 (ru) * 2012-11-29 2014-04-27 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохояйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) Биопрепарат под бобовую культуру жидкой формы на основе клубеньковых бактерий
RU2658994C2 (ru) * 2013-03-28 2018-06-26 Новозимс Биоаг А/С Композиции и способы усиления стабильности микробов
RU2739954C2 (ru) * 2015-09-11 2020-12-30 Новозимс Биоаг А/С Стабильные композиции с инокулянтом и способы их получения
RU2776948C2 (ru) * 2016-06-02 2022-07-29 Данстар Фермент Аг Композиция и способ улучшения развития растений
RU2806593C1 (ru) * 2023-07-05 2023-11-01 Федеральное Государственное Бюджетно Научное Учреждение "Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Сельскохозяйственной Микробиологии" СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ СОИ Bradyrhizobium japonicum RZ300

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006071369A2 (en) 2006-07-06
AU2005322518A1 (en) 2006-07-06
NZ555671A (en) 2008-12-24
US8011132B2 (en) 2011-09-06
MX2007007620A (es) 2008-01-28
WO2006071369A3 (en) 2007-01-18
HUE048726T2 (hu) 2020-09-28
US20110268704A1 (en) 2011-11-03
JP2012235794A (ja) 2012-12-06
BRPI0519258A2 (pt) 2009-01-06
CA2592139A1 (en) 2006-07-06
EP1827074A4 (en) 2011-11-16
JP5587540B2 (ja) 2014-09-10
US20060150488A1 (en) 2006-07-13
JP2008525022A (ja) 2008-07-17
EP1827074A2 (en) 2007-09-05
RU2007127833A (ru) 2009-01-27
UA94389C2 (ru) 2011-05-10
AU2005322518B2 (en) 2011-09-08
BRPI0519258B1 (pt) 2017-05-30
AU2005322518A2 (en) 2006-07-06
CN101106900A (zh) 2008-01-16
EP1827074B1 (en) 2020-01-08
CN101106900B (zh) 2014-04-02
CA2592139C (en) 2014-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2428467C2 (ru) Жидкие бактериальные инокулянты с повышенным сроком годности и повышенной стабильностью на семенах
CN111254086B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在生防中的应用
US8020343B2 (en) Enhanced shelf life and on seed stabilization of liquid bacterium inoculants
EP0226394B1 (en) Production of microbial field crop inoculants
WO2004050861A1 (fr) Preparation microbienne et procede de prevention et de traitement du fletrissement bacterien, la plante et son utilisation
CN105586274A (zh) 拟康宁木霉t-51菌株及其在番茄促生和灰霉病生物防治的应用
CN104686196A (zh) 一种通过阴干子实体保存和分离羊肚菌菌种的方法
CN110396485B (zh) 产生生长素的类短短芽孢杆菌及其应用
US20220053771A1 (en) Use of chaetomium globosum strain in controlling fusarium crown rot of wheat
CN104988098A (zh) 一株防治甜菜根腐病并且促进甜菜生长的芽孢杆菌菌株
CN105524874A (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌nkg-1及植物促生方法
CA2112398A1 (fr) Moyens pour ameliorer la croissance des plantes
EP3462879B1 (fr) Méthode pour améliorer le développement des plantes
CN115873750B (zh) 一株防治西瓜枯萎病的普城沙雷氏菌、菌剂及应用
CN111304101B (zh) 一种dse干菌剂及其在促进植物生长中的应用
CN111394259B (zh) 一种促进植物生长且易于保存和运输的dse干菌剂的制备方法
JPH10191783A (ja) カバノアナタケの液体培養方法
CN114164126A (zh) 一株米根霉xerf-1及其在减轻苹果连作障碍中的应用
CN118308247A (zh) 一种短小芽孢杆菌及生防菌的筛选、菌剂制备与应用
CN116218742A (zh) 一株拮抗掘氏疫霉菌的地衣芽孢杆菌及其应用
CN109761668A (zh) 一种促进冬枣树根茎发育的液体肥料及其制备方法
CN108947629A (zh) 一种促进翠冠梨生根壮苗的液体肥料及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner