JP3056258B2 - 多機能プロテアーゼ阻害剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 関連出願の相互参照 この出願は、1995年６月５日に出願された米国特許出
願第464,398号の一部継続出願であり、これは1994年11
月14日に出願された米国特許出願第337,795号の一部継
続出願である。

発明の分野 この発明は多機能プロテアーゼ（MCP）の阻害剤、そ
うした阻害剤を包含する組成物、および例えば多様な生
理学的状態に付随する筋肉量の遅延性の損失に対するMC
P阻害剤の使用に関する。

発明の背景 真核生物細胞は細胞性タンパク質を常に分解しかつ置
き換えている。これは、細胞が異常な形態を有するタン
パク質およびペプチドを選択的かつ迅速に除去し、調節
ペプチドのレベルを調整することにより代謝経路にわた
って制御を発揮し、そして飢餓におけるような必要な場
合にアミノ酸をエネルギーのために供給することを可能
にする。ゴールドベルグ（Goldberg.A.L.）とセント・
ジョン（St.John,A.C.）、Annu.Rev.Biochem.45:747−8
03（1976）を参照。哺乳類の細胞メカニズムはタンパク
質分解の複合的経路を見込んでいる。これらの経路のい
くつかはアデノシン三リン酸（「ATP」）の形態でのエ
ネルギー投入を必要とするようである。ゴールドベルグ
とセント・ジョン、上記を参照。

多機能プロテアーゼ（MCP、一般に「マルチキャタリ
ティックプロテイナーゼ」、「プロテアソーム」、「マ
ルチキャタリティックプロテイナーゼ複合体」、「マル
チキャタリティックエンドペプチダーゼ複合体」、「20
Sプロテアソーム」および「インジェンシン」ともまた
称される）は高分子量（700kD）の真核細胞の非リソゾ
ーム性プロテイナーゼ複合体であり、タンパク質からペ
プチドおよびアミノ酸への分解の少なくとも２種の細胞
性経路で役割を演じる。オルロウスキ（Orlowski,
M.）、バイオケミストリー（Biochemistry）29（45）10
289−10297（1990）を参照。当該複合体は少なくとも３
種の異なるタイプの加水分解活性を有する。すなわち、
（１）ペプチド結合が塩基性アミノ酸のカルボキシル側
で切断されるトリプシン様活性；（２）ペプチド結合が
疎水性アミノ酸のカルボキシル側で切断されるキモトリ
プシン様活性；および（３）ペプチド結合がグルタミン
酸のカルボキシル側で切断される活性。リヴェ（Rivet
t,A.J.）ジャーナル オブ バイオロジカル ケミスト
リー（J.Biol.Chem.）264:21 12215−12219（1989）お
よびオルロウスキ、上記を参照。

MCPを必要とするタンパク質加水分解の１個の経路は
またポリペプチド「ユビキチン」も必要とする。ヘルシ
ュコ（Hershko,A.）とクレチャノフ（Crechanovh,
A.）、Annu.Rev.Biochem.51:335−364（1982）。MCP、A
TPおよびユビキチンを必要とするこの経路は高度に異常
なタンパク質、寿命の短いある正常なタンパク質および
増殖する線維芽細胞および成熟する網状赤血球中のタン
パク質の大部分の分解を司るようである。ドリスコール
（Driscoll,J.）とゴールドベルグ（Goldberg,A.L.）、
プロシーディングス オブ ナショナル アカデミー
オブ サイエンス USA（Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.）
86:787−791（1989）を参照。

この経路により分解されることになるタンパク質は、
ATP依存性の様式でそれらのリシンのアミノ基を介して
ユビキチンに共有結合される。ユビキチンに結合された
タンパク質はその後26SプロテアソームによるATP依存性
プロテアーゼ複合体により小さなペプチドに分解され
る。26SプロテアソームはMCPをそのタンパク質分解中心
として含有する。ゴールドベルグ（Goldberg,A.L.）と
ロック（Rock,K.L.）、ネイチャー（Nature）357:375−
379（1992）。

MCPおよびATPを必要とするがしかしユビキチンを必要
としないタンパク質分解の第二の経路もまた記述されて
いる。ドリスコールとゴールドベルグ、上記を参照。こ
の過程では、MCPはATP依存性の様式でタンパク質を加水
分解する。ゴールドベルグとロック、上記を参照。この
過程は骨格筋で観察されている。ドリスコールとゴール
ドベルグ、上記を参照。しかしながら、筋肉では、MCP
は他のプロテアーゼ、マルチパインと相乗作用的に機能
することが示唆されており、かように筋肉タンパク質の
促進された分解をもたらす。ゴールドベルグとロック、
上記を参照。

MCPは、その活性部位の求核分子がＮ末端のスレオニ
ン残基のヒドロキシル基であるタンパク質分解メカニズ
ムにより機能することが報告されている。かように、MC
Pはスレオニンプロテアーゼの最初に知られた例であ
る。ゼームラー（Seemuller）ら、サイエンス（Scienc
e）（1995）268 579−582;ゴールドベルグ（Goldberg,
A.L.）、サイエンス（Science）（1995）268 522−523
を参照。

細胞性のタンパク質の合成および分解の経路の相対活
性がどのタンパク質が蓄積されるかもしくは失われるか
を決定する。タンパク質の量の異常損失は、筋ジストロ
フィー、心性悪液質、気腫、らい、栄養失調、骨軟化
症、小児急性白血病および癌性悪液質のようないくつか
の疾患状態と関連する。筋肉量の損失はまた老化、長期
入院もしくは長期間の病床で療養で、および慢性腰痛で
も観察される。

脱神経もしくは使用停止で、骨格筋は、大きさ、タン
パク質含量および収縮力の大きな低下につながる急速な
萎縮を蒙る。この萎縮はヒトでの多くの神経筋疾患の重
要な成分である。タンパク質分解の増強は脱神経萎縮で
の筋消耗の主要原因として関連している。フロノ（Furo
no,K.）ら、ジャーナル オブ バイオケミストリー
（J.Biochem.）265/15:8550−8557（1990）。筋肉での
タンパク質加水分解に関連する特定の過程（ひとつもし
くは複数）は同定されていないが、証拠は筋肉タンパク
質の促進された分解でのMCPの関与に結びつけて入手し
得る。例えば、フロノ、上記および公開されたPCT出願
のWO 92/20804号（公開日:1992年11月26日）を参照。

MCP活性はいくつかの疾患状態に関連している。例え
ば、ヒト白血球細胞株でのMCPの異常な高発現が報告さ
れている。クマトリ（Kumatori,A.）ら、プロシーディ
ングス オブ ナショナル アカデミー オブ サイエ
ンス USA（PNAS）87:7071（1990）。全身性エリテマト
ーデス（「SLE」）患者でのMCPに対する自己抗体もまた
報告されている。アリバス（Arribas,J.）らジャーナル
オブ エクスペリメンタル メディシン（J.Exp.Me
d.）173:423−427（1990）。

MCP複合体を阻害することが可能である作用物質が必
要とされる。そうした作用物質は、例えばMCP活性の分
野で研究を行う者、および、例えば異常なもしくは異所
性のMCP活性の有害な影響を制御するために医学分野に
ある者の双方に価値のある手段を提供するとみられる。
本発明はこれらの重要な目的に向けられる。

発明の要約 本発明は新規の多機能プロテアーゼ（「MCP」）阻害
剤に向けられる。主題の発明はまた筋消耗疾患の治療を
包含するある疾患に関連するMCPの阻害方法も含む。

ひとつの局面では式 を有する化合物が提供される。

構成要素および好まれる構成要素が以下に定義され
る。

本発明の化合物は多様な用途において有用である。例
えば、当該化合物は、MCP経路のメカニズム的理解のた
めの、および、主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（MH
C Ｉ）経路を介するペプチド抗原の提示に関するイン
ビトロおよびインビボのモデルをさらに正確にしかつ開
発するために研究用途で採用されうる。

臨床的な設定では、特許請求の化合物を含む組成物が
MCP活性の阻害、筋肉量の損失の減少、筋消耗疾患の治
療、スーパーオキシドジスムターゼ分解の低減およびス
ーパーオキシドジスムターゼ活性の低下により特徴づけ
られる疾患の治療に使用され得る。

方法もまた本発明の化合物の生成のために提供され
る。

当該化合物のこれらのおよび他の特徴は後述のように
拡大される形態で述べられるであろう。

図面の簡単な説明 第１図はM12.B6細胞による電気穿孔されたOVAのプロ
セシングに対する開示されるMCP阻害剤の態様の影響を
示す。

第２図は本発明のひとつの態様によるプロセシングの
阻害に対するOVA濃度の影響を示す。

第３図は本発明のひとつの態様によるプロセシングの
阻害に対するOVA濃度の影響を示す。

第４図は、SOD−１遺伝子ならびにFALS変異、制限酵
素切断部位およびPCRプライマーの場所を明確にする物
理的地図を示す。

第５図は、MCP阻害剤の態様の５μＭとのインキュベ
ーション後の一過性にトランスフェクションされた293
細胞中のSOD−１レベルの定量を示す。

第６図は本発明のひとつの態様に対する多様なSOD−
１アイソフォームの用量応答を示す。

第７図はSOD−１の代謝回転がMCP活性の作用であるこ
とを示す。

好まれる態様の詳細な説明 この発明はMCP阻害剤、これらの阻害剤を包含する組
成物およびこれらの阻害剤の使用方法を提供する。本発
明のMCP阻害剤は例えば下記式で表される： 式中、 R₁は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）OR₉、フタルイミド
基、−NH−SO₂R₉、および−NH−Ｊよりなる群から選択
され、 R₂は、水素原子、ヒドロキシル基、１個から10個まで
の炭素原子を有するアルキル基、および３個から７個ま
での炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から
選択され、 R₃は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−NH₂、−R₆−
NO₂、−R₆−Ｊおよび−R₆−CNよりなる群から選択さ
れ、 R₄は−CH（CH₂−R₇）−Ｑであり、 Ｑは、−CH−R₈、−Ｃ（＝Ｏ）CH₃、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂
Cl、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂Br、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂F、−Ｃ（＝
Ｏ）CHF₂、−Ｃ（＝Ｏ）CF₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R
₇、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂−
R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂H、−Ｂ（OH）_２、 式中、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、Ｗはシ
クロアルキル基である、 よりなる群から選択され、 R₅は−NO₂、−CNおよび−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₆は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝NH）−NH−であり、 R₇はフェニル基、および１個から８個までの炭素原子
を有するアルキル基であって、前述のアルキル基が場合
によっては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリ
ール基、もしくはヘテロアリール基で置換される、より
なる群から選択され、 R₈は＝Ｏ、＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−OH、＝Ｎ
−OCH₃、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅、＝NNH−Ｃ（＝Ｓ）−NH
₂および＝Ｎ−NH−Ｊよりなる群から選択され、 R₉は水素原子および１個から６個までの炭素原子を有
するアルキル基であって、前述のアルキル基が場合によ
っては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
基もしくはヘテロアリール基で置換される、よりなる群
から選択され、 Ｊは保護基であり、 ｎは３から10までの整数であり、そして ｍは２から５までの整数である。

いくつかの好まれる態様においてはR₁は−Ｃ≡Ｎ、−
Ｃ（＝Ｏ）OCH₃、フタルイミド基もしくは−NH−SO₂CF₃
であり、また、他の好まれる態様においてはR₂は水素原
子もしくはシクロペンチル基である。

R₃は好ましくは−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−N
H₂である。

Ｑは好ましくは−CH−R₈、−Ｂ（OH）_２、−Ｃ（＝
Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇であるか、または構造： を有する。

R₅は好ましくは−NO₂、−CN、−PMC、−MTR、−MTS、
もしくはTos基である。

R₇は好ましくは−CH（CH₃）_２、−（CH₂）_２−CH₃、
−CH₂−CH₃、もしくは−C₆H₅である。

R₈は好ましくは＝Ｏ、＝Ｎ−OH、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H
₅、＝NNH−Ｃ（＝Ｏ）−NH₂もしくは＝NNH−Ｃ（＝Ｓ）
−NH₂である。

いくつかの好まれる態様においては、R₁は−Ｃ（＝
Ｏ）OCH₃、フタルイミド基もしくは−NH−SO₂CF₃であ
り、R₂はシクロペンチル基であり、R₃は−（CH₂）_３−N
H−Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂であり、R₇は−CH（CH₃）_２で
あり、また、R₈は＝Ｏである。

他の好ましい態様においては、R₁は−Ｃ≡Ｎであり、
R₂はシクロペンチル基であり、R₃は−（CH₂）_３−NH−
Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂もしくは−（CH₂）_３−NH−Ｃ
（＝Ｎ−Ｊ）−NH₂であり、R₇は−CH（CH₃）_２であり、
また、R₈は＝Ｏである。

さらに好まれる態様においては、R₁はＣ≡Ｎであり、
R₂はシクロペンチル基であり、R₃は−（CH₂）_３−NH−
Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂もしくは−（CH₂）_３−NH−Ｃ
（＝Ｎ−Ｊ）−NH₂であり、R₇は−CH（CH₃）_２であり、
Ｑは−CH−R₈であり、およびR₈は＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−N
H₂、＝Ｎ−OH、＝Ｎ−OCH₃、もしくは＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C
₆H₅である。

本明細書で使用されるように、「アルキル」という用
語は、エチル基、イソプロピル基およびシクロペンチル
基のような直鎖状、分枝状および環状の炭化水素を包含
することになる。置換されたアルキル基は、その１個も
しくはそれ以上の水素原子がハロゲン原子、他の炭素水
素基（例えばフェニル基）、ヘテロアリール基またはそ
こで１個もしくはそれ以上の炭素原子が酸素原子により
中断されている基により置換されているアルキル基であ
る。好まれるアルキル基は１ないし約８個の炭素原子を
有する。本明細書で使用されるように、「ハロゲン」と
いう用語はその通常の意味を有し、かつ、フッ素、塩
素、臭素およびヨウ素を包含し、フッ素が好まれるハロ
ゲンである。本発明中に使用されるような「Arg」とい
う用語はアミノ酸「アルギニン」の略語のようなその通
常の意味を有する。

いくつかの態様において、本発明の化合物は保護基を
含有する。本明細書で使用されるように、「保護基」と
いう句は幅広い解釈を認容されることになる。保護基は
ヒドロキシル基、アミノ基およびカルボキシル基のよう
な機能性（に選択的に附加されまたそれから除去され得
る化学的官能基としてそれ自体既知である。これらの基
は化合物に存在し、そうした機能性を当該化合物が曝さ
れる化学的反応条件に対し不活性にする。多用な保護基
のいずれも本発明で採用されうる。ひとつのそうした保
護基はフタルイミド基である。本発明による他の好まれ
る保護基は以下の式を有する： 本発明の実際に適するさらなる代表的保護基はグリーン
（Greene,T.W.）とウッツ（Wuts,P.G.M.）、「プロテク
ティブ グループス イン オーガニック シンテシス
（Protective Groups in Organic Synthesis）」第２
版、ウィレイ アンド サンズ（Wiley ＆ Sons）、199
1、に見出されうる。その開示は完全に引用することに
より本明細書に組み込まれる。

以前に指摘されたように、MCP活性は多様な障害およ
び疾患と結び付けられている。本明細書に開示されるよ
うな化合物はMCP活性の阻害に有用であり、かつ、こう
した化合物の有用性は研究および治療の双方の設定に応
用され得るため、MCPを本発明の化合物と接触すること
によるMCP活性の阻害の方法論は、当該化合物をヒトを
包含する哺乳類に薬物もしくは製薬学的作用物質として
提供することを包含する。

本明細書で使用されるように、「接触」という用語
は、接触されるべき部分が相互に物理的接触に加わるよ
うに当該部分の一緒の配置を直接的もしくは間接的に引
きこすことを意味する。接触はかように当該部分を一緒
に容器中に置く、もしくはひとりの患者に部分を複数投
与するような物理的活動を包含する。かように、例え
ば、本発明の化合物を、ある疾患もしくは障害に関連す
るMCPの異常なおよび／もしくは異所性の活性と関連す
るそうした疾患もしくは障害を明示するヒト患者に投与
することは、「接触」という用語の定義の範囲内に入
る。

好まれる態様においては、本発明による製薬学的組成
物がある障害すなわち異常な身体的状況、MCPの異常な
および／もしくは異所性の活性と関連する疾患もしくは
病態生理学的状況に罹っている患者に投与される。本発
明の組成物が投与される障害は、好ましくは筋肉量の消
耗（すなわち損失）、すなわち筋消耗性疾患を直接的も
しくは間接的に生み出すそれらである。これらは筋ジス
トロフィー、心性悪液質、気腫、らい、栄養失調、骨軟
化症、小児急性白血病、エイズ悪液質および癌性悪液質
を包含する。

本発明の状況において、「投与」は、当該製薬学的組
成物の患者への導入を意味する。好まれる投与方法は静
脈内、皮下および筋肉内の投与を包含する。好ましく
は、当該化合物は、生理学的食塩水のような製薬学的に
許容し得る担体と組み合わせて当該化合物を含む製薬学
的組成物として投与されるであろう。他の適した担体
は、レミントンの薬剤学（Remington's Pharmaceutical
Sciences）（マック パブリッシャーズ カンパニー
（Mack Pub.Co.）、イーストン、フィラデルフィア州、
1980）中に見出され得る。

本明細書中に記述される化合物の製薬学的組成物中の
濃度は、投与されるべき当該薬物の投薬、採用される化
合物の化学的特徴（例えば疎水性）、および投与経路を
包含する多数の因子に依存して変動するであろう。漠然
とは、この発明の化合物は、非経口投与には約0.1ない
し10w/v％の化合物を含有する水性の生理学的緩衝溶液
中で提供されうる。典型的な用量範囲は１日に体重1kg
あたり約１μｇから約1gまでであり、好まれる用量範囲
は１日に体重1kgあたり約0.01mgから約100mgまでであ
る。投与されるべき薬物の好まれる投薬は、その疾患も
しくは障害の進展の型および程度、特定の患者の概括的
健康状態、選択された化合物の相対的な生物学的効力、
ならびに賦形剤化合物の処方のような変数、さらにその
投与経路に依存するようである。本明細書で使用される
ような「患者」という用語はいずれかの種類の脊椎動物
を意味する。好ましくは当該患者はヒトである。

筋ジストロフィーは神経変性の証拠のない筋線維の進
展性の脱力および変性により特徴づけられる遺伝子的疾
患である。デュシェーヌ（Duchenne）筋ジストロフィー
（DMD）では、患者は平均67％の筋肉量の減少を呈し、
また、筋緊張性ジストロフィーでは、断片的筋タンパク
質の合成が、非筋肉タンパク質合成でのいかなる対応す
る減少なしに平均28％減少することが示されている（お
そらくタンパク質同化ホルモンもしくは同基質に対する
終末器官の損なわれた応答によるとみられる）。促進さ
れるタンパク質分解がDMD患者の筋肉で立証されてい
る。

重篤なうっ血性心不全（CHF）は「心性悪液質」、す
なわち平均19％の体重減少を伴う心筋および骨格筋双方
の筋タンパク質の消耗により特徴づけられる。心性悪液
質は筋線維タンパク質分解の増大した速度により引き起
こされる。

気腫は肺胞壁の破壊的変化を伴なう末端の非呼吸細気
管支の遠位の気積の拡大により定義される慢性閉塞性肺
疾患である。低減した肺機能の臨床的症状発現は、咳、
喘鳴、再発性呼吸器感染症、浮腫ならびに機能障害およ
び短縮された寿命を包含する。チロシンの流出は気腫患
者で47％増加する。また、全身のロイシン流出は正常に
保たれ、全身のロイシン酸化は増大し、そして全身のタ
ンパク質合成は減少する。その結果は筋タンパク質合成
の減少であり、全身のタンパク質の代謝回転および骨格
筋量の減少を伴なう。この減少は疾患の進展および長期
の悪化とともにますます明白となる。

糖尿病では手の小さな筋肉の広汎性の消耗が存在す
る。これは慢性の部分的脱神経（ニューロパチー）によ
る。これはもっとも明白でありかつ長期の疾患の進展お
よび重篤度とともに悪化する。

らいは親指と人差し指の中手骨の間に発生する筋消耗
を伴なう。重篤な栄養失調はとりわけ重篤な筋消耗によ
り特徴づけられる。

骨軟化症はビタミンＤおよびカルシウムの欠乏により
引き起こされる栄養障害である。子どもでは「くる
病」、また成人では「骨軟化症」と称される。骨の軟化
（類骨の過剰蓄積を伴なう損なわれた鉱化作用によ
る）、痛み、脆弱、筋消耗および脱力、食欲不振、なら
びに概括的体重減少により特徴づけられる。栄養失調、
反復する妊娠および授乳（ビタミンＤおよびカルシウム
の貯蔵を消耗もしくは枯渇する）、ならびにビタミンＤ
抵抗性に起因し得る。

小児の急性白血病では骨格筋消耗に帰着するタンパク
質エネルギーの栄養失調が存在する。研究は、若干の小
児が白血病の診断前でさえも平均27％の筋肉量の減少を
伴なう筋消耗を表すことを示している。同時の脂肪組織
の33〜37％の増加もまた存在し、相対的体重および四肢
の円周の正味の変化に帰着しない。

癌性悪液質は固形腫瘍および血液学的悪性腫瘍のある
患者で変化しやすい頻度で発生する複合的症候群であ
る。臨床的には、癌性悪液質は、脂肪組織および脂肪の
ない筋肉量の双方の大規模な枯渇を伴なう体重減少とし
て現され、また、癌に起因する死亡の一因である。癌性
悪液質の患者はより短い生存期間および化学療法に対す
る低下した応答を有する。筋消耗を生み出す障害に加
え、他の環境および状況が筋肉量の減少と何らかの様式
で結び付けられるように思われる。こうした苦痛には慢
性の腰痛、高齢、疾患もしくは外傷による長期入院、ア
ルコール中毒症およびコルチコステロイド療法による筋
消耗を包含する。

研究は、慢性腰痛の重篤な症例では脊髄両側の筋消耗
が存在することを示している。傍脊髄の筋消耗の低減が
痛みを緩和しそして機能を改善する。

高齢での一般的な脱力は筋消耗によるともまた考えら
れる。身体が加齢すると骨格筋の増大する比率が線維組
織により置換される。その結果は筋力の大きな低下であ
るが、しかし、脂肪を含まない集団（mass）ではわずか
な低下にすぎない。

研究は、外傷もしくは慢性病を病みかつ長期間入院し
た患者では、筋肉量の平均31％の減少を伴なう持続性の
一側性の筋消耗が存在することを示している。研究はま
た、これが集中的理学療法で矯正され得ることも示して
いる。しかしながら、多くの患者にとって、薬物療法で
改善を遂げることがより効果的でありうる。

アルコール中毒患者では前頚骨筋の消耗が存在する。
この近位の筋損傷は神経原性の損傷、すなわち損なわれ
た解糖性およびホスホリラーゼの酵素活性により引き起
こされる。この損傷はアルコール濫用の期間が長くなる
ほど明らかになりかつ悪化する。コルチコステロイドで
治療される患者は筋肉量の損失を経験する。

MCPは、NFkappaBと称される炎症の細胞内性メディエ
ータを活性化することが示されている。ベウエルレ（Ba
euerle,P.A.）とヘンケル（Henkel,T.）（1994）Annu.R
ev.Immunol.12、141−179を参照。MCPの阻害剤は、従っ
て、自己免疫疾患および炎症性疾患の治療での使用を潜
在的に有する。

本発明の化合物は前述の疾患および他の疾患に起因す
る筋肉量の損失を緩和するのに使用され得る。加えて、
本発明のMCP阻害剤は家畜および動物の管理の応用にお
いて動物の体重減少に対抗し、もしくは成長を促進する
のに有用である。

MCPは主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（MHC Ｉ）
経路を介するペプチド抗原の提示に関係している。ゴー
ルドベルグとロック、上記を参照；また、下で「ロック
ら」のロック（Rock）ら、セル（Cell）、78:761−771
（1994）も参照。MCPの阻害剤は従って、MCH Ｉ経路の
阻害が望まれる研究において、ならびに、抗原の異所性
および／もしくは異常なMHC−１プロセシングに関連す
る疾患および障害の緩和において、研究試薬として有用
性を有する。MHC−１分子上に提示されるペプチドのほ
とんどの正確な起源が未だ明らかでないため、および、
MCPがMHC−Ｉの提示にて役割を演じうるという証拠が最
近蓄積されているため（ロックら、上記）、MHC−Ｉの
提示のための抗原のタンパク質分解性プロセシングを妨
げる、開示されるMCP阻害剤のような試薬はこの経路の
重要性の解明において有用と思われる。

驚くべきことに、本発明のMCP阻害剤はまたCu/Znスー
パーオキシドジスムターゼ−１（「SOD−１」）の活性
を高めるのにも有用であることもまた見出されている。
従って、これらの化合物はSOD−１が欠乏した系の研究
のための研究設定、および、SOD−１酵素活性での低下
により特徴づけられる神経変性疾患もしくは他の障害
（すなわち、そこではそうした低下が当該障害の病因に
関係している）の治療の双方で有用である。こうした状
況は、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチント
ン病、卒中、外傷および虚血のような酸化的ストレスを
伴なう疾患を包含する。

SOD−１は毒性のスーパーオキシドアニオンO₂・−のO
₂およびH₂O₂への不均化を触媒するホモダイマーの金属
酵素である。SOD−１はフリーラジカルのスカベンジャ
ーであり、そして従ってスーパーオキシドラジカルの非
毒化の第一列の防御として作用する。スーパーオキシド
ラジカルは有酸素代謝の正常な副産物である。SOD−１
は主として真核生物に存在し、そして事実上全ての細胞
タイプの細胞質中で見出される。SOD−１は酸素の毒性
に対する生理学的応答で不可欠の酵素であり、かつ、酸
化的ストレスに関連する病理学的状況での治療的作用物
質として活発に研究されている。バニスター（Banniste
r）ら、CRC Crit.Rev.Biochem.22:111−180（1987）；
ハリウェル（Halliwell）ら、メソッヅイン エンツィ
モロジー（Methods in Enzymol.）、186:1−75（199
0）；グリーンワルド（Greenwald）、Free Rad.Biol.Me
d.8:201−209（1990）を参照。

SOD−１の治療的作用物質としての使用を妨げている
特徴は、外因性に供給される場合のその乏しい細胞内へ
の到達、および血清中でのその極端に短い半減期であ
る。従って、細胞内性のSOD−１の活性を高める化合物
はSOD−１療法において大きな前進を供給するとみられ
る。

ALSは脊髄および脳の大きな運動ニューロンの変性に
より引き起こされる進展性麻痺性障害である。ALS症例
のおよそ５〜10％は家族性（FALS）であり、また、常染
色体性の優性の特性として遺伝される。最近、16種の異
なるミスセンス変異がFALSの家族のあるサブセットで同
定され、また、SOD−１をコードする遺伝子内に存在す
る。ローゼン（Rosen,D.R.）ら、サイエンス（Scienc
e）261:1047−1051（1993）；トン（Deng,H.−X.）ら、
ネイチャー（Nature）362:59−62（1993）を参照。これ
らの変異は赤血球および脳組織でのSOD−１活性の低減
につながり、また、上昇したこの酵素の代謝回転に帰着
する、SOD−１タンパク質を不安定化することが示され
ている。ボウリング（Bowling,A.C.）ら、J.Neurochem.
61:2322−2325（1993）；ボーシェルト（Borchelt,D.
R.）ら、プロシーディングス オブ ナショナル アカ
デミー オブ サイエンス（Proc.Natl.Acad.Sci.）91:
8292−8296（1994）を参照。加えて、SOD−１とALSの間
の関連の連坐に基づくALSのトランスジェニックマウス
モデルが記述されている。ブラウン（Brown,R.H.）331/
16 ニューイングランド ジャーナル オブ メディシ
ン（NEJM）1901（1994）。

われわれは、われわれのMCP阻害剤がSOD−１の強力な
正の効果物質であることを発見した。本明細書で「化合
物14」と称される好まれるMCP阻害剤は、用量依存性の
様式で野生型および変異体のSOD−１の分解を特異的に
低減する（化合物番号の呼称はその化合物の合成を開示
する実施例の番号に基づく。例えば化合物14の合成は以
下の実施例14に述べられる）。本明細書で使用されるよ
うに、SOD−１の分解の低減はSOD−１タンパク質が異化
される速度を遅延させることを意味する。

本発明は以下の実施例を介してさらに例証される。こ
れらの実施例は本発明のさらに解明することを意図さ
れ、かつ、追加される（appended）請求の範囲を制限す
ることを意図されない。

実施例１ ヒト組織からの多機能プロテアーゼの単離 死後得られたヒト肝および脳のサンプルを、イオン交
換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿およびゲ
ル濾過によるMCPの単離および部分的精製に使用した
（例えば、ドリスコール（Driscoll）とゴールドベルグ
（Goldberg）、プロシーディングス オブ ナショナル
アカデミー オブ サイエンス（Proc.Natl.Acad.Sc
i.）86、787−791（1989）；ヤマモト（Yamamoto）ら、
Biochim.Biophys.Acta 882、297−304（1986））。いず
れかの出発材料について、組織を20％グリセロールを含
有する10倍体積量の20mMトリス−塩酸（pH7.5）中でホ
モジェナイズした。40,000×ｇで30分間の遠心分離の
後、MCPのキモトリプシン様成分のタンパク質分解活性
が上清で検出可能であった（以下を参照）。この上清を
ホモジェナイズ緩衝液で平衡化したDEAE−セファロース
ファストフローカラム上で分画した。上清11それぞれに
ついて樹脂250mlを使用した。サンプル負荷後、カラム
を約10倍体積量のホモジェナイズ緩衝液で洗浄し、そし
てタンパク質を０から400mMまでの直線塩化ナトリウム
濃度勾配で溶出した（250mlの樹脂につき21）。フラク
ションをMCP活性についてアッセイし、そして活性のフ
ラクションを合わせ、それから80％飽和で硫酸アンモニ
ウムでの沈殿を受けた。沈殿したタンパク質を遠心分離
により収集し、ホモジェナイズ緩衝液に再懸濁し、そし
てウシ血清アルブミン（68kDa）を使用して標準化され
たセファクリルS300HRカラム（樹脂体積500ml）上に負
荷した。MCP活性のただ１個のピークが約650kDaの分子
量で溶出された。この調製物は他の測定可能なタンパク
質分解活性を含まず、また、６ヵ月を超える４℃での保
存に際してそのMCP活性を維持した。この調製物を実験
の大部分に使用した。ヒドロキシアパタイト−ウルトロ
ゲルカラム（ヤマモトら、上記）上での当該調製物のさ
らなる分画はより高度に精製された酵素を産し、これ
は、変性SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によれ
ば、20から35kDaまでのMrに及ぶ予期される10を超える
サブユニットから成った。

実施例２ MCPのキモトリプシン様活性およびトリプシン様活性の
アッセイ 上に記述されるMCPの単離方法は、そのタンパク質分
解活性が潜在的であるがしかしSDSの低濃度（0.02〜0.0
5％）の添加により活性化され得る（ヤマモトら、上
記）酵素複合体を創製した。キモトリプシン様活性を以
下の処置に従いアッセイした。すなわち、96穴マイクロ
タイタープレート中でヒトMCPを0.04％SDSを含有するホ
モジェナイズ緩衝液で４ないし10倍希釈した。ベイケム
バイオサイエンス インク（Bachem Bioscience In
c.）、キング オブ プルシア、ペンシルバニア州より
購入した比色分析基質MeOSuc−EVKM−パラニトロアニリ
ド（メトキシスクシニル−Glu−Val−Lys−Met−pNa）
を、ジメチルスルホキシド中10mMのストック溶液からの
100μＭの最終濃度に添加した。反応体積は穴あたり200
μｌであった。37℃で様々な時間インキュベーションし
た後、遊離のpNaの濃度をバイオテック（Biotech）EL−
340マイクロプレートリーダー上で490nmでの吸収を読み
測定した。プロテアーゼ活性を、基質加水分解が時間と
ともに直線的に増大しかつ吸収の変化が遊離のpNaの濃
度に比例する条件下で測定した。あるいは、蛍光原性基
質、メトキシスクシニル−Phe−Leu−Phe−アミドメチ
ルクマリン（エンザイム システムズ プロダクツ（En
zyme Systems Products）、ダブリン、カリフォルニア
州）を使用し、そして蛍光の変化を390nmの励起および4
60nmでの放射でモニターした。

ヒトMCPのトリプシン様活性は以下の修飾とともに上
に記述されるようにアッセイした。反応を1mMの２−メ
ルカプトエタノールを補充したトリス−グリセロース緩
衝液（pH9.5）中で実施し、また、基質は蛍光原性基
質、ベンジルオキシカルボニル−Phe−Arg−AMC（100μ
Ｍ）であった。

37℃で様々な時間インキュベーションした後、遊離の
AMCの濃度を、390nmの励起フィルターおよび460nmの放
射フィルターをつけたフルオロスカン（Fluoroskan）II
分光蛍光計上で測定した。プロテアーゼ活性を、基質加
水分解が時間とともに直線的に増大しかつ蛍光の変化が
遊離のAMCの濃度に比例する条件下で測定した。

実施例３ MCP阻害剤のIC₅₀値の決定 IC₅₀値は、一般に、その酵素活性の50％阻害を生み出
すのに必要なある化合物（この場合は開示されるMCP阻
害剤）の濃度として定義される。IC₅₀値はその指定され
る使用に関する化合物の活性の有用な指標である。好ま
しくは、本発明の阻害剤は約10マイクロモルより小さい
IC₅₀値を有する。

MCPのキモトリプシン様活性もしくはトリプシン様活
性の阻害は、基質の添加に先立ち当該酵素を様々な濃度
の推定の阻害剤と37℃で15分間インキュベーションする
ことにより測定した。各実験条件を３回の実験で評価
し、そして反復の実験を本明細書に記述される阻害剤に
ついて実行した。

実施例４ 細胞性の筋肉分解の阻害の立証：幼若ラットでの加重除
去萎縮の阻害 幼若ラットのヒラメ筋の加重除去萎縮に対するいくつ
かの阻害剤の効果を測定した。処置の一般的論考につい
てはティシュラー（Tischler,M.E.）（1990）メタボリ
ズム（Metabolism）39/7:756−763（以下「ティシュラ
ー−1990」）を参照。

幼若雌性シュプラグ−ドーレイ（Sprague−Dawley）
ラット（80〜90g）は尾をギプス包帯で固定し、後肢を
ジャスパー（Jaspers,S.R.）とティシュラー（Tischele
r,M.E.）（1984）J.Appl.Physiol.57:1472−1479におけ
るように懸垂した。動物の後肢を各動物に個々に居住さ
せてケージの床の上に持ち上げた。動物は食餌および水
への自由な接近を有し、そして懸垂時および終了時に体
重を測定した。懸垂期間の間、当該動物を毎日チェック
してそれらの爪先がケージの床に接していないこと、お
よび、ギプス包帯により尾の膨脹がないことを確認し
た。

A.実験デザイン−パート１ 各実験は無作為にそれぞれ５匹の４群に分割した20匹
のラットの懸垂で開始した。Ａ群はちょうど２日間懸垂
し、より長時間懸垂された他の動物でのヒラメ筋の大き
さを概算するための基礎データを提供した。試験の開始
時に群について平均体重を比較し、そして身体の大きさ
の差異の補正係数として使用した。Ｂ群は、動物の各群
について加重除去の間の緩徐な筋萎縮の能力を立証する
ために加重除去の２日後にマーサリルの水溶液で１個の
四肢のヒラメ筋を処理した第二の対照群であった。マー
サリルは、本明細書で利用されるプロトコールに記述さ
れるように、以前に研究されそしてインビボのモデルで
萎縮を本質的に防止することが立証されている。ティシ
ュラー−1990を参照。加重除去を始めた後２日目に、先
に記述されるように、マーサリルの水溶液（200nM;最初
の体重100gあたり４μｌ）を１個のヒラメ筋に注入し
た。反対側の筋肉には0.9％生理的食塩水（「ベヒク
ル」）の同体積を注入した。動物はインジツの注入処置
の間、インノーヴァー・ヴェット（Innovar−vet）（体
重100gあたり10μｌ）鎮静下に維持した。注入後、動物
をさらに24時間懸垂し、そしてヒラメ筋を除去した。各
実験のＣ群およびＤ群は開示される化合物の２種の異な
る態様それぞれを試験するのに使用した。動物は、ジメ
チルスルホキシド（DMSO）中に含有される1mMのMCP阻害
剤を一方の脚のヒラメ筋にそしてDMSOのみを反対側のヒ
ラメ筋に注入することを除いては、Ｂ群におけるように
処理した。かように各実験は２個の対照群および本発明
のMCP阻害剤の試験から成った。阻害剤の異なる対での
５個のこうした実験の終了は、各MCP阻害剤の試験につ
いて10の「ｎ」値を規定し、また、動物の２種の異なる
発送（shipment）で試験される各阻害剤を提供した。

B.ヒラメ筋の処置−パート１ 動物を殺した後、ヒラメ筋を切除し、脂肪および結合
組織を取り除き、そして慎重に重量を測定した。筋肉を
その後10％トリクロロ酢酸（TCA）中でホモジェナイズ
し、そして沈殿させたタンパク質を遠心分離により沈降
させた。ペレットをその後10％TCAで１度、およびエタ
ノール：エーテル（1:1）で１度洗浄した。最終的なペ
レットを1N水酸化ナトリウム4ml中で可溶化した。当該
サンプルはその後、アルブミンを標準として使用し、ビ
ウレット法によりタンパク質含量を分析した。

C.データ解析−パート１ 筋肉の総タンパク質含量に対するMCP阻害剤の効果
を、主として、未処理の反対側の筋肉との対にした（pa
ired）比較により検査した。含量の比を算出し、そして
その後分散分析（「ANOVA」）により統計学的に解析し
た。左脚は、タンパク質含量比が未処理の対照動物でも
同様に比較され得るように、常に処理された脚であっ
た。この方法で、２本の脚のタンパク質含量、および試
験したMCP阻害剤の相対的有効性を比較することによ
り、有意差が示され得た。ペアードスチューデント検定
もまたそれぞれ別個の処理の影響について実行した。未
処理の対照のデータもまた第２日のタンパク質含量の推
定値を提供した。これはＢ、ＣおよびＤ群それぞれにつ
いて、処理の24時間にわたるタンパク質の変化の近似を
可能にした。

D.実験デザイン−パート２ 各実験は、阻害剤類のうち１個でタンパク質合成に対
するその効果について試験される５匹の動物の群の10匹
の動物から成った。反対側のDMSO処理した筋肉が阻害剤
処理した筋肉について対になる対照としてはたらいたた
め、対照動物は研究のこの局面については必要とされな
かった。各群にはパート１のＣおよびＤ群について記述
されるように注入した。インジツ処理の24時間後、タン
パク質合成の断片的速度（fractional rate）を双方の
ヒラメ筋で分析した。各筋肉に3H−フェニルアラニン
（50mM;1μCi/μｌ）を含有する0.9％生理的食塩水溶液
（最終体重100gあたり3.5μｌ）を注入した。15分後、
筋肉の中間の2/3を切除しそしてこの筋肉を以下に記述
されるように処置した。

E.ヒラメ筋の処置−パート２ 筋肉をまず、0.5mMシクロヘキシイミドを含有する0.8
4％生理的食塩水中で10分間洗浄してタンパク質合成を
停止させ、そして20mMシクロロイシンで洗浄して細胞内
にフェニルアラニンを捕捉した。この筋肉をその後氷冷
２％過塩素酸2.5ml中でホモジェナイズした。沈殿した
タンパク質を遠心分離により沈降した。上清の１個のア
リコートを液体シンチレーション計測のために取り、そ
してもう１個のアリコートはフェニルアラニンからフェ
ネチルアミンへの変換のため処理し、可溶性のフェニル
アラニン濃度を蛍光測定的に測定した。ガーリック（Ga
rlick,P.J.）ら、バイオケミカル ジャーナル（Bioche
m.J.）、192 719−723（1980）およびムノ（Munoz,K.
M.）ら、1993メタボリズム（Metabolism）、投稿中、を
参照。これらの値は細胞内の特異的活性を提供する。筋
肉タンパク質中のフェニルアラニンの特異的活性を、タ
ンパク質を6N塩酸中で加熱することにより加水分解した
後に測定した。放出されたアミノ酸を緩衝液中で可溶化
した。上清フラクションについてのように、１個のアリ
コートをシンチレーション計測のために、そしてもう１
個をフェニルアラニン分析のために取った。タンパク質
合成の断片的速度を： タンパク質の特異的活性／細胞内の特異的活性×時間 として算出した。

F.データ解析−パート２ タンパク質合成の分析は各MCP阻害剤について対をも
とにした。反対側の筋肉のスチューデントのペアードｔ
検定の比較がタンパク質合成に対する当該阻害剤のいず
れかの効果が存在するかどうかを決定した。タンパク質
分解は、タンパク質累積の断片的速度（パート１から）
を加えたタンパク質合成の断片的速度（パート２から）
としておおよそ算出され得た。ここでタンパク質の損失
はタンパク質の累積に対し負の値をもたらす。

質的に、MCP阻害剤がタンパク質合成に影響すること
なくタンパク質損失を遅延させる能力はタンパク質分解
の遅延を指摘する。

G.結果 第１表は対照の筋肉に対するMCP阻害剤の効果の欠如
を示す。

第２表は加重除去の第３日の間のタンパク質含量での
変化を示す。

第３表は加重除去した筋肉タンパク質に対するMCP阻
害剤の効果を示す。

第４表は加重除去した筋肉合成に対するMCP阻害剤の
効果を示す。

表中、化合物番号は当該化合物についての合成経路が
述べられる実施例番号を示す。

実施例５ MHC−Ｉプロセシングを使用するMCP阻害の立証 本発明の化合物を、クラスＩの主要組織適合遺伝子複
合体経路（NHC−Ｉ）による外因性OVA抗原のプロセシン
グを阻害する能力についてアッセイした。MCP阻害剤
を、抗原への露出の間に抗原プロセシング細胞内への当
該阻害剤の封入を可能にする機能性抗原プロセシング系
に適用し、その後当該プロセシング細胞を固定した。Ｔ
細胞ハイブリドーマをその後、阻害剤の非存在下にこの
プロセシング細胞に添加し、ペプチド−MHC−Ｉ複合体
の発現を決定した。この発現は固定に先立つ抗原プロセ
シングを反映する。

A.細胞培養系 細胞は、37℃で５％CO₂に維持した加湿雰囲気上、標
準的培地すなわち10％ウシ胎児血清（ハイクローン（Hy
clone）、ローガン、ユタ州）、５×10^-5Mの２−メルカ
プトエタノール、抗生物質および以下の補助物質すなわ
ち塩酸Ｌ−アルギニン（116mg/L）、Ｌ−アスパラギン
（36mg/L）、炭酸水素ナトリウム（2g/L）、ピルビン酸
ナトリウム（1mM）、を含むDMEM（ギブコ（Gibco）、セ
ントルイス、ミズーリ州）中で培養した。ハーディング
（Harding,C.I.）、（1992）Eur.J.Immunol.22:1865−1
869も参照。M12.B6細胞（オサミ・カナガワ（Osami Kan
agawa）、ワシントン大学、セントルイス、ミズーリ
州、の恵与）を抗原提示に使用した。この細胞はM12.C3
マウスＢリンパ球細胞をC57BL/6マウスからのLPS刺激し
た脾細胞（Ｂリンパ芽細胞の起源）と融合することによ
り創造した。従ってそれらはＨ−2^b抗原を発現する。DO
WB Ｔハイブリドーマ細胞はＩ−A^bもしくはＩ−A^dのい
ずれかに結合したOVA（323−339）ペプチドに特異的で
ある。ユーデル（Yewdell）ら、サイエンス（Science）
1988 239:637を参照。B3.1 Ｔハイブリドーマ細胞はOV
A（258−276）−K^bに応答する。

B.電気穿孔法および抗原プロセシングの研究 MHC−Ｉ経路によりプロセシングされかつ提示される
には、外因性抗原（卵白アルブミン;OVA）がプロセシン
グ細胞の細胞質内に浸透しなければならない。OVAを電
気穿孔法によりプロセシング細胞（M12.B6細胞）の細胞
質内に導入した。

電気穿孔法は、0.4cmのギャップのキュベットチャン
バーを使用し、ギブコ（Gibco）BEL電気穿孔装置で実行
した。静電容量は800μＦ、また、電圧は50〜300Vであ
った。電気穿孔法は、４℃でOVAの存在下、M12.B6細胞
を1.5×10⁷個/ml（範囲0.5×10⁷〜4.0×10⁷）含む血清
を含まないPRMIもしくはPMEM（ギブコ（Gbco））中で実
行した。細胞を直ちに氷上に置いた。様々な阻害剤をそ
の後添加しそして細胞を18℃もしくは37℃に移した。最
後に、細胞を１％パラホルムアルデヒドで約10分間軽く
固定し、そして37℃で広範囲に（extensively）洗浄し
てさらなるプロセシングを防止した。プロセシングの程
度（すなわち表される特異的なペプチド−MHC複合体の
濃度）を、B3.1もしくはDOBW Ｔハイブリドーマ細胞に
よるIL−２分泌を促進するM12.B6細胞の能力により決定
した。Ｔ細胞（105個）を、10²チャンバー中37℃で18〜
24時間、0.2ml中にM12.B6細胞（固定された場合２×10⁵
個、生存能力のある場合５×10⁴個）とともに培養し
た。双方のＴハイブリドーマがIL−２の分泌による抗原
刺激に応答する（上清中でIL−２依存性のCTLL細胞の増
殖および［H³］チミジンの取り込みによりアッセイされ
る。アレン（Allen）ら、ジャーナル オブ イムノロ
ジー（J.Immunol.）132:1077を参照）。

これらの研究の結果が第１〜３図に示される。第１図
は電気穿孔されたOVAのM12.B6細胞によるプロセシング
に対する化合物14および16の影響を示す。第２図および
第３図はMHC−ＩのOVAプロセシングに対する化合物14お
よび20の影響を示す。双方の化合物はOVAプロセシング
を効果的に阻害する。これらのデータは本発明の化合物
のMCP阻害効果に対する付加的な支持を提供する。古典
的なMHC−Ｉ経路がプロテアソームによる抗原分解を必
要とすることが認容される。ゴールドベルグら、上記を
参照。かように、当該化合物類は抗原のタンパク質分解
的プロセシングの重要性のさらなる理解に利用され得
る。

実施例６ A.Cu/Znスーパーオキシドジスムターゼ（SOD−１）分解
の低減 I.パート１−クローニングおよび突然変異誘発 マウスのSOD−１のcDNAクローンはジム・マハフェイ
（Jim Mahaffey）（ノースカロライナ州立大学、ラレ
イ、ノースカロライナ州）より得た。このクローンを、
１）ATG開始コドンの直接上流にコザック（Kozak）の翻
訳開始コンセンサスシグナル（すなわち５′−GCCGCCAC
C−３′）を、２）このコンセンサスシグナルの５′側
にHind III制限酵素切断部位を、および３）当該cDNAの
３′末端にXho I制限酵素切断部位を組み込むよう、ポ
リメラーゼ連鎖反応（PCR）の方法論により修飾した。P
CR処置に使用したオリゴヌクレオチドプライマーは： ５′プライマー（EH87）が５′−TCGATCGAAGCTTGCCGCCA
CCATGGCGATGAAAGC−３′（配列番号１）、３′プライマ
ー（EH88）が５′−AGCTAGCCTCGAGCAGATTACAGTTTAATG−
３′（配列番号２）であった。得られたPCR産物を制限
酵素Hind IIIおよびXho Iで切断し、そしてHind IIIお
よびXho Iで切断したpBluescript（ｐ−ブルースクリプ
ト）II SK＋（ストラタジーン クローニング システ
ムで（Stratagene Cloning Systems）、ラホヤ、カリフ
ォルニア州）中にクローニングしてpSK−HX2を得た。

アミノ酸４（Ala⁴→Val）（GCG→GTG）およびアミノ
酸113（Ile¹¹³→Thr）（ATT→ACT）でのFALS点突然変異
は、ホー（Ho）ら、ジーン（Gene）77:51−59（1989）
により記述されるオーバーラップ伸長PCR突然変異誘発
法を使用して、SOD−１のcDNAクローンpSK−HX2内に導
入した。Ile¹¹³→Thr変異体は以下のように構築した。
すなわち、５′のPCR断片は、ヌクレオチド配列５′−T
TAATCCTCACTCTAAGAAAC−３′（配列番号３）（SOD−１
のcDNAの第193から213ヌクレオチド、第１番はATG開始
コドンのＡ）から成る５′プライマーEH78、およびヌク
レオチド配列５′−TTGTACGGCCAGTGATGGAATGCT−３′
（配列番号４）（第351から328ヌクレオチド）から成る
３′プライマーEH84を使用して創製し、３′のPCR断片
は、ヌクレオチド配列５′−AGCATTCCATCACTGGCCGTACAA
−３′（配列番号５）（第328から351ヌクレオチド）か
ら成る５′プライマーEH83、およびヌクレオチド配列
５′−TAATACGACTCACTATAGGG−３′（配列番号６）（ｐ
ブルースクリプト II SK＋の第626から645ヌクレオチ
ド）から成る３′プライマーEH42を使用して構築した。
５′および３′のPCR断片双方の50ナノグラムを第二段
階のPCR反応で組み合わせ、そしてプライマーEH78およ
びEH42を使用して増幅した。このPCR産物をBal Iおよび
Xho Iで切断しそしてBal IおよびXho Iで切断したpSK−
HX2中にクローニングし、かように本来の255bpのBal I/
Xho I断片をFALS変異体断片で置換した（クローンpSK−
113）。

Ala⁴→Val変異体は以下のように構築した。すなわ
ち、５′のPCR断片は、ヌクレオチド配列５′−GCACACC
ACTTTCATCGCCATGGTGGCGGCAAGCTTCGATC−３′（配列番号
７）（＋21から−20ヌクレオチド）から成る５′プライ
マーEH105、およびヌクレオチド配列５′−ATTAACCCTCA
CTAAAGGGA−３′（配列番号８）（ｐブルースクリプト
II SK＋の第792から773ヌクレオチド）から成る３′
プライマーEH41を使用して創製した。３′のPCR断片
は、ヌクレオチド配列５′−GATCGAAGCTTGCCGCCACCATGG
CGATGAAAGTGGTGTGC−３′（配列番号９）（＋21から−2
0ヌクレオチド）から成る５′プライマーEH104、および
ヌクレオチド配列５′−CTTCAGTTAATCCTGTAA−３′（配
列番号10）（第123から106ヌクレオチド）から成る３′
プライマーEH103を使用して創製した。上のように、
５′および３′のPCR断片双方の50ngを第二段階のPCR反
応で組み合わせ、そしてプライマーEH41およびEH103を
使用して増幅した。このPCR産物をHind IIIおよびRsr I
Iで切断しそしてHind IIIおよびRsr IIで切断したpSK−
HX2中にクローニングし、かように本来の51bpのHind II
I/Rsr II断片をFALS変異体断片で置換した（クローンpS
K−A4V）。上に記述される全PCR産物はシークェナーゼ
法（US バイオケミカル（US Biochemical）、クリーヴ
ランド、オハイオ州）を使用して配列を決定し、変異の
存在およびいかなるPCRの誤りの存在しないことを確認
した。変異、プライマーおよび制限酵素切断部位の位置
を明らかにするSOD−１遺伝子の図解が第４図に示され
る。

SOD−１のcDNAの発現ベクターの野生型構築物（pSK−
HX2）および変異構築物（pSK−113およびpSK−A4V）をH
ind IIIおよびXho Iで切断することにより構築した。SO
D−１のcDNA配列を含有する３個の得られた546bpの断片
それぞれを、Hind IIIおよびXho Iで切断したpcDNA I/
Neo（インヴィトロジェン コープ（Invitrogen Cor
p.）、サンディエゴ、カリフォルニア州）中に別個にク
ローニングし、それぞれpCMV−HX5（野生型SOD）、pCMV
−113（Ile¹¹³→Thr）、およびpCMV−A4V（Ala⁴→Val）
を得た。

II.パート２ 最初の実験は、FALS変異体SOD−１タンパク質の低減
した安定性がMCPが媒介するタンパク質分解性の分解に
よるかどうかを決定するために行った。293と称される
ヒト腎細胞株（ヒト293細胞もしくは293細胞）をアメリ
カン タイプ カルチャー コレクション（American T
ype Culture Collection）（ATCC）、12301 パークロ
ーン ドライヴ（Parklawn Drive）、ロックヴィル、メ
リーランド州、20853（ATCC ＃CRL 1573）から得、そ
して4.6g/Lグルコース、10％熱不活性化ウマ血清（ギブ
コ／ライフテクノロジー インク（Gibco/Life Technol
ogy Inc.）、ゲイタースバーグ、メリーランド州）を含
むダルベッコ（Dulbecco）の修飾イーグル（Eagle）培
地中で増殖させた。ヒト293細胞は５％CO2雰囲気中37℃
で維持した。293細胞をリン酸カルシウム法（チェン（C
hen,C.）ら、バイオテクニクス（Biotechniques）6:632
（1988））を使用して一過性にトランスフェクションし
た。pCMV−113 SOD−１発現ベクターを293細胞に導入
し、そして24時間後、細胞をいずれも５μＭの濃度の化
合物34、化合物14もしくは化合物24のいずれかと24時間
インキュベーションした。MCPおよび他のプロテアーゼ
の既知の阻害性化合物をジメチルスルホキシド（DMSO）
中で可溶化した。他の293細胞培養系は同体積のDMSOと
ともにインキュベートするか、もしくはネガティブコン
トロールとして培地のみの中に残した。

試験化合物を受け入れるおよそ48時間前に、５×10⁵
個の293細胞を36mmのプレートに植え付け、そして５％C
O₂雰囲気中37℃で維持した。細胞をMCP阻害剤（化合物3
4、同14もしくは同24）と、もしくはネガティブコント
ロールとしてDMSOと、24時間インキュベーションした。
細胞ライセートは、凍結／融解サイクルによりおよそ75
μｌのリン酸緩衝液処理生理的食塩水（PBS）中で細胞
を分解することにより調製した。細胞ライセートのタン
パク質濃度をBCA法（ピアース（Pierce）、ロックフォ
ード、イリノイ州）を使用して測定し、そして各サンプ
ルの２ないし2.5μｇをトリス／グリシン/SDS（25mMト
リス/192mMグリシン/0.1％SDS）緩衝液系を使用する４
〜20％ポリアクリルアミドゲル（ノヴェックス（Nove
x）、サンディエゴ、カリフォルニア州）上で電気泳動
した。タンパク質を電気溶出によりニトロセルロースフ
ィルターに転写し、そしてフィルターを30分間のブロッ
ト溶液（25mMトリス緩衝液処理生理的食塩水（１×TB
S）中５％粉乳）中でのインキュベーションによりブロ
ッキングした。フィルターを一次抗体溶液（ブロット溶
液で10,000倍に希釈）に移し、そして２〜18時間インキ
ュベートした。これらの研究で使用した一次抗体はE.コ
リ（E.coli）で産生した精製マウスSOD−１（ヘイゼル
トン リサーチ プロダクツ（Hazelton Research Prod
ucts）、デンバー、ペンシルバニア州）に対して出現さ
せたポリクローナルウサギ抗血清であった。フィルター
を１×TBS中で５分間ずつ３度洗浄し、そして二次抗体
溶液（ブロット溶液で2,000倍に希釈）中で２時間イン
キュベートした。二次抗体はアルカリフォスファターゼ
に結合したヤギ抗ウサギIgG（バイオラド（Bio−Ra
d）、リッチモンド、カリフォルニア州）であった。フ
ィルターを１×TBS中で５分間ずつ３度洗浄し、そし
て、商業的に入手可能なアルカリフォスファターゼ検出
試薬（バイオラド（Bio Rad）、リッチモンド、カリフ
ォルニア州）中での５〜60分間のインキュベーションに
よりアルカリフォスファターゼ活性について染色した。
SOD−１タンパク質に対応する染色されたバンドをドキ
ュゲル（DocuGel）Ｖ画像分析システムおよびRELPスキ
ャン ソフトウェア（スキャンアナリティクス（Scanan
alytics）、ビレリカ、マサチューセッツ州）を使用し
て定量した。SOD−１のレベルはネガティブコントロー
ルに関連する誘導の単位（すなわち、コントロールの単
位で実験の単位を割ったもの）として表した。細胞ライ
セートのイムノブロット分析は、SOD−１レベルがMCP阻
害剤の存在下でインキュベーションした３個のサンプル
それぞれでコントロールのレベルに比較して若干上昇し
たことを示した（第５図）。これらの結果は、本発明の
化合物によるMCP阻害がIle¹¹³→Thr変異体中のSOD−１
タンパク質の増大した蓄積につながり、かつそれによっ
てFALS変異を含有する細胞でのSOD−１の低減したレベ
ルを司るようにMCPを関連させることを示す。

III.パート３ MCP活性がSOD−１の代謝回転を司ることをさらに示す
ため、研究を、野生型のマウスSOD−１もしくはFALS変
異体タンパク質すなわちAla⁴の代りにValおよびIle¹¹³
の代りにThrを安定に産生する細胞株で行った。マウス
本来のSOD−１および上で言及された２種のFALS変異体S
OD−１タンパク質を安定に発現する細胞株は、SOD−１
のcDNA発現構築物（上で記述される）での293細胞のリ
ン酸カルシウムトランスフェクション（チェン（Chen,
C.）ら、バイオテクニクス（Biotechniques）6:632（19
88））、その後の1mg/mlのG418（ジェネティシン［Gene
ticin］（商標）、ギブコ／ライフテクノロジー イン
ク（Gibco/Life Technologies,Inc.）、ゲイタースバー
グ、メリーランド州）存在下での増殖によるネオマイシ
ン耐性についての選択により得た。細胞を３週間G418選
択中に維持し、その時点で薬剤選択を除去し、そしてそ
れぞれの形質転換された細胞タイプのG418耐性コロニー
をさらなる増殖のためプールした。化合物14をこれらの
研究で利用した。

指摘されるSOD−１アイソフォームを発現する細胞株
を様々な濃度の化合物14と24時間インキュベーション
し、その時点でSOD−１レベルをイムノブロットの濃度
測定スキャンニングにより測定した。SOD−１のレベル
はネガティブコントロールからのサンプルに関連する誘
導の単位として表し（上のように）、また、各データ点
は３回の実験の平均である。化合物14の用量反応分析
は、トランスフォーメーションされた細胞のこのMCP阻
害剤とのインキュベーションが、およそ20μＭの濃度の
化合物14とインキュベーションしたそれらの細胞で起こ
る最大の蓄積を伴うSOD−１タンパク質レベルの大きな
蓄積につながることを指摘した（第６図）。さらに、SO
D−１の蓄積の大きさは様々なSODタンパク質の推定され
る半減期に相関する。野生型SOD−１が最も安定であ
り、また、Ala⁴→Valが最も不安定である（ボーシェル
ト（Borchelt,D.R.）ら、）ら、プロシーディングス
オブ ナショナル アカデミー オブ サイエンス US
A（Proc.Natl.Acad.Sci.）、91:8292−8296（199
4））。これらのデータは、FALS変異が、おそらく誤っ
たフォールディングのため、およびMCPによる分解に対
する変異体の標的のこれらのタンパク質に起因する構造
変化の結果として、当該SOD−１を不安定するという仮
説と矛盾しない。これらの結果はまた、化合物14が、SO
D−１の分解におけるMCPの役割をさらに支持する、野生
型SOD−１タンパク質の代謝回転に対する統計学的に有
意の影響を有することを立証する。

IV.パート４ SOD−１の代謝回転でのMCP活性の特異性を立証する
（そしてカルシウム活性化性プロテアーゼのカルパイン
およびリソゾームのプロテアーゼのような他の主要なタ
ンパク質分解経路の可能性のある関与を排除する）た
め、２種の形質転換された細胞株（上に記述される、１
種は野生型タンパク質を、そして他方はAla⁴→Val変異
のあるSOD−１タンパク質を産生する）を様々なプロテ
アーゼ阻害剤とともにインキュベーションする実験を実
行した。これらの阻害剤のそれぞれは独特のタンパク質
分解活性について特異的である。すなわち、化合物14は
MCPを阻害する；細胞浸透性の「カルパイン」阻害剤
（カルパインはシステインプロテアーゼである）の「カ
ルペプチン」（ノヴァバイオケム USA（Novabiochem U
SA）、ラホヤ、カリフォルニア州、カタログ番号03−34
−0051;CBZ−Leu−Nle−アルデヒド、Biochem.Biophys.
Res.Comm.（1988）153:1201）；およびDK−３（エンザ
イム システムズ プロダクツ（Enzyme Systems Produ
cts）、ダブリン、カリフォルニア州;CBZ−Phe−Ala−C
HN₂）はリソゾームのプロテアーゼの活性を阻害する。
加えて、細胞を化合物16とともにインキュベーションし
た。この化合物は本発明のとりわけ好まれる化合物すな
わち化合物14に比較してより強力でないMCP阻害剤であ
る。指摘されるSOD−１アイソフォームを発現する細胞
株を、以下のプロテアーゼ阻害剤、すなわち20μＭの化
合物14、10μＭのカルペプチン、５μＭのDK−３、20μ
Ｍの化合物16、もしくはネガティブコントロールとして
のDMSO、と24時間インキュベーションした。阻害剤との
24時間のインキュベーションの後、SOD−１のレベルを
イムノブロットの濃度測定スキャンニングにより測定し
た。SOD−１のレベルは上のように未処理のサンプルに
関連する誘導の単位として表す。各データ点は３回の実
験からの結果の平均である。

結果は第７図に提示される。Ala⁴→Val変異SOD−１の
代謝回転はMCP活性の作用であること、および、好まれ
る化合物14によるMCPの特異的阻害のみがSOD−１タンパ
ク質の蓄積での大きな（３倍）増大につながることが見
られ得る。カルパインもしくはリソゾームのプロテアー
ゼの阻害剤とのインキュベーションはSOD−１の代謝回
転に評価できる影響を有しなかった。さらに、化合物14
での処理は野生型SOD−１の蓄積のわずかな増大とい
う、用量反応研究でもまたすでに観察された知見に帰着
した。一緒にすると、これらの研究は、MCP活性は形質
転換された293細胞株でのSOD−１代謝回転に決定的であ
ること、および、化合物14によるMCP阻害が範囲内でのS
OD−１タンパク質の上昇につながることを立証する。

阻害剤の合成 以下は本発明の化合物の調製の例示的合成経路を提供
する。他の合成プロトコール、および以下の合成スキム
の修飾は、本開示の用意すれば当業者には容易に明らか
となるであろう。

本発明の阻害剤は、ザ ペプタイズ：アナリシス、シ
ンテシス、バイオロジー（The Peptides:Analysis,Synt
hesis,Biology）、第１巻（1979）、グロス（Gross）ら
編、アカデミック プレス（Academic Press）に記述さ
れる、および、以下の実施例８−11に詳細に記述される
溶液相の技術を使用するよく知られた合成処置により導
入されうるアミド結合を組み込む。

当該阻害剤は、実施例14−38に記述されるように、断
片： R₁−（CH₂）_ｎ−CH（R₂）−COOH および H₂N−CH（R₃）−CONH−R₄ の別個の合成および結合（結合処置Ｉ）により調製され
うる。

あるいは、下の実施例39−42に記述されるように、そ
れらは断片： R₁−（CH₂）_ｎ−CH（R₂）−CONH−CH（R₃）−COOH
および H₂N−R₄ の別個の合成および結合（結合処置II）により調製され
うる。

置換基Ｑが１個のアルデヒド基を含有する場合（すな
わちH₂N−R₄があるアミノ酸由来のアミノアルデヒド例
えばH₂N−CH（CH₂R₇）−CHOである場合）、アセタール
保護された必要なアミノアルデヒドは、ガセック（Gace
k）ら、テトラヘドロン（Tetrahedron）、30、4233（19
74）により記述されるように、もしくは実施例12に記述
される処置により、合成しうる。結合が完遂した後（結
合処置ＩもしくはIIを介して）、アセタール保護基を実
施例11（方法Ｅ）に記述されるように除去して遊離のア
ルデヒド基を遊離させうる。

Ｑがメチルケトンまたはジアゾメチルケトン、ブロモ
メチルケトンもしくはクロロメチルケトンである場合
（すなわちH₂N−R₄がα−アミノ置換されたメチルケト
ンまたはあるアミノ酸由来のα−ジアゾメチルケトン、
α−ブロモメチルケトンもしくはα−クロロメチルケト
ンである場合）、結合処置IIはとりわけ都合がよい。ク
ロロメチルケトンの塩酸塩は購入されうる（ベイケム
バイオサイエンス インク（Bachem Bioscience In
c.）、キング オブ プルシア、ペンシルバニア州）
か、もしくは、その後にジアゾメチルケトンを生じるジ
アゾメタンとの反応が続くBoc保護されたアミノ酸の混
合無水カルボン酸への変換により調製され得る。ブロモ
メチルケトンおよびクロロメチルケトンは、ケトナー
（Kettner）ら、Arch.Biochem.Biophys.162、56（197
4）、フィットカウ（Fittkau）、J.Prakt.Chem.315、10
37（1973）もしくは1995年６月15日に公表されたジンマ
ーマン（Zimmerman）ら、PCT WO第95/15749号により記
述されるようなジアゾメチルケトンの臭化水素もしくは
塩化水素との反応により調製される。

対応するメチルケトン類は、ケトナー（Kettner）
ら、米国特許第4,652,552号により記述されるようにク
ロロメチルケトンの水素化分解により調製されうる。

Ｑがα−ジフルオロメチルケトンである場合は、対応
する１−アミノ−3,3−ジフルオロ−２−プロパノール
は結合処置IIにより調製されかつ結合され得、そして得
られるジフルオロアルコールはトレイノール（Traino
r）とシュタイン（Stein）、米国特許第4,923,890号に
より記述される処置によりジフルオロケトンに酸化され
得る。

Ｑがトリフルオロメチルケトンである場合（すなわち
H₂N−R₄がアミノ酸由来のトリフルオロメチルケトン例
えばH₂N−CH（CH₂−R₇）−COCF₃である）、必要なケト
ンはインペリアリ（Imperiali）とアベレス（Abele
s）、バイオケミストリー（Biochemistry）25、3760お
よび補足ページ（1986）により記述されるように調製さ
れうる。

Ｑがあるアミノ酸由来のモノフルオロメチルケトンで
ある場合（すなわちH₂N−R₄がフルオロメチルケトン基
を含有する場合例えばH₂N−CH（CH₂−R₇）−COCH₂F）、
必要なケトンは、Boc保護されたアミノ酸およびフルオ
ロマロン酸ベンジルマグネシウムを使用して、欧州特許
出願EP第442,754号のパーマー（Palmer）の処置により
調製されうる。Boc保護基の除去の後にアミンが結合処
置IIを使用して結合され得る。あるいは、モノフルオロ
メチルケトンが実施例42に記述されるように対応するア
ルコールの酸化により調製され得る。

Ｑがブロモアミノ酸誘導体である場合（すなわちＱが
−Ｂ（OH）_２もしくはその環状エステル）、その環状エ
ステルは本質的にシェンヴィ（Shenvi）、米国特許第4,
537,773号により記述されるように調製され、そして、
結合処置IIにより結合した後、場合によっては、シェン
ヴィ（Shenvi）とケトナー（Kettner）により米国特許
第4,499,082号および同第5,187,157号に、ならびにジャ
ーナル オブ バイオロジカル ケミストリー（J.Bio
l.Chem.）259、15106（1984）に記述されるように、遊
離ペプチドホウ素酸（boronic acid）に変換され得る。

Ｑがα−ジケトンもしくはα−ケトエステルである場
合（すなわちＱが−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R₇もしくは−
Ｃ（＝Ｏ）CO₂R₇）、必要なアミノジケトンもしくはα
−ケトエステルはアンジェラストロ（Angelastro）ら、
J.Med.Chem.33、13（1990）およびその中の引用文献に
より記述されるように調製され得る。α−ケトエステル
は加水分解されるかもしくはアミド化され、対応するα
−ケト酸もしくはアミドを産生する。α−ケトアミドも
また、ハルベソン（Harbeson）ら、J.Med.Chem.37、291
8−2929（1994）の処置の修飾により、商業的に入手し
得るBoc保護されたアミノ酸から調製されうる。この後
者の非常に有用な処置では、Boc保護されたアミノ酸は
続けてN,O−ジメチルヒドロキシアミド、アルデヒド、
シアノヒドリン、α−ヒドロキシカルボン酸、およびα
−ヒドロキシカルボキサミドに変換される： ここでR₁はBoc−NH−CH（CH₂R₇）−である。

Boc基は酸性条件下で除去され、そして中和後、遊離
のアミノ残基が結合処置IIにおけるように結合されてα
−ヒドロキシカルボキサミドを生じる。これはその後酸
化されα−ケトカルボキサミド阻害剤を与える： 実施例７ 方法A:混合無水物法： スキム： Ｘはフルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）基
もしくはｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）基;Yはア
セタールもしくはアミノアルデヒドの他の保護基 AA₁はアミノ酸 AA₂はアミノアルデヒド Ｎ−メチルモルフォリン（NMM）（１等量）を、テト
ラヒドロフラン（THF）中の保護されたアミノ酸の攪拌
した溶液に添加した。混合物を−15℃まで冷却し、クロ
ロギ酸イソブチル（IBCF）（1.1等量）で処理し、そし
て10分間反応させた。その後、遊離塩基の形態のアミノ
アルデヒド成分、その後にNMM（1.1等量、酸塩の場合は
2.2等量）を添加した。攪拌は−15℃で30分間、そして
その後３〜４時間室温で進行した。反応混合物を酢酸エ
チル（EtOAc）150〜200ml中に溶解した。得られた溶液
を水、５％炭酸水素ナトリウム（NaHCO₃）、２％クエン
酸水溶液、そして最後に水で、連続的に洗浄した。有機
層を無水硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）もしくは硫酸マグネ
シウム（MgSO₄）で乾燥し、溶媒を減圧下除去し、そし
てかように得られる生成物を石油エーテルと摩砕した。
かように得られる固形物のペプチドを濾別し、乾燥しそ
して特徴づけした。

実施例８ 方法B:Fmoc基の脱保護処置： スキム： 酢酸エチル（EtOAc）中の30％ジメチルホルムアミド
（DMF）混合物中のFmoc保護されたペプチド（0.2ないし
4mmol）をジエチルアミン（DEA）の50〜60倍過剰ととも
に室温で２時間処理した。溶媒を30℃で減圧下に蒸発
し、そして石油エーテルを残渣に添加した。沈殿物が形
成された場合はそれを濾過しそして乾燥した。他の場合
は、得られるガム状物質を石油エーテルと繰り返し摩砕
し、そしてこのガム状物質を真空下に保存した。

実施例９ 方法C:ペプチドへのキャッピング基もしくはアミノ酸の
添加： スキム： キャッピング基（遊離カルボン酸として）もしくは保護
されたアミノ酸（１等量）、ヘキサフルオロリン酸ベン
ゾトリアゾール−１−イロキシ−トリス−（ジメチルア
ミノ）−ホスホニウム（BOP）（1.1等量）および１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）（１等量）をDMF5
mLに溶解しその後NMM（2.2等量）を加えた。５分後、ペ
プチドもしくはカルボキシル基を保護されたアミノ酸の
脱保護した塩基性成分を添加し、pHを８に調整しそして
混合物を３〜４時間攪拌した。それをその後EtOAc150〜
300mLで希釈し、そして水、２％炭酸水素ナトリウム、
水、２％クエン酸および水で連続的に抽出した。有機層
を乾燥しそして乾固まで蒸発させ、キャッピングされた
もしくはＮ−保護されたペプチドを得た。

実施例10 方法D:カルボベンジルオキシ（CBZ−）基の除去の処
置： 酢酸エチル（15mL）中のCBZ保護されたペプチドもし
くはアミノ酸誘導体（1g）の溶液を0.2gの炭素上のPd/C
（50重量％の水を含有する炭素上の10％Pd）と混合し、
そして40psiで４時間水素化した。溶液をセライト［Cel
ite］（商標）（ケイソウ土）を通して濾過し、そして
乾固まで蒸発させ、未保護のペプチドもしくはアミノ酸
の誘導体を得た。

実施例11 方法E:アセタールのアルデヒドへの変換 3mLのTHF中のペプチドアセタール（１等量）溶液を3m
Lの塩酸水溶液（2M）と混合し、そして0.5〜２時間攪拌
した。溶媒を蒸発により除去し、そして最終残渣を水で
希釈しそして凍結乾燥してペプチドアルデヒドを得た。

実施例12 方法F:ロイシナールジエチルアセタールの調製： 段階1:NMM（10mL）をTHF250mL中のCBZ−Leu−OH（25g、
93mmol）の溶液に添加した。この溶液を−15℃に冷却
し、クロロギ酸イソブチル（IBCF）13mLで処理し、そし
て10分間反応させた。その後、DMF40ml中の塩酸N,O−ジ
メチルヒドロキシルアミン（9.36g、96mmol）の懸濁液
およびNMM10mlを添加した。攪拌４時間後、混合物を400
mlのEtOAcで希釈し、そしてこの溶液を水、５％炭酸水
素ナトリウム溶液、水、２％クエン酸および水で連続的
に洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥しそして
蒸発して無色油状物質19.0gを得た。

段階2:段階１よりの油状物質（19g）のエーテル200mL中
の溶液を−78℃まで冷却し、そして水素化アルミニウム
リチウム（LiAlH₄）のエーテル溶液（1.0M）120mLを45
分間にわたり滴下した。当該溶液を30分間攪拌し、そし
て1M硫酸水素カリウム（KHSO₄）200mLを窒素雰囲気下に
滴下した。有機層を分離し、硫酸水素カリウム（1M）溶
液で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）しそして蒸発し
て無色液体（CBZ−Leu−Ｈ）を得た。

段階3:オルトギ酸トリエチル104mLを、無水エタノール
（EtOH）100mL中のCBZ−Leu−Ｈ（12g）およびｐ−トル
エンスルホン酸（0.9g）の溶液に30分間かけて添加し
た。混合物を30分間攪拌し、そしてその後蒸発しかつエ
ーテル500mLで希釈した。エーテル層を炭酸水素ナトリ
ウムおよび塩化ナトリウムの飽和溶液で連続的に洗浄し
た。黄味がかった茶色の半固形物を冷ヘキサンから再結
晶し、CBZ−ロイシナールジエチルアセタールの灰白色
針状晶を得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.28
（ｍ、5H）、5.03（ｓ、2H）、4.77（ｄ、1H）、4.27
（ｄ、1H）、3.8（ｍ、1H）、3.63（ｍ、2H）、3.43
（ｍ、2H）、1.6（dd、2H）、1.30（ｍ、2H）、1.12
（ｍ、6H）、0.83（ｄ、6H） 段階4:段階３よりの生成物（14.8g）を方法Ｄを使用し
て2.5gのPd/Cで水素化し、4.09gのロイシナールジエチ
ルアセタールを油状物質として得た。¹H NMR（300MH
z、CDCl₃）δ:4.16（ｄ、1H）、3.70（ｍ、3H）、3.75
（ｍ、2H）、2.87（ｍ、1H）、1.78（ｍ、1H）、1.33
（ｍ、2H）、1.23（ｍ、6H）、0.935（dd、6H） 実施例13 方法G:P3模倣物（mimics）の合成（命名法についてはシ
ェヒター（Schechter,I.）とバーガー（Burger,A.）（1
967）Biochem.Biophys.Res.Commun.27:157−162を参
照） 段階1:シクロペンタン酢酸ベンジルの調製 ベンゼン（60mL）中のシクロペンチル酢酸（10.02g、
78.2mmol）、ベンジルアルコール（8.45g、78.2mmol）
およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（1.48g、78.2m
mol）の混合物をディーン・シュタルク（Dean−Stark）
の水分離器を使用して２時間還流した。冷却後、ベンゼ
ンを除去し、そして混合物をエーテル（50mL）で希釈し
さらに炭酸水素ナトリウム飽和溶液、飽和食塩水溶液で
逐次洗浄し、乾燥しかつ蒸発して当該化合物（15.40g）
を油状物質として得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:
7.35（ｍ、5H）、5.10（ｓ、2H）、2.40（ｄ、Ｊ＝8H
z、2H）、2.26（ｍ、1H）、1.81（ｍ、2H）、1.6（ｍ、
4H）、1.18（ｍ、2H）。

段階2:2−シクロペンチル−10−ヨウ化デカン酸ベンジ
ルの調製 THF（20mL）およびヘキサン（8mL）の混合物中のジイ
ソプロピルアミドリチウム（20mmol）の冷却した（−78
℃）溶液（対応するジイソプロピルアミンおよびｎ−ブ
チルリチウムよりインジツに得られる）に、無水THF（1
0mL）中の段階１で得た化合物（3.96g、18mmol）をゆっ
くりと添加した。混合物を30分間攪拌し、そしてヘキサ
メチルホスホルアミド（3.50g,20mmol）中の1,8−ジヨ
ウ化オクタン（7.19g、20mmol）を添加した。この混合
物を−78℃で30分間攪拌し、２時間かけてゆっくりと０
℃にし、そして12％塩化ナトリウム水溶液50mLの注意深
い添加により反応を停止した。混合物をエーテルで抽出
し、食塩水で洗浄し、乾燥しそして溶媒を蒸発した。粗
生成物を、溶出液としてヘキサンないしヘキサン中１％
EtOAcを使用するシリカでのフラッシュクロマトグラフ
ィーにより油状物質（3.23g）まで精製した。¹H NMR
（300MHz、CDCl₃）δ:7.35（ｍ、5H）、5.15（ｓ、2
H）、3.20（ｔ、8Hz、2H）、2.20（ｍ、1H）、1.2−1.8
（ｍ、22H） 段階3:10−シアノ−２−シクロペンチルデカン酸ベンジ
ルの調製 15mLの無水DMSO中の段階２よりのヨウ化エステル（3.
99g、8.7mmol）およびシアン化ナトリウム（0.47g、9.6
mmol）の混合物を70〜75℃で30分間加熱した。冷却後、
反応混合物を氷（約40g）上に注ぎ、エーテル中に抽出
しそして水および飽和食塩水で逐次洗浄した。有機層を
濃縮し油状物質（2.89g）を得た。¹H NMR（300MHz、CD
Cl₃）δ:7.35（ｍ、5H）、5.15（ｓ、2H）、2.30（ｔ、
8Hz、2H）、2.20（ｍ、1H）、2.00（ｍ、1H）、1.3−1.
8（ｍ、22H）。

段階4:10−Ｎ−フタルイミド−２−シクロペンチルデカ
ン酸ベンジルの調製 8mLのDMF中の段階２よりの化合物（1.21g、2.6mmol）
およびフタルイミドカリウム（0.536g、3mmol）の混合
物を70〜75℃で30分間加熱した。冷却後、反応混合物を
氷（約40g）上に注ぎ、60mLのエーテル中に抽出した。
合わせた有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、そして
無色油状物質（1.24g）まで濃縮した。¹H NMR（300MH
z、CDCl₃）δ:7.85（ｍ、2H）、7.70（ｍ、2H）、7.35
（ｍ、5H）、5.10（ｓ、2H）、3.65（ｔ、8Hz、2H）、
2.20（ｍ、1H）、2.00（ｍ、1H）、1.22−1.18（ｍ、22
H）。

段階5:10−シアノ−２−シクロペンチルデカン酸の調製 無水MeOH（35mL）中の段階３よりのシアノエステル
（2.89g、8mmol）および10％Pd−Ｃ（0.6g、デグサ（De
Gussa）、水分含量50％）の混合物を２時間水素化した
（42〜26psi）。反応混合物をセライト［Celite］（商
標）パッドを通して濾過し、そして無色油状物質まで濃
縮した。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:2.35（ｔ、8Hz、
2H）、2.20（ｍ、1H）、2.00（ｍ、1H）、1.3−1.9
（ｍ、22H）。

段階6:2−シクロペンチル−10−Ｎ−フタルイミドデカ
ン酸の調製 段階５の処置に従い、段階４の生成物（0.41g）を表
題の化合物（0.31g）に変換した。¹H NMR（300MHz、CD
Cl₃）δ:7.85（ｍ、2H）、7.70（ｍ、2H）、3.70（ｔ、
8Hz、2H）、2.15（ｍ、1H）、1.95（ｍ、1H）、1.10−
1.85（ｍ、22H）。

段階7:10−トリフルオロメタンスルホンアミド−２−シ
クロペンチル−デカン酸ベンジルエステルの調製 メタノール（8mL）中の段階４よりのエステル（0.874
g、1.7mmol）およびヒドラジン一水和物（0.425g、0.41
mL、8.5mmol）の混合物を還流下に30分間加熱し、濃縮
し、そして残渣をエーテルで摩砕して白色沈殿物を得、
これを濾別した。濾液を濃縮して油状物質（0.540g）を
得た。この油状物質を−10℃に冷却したジクロロメタン
（8mL）に溶解し、そしてこれにトリエチルアミン（0.3
24mL）その後トリフルオロメタンスルホニルクロリド
（0.25mL）を添加した。温度を１時間にわたってゆっく
りと室温にした。反応混合物をその後水、２％塩酸、水
および飽和食塩水で洗浄した。有機層を油状物質まで濃
縮し、そして、溶出液としてヘキサン中10％EtOAcを使
用するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーに
より精製し、10−トリフルオロメタンスルホンアミド−
２−シクロペンチル−デカン酸ベンジルエステルを油状
物質（0.25g）として得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）
δ:7.35（ｍ、5H）、5.15（ｓ、ブロード、1H）、5.10
（ｓ、2H）、3.25（ｍ、1H）、2.20（ｍ、1H）、2.00
（ｍ、1H）、1.10−1.7（ｍ、22H）。

段階8:2−シクロペンチル−10−（トリフルオロメタン
スルホンアミド）−デカン酸の調製 段階５で記述されるのと同じ処置に従い、段階７より
得た化合物（0.25g）を表題の化合物（0.20g）に油状物
質として変換した。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:6.60
−5.60（ｂ、1H）、3.30（ｄ、8Hz、2H）、2.15（ｍ、1
H）、1.90（ｍ、1H）、1.1−1.8（ｍ、22H）。

段階9:8−ヨウ化カプリル酸ｔ−ブチルの調製 表題の化合物を、段階２の化合物について記述される
ような処置に従い、酢酸ｔ−ブチル（1.16g）および1,6
−ジヨウ化ヘキサン（4.06g）から油状物質（2.13g）と
して合成した。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:3.20
（ｔ、8Hz、2H）、2.20（ｔ、8Hz、2H）、1.75−1.85
（ｍ、2H）、1.55−1.65（ｍ、2H）、1.45（ｓ、9H）、
1.25−1.43（ｍ、6H）。

段階10:2−シクロペンチルデカン−1,10−ジオン酸−１
−ベンジル−10−ｔ−ブチルエステルの調製 段階２に記述されるような処置を使用し、段階１より
のエステル（6.92g）および段階９よりのヨウ化エステ
ル（11.37g）を反応させて表題の化合物（7.44g）の油
状物質を得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.35
（ｍ、5H）、5.10（ｓ、2H）、2.20（ｍ、3H）、2.00
（ｍ、1H）、1.45（ｓ、9H）、1.0−1.9（ｍ、20H） 段階11:2−シクロペンチルデカン−1,10−ジオン酸−１
−ベンジル−10−メチルエステルの調製 段階10よりのジエステル（2.86g、7mmol）のジクロロ
メタン（30mL）溶液および90％TFA10mLを30分間攪拌し
た。蒸発の後得られる生成物をジクロロメタン（10mL）
およびメタノール（6mL）の混合物中に溶解した。当該
溶液を−20℃で攪拌し、そしてそれに塩化チオニル（6m
L）を２時間かけてゆっくりと添加した。溶媒を蒸発
し、そして残渣をジエチルエーテル（20mL）に溶解し
た。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水および食
塩水で逐次洗浄し、乾燥し、蒸発しそしてシリカゲル上
でフラッシュクロマトグラフィーし（溶出液:2％EtOAc
−ヘキサン）、生成物を油状物質（2.05g）としてもた
らした。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.35（ｍ、5
H）、5.10（ｓ、2H）、3.65（ｓ、3H）、2.30（ｔ、8H
z、2H）、2.20（ｍ、1H）、2.00（ｍ、1H）、1.10−1.9
0（ｍ、10H） 段階12:2−シクロペンチルデカン−1,10−ジオン酸−10
−メチルエステルの調製 段階５に記述されるような処置を使用し、段階11より
の化合物（4.96g）を表題の化合物（3.66g）に油状物質
として変換した。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:3.65
（ｓ、3H）、2.30（ｔ、8Hz、2H）、2.15（ｍ、1H）、
2.00（ｍ、1H）、1.10−1.19（ｍ、20H）。

段階13:6−シアノヘキサン−１−スルフィン酸ナトリウ
ム塩の調製 水冷却管、メカニカルスターラーおよび滴下ロートを
取りつけた三ツ口フラスコ中、95％エタノール中75mL中
の１−ブロモ−６−シアノヘキサン（8.04g、42.3mmo
l）溶液を置いた。混合物を還流まで加熱し、そしてそ
れに水50mL中の亜硫酸ナトリウム（8.00g、63.5mmol）
溶液を30分間かけてゆっくりと添加した。この混合物を
２時間加熱し、そしてその後減圧下に濃縮した。残渣を
95％エタノール（200ml）に溶解し、沸騰するまで加熱
しそして濾過した。濾液を濃縮しそして氷浴中で冷却し
た。沈殿物を濾過により収集しそして乾燥して白色固形
物3.00gを得た。さらに濃縮した母液は当該生成物2.2g
の別のバッチを産生した。¹H NMR（300MHz、DMSO−
d₆）δ:2.50（ｔ、Ｊ＝8Hz、2H）、2.40（ｔ、8Hz、2
H）、1.55（ｍ、4H）、1.3（ｍ、4H）。

段階14:6−シアノヘキサン−１−塩化スルホニルの調製 段階13よりの生成物（0.340g、1.6mmol）、塩化チオ
ニル（0.95g、8mmol）および１滴のDMFの混合物を75〜8
0℃で30分間加熱した。冷却後、溶媒を除去し、そして
残渣を氷水（5mL）で処理した。有機層をエーテル30mL
中に抽出し、そして合わせた有機層を３％炭酸水素ナト
リウム溶液および水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウ
ム）しそして濾過した。濾液を活性炭（ダルコ（Darc
o））で処理し、濾過しそして濃縮して、さらなる精製
なしに使用される無色油状物質（0.240g）を得た。

実施例14−38は第５表中に列挙されるMCP阻害剤の合
成を記述する。対応する精製条件は第６表中に列挙され
る。

実施例14 10−シアノ−２−シクロペンチルデカノイル−N^g−ニト
ロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:フルオレニルメチルオキシカルボニルN^g−ニトロ
−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセター
ル Fmoc−Arg（NO₂）−OH（4.41g、10mmol）を方法Ａ
（実施例７）に従い、1.29mLのIBCF、2.2mLのNMMおよび
10mLのTHF（実施例７の方法ＡでのDMFの代わりに）を使
用してLeu−アセタール（1.89g、10mmol）と結合した。
粗ペプチドを無定形の固体として得た。¹ H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.75（ｄ、2H）、7.55
（ｄ、2H）、7.4（ｍ、2H）、7.29（ｍ、2H）、6.21
（ｄ、1H）、5.91（ｄ、1H）、4.30（ｍ、5H）、3.66
（ｍ、3H）、3.63（ｄ、2H）、3.32（ｍ、2H）、1.72
（ｍ、4H）、1.29（ｍ、2H）、1.17（ｂ、6H）、0.89
（ｍ、6H）。

段階2:N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール
ジエチルアセタール Fmoc基を、段階１よりの生成物3.5gから脱保護法Ｂ
（実施例８）を使用して除去した。遊離塩基（2.5g）を
半固形物として得た。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:
8.6（ｂ、1H）、7.61（ｄ、1H）、4.27（ｄ、1H）、3.9
0（ｍ、1H）、3.59（ｍ、1H）、3.45（ｍ、4H）、3.14
（ｍ、2H）、1.54（ｍ、4H）、1.33（ｍ、3H）、1.10
（tt、6H）、0.83（dd、6H）。

段階3:10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−
Ng−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチ
ルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、DMF16mL中の方法Ｇより
の10−シアノ−２−シクロペンチル−デカン酸（2g、7.
5mmol）を、BOP（3.34g、7.5mmol）およびHOBt（1.01
g、7.5mmol）を使用して段階２の生成物（2.15g、5.5mm
ol）と処理し、粗ペプチド（3.85g）を薄黄色固体とし
て得た。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:8.31（bd、1
H）、8.0（bd、1H）、7.83（ｄ、1H）、4.34（ｍ、1
H）、4.24（ｄ、1H）、3.91（ｍ、1H）、3.56（ｍ、4
H）、3.43（ｍ、2H）、3.16（ｍ、2H）、2.47（ｔ、3
H）、2.03（ｍ、1H）、1.76（ｍ、2H）、1.15−2.0
（ｍ、25H）、1.07（ｍ、6H）、0.81（ｄ、6H）。

段階4:30％TFAを含有するアセトニトリル（ACN）10mL中
の段階３の生成物（0.2g）の溶液を１時間攪拌し、そし
て溶媒を蒸発し、そして化合物14をジエチルエーテルを
使用して沈殿させた。HPLC精製条件は第６表中に示す。
¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.38（ｓ、1H）、8.56
（ｂ、1H）、8.3（ｄ、1H）、7.99（dd、1H）、4.38
（ｍ、1H）、4.17（ｍ、1H）、3.37（ｍ、4H）、3.17
（ｍ、2H）、2.26（ｔ、3H）、1.0−2.0（ｍ、27H）、
0.86（dd、6H）。

実施例15 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−
（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホニ
ル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−
N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホ
ニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルア
セタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、10−シアノ−２−シクロ
ペンチル−デカン酸（2mmol、実施例13の方法Ｇ中の段
階５より）を、N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマ
ン−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナ
ールジエチルアセタール（1.8mmol、化合物14中の段階
２から）と結合し、当該化合物を固形物として得た。

段階2:10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−
N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホ
ニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階１よりの生成物（0.
3g）を化合物15（0.2g）に変換しそしてHPLCにより精製
した。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.38（ｓ、1
H）、8.23（ｄ、1H）、7.8（ｓ、1H）、7.72（ｄ、1
H）、7.49（ｔ、1H）、7.48（ｓ、1H）、4.34（ｍ、1
H）、4.14（ｍ、1H）、3.05（ｍ、2H）、2.60（ｔ、2
H）、2.50（ｓ、3H）、2.46（ｓ、3H）、2.25（ｍ、4
H）、2.00（ｓ、3H）、1.74（ｔ、2H）、1.6−1.0
（ｍ、25H）、1.13（ｓ、6H）、0.82（dd、6H） 実施例16 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールセミカルバゾ
ン 塩酸セミカルバジド（0.20mmol）、酢酸ナトリウム
（0.3mmol）および水（0.5mL）をエタノール4.5mL中の
化合物14（0.050g、0.089mmol）の溶液に添加しかつ室
温で一夜攪拌した。溶媒を除去しそして得られる化合物
16を第６表中に指摘されるようにHPLCにより精製した。
¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.91（ｓ、1H）、8.51
（ｓ、2H）、8.04（ｄ、1H）、7.95（ｄ、1H）、7.40
（ｓ、1H）、7.09（ｄ、1H）、6.29（ｓ、2H）、4.44
（ｍ、1H）、4.33（ｍ、1H）、3.16（ｓ、2H）、2.08−
1.00（ｍ、33H）、0.87（dd、6H）。

実施例17 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールオキシム 塩酸ヒドロキシルアミン（0.037g、0.534mmol）を、
ピリジン（0.175g、2.2mmol）中の実施例14の段階４の
生成物（0.05g、0.089mmol）の溶液に室温でそしてその
後80℃で30分添加した。生成物を第６表中に指摘される
ようにHPLCにより精製した。

実施例18 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール−Ｏ−メチル
オキシム 実施例17の処置に従い、化合物18を、塩酸Ｏ−メチル
ヒドロキシルアミン（0.031g、0.38mmol）を使用して調
製し、そして第６表中に指摘されるようにHPLCにより２
個のピークの混合物として単離した。

実施例19 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール−Ｏ−ベンジ
ルオキシム 実施例17の調製でのような処置に従い、化合物19を、
化合物14（0.05g、0.089mmol）、塩酸ヒドロキシルアミ
ンＯ−ベンジル（0.043g、0.267mmol）およびピリジン
（0.092mL、1.14mmol）を使用して作成した。当該化合
物はHPLC精製で２個のピークとして分離された。

実施例20 ９−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−ノナノ
イル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−
スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:Fmoc−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナー
ルジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、Fmoc−N^g−（2,2,5,7,8
−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−アル
ギニン（3.31g、5mmol）を、DMF12mL中のBOP（2.21g、5
mmol）、HOBt（0.67g、5mmol）およびNMM（0.7mL）を使
用してＬ−ロイシナールジエチルアセタール（0.85g、
実施例12の方法Ｆより）と結合しジペプチドアセタール
（3.24g）を得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.89
（ｓ、1H）、7.78（ｄ、2H）、7.6（ｄ、2H）、7.4
（ｔ、2H）、7.31（ｔ、3H）、6.4（ｄ、2H）、5.92
（ｄ、1H）、4.58（ｍ、1H）、4.43（ｍ、1H）、4.35
（ｍ、3H）、3.69（ｍ、2H）、3.53（ｍ、2H）、3.30
（ｍ、2H）、2.6（ｔ、2H）、2.58（ｓ、6H）、2.12
（ｓ、3H）、1.80（tt、2H）、1.64（ｍ、3H）、1.32
（ｍ、10H）、1.18（ｑ、6H）、0.89（ｔ、6H）。

段階2:N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−
スルホンニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｂ（実施例８）に従い、Fmoc基を段階１よりの生
成物（1.6g）から除去して半固形物（1.3g）を得た。¹H
NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:7.6（ｄ、1H）、6.76
（ｂ、1H）、6.46（ｂ、1H）、4.27（ｄ、1H）、3.9
（ｍ、1H）、3.58（ｍ、1H）、3.44（ｍ、4H）、3.11
（ｔ、1H）、3.01（ｍ、2H）、2.58（ｔ、2H）、2.47
（ｓ、6H）、2.03（ｓ、3H）、1.77（ｔ、2H）、1.5
（ｍ、5H）、1.26（ｓ、6H）、1.09（ｍ、6H）、0.83
（dd、6H） 段階3:9−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−
ノナノイル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナー
ルジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９−メトキシカルボニル
−２−シクロペンチル−ノナン酸（0.56g）を、DMF5mL
中のBOP（0.66g、1.5mmol）、HOBt（0.202g、1.5mmol）
およびNMM（2.2mL、2mmol）を使用してN^g−（2,2,5,7,8
−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−アル
ギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール（0.7g、
1.1mmol）と結合し、生成物（1.8g）を固形物として得
た。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:7.5−8.0（ｍ、2
H）、6.66（ｍ、1H）、6.4（ｍ、1H）、4.32（ｍ、1
H）、4.24（ｄ、1H）、3.93（ｍ、1H）、3.57（ｍ、6
H）、3.44（ｍ、4H）、3.04（ｍ、2H）、2.59（ｔ、2
H）、2.48（ｓ、6H）、2.28（ｍ、3H）、2.03（ｓ、3
H）、1.77（ｔ、2H）、1.48（ｍ、22H）、1.26（ｓ、6
H）、1.1（tt、9H）、0.81（ｔ、6H）。

段階4:9−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−
ノナノイル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナー
ル 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階１よりの化合物（0.
2g）を化合物20に変換しそしてHPLCにより直線精製し
た。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.37（ｓ、1H）、
8.2−7.4（ｍ、2H）、6.69（brm、1H）、6.4（brm、1
H）、4.3（ｍ、2H）、3.58（ｓ、3H）、3.03（ｍ、2
H）、2.60（ｔ、2H）、2.48（ｓ、6H）、2.26（ｍ、4
H）、2.03（ｓ、3H）、1.77（ｔ、2H）、1.47（brm、28
H）、1.24（ｓ、3H）、0.80（dd、6H）。

実施例21 ９−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−ノナノ
イル−N^g−（４−メトキシ−2,3,6−トリメチル−ベン
ゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシ
ナール 段階1:9−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−
ノナノイル−N^g−（４−メトキシ−2,3,6−トリメチル
ベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロ
イシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９−メトキシカルボニル
−２−シクロペンチル−ノナン酸（1.2mmol、方法Ｇの
段階12より）を、N^g−（４−メトキシ−2,3,6−トリメ
チルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ
−ロイシナールジエチルアセタール（1.0mmol）と結合
し、当該ペプチドを固形物として得た。

段階2:方法Ｅ（実施例11）に従い、段階１よりのアセタ
ールを化合物21に変換しそしてHPLCにより精製した。¹H
NMR（300MHz、CDCl₃/DMSO−d₆）δ:9.42（ｓ、1H）、
8.25（ｄ、1H）、7.92（ｄ、1H）、7.84（ｓ、1H）、6.
4（ｍ、2H）、4.40（ｍ、1H）、4.20（ｍ、1H）、3.80
（ｓ、3H）、3.57（ｓ、3H）、3.26（ｍ、2H）、2.64
（ｓ、3H）、2.55（ｓ、3H）、2.36（ｍ、2H）、2.07
（ｓ、3H）、1.8−1.0（ｍ、30H）、0.87（dd、6H）。

実施例22 ９−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−ノナノ
イル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−
スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ノルロイシナール 段階1:9−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−
ノナノイル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ノルロイシ
ナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、９−メトキシカルボニ
ル−２−シクロペンチル−ノナン酸（1mmol）を、DMF5m
L中のBOP（1mmol）、HOBt（1mmol）およびNMM（2.5mmo
l）を使用して、N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマ
ン−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ノルロイ
シナールジエチルアセタール（0.69mmol、方法Ｂに従い
実施例30の段階１より成る）と結合した。反応混合物を
4.5時間攪拌し、そして当該ペプチドを単離した（0.37
g、0.42mmol）。

段階2:9−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−
ノナノイル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ノルロイシ
ナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階１よりの生成物（0.
37g、0.42mmol）を化合物22（0.33g）に変換しそしてHP
LCにより精製した。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.
29（ｓ、1H）、7.79（ｄ、1H）、7.89（ｄ、1H）、7.31
（ｔ、1H）、7.26（ｓ、2H）、4.17（ｍ、1H）、3.94
（ｍ、1H）、3.49（ｓ、3H）、2.94（ｍ、2H）、2.74
（ｔ、2H）、2.51（ｔ、2H）、2.37（ｓ、6H）、2.20
（ｍ、4H）、1.94（ｓ、3H）、1.14（ｓ、6H）、1.0−
1.8（ｍ、3H）、0.74（ｔ、3H）。

実施例23 ９−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−ノナノ
イル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:9−メトキシカルボニル−２−シクロペンチル−
ノナノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシ
ナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９−メトキシカルボニル
−２−シクロペンチル−ノナン酸（0.66g、0.33mmol）
を、DMF7mL中のBOP（0.146g、0.33mmol）、HOBt（0.044
9g、0.33mmol）およびNMM（0.105g、0.95mmol）を使用
して実施例14の段階２よりの生成物（0.109g、0.28mmo
l）と結合し、段階１の表題の化合物（0.124g）を得
た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.31（ｍ、2H）、6.6
9（brd、1H）、6.15（brd、1H）、4.5（ｍ、1H）、4.33
（ｍ、1H）、4.18（ｍ、1H）、3.67（ｓ、3H）、3.53
（ｍ、4H）、3.32（ｍ、2H）、2.68（ｍ、2H）、2.29
（ｔ、3H）、2.0−1.0（bm、34H）、0.90（dd、6H）。

段階2:方法Ｅ（実施例11）に従い、当該ペプチド（段階
１より、0.124g）を化合物23（0.106g）に変換した。¹H
NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.39（ｓ、1H）、8.54
（ｍ、1H）、8.31（ｄ、1H）、7.99（brd、2H）、4.36
（ｍ、1H）、4.15（ｍ、1H）、3.33（ｓ、3H）、3.16
（ｍ、2H）、2.27（ｔ、2H）、2.03（ｍ、2H）、1.0−
1.7（ｍ、28H）、0.83（dd、6H）。

実施例24 ２−シクロペンチル−10−Ｎ−フタルイミド−デカノイ
ル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:2−シクロペンチル−10−Ｎ−フタルイミド−デ
カノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナ
ールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、方法Ｇの段階６よりの生
成物（0.25g、0.65mmol）を、DMF5mL中のBOP（0.288g、
0.65mmol）、HOBt（0.088g、0.65mmol）およびNMM（0.1
30mL、0.130mmol）を使用して実施例14の段階２よりの
生成物（0.195g、0.5mmol）と結合し、表題の化合物
（0.557g）を固形物として得た。¹H NMR（300MHz、DMS
O−d₆）δ:8.57（brm、1H）、7.91（ｄ、1H）、7.85（b
rd、4H）、7.55（ｄ、1H）、4.32（ｍ、1H）、4.23（d
d、1H）、3.90（ｍ、1H）、3.55（ｔ、3H）、3.43
（ｍ、4H）、3.14（ｍ、2H）、2.0（brm、1H）、1.74
（brm、2H）、2.0−1.15（2brm、28H）、1.09（tt、6
H）、0.79（dd、6H）。

段階2:2−シクロペンチル−10−Ｎ−フタルイミド−デ
カノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナ
ール 方法Ｅ（実施例11）を使用し、段階１の生成物（0.45
g）を化合物24（0.32g）に変換した。¹H NMR（300MH
z、DMSO−d₆）δ:9.38（ｓ、1H）、8.31（ｄ、1H）、8.
00（ｄ、1H）、7.85（ｍ、4H）、4.38（ｍ、1H）、4.15
（１、1H）、3.57（tt、3H）、3.15（ｍ、2H）、2.00
（ｍ、1H）、1.9−1.0（brm、30H）、0.86（dd、6H）。

実施例25 10−（トリフルオロメタンスルホニル）アミノ−２−シ
クロペンチル−デカノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニ
ル−Ｌ−ロイシナール 段階1:（トリフルオロメタンスルホニル）10−アミノ−
２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−ア
ルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、10−（トリフルオロメ
タンスルホニル）アミノ−２−シクロペンチル−デカン
酸（0.199g、0.51mmol）を、DMF5mL中のBOP（0.22g、0.
51mmol）、HOBt（0.069g、0.51mmol）およびNMM（0.052
mL、0.47mmol）を使用して実施例14の段階２よりの生成
物（0.175g、0.45mmol）と結合した。当該アセタールを
固形物（0.42g）として得た。¹H NMR（300MHz、CDC
l₃）δ:6.06（brm、1H）、5.81（ｍ、1H）、4.53（ｍ、
1H）、4.32（ｄ、1H）、4.13（ｍ、1H）、3.73（ｑ、4
H）、3.53（ｍ、2H）、3.30（ｑ、3H）、2.0−1.0（2br
m、36H）、0.99（dd、6H）。

段階2:10−（トリフルオロメタンスルホニル）アミノ−
２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−ア
ルギニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階１よりの生成物（0.
35g）を化合物25（0.17g）に変換した。¹H NMR（300MH
z、DMSO−d₆）δ:9.27（ｓ、1H）、8.46（brm、1H）、
4.30（ｍ、1H）、3.87（ｍ、1H）、3.09（ｍ、5H）、2.
8−1.0（brm、30H）、0.78（dd、6H）。

実施例26 モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−
Ｌ−ロイシナール 段階1:モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、表題の化合物を、DMF12m
L中のアゼライン酸モノメチルエステル（0.708g、3.5mm
ol）、BOP（1.55g、3.5mmol）、HOBt（0.47g、3.5mmo
l）およびNMM（0.38mL、3.5mmol）、N^g−ニトロ−Ｌ−
アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール（実
施例８の方法Ｂに従い実施例14の段階２より成る）（1.
306g、3.5mmol）を使用して作成した。当該ペプチドを
無定形の固形物（2.17g）として得た。¹H NMR（300MH
z、CDCl₃）δ:6.58（ｄ、1H）、6.04（ｄ、1H）、4.47
（ｍ、1H）、4.30（ｄ、1H）、4.17（ｍ、1H）、3.67
（ｓ、3H）、3.53（ｍ、2H）、3.2−3.4（ｔ、ｄ、2
H）、2.3（ｍ、3H）、2.2（ｔ、1H）、1.83（ｍ、1
H）、1.2−1.8（ｍ、24H）、1.2（ｍ、3H）、0.9（ｄ、
3H）。

段階2:モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、当該ペプチドアセタール
（段階１より）（250mg）を化合物26（0.22g）に変換し
た。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.38（ｓ、1H）、
7.73（ｄ、1H）、4.30（ｍ、1H）、4.09（ｍ、1H）、3.
57（ｓ、3H）、3.15（ｍ、2H）、3.01（ｑ、1H）、2.75
（ｍ、1H）、2.24（ｍ、7H）、1.50（ｍ、12H）、1.24
（ｂ、14H）、0.86（ｍ、6H）。

実施例27 モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−
Ｌ−フェニルアラニナール 段階1:フェニルアラニナールジエチルアセタール CBZ−Phe−OH（6.0g、2mmol）を、ロイシナールジエ
チルアセタールで使用される同じ処置（方法Ｆ、実施例
12）に従いフェニルアラニナールジエチルアセタールに
変換した。

段階2:Fmoc−Arg（NO₂）−OH THF60mLの中のフルオレニルメチルオキシカルボニル
−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（32mmol）
溶液を、水70mLのN^g−ニトロ−Ｌ−アルギニン（35mmo
l）および炭酸水素ナトリウム（70mmol）の攪拌した溶
液に添加した。乳状溶液は１時間後に透明になり、そし
てこの溶液を固形のクエン酸でpH2〜３まで酸性化し、
そして300mLのEtOAcで抽出した。有機層を水で１度洗浄
し、乾燥しそして蒸発して当該化合物を白色固形物とし
て得た（26.8mmol）。

段階3:Fmoc−Arg（NO₂）−樹脂 DMF40mL中の９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル−Ng−ニトロ−Ｌ−アルギニン（段階２より、26.8mm
ol）、BOP（30mmol）、HOBt（30mmol）およびNMM（55mm
ol）の溶液をPAC樹脂（ポリスチレン−１％ジビニルベ
ンゼンに取り付けられたα−メチルフェナシルリンカ
ー、置換0.97mmol/g、ベイケム バイオサイエンス イ
ンク（Bachem Bioscience,Inc）、キング オブ プル
シア、フィラデルフィア州、により供給される）10gと
混合しそして４時間攪拌した。樹脂を濾別し、DMF、DCM
およびMeOHで洗浄し、そして乾燥して最終生成物Fmoc−
Arg（NO₂）−樹脂（11.1g）を得た。この樹脂Fmoc−Arg
（NO₂）−樹脂（11.1g）を、ピペリジン（30％）、DMF
（35％）およびトルエン（35％）を含有する溶液100mL
で処理しそして2.5時間攪拌した。Fmocが除去された樹
脂を濾過し、そしてDCM/DMF（50:50）およびMeOHで連続
して洗浄して生成物（9.2g）を得た。

段階4:MeoAz:Arg（NO₂）−樹脂 アゼライン酸モノメチル（20mmol）を、Arg（NO₂）−
樹脂（9.2g）、BOP（20mmol）、HOBt（20mmol）およびN
MM（pHを８に調整するため）の攪拌したスラリーに添加
した。一夜攪拌後、アゼライン酸モノメチル（10mmo
l）、BOP（20mmol）、HOBt（10mmol）およびNMM（20mmo
l）の混合物を添加しかつ24時間攪拌した。当該樹脂をD
MF、DCMおよびメタノールで洗浄し、樹脂10.56gを得
た。

段階5:モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニン 段階４よりの生成物（10.56g）を、67％DCM（30％）T
FAおよび（３％）アニソールの100mLの溶液中で５時間
攪拌した。このスラリーを濾過しそして溶媒を蒸発し、
さらにエーテルで摩砕して当該ペプチド（1.11g、2.75m
mol）を得た。

段階6:モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニル−Ｌ−フェニルアラニナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、メトキシアゼライル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニン（1mmol）を、BOP（1.3mmo
l）、HOBt（1.3mmol）およびNMM（pHを８に調整するた
め）を使用してＬ−フェニルアラニナールジエチルアセ
タール（1.3mmol）と結合し、標題のペプチド（0.82mmo
l）を得た。

段階7:モノメチルアゼライル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニル−Ｌ−フェニルアラニナール 方法Ｅ（実施例11）を使用し、段階６よりの生成物
（0.82mmol）を標題の化合物26（0.81mmol）に変換し
た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:9.59（ｓ、1H）、8.3
6（ｓ、1H）、7.49（ｓ、1H）、7.31−7.09（ｍ、7
H）、6.71（ｄ、1H）、4.69（ｍ、1H）、4.60（ｍ、1
H）、3.66（ｓ、3H）、3.41（ｍ、2H）、3.27（ｍ、2
H）、2.31（ｔ、2H）、2.2（ｔ、2H）、1.80−1.2
（ｍ、14H） 実施例28 モノメチルアゼライル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチ
ルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−
ロイシナール 段階1:モノメチルアゼライル−N^g−（2,2,5,7,8−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル
−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（1.42g、7.0mmol）を、各7.0mmolのBOP、HOBtおよびNM
Mを使用してN^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−
６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール
ジエチルアセタール（3.06g、5.0mmol、実施例20の段階
２より得る）と結合し、当該化合物（3.43g）を固形物
として得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:6.58（ｄ、1
H）、6.04（ｄ、1H）、5.4（br、1H）、5.06（br、1
H）、4.47（ｍ、1H）、4.30（ｄ、1H）、4.17（ｍ、1
H）、3.67（ｓ、3H）、3.53（ｍ、4H）、3.23（ｄ、1
H）、3.19（ｔ、2H）、2.30（ｍ、2H）、2.2（tt、2
H）、2.0−1.25（2brm、17H）、1.20（tt、6H）、0.90
（dd、6H）。

段階2:モノメチルアゼライル−N^g−（2,2,5,7,8−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル
−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）を使用し、段階１よりの生成物
（0.30g）を化合物28（0.22g）に変換した。¹H NMR（3
00MHz、DMSO−d₆）δ:9.38（ｓ、1H）、8.5（br、1
H）、4.30（ｍ、1H）、4.09（ｍ、1H）、3.57（ｓ、3
H）、3.15（ｍ、2H）、3.00（ｔ、2H）、2.75（ｍ、2
H）、2.12（ｔ、2H）、1.8−1.20（2brm、17H）、0.86
（dd、6H） 実施例29 モノメチルアゼライル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチ
ルクロマン−６−スルホニル）−Ｄ−アルギニル−Ｌ−
ロイシナール 段階1:9−フルオレニルメトキシカルボニル−N^g−（2,
2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル）−
Ｄ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９−フルオレニルメトキ
シカルボニル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマ
ン−６−スルホニル）−Ｄ−アルギニン（3mmol）を、D
MF5mL中のBOP（3mmol）、HOBt（3mmol）およびNMM（5mm
ol）を使用してロイシナールジエチルアセタール（2.5m
mol）と結合し、当該ペプチド（1.72g、2mmol）を固形
物として得た。

段階2:MeOAz−Ｄ−Arg（PMC）−ロイシナールジエチル
アセタール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、アゼライン酸モノメチ
ル（1.0mmol）を、DMF5mL中のBOP（1mmol）、HOBt（1mm
ol）およびNMM（3mmol）を使用して、方法Ｂ（実施例
８）に従い段階１の標題の化合物より得たN^g−（2,2,5,
7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｄ−
アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール（0.
54g、0.88mmol）と結合し、当該化合物を得た（0.735
g）。

段階3:モノメチルアゼライル−N^g−（2,2,5,7,8−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｄ−アルギニル
−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）を使用し、段階２よりの生成物
（0.1g）を化合物29に変換しそしてHPLCにより精製し
た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:9.49（ｓ、1H）、7.7
4（ｔ、1H）、7.43（ｄ、1H）、6.43（ｄ、1H）、6.34
（ｓ、2H）、4.60（ｍ、1H）、4.51（ｓ、3H）、4.54
（ｓ、3H）、4.37（ｍ、1H）、3.66（ｓ、3H）、3.31
（ｍ、2H）、2.63（ｔ、2H）、2.26（ｍ、4H）、2.09
（ｓ、3H）、1.80（ｔ、2H）、1.57（ｍ、7H）、1.26
（ｍ、16H）、0.90（dd、6H） 実施例30 モノメチルアゼライル−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチ
ルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−
ノルロイシナール 段階1:Fmoc−N^g−（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ノルロイシ
ナール Fmoc−Arg（PMC）−OH（2mmol）を、DMF6mL中のBOP
（2mmol）、HOBt（2mmol）およびNMM（6mmol）を使用し
て、方法Ｃ（実施例９）に従い、ノルロイシナールジエ
チルアセタール（2mmol、Leu−アセタールの調製での処
置に従いCBZ−Nle−OHより得た）と結合し、当該ペプチ
ド（1.37g、1.64mmol）を得た。

段階2:MeOAz−Arg（PMC）−Ｌ−ノルロイシナールジエ
チルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（2mmol）を、BOP（2mmol）、HOBt（2mmol）およびNMM
（6mmol）を使用して、Arg（PMC）−ノルロイシナール
ジエチルアセタール（1.39mmol、実施例８の方法Ｂに従
い段階１より得た）と結合し、そして一夜攪拌した。翌
日、アゼライン酸モノメチル、BOP、HOBtおよびNMMの各
1mmolを添加しそして４時間攪拌した。反応混合物を実
施例９の方法Ｃのように加工し、当該ペプチド（0.37
g、0.84mmol）を得た。

段階3:方法Ｅ（実施例11）に従い、段階２よりの生成物
（0.94g、0.84mmol）を化合物30（0.58g）に変換した。
¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:9.54（ｓ、1H）、7.49
（ｔ、1H）、6.74（ｄ、1H）、6.26（ｓ、2H）、6.23
（ｄ、1H）、4.58（ｍ、1H）、4.31（ｍ、1H）、3.66
（ｓ、3H）、3.34（ｍ、2H）、2.63（ｔ、2H）、2.58
（ｓ、3H）、2.56（ｓ、3H）、2.29（ｔ、2H）、2.23
（ｔ、2H）、1.9−1.5（ｍ、22H）、1.30（ｓ、6H）、
0.86（ｔ、3H） 実施例31 モノメチルアゼライル−N^g−（ｐ−トルエンスルホニ
ル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:Fmoc−N^g−（ｐ−トルエンスルホニル）−Ｌ−ア
ルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、Fmoc−N^g−（ｐ−トル
エンスルホニル）−Ｌ−アルギニン（5mmol）を、DMF15
mL中のHBTU（5.5mmol）、HOBt（5.5mmol）およびNMM（1
1mmol）を使用して、ロイシナールジエチルアセタール
（5.5mmol）と結合した。当該ペプチドを固形物として
単離した（2.86g、3.96mmol）。

段階2:モノメチルアゼライル−N^g−（ｐ−トルエンスル
ホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチル
アセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（6mmol）を、DMF15mL中のヘキサフルオロリン酸１−ベ
ンゾトリアゾール−１−イル−1,1,3,3,−テトラメチル
ウロニウム（HBTU）（6mmol）、HOBt（6mmol）およびNM
M（12mmol）を使用しそして一夜攪拌して、N^g−（ｐ−
トルエンスルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナ
ールジエチルアセタール（2.7g、4.7mmol、実施例８の
方法Ｂを使用して段階１より得た）と結合した。反応収
量は、アゼライン酸モノメチル（3mmol）およびジフェ
ニルホスホリルアジド（3mmol）を添加することにより
増やされ、そして、４時間攪拌して当該ペプチド（1.92
g）を固形物として得た。

段階3:モノメチルアゼライル−N^g−（ｐ−トルエンスル
ホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階２よりの生成物（1.
92g、2.8mmol）を化合物31（1.64g）に変換した。¹H N
MR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.37（ｓ、1H）、8.97
（ｄ、1H）、8.37（ｄ、1H）、7.66（ｄ、2H）、7.37
（ｍ、1H）、7.29（ｄ、2H）、7.03（ｓ、1H）、6.63
（ｓ、1H）、4.09（ｍ、1H）、3.57（ｓ、3H）、3.44
（ｍ、1H）、3.04（ｍ、2H）、2.26（ｓ、3H）、2.33
（ｔ、2H）、2.13（ｔ、2H）、2.80−1.09（ｍ、7H）、
0.86（dd、6H）。

実施例32 モノメチルアゼライル−N^g−（４−メトキシ−2,3,6−
トリメチルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニ
ル−Ｌ−ロイシナールセミカルバゾン バサク（Basak,A.）ら、Int.J.Peptide Protein Res.
36 7−17（1990）を参照。90％EtOH3mL中のMeOAz−Arg
（MTR）−Leu−Ｈ（実施例34）（67mg、0.10mmol）、塩
酸セミカルバジド（11mg、0.1mmol）および酢酸ナトリ
ウム（9mg、0.11mmol）の混合物を70℃に18時間加熱し
た。反応混合物を濃縮し、薄黄色の固形物（化合物32）
を得た。これをその後第６表中のようにHPLCにより精製
した。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.91（ｔ、1H）、
7.09（ｄ、1H）、6.68（ｓ、1H）、6.22（ｓ、1H）、4.
37−4.46（ｍ、1H）、4.2−4.3（ｍ、1H）、4.04（ｄ、
1H）、3.7（ｓ、3H）、3.58（ｓ、3H）、2.6（ｓ、3
H）、2.27（dd、2H）、2.05、2.12（ｓ、3H）、1.2−1.
64（ｍ、12）、0.85（ｔ、6H）。

実施例33 モノメチルアゼライル−N^g−（４−メトキシ−2,3,6−
トリメチルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニ
ル−Ｌ−ロイシナールチオセミカルバゾン 実施例32と同じ段階に従い、化合物33を、90％EtOH2m
L中の実施例34の化合物（51mg、0.07mmol）およびチオ
セミカルバジド（7mg、0.07mmol）より作成した。

実施例34 モノメチルアゼライル−N^g−（４−メトキシ−2,3,6−
トリメチルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニ
ル−Ｌ−ロイシナール 段階1:方法Ｃ（実施例９）に従い、９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル−N^g−（４−メトキシ−2,3,6−
トリメチルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニ
ル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタールを、９−フル
オレニルメチルオキシカルボニル−N^g−（４−メトキシ
−2,3,6−トリメチルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ
−アルギニンおよびＬ−ロイシナールジエチルアセター
ルより調製した。

段階2:モノメチルアゼライル−N^g−（４−メトキシ−2,
3,6−トリメチルベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニ
ル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（6mmol）を、Ng−（４−メトキシ−2,3,6−トリメチル
ベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロ
イシナールジエチルアセタール（5mmol、実施例８の方
法Ｂを使用して段階１から得た）と結合し、そして当該
ペプチドを無定形の固形物（3.3g）として単離した。

段階3:メトキシアゼライル−N^g−（４−メトキシ−2,3,
6−トリメチルベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アル
ギニル−Ｌ−ロイシナール。

段階２よりの生成物（0.5g）を、実施例11の方法Ｅに
従って化合物34（0.36g）に変換した。¹H NMR（300MH
z、CDCl₃）δ:9.54（ｓ、1H）、7.51（ｓ、1H）、6.74
（ｄ、1H）、6.57（ｓ、Ｈ）、6.40（ｓ、2H）、6.31
（ｓ、1H）、4.66（ｍ、1H）、4.41（ｍ、1H）、3.87
（ｓ、3H）、3.70（ｓ、3H）、3.33（ｍ、2H）、2.73
（ｓ、3H）、2.66（ｓ、3H）、2.33（ｔ、2H）、2.26
（ｔ、2H）、2.17（ｓ、3H）、2.00−1.26（ｍ、17
H）、0.96（dd、6H）。

実施例35 メトキシアゼライル−N^g−（2,4,6−トリメチルベンゼ
ン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナ
ール 段階1:Fmoc−N^g−（2,4,6−トリメチルベンゼン−１−
スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエ
チルアセタール ジオキサン（10mL）中の4M塩酸溶液をジオキサン10mL
中のBoc−Arg（MTS）−OH（6mmol）の溶液に添加した。
30分後、溶媒を除去し、そしてエーテルを添加し、沈殿
物を収集しそして乾燥した（3.21g、9mmol）。塩酸Arg
−MTS−OHを、トシル誘導体の調製について記述される
ような処置（実施例31）に従ってFmoc−Arg（MTS）−OH
に変換し、標題の化合物を白色固形物（2.09g）として
得た。

段階2:Fmoc−Arg（MTS）−Leu−アセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、Fmoc−Arg（MTS）−OH
（3.361mmol）を、DMF15mL中のHBTU（4mmol）、HOBt（4
mmol）およびNMM（10mmol）を使用してロイシナールジ
エチルアセタール（4mmol）と結合し、標題のペプチド
（1.05g）を得た。

段階3:MeOAz−Arg（MTS）−Leu−アセタール 方法Ｃを使用し、アゼライン酸モノメチル（1.2mmo
l）を、DMF3mL中のBOP（1.2mmol）、HOBt（1.2mmol）お
よびNMM（3.6mmol）を使用して、Arg（MTS）−Leu−ア
セタール（0.85mmol、実施例８の方法Ｂに従い段階２よ
り得る）と結合し、そして一夜攪拌して、標題のペプチ
ドを半固形物（0.59g）として得た。

段階4:メトキシアゼライル−N^g−（2,4,6−トリメチル
ベンゼン−１−スルホニル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロ
イシナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階３の生成物（0.59
g）を化合物35（0.54g）に変換し、そしてHPLCにより精
製した。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:9.49（ｓ、1
H）、7.53（ｓ、1H）、6.90（ｓ、2H）、6.81（ｄ、1
H）、6.40（bs、3H）、4.61（ｍ、1H）、4.38（ｍ、1
H）、3.67（ｓ、3H）、2.67（ｓ、6H）、2.29（ｔ、2
H）、2.20（ｔ、2H）、2.0−1.20（ｍ、19H）、0.91（d
d、6H）。

実施例36 ６−シアノ−ヘキサン−１−スルホニル−N^g−（2,2,5,
7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル）−Ｌ−
アルギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:6−シアノ−ヘキサン−１−スルホニル−N^g−
（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホニ
ル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセ
タール 方法Ｇ（実施例13）の段階14よりの６−シアノ−ヘキ
サン−１−スルホニルクロリド（0.19g、0.89mmol）
を、DMF1mL中の実施例20の段階２よりの生成物（0.55
g、0.899mmol）の溶液に添加し、そしてこの溶液のpHを
NMMを使用して８に調整した。攪拌４時間後、反応混合
物を方法Ａ（実施例７）に記述されるように加工し、標
題化合物（0.466g）を得た。

段階2:6−シアノ−ヘキサン−１−スルホニル−N^g−
（2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−スルホニ
ル）−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）を使用し、段階１よりの生成物
（0.297g）を化合物36（0.22g）に変換し、そして第６
表中に記述されるようにHPLCにより精製した。¹H NMR
（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.37（ｓ、1H）、6.83（ｂ、1
H）、6.43（ｂ、1H）,3.88（ｍ、1H）、3.77（ｍ、1
H）、3.01（ｍ、2H）、2.80（ｍ、2H）、2.55（ｔ、2
H）、2.46（ｓ、6H）、2.0（ｓ、3H）、1.75（ｍ、5
H）、1.6−1.3（ｍ、15H）、1.23（ｓ、6H）、0.84（d
d、6H） 実施例37 ２−ナフトイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロ
イシナール 段階1:2−ナフトイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−
Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 塩化２−ナフトイル（0.104g、0.55mmol）を、DMF2mL
中の実施例14の段階２よりの生成物の溶液に添加し、そ
してNMM（0.18mL）および標題の生成物を加工して標題
化合物を固形物として得た（0.22g）。¹H NMR（300MH
z、CDCl₃）δ:8.92（ｂ、1H）、8.0−7.91（mm、10
H）、6.93（ｄ、1H）、5.07（ｍ、1H）、4.37（ｄ、1
H）、4.17（ｍ、1H）、3.69（ｍ、3H）、3.53（ｍ、3
H）、3.38（ｍ、2H）、1.77、1.58、1.4（mm、5H）、0.
83（dd、6H）。

段階2:2−ナフトイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−
Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）を使用し、段階１よりの生成物
（0.17g）を化合物37（60mg）に変換した。¹H NMR（30
0MHz、DMSO−d₆）δ:9.43（ｓ、1H）、8.72（ｄ、1
H）、8.53（ｍ、2H）、8.0（ｍ、6H）、7.6（ｍ、2
H）、6.20（ｍ、1H）、4.57（ｍ、1H）、4.14（ｍ、1
H）、3.92（ｍ、1H）、3.2（ｍ、2H）、3.0（ｄ、1
H）、1.77（ｍ、5H）、0.86（ｍ、6H）。

実施例38 CBZ−７−アミノヘプタノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アル
ギニル−Ｌ−ロイシナール 段階1:CBZ−７−アミノヘプタノイル−N^g−ニトロ−Ｌ
−アルギニル−Ｌ−ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、CBZ−７−アミノヘプタ
ン酸（0.7g、2.5mmol）を、BOP（1.1g、2.5mmol）、HOB
t（0.34g、2.5mmol）およびNMM（0.253mL、2.5mmol）を
使用して実施例14の段階２の生成物（0.78g、2.0mmol）
と結合し、当該ペプチドを半固形物として得た。これを
次の段階で直接使用した。

段階2:CBZ−７−アミノヘプタノイル−N^g−ニトロ−Ｌ
−アルギニル−Ｌ−ロイシナール 方法Ｅ（実施例11）に従い、段階１よりのアセタール
を、当該反応を５時間攪拌した後に化合物38（0.8g）に
変換した。¹H NMR（300MHz、DMSO−d₆）δ:9.30（ｓ、
1H）、8.47（ｓ、1H）、8.46（ｓ、1H）、8.29（ｄ、1
H）、8.11（ｔ、1H）、7.80（ｓ、1H）、7.64（ｄ、1
H）、7.31（ｓ、1H）、7.23（ｓ、5H）、4.91（ｓ、2
H）、4.23（ｍ、1H）、4.00（ｍ、1H）、3.51（ｑ、2
H）、3.27（ｍ、2H）、2.89（ｑ、2H）、2.11（ｔ、2
H）、2.03（ｔ、2H）、1.7−1.00（ｍ、10H）、0.77（d
d、6H）。

実施例39〜42は第７表中に列挙されるMCP阻害剤の合
成を記述する。

実施例39 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシンクロロメチルケト
ン これおよび以下の３個の実施例では、本発明の阻害剤
は結合処置IIにより調製される。各場合において、本明
細書に記述されるように調製される10−シアノ−２−シ
クロペンチル−デカノイル−N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニ
ンを酵素反応性のアミノ酸誘導体と結合して阻害剤を産
生する。これらの阻害剤は２個もしくはそれ以上のジア
ステレオマーの混合物として得られ、それらはいくつか
の場合にはHPLCにより分離されうる。

Ａ）10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル 方法Ｃ（実施例９）の処置に従い、DMF26mL中の実施
例13の段階５よりの10−シアノ−２−シクロペンチル−
デカン酸（2.4g;11mmol）を、塩化ジヒドロN^g−ニトロ
−Ｌ−アルギニンメチルエステル（2.86g、11mmol）、B
OP（6.6g、15mmol）、HOBt（1.62g、12mmol）およびNMM
3.6mL（33mmol）と攪拌し、当該メチルエステル4.8gを
泡状固形物として得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:
8.75（bs、1H）、7.81（bs、2H）、6.42（ｄ、1H）、4.
67（ｔ、1H）、3.82（ｓ、3H）、3.75（ｍ、1H）、3.32
（ｍ、1H）、2.15（ｔ、2H）、2.05−1.12（ｍ、28
H）。

Ｂ）10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニン メタノール30mL中の上のパート「Ａ」よりのメチルエ
ステル5.5gの溶液を1.00N水酸化ナトリウム水溶液24mL
で処理した。２時間後、２％炭酸水素ナトリウム水溶液
100mLを添加し、そして得られる溶液をエーテル100mLで
抽出した。水層を分離しそして３％クエン酸水溶液で酸
性化し、それから酢酸エチル250mLで抽出した。得られ
る有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、そ
して蒸発して無色ガム状物質を得た。これは石油エーテ
ルとの摩砕に際し重さ4.4gである微細白色粉末に固化し
た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:10.6（bs、1H）、8.7
5（bs、1H）、7.82（bs、2H）、6.41（ｄ、1H）、4.67
（ｔ、1H）、3.71（ｍ、1H）、3.32（ｍ、1H）、2.15
（ｔ、2H）、2.04−1.12（ｍ、30H）。

Ｃ）10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシンクロロメチル
ケトン 上のパート「Ｂ」よりの生成物467mg（1.0mmol）およ
び塩酸ロイシンクロロメチルケトン（ベイケム バイオ
サイエンス インク（Bachem Bioscience,Inc.）、キン
グ オブ プルシア、ペンシルバニア）270mg（1.0mmo
l）の混合物、BOP440mg（1.0mmol）およびDMF4.0mL中の
HOBt135mg（1mmol）をNMM0.33mL（3mmol）で処理した。
４時間後、混合物を酢酸エチル75mLで希釈し、２％炭酸
水素ナトリウム水溶液、水、３％クエン酸水溶液および
最後に水で洗浄した。有機層を分離しかつ乾燥（硫酸マ
グネシウム）し、そして最後に蒸発して薄黄色の粘稠な
油状物質を得た。この化合物を、溶出に酢酸エチルを使
用するシリカゲル60−Ｈの９×1/2インチカラムでのフ
ラッシュクロマトグラフィーにより精製した。得られる
溶液を蒸発し無色のガム状物質を得た。これを酢酸エチ
ル／エーテル1:1中において固化させ、無色固形物のク
ロロメチルケトン198mgを得た。HPLCが２種のジアステ
レオマーの存在を指摘し、これを調製RP−HPLCにより分
離した。水−アセトニトリルの濃度勾配（40分間でアセ
トニトリル30〜80％）中、22.58分（ジアステレオマー
ａ）および23.7分（ジアステレオマーｂ）のピークを単
離した。

ジアステレオマーa:¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.53
（bs、1H）、7.61（bs、2H）、7.31（bs、1H）、6.69
（ｄ、1H）、4.73（ｍ、1H）、4.65（ｍ、1H）、4.28
（ｑ、2H）、3.53（ｍ、1H）、3.31（ｔ、1H）、2.32
（ｔ、2H）、1.90−1.11（ｍ、31H）、0.93（ｑ、6
H）。

ジアステレオマーb:¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.53
（bs、1H）、7.61（bs、2H）、7.31（bs、1H）、6.79
（ｄ、1H）、4.73（ｍ、1H）、4.65（ｍ、1H）、4.28
（ｑ、2H）、3.53（ｍ、1H）、3.31（ｔ、1H）、2.32
（ｔ、2H）、1.90−1.11（ｍ、31H）、0.93（ｑ、6
H）。

実施例40 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−ホウ化ロイシンピナコールエス
テル 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−
ニトロ−Ｌ−アルギニン（実施例39、上のパート
「Ｂ」）467mg（1.0mmol）およびシェンヴィ（Shenv
i）、米国特許第4,537,773号の方法により調製した塩酸
ホウ化ロイシンピナコールエステル264mg（1.9mmol）、
BOP440mg（1.0mmol）およびHOBt135mg（1.0mmol）のDMF
5.0mL中の溶液をNMM0.33mL（3mmol）で処理した。２時
間後、混合物を酢酸エチル75mLで希釈し、そして２％炭
酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄し、それから有
機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）しさらに蒸発
して薄茶色の粉末410mgを得た。この固形物をクロロホ
ルムで洗浄して生成物290mgを灰白色の固形物として得
た。これはHPLCで単一ピークを表した。¹ H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.53（bs、1H）、7.65（b
s、2H）、6.71（ｔ、1H）、4.61（ｍ、1H）、3.52
（ｍ、1H）、3.31（ｍ、2H）、3.05（ｍ、1H）、2.82
（ｍ、1H）、2.38（ｔ、2H）、2.06−1.42（ｍ、28
H）、1.22（ｓ、12H）、1.15（ｍ、2H）、0.92（ｍ、6
H）。

実施例41 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−ロイシンα−ケトエチルアミド Ａ）10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニル−（１−エチルアミノカルボ
ニル１−ヒドロキシ−４−メチル）−２−ペンチルアミ
ド DMF5.0mL中の10−シアノ−２−シクロペンチル−デカ
ノイル−Ng−ニトロ−Ｌ−アルギニン467mg（1.0mmol）
および塩酸３−アミノ−２−ヒドロキシ−５−メチル−
ヘキサン酸Ｎ−エチルアミド（ハーブソン（Harbeson）
ら、J.Med.Chem.37、2918−29（1994）の方法により調
製した）225mgの溶液を、BOP440mg（1mmol）、HOBt135m
g（1mmol）およびNMM0.33mL（3mmol）で処理した。２時
間攪拌後、溶液を酢酸エチル75mLで希釈し、そして２％
炭酸水素ナトリウム水溶液、水、３％クエン酸水溶液、
水で洗浄し、そして乾燥（硫酸マグネシウム）して、蒸
発後、ヒドロキシ化合物540mgを灰白色の固形物として
得た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.53（bs、1H）、
7.73（bs、2H）、7.04（bm、1H）、6.83（ｔ、1H）、4.
52（ｍ、1H）、4.19（ｍ、1H）、4.11（ｑ、2H）、3.46
（ｑ、2H）、3.26（ｍ、2H）、2.35（ｔ、2H）、1.91
（ｍ、2H）、1.83（ｍ、2H）、1.8−1.2（ｍ、28H）、
1.13（ｔ、3H）、0.88（ｍ、6H）。

Ｂ）10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニル−ロイシンα−ケトエチルア
ミド 上のパート「Ａ」よりのヒドロキシ化合物250mgの無
水ジクロロメタン6.0mL中の溶液を０℃に冷却し、そし
てデス−マーチン（Dess−Martin）試薬（デス（D.B.De
ss）とマーチン（J.C.Martin）、ジャーナル オブ オ
ーガニック ケミストリー（J.Org.Chem.）48、4156−4
158（1983））225mg（約0.5mmol）と攪拌した。

当該反応を室温まで温まらせそして２時間攪拌した。
この濁った懸濁液を酢酸エチル50mLで希釈し、そして細
かい焼結ガラスフィルターを通して濾過した。濾液を10
％チオ硫酸ナトリウム水溶液で、その後飽和塩化ナトリ
ウムで洗浄した。それを乾燥（硫酸マグネシウム）しそ
して蒸発して白色粉末のケトアミド生成物180mgを得
た。これを水−アセトニトリル濃度勾配系（40分間で40
〜70％アセトニトリル）を使用する調製RP−HPLCにより
精製した。18.07分（ジアステレオマーａ）および19.54
分（ジアステレオマーｂ）のピークを収集した。

ジアステレオマーa:¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.45
（bs、1H）、7.58（bs、2H）、7.04（bm、2H）、6.57
（ｔ、1H）、5.33（ｔ、1H）、4.60（ｍ、1H）、3.51
（ｍ、1H）、3.33（ｍ、3H）、2.35（ｔ、2H）、1.91−
1.11（ｍ、34H）、0.94（ｍ、6H）。

ジアステレオマーb:¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.45
（bs、1H）、7.48（bs、2H）、7.25（ｍ、1H）、7.04
（ｔ、1H）、6.85（ｍ、1H）、6.62（ｄ、1H）、5.32
（ｔ、1H）、4.81（ｍ、1H）、4.58（ｍ、1H）、3.51
（ｍ、1H）、3.35（ｍ、3H）、2.35（ｔ、2H）、1.95−
1.11（ｍ、32H）、0.98（ｍ、6H）。

実施例42 10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g−ニ
トロ−Ｌ−アルギニル−フェニルアラニンフルオロメチ
ルケトン Ａ）１−ニトロ−２−フェニルエタンの合成 室温のクロロホルム（400mL）およびイソプロパノー
ル（75mL）中のトランス−β−ニトロスチレン（5.25
g、0.035mol）およびシリカゲル（10g、230〜400メッシ
ュ）の攪拌している混合物に、テトラヒドロホウ酸ナト
リウム（5.50g、0.145mol）を45分間にわたってゆっく
りと添加した。反応混合物をさらに15分間攪拌し、そし
てその後10％塩酸（20mL）で慎重に反応を停止した。分
離された固形物を濾過しそしてクロロホルム（50mL）で
洗浄した。合わせた濾液および洗液を水（１×20mL）、
食塩水（１×20mL）で洗浄し、そして無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥した。減圧下での溶媒の蒸発で粗材料を得、こ
れをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８％
酢酸エチル−ヘキサン）によって精製して、１−ニトロ
−２−フェニルエタン2.86gを無色油状物質（スパイス
臭）として得た;R_f（ヘキサン中10％酢酸エチル）:0.4
0;¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.40−7.20（ｍ、5
H）、4.60（ｔ、2H）、3.30（ｔ、2H）。

Ｂ）１−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−ニトロ−４−
フェニルブタンの合成 ジクロロメタン（11.60mL、0.0232mol）中の塩化オキ
ザリル（2M）の冷却した（−78℃）溶液にジメチルスル
ホキシド（3.65g、3.32mL、0.0467mol）をゆっくりと添
加した。反応混合物を15分間攪拌した。ジクロロメタン
（10mL）中の２−フルオロエタノール（1.16g、0.0181m
ol）の溶液をその後反応フラスコ中にゆっくりと導入し
た。さらに15分間撹拌した後、反応混合物を無水ジクロ
ロメタン（180mL）で希釈し、そしてトリエチルアミン
（9.20g、12.63mL、0.090mol）をそれに添加した。攪拌
をさらに２時間継続し、それまでに温度を室温にまで上
げた。この時点で、無水ジクロロメタン（10mL）中の１
−ニトロ−２−フェニルエタン（2.74g、0.0181mol）の
溶液を反応混合物に添加し、そして攪拌を一夜継続し
た。混合物をその後水（１×30mL）、４％塩酸（３×20
mL）、水（１×20mL）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液
（２×20mL）および食塩水（１×20mL）で洗浄した。無
水硫酸ナトリウムで乾燥しそして溶媒の蒸発で粗材料を
得、これをフラッシュクロマトグラィー（シリカゲル、
25％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して、生成物を
エリスロおよびスレオの異性体として得た。合わせた収
量は3.01gであった。この処置の一般的な記述はインペ
リアリ（Imperiali,B.）ら、テトラヘドロン レターズ
（Tetrahedron Lett.）27（２）、135（1986）中および
レヴェス（Revesz,L.）ら、テトラヘドロン レターズ
（Tetrahedron Lett.）35（52）、9693（1994）中に見
出され得る。

異性体ａは白色固形物、融点71〜73℃であった;R
_f（ヘキサン中30％酢酸エチル）:0.46;¹H NMR（3MHz、
CDCl₃）δ:7.40−7.10（ｍ、5H）、4.90（ｍ、1H）、4.
60（ｍ、1H）、4.50−4.30（ｍ、2H）、3.45−3.25
（ｍ、2H）、2.70（ｄ、1H）。

異性体ｂは無色油状物質であった;R_f（ヘキサン中30
％酢酸エチル）:0.42;¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.4
0−7.15（ｍ、5H）、4.90（ｍ、1H）、4.65（ｍ、1
H）、4.50（ｍ、1H）、4.20（ｍ、1H）、3.40−3.30
（ｍ、2H）、2.90（ｄ、1H）。

Ｃ）３−アミノ−１−フルオロ−２−ヒドロキシ−４−
フェニルブタンの合成 上の異性体ａ（0.48g、2.25mol）、無水エタノール
（20mL）およびラネーニッケル（触媒）の混合物を、パ
ー（Parr）の装置中で５時間水素化（60psi）した。セ
ライトパッドを通しての濾過および溶媒の蒸発でアミン
異性体a410mgを得た。上の異性体ｂ（800mg、3.75mmo
l）の同様の処理でアミン異性体b510mgを得た。

アミン異性体ａは白色固形物、融点64〜67℃であっ
た;¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.40−7.10（ｍ、5
H）、4.70（ｄ、1H）、4.50（ｄ、1H）、3.90−3.70
（ｍ、1H）、3.30−3.10（ｍ、1H）、2.95（dd、1H）、
2.60−2.45（ｑ、1H）、2.20−1.70（ブロード、3H）。

アミン異性体ｂは白色固形物、融点67〜70℃であっ
た;¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:7.40−7.10（ｍ、5
H）、4.70（ｄ、1H）、4.55（ｄ、1H）、3.70−3.50
（ｍ、1H）、3.20−3.00（ｍ、1H）、2.95（dd、1H）、
2.60−2.45（ｑ、1H）、2.20−1.65（ブロード、3H）。

Ｄ）10−シアノ−２−シクロペンチル−デカノイル−N^g
−ニトロ−Ｌ−アルギニル−（４−フルオロ−３−ヒド
ロキシ−１−フェニル）−２−ブチルアミド DMF5.0mL中の10−シアノ−２−シクロペンチル−デカ
ノイル−Ng−ニトロ−Ｌ−アルギニン467mg（1.0mmol）
および３−アミノ−１−フルオロ−２−ヒドロキシ−４
−フェニル−ブタン183mg（1.0mmol）の溶液を、BOP440
mg（1.0mmol）、HOBt135mg（1.0mmol）およびNMM0.33mL
（3mmol）で処理した。２時間攪拌後、溶液を酢酸エチ
ル75mLで希釈し、そして、２％炭酸水素ナトリウム水溶
液、水、３％クエン酸水溶液、水で洗浄しそして乾燥
（硫酸マグネシウム）して、蒸発後に480mgのヒドロキ
シ化合物を灰白色の固形物として得た。;¹H NMR（300M
Hz、CDCl₃＋d₆−DMSO）δ:8.15（bs、1H）、7.82（bs、
2H）、7.21（ｍ、6H）、5.05（ｔ、1H）、4.51（ｍ、1
H）、4.22（ｍ、1H）、3.82（ｍ、1H）、3.75（ｍ、2
H）、2.95（ｑ、2H）、2.35（ｔ、2H）、2.04−1.13
（ｍ、31H）。

Ｅ）10−シアノ−２シクロペンチル−１−デカノイル−
N^g−ニトロ−Ｌ−アルギニル−フェニルアラニンフルオ
ロメチルケトン 無水ジクロロメタン6.0mL中のパート「Ｃ」よりのヒ
ドロキシ化合物250mgの溶液を０℃に冷却し、そしてデ
ス−マーチン（Dess−Martin）試薬225mg（約0.5mmol）
と攪拌した。反応を室温まで温まらせかつ２時間攪拌し
た。濁った懸濁液を酢酸エチル50mLで希釈し、そして微
細な焼結グラスフィルターを通して濾過した。濾液を10
％チオ硫酸ナトリウム水溶液でおよびその後飽和塩化ナ
トリウムで洗浄した。それを乾燥（硫酸マグネシウム）
しそして蒸発して、180mgの白色固定物を得た。HPLC精
製の後、42mgの純粋なフルオロメチルケトン精製物を得
た。¹H NMR（300MHz、CDCl₃）δ:8.56（bs、1H）、7.6
2（bs、2H）、7.42（ｔ、1H）、7.21（ｍ、5H）、6.63
（ｍ、1H）、5.05−4.53（ｍ、4H）、3.46（ｍ、1H）、
3.18（ｍ、2H）、2.98（ｑ、2H）、2.33（ｔ、2H）、2.
04−1.13（ｍ、27H）。

この明細書に引用される公表された文書のそれぞれは
完全に引用することにより本明細書に組み込まれる。

当業者は、多数の変更および修飾が本発明の好まれる
態様に示しなされうること、および、そうした変更およ
び修飾が本発明の精神を離れることなくなされうること
を正しく認識するであろう。従って、追加される（appe
nded）請求の範囲が全ての同等の変動を本発明の真の精
神および範囲内に含まれるように包含することが意図さ
れる。

本発明の主要な態様は、以下のとおりである。

1.下記式で表される化合物。

式中、 R₁は−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）OR₉、フタルイミド基、
−NH−SO₂R₉、および−NH−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₂は水素原子、ヒドロキシル基、１個から10個までの
炭素原子を有するアルキル基、および３個から７個まで
の炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から選
択され、 R₃は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−NH₂、−R₆−
NO₂、−R₆−Ｊおよび−R₆−CNよりなる群から選択さ
れ、 R₄は−CH（CH₂−R₇）−Ｑであり、 Ｑは−CH−R₈、−Ｃ（＝Ｏ）CH₃、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂C
l、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂Br、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂F、−Ｃ（＝
Ｏ）CHF₂、−Ｃ（＝Ｏ）CF₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R
₇、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂−
R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂H、−Ｂ（OH）_２、 式中ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキル基である、 よりなる群から選択され、 R₅は−NO₂、−CNおよび−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₆は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝NH）−NH−であり、 R₇はフェニル基、および１個から８個までの炭素原子
を有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合に
よっては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリー
ル基、もしくはヘテロアリール基で置換される、よりな
る群から選択され、 R₈は＝Ｏ、＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−OH、＝Ｎ
−OCH₃、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅、＝NNH−Ｃ（＝Ｓ）−NH
₂および＝Ｎ−NH−Ｊよりなる群から選択され、 R₉は水素原子、および１個から６個までの炭素原子を
有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合によ
っては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
基もしくはヘテロアリール基で置換される、よりなる群
から選択され、 Ｊは保護基であり、 ｎは３から10までの整数であり、そして ｍは２から５までの整数である。

2.R₁が−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）OCH₃、フタルイミド基お
よび−NH−SO₂CF₃からなる群から選択される、前記１項
に記載の化合物。

3.R₂が水素原子およびシクロペンチル基からなる群から
選択される、前記１項に記載の化合物。

4.R₃が−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−NH₂である、
前記１項に記載の化合物。

5.R₅が−NO₂、−CN、−PMC、−MTR、−MTSおよびTos基
からなる群から選択される、前記４項に記載の化合物。

6.R₇が−CH（CH₃）_２、−（CH₂）_２−CH3および−C₆H₅
からなる群から選択される、前記１項に記載の化合物。

7.Qが−CH−R₈である、前記１項に記載の化合物。

8.Qが−Ｃ（＝Ｏ）CH₃、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂Cl、−Ｃ（＝
Ｏ）CH₂Br、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂F、−Ｃ（＝Ｏ）CHF₂、−
Ｃ（＝Ｏ）CF₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R₇、−Ｃ（＝
Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂−R₇、−Ｃ
（＝Ｏ）CO₂H、−Ｂ（OH）_２、 からなる群から選択される、前記１項に記載の化合物。

9.Qが−CH−R₈、−Ｂ（OH）_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝
Ｏ）NH−R₇、 からなる群から選択される、前記７項に記載の化合物。

10.R₈が＝Ｏ、＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−OH、＝
Ｎ−OCH₃、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅、および＝NNH−Ｃ（＝
Ｓ）−NH₂からなる群から選択される、前記７項に記載
の化合物。

11.R₁が−Ｃ（＝Ｏ）OCH₃、フタルイミド基および−NHS
O₂CF₃からなる群から選択され、R₂がシクロペンチル基
であり、R₃が−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂
であり、Ｑが−CH−R₈であり、R₇が−CH（CH₃）_２であ
り、また、R₈が＝Ｏである、前記１項に記載の化合物。

12.R₁が−Ｃ≡Ｎであり、R₂がシクロペンチル基であ
り、R₃が−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂およ
び−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−NH₂からなる群か
ら選択され、Ｑが−CH−R₈であり、R₇が−CH（CH₃）_２
であり、また、R₈が＝Ｏである、前記１項に記載の化合
物。

13.R₁が−Ｃ≡Ｎであり、R₂がシクロペンチル基であ
り、R₃が−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂およ
び−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−NH₂からなる群か
ら選択され、Ｑが−Ｂ（OH）_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝
Ｏ）NH−R₇、 からなる群から選択され、また、R₇が−CH（CH₃）_２お
よび−CH₂−CH₃からなる群から選択される、前記１項に
記載の化合物。

14.R₁が−Ｃ≡Ｎであり、R₂がシクロペンチル基であ
り、R₃が−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−NO₂）−NH₂およ
び−（CH₂）_３−NH−Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−NH₂からなる群か
ら選択され、Ｑが−CH−R₈であり、R₇が−CH（CH₃）_２
であり、また、R₈が＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−O
H、＝Ｎ−OCH₃、および＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅からなる群
から選択される、前記１項に記載の化合物。

15.前記１項に記載の化合物および製薬学的に許容し得
る担体を含む、多機能プロテアーゼを阻害するための組
成物。

16.前記１項に記載の化合物および製薬学的に許容し得
る担体を含む、筋肉量の損失を低減するための組成物。

17.前記１項に記載の化合物および製薬学的に許容し得
る担体を含む、筋消耗疾患の治療のための組成物。

18.当該疾患が筋ジストロフィー、心性悪液質、気腫、
糖尿病、らい、栄養失調、骨軟化症もしくは癌性悪液質
である、前記17項に記載の組成物。

19.多機能プロテアーゼ阻害剤および製薬学的に許容し
得る担体を含む、Cu/Znスーパーオキシドジスムターゼ
ー１酵素の分解の低減のための組成物。

20.当該多機能プロテアーゼ阻害剤が式： 式中、 R₁は−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）OR₉、フタルイミド基、
−NH−SO₂R₉、および−NH−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₂は水素原子、ヒドロキシル基、１個から10個までの
炭素原子を有するアルキル基、および３個から７個まで
の炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から選
択され、 R₃は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−NH₂、−R₆−
NO₂、−R₆−Ｊおよび−R₆−CNよりなる群から選択さ
れ、 R₄は−CH（CH₂−R₇）−Ｑであり、 Ｑは−CH−R₈、−Ｃ（＝Ｏ）CH₃、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂C
l、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂Br、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂F、−Ｃ（＝
Ｏ）CHF₂、−Ｃ（＝Ｏ）CF₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R
₇、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂−
R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂H、−Ｂ（OH）_２、 式中ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキル基である、 よりなる群から選択され、 R₅は−NO₂、−CNおよび−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₆は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝NH）−NH−であり、 R₇はフェニル基、および１個から８個までの炭素原子
を有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合に
よっては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリー
ル基、もしくはヘテロアリール基で置換される、よりな
る群から選択され、 R₈は＝Ｏ、＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−OH、＝Ｎ
−OCH₃、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅、＝NNH−Ｃ（＝Ｓ）−NH
₂および＝Ｎ−NH−Ｊよりなる群から選択され、 R₉は水素原子、および１個から６個までの炭素原子を
有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合によ
っては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
基もしくはヘテロアリール基で置換される、よりなる群
から選択され、 Ｊは保護基であり、 ｎは３から10までの整数であり、そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物である、前記19項に記載の組成物。

21.多機能プロテアーゼの阻害剤および製薬学的に許容
し得る担体を含む、Cu/Znスーパーオキシドジスムター
ゼ−１酵素活性における低減を特徴とする疾患の治療の
ための組成物。

22.当該多機能プロテアーゼ阻害剤が式： 式中、 R₁は−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）OR₉、フタルイミド基、
−NH−SO₂R₉、および−NH−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₂は水素原子、ヒドロキシル基、１個から10個までの
炭素原子を有するアルキル基、および３個から７個まで
の炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から選
択され、 R₃は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−NH₂、−R₆−
NO₂、−R₆−Ｊおよび−R₆−CNよりなる群から選択さ
れ、 R₄は−CH（CH₂−R₇）−Ｑであり、 Ｑは−CH−R₈、−Ｃ（＝Ｏ）CH₃、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂C
l、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂Br、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂F、−Ｃ（＝
Ｏ）CHF₂、−Ｃ（＝Ｏ）CF₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R
₇、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂−
R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂H、−Ｂ（OH）_２、 式中ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキル基である、 よりなる群から選択され、 R₅は−NO₂、−CNおよび−Ｊよりなる群から選択さ
れ、 R₆は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝NH）−NH−であり、 R₇はフェニル基、および１個から８個までの炭素原子
を有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合に
よっては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリー
ル基、もしくはヘテロアリール基で置換され、よりなる
群から選択され、 R₈は＝Ｏ、＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−OH、＝Ｎ
−OCH₃、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅、＝NNH−Ｃ（＝Ｓ）−NH
₂および＝Ｎ−NH−Ｊよりなる群から選択され、 R₉は水素原子、および１個から６個までの炭素原子を
有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合によ
っては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
基もしくはヘテロアリール基で置換される、よりなる群
から選択され、 Ｊは保護基であり、 ｎは３から10までの整数であり、そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物である、前記21項に記載の組成物。

23.当該疾患が筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、
アルツハイマー病、ハンチントン病、卒中、外傷もしく
は虚血である、前記21項に記載の組成物。

配列の一覧 （１）一般的情報 （ｉ）出願人：モハメド・イクバル サンカー・チャッタージー ジェイムズ・L.ディエボルド ジェイムズ・C.カウエル ロバートサイマン （ii）発明の名称：多触媒プロテアーゼ阻害剤 （iii）配列の数:10 （iv）連絡先 （Ａ）住所：ウッドコックウォシュバーンカーツマッ
キーヴィッツアンド ノリス （Ｂ）通り：ワン リバティ プレイス、46階 （Ｃ）都市：フィラデルフィア （Ｄ）州：フィラデルフィア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号:19103 （ｖ）コンピュータで解読しうる形式 （Ａ）媒体の形:3.5インチディスク、720Kb （Ｂ）コンピュータ:IBM PC互換機 （Ｃ）オペレーティング システム:PC−DOS/MS−DOS （Ｄ）ソフトウェア：ワードパーフェクト 5.1 （vi）現在の出願のデータ （Ａ）出願番号：なし （Ｂ）提出日：これに添えて （Ｃ）分類：なし （viii）代理人の情報 （Ａ）氏名：マイケル・P.シュトラハー （Ｂ）登録番号:38,325 （Ｃ）参照／登録書番号:CEPH−0148 （ix）遠距離通信の情報 （Ａ）電話番号:215−568−3100 （Ｂ）ファクス番号:215−568−3439 （２）配列番号１の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:36 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号１ （２）配列番号２の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:30 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号２ （２）配列番号３の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:21 （Ｂ）発列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号３ （２）配列番号４の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）発列の長さ:24 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号４ （２）配列番号５の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:24 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号５ （２）配列番号６の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:20 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号６ （２）配列番号７の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:41 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号７ （２）配列番号８の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:20 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号８ （２）配列番号９の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:41 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号９ （２）配列番号10の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ:18 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:1本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：番号10

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 311/01 Ｃ０７Ｃ 311/01 Ｃ０７Ｄ 311/70 Ｃ０７Ｄ 311/70 Ｃ０７Ｆ 5/02 Ｃ０７Ｆ 5/02 Ｃ Ｃ０７Ｋ 5/023 Ｃ０７Ｋ 5/023 (31)優先権主張番号 ５５２，７９４ (32)優先日 平成７年11月３日(1995．11．3) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (72)発明者 サイマン，ロバート アメリカ合衆国デラウエア州19801ウイ ルミントン・ビタースイートドライブ 2646 (72)発明者 チヤタージー， サンカー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19096 ウインウツド・ヘンリーロード228 (72)発明者 カウアー， ジエイムズ・シー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19348 ケネツトスクエア・ウイロウグレンロー ド605 (56)参考文献 特開 昭55−69550（ＪＰ，Ａ) 国際公開95／13295（ＷＯ，Ａ１) Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，155［４ ］（1995），1767−1775. (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07C 279/14 A61K 31/275 A61K 31/69 C07C 279/34 C07C 311/01 C07D 311/70 C07F 5/02 C07F 5/023 ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式で表される化合物。 式中、 R₁は−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）OR₉、フタルイミド基、−N
   H−SO₂R₉、および−NH−Ｊよりなる群から選択され、 R₂は水素原子、ヒドロキシル基、１個から10個までの炭
   素原子を有するアルキル基、および３個から７個までの
   炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から選択
   され、 R₃は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝Ｎ−R₅）−NH₂、−R₆−NO
   ₂、−R₆−Ｊおよび−R₆−CNよりなる群から選択され、 R₄は−CH（CH₂−R₇）−Ｑであり、 Ｑは−CH−R₈、−Ｃ（＝Ｏ）CH₃、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂Cl、
   −Ｃ（＝Ｏ）CH₂Br、−Ｃ（＝Ｏ）CH₂F、−Ｃ（＝Ｏ）C
   HF₂、−Ｃ（＝Ｏ）CF₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）R₇、−
   Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）NH−R₇、−Ｃ（＝Ｏ）CO₂−R₇、
   −Ｃ（＝Ｏ）CO₂H、−Ｂ（OH）_２、 式中ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキル基である、 よりなる群から選択され、 R₅は−NO₂、−CNおよび−Ｊよりなる群から選択され、 R₆は−（CH₂）_ｍ−NH−Ｃ（＝NH）−NH−であり、 R₇はフェニル基、および１個から８個までの炭素原子を
   有するアルキル基であって前述のアルキル基が場合によ
   っては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
   基、もしくはヘテロアリール基で置換される、よりなる
   群から選択され、 R₈は＝Ｏ、＝Ｎ−NHC（＝Ｏ）−NH₂、＝Ｎ−OH、＝Ｎ−
   OCH₃、＝Ｎ−Ｏ−CH₂−C₆H₅、＝NNH−Ｃ（＝Ｓ）−NH₂
   および＝Ｎ−NH−Ｊよりなる群から選択され、 R₉は水素原子、および１個から６個までの炭素原子を有
   するアルキル基であって前述のアルキル基が場合によっ
   ては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール基
   もしくはヘテロアリール基で置換される、よりなる群か
   ら選択され、 Ｊは４−メトキシ−2,3,6−トリメチルベンゼン−１−
   スルホニル基、2,4,6−トリメチルベンゼン−１−スル
   ホニル基、2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−ス
   ルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基もしくはカルボ
   ベンジルオキシ基であり、 ｎは３から10までの整数であり、そして ｍは２から５までの整数である。
2. 【請求項２】請求項１記載の化合物および製薬学的に許
   容し得る担体を含む、多機能プロテアーゼを阻害するた
   めの組成物。
3. 【請求項３】請求項１記載の化合物および製薬学的に許
   容し得る担体を含む、筋肉量の損失を低減するための組
   成物。
4. 【請求項４】請求項１記載の化合物および製薬学的に許
   容し得る担体を含む、筋消耗疾患の治療のための組成
   物。
5. 【請求項５】請求項１記載の化合物および製薬学的に許
   容し得る担体を含む、Cu/Znスーパーオキシドジスムタ
   ーゼ−１酵素の分解を抑制するための組成物。
6. 【請求項６】請求項１記載の化合物および製薬学的に許
   容し得る担体を含む、Cu/Znスーパーオキシドジスムタ
   ーゼ−１酵素活性の低減を特徴とする疾患の治療のため
   の組成物。