CN105101776B - 用于增强微生物稳定性的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

在此描述了用于增加一种或多种有益微生物的存活性的多种组合物和方法。

Description

用于增强微生物稳定性的组合物和方法
领域
用于增强微生物稳定性的组合物和方法,特别是当将微生物施用至种子时。
背景
植物生长至少部分取决于该植物和栖息于其周围土壤中的微生物之间的相互作用。例如,革兰氏阴性土壤细菌、根瘤菌科和慢生根瘤菌科,与豆类例如大豆之间的共生是有据可查的。针对这些关系的生物化学基础包括一种分子信号传导的交换、其中植物至细菌信号化合物包括黄酮、异黄酮以及黄烷酮,并且该植物至细菌信号化合物(包括慢生菌和根瘤菌结瘤基因表达的最终产物)已知为脂质-壳寡糖(LCO)。这些细菌和豆类之间的共生使得豆类能够固定大气氮用于植物生长,因此避免了对氮肥的需求。由于氮肥可以显著地增加作物成本并且是与大量污染效应相关的,所以农业产业继续其努力来开发这种生物关系并研发用于改进植物产量而不增加基于氮的肥料的使用的新的试剂和方法。
植物和土壤微生物之间另一种已知的并被良好研究的共生体涉及丛枝状菌根(AM)真菌。这组真菌,近来被重新命名为球囊菌门,广泛分布在整个植物界,包括被子植物、裸子植物、蕨类植物和一些苔藓植物(史密斯(Smith)和瑞德(Read),2008)。在被子植物中,至少80%的物种可以形成AM共生,唯一主要例外是十字花科和藜科。丛枝状菌根真菌能够从土壤转移稀少或难溶矿物营养物质,例如磷、锌和铜到植物,这进而提供碳水化合物至这些真菌。这种营养素的交换在土壤肥力和水可用性低(在世界大部分地区严重限制农业生产的条件)时可能是至关重要的(史密斯(Smith)等人,菌根共生(Mycorrhizalsymbiosis),787页,科学出版社(Academic Press.)(2008))。
除了与微生物之间的共生关系,健康生长需要植物从土壤提取多种元素例如磷和微量营养素(铜、铁、锌、等)。土壤时常可能缺乏这些元素或包含这些元素的不能容易地由植物同化的形式。肥料典型地被施用至土壤以增加植物对磷的摄取量。然而,绝大多数施加的磷快速转化为不能容易地由植物利用的形式。青霉属(例如,P.bilaiae)和根瘤菌属的各种真菌菌株已经应用于土壤以促进由植物摄取磷。参见,例如,美国专利5,026,417和5,484,464以及美国专利申请公开号2010/0099560。
继续进行努力开发这些类型的植物和微生物之间的关系,目标是增加植物生长和产量。一种这样的努力是在接种物领域,其中具体致力于增强“种子上(on-seed)”接种物技术并且特别是,一旦它们被施用至种子,用以增强接种物的存活性。造成接种物低存活性的一个这样的原因包括,除其他事项之外,存在于种子处理中的不兼容的化合物的存在。这类化合物可以包括防腐剂或在种子处理成分中使用的其他杀生物剂。
美国专利号:4,149,869披露了包衣有一种混合物的种子,该混合物含有一种酪蛋白酸盐和活根瘤菌细菌。
欧洲专利申请公开号:0454291披露了一种用于生产增强的根瘤菌接种物的工艺。
美国专利号:5,106,648披露了一种用于包衣种子的方法,然而,该披露陈述了有必要使用抗杀真菌剂的根瘤菌菌株以允许种子可以同时包衣有杀真菌剂。
美国专利申请公开号:2008/0132411披露了一种用于改进微生物接种物在种子上的存活和活力的方法,该方法包括用一种混合物包衣种子的步骤,该混合物包括一种碳水化合物、一种糖醇、和多种微生物。
美国专利申请公开号:2012/0208699披露了用于降低处理过的种子的桥接的方法和组合物,包括将还增强任何有益微生物的存活性的一些物质包括在该组合物中或与其混合和/或增强从对其施用该处理的种子生长的植物的产量。
专利申请公开号:WO 1994/06732披露了一种获得用于与豆科作物一起使用的可湿性粉剂接种物配制品的方法。
专利申请公开号:WO 2006/071369披露了一种方法,该方法用于生产一种包含干燥剂的液体接种物,其中该方法可以改进细菌在液体接种物(在包装中或在种子上)中的存活和稳定性。
戴伊(Dey,B.P.)、恩格利(Engley Jr.,F.B.),(1994),通过恢复培养基中和抗微生物化学品(Neutralization of antimicrobial chemicals by recovery media)微生物学方法(Microbiol.Methods),19:51-58(披露了使用中和培养基以便从暴露于商业苯酚和一种季铵化合物的贴砖表面回收金黄色葡萄球菌菌株ATCC 6532来中和多种抗微生物剂的能力)。
然而,仍然存在对当与基于微生物的接种物不相容的化合物被用作种子处理的一部分时,可以增强微生物的存活性的组合物和方法的需求。
概述
在此描述了增加一种或多种微生物的存活性的组合物,这些组合物包括至少一种化合物(包括一种或多种微生物稳定化合物)和至少一种第二成分(选自组(A)至(E),其中组(A)是一种杀真菌剂、组(B)是一种杀昆虫剂、组(C)是一种杀线虫剂,组(D)是一种杀螨剂、组(E)是一种除草剂、并且组(F)是一种肥料)。在一个实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物可以包括这样一种化合物,该化合物选自下组,该组由以下各项组成:酵母提取物、酪蛋白酸钙、奶、脲、补血剂、牛肉提取物、氨、氨基酸、铵盐、铁盐、亚铁盐、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、卵磷脂、聚山梨醇酯、白蛋白、蛋白胨(例如,大豆蛋白胨)、及其组合。
在另一个实施例中,该组合物包括一种或多种农业上有益的成分,如一种或多种生物活性成分。生物活性成分可以包括一种或多种植物信号分子或一种或多种有益微生物。在一个特定实施例中,该一种或多种生物活性成分可以包括一种或多种脂壳寡糖(lipo-chitooligosaccharide)(LCO)、一种或多种壳寡糖(CO)、一种或多种几丁质化合物、一种或多种类黄酮、一种或多种非类黄酮结瘤基因诱导物及其衍生物、一种或多种卡里金(karrikin)及其衍生物、或其任何信号分子组合。在另一个实施例中,该一种或多种有益微生物
进一步在此描述的是一种用于增加一种或多种微生物的存活性的方法。在一个实施例中,该用于增加一种或多种微生物的存活性的方法包括向一种种子处理组合物添加一种或多种微生物稳定化合物,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性,以及向该种子处理组合物添加一种或多种微生物。在一个实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物可以包括酵母提取物、酪蛋白酸钙、奶、脲、补血剂、牛肉提取物、氨、氨基酸、铵盐、铁盐、亚铁盐、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、卵磷脂、聚山梨醇酯、白蛋白、蛋白胨、及其组合。在另一个实施例中,该一种或多种抗微生物化合物可以包括一种抑细菌剂、一种杀细菌剂、或其组合。
最后,在此描述了一种用于包衣种子的方法。在一个实施例中,该方法包括向一种种子处理组合物添加一种或多种微生物稳定化合物,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性,向该种子处理组合物添加一种或多种微生物,以及将该种子处理施用至种子。
详细说明
披露的实施例涉及用于增强植物生长的组合物和方法。
定义:
如在此使用的,单数形式“一个”、“一种”和“该”旨在也包括复数形式,除非上下文清楚地另外指明。
如在此使用的,“一种或多种微生物稳定化合物”意指任何化合物,该化合物能够维持和/或增加一种或多种微生物的活力、存活性和/或CFU。如在此使用的,“一种或多种微生物稳定化合物”进一步意指任何化合物,该化合物能够预防和/或减少一种或多种微生物的死亡量和/或死亡速率。
如在此使用的,术语“奶制品底物”意指一种动物的奶、连同奶的组分(例如,奶油)、以及奶和奶油的组合(例如,各占一半)。如在此使用的,术语“奶”意指动物产生的全脂乳、连同其加工形式。实际上,发现任何合适形式的奶都能用于本发明的实施例中,包括包含或不包含乳清的奶、连同全脂乳、生乳、脱脂乳、脱水乳、重组乳、炼乳、巴氏消毒乳、未灭菌的、均质化的、非均质化的、或再水合的奶粉。
如在此使用的,术语“脲”意指一种具有化学式NH2CONH2的有机化合物,连同其异构体、盐、溶剂化物、以及衍生物。
如在此使用的,术语“氨基酸”是指天然发生的以及合成的氨基酸,连同氨基酸类似物以及氨基酸模拟物(它们以一种类似于天然发生的氨基酸的方式中发挥作用)。天然发生的氨基酸是由遗传密码编码的那些,连同那些随后被修饰的氨基酸,例如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸酯、以及O-磷酸丝氨酸。氨基酸也指聚(氨基酸)如肽、多肽与蛋白。
“氨基酸类似物”意指化合物,它们具有与天然发生的氨基酸相同的基本化学结构,即,一个碳,该碳结合到一个氢上、一个羧基基团、一个氨基基团、以及一个R基团。氨基酸类似物的实例包括,但不局限于同型丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这些类似物具有修饰的R基团(例如,正亮氨酸)或修饰的肽骨架,但保留了与一种天然发生的氨基酸相同的基本化学结构。
“非天然氨基酸”不是由遗传密码编码的,并且可以(但不必然)具有与一种天然发生的氨基酸相同的基本结构。非天然氨基酸包括,但不局限于铃兰氨酸、2-氨基脂肪酸、3-氨基脂肪酸、β-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、叔-丁基甘氨酸、2,4-二氨基异丁酸、锁链素、2,2’-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、同型脯氨酸、羟基赖氨酸、别-羟基赖氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、异锁链素、别-异亮氨酸、N-甲基丙氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸、N-甲基戊基甘氨酸、N-甲基缬氨酸、萘基丙氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸、戊基甘氨酸、哌啶酸和硫代脯氨酸。
如在此使用的,术语“氨基酸模拟物”意指具有一种不同于氨基酸的通用化学结构的结构,但是以一种类似于天然发生的氨基酸的方式中发挥作用的化合物。
在此可以将氨基酸表示为通常已知的三字母符号或通过IUPAC-生物化学命名委员会(IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)推荐的单字母符号。同样地,可以将核苷酸表示为它们普遍接受的单字母码。
如在此使用的,术语“葡糖酸内酯”意指具有分子式C6H10O6、摩尔质量为约178.14gmol-1、并且具有如下结构的分子
并且包括其异构体、盐、以及溶剂化物。
如在此使用的,术语“谷胱甘肽”意指具有分子式C10H17N3O6S、摩尔质量为约307.32g mol-1、并且具有如下结构的分子
并且包括其异构体、盐、以及溶剂化物。
如在此使用的,术语“卵磷脂”意指一种磷脂混合物。如在此使用的不具有修饰形容词的术语卵磷脂可以是指酰化和非酰化形式的卵磷脂中任一者或两者。
如在此使用的,术语“聚山梨醇酯”意指山梨醇和它的酐的油酸酯,典型地与环氧乙烷共聚。
如在此使用的,术语“白蛋白”与“血清白蛋白”是可互换使用的并且不意在限定该白蛋白的来源。如在此使用的术语“白蛋白”包括白蛋白的任何衍生物或白蛋白的经修饰的型式。因此,如在此使用的术语“白蛋白”可以指从一个天然来源例如血液或浆液纯化的白蛋白、或它可以是指化学合成或重组产生的白蛋白或白蛋白变体或天然白蛋白的衍生物。
如在此使用的,“稳定”是本领域中已知的一个术语,并且在一个方面中,稳定意指微生物保持活力形式直到它如在此披露的进行施用(例如,施用至一种植物和/或植物部分,以增强植物和/或植物部分的生长、增强种子萌发、增强出苗、增强固氮、增强磷酸盐溶解,等)为止的能力。
如在此使用的,术语“一种或多种农业上有益的成分”意指能够在农业中导致或提供有益的和/或有用的效果的任何试剂或试剂组合。
如在此使用的,“一种或多种生物活性成分”意指除在此描述的细菌稳定化合物之外的生物活性成分(例如,植物信号分子、其他微生物等)。
如在此使用,可以与“一种或更多种植物生长-增强剂”可互换地使用的术语“一种或更多种信号分子”或“一种或更多种植物信号分子”宽泛地意指任何试剂,它们是在植物或微生物中天然存在的以及合成的(并且它们可以是非-天然存在的),直接地或间接地激活或灭活植物生物化学通路,与未处理的植物或获得自未处理的种子的植物相比,导致增加的或增强的植物生长。
如在此使用的,术语“有效量”、“有效浓度”、或“有效剂量”意指一种或多种微生物稳定化合物的足以抑制一种或多种化合物的抗微生物活性的量、浓度、或剂量。实际的有效剂量(以绝对值计)取决于以下因素,这些因素包括但不限于:待抑制的抗微生物化合物的量(抗微生物化合物的浓度、体积、等),可以提高或降低一种或多种微生物稳定化合物的微生物抑制效果/活性的其他活性或惰性成分之间的协同或拮抗相互作用,以及该一种或多种微生物稳定化合物在组合物中和/或作为植物或植物部分处理剂的稳定性。可以例如通过常规的剂量反应实验确定一种或多种微生物稳定化合物的“有效量”、“有效浓度”或“有效剂量”。
如在此使用的,术语“载体”意指一种“农艺学上可接受的载体”。“农艺学上可接受的载体”意指可以用于将活性物(例如,在此描述的微生物稳定化合物、一种或多种农业上有益的成分、一种或多种生物活性成分等)递送至植物或植物部分(例如,种子)的任何材料,并且优选地可以施用该载体(至植物、植物部分(例如,种子)、或土壤)而不具有对植物生长、土壤结构、土壤排水等的有害影响。
如在此使用的,术语“一种或多种营养素”意指植物生长、植物健康、和/或植物发育所需的任何营养素(例如,维生素、大量元素、微量营养素、痕量矿物质、有机酸、等)。
如在此所使用的,术语“一种或多种生物刺激剂”意指能够增强植物和土壤内的代谢或生理过程的任何试剂或试剂组合。
如在此所使用的,术语“一种或多种除草剂”意指能够杀死杂草和/或抑制杂草生长(这种抑制在某些条件下是可逆的)的任何试剂或试剂组合。
如在此所使用的,术语“一种或多种杀真菌剂”意指能够杀死真菌和/或抑制真菌生长的任何试剂或试剂组合。
如在此所使用的,术语“一种或多种杀昆虫剂”意指能够杀死一种或多种昆虫和/或抑制一种或多种昆虫生长的任何试剂或试剂组合。
如在此所使用的,术语“一种或多种杀线虫剂”意指能够杀死一种或多种线虫和/或抑制一种或多种线虫生长的任何试剂或试剂组合。
如在此所使用的,术语“一种或多种杀螨剂”意指能够杀死一种或多种螨和/或抑制一种或多种螨生长的任何试剂或试剂组合。
如在此所使用的,术语“增强的植物生长”意指增加的植物产量(例如,增加的生物质、增加的果实数、增加的结铃数、或其组合,如通过每英亩的蒲式耳所测量的)、增加的根数、增加的根质量、增加的根体积、增加的叶面积、增加的植物直立、增加的植物活力、更快的出苗(即,增强的出苗)、更快的萌发、(即,增强的萌发)、或其组合。
如在此使用,术语“一种或多种植物”和“一种或多种植物部分”意指所有植物和植物群体,例如希望的和不希望的野生植物或作物植物(包括天然存在的作物植物)。作物植物可以是可通过常规的植物育种与优化方法或通过生物技术与基因工程方法或通过这些方法的组合获得的植物,包括转基因植物并且包括可受或可不受植物育种人权利保护的植物栽培品种。应该将植物部分理解为意指地面上下的所有植物部分和器官,如芽、叶、花以及根,可以提及的实例是叶、针叶、秆、茎、花、子实体、果实、种子、根、块茎以及根茎。植物部分还包括收获的材料以及营养繁殖和有性繁殖材料(例如,插条、块茎、根茎、侧枝以及种子等)。
如在此所使用的,术语“接种物”意指当温度、湿度等条件利于微生物生长时能够在土壤上或土壤内繁殖的任何形式的微生物细胞或孢子。
如在此所使用的,术语“一种或多种固氮生物”意指能够将大气氮(N2)转化为氨(NH3)的任何生物。
如在此使用,术语“溶磷有机体”意指能够将不溶的磷酸盐转化为可溶的磷酸盐形式的任何有机体。
如在此使用的,术语“孢子”具有本领域的普通技术人员熟知和理解的其一般含义。如在此所使用的,术语孢子是指处于其休眠、受保护状态的微生物。
如在此所使用的,术语具体元素的“来源”意指具有该元素的化合物,至少在考虑到的土壤条件中,该化合物不能使得该元素完全被植物摄取。
组合物
披露的组合物包括如在此描述的一种或多种微生物稳定化合物。在某些实施例中,该组合物可以处于液体、凝胶、浆液、固体或粉末(可湿性粉剂或干粉)的形式。
在一个具体实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物是能够抑制一种或多种抗微生物化合物的活性的化合物。
如在此使用的,术语“一种或多种抗微生物化合物”包括一种杀生物剂(即,抑细菌剂或杀细菌剂)。杀生物剂的非限制性实例包括以下各项:
杀细菌剂:
如在此使用的,杀细菌剂是这样一种试剂,该试剂杀死细菌。杀细菌剂可以是消毒剂、防腐剂或抗生素。
杀细菌消毒剂的一种非限制性实例可以是:
活性氯(即、次氯酸盐、氯胺、二氯异氰尿酸盐和三氯异氰尿酸盐、湿氯、二氧化氯、等),
活性氧(过氧化物,例如过乙酸、过硫酸钾、过硼酸钠、过碳酸钠和脲过氧化氢合物),
碘(聚维酮碘(iodpovidone)(聚维酮-碘、Betadine)、鲁戈(Lugol’s)溶液、碘酊、碘化非离子表面活性剂),
浓缩的醇(主要是乙醇、1-丙醇(也称为正丙醇)和2-丙醇(称为异丙醇)、及其混合物;进一步地,2-苯氧乙醇和1-和2-苯氧丙醇),
酚类物质(如苯酚(也称为“石炭酸”)、甲酚(与液体钾皂组合称为“Lysole”)、卤代(氯化、溴化)苯酚,例如六氯酚、三氯生、三氯酚、三溴苯酚、五氯酚、Dibromol及其盐),
阳离子表面活性剂,例如一些季铵阳离子(如苯扎氯铵、十六烷基三甲基溴化铵或氯化物、二癸基二甲基氯化铵、十六烷基氯化吡啶、苄索氯铵)以及其他非季化合物,如氯己定、糖鱼精蛋白(glucoprotamine)、奥替尼啶二盐酸盐(octenidine dihydrochloride)、等),
强氧化剂,如臭氧和高锰酸盐溶液;
重金属及其盐,如胶体银、硝酸银、氯化汞、苯汞盐、硫酸铜、氧化铜-氯化物、等。重金属及其盐是最具毒性和环境-危险性的杀细菌剂并且因此,它们的使用被强烈压制或消除;进一步地,还有
适当浓缩的强酸(磷酸、硝酸、硫酸、酰氨基硫酸、甲苯磺酸氨基酸)以及
碱(钠、钾、钙的氢氧化物),如pH<1或>13,特别是在升高的温度下(超过60℃)下,杀死细菌。
杀菌防腐剂的一种非限制性实例可以是:
适当地稀释的氯制剂(例如,达康氏(Daquin’s solution)、0.5%次氯酸钠或次氯酸钾溶液、pH-调节至pH 7-8、或0.5%-1%苯磺酰氯胺钠钠溶液(氯胺B)),
一些碘制剂,诸如在过去还称为鲁戈溶液的不同盖仑制剂(软膏,溶液、伤口膏药)中的碘聚维酮(iodopovidone),
过氧化物如脲过氧化氢合物溶液和pH-缓冲的0.1%-0.25%过乙酸溶液,
具有或不具有防腐添加剂的醇,主要用于皮肤消毒,
弱有机酸,如山梨酸、苯甲酸、乳酸和水杨酸,
一些酚类化合物、如六氯酚、三氯生及Dibromol,以及
阳离子活性化合物,如0.05%-0.5%苄烷铵、0.5%-4%氯己定、0.1%-2%奥替尼啶溶液(octenidine)溶液。
杀细菌抗生素的非限制性实例可以是青霉素、头孢菌素、以及氨基糖苷抗生素。
其他杀细菌抗生素包括氟喹诺酮、硝基呋喃、万古霉素、单环β-内酰胺、复方新诺明、和甲硝唑。
优选的杀细菌剂是:
含卤素的化合物,例如:
Bronopol—活性2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇
Dowicil 75—活性1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物
DBNPA—活性二溴次氨基丙酰胺
有机硫—包括异噻唑酮,如:
Proxel(Nipacide)—活性1,2-苯并异噻唑啉-3-酮
Kathon——活性5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮
含氮化合物,例如:
Germall II(重氮烷基脲)
三硝基(三(羟甲基)硝基甲烷)
酚类,如:
Dowicide(邻苯基酚钠)
Preventol(苄基-半缩甲醛)
无机物如:
砷酸铜
氧化亚铜
有机金属如:
砷、铜、汞的化合物
季铵化合物。
抑细菌剂:
如在此使用的,抑细菌剂是一种预防细菌生长但不一定杀死它们或它们的孢子的试剂,通常为化学试剂。在移除抑细菌剂后,该细菌通常再次开始生长。
抑细菌剂的非限制性实例包括叠氮化钠和硫柳汞。
微生物稳定化合物:
在此描述的微生物稳定化合物可以包括能够增加一种或多种微生物的存活性的任何化合物。在一个实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种在此描述的杀生物剂的活性。在另一个实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种在此披露的杀细菌剂的活性。在又另一个实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种在此披露的抑细菌剂的活性。在仍另一个实施例中,该一种或多种微生物稳定化合物抑制以下项的活性:甲醛、苄基-半缩甲醛(苯基甲氧基甲醇)、2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇、1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物、二溴次氨基丙酰胺、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、重氮烷基脲、三(羟甲基)硝基甲烷、邻苯基酚钠、砷酸铜、氧化亚铜、砷、铜、汞的化合物、季铵化合物、叠氮化钠、硫柳汞、或其组合。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是酵母提取物。酵母提取物被广泛地使用,例如,用于食品行业中的调味剂,用于微生物发酵培养基,并且用作保健食品。所述的酵母提取物的生产被描述于文献中,参见例如,凯利(Kelly,M.)(1982)酵母提取物(YeastExtract)(在:工业酶学(Industrial Enzymology)中,戈弗雷(Godfrey,T.)编著)或朝(Chae,H.J.)等人,(2001),生物资源技术(Bioresource Technology)76,253-258。它典型地是通过以下步骤制造的:通过酸水解或机械或化学破坏细胞分解酵母,然后通过用内源性酶自溶降来解酵母的大分子结构,尤其是蛋白,为可溶性材料的最大量。可能地,添加外源酶,包括蛋白酶如木瓜蛋白酶来增进酵母自身酶的作用。在酶水解之后,将酵母提取物自细胞碎片分离并且可能进行巴氏消毒并且浓缩。
在另一个实施例中,该微生物稳定化合物是酪蛋白酸钙。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种奶制品底物。在一个具体实施例中,该微生物稳定化合物是奶。实际上,根据在此披露的这些实施例,考虑了处于任何形式的奶将是可接受的。在一些实施例中,发现了获得自任何适当的奶的奶油的用途。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是脲,连同其异构体、盐、溶剂化物、以及衍生物。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种补血剂。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是牛肉提取物。牛肉提取物是本领域熟知的。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是氨,连同其异构体、盐、溶剂化物、以及衍生物。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种氨基酸、一种氨基酸类似物、一种非天然的氨基酸、一种氨基酸模拟物、或其组合。如在此所定义,可以将氨基酸表示为通常已知的三字母符号或通过IUPAC-生物化学命名委员会推荐的单字母符号。同样地,可以将核苷酸表示为它们普遍接受的单字母码。在一个具体实施例中,该氨基酸是色氨酸。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种或多种铵盐。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种或多种铁盐、亚铁盐、或其组合。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是葡糖酸内酯,连同其异构体、盐、以及溶剂化物。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是谷胱甘肽,连同其异构体、盐、以及溶剂化物。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是卵磷脂。在一个具体实施例中,卵磷脂包括通常源于蛋、鱼、啤酒酵母、以及植物来源,尤其是大豆的磷脂混合物;然而,在本披露中可以使用任何磷脂混合物,无论其来源。这样一种磷脂混合物的四个主要组分是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酸。在一些文献中已经通过以下名称提及卵磷脂:PC-55、乙醇胺、和丝氨酸。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种或多种聚山梨醇酯。聚山梨醇酯的非限制性实例包括聚山梨醇酯20(聚(环氧乙烷)(20)脱水山梨醇单月桂酸酯,吐温20)或聚山梨醇酯80(聚(环氧乙烷)(80)脱水山梨醇单月桂酸酯,吐温80)。
在再另一个实施例中,该微生物稳定化合物是白蛋白。在一些实施例中,该白蛋白是一种哺乳动物白蛋白、或其变体或衍生物。可以使用的哺乳动物白蛋白的非限制性实例包括人、牛、绵羊、山羊、兔、猫、犬、猪、灵长类动物、或啮齿动物白蛋白。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物是一种蛋白胨。非限制性实例包括可以使用的胰蛋白酶或木瓜蛋白酶蛋白胨,包括动物或植物来源的胰蛋白酶蛋白胨。在一个具体实施例中,消化的蛋白胨来自大豆粉。在另一个实施例中,蛋白胨是大豆蛋白胨(例如,来自大豆粉的蛋白胨)。在仍另一个实施例中,该大豆蛋白胨是大豆胰蛋白酶肉汤。
在仍另一个实施例中,该微生物稳定化合物选自下组,该组由以下各项组成:酵母提取物、酪蛋白酸钙、奶、脲、补血剂、牛肉提取物、氨、氨基酸、铵盐、铁盐、亚铁盐、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、卵磷脂、聚山梨醇酯、白蛋白、蛋白胨、及其组合。
载体:
在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种载体来递送一种或多种在此描述的活性物(例如,微生物稳定化合物,或一种农业上有益的成分,例如,有益的微生物,等)。在此描述的载体的非限制性实例包括液体,凝胶,浆液或固体(包括可湿性粉剂或干粉)。载体材料的选择将取决于预期的应用。该载体可以是,例如,一种土壤相容性载体、一种种子相容性载体和/或一种叶面相容性载体。在一个具体实施例中,该载体是一种种子相容性载体。
在一个实施例中,该载体是液体载体。作为用于在此披露的组合物的载体有用的液体的非限制性实例包括水、水溶液、或非水溶液。在一个具体实施例中,该载体是水。
如果使用液体载体,则该液体载体可以进一步包括用以培养在描述的组合物中使用的一种或多种微生物菌株的生长培养基。微生物菌株的适合的生长培养基的非限制性实例包括YEM培养基、甘露醇酵母提取物、甘油酵母提取物、察氏培养基、马铃薯葡萄糖肉汤或本领域的普通技术人员已知可以与被包括于在此描述的组合物中的微生物菌株兼容的和/或为其提供生长营养素的任何培养基。
农业上有益的成分
在此披露的组合物可以包括一种或多种农业上有益的成分。农业上有益的成分的非限制性实例包括一种或多种生物活性成分、营养素、生物刺激剂、防腐剂、聚合物、润湿剂、表面活性剂、除草剂、杀真菌剂、杀昆虫剂或其组合。
一种或更多种生物活性成分:
在此描述的组合物可以任选地包括一种或多种如在此描述的生物活性成分。生物活性成分的非限制性实例包括植物信号分子(例如,脂壳寡糖(LCO)、壳寡糖(CO)、类黄酮、几丁质化合物、茉莉酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、亚麻酸或其衍生物、卡里金等)以及有益的微生物(例如,根瘤菌属、慢生根瘤菌属、中华根瘤菌属、固氮根瘤菌属、球囊霉属、巨孢囊霉属、膜盘菌属(Hymenoscyphous spp.)、树粉孢属、蜡蘑属、豆马勃属、须腹菌属(Rhizopogon spp.)、硬皮马勃属、丝核菌属、不动杆菌属、节细菌属、节丛孢菌属、曲霉属、固氮螺菌属、芽孢杆菌属、伯克氏菌属、假丝酵母属、单胞菌属、肠杆菌属、正青霉属、微小杆菌属、克雷伯氏杆菌属、克吕沃氏菌属、微杆菌属、毛霉属、拟青霉属、类芽孢杆菌属、青霉属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、链孢子囊菌属、Swaminathania属、硫杆菌属、有孢圆酵母属(Torulospora spp.)、弧菌属、黄杆菌属、黄单胞菌属等)。
一种或多种植物信号分子
在一个实施例中,在此描述的组合物可以任选地包括一种或多种植物信号分子。在一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种LCO。在另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种CO。在仍另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种几丁质化合物。在另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种类黄酮。在又另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种非类黄酮结瘤基因诱导物(例如,茉莉酸、亚油酸、亚麻酸及其衍生物)。在再又另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种卡里金或其衍生物。在仍另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种LCO、一种或多种CO、一种或多种几丁质化合物、一种或多种类黄酮、一种或多种非类黄酮结瘤基因诱导物及其衍生物、一种或多种卡里金及其衍生物、或其任何信号分子组合。
LCO
脂-壳寡糖化合物(LCO)(在本领域中还称为共生性结瘤信号或结瘤因子)由具有缩合在非-还原端的N-连接的脂酰基链的β-l,4-连接的N-乙酰基-D-葡糖胺(“GIcNAc”)残基的寡糖骨架组成。LCO的区别在于骨架中GIcNAc残基的数目、脂酰基链的长度和饱和度以及还原和非-还原糖残基的取代。LCO旨在包括所有LCO及其异构体、盐和溶剂化物。LCO的一个实例在下文以化学式I呈现:
其中:
G是可以被例如氮上的乙酰基、硫酸基团、乙酰基和/或氧上的醚基取代的己糖胺,
可以相同或不同的R1、R2、R3、R5、R6以及R7表示H、CH3CO--、CxHyCO--,其中x是一个在0与17之间的整数并且y是一个在1与35之间的整数,或任何其他酰基(例如像氨甲酰基),
R4表示包含至少12个碳原子的单-、二-、三-及四不饱和的脂肪链,并且n是一个在1与4之间的整数。
LCO可以获得(分离和/或纯化)自细菌,例如根瘤菌,例如根瘤菌属、慢生根瘤菌属、中华根瘤菌属以及固氮根瘤菌属。每个这样的细菌种类的LCO结构都是具有特征的,并且每种菌株都可以产生多种具有不同结构的LCO。例如,来自苜蓿中华根瘤菌的特定LCO还已经在美国专利5,549,718中描述为具有化学式II:
其中R表示H或CH3CO--并且n等于2或3。
甚至更特定的LCO包括NodRM、NodRM-1、NodRM-3。当被乙酰化时(R=CH3CO--),它们分别变为AcNodRM-1和AcNodRM-3(美国专利5,545,718)。
来自慢生型大豆根瘤菌的LCO描述于美国专利5,175,149和5,321,011中。宽泛地,它们是包括甲基呋喃的戊糖植物激素。描述了许多这些慢生型大豆根瘤菌衍生的LCO:BjNod-V(C18:1);BjNod-V(AC,C18:1),BjNod-V(C16:1);以及BjNod-V(AC,C16:0),其中“V”表示存在五个N-乙酰葡糖胺;“Ac”表示乙酰化;“C”后的数字表示脂肪酸侧链中的碳数;并且“:”后的数字表示双键数。
用于本披露的组合物中的LCO可以获得(即,分离和/或纯化)自产生LCO的细菌菌株,例如固氮根瘤菌属、慢生根瘤菌属(包括慢生型大豆根瘤菌)、中慢生根瘤菌属、根瘤菌属(包括豌豆根瘤菌)、中华根瘤菌属(包括苜蓿中华根瘤菌)的菌株,以及被基因工程而产生LCO的细菌菌株。
本披露还涵盖使用获得(即,分离和/或纯化)自菌根真菌(如球囊菌门(Glomerocycota)群组的真菌,例如根内球囊霉(Glomus intraradicus))的LCO的组合物。获得自这些真菌的代表性LCO的结构描述于WO 2010/049751中(其中描述的LCO也称为“Myc因子”)。
本披露的组合物进一步涵盖的是使用合成的LCO化合物(例如,描述于WO 2005/063784中的那些)以及通过基因工程产生的重组LCO。基本的天然存在的LCO结构可以包含发现于天然存在的LCO中的修饰或取代,例如描述于斯帕英克(Spaink),植物科学评论(Crit.Rev.Plant Sci.)54:257-288(2000)和德哈斯(D'Haeze)等人,糖生物学(Glycobiology)12:79R-105R(2002)中的那些。用于构建LCO的前体寡糖分子(在下文描述的CO在本披露中也可用作植物信号分子)还可以由基因工程化的生物来合成,例如如在萨曼(Samain)等人,碳水化合物研究(Carb.Res.)302:35-42(1997);萨曼等人,生物技术杂志(J.Biotechnol.)72:33-47(1999)中。
LCO可以按不同纯度形式加以利用并且可以单独使用或以产LCO的细菌或真菌的培养物的形式使用。用于提供基本上纯的LCO的方法包括从LCO和微生物的混合物中简单地除去微生物细胞,或通过LCO溶剂相分离、随后通过HPLC色谱法继续分离和纯化LCO分子,如例如美国专利5,549,718中所述。可以通过重复的HPLC来增强纯化,并且纯化的LCO分子可以冷冻干燥,以便长期存储-。
CO
壳寡糖(CO)在本领域中作为鉴定为几丁质寡聚体的β-1-4连接的N-乙酰葡糖胺结构而已知,还称为N-乙酰壳寡糖。CO具有独特且不同的侧链修饰,这些修饰使得它们不同于几丁质分子((C8H13NO5)n,CAS编号1398-61-4)和壳聚糖分子[(C5H11NO4)n,CAS编号9012-76-4]。描述了CO的结构与产生的代表性文献如下:范德霍尔斯特(Van der Holst)等人,结构生物学当前观点(Current Opinion in Structural Biology),11:608-616(2001);罗宾娜(Robina)等人,四面体(Tetrahedron)58:521-530(2002);哈奈尔(Hanel)等人,植物学(Planta)232:787-806(2010);罗赫(Rouge)等人第27章,实验医学与生物学进展(Advancesin Experimental Medicine and Biology)中的“复合碳水化合物的分子免疫学(TheMolecular Immunology of Complex Carbohydrates)”,施普林格科学(SpringerScience);温(Wan)等人,植物细胞(Plant Cell)21:1053-69(2009);PCT/F100/00803(9/21/2000);以及德蒙特科雷特(Demont-Caulet)等人,植物生理学(Plant Physiol.)120(1):83-92(1999)。这些CO可以是合成的或重组的。用于制备重组CO的方法在本领域是已知的。参见例如,萨曼(Samain)等人(见上文);科塔兹(Cottaz)等人,工程方法(Meth.Eng.)7(4):311-7(2005)以及萨曼等人,生物技术杂志(J.Biotechnol.)72:33-47(1999)。CO旨在包括其异构体、盐和溶剂化物。
几丁质化合物
作为真菌的细胞壁和虫与甲壳动物的外骨骼的主要组分的几丁质和壳聚糖也由GIcNAc残基构成。几丁质化合物包括几丁质(IUPAC:N-[5-[[3-乙酰氨基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2基]甲氧基甲基]-2-[[5-乙酰氨基-4,6-二羟基-2-(羟基甲基)噁烷-3-基]甲氧基甲基]-4-羟基-6-(羟基甲基)噁烷-3-基]乙酰胺)、壳聚糖(IUPAC:5-氨基-6-[5-氨基-6-[5-氨基-4,6-二羟基-2(羟基甲基)噁烷-3-基]氧基-4-羟基-2-(羟基甲基)噁烷-3-基]氧基-2(羟基甲基)噁烷-3,4-二醇)及其异构体、盐和溶剂化物。
这些化合物可以商业地获得自例如西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)或制备自昆虫、甲壳动物壳或真菌细胞壁。用于制备几丁质和壳聚糖的方法在本领域是已知的并且已经描述于例如美国专利4,536,207(制备自甲壳动物壳);伯查纳瓦里奇(Pochanavanich)等人,应用微生物学快报(Lett.Appl.Microbiol.)35:17-21(2002)(制备自真菌细胞壁);以及美国专利5,965,545(制备自蟹壳和商业壳聚糖的水解)中。可以获得范围从小于35%至大于90%脱乙酰化的脱乙酰化几丁质和壳聚糖,并且包括广谱的分子量,例如小于15kD的低分子量壳聚糖寡聚体和0.5至2kD的几丁质寡聚体;分子量约15kD的“实用等级”壳聚糖;以及高达70kD的高分子量壳聚糖。用于种子处理的配制的几丁质和壳聚糖组合物也是可商购的。商品包括例如(植物防御支持公司(Plant Defense Boosters,Inc.))和BEYONDTM(Agrihouse公司)。
类黄酮
类黄酮是具有两个由三-碳桥连接的芳环的一般结构的酚类化合物。类黄酮是由植物产生并且具有许多功能,例如作为有益的信号传导分子以及作为保护剂以免受虫、动物、真菌以及细菌。类黄酮的分类包括在本领域中已知的那些。参见,杰恩(Jain)等人,植物生物化学与生物技术杂志(J.Plant Biochem.&Biotechnol.)11:1-10(2002);绍尔(Shaw)等人,环境微生物学(Environmental Microbiol.)11:1867-80(2006)。类黄酮化合物可商购自例如诺维信公司(Novozymes BioAg),萨斯卡通(Saskatoon),加拿大;纳特兰德国际公司(Natland International Corp.),三角科学园(Research Triangle Park),北卡罗来纳州;MP生物医药公司(MP Biomedicals),欧文,加州;LC实验室(LC Laboratories),沃本,马萨诸塞州。类黄酮化合物可以分离自植物或种子,例如如美国专利5,702,752;5,990,291;以及6,146,668中所述。类黄酮化合物还可以由基因工程化的生物(例如酵母)产生,如,描述于罗尔斯顿(Ralston)等人,植物生理学(Plant Physiology)137:1375-88(2005)中。类黄酮化合物旨在包括所有类黄酮化合物及其异构体、盐和溶剂化物。
该一种或多种类黄酮可以是天然的类黄酮(即,不是合成产生的)、合成的类黄酮(例如,化学合成的类黄酮)或其组合。在一个具体实施例中,在此描述的组合物包括黄烷醇、黄酮、花色素、异黄酮类化合物、新类黄酮及其组合,包括其所有异构体、溶剂化物、水合物、多态的、晶态形式、非晶态形式、及盐变体。
在一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种黄烷醇。在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的黄烷醇,该组由以下各项组成:黄烷-3-醇(例如,儿茶素(C)、没食子儿茶素(GC)、儿茶素3-没食子酸酯(Cg)、没食子儿茶素3-没食子酸酯(GCg)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)表儿茶素3-没食子酸酯(ECg)、表没食子儿茶素3-没食子酸酯(EGCg),等)、黄烷-4-醇、黄烷-3,4-二醇(例如,无色花色素),原花色素(例如,包括黄烷醇的二聚体、三聚体、低聚物、或多聚物)、及其组合。在再又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的黄烷醇,该组由以下各项组成:儿茶素(C)、没食子儿茶素(GC)、儿茶素3-没食子酸酯(Cg)、没食子儿茶素3-没食子酸酯(GCg)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)表儿茶素3-没食子酸酯(ECg)、表没食子儿茶素3-没食子酸酯(EGCg)、黄烷-4-醇、无色花色素、及其二聚体、三聚体、低聚物或多聚物。
在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种黄酮。在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的黄酮,该组由以下各项组成:黄酮(例如,木犀草素、芹菜素、柑桔黄酮、等)、黄酮醇(例如、槲皮素、栎素、芸香苷、堪非醇、山柰苷、紫云英苷、槐属黄酮苷、杨梅树皮素、漆黄素、异鼠李素、霍香黄酮醇、甲基鼠李素、等)、黄烷酮(例如橙皮素、橙皮苷、柚皮素、圣草酚、高圣草酚、等)、以及二氢黄酮醇(例如,二氢槲皮素、二氢堪非醇、等)。在再又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的黄酮,该组由以下各项组成:木犀草素、芹菜素、柑桔黄酮、槲皮素、栎素、芸香苷、堪非醇、山柰苷、紫云英苷、槐属黄酮苷、杨梅树皮素、漆黄素、异鼠李素、霍香黄酮醇、甲基鼠李素、橙皮素、橙皮苷、柚皮素、圣草酚、高圣草酚、二氢槲皮素、二氢堪非醇、及其组合。
在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种花色素。在又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的花色素,该组由以下各项组成:矢车菊素、飞燕草素、锦葵色素、天竺葵色素、芍药素、矮牵牛素、及其组合。
在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种异黄酮类化合物。在再又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的异黄酮类化合物,该组由以下各项组成:植物雌激素、异黄酮(例如,木黄酮、大豆黄酮、黄豆黄素等)、以及异黄烷(例如,雌马酚、lonchocarpane、laxiflorane等)、及其组合。在又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的异黄酮类化合物,该组由以下各项组成:木黄酮、大豆黄酮、黄豆黄素、雌马酚、lonchocarpane、laxiflorane、及其组合。
在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种新类黄酮。在又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的新类黄酮,该组由以下各项组成:新黄酮(例如,海棠果素)、新黄酮烯(neoflavene)(例如,黄檀色烯)、coutareagenin、黄檀素、nivetin、及其组合。在再又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的新类黄酮,该组由以下各项组成:海棠果素、黄檀色烯、coutareagenin、黄檀素、nivetin、及其组合。
在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的类黄酮,该组由以下各项组成:儿茶素(C)、没食子儿茶素(GC)、儿茶素3-没食子酸酯(Cg)、没食子儿茶素3-没食子酸酯(GCg)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)表儿茶素3-没食子酸酯(ECg)、表没食子儿茶素3-没食子酸酯(EGCg)、黄烷-4-醇、无色花色素、原花色素、木犀草素、芹菜素、柑桔黄酮、槲皮素、栎素、芸香苷、堪非醇、山柰苷、紫云英苷、槐属黄酮苷、杨梅树皮素、漆黄素、异鼠李素、霍香黄酮醇、甲基鼠李素、橙皮素、橙皮苷、柚皮素、圣草酚、高圣草酚、二氢槲皮素、二氢堪非醇、矢车菊素、飞燕草素、锦葵色素、天竺葵色素、芍药素、矮牵牛素、木黄酮、大豆黄酮、黄豆黄素、雌马酚、lonchocarpane、laxiflorane、海棠果素、黄檀色烯、coutareagenin、黄檀素、nivetin、及其组合。在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的类黄酮,该组由以下各项组成:橙皮素、橙皮苷、柚皮素、木黄酮、大豆黄酮、及其组合。在一个具体实施例中,在此所描述的组合物可以包括类黄酮橙皮素。在另一个具体实施例中,在此所描述的组合物可以包括类黄酮橙皮苷。在又另一个具体实施例中,在此所描述的组合物可以包括类黄酮柚皮素。在仍又另一个具体实施例中,在此所描述的组合物可以包括类黄酮木黄酮。在仍另一个具体实施例中,在此所描述的组合物可以包括类黄酮大豆黄酮。
一种或更多种非类黄酮结瘤基因诱导物:
茉莉酸(JA,[1R-[1α,2β(Z)]]-3-氧代-2-(戊烯基)环戊烷乙酸)及其衍生物、亚油酸((Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸)及其衍生物和亚麻酸((Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸)及其衍生物也可以用于在此描述的组合物中。非类黄酮结瘤基因诱导物旨在不仅包括在此描述的非类黄酮结瘤基因诱导物,还包括其异构体、盐和溶剂化物。
统称为茉莉酸酯的茉莉酸及其甲酯(茉莉酸甲酯(MeJA))是天然存在于植物中的类十八烷基化合物。茉莉酸由小麦幼苗的根产生,并且由真菌微生物(如可可球二孢和藤仓赤霉菌(Gibbrella fujikuroi)、酵母(酿酒酵母)以及大肠杆菌的致病和非致病菌株产生。亚油酸和亚麻酸是在茉莉酸的生物合成过程中产生。据报道,茉莉酸酯、亚油酸和亚油酸(及其衍生物)是根际细菌表达结瘤基因或产生LCO的诱导物。参见例如,马布德(Mabood),法兹利(Fazli),茉莉酸酯诱导结瘤基因在慢生型大豆根瘤菌中的表达(Jasmonatesinduce the expression of nod genes in Bradyrhizobium japonicum),2001年5月17日;和马布德(Mabood),法兹利(Fazli),“亚油酸和亚麻酸诱导结瘤基因在慢生型大豆根瘤菌中的表达(Linoleic and linolenic acid induce the expression of nod genes inBradyrhizobium japonicum)”,USDA 3,2001年5月17日。
可以用于本披露的组合物中的亚油酸、亚麻酸和茉莉酸的有用衍生物包括酯、酰胺、糖苷以及盐。代表性酯是以下化合物,其中亚油酸、亚麻酸或茉莉酸的羧基已经被--COR基团替代,其中R是--OR1基团,其中R1是:烷基,如C1-C8直链或支链烷基,例如甲基、乙基或丙基;烯基,如C2-C8直链或支链烯基;炔基,如C2-C8直链或支链炔基;具有例如6至10个碳原子的芳基;或具有例如4至9个碳原子的杂芳基,其中杂芳基中的杂原子可以是例如N、O、P或S。代表性酰胺是以下化合物,其中亚油酸、亚麻酸或茉莉酸的羧基已经被--COR基团替代,其中R是NR2R3基团,其中R2和R3独立地是:氢、烷基,如C1-C8直链或支链烷基,例如甲基、乙基或丙基;烯基,如C2-C8直链或支链烯基;炔基,如C2-C8直链或支链炔基;具有例如6至10个碳原子的芳基;或具有例如4至9个碳原子的杂芳基,其中杂芳基中的杂原子可以是例如N、O、P或S。可以通过已知的方法制备酯,例如酸-催化的亲核加成,其中使羧酸在催化量的矿物酸的存在下与醇反应。也可以通过已知的方法制备酰胺,例如通过使羧酸在偶联剂(例如二环己基碳二亚胺(DCC))的存在下与适当的胺在中性条件下反应。亚油酸、亚麻酸和茉莉酸的适合的盐包括例如碱加成盐。可以用作制备这些化合物的代谢上可接受的碱盐的试剂的碱包括来源于阳离子(如碱金属阳离子(例如,钾和钠)和碱土金属阳离子(例如,钙和镁))的那些。这些盐可以通过将亚油酸、亚麻酸或茉莉酸的溶液与碱溶液混合在一起而容易地制备。盐可以通过过滤从溶液中沉淀并收集,或可以通过其他手段(例如通过蒸发溶剂)回收。
一种或更多种卡里金
卡里金是插烯4H-吡喃酮,例如2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮,包括其衍生物和类似物。卡里金旨在包括其异构体、盐和溶剂化物。这些化合物的实例由以下结构表示:
其中;Z是O、S或NR5;R1、R2、R3以及R4各自独立地是H、烷基、烯基、炔基、苯基、苄基、羟基、羟烷基、烷氧基、苯氧基、苄氧基、CN、COR6、COOR=、卤素、NR6R7或NO2;并且R5、R6和R7各自独立地是H、烷基或烯基,或其生物学上可接受的盐。这些化合物的生物学上可接受的盐的实例可以包括与生物学上可接受的酸形成的酸加成盐,其实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或磷酸氢盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐;甲磺酸盐、苯磺酸盐以及对甲苯磺酸。另外的生物学上可接受的金属盐可以包括与碱形成的碱金属盐,其实例包括钠盐和钾盐。由该结构涵盖且可以适于在本披露中使用的化合物的实例包括以下各项:3-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1=CH3,R2、R3、R4=H)、2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R2、R3、R4=H)、7-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R2、R4=H,R3=CH3)、5-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R2、R3=H,R4=CH3)、3,7-二甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R3=CH3,R2、R4=H)、3,5-二甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R4=CH3,R2、R3=H)、3,5,7-三甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R3、R4=CH3,R2=H)、5-甲氧基甲基-3-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1=CH3,R2、R3=H,R4=CH2OCH3)、4-溴-3,7-二甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1、R3=CH3,R2=Br,R4=H)、3-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2(3H)-酮(其中Z=NH,R1=CH3,R2、R3、R4=H)、3,6-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2(6H)-酮(其中Z=N--CH3,R1=CH3,R2、R3、R4=H)。参见美国专利7,576,213。这些分子又称卡里金。参见,哈尔福德(Halford),化学与工程新闻(Chem.Eng.News)(2010年4月12日),第37-38页中的“烟雾信号(Smoke Signals)”(报道到森林火灾后,包含在烟雾中的卡里金或丁烯羟酸内酯充当生长刺激剂并刺激种子萌发,并且可以使已经被存储的种子(例如玉米、番茄、莴苣以及洋葱)健壮)。这些分子是美国专利7,576,213的主题。
一种或更多种有益微生物
在一个实施例中,在此描述的组合物可以任选地包括一种或多种有益微生物。该一种或多种有益微生物可以处于孢子形式、营养体形式或其组合。该一种或多种有益的微生物可以包括任何数目的具有一种或多种有益特性(例如,产生一种或多种在此描述的植物信号分子、增强营养素和水的吸收、促进和/或增强固氮作用、增强生长、增强种子萌发、增强出苗、打破植物的休眠或静止、提供抗真菌活性等)的微生物。
在一个实施例中,该一种或多种有益微生物是固氮生物(即,为共生固氮细菌的细菌)。在仍另一个实施例中,该一种或多种有益微生物是选自下组的细菌固氮生物,该组由以下各项组成:根瘤菌属、慢生根瘤菌属、固氮根瘤菌属、中华根瘤菌属、中慢生根瘤菌属、固氮螺菌属、及其组合。在仍另一个实施例中,该一种或多种有益微生物是选自下组的细菌,该组由以下各项组成:解纤维素根瘤菌(Rhizobium cellulosilyticum)、Rhizobiumdaejeonense、埃特里根瘤菌(Rhizobium etli)、山羊豆根瘤菌(Rhizobium galegae)、高卢根瘤菌(Rhizobium gallicum)、Rhizobium giardinii、海南根瘤菌(Rhizobiumhainanense)、Rhizobium huautlense、木蓝属根瘤菌(Rhizobium indigoferae)、豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum)、松弛根瘤菌(Rhizobium loessense)、羽扇豆根瘤菌(Rhizobium lupini)、Rhizobium lusitanum、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、蒙古根瘤菌(Rhizobium mongolense)、汨罗根瘤菌(Rhizobium miluonense)、苏拉根瘤菌(Rhizobium sullae)、热带根瘤菌(Rhizobium tropici)、居水根瘤菌(Rhizobiumundicola)、杨陵根瘤菌(Rhizobium yanglingense)、贝特慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumbete)、Bradyrhizobium canariense、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobium elkanii)、西表岛慢生根瘤菌(Bradyrhizobium iriomotense)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)、Bradyrhizobium jicamae、辽宁慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumliaoningense)、豆薯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium pachyrhizi)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)、茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)、Azorhizobium doebereinerae、岩洞中华根瘤菌(Sinorhizobium abri)、附着中华根瘤菌(Sinorhizobium adhaerens)、美洲中华根瘤菌(Sinorhizobium americanum)、Sinorhizobium aboris费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)、Sinorhizobiumindiaense、柯斯第中华根瘤菌(Sinorhizobium kostiense)、鸡眼草中华根瘤菌(Sinorhizobium kummerowiae)、Sinorhizobium medicae、苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、墨西哥中华根瘤菌(Sinorhizobium mexicanus)、莫雷兰中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)、萨赫靳中华根瘤菌(Sinorhizobium saheli)、好客中华根瘤菌(Sinorhizobium terangae)、新疆中华根瘤菌(Sinorhizobium xinjiangense)、合欢中慢生根瘤菌(Mesorhizobium albiziae)、紫穗槐中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumamorphae)、含羞草中慢生根瘤菌(Mesorhizobium chacoense)、鹰嘴豆中慢生根瘤菌(Mesorhizobium ciceri)、中慢生型华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)、中慢生型百脉根根瘤菌(Mesorhizobium loti)、地中海中慢生根瘤菌(Mesorhizobium mediterraneum)、Mesorhizobium pluifarium、叉叶慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)、温度慢生根瘤菌(Mesorhizobium temperatum)、中慢生天山根瘤菌(Mesorhizobiumtianshanense)、亚马逊固氮螺菌(Azospirillum amazonense)、巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)、加拿大固氮螺菌(Azospirillum canadense)、Azospirillumdoebereinerae、台湾固氮螺菌(Azospirillum formosense)、Azospirillumhalopraeferans)、伊拉克固氮螺菌(Azospirillum irakense)、Azospirillumlargimobile、生脂固氮螺菌(Azospirillum lipoferum)、糖蜜草固氮螺菌(Azospirillummelinis)、曲霉固氮螺菌(Azospirillum oryzae)、皮克斯固氮螺菌(Azospirillumpicis)、多皱固氮螺菌(Azospirillum rugosum)、Azospirillum thiophilum、玉米固氮螺菌(Azospirillum zeae)、及其组合。
在一个具体实施例中,该有益的微生物是选自下组的细菌固氮生物,该组由以下各项组成:慢生型大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、苜蓿中华根瘤菌、巴西固氮螺菌、及其组合。在另一个实施例中,该有益的微生物是细菌固氮生物慢生型大豆根瘤菌。在另一个实施例中,该有益的微生物是细菌固氮生物豌豆根瘤菌。在另一个实施例中,该有益的微生物是细菌固氮生物苜蓿根瘤菌。在另一个实施例中,该有益的微生物是细菌固氮生物苜蓿中华根瘤菌。在另一个实施例中,该有益的微生物是细菌固氮生物巴西固氮螺菌。
在一个具体实施例中,该一种或多种固氮生物包括一种或多种豌豆根瘤菌菌株。在另一个具体实施例中,豌豆根瘤菌的菌株包括菌株SO12A-2-(IDAC 080305-01)。在另一个具体实施例中,该一种或多种固氮生物包括一种慢生型大豆根瘤菌菌株。在又另一个具体实施例中,慢生型大豆根瘤菌的菌株包括以下菌株慢生型大豆根瘤菌USDA532C、慢生型大豆根瘤菌USDA 110、慢生型大豆根瘤菌USDA 123、慢生型大豆根瘤菌USDA 127、慢生型大豆根瘤菌USDA 129、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50608、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50609、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50610、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50611、慢生型大豆根瘤菌NRRLB-50612、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50592(还保藏为NRRL B-59571)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50593(还保藏为NRRL B-59572)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50586(还保藏为NRRLB-59565)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50588(还保藏为NRRL B-59567)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50587(还保藏为NRRL B-59566)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50589(还保藏为NRRLB-59568)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50591(还保藏为NRRL B-59570)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50590(还保藏为NRRL B-59569)、NRRL B-50594(还保藏为NRRL B-50493)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50726、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50727、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50728、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50729、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50730,及其组合。
在再又一个更具体实施例中,该一种或多种固氮生物包括一种或多种豌豆根瘤菌的菌株,包括以下菌株SO12A-2-(IDAC 080305-01)、慢生型大豆根瘤菌USDA 532C、慢生型大豆根瘤菌USDA 110、慢生型大豆根瘤菌USDA 123、慢生型大豆根瘤菌USDA 127、慢生型大豆根瘤菌USDA 129、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50608、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50609、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50610、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50611、慢生型大豆根瘤菌NRRLB-50612、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50592(还保藏为NRRL B-59571)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50593(还保藏为NRRL B-59572)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50586(还保藏为NRRLB-59565)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50588(还保藏为NRRL B-59567)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50587(还保藏为NRRL B-59566)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50589(还保藏为NRRLB-59568)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50591(还保藏为NRRL B-59570)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50590(还保藏为NRRL B-59569)、NRRL B-50594(还保藏为NRRL B-50493)、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50726、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50727、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50728、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50729、慢生型大豆根瘤菌NRRL B-50730,及其组合。
在另一个实施例中,该一种或多种有益微生物包括一种或多种溶磷微生物。溶磷微生物包括真菌和细菌菌株。在一个实施例中,该溶磷微生物是选自以下各属的微生物,这些属由以下各项组成:不动杆螨属、节杆菌、节丛孢菌属、曲霉属、固氮螺菌属、芽孢杆菌属、布克氏菌属、假丝酵母属、金色单胞菌属、肠杆菌属、正青霉属、微杆菌属(Exiguobacterium)、克雷白氏菌属、克罗非菌属、细杆菌属(Microbacterium)、毛霉属、拟青霉属、类芽孢杆菌属、青霉菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、链孢子囊菌属、Swaminathania菌属、硫杆菌属、Torulospora菌属、弧菌属、黄色杆菌属、黄单胞菌属、及其组合。在再又另一个实施例中,该溶磷微生物是一种选自下组的微生物,该组由以下各项组成:醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)、少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)、黑曲霉(Aspergillus niger)、亚马逊固氮螺菌(Azospirillum amazonense)、巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)、加拿大固氮螺菌(Azospirillum canadense)、Azospirillum doebereinerae、台湾固氮螺菌(Azospirillum formosense)、Azospirillum halopraeferans)、伊拉克固氮螺菌(Azospirillum irakense)、Azospirillum largimobile、生脂固氮螺菌(Azospirillumlipoferum)、糖蜜草固氮螺菌(Azospirillum melinis)、曲霉固氮螺菌(Azospirillumoryzae)、皮克斯固氮螺菌(Azospirillum picis)、多皱固氮螺菌(Azospirillumrugosum)、Azospirillum thiophilum、玉米固氮螺菌(Azospirillum zeae)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、洋葱伯克氏菌(Burkholderia cepacia)、越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)、克鲁斯假丝酵母(Candida krissii)、浅黄金色单胞菌、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)、泰洛肠杆菌(Enterobacter taylorae)、微细正青霉(Eupenicillium parvum)、栖冷克吕沃尔菌(Kluyvera cryocrescens)、多枝毛霉(Mucor ramosissimus)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepialid)、马昆德拟青霉(Paecilomyces marquandii)、浸麻芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)、胶质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)、比莱青霉(Penicillium bilaiae)(以前称为拜莱青霉(Penicillium bilaii))、发白青霉(Penicillium albidum)、橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、黄暗青霉(Penicillium citreonigrum)、桔青霉(Penicillium citrinum)、指状青霉(Penicillium digitatum)、Penicilliumfrequentas、锈色青霉(Penicillium fuscum)、Penicillium gaestrivorus、光孢青霉(Penicillium glabrum)、灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)、纠缠青霉(Penicilliumimplicatum)、微紫青霉(Penicillium janthinellum)、淡紫青霉(Penicilliumlilacinum)、朱黄青霉(Penicillium minioluteum)、山地青霉(Penicilliummontanense)、微黑青霉(Penicillium nigricans)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、Penicillium pinetorum、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)、产紫青霉(Penicilliumpurpurogenum)、生根青霉(Penicillium radicans)、甘蓝青霉(Penicillium radicum)、雷斯青霉(Penicillium raistrickii)、皱褶青霉(Penicillium rugulosum)、简青霉(Penicillium simplicissimum)、离生青霉(Penicillium solitum)、变幻青霉(Penicillium variabile)、毡毛青霉(Penicillium velutinum)、纯绿青霉(Penicilliumviridicatum)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)、Penicillium fussiporus、扩展青霉(Penicillium expansum)、起皱假单胞菌(Pseudomonas corrugate)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、淡黄假单胞菌(Pseudomonas lutea)、草假单胞菌(Pseudomonas poae)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、施氏假单胞菌、Pseudomonas trivialis、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、Swaminathania salitolerans、氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)、圆叶鼠李有孢圆酵母(Torulospora globosa)、解蛋白弧菌(Vibrio proteolyticus)、敏捷黄杆菌(Xanthobacter agilis)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris、及其组合。
在一个具体实施例中,该一种或多种溶磷微生物是霉菌青霉属菌株。在另一个实施例中,该一种或多种青霉属种类是比莱青霉、P.gaestrivorus或其组合。
在一个具体实施例中,该一种或多种溶磷微生物是霉菌青霉属菌株。在另一个实施例中,该一种或多种青霉属种类是比莱青霉、P.gaestrivorus或其组合。在一个具体实施例中,青霉属菌株包括比莱青霉NRRL 50169、比莱青霉ATCC 20851、比莱青霉ATCC 22348、比莱青霉ATCC 18309、比莱青霉NRRL 50162、及其组合。在另一个具体实施例中,青霉属菌株包括菌株P.gaestrivorus NRRL 50170。在仍又另一个具体实施例中,青霉属菌株包括比莱青霉NRRL 50169、比莱青霉ATCC 20851、比莱青霉ATCC 22348、比莱青霉ATCC 18309、比莱青霉NRRL 50162、P.gaestrivorus NRRL 50170、及其组合。
在另一实施例中,该有益微生物是一种或多种菌根。具体而言,该一种或更多种菌根是内生菌根(亦称泡囊-丛枝状菌根、VAM、丛枝菌根或AM)、外生菌根或其组合。
在一个实施例中,该一种或更多种菌根是球囊菌门和球囊霉与巨孢囊霉属的内生菌根。仍在一个另外的实施例中,该内生菌根是聚丛球囊霉(Glomus aggregatum)、巴西球囊霉(Glomus brasilianum)、明球囊霉(Glomus clarum)、沙漠球囊霉(Glomusdeserticola)、幼套球囊霉(Glomus etunicatum)、聚生球囊霉(Glomus fasciculatum)、根内球囊霉、单孢球囊霉(Glomus monosporum)或摩西球囊霉(Glomus mosseae)、珠状巨孢囊霉(Gigaspora margarita)的菌株,或其组合。
在另一实施例中,该一种或更多种菌根是担子菌门、子囊菌门和接合菌门的外生菌根。在再又另一个实施例中,该外生菌根是双色蜡蘑、漆蜡蘑(Laccaria laccata)、彩色豆马勃、Rhizopogon amylopogon、Rhizopogon fulvigleba、浅黄根须腹菌(Rhizopogonluteolus)、Rhizopogon villosuli、光硬皮马勃(Scleroderma cepa)、黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum)的菌株,或其组合。
在仍另一个实施例中,该一种或多种菌根是杜鹃花类(ecroid)菌根、丛枝类(arbutoid)菌根或水晶兰类(monotropoid)菌根。丛枝菌根和外生菌根与许多属于杜鹃花目的植物形成杜鹃花类菌根,而一些杜鹃花目形成丛枝类菌根和水晶兰类菌根。所有兰花在其生命周期过程中的某一阶段都是真菌异养的(mycoheterotrophic)并且与一系列担子菌真菌形成兰花菌根。在一个实施例中,该菌根可以是一种杜鹃花类菌根,优选子囊菌门的杜鹃花类菌根,例如灰斑膜盘菌(Hymenoscyphous ericae)或树粉孢属。在另一实施例中,该菌根可以是一种丛枝类菌根,优选担子菌门的丛枝类菌根。在又另一个实施例中,该菌根可以是一种水晶兰类菌根,优选担子菌门的水晶兰类菌根。在再又另一个实施例中,该菌根可以是一种兰花菌根,优选丝核菌属的兰花菌根。
在仍另一个实施例中,该一种或多种有益微生物是杀真菌剂,即,具有杀真菌活性(例如,生物杀真菌剂)。生物杀真菌剂的非限制性实例被提供于以下“杀真菌剂”部分。
一种或更多种杀真菌剂
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或更多种杀真菌剂。有用于在此描述的组合物的杀真菌剂可以是生物杀真菌剂、化学杀真菌剂、或其组合。可以对杀真菌剂进行选择,从而提供针对广谱植物致病真菌、包括土传真菌的有效控制,这些真菌尤其是源自以下类别:根肿菌纲、Peronosporomycete(异名卵菌纲)、壶菌纲、接合菌纲、子囊菌纲、担子菌纲及半知菌纲(异名不完全菌纲)。可以有效靶向的更常见的真菌性病原体包括疫霉属、丝核菌属、镰孢属、腐霉属、拟茎点霉属或核盘菌属(Selerotinia)以及层锈菌属及其组合。
在一些实施例中,该生物杀真菌剂可以是一种以下属的细菌:放线菌属、土壤杆菌属、节杆菌属、产碱菌属、金杆菌属、固氮菌属、芽胞杆菌属、拜叶林克氏菌属、短芽孢杆菌属、布克氏菌属、色杆菌属、梭菌属、棒形杆菌属、丛毛单胞菌属(Comomonas)、棒状杆菌属、短小杆菌属、肠杆菌属、黄质菌属、葡糖杆菌属、Hydrogenophage、克雷白氏杆菌属、甲基杆菌属、类芽孢杆菌属、巴斯德氏芽菌属、鞘脂杆菌属(Phingobacterium)、发光杆菌属、叶杆菌属、假单胞菌属、根瘤菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、贪食菌属、以及致病杆菌属。在具体实施例中,该细菌是选自下组,该组由以下各项组成:解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽胞杆菌、球形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、拾津贺色杆菌(Chromobacterium suttsuga)、穿刺巴氏杆菌(Pasteuria penetrans)、Pasteuria usage、以及荧光假单胞菌。
在某些实施例中,该生物杀真菌剂可以是一种以下属的真菌:链格孢属、白粉寄生菌属(Ampelomyces)、曲霉属、短梗霉属、白僵菌属、炭疽菌属、盾壳霉属(Coniothyrium)、胶枝霉属、绿僵菌属、Muscodor、拟青霉属、木霉属、核瑚菌属、细基格孢属、和轮枝孢属。在具体实施例中,该真菌是球孢白僵菌、盾壳霉(Coniothyrium minitans)、绿粘帚霉、绿僵菌、Muscodor albus、淡紫拟青霉、或Trichoderma polysporum。
可以适合在本披露中使用的生物杀真菌剂的非限制性实例包括白粉寄生孢(例如,AQ来自Intrachem生物公司(Intrachem Bio GmbH&Co.)KG,德国)、黄曲霉(例如,来自先正达公司(Syngenta,CH))、出芽短梗霉菌(例如,来自生物发酵公司(bioferm GmbH),德国)、短小芽胞杆菌(例如,分离株NRRLNr.B21661,在MAX和ASO下,来自Fa.AgraQuest公司(Fa.AgraQuest Inc.),美国)、解淀粉芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌FZB24(例如,来自诺维信生物制剂公司(Novozymes Biologicals,Inc.),美国)、解淀粉芽孢杆菌TJ1000(例如,还称作1BE,分离株ATCC BAA-390)、Candida oleophila、Candida oleophila I-82(例如,来自Ecogen公司(Ecogen Inc.),美国)、Candida saitoana(例如,(与溶菌酶的混合物)以及来自Micro Flo公司(Micro FloCompany)),美国(BASF SE)和Arysta)、Clonostachys rosea f.catenulata,还称为Gliocladium catenulatum(例如,分离株J1446:来自Verdera公司(Verdera),芬兰)、Coniothyrium minitans(例如,来自Prophyta公司(Prophyta),德国)、Cryphonectria parasitica(例如,Endothia parasitica,来自CNICM,法国)、浅白隐球酵母(例如,来自安佳生物技术公司(AnchorBioTechnologies),南非)、尖孢镰刀菌(例如,来自S.I.A.P.A.公司(S.I.A.P.A.)意大利;来自天然植物保护公司(Natural PlantProtection),法国)、梅奇酵母(Metschnikowia fructicola)(例如,来自Agrogreen公司(Agrogreen)),以色列)、Microdochium dimerum(例如,来自Agrauxine公司(Agrauxine),法国)、大伏革菌(Phlebiopsis gigantea)(例如,来自Verdera公司(Verdera),芬兰)、Pseudozyma flocculosa(例如,来自植物产品公司(Plant Products Co.Ltd.),加拿大)、寡雄腐霉(Pythium oligandrum)、寡雄腐霉DV74(例如,来自Remeslo SSRO公司(Remeslo SSRO),Biopreparaty,Czech Rep.)、Reynoutria sachlinensis(例如,来自马诺尼生物创新公司(Marrone BioInnovations),美国)、黄色蠕形霉(Talaromyces flavus)、黄色蠕形霉V117b(例如,来自Prophyta公司(Prophyta),德国)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)、棘孢木霉SKT-1(例如,ECO-来自Kumiai化学品工业公司(Kumiai Chemical Industry Co.,Ltd.),日本)、深绿木霉(Trichoderma atroviride)、深绿木霉LC52(例如,来自Agrimm技术公司(Agrimm Technologies Ltd),NZ)、哈茨木霉、哈茨木霉T-22(例如,der Firma BioWorks Inc.),美国)、哈茨木霉TH 35(例如,来自Mycontrol公司(Mycontrol Ltd.),以色列)、哈茨木霉T-39(例如,以及TRICHODERMA来自Mycontrol公司(Mycontrol Ltd.),以色列以及Makhteshim公司(Makhteshim Ltd.),以色列)、哈茨木霉ICC012、哈茨木霉以及绿色木霉(例如,TRICHOPEL,来自Agrimm科技公司(Agrimm Technologies Ltd),NZ)、哈茨木霉ICC012以及绿色木霉(T.viride)ICC080(例如,来自Isagro Ricerca公司(Isagro Ricerca),意大利)、T.polysporum以及哈茨木霉(例如,来自BINAB生物创新公司(BINABBioInnovation AB),瑞典)、Trichoderma stromaticum(例如,来自C.E.P.L.A.C.公司(C.E.P.L.A.C.),巴西)、绿木霉(Trichoderma virens)、绿木霉GL-21(例如,来自Certis公司(Certis LLC),美国)、绿木霉G1-3(例如,ATCC58678,来自诺维信公司(Novozymes BioAg,Inc.))、绿木霉G1-21(例如,可商购自ThermoTrilogyg公司(Thermo Trilogy Corporation))绿色木霉(例如,来自印度Ecosense公司(Ecosense Labs),(India)Pvt.Ltd.,印度;BIO-F,来自T.Stanes&Co.Ltd.公司(T.Stanes&Co.Ltd.),印度)、绿色木霉TV1(例如,绿色木霉TV1,来自Agribiotec srl公司,意大利)、绿色木霉ICC080、利迪链霉菌、利迪链霉菌WYEC 108(例如,分离株ATCC 55445,在ACTINOVATEACTINOVATEACTINO-ACTINOVATE以及下,来自Idaho研究基金公司(Idaho Research Foundation),美国)、链霉菌(Streptomyces violaceusniger)、链霉菌YCED 9(例如,分离株ATCC 55660,在DE-THATCH-DECOMP-以及THATCH下,来自Idaho研究基金公司(Idaho Research Foundation),美国)、链霉菌属WYE 53(例如,分离株ATCC 55750,在DE-DECOMP-以及THATCH下,来自Idaho研究基金公司(Idaho Research Foundation),美国)以及Ulocladium oudemansii、Ulocladium oudemansii HRU3(例如,BOTRY-来自BotryZen公司(BotryZen Ltd,NZ)。
在一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是解淀粉芽孢杆菌FZB24。在另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是解淀粉芽孢杆菌TJ1000。在又另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是利迪链霉菌WYEC 108。在仍又另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是链霉菌(Streptomyces violaceusniger)YCED 9。在另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是链霉菌属WYE 53。在又另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是绿木霉G1-3。在另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是绿木霉G1-21。
在又另一个具体实施例中,该生物杀真菌剂是一种如下组合:解淀粉芽孢杆菌FZB24、解淀粉芽孢杆菌TJ1000、利迪链霉菌WYEC108、链霉菌YCED 9、链霉菌属WYE 53、绿木霉G1-3、绿木霉G1-21、或其组合(例如,至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、直到并且包括组合中的所有菌株)。
在另外的实施例中,该生物杀真菌剂可以是植物生长激活剂或植物防御试剂,包括但不局限于敏蛋白(harpin)、大虎杖(Reynoutriasa chalinensis)等。
可以适合在本披露中使用的有用化学杀真菌剂的代表性实例包括:芳香族烃、苯并咪唑、苯并噻二唑、羧酰胺、羧酸酰胺、吗啉、苯基酰胺、膦酸盐、醌外抑制剂(例如,嗜球果伞素)、噻唑烷、托布津、噻吩羧酰胺、以及三唑:
A)嗜球果伞素:
嘧菌酯、甲香菌酯(coumethoxystrobin)、丁香菌酯、醚菌胺(dimoxystrobin)、烯肟菌酯(enestroburin)、氟嘧菌酯、醚菌酯、苯氧菌胺、肟醚菌胺、啶氧菌酯、唑菌胺酯、唑胺菌酯(pyrametostrobin)、唑菌酯、吡菌苯威、肟菌酯、2-[2-(2,5-二甲基-苯氧甲基)-苯基]-3-甲氧基-丙烯酸甲酯和2-(2-(3-(2,6-二氯苯基)-1-甲基-亚烯丙基氨基氧甲基)-苯基)-2-甲氧亚氨基-苯基)-N-甲基-乙酰胺;
B)羧酰胺
甲酰苯胺类:苯霜灵、苯霜灵-M、邻碘酰苯胺、联苯吡菌胺、啶酰菌胺、萎锈灵、甲呋酰胺、环酰菌胺、氟酰胺、氟苯吡菌胺、福拉比、吡唑萘菌胺、异噻菌胺、kiralaxyl、灭锈胺、甲霜灵、精甲霜灵、呋酰胺、噁霜灵、氧化萎锈灵、戊苯吡菌胺、吡噻菌胺、环丙吡菌胺、叶枯酞、噻氟菌胺、噻酰菌胺、2-氨基-4-甲基-噻唑-5-甲酰苯胺、N-(4'-三氟甲基硫代联苯基-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和N-(2-(1,3,3-三甲基丁基)-苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4-羧酰胺;
羧酸酰吗啉:烯酰吗啉、氟吗啉、丁吡吗啉;
苯甲酸酰胺:氟联苯菌、氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、苯酰菌胺;
其他羧酰胺:环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、双炔酰菌胺、土霉素、硅噻菌胺和N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)环丙烷羧酸酸酰胺;
C)唑类
三唑:阿扎康唑、联苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、烯唑醇M、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、亚胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、恶咪唑、多效唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、烯效唑;
咪唑:氰霜唑、抑霉唑、稻瘟酯、丙氯灵、氟菌唑;
D)杂环化合物
吡啶:啶胺、啶斑肟、3-[5-(4-氯-苯基)-2,3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、3-[5-(4-甲基-苯基)-2,3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶;
嘧啶:乙嘧酚磺酸酯、嘧菌环胺、二氟林、氯苯嘧啶醇、嘧菌腙、嘧菌胺、氯定、氟苯嘧啶醇、嘧霉胺;
哌嗪:嗪氨灵;
吡咯:拌种咯、咯菌腈;
吗琳:4-十二烷基-2,6-二甲基吗啉、十二环吗啉、十二环吗啉-乙酸酯、丁苯吗啉、十三吗啉;
哌啶:苯锈啶;
二甲酰亚胺类:氟菌丹、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利;
非芳香族5-元杂环:噁唑菌酮、咪唑菌酮、flutianil、辛噻酮、噻菌灵、5-氨基-2-异丙基-3-氧代-4-邻-甲苯基-2,3-二氢-吡唑-1-羧硫代酸S-烯丙基酯;
其他:阿拉酸式苯-S-甲基、辛唑嘧菌胺、吲唑磺菌胺(amisulbrom)、敌菌灵、杀稻瘟菌素-S、敌菌丹、克菌丹、灭螨猛(chinomethionat)、棉隆、咪菌威、哒菌酮、野燕枯(difenzoquat)、野燕枯-甲基硫酸盐、氰菌胺、灭菌丹、恶喹酸、粉病灵、丙氧喹啉、咯喹酮、喹氧灵、唑嗪、三环唑、2-丁氧基-6-碘-3-丙基苯并吡喃-4-酮、5-氯-1-(4,6-二甲氧基-嘧啶-2-基)-2-甲基-1H-苯并咪唑和5-氯-7-(4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑-[1,5-a]嘧啶;
E)苯并咪唑:
多菌灵。
F)其他活性物质:
胍类:胍、多果定、多果定游离碱、双胍盐、双胍辛-乙酸酯、双胍辛胺、双胍辛胺-醋酸盐、双胍三辛烷基苯磺酸盐(iminoctadine-tris(albesilate));
抗生素:春雷霉素、春雷霉素盐酸盐-水合物、链霉素、多氧菌素、井冈霉素;
硝基苯基衍生物:乐杀螨、氯硝胺、敌螨通、敌螨普、酞菌酯、四氯硝基苯,
有机金属化合物:三苯锡盐例如三苯锡-乙酸酯、三苯基氯化锡或三苯基氢氧化锡;
含硫杂环基化合物:二噻农、稻瘟灵;
有机磷化合物:敌瘟磷、三乙膦酸、三乙膦酸铝、异稻瘟净、磷酸及其盐、吡菌磷、甲基立枯磷;
有机氯化合物:百菌清、抑菌灵、双氯酚、磺菌胺、六氯苯、戊菌隆、五氯苯酚及其盐、四氯苯酞(phthalide)、五氯硝基苯、甲基硫菌灵、硫菌灵、对甲抑菌灵(tolylfluanid)、N-(4-氯-2-硝基-苯基)-N-乙基-4-甲基-苯磺酰胺;
无机活性物质:波尔多混合物、乙酸铜、氢氧化铜、氯氧化铜、碱性硫酸铜以及硫。
商业杀真菌剂最适合地根据厂商的说明书以推荐的浓度使用。
一种或更多种除草剂
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或更多种除草剂。除草剂的非限制性实例包括ACC酶抑制剂、乙酰苯胺、AHAS抑制剂、类胡萝卜素生物合成抑制剂、EPSPS抑制剂、谷氨酰胺合成酶抑制剂、PPO抑制剂、PS II抑制剂、以及合成植物生长素。在一个具体实施例中,该除草剂可以是萌发前除草剂、萌发后除草剂或其组合。
适合的除草剂包括化学除草剂、天然除草剂(例如,生物除草剂、有机除草剂等)或其组合。适合的除草剂的非限制性实例包括乙草胺、麦草畏、灭草松、三氟羧草醚、氯嘧磺隆、乳氟禾草灵、异噁草酮、吡氟禾草灵、丙炔氟草胺、草丁磷、草甘膦、烯禾啶、咪草烟、甲氧咪草烟、fomesafe、氟磺胺草醚、氟烯草酸、灭草喹(咪唑喹啉酸)、甲基磺草酮、喹禾灵、嘧啶肟草醚、磺草酮、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、2,4,5-三氯苯氧乙酸(2,4,5-T)、thaxtomin(例如,如在美国专利号:7,989,393中所述的thaxtomin)和烯草酮。包含这些化合物中的每种的商品是可容易地获得的。组合物中的除草剂浓度通常将对应于具体除草剂的标记使用比率。
一种或多种杀昆虫剂、杀螨剂杀线虫剂
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种杀昆虫剂、杀螨剂、杀线虫剂、或其组合。有用于在此描述的组合物的杀昆虫剂将对宽范围的虫适合地展示出活性,包括但不限于金针虫、地老虎、蛴螬、玉米根虫、玉米种子蛆虫、跳甲、麦长蝽、蚜虫、叶甲、椿象及其组合。在此描述的杀昆虫剂、杀螨剂以及杀线虫剂可以是化学或天然的(例如,生物溶液,如真菌杀有害生物剂等)。
可以用于在此披露的组合物的杀昆虫剂、杀螨剂和杀线虫剂的非限制性实例包括氨基甲酸酯、二酰胺、大环内酯、新烟碱类、有机磷酸酯、苯基吡唑、除虫菊酯、多杀霉素(spinosyns)、合成拟除虫菊酯、特窗酸(tetronic acid)以及特特拉姆酸(tetramicacid)。
在具体实施例中,杀昆虫剂、杀螨剂和杀线虫剂包括氟丙菊酯、α-氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、三氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯高氰戊菊酯、依芬普司、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰菊酯、噻唑磷、λ-三氯氟氰菊酯、γ-三氯氟氰菊酯、苄氯菊酯、τ-氟胺氰菊酯、四氟菊酯、ζ-氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯、七氟菊酯、eflusilanat、扫螨宝、除虫菊酯、苄呋菊酯、吡虫啉、啶虫脒、噻虫嗪、烯啶虫胺、噻虫啉、呋虫胺、噻虫胺、氯噻啉、定虫隆、除虫脲、氯芬奴隆、伏虫脲、杀虫隆、双苯氟脲、氟虫脲、氟铃脲、双三氟虫脲、多氟脲、噻嗪酮、赛灭净、甲氧虫酰肼、虫酰肼、氯虫酰肼、环虫酰肼、硫丹、氟虫腈、乙虫腈、pyrafluprole、皮瑞普、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺(氯虫酰胺)、呋虫胺、氰虫酰胺、依马克丁、苯甲酸依马克、阿巴美丁、伊维菌素、米尔螨素、雷皮菌素、吡螨胺、唑螨酯、哒螨酮、喹螨醚、嘧螨醚、唑虫酰胺、开乐散、唑螨氰、丁氟螨酯、灭螨醌、嘧螨酯、联苯肼酯、杀螨隆、乙螨唑、四螨嗪、多杀菌素、triarathen、三氯杀螨砜、克螨特、噻螨酮、溴螨酯、灭螨猛(chinomethionat)、双甲脒、氟虫吡喹、吡甲嗪、氟啶虫酰胺、蚊蝇醚、苯虫醚、溴虫腈、氰氟虫腙、茚虫威、毒死蜱、螺螨酯、螺甲螨酯、螺虫乙酯、啶虫丙醚、spinctoram、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、杀线威、乙基多杀菌素(spinetoram)、苯线磷、fenamipclothiahos、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2,2-二氟乙基)氨基}呋喃-2(5H)-酮、硫线磷、甲萘威、克百威、灭线磷、硫双威、涕灭威、涕灭砜威、甲胺磷、灭虫威、氟啶虫胺腈、溴氰虫酰胺,以及还有基于坚强芽孢杆菌(I-1582、BioNeem、Votivo)的产品、及其组合。
在一个具体实施例中,杀昆虫剂是一种微生物杀昆虫剂。在一个更具体的实施例中,微生物杀昆虫剂是一种真菌杀昆虫剂。可以用于在此披露的组合物中的真菌杀昆虫剂的非限制性实例被描述于麦考伊(McCoy),C.W.,萨姆森(Samson),R.A.,以及库西亚斯(Coucias),D.G.“虫生真菌(Entomogenous fungi.),“天然杀有害生物剂的CRC手册(CRCHandbook of Natural Pesticides).微生物杀有害生物剂部分A.虫生原生动物和真菌(Microbial Pesticides,Part A.Entomogenous Protozoa and Fungi).”(C.M.伊诺副(Inoffo)编辑),(1988):第5卷,151-236;萨姆森(Samson),R.A.,埃文斯(Evans),H.C.,以及拉特吉(Latge′),J.P.“昆虫病原性真菌的阿特拉斯(Atlas of EntomopathogenicFungi).”(柏林斯普林格出版社(Springer-Verlag))(1988);以及德法利亚(deFaria),M.R.和赖特(Wraight),S.P.“真菌杀昆虫剂和真菌杀螨剂:具有全球覆盖和国际分类的配制类型的一个全面列表(Mycoinsecticides and Mycoacaricides:A comprehensive listwith worldwide coverage and international classification of formulationtypes).”生物控制(Biol.Control)(2007),doi:10.1016/j.biocontrol.2007.08.001。
在一个实施例中,可以在此处所披露的组合物中使用的真菌杀昆虫剂的非限制性实例包括以下物种:腔壶菌属(Coelomycidium)、蝇壶菌属(Myiophagus)、柯里真菌属(Coelemomyces)、链壶菌属(Lagenidium)、细囊霉属(Leptolegnia)、库奇霉属(Couchia)、拟小孢霉属(Sporodiniella)、耳霉属(Conidiobolus)、噬虫霉属(Entomophaga)、虫霉属(Entomophthora)、虫疫霉属(Erynia)、团孢霉属(Massospora)、顶裂霉属(Meristacrum)、新接霉属(Neozygites)、潘多拉属(Pandora)、虫瘟霉属(Zoophthora)、芽枝酵母属(Blastodendrion)、梅奇酵母属(Metschnikowia)、生膜菌属(Mycoderma)、球囊菌属(Ascophaera)、虫草属、锥壳属(Torrubiella)、丛赤壳属(Nectria)、肉座菌属(Hypocrella)、丽赤壳属(Calonectria)、丝菌属(Filariomyces)、海茨帕真菌属(Hesperomyces)、特雷诺真菌属(Trenomyces)、多腔菌属(Myriangium)、柄丛赤壳属(Podonectria)、刺束梗孢属(Akanthomyces)、座壳孢属(Aschersonia)、曲霉属、白僵菌属、蚊菌属(Culicinomyces)、侧齿霉属(Engyodontium)、镰孢属、球束梗孢属(Gibellula)、多毛菌属(Hirsutella)、层束梗孢属(Hymenostilbe)、棒束孢属(Isaria)、绿僵菌属、野村菌属(Nomuraea)、拟青霉属、羽束梗孢属(Paraisaria)、侧链孢属(Pleurodesmospora)、多头霉属(Polycephalomyces)、拟球束梗孢属(Pseudogibellula)、小团孢属(Sorosporella)、束梗孢属(Stillbella)、四臂壳孢属(Tetranacrium)、多头束霉属(Tilachlidium)、弯颈霉属、轮枝孢属(Verticillium)、虫座孢属(Aegerita)、线黑粉菌属(Filobasidiella)、隔担菌属(Septobasidium)、拟锈菌属(Uredinella)、及其组合。
可以于在此处描述的组合物中用作真菌杀昆虫剂的具体物种的非限制性实例包括钩状木霉、哈茨木霉(Trichoderma hazarium)、决明链格孢(Alternaria cassiae)、砖红镰孢霉(Fusarium lateritum)、茄病镰刀菌、蜡蚧轮枝菌、寄生曲霉、蜡蚧轮枝茵(Verticillium lecanii)、绿僵菌、以及球孢白僵菌。在一个实施例中,在此披露的组合物可以包括上文提供的任何真菌杀昆虫剂、包括其任何组合。
在一个实施例中,该组合物包含至少一种来自绿僵菌属例如绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)(在本领域中还称作金龟子绿僵菌(Metarrhizium anisopliae)、Metarhiziumbrunneum、或“绿色圆叶葡萄菌(green muscadine)”)的真菌杀昆虫剂。在至少一个实施例中,该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌菌株。在另一个实施例中,这些组合物包括绿僵菌菌株的孢子。
在一个具体实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌菌株F52(还称为绿僵菌菌株52、绿僵菌菌株7、绿僵菌菌株43、绿僵菌BIO-1020、TAE-001,并且保藏为DSM3884、DSM 3885、ATCC 90448、SD 170、以及ARSEF 7711)(可获自诺维信公司(Novozymes Biologicals,Inc.),美国)。在又另一个具体实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌菌株F52的孢子。
在又另一个实施例中该组合物可以进一步包含至少一种来自白僵菌属(例如,如球孢白僵菌)的真菌杀昆虫剂。在至少一个实施例中,真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株。在另一个实施例中,该组合物进一步包括球孢白僵菌菌株的孢子。
在一个具体实施例中,该组合物进一步包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株ATCC-74040。在另一个实施例中,该组合物进一步包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株ATCC-74040的孢子。在另一个具体实施例中,该组合物进一步包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株ATCC-74250。在又另一个具体实施例中,该组合物进一步包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株ATCC-74250的孢子。在仍另一个具体实施例中,该组合物进一步包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株ATCC-74040与球孢白僵菌菌株ATCC-74250的混合物。在仍另一个实施例中,该组合物进一步包括至少一种真菌杀昆虫剂,该真菌杀昆虫剂包括球孢白僵菌菌株ATCC-74040与球孢白僵菌菌株ATCC-74250的孢子的混合物。
在仍又另一个具体实施例中,在此所描述的组合物可以包括一种真菌组合。在一个实施例中,该组合物可以包括相同物种的不同菌株的两种或更多种真菌杀昆虫剂。在另一个实施例中,该组合物包含不同物种菌株的至少两种不同的真菌杀昆虫剂。在一个实施例中,该组合物包括至少一种来自绿僵菌属的真菌杀昆虫剂以及至少一种来自白僵菌属的真菌杀昆虫剂。在另一个实施例中,该组合物包括绿僵菌属和白僵菌属的孢子。
在一个具体实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中至少一种真菌杀昆虫剂是绿僵菌菌株并且至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株。在另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌和白僵菌的孢子。
在一个具体实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中至少一种真菌杀昆虫剂是绿僵菌菌株F52并且至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株ATCC-74040。在又另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌菌株F52和白僵菌菌株ATCC-74040的孢子。
在又另一个具体实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中至少一种真菌杀昆虫剂是绿僵菌菌株F52并且至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株ATCC-74250。在又另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌菌株F52和白僵菌菌株ATCC-74250的孢子。
在仍又另一个具体实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中至少一种真菌杀昆虫剂是绿僵菌菌株F52,至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株ATCC-74040,并且至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株ATCC-74250。在又另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中该真菌杀昆虫剂包括绿僵菌菌株F52、白僵菌菌株ATCC-74040、和白僵菌菌株ATCC-74250的孢子。
在另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中该至少一种真菌杀昆虫剂是玫烟色拟青霉菌株。在又另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中该至少一种真菌杀昆虫剂是玫烟色拟青霉菌株FE991(在下来自FuturEco生物科学公司(FuturEco BioScience S.L.)巴塞罗那,西班牙)。在再又另一个实施例中,该组合物包括至少一种真菌杀昆虫剂,其中至少一种真菌杀昆虫剂其中该至少一种真菌杀昆虫剂是玫烟色拟青霉菌株FE991至少一种真菌杀昆虫剂是绿僵菌菌株F52,至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株ATCC-74040,并且至少一种真菌杀昆虫剂是白僵菌菌株ATCC-74250,及其组合。
在另一个实施例中,在此披露的组合物包括一种杀线虫剂。在一个更具体的实施例中,该杀线虫剂是一种微生物杀线虫剂,更优选是一种食线虫真菌和/或食线虫细菌。在一个具体实施例中,该微生物杀线虫剂是一种选自下组的食线虫真菌,该组由以下各项组成:节丛孢菌属、顶辐孢霉属、钩丝孢属、被毛孢属、单顶孢属、毒虫霉属、顶裂霉属、漆斑菌属、拟青霉属、巴斯德氏芽菌属、普奇尼亚菌属、木霉属、轮枝孢属、及其组合。在又一个更具体的实施例中,该食线虫真菌是选自下组,该组由以下各项组成:指状节丛孢、倒卵节丛孢、多孢节丛孢、指状节丛孢、白顶辐霉、鳗形钩丝孢、洛氏被毛孢、明尼达被毛孢、柱捕单顶孢、嗜磁线疫霉、番茄针孢酵母、Meristacr umasterospermum、疣孢漆斑菌、淡紫拟青霉、玫烟色拟青霉、穿刺巴氏杆菌、巴氏杆菌、厚垣普奇尼亚菌、哈茨木霉、绿木霉、厚垣轮枝孢菌、及其组合。
在一个更具体的实施例中,该微生物杀线虫剂是一种选自下组的食线虫细菌,该组由以下各项组成:放线菌属、土壤杆菌属、节杆菌蝇属、产碱菌属、出芽金担菌属、固氮菌属、拜叶林克氏菌属、布克氏菌属、色杆菌属、棒形杆菌属、梭菌属、丛毛单胞菌属、棒杆菌属、短小杆菌属、Desulforibtios属、肠杆菌属、黄质菌属、葡糖杆菌属、Hydrogenophage属、克雷白氏杆菌属、甲基杆菌属、叶杆菌属、Phingobacterium属、光杆菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌、Xenorhadbus属、贪食菌属、链霉菌属、假单胞菌属、类芽孢杆菌属属、及其组合。
在又一个更具体的实施例中,该微生物杀线虫剂是一种选自下组的食线虫细菌,该组由以下各项组成:Chromobacterium subtsugae、紫色色杆菌、利迪链霉菌、链霉菌及其组合。在一个具体实施例中,Chromobacterium subtsugae菌株是Chromobacteriumsubtsugae sp.nov.菌株,更具体地,是具有保藏号NRRL B-30655的Chromobacteriumsubtsugae sp.nov.菌株。在又另一个具体实施例中,链霉菌属的菌株是利迪链霉菌菌株WYEC 108、链霉菌菌株YCED 9、链霉菌属WYE53或其组合。
一种或多种营养素:
在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种有益的营养素。用于在于此描述的组合物中使用的营养素的非限制性实例包括维生素(例如,维生素A、复合维生素B(即,维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B7、维生素B8、维生素B9、维生素B12、胆碱)、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、类葫萝卜素(α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、隐黄质、叶黄素、番茄红素、玉米黄质等)、常量矿物质(例如,磷、钙、镁、钾、钠、铁等)、痕量矿物质(例如,硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒、锌等)、有机酸(例如,乙酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸、牛磺酸等)、及其组合。在一个具体实施例中,这些组合物可以包括磷、硼、氯、铜、铁、锰、钼、锌或其组合。
在另一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括磷。在一个实施例中,磷来源于一种来源。在另一个实施例中,适合的磷来源包括能够被一种或多种微生物(例如,比莱青霉等)溶解的磷来源。
在一个实施例中,磷可以来源于一种磷酸岩来源。在另一个实施例中,磷可以来源于包括一种或多种磷来源的肥料。可商购的制造磷肥具有很多类型。一些常见类型是包含以下项的那些:磷矿石、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钙、过磷酸盐、三过磷酸盐、和/或聚磷酸铵。通过在大规模肥料制造设施中对不溶天然磷矿石进行化学加工,生产所有这些肥料,并且产品是昂贵的。借助本披露,可能减小施加至土壤的这些肥料的量,同时仍维持从土壤摄取的磷的相同的量。
在仍另一个实施例中,磷可以来源于一种有机磷来源。在一个另外具体的实施例中,该磷来源可以包括一种有机肥料。有机肥料是指来源于至少保证最低百分比的氮、磷酸盐和碳酸钾的天然来源的土壤改良剂。有机肥料的非限制性实例包括植物和动物副产品、石粉、海藻、接种物以及调节剂。这些有机肥料通常可以在园林中心和通过园艺供应公司获得。具体而言,磷有机来源可以来自骨粉、肉粉、畜肥、堆肥、污水污泥、或鸟粪、或其组合。
在仍另一个实施例中,磷可以来源于磷来源的组合,这些磷来源包括但不限于磷酸岩、包括一种或多种磷来源(例如,磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钙、过磷酸钙、三元过磷酸钙、磷酸铵等)的肥料、一种或多种有机磷来源及其组合。
一种或更多种生物刺激剂
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或更多种有益的生物刺激剂。生物刺激剂可以增强代谢或生理过程,例如呼吸作用、光合作用、摄取核酸、摄取离子、输送营养或其组合。生物刺激剂的非限制性实例包括海藻提取物(例如,球型褐藻)、腐植酸(例如,腐殖酸钾)、富里酸、肌醇(myo-inositol)、甘氨酸及其组合。在另一个实施例中,这些组合物包括海藻提取物、腐植酸、富里酸、肌醇、甘氨酸及其组合。
一种或更多种聚合物:
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或更多种聚合物。聚合物在农业产业中的非限制性用途包括输送农用化学品、去除重金属、保水和/或输送水及其组合。包斯(Pouci)等人,美国农业与生物科学杂志(Am.J.Agri.&Biol.Sci.),3(1):299-314(2008)。在一个实施例中,该一种或更多种聚合物是天然聚合物(例如,琼脂、淀粉、藻酸盐、果胶、纤维素等)、合成聚合物、可生物降解的聚合物(例如,聚己内脂、聚交酯、聚(乙烯醇)等)或其组合。
对于有用于在此描述的组合物的聚合物的非限制性列表,参见包斯(Pouci)等人,美国农业与生物科学杂志(Am.J.Agri.&Biol.Sci.),3(1):299-314(2008)。在一个实施例中,在此描述的组合物包括纤维素、纤维素衍生物、甲基纤维素、甲基纤维素衍生物、淀粉、琼脂、藻酸盐、果胶、聚乙烯吡咯烷酮及其组合。
一种或更多种润湿剂
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或更多种润湿剂。通常将润湿剂应用至土壤上,具体地是疏水性土壤上,以改进进入土壤的水的浸润和/或穿透。该润湿剂可以是辅助剂、油、表面活性剂、缓冲剂、酸化剂、或其组合。在一个实施例中,该润湿剂是表面活性剂。在一个实施例中,该润湿剂是一种或更多种非离子表面活性剂、一种或更多种阴离子表面活性剂、或其组合。在又另一个实施例中,该润湿剂是一种或更多种非离子表面活性剂。
在“表面活性剂”部分中提供了适合在此描述的组合物的表面活性剂。
一种或更多种表面活性剂
适用于在此描述的组合物的表面活性剂可以是非离子表面活性剂(例如,半极性和/或阴离子和/或阳离子和/或两性离子的)。这些表面活性剂可以湿润并乳化一处或多处土壤和/或一处或多处泥土。可以设想的是,用于所描述的组合物中的表面活性剂对于包含在配制物中的任何微生物而言具有低的毒性。进一步预期用于所描述的组合物中的表面活性剂具有低的植物毒性(即,物质或物质的组合对植物具有的毒性程度)。可以使用单个的表面活性剂或若干表面活性剂的共混物。
阴离子表面活性剂
阴离子表面活性剂或阴离子和非离子表面活性剂的混合物也可以用于这些组合物中。阴离子表面活性剂是在水性溶液中具有处于阴离子或带负电荷状态的亲水性部分的表面活化剂。在此描述的组合物可以包括一种或更多种阴离子表面活性剂。该一种或更多种阴离子表面活性剂可以是水溶性阴离子表面活性剂、水不可溶的阴离子表面活性剂,或水溶性阴离子表面活性剂和水不可溶的阴离子表面活性剂的组合。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括磺酸、硫酸酯、羧酸及其盐。水溶性阴离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基酰氨基醚硫酸盐、烷基芳基聚醚硫酸盐、烷基芳基硫酸盐、烷基芳基磺酸盐、单甘油酯硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基酰胺磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、异丙苯磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基二苯醚磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、烷基萘磺酸盐、石蜡磺酸盐、木质素磺酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、乙氧基化磺基琥珀酸盐、烷基醚磺基琥珀酸盐、烷基酰胺磺基琥珀酸盐、烷基磺基琥珀酰胺酸盐、烷基磺基乙酸盐、烷基磷酸盐、磷酸酯、烷基醚磷酸盐、酰基肌氨酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、N-酰基-N-烷基牛磺酸盐、烷基羧酸盐或其组合。
非离子表面活性剂
非离子表面活性剂是当溶解或分散于水性介质中时不带电荷的表面活性剂。在此处描述的组合物的至少一个实施例中,使用一种或更多种非离子表面活性剂,因为它们提供希望的湿润和乳化作用并且不显著抑制孢子的稳定性和活性。该一种或更多种非离子表面活性剂可以是水溶性非离子表面活性剂、水不可溶的非离子表面活性剂,或水溶性非离子表面活性剂和水不可溶的非离子表面活性剂的组合。
水不可溶的非离子表面活性剂
水不可溶的非离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基和芳基:甘油醚、乙二醇醚、乙醇酰胺、磺酰胺、醇、酰胺、醇乙氧基化物、甘油酯、乙二醇酯、甘油酯和乙二醇酯的乙氧基化物、糖基烷基多糖苷、聚氧乙烯化脂肪酸、烷醇胺冷凝物、烷醇酰胺、三级炔属乙二醇、聚氧乙烯化硫醇、羧酸酯、聚氧乙烯化聚氧丙烯乙二醇、山梨糖醇脂肪酸酯或其组合。还包括EO/PO嵌段共聚物(EO是环氧乙烷,PO是环氧丙烷)、EO聚合物与共聚物、聚胺以及聚乙烯吡咯烷酮。
水溶性非离子表面活性剂
水溶性非离子表面活性剂的非限制性实例包括山梨糖醇脂肪酸醇乙氧基化物和山梨糖醇脂肪酸酯乙氧基化物。
非离子表面活性剂的组合
在一个实施例中,在此描述的组合物包括至少一种或更多种非离子表面活性剂。在一个实施例中,这些组合物包括至少一种水不可溶的非离子表面活性剂和至少一种水溶性非离子表面活性剂。在仍另一个实施例中,这些组合物包括具有基本上相同的长度的烃链的非离子表面活性剂的组合。
其他表面活性剂
在另一个实施例中,在此描述的组合物还可以包括有机硅表面活性剂,其是在硅酮基和矿物油基消泡剂中用作表面活性剂的硅酮基消泡剂。在又另一个实施例中,在此描述的组合物还可以包括脂肪酸的碱金属盐(例如,脂肪酸的水溶性碱金属盐和/或脂肪酸的水不可溶的碱金属盐)。
一种或多种抗冻剂:
在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种抗冻剂。抗冻剂的非限制性实例包括乙二醇、丙二醇、脲、甘油、及其组合。
方法
在另一个方面,披露了使用一种或多种微生物稳定化合物来增加一种或多种微生物的存活性的方法。在一个具体实施例中,该方法包括添加一种或多种在此所述的微生物稳定化合物于一种混合物中,该混合物包括一种或多种抗微生物化合物,以抑制该抗微生物化合物的抗微生物活性。在又另一个实施例中,该方法包括以下步骤:将一种或多种微生物添加至该混合物中。在再又另一个实施例中,添加至该混合物中的一种或多种微生物是一种或多种有益微生物。在一个具体实施例中,该混合物是一种种子处理组合物。
更进一步地,使用一种或多种微生物稳定化合物以增加一种或多种微生物的存活性的方法进一步包括添加一种或多种如在此描述的农业上有益的成分的步骤。在一个实施例中,添加一种或多种农业上有益的成分的步骤可以在添加一种或多种微生物稳定化合物于一种混合物中的步骤之前、之后或同时发生。在仍另一个实施例中,添加一种或多种农业上有益的成分的步骤可以在添加一种或多种微生物到该混合物中的步骤之前、之后或同时发生。
种子包衣
在另一个方面中,用在此描述的一种或多种组合物包衣种子。
在另一个实施例中,该方法进一步包括一种用于包衣种子的方法,该方法包括添加一种或多种在此所述的微生物稳定化合物于一种混合物中,该混合物包括一种或多种抗微生物化合物,以抑制该抗微生物化合物的抗微生物活性;添加一种或多种微生物到该混合物中;并且将该混合物施用至种子。在再又另一个实施例中,添加至该混合物中的一种或多种微生物是一种或多种有益微生物。在一个具体实施例中,该混合物是一种种子处理组合物。
该施用步骤可以通过本领域已知的任何的方法进行。施用至种子的非限制性实例包括但不局限于,喷雾种子、浸渍种子、滴注到种子上、对种子进行撒粉、浸没种子、和/或包衣种子。在一个更具体的实施例中,施用步骤是一个种子包衣步骤。在一个另外的实施例中,重复该施用步骤(例如,不止一次,如将该接触步骤重复两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次等)。
更进一步地,用于包衣种子的方法进一步包括添加一种或多种在此描述的农业上有益的成分的步骤。在一个实施例中,添加一种或多种在此描述的农业上有益的成分的步骤可以在向混合物中添加一种或多种抗微生物化合物以抑制该抗微生物化合物的抗微生物活性的步骤之前、之后或同时发生。在仍另一个实施例中,添加一种或多种农业上有益的成分的步骤可以在添加一种或多种微生物到该混合物中的步骤之前、之后或同时发生。在再另一个实施例中,添加一种或多种农业上有益的成分的步骤可以在向种子施用该混合物的步骤之前、之后或同时发生
在一个实施例中,可以按若干方式用在此描述的一种或更多种组合物处理种子,但是优选地经由喷洒或滴加。喷洒和滴加处理可以通过配制在此描述的组合物并经由连续处理系统(其被校准,以与种子的连续流成比例的预定义速率施加处理)(例如滚筒式处理器)将该一种或更多种组合物喷洒或滴加至一或多种的种子上。也可以利用间歇式系统,在这种系统中预定批量的种子和如在此描述的一种或更多种组合物被递送至混合器中。用于实施这些过程的系统和仪器可商购自许多供应商,例如拜耳作物科学(BayerCropScience)(古斯塔夫森公司(Gustafson))。
在另一个实施例中,该处理必需包衣种子。一种这样的过程涉及用在此描述的一种或更多种组合物包衣圆形容器的内壁,添加种子,然后旋转该容器,以使得这些种子与该壁和该一种或更多种组合物接触,即一种在本领域中称为“容器包衣(containercoating)”的过程。可以通过包衣方法的组合来包衣种子。浸渍典型地必需使用在此描述的组合物的液体形式。例如,可以将种子浸渍约1分钟至约24小时(例如,持续至少1min、5min、10min、20min、40min、80min、3hr、6hr、12hr、24hr)。
本披露的实施例通过以下编号的段落进一步定义:
1.一种用于增加一种或多种有益微生物的存活性的方法,该方法包括向一种种子处理组合物添加一种或多种微生物稳定化合物,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性。
2.如段落1所述的方法,其中该方法进一步包括以下步骤:添加一种或多种有益微生物到该种子处理组合物中。
3.如段落1或2所述的方法,其中该一种或多种有益微生物是一种固氮微生物、一种溶磷微生物、或其组合。
4.如段落1或2所述的方法,其中该一种或多种有益微生物是一种固氮微生物。
5.如段落1或2所述的方法,其中该一种或多种有益微生物是一种溶磷微生物。
6.如段落3-4所述的方法,其中该固氮微生物是选自下组的根瘤菌物种,该组由以下各项组成:根瘤菌属、慢生根瘤菌属、固氮根瘤菌属、中华根瘤菌属、中慢生根瘤菌属、固氮螺菌属、及其组合。
7.如段落6所述的方法,其中该固氮微生物是选自下组的细菌物种,该组由以下各项组成:解纤维素根瘤菌(Rhizobium cellulosilyticum)、Rhizobium daejeonense、埃特里根瘤菌(Rhizobium etli)、山羊豆根瘤菌(Rhizobium galegae)、高卢根瘤菌(Rhizobiumgallicum)、Rhizobium giardinii、海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)、Rhizobiumhuautlense、木蓝属根瘤菌(Rhizobium indigoferae)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)、松弛根瘤菌(Rhizobium loessense)、羽扇豆根瘤菌(Rhizobiumlupini)、Rhizobium lusitanum、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、蒙古根瘤菌(Rhizobium mongolense)、汨罗根瘤菌(Rhizobium miluonense)、苏拉根瘤菌(Rhizobiumsullae)、热带根瘤菌(Rhizobium tropici)、居水根瘤菌(Rhizobium undicola)、杨陵根瘤菌(Rhizobium yanglingense)、贝特慢生根瘤菌(Bradyrhizobium bete)、Bradyrhizobiumcanariense、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobium elkanii)、西表岛慢生根瘤菌(Bradyrhizobium iriomotense)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、Bradyrhizobium jicamae、辽宁慢生根瘤菌(Bradyrhizobium liaoningense)、豆薯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium pachyrhizi)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)、茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)、Azorhizobium doebereinerae、岩洞中华根瘤菌(Sinorhizobium abri)、附着中华根瘤菌(Sinorhizobium adhaerens)、美洲中华根瘤菌(Sinorhizobium americanum)、Sinorhizobium aboris费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)、Sinorhizobium indiaense、柯斯第中华根瘤菌(Sinorhizobiumkostiense)、鸡眼草中华根瘤菌(Sinorhizobium kummerowiae)、Sinorhizobium medicae、苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、墨西哥中华根瘤菌(Sinorhizobiummexicanus)、莫雷兰中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)、萨赫靳中华根瘤菌(Sinorhizobium saheli)、好客中华根瘤菌(Sinorhizobium terangae)、新疆中华根瘤菌(Sinorhizobium xinjiangense)、合欢中慢生根瘤菌(Mesorhizobium albiziae)、紫穗槐中慢生根瘤菌(Mesorhizobium amorphae)、含羞草中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumchacoense)、鹰嘴豆中慢生根瘤菌(Mesorhizobium ciceri)、中慢生型华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)、中慢生型百脉根根瘤菌(Mesorhizobium loti)、地中海中慢生根瘤菌(Mesorhizobium mediterraneum)、Mesorhizobium pluifarium、叉叶慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)、温度慢生根瘤菌(Mesorhizobium temperatum)、中慢生天山根瘤菌(Mesorhizobium tianshanense)、亚马逊固氮螺菌(Azospirillumamazonense)、巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)、加拿大固氮螺菌(Azospirillumcanadense)、Azospirillum doebereinerae、台湾固氮螺菌(Azospirillum formosense)、Azospirillum halopraeferans)、伊拉克固氮螺菌(Azospirillum irakense)、Azospirillum largimobile、生脂固氮螺菌(Azospirillum lipoferum)、糖蜜草固氮螺菌(Azospirillum melinis)、曲霉固氮螺菌(Azospirillum oryzae)、皮克斯固氮螺菌(Azospirillum picis)、多皱固氮螺菌(Azospirillum rugosum)、Azospirillumthiophilum、玉米固氮螺菌(Azospirillum zeae)、及其组合。
8.如段落3或5所述的方法,其中该溶磷微生物是选自下组的物种,该组由以下各项组成:不动杆螨属、节杆菌、节丛孢菌属、曲霉属、固氮螺菌属、芽孢杆菌属、布克氏菌属、假丝酵母属、金色单胞菌属、肠杆菌属、正青霉属、微杆菌属(Exiguobacterium)、克雷白氏菌属、克罗非菌属、细杆菌属(Microbacterium)、毛霉属、拟青霉属、类芽孢杆菌属、青霉菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、链孢子囊菌属、Swaminathania菌属、硫杆菌属、Torulospora菌属、弧菌属、黄色杆菌属、黄单胞菌属、及其组合。
9.如段落8所述的方法,其中该溶磷微生物是选自下组的青霉属物种,该组由以下各项组成:比莱青霉(Penicillium bilaiae)、发白青霉(Penicillium albidum)、橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、黄暗青霉(Penicillium citreonigrum)、桔青霉(Penicillium citrinum)、指状青霉(Penicilliumdigitatum)、Penicillium frequentas、锈色青霉(Penicillium fuscum)、Penicilliumgaestrivorus、光孢青霉(Penicillium glabrum)、灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvum)、纠缠青霉(Penicillium implicatum)、微紫青霉(Penicilliumjanthinellum)、淡紫青霉(Penicillium lilacinum)、朱黄青霉(Penicilliumminioluteum)、山地青霉(Penicillium montanense)、微黑青霉(Penicilliumnigricans)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、Penicillium pinetorum、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、生根青霉(Penicillium radicans)、甘蓝青霉(Penicillium radicum)、雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)、皱褶青霉(Penicillium rugulosum)、简青霉(Penicilliumsimplicissimum)、离生青霉(Penicillium solitum)、变幻青霉(Penicilliumvariabile)、毡毛青霉(Penicillium velutinum)、纯绿青霉(Penicillium viridicatum)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)、Penicillium fussiporus、扩展青霉(Penicilliumexpansum)、及其组合。
10.如段落1所述的方法,其中该一种或多种微生物稳定化合物是这样一种化合物,该化合物选自下组,该组由以下各项组成:酵母提取物、酪蛋白酸钙、奶、脲、补血剂、牛肉提取物、氨、氨基酸、铵盐、铁盐、亚铁盐、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、卵磷脂、聚山梨醇酯、白蛋白、蛋白胨、及其组合。
11.如段落1所述的方法,其中该一种或多种抗微生物化合物为一种抑细菌剂、一种杀细菌剂、或其组合。
12.如段落11所述的方法,其中该杀细菌剂是一种消毒剂、一种防腐剂、或一种抗生素。
13.如段落12所述的方法,其中该消毒剂选自下组,该组由以下各项组成:活性氯、活性氧、碘、醇、酚类物质、阳离子表面活性剂、强氧化剂、重金属及其盐、酸、和碱。
14.如段落12所述的方法,其中该防腐剂选自下组,该组由以下各项组成:氯制剂、碘制剂、过氧化物、醇、有机酸、酚类化合物、阳离子活性化合物。
15.如段落12所述的方法,其中该抗生素选自下组,该组由以下各项组成:青霉素、头孢菌素、氨基糖苷抗生素、氟喹诺酮、硝基呋喃、万古霉素、单环β-内酰胺、复方新诺明、和甲硝唑。
16.如段落11所述的方法,其中该抑细菌剂是叠氮化钠或硫柳汞。
17.如段落1所述的方法,其中该一种或多种抗微生物化合物是选自下组,该组由以下各项组成:甲醛、苄基-半缩甲醛(苯基甲氧基甲醇)、2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇、1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物、二溴次氨基丙酰胺、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、重氮烷基脲、三(羟甲基)硝基甲烷、邻苯基酚钠、砷酸铜、氧化亚铜、砷、铜、汞的化合物、季铵化合物、叠氮化钠、硫柳汞、或其组合。
18.如段落1所述的方法,其中该方法进一步包括以下步骤:添加一种或多种农业上有益的成分。
19.如段落18所述的方法,其中添加一种或多种农业上有益的成分发生在向一种种子处理组合物添加一种或多种微生物稳定化合物的步骤之后,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性。
20.如段落2所述的方法,其中添加一种或多种农业上有益的成分发生在向该种子处理组合物添加一种或多种有益微生物的步骤之后。
21.如段落18所述的方法,其中添加一种或多种农业上有益的成分与向一种种子处理组合物添加一种或多种微生物稳定化合物的步骤同时发生,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性。
22.如段落20所述的方法,其中添加一种或多种农业上有益的成分与向该种子处理组合物添加一种或多种有益微生物的步骤同时发生。
23.如段落18-22所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分是一种或多种选自下组的植物信号分子,该组由以下各项组成:脂壳寡糖(LCO)、壳寡糖(CO)、几丁质化合物、类黄酮、茉莉酸、茉莉酸甲酯、亚油酸、亚麻酸、卡里金、及其组合。
24.如段落23所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种CO。
25.如段落23所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种LCO。
26.如段落23所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种类黄酮。
27.一种用于包衣种子的方法,包括将一种种子处理组合物施加至一种种子,其中该种子处理组合物包括一种或多种有益微生物以及一种或多种微生物稳定化合物,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性。
28.如段落27所述的方法,其中该一种或多种有益微生物是一种固氮微生物、一种溶磷微生物、或其组合。
29.如段落27所述的方法,其中该一种或多种有益微生物是一种固氮微生物。
30.如段落27所述的方法,其中该一种或多种有益微生物是一种溶磷微生物。
31.如段落29所述的方法,其中该固氮微生物是选自下组的根瘤菌物种,该组由以下各项组成:根瘤菌属、慢生根瘤菌属、固氮根瘤菌属、中华根瘤菌属、中慢生根瘤菌属、固氮螺菌属、及其组合。
32.如段落31所述的方法,其中该固氮微生物是选自下组的细菌物种,该组由以下各项组成:解纤维素根瘤菌(Rhizobium cellulosilyticum)、Rhizobium daejeonense、埃特里根瘤菌(Rhizobium etli)、山羊豆根瘤菌(Rhizobium galegae)、高卢根瘤菌(Rhizobium gallicum)、Rhizobium giardinii、海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)、Rhizobium huautlense、木蓝属根瘤菌(Rhizobium indigoferae)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)、松弛根瘤菌(Rhizobium loessense)、羽扇豆根瘤菌(Rhizobiumlupini)、Rhizobium lusitanum、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、蒙古根瘤菌(Rhizobium mongolense)、汨罗根瘤菌(Rhizobium miluonense)、苏拉根瘤菌(Rhizobiumsullae)、热带根瘤菌(Rhizobium tropici)、居水根瘤菌(Rhizobium undicola)、杨陵根瘤菌(Rhizobium yanglingense)、贝特慢生根瘤菌(Bradyrhizobium bete)、Bradyrhizobiumcanariense、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobium elkanii)、西表岛慢生根瘤菌(Bradyrhizobium iriomotense)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、Bradyrhizobium jicamae、辽宁慢生根瘤菌(Bradyrhizobium liaoningense)、豆薯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium pachyrhizi)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)、茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)、Azorhizobium doebereinerae、岩洞中华根瘤菌(Sinorhizobium abri)、附着中华根瘤菌(Sinorhizobium adhaerens)、美洲中华根瘤菌(Sinorhizobium americanum)、Sinorhizobium aboris费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)、Sinorhizobium indiaense、柯斯第中华根瘤菌(Sinorhizobiumkostiense)、鸡眼草中华根瘤菌(Sinorhizobium kummerowiae)、Sinorhizobium medicae、苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、墨西哥中华根瘤菌(Sinorhizobiummexicanus)、莫雷兰中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)、萨赫靳中华根瘤菌(Sinorhizobium saheli)、好客中华根瘤菌(Sinorhizobium terangae)、新疆中华根瘤菌(Sinorhizobium xinjiangense)、合欢中慢生根瘤菌(Mesorhizobium albiziae)、紫穗槐中慢生根瘤菌(Mesorhizobium amorphae)、含羞草中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumchacoense)、鹰嘴豆中慢生根瘤菌(Mesorhizobium ciceri)、中慢生型华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)、中慢生型百脉根根瘤菌(Mesorhizobium loti)、地中海中慢生根瘤菌(Mesorhizobium mediterraneum)、Mesorhizobium pluifarium、叉叶慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)、温度慢生根瘤菌(Mesorhizobium temperatum)、中慢生天山根瘤菌(Mesorhizobium tianshanense)、亚马逊固氮螺菌(Azospirillumamazonense)、巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)、加拿大固氮螺菌(Azospirillumcanadense)、Azospirillum doebereinerae、台湾固氮螺菌(Azospirillum formosense)、Azospirillum halopraeferans)、伊拉克固氮螺菌(Azospirillum irakense)、Azospirillum largimobile、生脂固氮螺菌(Azospirillum lipoferum)、糖蜜草固氮螺菌(Azospirillum melinis)、曲霉固氮螺菌(Azospirillum oryzae)、皮克斯固氮螺菌(Azospirillum picis)、多皱固氮螺菌(Azospirillum rugosum)、Azospirillumthiophilum、玉米固氮螺菌(Azospirillum zeae)、及其组合。
33.如段落30所述的方法,其中该溶磷微生物是选自下组的物种,该组由以下各项组成:不动杆螨属、节杆菌、节丛孢菌属、曲霉属、固氮螺菌属、芽孢杆菌属、布克氏菌属、假丝酵母属、金色单胞菌属、肠杆菌属、正青霉属、微杆菌属(Exiguobacterium)、克雷白氏菌属、克罗非菌属、细杆菌属(Microbacterium)、毛霉属、拟青霉属、类芽孢杆菌属、青霉菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、链孢子囊菌属、Swaminathania菌属、硫杆菌属、Torulospora菌属、弧菌属、黄色杆菌属、黄单胞菌属、及其组合。
34.如段落33所述的方法,其中该溶磷微生物是选自下组的青霉属物种,该组由以下各项组成:比莱青霉(Penicillium bilaiae)、发白青霉(Penicillium albidum)、橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、黄暗青霉(Penicillium citreonigrum)、桔青霉(Penicillium citrinum)、指状青霉(Penicilliumdigitatum)、Penicillium frequentas、锈色青霉(Penicillium fuscum)、Penicilliumgaestrivorus、光孢青霉(Penicillium glabrum)、灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvum)、纠缠青霉(Penicillium implicatum)、微紫青霉(Penicilliumjanthinellum)、淡紫青霉(Penicillium lilacinum)、朱黄青霉(Penicilliumminioluteum)、山地青霉(Penicillium montanense)、微黑青霉(Penicilliumnigricans)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、Penicillium pinetorum、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、生根青霉(Penicillium radicans)、甘蓝青霉(Penicillium radicum)、雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)、皱褶青霉(Penicillium rugulosum)、简青霉(Penicilliumsimplicissimum)、离生青霉(Penicillium solitum)、变幻青霉(Penicilliumvariabile)、毡毛青霉(Penicillium velutinum)、纯绿青霉(Penicillium viridicatum)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)、Penicillium fussiporus、扩展青霉(Penicilliumexpansum)、及其组合。
35.如段落27所述的方法,其中该一种或多种微生物稳定化合物是这样一种化合物,该化合物选自下组,该组由以下各项组成:酵母提取物、酪蛋白酸钙、奶、脲、补血剂、牛肉提取物、氨、氨基酸、铵盐、铁盐、亚铁盐、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、卵磷脂、聚山梨醇酯、白蛋白、蛋白胨、及其组合。
36.如段落27所述的方法,其中该一种或多种抗微生物化合物为一种抑细菌剂、一种杀细菌剂、或其组合。
37.如段落36所述的方法,其中该杀细菌剂是一种消毒剂、一种防腐剂、或一种抗生素。
38.如段落37所述的方法,其中该消毒剂选自下组,该组由以下各项组成:活性氯、活性氧、碘、醇、酚类物质、阳离子表面活性剂、强氧化剂、重金属及其盐、酸、和碱。
39.如段落37所述的方法,其中该防腐剂选自下组,该组由以下各项组成:氯制剂、碘制剂、过氧化物、醇、有机酸、酚类化合物、阳离子活性化合物。
40.如段落37所述的方法,其中该抗生素选自下组,该组由以下各项组成:青霉素、头孢菌素、氨基糖苷抗生素、氟喹诺酮、硝基呋喃、万古霉素、单环β-内酰胺、复方新诺明、和甲硝唑。
41.如段落36所述的方法,其中该抑细菌剂是叠氮化钠或硫柳汞。
42.如段落27所述的方法,其中该一种或多种抗微生物化合物是选自下组,该组由以下各项组成:甲醛、苄基-半缩甲醛(苯基甲氧基甲醇)、2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇、1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物、二溴次氨基丙酰胺、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、重氮烷基脲、三(羟甲基)硝基甲烷、邻苯基酚钠、砷酸铜、氧化亚铜、砷、铜、汞的化合物、季铵化合物、叠氮化钠、硫柳汞、或其组合。
43.如段落27所述的方法,其中该方法进一步包括以下步骤:添加一种或多种农业上有益的成分。
44.如段落43所述的方法,其中添加一种或多种农业上有益的成分发生在向一种种子施加该种子处理组合物的步骤之后,其中该种子处理组合物包括一种或多种有益微生物以及一种或多种微生物稳定化合物,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性。
45.如段落43所述的方法,其中添加一种或多种农业上有益的成分与向一种种子施加该种子处理组合物的步骤同时发生,其中该种子处理组合物包括一种或多种有益微生物以及一种或多种微生物稳定化合物,该一种或多种微生物稳定化合物抑制一种或多种抗微生物化合物的抗微生物活性。
46.如段落43-45所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分是一种或多种选自下组的植物信号分子,该组由以下各项组成:LCO、CO、几丁质化合物、类黄酮、茉莉酸、茉莉酸甲酯、亚油酸、亚麻酸、卡里金、及其组合。
47.如段落46所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种CO。
48.如段落46所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种LCO。
49.如段落46所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种类黄酮。
50.一种组合物,包括:
1)至少一种化合物,该化合物包含一种或多种微生物稳定化合物;和
2)至少一种选自组(A)至(F)的第二成分
(A)一种杀真菌剂;
(B)一种杀昆虫剂;
(C)一种杀线虫剂;
(D)一个杀螨剂;
(E)一种除草剂;和
(F)一种肥料。
51.如段落50所述的组合物,其中该一种或多种微生物稳定化合物是这样一种化合物,该化合物选自下组,该组由以下各项组成:酵母提取物、酪蛋白酸钙、奶、脲、补血剂、牛肉提取物、氨、氨基酸、铵盐、铁盐、亚铁盐、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、卵磷脂、聚山梨醇酯、白蛋白、蛋白胨、及其组合。
52.如段落50所述的组合物,其中该至少一种选自组(A)至(F)的第二成分包括一种或多种抗微生物化合物。
53.如段落52所述的组合物,其中该一种或多种抗微生物化合物为一种抑细菌剂、一种杀细菌剂、或其组合。
54.如段落53所述的组合物,其中该杀细菌剂是一种消毒剂、一种防腐剂、或一种抗生素。
55.如段落54所述的组合物,其中该消毒剂选自下组,该组由以下各项组成:活性氯、活性氧、碘、醇、酚类物质、阳离子表面活性剂、强氧化剂、重金属及其盐、酸、和碱。
56.如段落54所述的组合物,其中该防腐剂选自下组,该组由以下各项组成:氯制剂、碘制剂、过氧化物、醇、有机酸、酚类化合物、阳离子活性化合物。
57.如段落54所述的组合物,其中该抗生素选自下组,该组由以下各项组成:青霉素、头孢菌素、氨基糖苷抗生素、氟喹诺酮、硝基呋喃、万古霉素、单环β-内酰胺、复方新诺明、和甲硝唑。
58.如段落53所述的组合物,其中该抑细菌剂是叠氮化钠或硫柳汞。
59.如段落52所述的组合物,其中该一种或多种抗微生物化合物是选自下组,该组由以下各项组成:甲醛、苄基-半缩甲醛(苯基甲氧基甲醇)、2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇、1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物、二溴次氨基丙酰胺、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、重氮烷基脲、三(羟甲基)硝基甲烷、邻苯基酚钠、砷酸铜、氧化亚铜、砷、铜、汞的化合物、季铵化合物、叠氮化钠、硫柳汞、或其组合。
60.如段落50所述的组合物,其中该组合物进一步包括一种或多种农业上有益的成分。
61.如段落60所述的组合物,其中该一种或多种农业上有益的成分是一种或多种选自下组的植物信号分子,该组由以下各项组成:LCO、CO、几丁质化合物、类黄酮、茉莉酸、茉莉酸甲酯、亚油酸、亚麻酸、卡里金、及其组合。
62.如段落61所述的组合物,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种CO。
63.如段落61所述的组合物,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种LCO。
64.如段落61所述的组合物,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种类黄酮。
65.如段落61所述的组合物,其中该组合物进一步包括一种或多种有益微生物。
66.如段落65所述的组合物,其中该一种或多种有益微生物是一种固氮微生物、一种溶磷微生物、或其组合。
67.如段落66所述的组合物,其中该一种或多种有益微生物是一种固氮微生物。
68.如段落66所述的组合物,其中该一种或多种有益微生物是一种溶磷微生物。
69.如段落66-67所述的组合物,其中该固氮微生物是选自下组的根瘤菌物种,该组由以下各项组成:根瘤菌属、慢生根瘤菌属、固氮根瘤菌属、中华根瘤菌属、中慢生根瘤菌属、固氮螺菌属、及其组合。
70.如段落69所述的组合物,其中该固氮微生物是选自下组的细菌物种,该组由以下各项组成:解纤维素根瘤菌(Rhizobium cellulosilyticum)、Rhizobium daejeonense、埃特里根瘤菌(Rhizobium etli)、山羊豆根瘤菌(Rhizobium galegae)、高卢根瘤菌(Rhizobium gallicum)、Rhizobium giardinii、海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)、Rhizobium huautlense、木蓝属根瘤菌(Rhizobium indigoferae)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)、松弛根瘤菌(Rhizobium loessense)、羽扇豆根瘤菌(Rhizobiumlupini)、Rhizobium lusitanum、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、蒙古根瘤菌(Rhizobium mongolense)、汨罗根瘤菌(Rhizobium miluonense)、苏拉根瘤菌(Rhizobiumsullae)、热带根瘤菌(Rhizobium tropici)、居水根瘤菌(Rhizobium undicola)、杨陵根瘤菌(Rhizobium yanglingense)、贝特慢生根瘤菌(Bradyrhizobium bete)、Bradyrhizobiumcanariense、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobium elkanii)、西表岛慢生根瘤菌(Bradyrhizobium iriomotense)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、Bradyrhizobium jicamae、辽宁慢生根瘤菌(Bradyrhizobium liaoningense)、豆薯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium pachyrhizi)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)、茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)、Azorhizobium doebereinerae、岩洞中华根瘤菌(Sinorhizobium abri)、附着中华根瘤菌(Sinorhizobium adhaerens)、美洲中华根瘤菌(Sinorhizobium americanum)、Sinorhizobium aboris费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)、Sinorhizobium indiaense、柯斯第中华根瘤菌(Sinorhizobiumkostiense)、鸡眼草中华根瘤菌(Sinorhizobium kummerowiae)、Sinorhizobium medicae、苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、墨西哥中华根瘤菌(Sinorhizobiummexicanus)、莫雷兰中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)、萨赫靳中华根瘤菌(Sinorhizobium saheli)、好客中华根瘤菌(Sinorhizobium terangae)、新疆中华根瘤菌(Sinorhizobium xinjiangense)、合欢中慢生根瘤菌(Mesorhizobium albiziae)、紫穗槐中慢生根瘤菌(Mesorhizobium amorphae)、含羞草中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumchacoense)、鹰嘴豆中慢生根瘤菌(Mesorhizobium ciceri)、中慢生型华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)、中慢生型百脉根根瘤菌(Mesorhizobium loti)、地中海中慢生根瘤菌(Mesorhizobium mediterraneum)、Mesorhizobium pluifarium、叉叶慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)、温度慢生根瘤菌(Mesorhizobium temperatum)、中慢生天山根瘤菌(Mesorhizobium tianshanense)、亚马逊固氮螺菌(Azospirillumamazonense)、巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)、加拿大固氮螺菌(Azospirillumcanadense)、Azospirillum doebereinerae、台湾固氮螺菌(Azospirillum formosense)、Azospirillum halopraeferans)、伊拉克固氮螺菌(Azospirillum irakense)、Azospirillum largimobile、生脂固氮螺菌(Azospirillum lipoferum)、糖蜜草固氮螺菌(Azospirillum melinis)、曲霉固氮螺菌(Azospirillum oryzae)、皮克斯固氮螺菌(Azospirillum picis)、多皱固氮螺菌(Azospirillum rugosum)、Azospirillumthiophilum、玉米固氮螺菌(Azospirillum zeae)、及其组合。
71.如段落66或68所述的组合物,其中该溶磷微生物是选自下组的物种,该组由以下各项组成:不动杆螨属、节杆菌、节丛孢菌属、曲霉属、固氮螺菌属、芽孢杆菌属、布克氏菌属、假丝酵母属、金色单胞菌属、肠杆菌属、正青霉属、微杆菌属(Exiguobacterium)、克雷白氏菌属、克罗非菌属、细杆菌属(Microbacterium)、毛霉属、拟青霉属、类芽孢杆菌属、青霉菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、链孢子囊菌属、Swaminathania菌属、硫杆菌属、Torulospora菌属、弧菌属、黄色杆菌属、黄单胞菌属、及其组合。
72.如段落71所述的组合物,其中该溶磷微生物是选自下组的青霉属物种,该组由以下各项组成:比莱青霉(Penicillium bilaiae)、发白青霉(Penicillium albidum)、橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、黄暗青霉(Penicillium citreonigrum)、桔青霉(Penicillium citrinum)、指状青霉(Penicilliumdigitatum)、Penicillium frequentas、锈色青霉(Penicillium fuscum)、Penicilliumgaestrivorus、光孢青霉(Penicillium glabrum)、灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvum)、纠缠青霉(Penicillium implicatum)、微紫青霉(Penicilliumjanthinellum)、淡紫青霉(Penicillium lilacinum)、朱黄青霉(Penicilliumminioluteum)、山地青霉(Penicillium montanense)、微黑青霉(Penicilliumnigricans)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、Penicillium pinetorum、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、生根青霉(Penicillium radicans)、甘蓝青霉(Penicillium radicum)、雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)、皱褶青霉(Penicillium rugulosum)、简青霉(Penicilliumsimplicissimum)、离生青霉(Penicillium solitum)、变幻青霉(Penicilliumvariabile)、毡毛青霉(Penicillium velutinum)、纯绿青霉(Penicillium viridicatum)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)、Penicillium fussiporus、扩展青霉(Penicilliumexpansum)、及其组合。
实例
以下实例出于说明性目的而提供,并且不旨在限制如在此要求的实施例的范围。可以由熟练的技术人员想到的示例性实例的任何变体都旨在落入本披露的范围内。
材料:
YEM-琼脂(g.l<sup>-1</sup>)
甘露醇(10.0)
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>(0.5)
酵母提取物(0.5)
MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O(0.2)
NaCl(0.007)
YEM-PCNB–刚果红–万古霉素琼脂(g.l<sup>-1</sup>)
甘露醇(10.0)
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>(0.5)
酵母提取物(0.5)
MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O(0.2)
NaCl(0.007)
刚果红(0.04)
PCNB(0.2)
万古霉素(0.001)
盐溶液<sup>*</sup>
NaCL 8.5g
蒸馏水
*经由高压灭菌无菌化
微生物
埃氏慢生根瘤菌SEMIA 587
埃氏慢生根瘤菌SEMIA 5019
慢生型大豆根瘤菌SEMIA 5079
慢生型大豆根瘤菌SEMIA 5080
实例1
针对降低防腐剂苄基半缩甲醛(处于如下浓度,在该浓度处体现由对一种包括该防腐剂的商业杀昆虫剂的当前建议提供)的效应,测试两种微生物稳定化合物、酵母提取物和白蛋白的活性。
使用常规的无菌技术,将10ml的商用液体接种物,该接种物含有埃氏慢生根瘤菌SEMIA 587和埃氏慢生根瘤菌SEMIA 5019(最佳根瘤菌剂II(Nitragin Optimize II),可商购自诺维信公司(Novozymes))转移到一系列的无菌试管中,向这些无菌试管中添加0.7ml含有苄基半缩甲醛的2%溶液,并且在对应的管中并入0.3g的酵母提取物(可商购自默克公司(Merck))或0.3g白蛋白(可商购自西格玛公司(SIGMA)。测试对照细菌存活以用于比较,该对照由接种物组成而无微生物稳定化合物。这些处理提供于表1中。
表1:处理
这些管使用一种涡旋搅拌器混合,转移到一个30℃定轨振荡器上。在20分钟的孵育之后(时间0),取0.1ml样品,并且1/10常规稀释在一系列含有0.9ml无菌盐水溶液(0.85%NaCl,在蒸馏水中)的管中。一式三份将0.1ml稀释物10-5、10-6以及10-7铺板在酵母提取物甘露醇琼脂(YEM)上。在30℃下孵育这些平板。孵育七天之后对集落进行计数。考虑平板稀释和平板体积,计算集落形成单位/毫升(CFU ml-1)的数目。获得样品并且以两小时的间隔进行上述处理。结果显示于表2中。
表2:在苄基半缩甲醛存在下、随着时间的推移,酵母提取物和白蛋白对接种物存活性的影响
处理 0小时 2小时 4小时
1 3.00E+09 1.00E+08 BDL*
2 4.00E+09 3.50E+09 7.00E+08
3 3.40E+09 5.50E+08 5.50E+07
4 3.40E+09 3.50E+09 3.00E+09
*BDL:低于检出限(106CFU/ml)
如在表2中所示,酵母提取物和白蛋白降低在测试浓度下苄基半缩甲醛的存在诱导的有害作用。
实例2:
对描述于实例1中的通用方案进行修改来处理更大的样品。在模拟针对接种物以及杀昆虫剂两者所推荐的剂量的浓度下,测试一种含苄基半缩甲醛的商业杀昆虫剂。
使用含有无菌磁力搅拌器的250ml无菌锥形瓶代替试管。每种溶液的体积提供于表3中。将商品杀昆虫剂转移到一系列的锥形瓶并且将所述量的微生物稳定化合物(来自默克公司的酵母提取物和大豆粉蛋白胨以及来自味之素公司(Ajinomoto)的色氨酸)以250rpm预混合持续6小时。
表3:处理
向每个相应的锥形瓶中添加30ml的接种物(如实例1中所述)、混合,并且立即获得样品以及以2小时间隔获得样品。如实例1中所述对样品进行处理。结果提供于表4中。
表4:在含苄基半缩甲醛的杀昆虫剂的存在下、随着时间的推移,酵母提取物和来自豆粕的蛋白胨对对接种物存活性的影响
*BDL:低于检测限(106CFU/ml)
如在表4中所示,酵母提取物、来自豆粕的蛋白胨、和色氨酸,降低含苄基半缩甲醛的农用化学品的存在诱导的对微生物群体的有害作用。
实例3
在一种基于泥炭的预接种系统中使用酵母提取物和酪蛋白酸钙,该系统包含埃氏慢生根瘤菌SEMIA 587和埃氏慢生根瘤菌SEMIA5019(根瘤菌剂CTS200,可获得自诺维信公司(Novozymes)),并关于种子稳定性,对其与含苄基半缩甲醛农用化学品的相容性进行测试。种子处理遵循在此描述的实验方案完成。
使用磁力搅拌器预混合酵母提取物或酪蛋白酸钙(来自默克公司)与含苄基半缩甲醛农用化学品6小时。在6小时之后,对这些种子进行处理。表5描述了对应于1kg种子的种子处理。
对于组合液体接种物以及其他产品(杀真菌剂、杀昆虫剂等)的处理,根据说明制备处理并且将该处理静置在室温半小时,之后接种种子。
将种子放置在一个聚乙烯袋内,并且添加处理。种子必须占据1/3的该袋的总体积(充气和闭合时)。将该袋的内含物用旋转运动进行剧烈混合,用于内部产品的适当分布。
将具有经接种种子的袋打开并且在室温下静置持续4小时并且进行种子根瘤菌计数。为此,将100粒种子放置在具有100毫升盐水溶液的一个250ml锥形瓶中并且使用磁力搅拌器在大约300rpm经受震荡15分钟。将上清液称作稀释物100。取1ml样品,并且1/10常规稀释在一系列含有9ml无菌盐水溶液(0.85%NaCl,在蒸馏水中)的管中。一式三份将0.1ml稀释物10-1、10-2、10-3、10-4铺板在酵母提取物甘露醇琼脂(YEM)上。
然后将种子置于纸袋中并且保持在30℃室中直到该测试结束。在接种24和48小时之后将测定重复。在七天后读取平板并且在第十天进行检查。计数具有30和300个集落之间的平板并且检查稀释物之间的比率。根据式(I)计算CFU.种子-1。结果提供于表6中。
式(I):
CFU.种子<sup>-1</sup>=计数的集落的数目x 10x稀释因子
表6:当使用含苄基半缩甲醛的农用化学品时,随着时间的推移,酵母提取物和酪蛋白酸钙对种子上微生物存活性的影响
BDL*:低于检测限(102CFU/种子)
如在表6中所示,酵母提取物和酪蛋白酸钙的存在改进用含苄基半缩甲醛的农用化学品处理过的种子中的微生物恢复。
实例4
针对降低防腐剂苄基半缩甲醛(处于如下浓度,在该浓度处体现由一种包括该防腐剂的商业杀昆虫剂的当前建议提供)的效应,测试两种微生物稳定化合物、酵母提取物和白蛋白的活性。
使用常规的无菌技术,将10ml的商用液体接种物,该接种物含有慢生型大豆根瘤菌SEMIA 5079和慢生型大豆根瘤菌SEMIA 5080(Nitragin CellTech HC,可商购自诺维信公司(Novozymes))转移到一系列的无菌试管中,向这些无菌试管中添加0.7ml含有苄基半缩甲醛的2%溶液,并且在对应的管中并入0.3g的酵母提取物(可商购自默克公司(Merck))或0.3g白蛋白(可商购自西格玛公司(SIGMA)。测试对照细菌存活以用于比较,该对照包含接种物而无微生物稳定化合物。这些处理提供于表7中。
表7:处理
这些管使用一种涡旋搅拌器混合,转移到一个30℃定轨振荡器上。在20分钟的孵育之后(时间0),取0.1ml样品,并且1/10常规稀释在一系列含有0.9ml无菌盐水溶液(0.85%NaCl,在蒸馏水中)的管中。一式三份将0.1ml稀释物10-5、10-6以及10-7铺板在酵母提取物甘露醇琼脂(YEM)上。在30℃下孵育这些平板。孵育七天之后对集落进行计数。考虑平板稀释和平板体积,计算集落形成单位/毫升(CFU ml-1)的数目。获得样品并且以两小时的间隔进行上述处理。结果显示于表8中。
表8:在苄基半缩甲醛存在下、随着时间的推移,酵母提取物和白蛋白对接种物存活性的影响
处理 0小时 2小时 4小时 6小时
1 3.10E+09 1.30E+08 BDL* BDL*
2 3.80E+09 3.30E+09 5.00E+08 3.10E+08
3 3.70E+09 5.10E+08 5.50E+07 3.10E+07
4 3.40E+09 3.10E+09 3.00E+09 3.30E+09
*BDL:低于检出限(106CFU/ml)
如在表8中所示,酵母提取物和白蛋白降低在测试浓度下苄基半缩甲醛的存在诱导的有害作用。
实例5
对描述于实例4中的通用方案进行修改来处理更大的样品。在模拟针对接种物以及杀昆虫剂两者所推荐的剂量的浓度下,测试一种含苄基半缩甲醛的商业杀昆虫剂。
使用含有无菌磁力搅拌器的250ml无菌锥形瓶代替试管。每种溶液的体积提供于表9中。将商品杀昆虫剂转移到一系列的锥形瓶并且将所述量的微生物稳定化合物(来自默克公司的酵母提取物和大豆粉蛋白胨以及来自味之素公司(Ajinomoto)的色氨酸)以250rpm预混合持续6小时。
表9:处理
向每个相应的锥形瓶中添加30ml的接种物(如实例4中所述)、混合,并且立即获得样品以及以2小时间隔获得样品。如实例4中所述对样品进行处理。结果提供于表10中。
表10:在含苄基半缩甲醛的杀昆虫剂的存在下、随着时间的推移,酵母提取物和来自豆粕的蛋白胨对对接种物存活性的影响
*BDL:低于检测限(106CFU/ml)
如在表10中所示,酵母提取物、来自豆粕的蛋白胨、和色氨酸,降低含苄基半缩甲醛的农用化学品的存在诱导的对微生物群体的有害作用。
实例6
在一种基于泥炭的预接种系统中使用酵母提取物和酪蛋白酸钙,该系统包含慢生型大豆根瘤菌SEMIA 5079和慢生型大豆根瘤菌SEMIA 5080(可获得自诺维信公司(Novozymes)),并关于种子稳定性,对其与含苄基半缩甲醛农用化学品的相容性进行测试。种子处理遵循在此描述的实验方案完成。
使用磁力搅拌器预混合酵母提取物或酪蛋白酸钙(来自默克公司)与含苄基半缩甲醛农用化学品6小时。在6小时之后,对这些种子进行处理。表11描述了对应于1kg种子的种子处理。
对于组合液体接种物以及其他产品(杀真菌剂、杀昆虫剂等)的处理,根据说明制备处理并且将该处理静置在室温半小时,之后接种种子。
将种子放置在一个聚乙烯袋内,并且添加处理。种子必须占据1/3的该袋的总体积(充气和闭合时)。将该袋的内含物用旋转运动进行剧烈混合,用于内部产品的适当分布。
将具有经接种种子的袋打开并且在室温下静置持续4小时并且进行种子根瘤菌计数。为此,将100粒种子放置在具有100毫升盐水溶液的一个250ml锥形瓶中并且使用磁力搅拌器在大约300rpm经受震荡15分钟。将上清液称作稀释物100。取1ml样品,并且1/10常规稀释在一系列含有9ml无菌盐水溶液(0.85%NaCl,在蒸馏水中)的管中。一式三份将0.1ml稀释物10-1、10-2、10-3、10-4铺板在酵母提取物甘露醇琼脂(YEM)上。
然后将种子置于纸袋中并且保持在30℃室中直到该测试结束。在接种24和48小时之后将测定重复。在七天后读取平板并且在第十天进行检查。计数具有30和300个集落之间的平板并且检查稀释物之间的比率。根据如上提供的式(I)计算CFU.种子-1。结果提供于表12中。
表12:当使用含苄基半缩甲醛的农用化学品时,随着时间的推移,酵母提取物和酪蛋白酸钙对种子上微生物存活性的影响
BDL*:低于检测限(102CFU/种子)
如在表12中所示,酵母提取物和酪蛋白酸钙的存在改进用含苄基半缩甲醛的农用化学品处理过的种子中的微生物恢复。
应该理解的是,本说明书和这些实例说明了本发明实施例并且在所要求的实施例的精神和范围内的其他实施例将也会使本领域的普通技术人员想到。尽管已经结合其具体形式和实施例对本披露进行了描述,但是应该意识到的是,可以在不偏离如所附权利要求书中所限定的实施例的精神或范围的情况下采取除了上文讨论的那些的各种修改。例如,可以用等效物取代具体描述的那些,并且在某些情况下,可以在不偏离如所附权利要求书中所限定的实施例的精神或范围的情况下将具体施用步骤全部颠倒或间插。

Claims (18)

1.一种用于增加种子处理组合物中的农业有益微生物的存活性的方法,所述种子处理组合物包括苯基甲氧基甲醇,该方法包括向该种子处理组合物添加一种或多种选自白蛋白、酪蛋白酸钙、大豆蛋白胨、色氨酸和酵母提取物的稳定化合物,该稳定化合物的量在0.14%w/v苯基甲氧基甲醇的存在下足以增加慢生根瘤菌的存活性。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述稳定化合物是白蛋白。
3.如权利要求1所述的方法,其中所述稳定化合物是酪蛋白酸钙。
4.如权利要求1所述的方法,其中所述稳定化合物是大豆蛋白胨。
5.如权利要求1所述的方法,其中所述稳定化合物是色氨酸。
6.如权利要求1所述的方法,其中所述稳定化合物是酵母提取物。
7.一种种子处理组合物,包括:苯基甲氧基甲醇、一种或多种农业有益微生物以及一种或多种选自白蛋白、酪蛋白酸钙、大豆蛋白胨、色氨酸和酵母提取物的稳定化合物,所述一种或多种稳定化合物以在0.14%w/v苯基甲氧基甲醇的存在下足以增加慢生根瘤菌的存活性的量存在。
8.如权利要求7所述的种子处理组合物,其中所述稳定化合物是白蛋白。
9.如权利要求7所述的种子处理组合物,其中所述稳定化合物是酪蛋白酸钙。
10.如权利要求7所述的种子处理组合物,其中所述稳定化合物是大豆蛋白胨。
11.如权利要求7所述的种子处理组合物,其中所述稳定化合物是色氨酸。
12.如权利要求7所述的种子处理组合物,其中所述稳定化合物是酵母提取物。
13.一种用于包衣种子的方法,所述方法包括将权利要求7所述的种子处理组合物施加至植物种子。
14.如权利要求13所述的方法,其中所述稳定化合物是白蛋白。
15.如权利要求13所述的方法,其中所述稳定化合物是酪蛋白酸钙。
16.如权利要求13所述的方法,其中所述稳定化合物是大豆蛋白胨。
17.如权利要求13所述的方法,其中所述稳定化合物是色氨酸。
18.如权利要求13所述的方法,其中所述稳定化合物是酵母提取物。
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