CN106591183A - 一株根瘤菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株根瘤菌及其应用。本发明所提供的根瘤菌为北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.11015。实验证明，本发明所提供的北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524 CGMCC No.11015在促进黄芪植株生长和/或提高黄芪品质和/或黄芪植株的育苗中具有重要的应用价值；促进黄芪植株生长体现为结瘤数增加和/或地下部分干重增加；提高黄芪品质体现为黄芪根中的黄芪多糖的百分含量的增加。

Description

一株根瘤菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一株根瘤菌及其应用。
背景技术
根瘤菌是一类能与豆科植物结瘤共生的固氮细菌。当根瘤菌与合适的豆科植物共生时，根瘤菌固定空气中的氮气为氨，从而为豆科植物提供氮素营养，而豆科植物则通过光合作用为根瘤菌提供碳水化合物和能量，两者形成良好的共生关系。
由于根瘤菌与豆科植物之间存在着相互识别作用，且这种作用又受到地理环境和土壤理化因子的影响，因此需要选育适合豆科植物且适应环境的根瘤菌，才能达到两者之间互惠互利的共生效果。在从未种植过豆科植物的土壤内种植豆科植物，需要接种合适的根瘤菌才能保障豆科植物良好地生长。
黄芪是常用中药材，为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓和敛疮生肌等功能。黄芪多糖是黄芪的主要活性成份，具有增强免疫系统功能、抗炎症、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、延缓衰老和降血糖等作用，是衡量黄芪品质和药效高低的重要指标。
随着野生黄芪的资源逐渐枯竭且更新缓慢，人工黄芪的栽培在我国山西、宁夏、甘肃等地逐渐推广，其不仅可以减少水土流失，保护生态环境，而且还能提高种植户的经济收入。由于黄芪多种植在土壤贫瘠的荒漠、荒山地区，而在这些地区，要通过人工施肥的方式来促进黄芪生长，又存在着缺少肥源，施肥困难等诸多问题，同时种植区域多为新开垦的土地，土壤中缺乏相匹配的根瘤菌，即使存在，在数量上也相对较少，因此，人工栽培的黄芪存在着结瘤少、生长状态差、黄芪多糖含量低等问题。可见，寻找促进黄芪植株生长和提高黄芪的品质的根瘤菌势在必行。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何促进黄芪植株生长和提高黄芪的品质。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了一株根瘤菌。
本发明所提供的根瘤菌为北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524，该菌株已于2015年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.11015。北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524 CGMCCNo.11015简称北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524。
本发明还提供了一种菌剂，该菌剂含有北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524。
所述菌剂的用途可为a1)、a2)或a3)：a1)促进黄芪植株生长；a2)提高黄芪品质；a3)黄芪植株的育苗。
所述菌剂可为菌剂甲或菌剂乙。
所述菌剂甲的制备方法可包括如下步骤：将北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524接种至根瘤菌培养基并进行培养，获得OD600nm值为0.8～1.0的培养菌液，即为菌剂甲。
所述菌剂甲的制备方法中，所述培养的具体条件具体可为：28℃、160rpm/min振荡培养3天。
所述菌剂乙的制备方法可包括如下步骤：将北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524接种至根瘤菌培养基并进行培养，获得OD600nm值为0.8～1.0的培养菌液；向所述培养菌液中加入微量元素溶液(1×)和羧甲基纤维素钠水溶液得到混合液，即为CCBAU 03524菌剂乙。所述混合液中，微量元素溶液(1×)的浓度具体可为1mL/L，羧甲基纤维素钠的浓度具体可为1g/100mL。所述微量元素溶液(1×)的制备方法具体可如下：将ZnSO4 0.22g、MnSO4 1.81g、H3BO4 2.86g、CuSO4·5H2O 0.8g和H2MoO4 0.02g溶于蒸馏水，用蒸馏水定容到1L，然后121℃灭菌30min。
所述菌剂乙的制备方法中，所述培养的具体条件具体可为：28℃、160rpm/min振荡培养3天。
上述任一所述根瘤菌培养基可为YMA液体培养基。所述YMA液体培养基的制备方法具体可如下：将甘露醇10g、酵母粉3g、MgSO4 0.2g、NaCl 0.1g、K2HPO4 0.25g和KH2PO4 0.25g溶于蒸馏水，用蒸馏水定容至1L，调节pH值至7.0；然后121℃灭菌30min。
除了活性成分，所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物。所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
所述北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524或上述任一所述菌剂在促进黄芪植株生长中的应用也属于本发明的保护范围。
上述促进黄芪植株生长的应用中，所述促进黄芪植株生长可体现为结瘤数增加和/或地下部分干重增加。
所述北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524或上述任一所述菌剂在提高黄芪品质中的应用也属于本发明的保护范围。
上述提高黄芪品质的应用中，所述提高黄芪品质可体现为黄芪根中的黄芪多糖的百分含量的增加。
所述北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524或上述任一所述菌剂在黄芪植株的育苗中的应用也属于本发明的保护范围。
上述任一所述的应用中，所述黄芪具体可为蒙古黄芪。
实验证明，将CCBAU 03524菌剂(含有北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524)、01583菌剂(含有菌株01583)、1A20菌剂(含有菌株1A20)或水接种到蒙古黄芪种子的根部区，培养一段时间后，与接种其它菌剂或水的蒙古黄芪相比，接种CCBAU 03524菌剂的蒙古黄芪的平均地下部分干重和平均结瘤数均显著增加；将蒙古黄芪植株的根部蘸上CCBAU 03524菌剂、01583菌剂、1A20菌剂或水，然后移栽，培养一段时间后，与根部蘸上水进行移栽的蒙古黄芪相比，根部蘸上CCBAU 03524菌剂进行移栽的蒙古黄芪根中黄芪多糖的平均百分含量显著增加，而根部蘸上01583菌剂或1A20菌剂进行移栽的蒙古黄芪根中黄芪多糖的平均百分含量则较低。因此，本发明所提供的北方中慢生根瘤菌CCBAU 03524在促进黄芪植株生长和/或提高黄芪品质和/或黄芪植株的育苗中具有重要的应用价值。
附图说明
图1为不同根瘤菌菌剂对蒙古黄芪的地下部分干重和根瘤数的影响。
图2为不同根瘤菌菌剂对蒙古黄芪根中黄芪多糖的百分含量的影响。
保藏说明
菌种名称：北方中慢生根瘤菌
拉丁名：Mesorhizobium septentrionale
菌株编号：CCBAU 03524
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2015年06月24日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.11015
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
YMA液体培养基：将甘露醇10g、酵母粉3g、MgSO4 0.2g、NaCl 0.1g、K2HPO4 0.25g和KH2PO4 0.25g溶于蒸馏水，用蒸馏水定容至1L，调节pH值至7.0；然后121℃灭菌30min。
YMA固体培养基：向YMA液体培养基中加入琼脂粉，使其浓度为20g/L得到的培养基。
YMA固体平板：将约50℃的YMA固体培养基倒入无菌培养皿，凝固后得到YMA固体平板。
蛭石混合物为向蛭石中加入植物低氮营养液(1×)混匀而成，其中植物低氮营养液(1×)的加入量以将蛭石混合物攥到手中有液滴出现但不能滴下，松手后蛭石混合物可散开为宜。
植物低氮营养液(1×)：将Ca(NO3)2 0.03g、CaSO4 0.46g、KCl 0.075g、MgSO4·7H2O0.06g、K2HPO4 0.136g、柠檬酸铁0.075g和微量元素溶液(1×)1mL溶于蒸馏水，用蒸馏水定容至1L；然后121℃灭菌30min。
微量元素溶液(1×)：将ZnSO4 0.22g、MnSO4 1.81g、H3BO4 2.86g、CuSO4·5H2O0.8g和H2MoO4 0.02g溶于蒸馏水，用蒸馏水定容到1L；然后121℃灭菌30min。
水琼脂固体平板：将琼脂粉0.7g溶于蒸馏水，用蒸馏水定容至100mL，121℃灭菌30min；灭菌后冷却至50℃左右时，倒入无菌培养皿，凝固后得到水琼脂固体平板。
蒽酮试剂：取烧杯，先加入0.200g蒽酮和1.00g硫脲，然后缓慢加入100mL浓硫酸(边加边搅拌)，待完全溶解后(呈浅黄色)，置于棕色瓶中，冷暗处保存备用。
蒙古黄芪的种子为山西浑源恒鑫农业科技推广有限公司的产品。
实施例1、根瘤菌的分离和鉴定
一、分离
1、消毒
(1)取采自山西浑源县官儿乡种植的黄芪植株的根瘤，先用无菌的浓度为0.8g/100mL的生理盐水清洗，然后用无菌的浓度为0.8g/100mL的生理盐水浸泡至完全膨胀，浸泡温度为4℃。
(2)完成步骤(1)后，取所述根瘤，置于无菌离心管中，加入适量的95％(v/v)乙醇水溶液浸泡45s。
(3)完成步骤(2)后，弃液相，向所述无菌离心管中加入浓度为2.4g/100mL的次氯酸钠水溶液至所述根瘤被完全浸没，消毒5min。
(4)完成步骤(3)后，弃液相，用无菌水洗涤6～7次。
2、分离
完成步骤1后，取所述根瘤，在无菌条件下捣碎，得到混合液；然后蘸取混合液在YMA固体平板上划线(采用三线法)，28℃恒温倒置培养，直至长出单菌落。挑选单菌落，反复纯化3次以上。将筛选到的三个菌株分别命名为菌株CCBAU 03524、菌株01583和菌株1A20。
二、鉴定
参考文献(陈文新、汪恩涛主编.《中国根瘤菌》.北京：科学出版社，2011年.)鉴定步骤一中2分离的根瘤菌。部分鉴定结果具体如下：
经革兰氏染色后，菌株CCBAU 03524、菌株01583和菌株1A20均为革兰氏阴性菌。
通过显微镜观察，菌株CCBAU 03524为杆状，长2.38微米，宽0.8微米。
测序结果表明，菌株CCBAU 03524的基因组DNA中持家基因recA的部分核苷酸序列如序列表中的序列1所示。通过MEGA5.0软件将序列表中的序列1与NCBI中的序列进行比对，并用Kimura-2-parameter模型构建邻接(Neighbor-Joining，NJ)系统发育树状图，bootstrap值设定为1000。结果表明，菌株CCBAU 03524与北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)的同源性为94.6％。
结果表明，菌株01583、菌株1A20和菌株CCBAU 03524均为根瘤菌。菌株CCBAU03524具体为北方中慢生根瘤菌。
实施例2、根瘤菌的应用
一、根瘤菌菌剂的制备
CCBAU 03524菌剂：将菌株CCBAU 03524在YMA固体平板上活化，然后挑取单菌落接种于装有200mL YMA液体培养基的500mL锥形瓶中，28℃、160rpm/min振荡培养3天，得到OD600nm值为0.8～1.0的培养菌液；向所述培养菌液中加入微量元素溶液(1×)和羧甲基纤维素钠水溶液，得到CCBAU 03524菌剂；CCBAU 03524菌剂中，微量元素溶液(1×)的浓度为1mL/L，羧甲基纤维素钠的浓度为1g/100mL。
按照上述CCBAU 03524菌剂的制备方法，将菌株CCBAU 03524替换为菌株01583，得到01583菌剂。
按照上述CCBAU 03524菌剂的制备方法，将菌株CCBAU 03524替换为菌株1A20，得到1A20菌剂。
二、蒙古黄芪种子的培养
1、先用65％(v/v)硫酸水溶液浸泡蒙古黄芪种子4min，再用无菌水冲洗干净。
2、完成步骤1后，取蒙古黄芪种子，先加入适量95％(v/v)乙醇水溶液浸泡45s；弃液相，再加入浓度为2.4g/100mL的次氯酸钠水溶液消毒8min；弃液相，最后用无菌水洗涤6～7次。
3、完成步骤2后，将蒙古黄芪种子转移到水琼脂固体平板上，28℃黑暗培养至根长为1～2cm。
三、步骤一制备的根瘤菌菌剂对蒙古黄芪的结瘤数和地下部分干重的影响
1、实验组一(在蛭石混合物中种植)
实验重复三次取平均值，每次种植蒙古黄芪种子5粒。
(1)参考文献(Leonard LT.A Simple Assembly for Use in the Testing ofCultures of Rhizobia.J Bacteriol.1943Jun；45(6):523-7.)制备双层杯装置，121℃灭菌30min。
(2)完成步骤(1)后，取双层杯装置，上层杯子填装经121℃灭菌30min的蛭石混合物，下层杯子盛放无菌蒸馏水，上层杯子和下层杯子之间用16～20cm长的纱布进行连接(目的为保证蛭石混合物可以源源不断的从下层杯子中吸水而保持湿润状态)；然后，将步骤二中3培养的蒙古黄芪种子移种到蛭石混合物中(注意：需将种子的根部向下，子叶向上)。
(3)完成步骤(2)后，吸取步骤一制备的根瘤菌菌剂(CCBAU 03524菌剂、01583菌剂或1A20菌剂)，接种到蒙古黄芪种子的根部区，然后用封口膜封闭上层杯子。每粒蒙古黄芪种子接种1mL的根瘤菌菌剂。
(4)完成步骤(3)后，将双层杯装置移入光照温室中，进行光暗交替培养(即光培养和暗培养交替，其中光培养的温度为25℃，暗培养的温度为18℃，光暗交替培养的周期具体为16h光培养/8h暗培养)。待蒙古黄芪种子出现2～3片叶子后，在封口膜上剪一个开口，使蒙古黄芪植株正好能够穿过开口向上生长。播种45天后，统计实验组一中每株蒙古黄芪的结瘤数和地下部分干重，并进一步计算获得每株蒙古黄芪的平均结瘤数和平均地下部分干重。蒙古黄芪的生长过程中，需定时浇水以保持适宜湿度。
2、对照组一(在蛭石混合物中种植)
按照步骤1的方法，将步骤(3)中的根瘤菌菌剂替换为无菌水，其它步骤均不变，得到对照组一中每株蒙古黄芪的平均结瘤数和平均地下部分干重。
3、实验组二(在土壤中种植)
按照步骤1的方法，将步骤(2)中的经121℃灭菌30min的蛭石混合物替换为采自山西浑源县官儿乡黄芪种植地的土壤样品，其它步骤均不变，得到实验组二中每株蒙古黄芪的平均结瘤数和平均地下部分干重。
4、对照组二(在土壤中种植)
按照步骤1的方法，将步骤(2)中的经121℃灭菌30min的蛭石混合物替换为采自山西浑源县官儿乡黄芪种植地的土壤样品，将步骤(3)中的根瘤菌菌剂替换为无菌水，其它步骤均不变，得到对照组二中每株蒙古黄芪的平均结瘤数和平均地下部分干重。
部分实验结果见图1(A为实验组二和对照组二中每株蒙古黄芪的平均地下部分干重；B为实验组二和对照组二中每株蒙古黄芪的平均结瘤数；03524为接种CCBAU 03524菌剂，01583为接种01583菌剂，1A20为接种1A20菌剂，对照为接种水)。结果表明，与接种其它菌剂或水的蒙古黄芪相比，接种CCBAU 03524菌剂的蒙古黄芪的平均地下部分干重和平均结瘤数均显著增加。
四、步骤一制备的根瘤菌菌剂对蒙古黄芪根中黄芪多糖的百分含量的影响
2014年4月，挖出种植与山西浑源县官儿乡的蒙古黄芪植株，然后将大小基本一致的5株蒙古黄芪植株的根部均蘸上CCBAU 03524菌剂、01583菌剂、1A20菌剂或水(作为对照)，移栽到新挖的沟渠(沟渠深为15-20cm)中，根系平放，盖上土壤，使蒙古黄芪继续生长。2014年10月，挖出上述蒙古黄芪植株，然后检测蒙古黄芪根中黄芪多糖的百分含量并取平均值，即得到蒙古黄芪根中黄芪多糖的平均百分含量。检测蒙古黄芪根中黄芪多糖的百分含量的步骤如下：
①标准曲线的制作
a、准确称取105℃烘干至恒重的葡萄糖10.00mg，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得到浓度为100mg/L的葡萄糖母液；然后精确吸取0.0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL或3.0mL葡萄糖母液，置于10mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀，得到葡萄糖标准溶液。
b、完成步骤a后，吸取1.0mL葡萄糖标准溶液，置于干燥具塞试管中，然后加入蒸馏水补足至2.0mL，摇匀；然后将所述干燥具塞试管置于冰水浴，并小心的沿管壁加入蒽酮试剂5.0mL，加塞，混匀。
c、完成步骤b后，将所述干燥具塞试管置于沸水浴10min，然后冷水冷却，得到混合物。
采用分光光度计测定混合物在625nm处的吸光值，实验重复3次，取平均值。
以葡萄糖质量(μg)为横坐标，OD625nm值为纵坐标，绘制标准曲线。
②黄芪多糖溶液的制备
a、取蒙古黄芪的干燥根，粉碎后先过20目筛，再在80℃下干燥至恒重，得到黄芪粉末。
b、完成步骤a后，将黄芪粉末3.00g置于三角瓶中，加入50mL蒸馏水沸水浴中浸提1h，真空抽滤，得到滤液1和滤渣1；向滤渣1中加入50mL蒸馏水沸水浴中浸提1h，真空抽滤，得到滤液2和滤渣2。将滤液1和滤液2合并，然后浓缩至20mL，即为浓缩滤液。
c、完成步骤b后，取20mL浓缩滤液，加入乙醇，得到混合体系；混合体系中乙醇的含量为85％(v/v)。
d、完成步骤c后，将所述混合体系密闭静置36h，抽滤，得到滤渣3；将滤渣3置于减压干燥箱内，70℃干燥至恒重，即获得黄芪粗多糖。
准确称取20mg黄芪粗多糖，用蒸馏水溶解并定容至50mL，摇匀，即为黄芪多糖溶液。
③检测黄芪多糖含量
a、取黄芪多糖溶液3.0mL，置于10mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀，得到溶液甲。
b、完成步骤a后，吸取溶液甲1.0mL，置于干燥具塞试管中，然后加入蒸馏水补足至2.0mL，摇匀；然后将所述干燥具塞试管置于冰水浴，并小心的沿管壁加入蒽酮试剂5.0mL，加塞，混匀。
c、完成步骤b后，将所述干燥具塞试管置于沸水浴10min，然后冷水冷却，得到溶液乙。
采用分光光度计测定溶液乙在625nm处的吸光值，实验重复3次，取平均值。然后根据步骤①制备的标准曲线计算黄芪多糖溶液中黄芪多糖质量，进一步计算出蒙古黄芪根中黄芪多糖的百分含量。
实验结果见图2(03524为根部蘸上CCBAU 03524菌剂，01583为根部蘸上01583菌剂，1A20为根部蘸上1A20菌剂，对照为根部蘸上水)。结果表明，与根部蘸上水进行移栽的蒙古黄芪相比，根部蘸上CCBAU 03524菌剂进行移栽的蒙古黄芪根中黄芪多糖的平均百分含量显著增加，而根部蘸上01583菌剂或1A20菌剂进行移栽的蒙古黄芪根中黄芪多糖的平均百分含量则较低。
菌株CCBAU 03524已于2015年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.11015。菌株CCBAU 03524的全称为北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumseptentrionale)CCBAU 03524CGMCC No.11015。
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<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 453
<212> DNA
<213> 北方中慢生根瘤菌（Mesorhizobium septentrionale）
<400> 1
tcgcttggcc tcgacatcgc gcttggcgtc ggtggcctgc cgcgcggccg catcgtcgag 60
atctatgggc cggaaagctc gggcaagacg acgctggcgc tgcacacggt agcggaggcc 120
cagaagaagg gtggcatctg cgccttcgtc gacgctgaac acgcgctcga tccggtgtat 180
gcccgcaagc tcggcgtcga cctggaaaac ctgctgatct cgcagcctga caccggcgag 240
caggcgctgg agatctgcga cacgctggtg cgctccggcg ccatcgacgt gctggtcgtc 300
gattcggtgg cggcactgac gccgcgcgcc gaaatcgagg gtgagatggg cgattcgctg 360
cccggcctgc aggctcgtct gatgagccag gcgctgcgca agctgaccgc ttcgatctcg 420
cgctccaaca ccatggtcat cttcatcaac cag 453

Claims (8)

1.北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524、或含有所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524的菌剂在促进黄芪植株生长中的应用；
所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.11015。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述促进黄芪植株生长体现为结瘤数增加和/或地下部分干重增加。
3.北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524、或含有所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524的菌剂在提高黄芪品质中的应用；
所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.11015。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述提高黄芪品质体现为黄芪根中的黄芪多糖的百分含量的增加。
5.北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524、或含有所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524的菌剂在黄芪植株的育苗中的应用；
所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.11015。
6.如权利要求1至5任一所述的应用，其特征在于：所述黄芪为蒙古黄芪。
7.北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobium septentrionale)CCBAU 03524，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.11015。
8.一种菌剂，其含有权利要求7所述北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumseptentrionale)CCBAU 03524。
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