CN113005059B - 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用 - Google Patents

一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113005059B
CN113005059B CN202110225257.7A CN202110225257A CN113005059B CN 113005059 B CN113005059 B CN 113005059B CN 202110225257 A CN202110225257 A CN 202110225257A CN 113005059 B CN113005059 B CN 113005059B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mesorhizobium
astragalus
astragalus root
nodulation
tetragonolobus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110225257.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113005059A (zh
Inventor
王文丽
李娟�
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
INSTITUTE OF SOIL FERTILIZER AND WATER-SAVING AGRICULTURE GANSU ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Original Assignee
INSTITUTE OF SOIL FERTILIZER AND WATER-SAVING AGRICULTURE GANSU ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by INSTITUTE OF SOIL FERTILIZER AND WATER-SAVING AGRICULTURE GANSU ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES filed Critical INSTITUTE OF SOIL FERTILIZER AND WATER-SAVING AGRICULTURE GANSU ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Priority to CN202110225257.7A priority Critical patent/CN113005059B/zh
Publication of CN113005059A publication Critical patent/CN113005059A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113005059B publication Critical patent/CN113005059B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A01G22/40—Fabaceae, e.g. beans or peas
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Fertilizers (AREA)

Abstract

本发明提供了一株四翅槐中间根瘤菌、黄芪根瘤菌剂及方法和应用，属于微生物菌剂技术领域。本发明提供的四翅槐中间根瘤菌(Mesorhizobiumkowhaii)YS‑1，保藏编号为CGMCCNo.20571，具有结瘤率高、固氮能力强的特性，可显著提高黄芪的总结瘤数、有效结瘤数、结瘤重，减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染，对生产“绿色食品”及农业的高产、高效、低耗有着举足轻重的作用和重要而深远的意义。

Description

一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法 和应用
技术领域
本发明属于微生物菌剂技术领域，具体涉及一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用。
背景技术
农用微生物效用始终贯穿着整个农业生产的过程，加强农用微生物资源研究与产业应用对促进农业产业结构转化以及农民增收等具有积极的推动作用，使用具有环保功能的微生物肥料或者菌剂已成为农业发展的必由之路。
黄芪为豆科多年生草本植物，以根入药，性温，味甘，可补气固表，是药用价值很高的中药材。黄芪的主要有效成分是皂苷、多糖、黄酮类化合物，此外还有叶酸、亚油酸、亚麻酸、胡萝卜苷等成分，在增强机体免疫功能等方面很有效，多糖、皂苷、黄酮是其主要的药效成分。
近年来，随着黄芪药材组分研究的深入，黄芪的开发产品也随之增长，市场需求量和种植面积不断扩大，因此，为了追求高产，化学氮肥在黄芪的种植中使用量不断提高，致使黄芪这种豆科作物根系根瘤很少，土著根瘤菌很不容易侵染黄芪根系。作为豆科植物，黄芪能够与根瘤菌形成共生关系；其中，根瘤菌能够向黄芪提供其生长所需的氮素而为环境减少施加氮肥所带来的压力，也有减少其成品亚硝酸盐含量的作用。然而，土壤中常常有有一些固氮效率低或无效的土著根瘤菌从而导致共生关系效率降低。因此，筛选和开发固氮效率高而且竞争结瘤效率高的根瘤菌非常有必要。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用。本发明提供的四翅槐中间根瘤菌结瘤率高、固氮能力强，可减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一株四翅槐中间根瘤菌(Mesorhizobium kowhaii)YS-1，保藏编号为CGMCC No.20571。
本发明提供了上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1的培养方法，将上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1接种到发酵培养基进行培养。
优选的，所述发酵培养基包括以下浓度的组分：甘露醇8～12g/L、磷酸二氢钾0.2～0.3g/L、磷酸氢二钾0.2～0.3g/L、硫酸镁0.15～0.25g/L、氯化钠0.1～0.2g/L和碳酸钙0.2～0.5g/L；pH 6.8～7.2。
优选的，所述培养的条件为：培养温度25～28℃，培养时间3～5d，搅拌转速180～200rpm，通气量为4.5～5m3/h。
本发明提供了一种黄芪根瘤菌剂，所述黄芪根瘤菌剂包括上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1，所述黄芪根瘤菌剂中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数不低于1×109CFU/mL。
本发明提供了一种提高黄芪结瘤率和/或固氮能力的方法，包括如下步骤：使用上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或上述技术方案中所述的黄芪根瘤菌剂浸染黄芪种苗，侵染后移栽。
优选的，所述侵染包括：将上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或上述技术方案中所述的黄芪根瘤菌剂配制成浸染液对黄芪种苗进行浸染；所述浸染液中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数不低于1×108CFU/mL。
优选的，所述浸染液的使用方法包括浸泡或喷洒。
优选的，所述浸泡的时间为30～50min。
本发明提供了上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或上述技术方案中所述的黄芪根瘤菌剂或上述技术方案中所述的方法在黄芪种植中的应用。
有益效果：
本发明提供了一株四翅槐中间根瘤菌(Mesorhizobium kowhaii)YS-1，保藏编号为CGMCC No.20571。本发明提供的四翅槐中间根瘤菌YS-1结瘤率高、固氮能力强，可减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染，对生产“绿色食品”及农业的高产、高效、低耗有着举足轻重的作用和重要而深远的意义。实施例的结果表明，本发明提供的四翅槐中间根瘤菌YS-1在黄芪大田试验和生产中结瘤固氮效果良好，单株有效结瘤数从常规施肥的1.17～4个增加到15.33～46.3个，产量与常规施肥相同，比氮肥减量30％的处理有效结瘤数多40.16个，产量增加14.5％。
生物保藏说明
四翅槐中间根瘤菌，拉丁文为Mesorhizobium kowhaii，编号为YS-1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号：CGMCC No.20571，保藏日期2020年08月31日，保藏地址北京市朝阳区北辰路西路1号院3号。
附图说明
图1为本发明四翅槐中间根瘤菌YS-1菌落。
具体实施方式
本发明提供了一株四翅槐中间根瘤菌(Mesorhizobium kowhaii)YS-1，保藏编号为CGMCC No.20571。本发明提供的四翅槐中间根瘤菌YS-1从位于甘肃渭源会川镇半阴坡村野生黄芪根瘤的样品中分离分化得到，菌落特征为圆形，无色，光滑,凸，表面湿润，经过对该菌株的16SrRNA基因序列和recA基因序列进行系统学分析，鉴定为Mesorhizobiumkowhaii四翅槐中间根瘤。本发明菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号CGMCC No.20571。本发明提供的四翅槐中间根瘤菌YS-1结瘤率高、固氮能力强，可减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染，对生产“绿色食品”及农业的高产、高效、低耗有着举足轻重的作用和重要而深远的意义。
本发明提供了上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1的培养方法，将上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1接种到发酵培养基进行培养。在本发明中，所述发酵培养基优选包括以下浓度的组分：甘露醇8～12g/L、磷酸二氢钾0.2～0.3g/L、磷酸氢二钾0.2～0.3g/L、硫酸镁0.15～0.25g/L、氯化钠0.1～0.2g/L和碳酸钙0.2～0.5g/L；pH6.8～7.2；进一步优选为甘露醇10g/L、磷酸二氢钾0.25g/L、磷酸氢二钾0.25g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钠0.1g/L、碳酸钙0.3g/L、pH 7.0。在此培养条件下，YS-1菌种发酵液活菌数多，发酵时间短。在本发明中，所述培养的温度优选为25～28℃，进一步优选为27℃；所述培养的时间优选为3～5d，进一步优选为4d。在此培养条件下，YS-1菌种发酵液活菌数最多。
本发明提供了一种黄芪根瘤菌剂，所述黄芪根瘤菌剂包括上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1，所述黄芪根瘤菌剂中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数优选不低于1×109CFU/mL。本发明提供的黄芪根瘤菌剂可以显著提高黄芪的总结瘤数、有效结瘤数、结瘤重，固氮效果良好，可减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染，同时又可保障黄芪总产量与常规施肥相同，对生产“绿色食品”及农业的高产、高效、低耗有着举足轻重的作用和重要而深远的意义。
本发明提供了一种提高黄芪结瘤率和/或固氮能力的方法，包括如下步骤：使用上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或上述技术方案中所述的黄芪根瘤菌剂浸染黄芪种苗，侵染后移栽。在本发明中，所述侵染优选包括：将上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或上述技术方案中所述的黄芪根瘤菌剂配制成浸染液对黄芪种苗进行浸染；所述浸染液中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数优选不低于1×108CFU/mL。在本发明中，所述浸染液的使用方法优选包括浸泡或喷洒；所述浸泡的时间优选为30～50min；所述喷洒优选均匀喷洒在黄芪种苗表面。当移栽的黄芪种苗数量较多时，优选采用喷洒的方法，使浸染更加方便。在本发明中，所述移栽前，优选将侵染后的种苗进行控干，控干后再进行移栽可使黄芪种苗移栽后不易腐烂。本发明提供的提高黄芪结瘤率和/或固氮能力的方法可显著提高黄芪总结瘤数、有效结瘤数、结瘤重，固氮效果良好，可减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染。
本发明提供了上述技术方案中所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或上述技术方案中所述的黄芪根瘤菌剂或上述技术方案中所述的方法在黄芪种植中的应用。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
四翅槐中间根瘤菌YS-1的分离鉴定
本发明四翅槐中间根瘤菌YS-1从位于甘肃渭源会川镇半阴坡村野生黄芪根瘤的样品中分离分化得到，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号CGMCC No.20571。本发明菌落特征为圆形，无色，光滑,凸，表面湿润，菌落无颜色，具体见图1；菌体形态见表1。
表1四翅槐中间根瘤菌YS-1的菌体形态
Figure BDA0002955599940000051
注：“+”为阳性；“-”为阴性
生理生化特征：通过Biolog微生物鉴定系统测试YS-1对不同碳源和氮源的利用情况及化学敏感物质测定，详细描述见表2和表3。
表2 YS-1的碳、氮源利用情况(Biolog GENⅢ生长试验)
Figure BDA0002955599940000052
Figure BDA0002955599940000061
注：“+”为阳性；“-”为阴性
表3 YS-1的化学敏感试验(Biolog GENⅢ)
阳性对照 + 1％乳酸钠 - 林可霉素 + 萘啶酸 +
十四烷硫酸钠 - 1％氯化钠 - 盐酸胍 - 氯化锂 -
万古霉素 - 4％氯化钠 - 夫西地酸 - 亚碲酸钾 -
醋竹桃霉素 - 8％氯化钠 - D-丝氨酸 - 氨曲南 +
利福霉素SV - pH6.0 - 四唑紫 + 丁酸钠 +
二甲胺四环素 - pH5.0 - 四唑蓝 - 溴酸钠 -
注：“+”为不敏感；“-”为敏感
基因鉴定：对YS-1菌体DNA提取、PCR扩增和测序，得到16S rRNA基因序列和recA基因序列，16S rRNA基因序列如SEQ ID No.1，recA基因序列如SEQ ID No.2。
综合YS-1的细胞形态、生理生化特征、16S rDNA基因序列分析、recA基因序列分析，参考《伯杰氏系统细菌学手册》及相关研究论文，将YS-1鉴定为四翅槐中间根瘤菌(Mesorhizobium kowhaii)。
实施例2
四翅槐中间根瘤菌YS-1的培养方法
将四翅槐中间根瘤菌YS-1接种到发酵培养基进行培养；其中，发酵培养基由以下浓度的组分组成：甘露醇10g/L、磷酸二氢钾0.25g/L、磷酸氢二钾0.25g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钠0.1g/L和碳酸钙0.3g/L、pH 7.0；在温度为27℃，搅拌转速为200rpm，通气量为4.8m3/h的条件下培养4d，培养结束后，四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数为1×109CFU/mL。
实施例3
一种黄芪根瘤菌剂，该菌剂中含有本发明的四翅槐中间根瘤菌YS-1，其中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数为1×109CFU/mL。本发明黄芪根瘤菌菌剂由实施例2的培养方法进行发酵得到。
实施例4
一种提高黄芪结瘤率和/或固氮能力的方法
将实施例3的黄芪根瘤菌剂稀释10倍得到浸染液，侵染液中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数为1×108CFU/mL；用得到的浸染液浸泡黄芪种苗全株40min后捞出，阴凉处控干、移栽。
实施例5
一种提高黄芪结瘤率和/或固氮能力的方法
将实施例3的黄芪根瘤菌剂稀释10倍得到浸染液，侵染液中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数为1×108CFU/mL；用得到的浸染液用喷雾器均匀喷洒在黄芪种苗全株表面，阴凉处控干、移栽。
实施例6
四翅槐中间根瘤菌YS-1结瘤固氮效果和对黄芪生长发育的影响
试验设计
共设4个处理3次重复。
处理1：CK1(常规施肥，N 150kg/hm2+P2O5105 kg/hm2)；
处理2：CK2(常规施肥-N30％，N 105kg/hm2+P2O5105 kg/hm2)；
处理3：常规施肥-N30％+菌剂YS-1，N 105kg/hm2+P2O5105kg/hm2+YS-1，其中四翅槐中间根瘤菌YS-1的使用方法同实施例4；
处理4：常规施肥-N30％+菌剂19703，N 105kg/hm2+P2O5105kg/hm2，其中菌株19703来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为ACCC19703，该菌剂的使用方法同实施例4，浸染液中菌株19703的活菌数为1×108CFU/mL；
试验方法
试验于2019年设在甘肃省渭源县会川镇半阴坡村(35.0387°N，104.0556°E)，试验不施有机肥，小区面积16m2(4m×4m)。黄芪于2019年4月26日移栽，按行距50cm、株距5cm进行露地平栽，栽培密度400002株·hm-2。
施肥数量及方式：试验中各处理按试验设计的相应肥料用量在播前作为基肥一次性撒施后耙磨整地。整个生长期间不追肥。
试验结果
表4不同根瘤菌剂对黄芪上的总结瘤数的影响(单位：个/株)
Figure BDA0002955599940000071
Figure BDA0002955599940000081
表5不同根瘤菌剂对黄芪上的有效结瘤数的影响(单位：个/株)
Figure BDA0002955599940000082
表6不同根瘤菌剂对黄芪上的结瘤重的影响(单位：g/株)
Figure BDA0002955599940000083
表7不同根瘤菌剂对黄芪产量的影响(单位：kg/亩)
Figure BDA0002955599940000084
由表4～6的结果可知，接种四翅槐中间根瘤菌YS-1与常规施肥相比黄芪根部总结瘤数、有效结瘤数和鲜瘤重显著增加3924.79％、4033.98％、2137.60％；接种四翅槐中间根瘤菌YS-1与氮肥减量30％的处理相比黄芪根部总结瘤数、有效结瘤数和鲜瘤重显著增加663.21％、654.08％、230.14％；接种四翅槐中间根瘤菌YS-1菌剂与根瘤菌剂19703相比黄芪根部总结瘤数、有效结瘤数和鲜瘤重显著增加440.02％、444.07％、279.25％。
由表7的结果可知，接种四翅槐中间根瘤菌YS-1和常规施肥处理的黄芪的产量相同，接种根瘤菌剂19703与常规施肥相比黄芪产量减少8.17％，氮肥减量30％的处理与常规施肥相比黄芪产量减少9.13％，由此说明黄芪接种四翅槐中间根瘤菌YS-1形成的根瘤能够有效的固定空气中的氮素，供给黄芪利用。
实施例7
四翅槐中间根瘤菌YS-1大田示范效果
试验设计
共设2个处理3次重复。
处理1：CK1(常规施肥，N 150kg/hm2+P2O5105 kg/hm2)；
处理2：常规施肥-30％N+YS-1，N105kg/hm2+P2O5105kg/hm2+YS-1，其中四翅槐中间根瘤菌YS-1的使用方法同实施例4；
试验方法
2020年在甘肃省陇西县首阳镇董家村示范，示范面积100亩。黄芪于2019年4月15日移栽，按行距50cm、株距5cm进行露地平栽，栽培密度400002株·hm-2。
施肥数量及方式：试验中各处理按试验设计的相应肥料用量在播前作为基肥一次性撒施后耙磨整地。整个生长期间不追肥。
试验结果
表8四翅槐中间根瘤菌YS-1大田示范对黄芪结瘤的影响
处理 总根瘤数(个/株) 有效根瘤数(个/株)
CK 4.520 4.000
常规施肥-30％N+YS-1 17.67 15.33
表9四翅槐中间根瘤菌YS-1大田示范增产效果
处理 根长(cm) 根粗(cm) 根重(g) 鲜亩产(kg/亩)
CK 38.94b 1.18b 30.79b 431.11b
常规施肥-30％N+YS-1 43.88a 1.28a 35.35a 494.95a
由表8结果可知，四翅槐中间根瘤菌YS-1在甘肃黄芪道地产区大田示范中结瘤固氮效果稳定，单株有效结瘤数能达到15.33个，比常规施肥多11.3个。由表9的结果可知，接种四翅槐中间根瘤菌YS-1能显著增加黄芪根长、根粗、根重和产量，与不接菌剂的对照相比黄芪根长、根粗、根重和产量分别增加12.70％、8.47％、14.81％、14.8％。
上述实施例的结果表明，本发明提供的四翅槐中间根瘤菌YS-1在大田试验和生产中结瘤固氮效果良好，单株有效结瘤数从常规施肥的1.17～4个增加到15.33～46.3个，产量与常规施肥相同，比氮肥减量30％的处理有效结瘤数多40.16个，产量增加14.5％。本发明提供的四翅槐中间根瘤菌YS-1结瘤率高、固氮能力强，可减少黄芪种植中化学氮肥的用量，降低氮肥对环境的污染，对生产“绿色食品”及农业的高产、高效、低耗有着举足轻重的作用和重要而深远的意义。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其它实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
序列表
<110> 甘肃省农业科学院土壤肥料与节水农业研究所
<120> 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1312
<212> DNA
<213> 四翅槐中间根瘤菌YS-1(Mesorhizobium kowhaii YS-1)
<400> 1
agcgccttcg ggtaaaacca actcccatgg tgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga 60
acgtattcac cgcggcatgc tgatccgcga ttactagcga ttccaacttc atgcactcga 120
gttgcagagt gcaatccgaa ctgagatggc ttttggagat tagctcgacc tcgcggtctc 180
gctgcccact gtcaccacca ttgtagcacg tgtgtagccc agcccgtaag ggccatgagg 240
acttgacgtc atccccacct tcctctcggc ttatcaccgg cagtcccctt agagtgccca 300
acttaatgct ggcaactaag ggcgagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct 360
cacgacacga gctgacgaca gccatgcagc acctgtcacc ggtccagccg aactgaaggt 420
taccatctct ggaaaccgcg accgggatgt caagggctgg taaggttctg cgcgttgctt 480
cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagttttaa 540
tcttgcgacc gtactcccca ggcggagagc ttaatgcgtt agctgcgcca ccgacaagta 600
aacttgccga cggctagctc tcatagttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg 660
tttgctcccc acgctttcgc acctcagcgt cagtaccgag ccagtgagcc gccttcgcca 720
ctggtgttcc tccgaatatc tacgaatttc acctctacac tcggaattcc actcacctct 780
ctcggactcg agattgccag tattaaaggc agttccgggg ttgagccccg ggatttcacc 840
cctaacttaa caatccgcct acgtgcgctt tacgcccagt aattccgaac aacgctagcc 900
cccttcgtat taccgcggct gctggcacga agttagccgg ggcttcttct acggttaccg 960
tcattatctt caccgttgaa agagctttac aaccctaggg ccttcatcac tcacgcggca 1020
tggctggatc aggctttcgc ccattgtcca atattcccca ctgctgcctc ccgtaggagt 1080
ttgggccgtg tctcagtccc aatgtggctg atcatcctct cagaccagct atggatcgtc 1140
gccttggtag gccattaccc caccaactag ctaatccaac gcgggctcat ccatctccga 1200
taaatctttc tcccgaagga cgtatacggt attagctcca gtttcccgga gttgttccgt 1260
agagatgggt agattcccac gcgttactca cccgtctgcc gctcctcttg cg 1312
<210> 2
<211> 533
<212> DNA
<213> 四翅槐中间根瘤菌YS-1(Mesorhizobium kowhaii YS-1)
<400> 2
tcagcttgcg cagcgcctgg ctcatcaggc gggcttgcag gccgggcagc gaatcgccca 60
tctcgccttc gatttcggcg cgcggcgtca gcgccgcgac cgaatcgacc accagcacgt 120
cgatggcgcc ggagcgcacc agcgtgtcgc agatttccag cgcctgctca ccggtgtcgg 180
gctgcgagat cagaaggttt tccagatcga cgccaagctt gcgggcatag accggatcga 240
gcgcatgctc ggcatcgacg aaggcgcaga tgccgccctt cttctgggct tcggccacgg 300
tgtgcagcgc cagcgtcgtc tgtcccgagc tttccggccc gtagatctcg acgatgcggc 360
cgcgcggcag gccaccgacg ccaagcgcga tgtcgaggcc aagcgagccg gtcggcacgg 420
tttcgatctc gacgacctgc tcgttcgcgc cgagccgcat gatcgagcct ttgccgaaag 480
cccgctcgat ttgcgacagc gccgcatcca gagcctttga tttgtccacc gat 533

Claims (10)

1.一株四翅槐中间根瘤菌(Mesorhizobium kowhaii)YS-1，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.20571。
2.权利要求1所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1的培养方法，其特征在于，将权利要求1所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1接种到发酵培养基进行培养。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下浓度的组分：甘露醇8～12g/L、磷酸二氢钾0.2～0.3g/L、磷酸氢二钾0.2～0.3g/L、硫酸镁0.15～0.25g/L、氯化钠0.1～0.2g/L和碳酸钙0.2～0.5g/L；pH 6.8～7.2。
4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述培养的条件为：培养温度25～28℃，培养时间3～5d，搅拌转速180～200rpm，通气量4.5～5m3/h。
5.一种黄芪根瘤菌剂，其特征在于，所述黄芪根瘤菌剂包括权利要求1所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1，所述黄芪根瘤菌剂中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数不低于1×109CFU/mL。
6.一种提高黄芪结瘤率和/或固氮能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：使用权利要求1所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或权利要求5所述的黄芪根瘤菌剂浸染黄芪种苗，侵染后移栽。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述侵染包括：将权利要求1所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或权利要求5所述的黄芪根瘤菌剂配制成浸染液对黄芪种苗进行浸染；所述浸染液中四翅槐中间根瘤菌YS-1的活菌数不低于1×108CFU/mL。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述浸染液的使用方法包括浸泡或喷洒。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述浸泡的时间为30～50min。
10.权利要求1所述的四翅槐中间根瘤菌YS-1或权利要求5所述的黄芪根瘤菌剂或权利要求6～9任一项所述的方法在黄芪种植中的应用。
CN202110225257.7A 2021-03-01 2021-03-01 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用 Active CN113005059B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110225257.7A CN113005059B (zh) 2021-03-01 2021-03-01 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110225257.7A CN113005059B (zh) 2021-03-01 2021-03-01 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113005059A CN113005059A (zh) 2021-06-22
CN113005059B true CN113005059B (zh) 2022-09-13

Family

ID=76387406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110225257.7A Active CN113005059B (zh) 2021-03-01 2021-03-01 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113005059B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113396868A (zh) * 2021-06-29 2021-09-17 中国科学院南京土壤研究所 一种土壤中线虫原位富集方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014160827A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 Novozymes Bioag A/S Compositions and methods for enhancing microbial stability
WO2014193746A1 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Novozymes Bioag A/S Compositions and methods for enhancing germination
CN106591183A (zh) * 2016-12-09 2017-04-26 中国农业大学 一株根瘤菌及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014160827A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 Novozymes Bioag A/S Compositions and methods for enhancing microbial stability
WO2014193746A1 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Novozymes Bioag A/S Compositions and methods for enhancing germination
CN106591183A (zh) * 2016-12-09 2017-04-26 中国农业大学 一株根瘤菌及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Increasing the Legume–Rhizobia Symbiotic Efficiency Due to the Synergy between Commercial Strains and Strains Isolated from Relict Symbiotic Systems;Vera Safronova等;《Agronomy》;20210712;第11卷(第11期);1-17 *
Mesorhizobium kowhaii strain Opo-324 16S ribosomal RNA gene, partial sequence;Safronova,V.等;《Genbank database》;20180314;MF661790.1 *
Two Broad Host Range Rhizobial Strains Isolated From Relict Legumes Have Various Complementary Effects on Symbiotic Parameters of Co-inoculated Plants;Vera Safronova等;《Frontiers in microbiology》;20190315;第10卷;1-14 *
川西高寒山区野生药用黄芪根瘤菌的遗传多样性;江华明等;《西南农业学报》;20181128;第31卷(第11期);2268-2275 *
斜茎黄芪根瘤菌结瘤基因nod A PCR扩增及PCR-RFLP分析;高俊莲等;《微生物学杂志》;20060730;第26卷(第04期);1-5 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113005059A (zh) 2021-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101659932B (zh) 防除连作烟草青枯病的拮抗菌及用其微生物有机肥料
CN104263684B (zh) 一种产铁载体类芽孢杆菌及其应用
CN103484396B (zh) 一种嗜热一氧化碳链霉菌新菌株及其应用
CN106085925A (zh) 一种耐盐细菌t5s2及其在微生物肥料中的应用
CN101886055B (zh) 用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌njl-14
CN101519644B (zh) 一株根瘤菌及其应用
CN106399148A (zh) 一种泌铵固氮菌及其应用
CN113005059B (zh) 一株四翅槐中间根瘤菌及其培养方法、黄芪根瘤菌剂及方法和应用
CN109055274B (zh) 一株锦鸡儿根瘤菌及其发酵培养方法与应用
CN107628894A (zh) 提高土壤肥力的复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN103045500B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm295及其应用
CN113151085A (zh) 一种防治烟草土传病害的复合微生物菌剂及其应用
CN104774788B (zh) 垃圾堆肥中草坪耐盐强化复合微生物菌群的制备方法及应用
CN118146977A (zh) 孟氏假单胞菌、含有其的复合种子包衣剂及应用
CN104593302B (zh) 道地黄芪固氮菌新菌株t16及发酵液的制备方法
CN110241040B (zh) 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用
CN115594549A (zh) 改良盐碱地土壤耕层结构的微生物有机肥及其制备方法
CN103013857B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm565及其应用
CN103013856B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm611及其应用
CN115287229B (zh) 一株能够促进扁蓿豆生长和结瘤固氮的根瘤菌及其应用
CN103045501B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm283及其应用
CN102978138B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm185及其应用
CN102978139B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm495及其应用
CN102978136B (zh) 中慢生根瘤菌kdrm024及其应用
CN114703089B (zh) 一株短小芽孢杆菌t5-1及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant