JP2022524588A - タウ認識抗体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、タウを特異的に結合する抗体を提供する。抗体は、タウ関連症状および関連病状悪化を抑制するまたは遅らせる。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年３月３日に出願された米国特許仮出願第６２／８１３，１２６号、２０１９年３月３日に出願された米国特許仮出願第６２／８１３，１３７号および２０１９年４月２４日に出願された米国特許仮出願第６２／８３８，１５９号の優先権を主張するものである。これらの仮出願特許のそれぞれは、本出願において参照によりその全体が組み込まれる。
配列リストの参照
本出願は、２０２０年２月２４日に作成され、１６８，８７５バイトを含む、ファイル名５３６３２３ＷＯ＿ＳＴ２５．ＴＸＴの電子配列リストを含む。この配列リストは、本出願において参照によりその全体が組み込まれる。
タウは、リン酸化型で存在し得るよく知られたヒトタンパク質である（例えば、Ｇｏｅｄｅｒｔ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：４０５１－４０５５（１９８８）；Ｇｏｅｄｅｒｔ，ＥＭＢＯ Ｊ．８：３９３－３９９（１９８９）；Ｌｅｅ，Ｎｅｕｒｏｎ ２：１６１５－１６２４（１９８９）；Ｇｏｅｄｅｒｔ，Ｎｅｕｒｏｎ ３：５１９－５２６（１９８９）；Ａｎｄｒｅａｄｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：１０６２６－１０６３３（１９９２）参照）。タウは、特に中枢神経系における微小管の安定化に関与すると報告されている。総タウ（ｔ－タウ、すなわち、リン酸化型および非リン酸化型）ならびにリン酸化タウ（ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔａｕ）（ｐ－タウ、すなわち、リン酸化されたタウ）は、神経損傷および神経変性に応答して脳によって放出され、母集団と比べて、アルツハイマー病患者のＣＳＦにおいてレベルが増加していることが報告されている（Ｊａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ ９：１１９－２８（２０１０））。
タウは、神経原線維濃縮体の主要な構成成分であり、プラークと共にアルツハイマー病の顕著な特徴である。濃縮体は、８０ｎｍの規則的な周期で螺旋状に巻かれたペアで生じる直径１０ｎｍの異常な原線維で構成されている。神経原線維濃縮体内のタウは、分子上の特定の部位に結合したリン酸基で異常にリン酸化（高リン酸化）されている。アルツハイマー病における神経原線維濃縮体の強い関与は、嗅内皮質層ＩＩニューロン、海馬のＣＡ１領域および海馬台領域、扁桃体、ならびに新皮質のより深い層（層ＩＩＩ、Ｖ、および表面のＶＩ）に見られる。高リン酸化タウはまた、微小管アセンブリーを妨害することが報告されており、これは神経回路網の破壊を促進し得る。
タウ封入体は、アルツハイマー病、前頭側頭葉変性症、進行性核上性麻痺およびピック病を含むいくつかの神経変性疾患の神経病理を特徴付ける要素である。
一態様では、本発明は、配列番号８を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９または配列番号１４９を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号１０を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、配列番号１８と少なくとも９０％同一である成熟重鎖可変領域と、配列番号１２を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１５０、１５１、１５３、１５６、１５８、１５９、１６０、１６３、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３または１７４を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号１４を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、配列番号１２２と少なくとも９０％同一である成熟軽鎖可変領域とを含むヒトタウに特異的に結合する単離された抗体を提供する。
いくつかの抗体では、位置Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１７、Ｈ２４、Ｈ４０、Ｈ４３、Ｈ４８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、およびＨ９１の少なくとも１つが、それぞれＶ、Ｋ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｑ、Ｉ、Ｒ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、およびＦにより占められ得、位置Ｌ２、Ｌ１２、Ｌ１５、Ｌ３７、Ｌ３９、Ｌ４５、Ｌ６０およびＬ１００の少なくとも１つが、それぞれＶ、Ｐ、Ｌ、Ｑ、Ｒ、Ｒ、ＤおよびＱにより占められ得る。
いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１５０、１５１、１６３、１６７、１６８、または１６９を含む。いくつかの抗体では、重鎖可変領域は、配列番号１８を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１０、１２１、１２２または１２３を含む。
いくつかの抗体では、軽鎖可変領域は、配列番号１１０を含む。いくつかの抗体では、軽鎖可変領域は、配列番号１２１を含む。いくつかの抗体では、軽鎖可変領域は、配列番号１２２を含む。いくつかの抗体では、軽鎖可変領域は、配列番号１２３を含む。
いくつかの抗体では、重鎖可変領域は、配列番号１４６を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４または１２２を含む。いくつかの抗体では、軽鎖可変領域は、配列番号９４を含む。いくつかの抗体では、軽鎖可変領域は、配列番号１２２を含む。
いくつかの抗体では、重鎖可変領域は、配列番号１８または１４６を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１２２を含む。
別の態様では、本発明は、位置Ｈ２８がＮまたはＴにより占められ得ること、Ｈ５４がＮまたはＤにより占められ得ること、Ｈ５６がＤまたはＥにより占められ得ること、位置Ｈ５８がＶまたはＩにより占められること、および位置Ｈ６０がＤまたはＥにより示され得ること以外は、それぞれ配列番号８、９、および１０を含むＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３を含む成熟重鎖可変領域と、位置Ｌ２４がＫまたはＲにより占められ得ること、位置Ｌ５０がＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ得ること、位置Ｌ５２がＳまたはＧにより占められ得ること、および位置Ｌ５４がＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ得ること以外は、それぞれ配列番号１２、１３、および１４を含むＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３を含む成熟軽鎖可変領域とを含む、ヒトタウに特異的に結合する抗体を提供し、次に示す位置の少なくとも１つは指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１はＱにより占められ、Ｈ５はＱにより占められ、Ｈ１１はＬにより占められ、Ｈ２０はＬにより占められ、Ｈ２３はＴにより占められ、Ｈ３８はＫにより占められ、Ｈ７５はＳにより占められ、Ｈ５６はＥにより占められ、Ｈ５８はＩにより占められ、Ｈ６０はＥにより占められ、Ｈ８２はＶにより占められ、Ｌ１０はＴにより占められ、Ｌ１７はＥにより占められ、Ｌ２４はＲにより占められ、Ｌ３７はＱにより占められ、Ｌ４７はＧ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、Ｓ、またはＡにより占められ、Ｌ４８はＧまたはＤにより占められ、Ｌ４９はＥにより占められ、Ｌ５０はＥ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、Ｌ５２はＧにより占められ、Ｌ５４はＤ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ、Ｌ８３はＬにより占められ、Ｌ８６はＨにより占められ、Ｌ１００はＱにより占められ、Ｌ１０６はＬにより占められる。
別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体３Ｄ６の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトタウを結合する単離されたモノクローナル抗体を提供し、位置Ｈ２７がＦまたはＹにより占められ得ること、位置Ｈ２８がＮまたはＴにより占められ得ること、位置Ｈ２９がＩまたはＦにより占められ得ること、位置Ｈ３０がＫまたはＴにより占められ得ること、位置Ｈ５１がＩまたはＶにより占められ得ること、位置Ｈ５４がＮまたはＤにより占められ得ること、位置Ｈ６０がＤ、ＡまたはＥにより占められ得ること、位置Ｈ６１がＰまたはＥにより占められ得ること、位置Ｈ１０２がＦまたはＹにより占められ得ること、位置Ｌ５０がＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ得ること、位置Ｌ５２がＳまたはＧにより占められ得ること、および位置Ｌ５４がＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、ＶまたはＳにより占められ得ること以外は、３Ｄ６が、配列番号７を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体であり、以下の位置の少なくとも１つが、指定したアミノ酸により占められ：Ｌ３７がＱにより占められ、Ｌ４７がＧ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、Ｓ、またはＡにより占められ、Ｌ４８がＧまたはＤにより占められ、Ｌ４９がＥにより占められ、Ｌ５０がＥ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、Ｌ５２がＧにより占められ、Ｌ５４がＤ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ、Ｌ１００がＱにより占められ、Ｈ６０がＥにより占められ、Ｈ８２がＶにより占められる。
いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８７、配列番号８８、配列番号９２、または配列番号１４９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１５０～１７５のいずれかを含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号８９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８７を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８８を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号４２、配列番号５８、配列番号５９、または配列番号６０を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４３、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４または配列番号１４９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１５０～１７５のいずれかを含むアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体は、ヒト化抗体、ベニヤ抗体（ｖｅｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、またはキメラ抗体である。
いくつかの抗体は、配列番号７６～８０および配列番号９０～９１のいずれか１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号８３～８５のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの抗体は、配列番号１８および配列番号１４６～１４８のいずれか１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号９３～１４５のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ９３はＳにより占められ、Ｈ９４はＴにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｈ９３およびＨ９４は、それぞれ、ＳおよびＴにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ９１は、Ｆにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１はＥにより占められ、Ｈ５はＶにより占められ、Ｈ１１はＶにより占められ、Ｈ２０はＩにより占められ、Ｈ２３はＫにより占められ、Ｈ３８はＲにより占められ、Ｈ４２はＧにより占められ、Ｈ４３はＫにより占められ、Ｈ６６はＲにより占められ、Ｈ７５はＴにより占められ、Ｈ７６はＤにより占められ、Ｈ８１はＥにより占められ、Ｈ１０８はＬにより占められ、Ｈ１０９はＶにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ６６、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８１、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、およびＶにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１７はＴにより占められ、Ｈ８０はＭにより占められ、Ｈ８３はＲにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１７、Ｈ８０およびＨ８３は、それぞれ、Ｔ、Ｍ、およびＲにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ５８は、Ｉにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ２８はＴにより占められ、Ｈ６７はＶにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ２８およびＨ６７は、それぞれ、ＴおよびＶにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ５４はＤにより占められ、Ｈ５６はＥにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ５４およびＨ５６は、それぞれ、ＤおよびＥにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１はＱまたはＥにより占められ、Ｈ５はＱまたはＶにより占められ、Ｈ１１はＬまたはＶにより占められ、Ｈ１７はＳまたはＴにより占められ、Ｈ２０はＬまたはＩにより占められ、Ｈ２３はＴまたはＫにより占められ、Ｈ２８はＮまたはＴにより占められ、Ｈ３８はＫまたはＲにより占められ、Ｈ４２はＥまたはＧにより占められ、Ｈ４３はＱまたはＫにより占められ、Ｈ５４はＮまたはＤにより占められ、Ｈ５６はＤまたはＥにより占められ、Ｈ５８はＶまたはＩにより占められ、Ｈ６０はＤまたはＥにより占められ、Ｈ６６はＫまたはＲにより占められ、Ｈ６７はＡまたはＶにより占められ、Ｈ７５はＳまたはＴにより占められ、Ｈ７６はＮまたはＤにより占められ、Ｈ８０はＬまたはＭにより占められ、Ｈ８１はＱまたはＥにより占められ、Ｈ８２ｃはＬまたはＶにより占められ、Ｈ８３はＴまたはＲにより占められ、Ｈ９１はＦまたはＹにより占められ、Ｈ９３はＳにより占められ、Ｈ９４はＴにより占められ、Ｈ１０８はＴまたはＬにより占められ、Ｈ１０９はＬまたはＶにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域の次の位置の少なくとも１つは、指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１０はＥまたはＤにより占められ、Ｈ１２はＫまたはＶにより占められ、Ｈ１３はＫまたはＲにより占められ、Ｈ１７はＴ、ＬまたはＳにより占められ、Ｈ２４はＶまたはＡにより占められ、Ｈ２７はＦまたはＹにより占められ、Ｈ２８はＮまたはＴにより占められ、Ｈ２９はＩまたはＦにより占められ、Ｈ３０はＫまたはＴにより占められ、Ｈ３８はＱまたはＲにより占められ、Ｈ４０はＡまたはＲにより占められ、Ｈ４２はＧまたはＥにより占められ、Ｈ４３はＫまたはＱにより占められ、Ｈ４８はＭまたはＩにより占められ、Ｈ５１はＶまたはＩにより占められ、Ｈ５４はＮまたはＤにより占められ、Ｈ６０はＤ、ＡまたはＥにより占められ、Ｈ６１はＰまたはＥにより占められ、Ｈ６６はＲまたはＫにより占められ、Ｈ６７はＶまたはＡにより占められ、Ｈ７６はＤまたはＮにより占められ、Ｈ８０はＭまたはＬにより占められ、Ｈ８１はＥまたはＱにより占められ、Ｈ８２はＳまたはＧにより占められ、Ｈ８２ｃはＬまたはＶにより占められ、Ｈ８３はＴまたはＲにより占められ、Ｈ９１はＹまたはＦにより占められ、Ｈ９３はＡまたはＳにより占められ、Ｈ１０２はＦまたはＹにより占められ、Ｈ１０８はＴまたはＬにより占められ、Ｈ１０９はＬまたはＶにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ９１、Ｈ９３、およびＨ９４は、それぞれ、Ｆ、Ｓ、およびＴにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ６６、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８１、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５８、Ｈ６６、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｉ、Ｒ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｉ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｈ６０は、Ｅにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｈ８２Ｃは、Ｖにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｈ６０、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８２ｃ、およびＨ８３は、それぞれＥ、Ｍ、Ｅ、Ｖ、およびＲにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＬ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｌ７はＳにより占められ、Ｌ１０はＳにより占められ、Ｌ１５はＬにより占められ、Ｌ８３はＶにより占められ、Ｌ８６はＹにより占められ、Ｌ１０６はＩにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ７、Ｌ１０、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８６、およびＬ１０６は、それぞれ、Ｓ、Ｓ、Ｌ、Ｖ、Ｙ、およびＹにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＬ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｌ７はＴまたはＳにより占められ、Ｌ１０はＴまたはＳにより占められ、Ｌ１５はＩまたはＬにより占められ、Ｌ１７はＱまたはＥにより占められ、Ｌ２４はＫまたはＲにより占められ、Ｌ３７はＬまたはＱにより占められ、Ｌ４５はＫまたはＲにより占められ、Ｌ４７はＬ、Ｇ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、Ｓ、またはＡにより占められ、Ｌ４８はＩ、Ｇ、またはＤにより占められ、Ｌ４９はＹまたはＥにより占められ、Ｌ５０はＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、Ｌ５２はＳまたはＧにより占められ、Ｌ５４はＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ、Ｌ８３はＬまたはＶにより占められ、Ｌ８６はＨまたはＹにより占められ、Ｌ１００はＡまたはＱにより占められ、Ｌ１０６はＬまたはＩにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＬ領域中の次の位置の少なくとも１つは、指定したアミノ酸により占められる：Ｌ２はＶまたはＩにより占められ、Ｌ７はＳまたはＴにより占められ、Ｌ１２はＰまたはＳにより占められ、Ｌ１５はＬまたはＩにより占められ、Ｌ３６はＬにより占められ、Ｌ３７はＬまたはＱにより占められ、Ｌ４５はＲまたはＫにより占められ、Ｌ４７はＬ、Ｇ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、Ｓ、またはＡにより占められ、Ｌ４８はＩ、Ｇ、またはＤにより占められ、Ｌ４９はＹまたはＥにより占められ、Ｌ５０はＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、Ｌ５２はＳまたはＧにより占められ、Ｌ５４はＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖにより占められ、Ｌ６０はＤまたはＳにより占められ、Ｌ１００はＧまたはＱにより占められる。
いくつかの抗体では、ＶＬ領域中の位置Ｌ７、Ｌ１０、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８６、およびＬ１０６は、それぞれ、Ｓ、Ｓ、Ｌ、Ｖ、Ｙ、およびＩにより占められる。いくつかの抗体では、ＶＬ領域中の位置Ｌ７、Ｌ１０、Ｌ１５、Ｌ１７、Ｌ２４、Ｌ３７、Ｌ４５、Ｌ８３、Ｌ８６、Ｌ１００、およびＬ１０６は、それぞれ、Ｓ、Ｓ、Ｌ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｙ、Ｑ、およびＩにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｄにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｇにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｎにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｅにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５０は、Ｅにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｑにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５０は、Ｄにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｋにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｒにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｔにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５０は、Ｇにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４８は、Ｇにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４８は、Ｄにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｇにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４９は、Ｅにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｖにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５４は、Ｓにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｌ５２は、Ｇにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｎにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｄにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｅにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｐにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｔにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ｓにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ４７は、Ａにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ５０は、Ｖにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｇ、およびＲにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｇ、およびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｇ、およびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｇ、およびＲにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｇ、およびＴにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｇ、およびＤにより占められる。いくつかの抗体では、Ｌ３７およびＬ５４は、それぞれＱおよびＲにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、それぞれＱおよびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、それぞれＱおよびＤにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５０は、それぞれＱおよびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５０は、それぞれＱおよびＤにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、それぞれＱおよびＴにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５２は、それぞれＱおよびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、それぞれＱおよびＥにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０およびＬ５４は、それぞれＱ、ＤおよびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０およびＬ５４は、それぞれＱ、ＤおよびＲにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｅ、およびＧにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、それぞれＱ、Ｅ、およびＲにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｇ、Ｒ、およびＱにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｇ、Ｇ、およびＱにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｇ、Ｒ、およびＱにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｇ、Ｄ、およびＱにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｄ、Ｇ、およびＱにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｄ、Ｒ、およびＱにより占められる。
いくつかの抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、それぞれＱ、Ｖ、Ｄ、およびＱにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ３７は、Ｑにより占められる。いくつかの抗体では、位置Ｌ１００は、Ｑにより占められる。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７６～８０および配列番号９０～９１のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３～８５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１８および配列番号１４６～１４８のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号９３～１４５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１２３のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１１０のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する。
例えば、抗体は、キメラ抗体、ベニヤ抗体、またはヒト化抗体であってよい。
抗体は、完全キメラ抗体、ベニヤ抗体もしくはヒト化抗体または結合フラグメント、単鎖抗体Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２フラグメント、または単鎖Ｆｖであってよい。いくつかの抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、一方、他の抗体は、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプを有してもよい。いくつかの抗体は、軽鎖定常領域に融合された成熟軽鎖可変領域および重鎖定常領域に融合された成熟重鎖可変領域を有する。いくつかの抗体の重鎖定常領域は、天然のヒト定常領域と比較して、Ｆｃγ受容体への結合が低減した天然のヒト定常領域の変異型である。
いくつかの抗体では、重鎖定常領域は、配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、重鎖定常領域に融合された成熟重鎖可変領域は、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体は、成熟重鎖および／または軽鎖可変領域に融合された単一ペプチドをさらに含む。いくつかの抗体では、重鎖は、配列番号１８０のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、軽鎖定常領域は、配列番号１７７のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、軽鎖定常領域に融合された成熟軽鎖可変領域は、配列番号１７９のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、軽鎖は、配列番号１８１のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、重鎖は、配列番号１７８のアミノ酸配列を有し、軽鎖は、配列番号１７９のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、重鎖は、配列番号１８０のアミノ酸配列を有し、軽鎖は、配列番号１８１のアミノ酸配列を有する。
いくつかの抗体は、定常領域に少なくとも１つの変異、例えば、補体結合または定常領域による活性化を減少させる変異、例えば、ＥＵナンバリングで、位置２４１、２６４、２６５、２７０、２９６、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９および３３１の１つまたは複数の位置での変異を有し得る。いくつかの抗体は、位置３１８、３２０および３２２にアラニンを有する。いくつかの抗体は、少なくとも９５％ｗ／ｗの純度であり得る。抗体は、治療薬、細胞傷害剤、細胞分裂停止剤、神経栄養剤、または神経保護剤にコンジュゲートすることができる。
別の態様では、本発明は、本明細書に開示されたいずれかの抗体および薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、本明細書に開示されたいずれかの抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸と、この核酸を含む組換え発現ベクターと、この組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞とを提供する。
いくつかの核酸では、重鎖は、配列番号１８２を含む配列によりコードされ、軽鎖は、配列番号１８３を含む配列によりコードされる。
このようなヒト化、キメラ、またはベニヤ抗体、例えば３Ｄ６のヒト化、キメラまたはベニヤ型などの抗体を生成する方法もまた、提供される。このような方法では、抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞は、抗体を分泌するように培養される。抗体はその後、細胞培地から精製され得る。
本明細書に開示されたいずれかの抗体を生成する細胞株は、抗体の重鎖および軽鎖と選択マーカーとをコードするベクターを細胞中に導入すること、ベクターのコピー数が増加した細胞について選択する条件下で細胞を増殖させること、選択された細胞から単細胞を単離すること、ならびに抗体の収量に基づいて選択された単細胞からクローニングされた細胞をバンキングすること、により生成され得る。
別の態様では、本発明は、本明細書に開示されたいずれかの抗体の哺乳動物細胞での発現を実行するための１つまたは複数の調節配列に作動可能に連結された成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域をコードする核酸を含むベクターを含む。いくつかのベクターでは、発現される抗体は、ｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントである。いくつかのベクターでは、１つまたは複数の調節配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、および転写終結シグナルの１つまたは複数を含む。いくつかのベクターでは、核酸は、成熟重鎖および軽鎖可変領域に融合されたシグナルペプチドをさらにコードする。いくつかのベクターでは、核酸は、宿主細胞内での発現のためにコドン最適化される。いくつかのベクターでは、１つまたは複数の調節配列は、真核生物プロモーターを含む。いくつかのベクターでは、核酸は、選択可能な遺伝子をさらにコードする。
さらに別の態様では、本発明は、哺乳動物細胞で抗体を発現させる方法であって、抗体が発現される遺伝子導入動物のゲノムに本明細書に開示された核酸を組み込むことを含む、方法を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、それぞれが本明細書に開示されたいずれかの抗体の発現を実行するために１つまたは複数の調節配列に作動可能に連結される、成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域をコードする核酸をそれぞれ含む第一および第二のベクターと、この核酸を含む宿主細胞とを提供する。いくつかの第一および第二のベクターでは、核酸はそれぞれさらに、成熟重鎖可変領域に融合された重鎖定常領域と、成熟軽鎖可変領域に融合された軽鎖定常領域とをコードする。いくつかの第一および第二のベクターでは、重鎖定常領域は、Ｃ末端リシンを有する、または有しない配列番号１７６の配列を有し、軽鎖定常領域は、配列番号１７７の配列を有する。
さらに別の態様では、本発明は、哺乳動物細胞内で抗体を発現させる方法であって、抗体が発現される遺伝子導入動物のゲノムに本明細書に開示された核酸のいずれかを組み込むことを含む、方法を提供する。
ヒト化、キメラまたはベニヤ抗体などの抗体を生成する方法も提供される。このような方法では、本明細書に開示されたいずれかの抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞は、抗体を分泌するように培養される。その後、抗体は、細胞培地から精製され得る。
本明細書で開示のいずれかの抗体を生成する細胞株は、請求項１の抗体の重鎖および軽鎖と、選択マーカーとをコードするベクターを細胞中に導入すること、コピー数が増加したベクターを有する細胞について選択する条件下で細胞を増殖させること、選択細胞から単細胞を単離すること、ならびに抗体の収量に基づいて選択した単細胞からクローニングした細胞をバンキングすること、により生成され得る。
いくつかの細胞は、選択条件下で増幅させて、自然に発現し、少なくとも１００ｍｇ／Ｌ／１０６細胞／２４時間を分泌する細胞株をスクリーニングできる。単細胞は、選択細胞から単離できる。単細胞からクローニングした細胞は、その後、保存できる。単細胞は、抗体の収率などの望ましい特性に基づいて選択できる。代表的細胞株は、３Ｄ６または３Ｄ６のヒト化型を発現する細胞株である。
本発明はまた、タウ媒介アミロイド症の対象を発症するリスクのある対象におけるタウの凝集を抑制するまたは減らす方法も提供し、方法は、対象に本明細書で開示の抗体の有効な投与計画を投与し、それにより、対象におけるタウの凝集を抑制するかまたは減らすことを含む。代表的抗体は、３Ｄ６のヒト化型を含む。
また、対象のタウ関連疾患を処置するまたは予防する方法も提供され、方法は、本明細書で開示の抗体の有効な投与計画を投与し、それにより、疾患の処置または予防をすることを含む。このような疾患の例は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー（ｇｌｏｂｕｌａｒ ｇｌｉａｌ ｔａｕｏｐａｔｈｙ）、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）である。いくつかの方法では、タウ関連疾患は、アルツハイマー病である。いくつかの方法では、患者はＡｐｏＥ４保因者である。
また、タウの異常伝播を減らす方法も提供され、方法は、本明細書で開示の抗体の有効な投与計画を投与し、それにより、タウの伝播を減らすことを含む。
また、タウの食作用を誘導する方法も提供され、方法は、本明細書で開示の抗体の有効な投与計画を投与し、それにより、タウの食作用を誘導することを含む。
また、タウの凝集または沈着を抑制する方法も提供され、方法は、本明細書で開示の抗体の有効な投与計画を投与し、それにより、タウの凝集または沈着を抑制することを含む。
また、タウの濃縮体の形成を抑制する方法も提供され、方法は、本明細書で開示の抗体の有効な投与計画を投与することを含む。
本発明はまた、タウ凝集または沈着に関連のある疾患の対象またはその疾患のリスクのある対象におけるタウタンパク質沈着物の検出方法が提供され、方法は、本明細書で開示の抗体を対象に投与し、対象のタウに結合した抗体を検出することを含む。このような疾患の例は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）である。いくつかの実施形態では、抗体は、静脈内注射により対象の身体に投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、頭蓋内注射により、または対象の頭蓋骨を通る孔をあけることにより、対象の脳に直接投与される。いくつかの実施形態では、抗体は標識される。いくつかの実施形態では、抗体は、蛍光標識、常磁性標識、または放射性標識により標識される。いくつかの実施形態では、放射性標識は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出される。
本発明はまた、タウ凝集または沈着に関連する疾患を処置される対象の処置の効力を測定する方法も提供し、方法は、本明細書で開示の抗体を対象に投与することによる処置の前に対象のタウタンパク質沈着物の第１のレベルを測定すること、ならびに対象のタウに結合した抗体の第１の量を測定すること、対象に処置を投与すること、対象に抗体を投与することによる処置後に対象のタウタンパク質沈着物の第２のレベルを測定すること、および対象のタウに結合した抗体を検出することを含み、タウタンパク質沈着物のレベルの減少が処置に対する陽性応答を示す。
本発明はまた、タウ凝集または沈着に関連する疾患を処置される対象の処置の効力を測定する方法も提供し、方法は、本明細書で開示の抗体を対象に投与することによる処置の前に対象のタウタンパク質沈着物の第１のレベルを測定すること、ならびに対象のタウに結合した抗体の第１の量を測定すること、対象に処置を投与すること、対象に抗体を投与することによる処置後に対象のタウタンパク質沈着物の第２のレベルを測定すること、および対象のタウに結合した抗体の第２の量を検出することを含み、タウタンパク質沈着物のレベルの無変化またはタウタンパク質沈着物の小さい増加が処置に対する陽性応答を示す。
別の態様では、本発明は、式ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）またはＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ（配列番号１９４）のモチーフ内のエピトープでヒトタウに特異的に結合する抗体を生成する方法であって、動物をヒトタウまたはそのフラグメントで免疫化して抗体を生成すること、およびモチーフ内で特異的に結合する生成された抗体の一抗体についてスクリーニングすること、を含む、方法を提供する。別の態様では、本発明は、残基ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）またはＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ（配列番号１９４）からなるペプチドに特異的に結合する抗体を生成する方法であって、動物をヒトタウまたはそのフラグメントで免疫化して抗体を生成すること、およびこのペプチドに特異的に結合する抗体の一抗体についてスクリーニングすること、を含む、方法を提供する。別の態様では、本発明は、ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）を含むエピトープに特異的に結合する抗体を生成する方法であって、動物をタウまたはそのフラグメントで免疫化すること、およびこのエピトープに特異的に結合する抗体についてスクリーニングすること、を含む、方法を提供する。
いくつかの方法では、動物は、３８３のアミノ酸ヒトタウ（４Ｒ０Ｎ）で免疫化される。いくつかの方法では、ヒトタウは、Ｐ３０１Ｓ変異を含む。いくつかの方法では、ヒトタウは、組換えＮ末端Ｈｉｓタグ付けされている。
いくつかの方法では、スクリーニングは、抗体と、それぞれＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）、ＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）、ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）を含む１５以下のアミノ酸の１種もしくは複数のペプチド、またはＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）により表される任意の他のコンセンサスモチーフとの間の特異的結合を決定する。いくつかの方法では、１種または複数のペプチドは、それぞれＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）またはＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）またはＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）を含む。いくつかの方法では、動物は、キャリアに連結されたＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）を含む１５以下のアミノ酸のタウフラグメントで免疫化される。いくつかの方法では、ペプチドは、ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）またはＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）またはＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）である。
マウス３Ｄ６モノクローナル抗体により結合されたエピトープ（単一または複数）をマッピングするために設計された実験の結果を示す。 マウス３Ｄ６抗体の重鎖可変領域（配列番号７）および３Ｄ６抗体のヒト化型の重鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈu３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７）に加え、ヒト生殖細胞系列重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）およびヒト受容体重鎖可変領域配列２ＲＣＳ ＶＨ ｈＦｒｗｋ（配列番号７５）の配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１は、配列番号７６であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２は、配列番号７７であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３は、配列番号７８であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４は、配列番号７９であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５は、配列番号８０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６は、配列番号９０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７は、配列番号９１である。カバット／コチアの組み合わせにより定義されるＣＤＲは、太字で示している。 マウス３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域（配列番号１１）および３Ｄ６抗体のヒト化型の軽鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３）に加え、ヒト生殖細胞系列軽鎖可変領域配列ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）およびヒト受容体ＡＲＸ７１３３５＿ＶＬ＿ｈＦｒｗｋ（配列番号８２）の配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１は、配列番号８３であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２は、配列番号８４であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３は、配列番号８５である。カバットにより定義されるＣＤＲは、太字で示している。 選択マウスモノクローナル抗タウ抗体のためのＥＬＩＳＡスクリーニングの結果を示す。 選択マウスモノクローナル抗タウ抗体のためのＥＬＩＳＡスクリーニングの結果を示す。 選択マウスモノクローナル抗タウ抗体のためのＥＬＩＳＡスクリーニングの結果を示す。 選択マウスモノクローナル抗タウ抗体の組換えヒトタウに対する結合動力学を示す。 選択マウスモノクローナル抗タウ抗体に対する機能ブロッキングアッセイの結果を示す。 選択マウスモノクローナル抗タウ抗体に対する脱凝集アッセイの結果を示す。 ３Ｄ６および５Ｇ８がヒトアルツハイマー病組織由来のタウを免疫捕獲することを示す実験の結果を示す。 マウス３Ｄ６の重鎖可変領域（配列番号７）および３Ｄ６抗体のヒト化型の重鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、およびｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９）と、ヒト生殖細胞系列重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）およびヒト受容体重鎖可変領域配列２ＲＣＳ ＶＨ ｈＦｒｗｋ（配列番号７５）との配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１は配列番号７６であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２は配列番号７７であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３は配列番号７８であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４は配列番号７９であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５は配列番号８０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６は配列番号９０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７は配列番号９１であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１は配列番号１８であり、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８は配列番号１４６であり、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９は配列番号１４８である。マウス３Ｄ６（配列番号７）の重鎖可変領域の残基と同一の残基を、“.”で注記している。カバット／コチアの組み合わせにより定義されるＣＤＲを、太字で示している。 マウス３Ｄ６の重鎖可変領域（配列番号７）および３Ｄ６抗体のヒト化型の重鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、およびｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９）と、ヒト生殖細胞系列重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）およびヒト受容体重鎖可変領域配列２ＲＣＳ ＶＨ ｈＦｒｗｋ（配列番号７５）との配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１は配列番号７６であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２は配列番号７７であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３は配列番号７８であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４は配列番号７９であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５は配列番号８０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６は配列番号９０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７は配列番号９１であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１は配列番号１８であり、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８は配列番号１４６であり、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９は配列番号１４８である。マウス３Ｄ６の重鎖可変領域（配列番号７）の残基と同一の残基を、“.”で注記している。カバット／コチアの組み合わせにより定義されるＣＤＲは、太字で示している。 ３Ｄ６抗体：ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（配列番号２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ （配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）のヒト化型の軽鎖可変領域の配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の軽鎖可変領域（配列番号２１）の残基と同一の残基を、“.”で注記している。カバットにより定義されるＣＤＲを、太字で示している。 ３Ｄ６抗体：ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（配列番号２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ （配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）のヒト化型の軽鎖可変領域の配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の軽鎖可変領域（配列番号２１）の残基と同一の残基を、“.”で注記している。カバットにより定義されるＣＤＲを、太字で示している。 ３Ｄ６抗体：ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（配列番号２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ （配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）のヒト化型の軽鎖可変領域の配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の軽鎖可変領域（配列番号２１）の残基と同一の残基を、“.”で注記している。カバットにより定義されるＣＤＲを、太字で示している。 ３Ｄ６抗体：ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（配列番号２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ （配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）のヒト化型の軽鎖可変領域の配列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の軽鎖可変領域（配列番号２１）の残基と同一の残基を、“.”で注記している。カバットにより定義されるＣＤＲを、太字で示している。 選択されたヒト化３Ｄ６バリアントについてのタウ内在化アッセイの結果を示す。 マイクロアレイ実験をマッピングする置換の結果を示す。図１２Ａは置換効果のプロットを示し、図１２Ｂはタウ微小管結合リピートの一部の配列比較を示し、３Ｄ６に結合するための重要な残基を強調している。ａａ２５５～２７１は配列番号１８４であり、ａａ２８６～３０２は配列番号１８５であり、ａａ３１７～３３３は配列番号１８６であり、ａａ３４９～３６５は配列番号１８７である。 マイクロアレイ実験をマッピングする置換の結果を示す。図１２Ａは置換効果のプロットを示し、図１２Ｂはタウ微小管結合リピートの一部の配列比較を示し、３Ｄ６に結合するための重要な残基を強調している。ａａ２５５～２７１は配列番号１８４であり、ａａ２８６～３０２は配列番号１８５であり、ａａ３１７～３３３は配列番号１８６であり、ａａ３４９～３６５は配列番号１８７である。 正常組織（上のパネル）およびアルツハイマー病組織（中央および下のパネル）において３Ｄ６がタウを結合することを示す免疫組織化学的実験の結果を表す。 ３Ｄ６の結合化学量論を評価する質量分析実験の結果を示す。 ３Ｄ６がアルツハイマー病のインビボ疾患モデルにおいてタウシーディングを中断することを示す。 ３Ｄ６ヒト化バリアントｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４がタウとヘパリンの相互作用をブロックすることを示す。 ３Ｄ６ヒト化バリアントｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４がタウの原線維型を結合することを示す。
配列の簡単な説明
配列番号１は、ヒトタウのアイソフォーム（スイスプロットＰ１０６３６－８）のアミノ酸配列を示す。
配列番号２は、ヒトタウのアイソフォーム（スイスプロットＰ１０６３６－７）のアミノ酸配列を示す。
配列番号３は、ヒトタウのアイソフォーム（スイスプロットＰ１０６３６－６）、（４Ｒ０Ｎヒトタウ）のアミノ酸配列を示す。
配列番号４は、ヒトタウのアイソフォーム（スイスプロットＰ１０６３６－５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号５は、ヒトタウのアイソフォーム（スイスプロットＰ１０６３６－４）のアミノ酸配列を示す。
配列番号６は、ヒトタウのアイソフォーム（スイスプロットＰ１０６３６－２）のアミノ酸配列を示す。
配列番号７は、マウス３Ｄ６抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号８は、マウス３Ｄ６抗体のカバット／コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、マウス３Ｄ６抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０は、マウス３Ｄ６抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１は、マウス３Ｄ６抗体およびマウス６Ａ１０抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２は、マウス３Ｄ６抗体およびマウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３は、マウス３Ｄ６抗体およびマウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４は、マウス３Ｄ６抗体およびマウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１６は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１７は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号２０は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号２１は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号２２は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号２３は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号２４は、重鎖可変受容体受入番号ＢＡＣ０１９８６．１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２５は、重鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２６は、重鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＫＪ１＊０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２７は、軽鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２８は、軽鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＫＪ２＊０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２９は、軽鎖可変受容体受入番号ＡＡＺ０９０４８．１のアミノ酸配列を示す。
配列番号３０は、マウス３Ｄ６抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列を示す。
配列番号３１は、マウス３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域をコードする核酸配列を示す。
配列番号３２は、マウス３Ｄ６抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号３３は、マウス３Ｄ６抗体のコチアＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号３４は、マウス３Ｄ６抗体のコチアＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３５は、マウス３Ｄ６抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３６は、マウス３Ｄ６抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号３７は、マウス３Ｄ６抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３８は、マウス３Ｄ６抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号３９は、マウス３Ｄ６抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号４０は、マウス３Ｄ６抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号４１は、マウス３Ｄ６抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号４２は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｇ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｈ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｅ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆと同様）の別のカバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号４３は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ５およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｈ３と同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号４４は、マウス３Ｄ６および選択ヒト化３Ｄ６抗体（ＶＨｖ１、ＶＨｖ２、ＶＨｖ１ｂ、ＶＨｖ１ｂＡ１１、およびＶＨｖ５）（ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５２５４４号の図２で「Ｍａｊｏｒｉｔｙ」と標識）の重鎖可変領域中のコンセンサスアミノ酸配列を示す。
配列番号４５は、マウス３Ｄ６および選択ヒト化３Ｄ６抗体（ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５２５４４号の図３で「Ｍａｊｏｒｉｔｙ」と標識）の軽鎖可変領域間のコンセンサスアミノ酸配列を示す。
配列番号４６は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｇ２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号４７は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｈ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号４８は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｃの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号４９は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５０は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｅの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５１は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５２は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５３は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５４は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５５は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５６は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５７は、ヒト化３Ｄ６抗体ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号５８は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨ１ｃと同様）の別のカバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号５９は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃと同様）の別のカバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号６０は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂおよびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂと同様）の別のカバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号６１は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｇ２と同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６２は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｃ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６３は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６４は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｅと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６５は、ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号６６は、マウス６Ａ１０抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号６７は、マウス６Ａ１０抗体のカバット／コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号６８は、マウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６９は、マウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７０は、重鎖ヒト化のための構造テンプレートとして使用したマウス抗体（ｐｄｂコード１ＣＲ９）のＶＨ領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号７１は、選択ヒト化３Ｄ６抗体（ＶＨｖ１、ＶＨｖ１ｂ、ＶＨｖ１ｂＡ１１、ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｇ２、ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｈ３、ＶＨｖ１ｃ、ＶＨｖ１ｄ、ＶＨｖ１ｅ、ＶＨｖ１ｆ、ＶＨｖ２、ＶＨｖ３、ＶＨｖ３ｂ、ＶＨｖ３ｃ、ＶＨｖ４、ＶＨｖ４ｂ、ＶＨｖ４ｃ、およびＶＨｖ５）（ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５２５４４号の図４Ａおよび４Ｂでは「Ｍａｊｏｒｉｔｙ」と標識）の重鎖可変領域中のコンセンサスアミノ酸配列を示す。
配列番号７２は、キメラ３Ｄ６抗体の重鎖のアミノ酸配列を示す。
配列番号７３は、キメラ３Ｄ６抗体の軽鎖のアミノ酸配列を示す。
配列番号７４は、重鎖可変構造モデル受入番号５ＭＹＸ－ＶＨ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。
配列番号７５は、重鎖可変受容体受入番号２ＲＣＳ－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。
配列番号７６は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号７７は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号７８は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７９は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４のアミノ酸配列を示す。
配列番号８０は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５のアミノ酸配列を示す。
配列番号８１は、軽鎖可変構造モデル受入番号５ＭＹＸ－ＶＬ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。
配列番号８２は、軽鎖可変受容体受入番号ＡＲＸ７１３３５－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。
配列番号８３は、ヒト化３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号８４は、ヒト化３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号８５は、ヒト化３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号８６は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５と同様）。
配列番号８７は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４と同様）。
配列番号８８は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５と同様）。
配列番号８９は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３と同様）。
配列番号９０は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６のアミノ酸配列を示す。
配列番号９１は、ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７のアミノ酸配列を示す。
配列番号９２は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７と同様）。
配列番号９３は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９５は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４５Ｎの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９６は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｅの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｅの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号９９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｋの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０１は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｒの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｔの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０３は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＩ４８Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０５は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＩ４８Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０６は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＹ４９Ｅの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｖの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｓの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＳ５２Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１１は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｎの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１３は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｅの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｐの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１５は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｔの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１６は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｓの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ａの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｖの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２１は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２３は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２５は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２６は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３１は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３３は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３５は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３６は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４０は、Ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４１は、Ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４２は、Ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４３は、Ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４４は、Ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＧ１００Ｑの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４５は、Ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅの軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４６は、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１バリアントＤ６０Ｅの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１バリアントＬ８２ｃＶの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４８は、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１バリアントＤ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒの重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４９は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８およびｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９と同様）。
配列番号１５０は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｄおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄと同様）。
配列番号１５１は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇと同様）。
配列番号１５２は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｎと同様）。
配列番号１５３は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｅおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅと同様）。
配列番号１５４は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５０Ｅと同様）。
配列番号１５５は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｑと同様）。
配列番号１５６は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５０Ｄおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄと同様）。
配列番号１５７は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｋと同様）。
配列番号１５８は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒと同様）。
配列番号１５９は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｔおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔと同様）。
配列番号１６０は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５０Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇと同様）。
配列番号１６１は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｖと同様）。
配列番号１６２は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５４Ｓと同様）。
配列番号１６３は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｓ５２Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇと同様）。
配列番号１６４は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２Ｌ５０Ｖと同様）。
配列番号１６５は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１６６は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１６７は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇと同様）。
配列番号１６８は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１６９は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔと同様）。
配列番号１７０は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１７１は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１７２は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１７３は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇと同様）。
配列番号１７４は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒと同様）。
配列番号１７５は、ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑと同様）。
配列番号１７６は、重鎖定常領域のアミノ酸配列を示す（ＩｇＧ１：アロタイプＧ１ｍ１７，１）。
配列番号１７７は、軽鎖定常領域のアミノ酸配列を示す（カッパ）。
配列番号１７８は、３Ｄ６ヒト化バリアントの成熟重鎖のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）。
配列番号１７９は、３Ｄ６ヒト化バリアントの成熟軽鎖のアミノ酸配列を示す（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）。
配列番号１８０は、Ｎ－末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの重鎖（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８１は、Ｎ－末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの軽鎖（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８２は、Ｎ－末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの重鎖（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）をコードするヌクレオチド配列を示す。
配列番号１８３は、Ｎ－末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの軽鎖（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）をコードするヌクレオチド配列を示す。
配列番号１８４は、タウ微小管結合リピート１の領域のアミノ酸配列を示す（配列番号１のアミノ酸残基２５５－２７１）。
配列番号１８５は、タウ微小管結合リピート２の領域のアミノ酸配列を示す（配列番号１のアミノ酸残基２８６－３０２）。
配列番号１８６は、タウ微小管結合リピート３の領域のアミノ酸配列を示す（配列番号１のアミノ酸残基３１７－３３３）。
配列番号１８７は、タウ微小管結合リピート４の領域のアミノ酸配列を示す（配列番号１のアミノ酸残基３４９－３６５）。
配列番号１８８は、３Ｄ６により結合されたＭＢＴＲ１におけるタウのコアモチーフのアミノ酸配列を示す。
配列番号１８９は、３Ｄ６により結合されたＭＢＴＲ１におけるタウのコアモチーフのＮ末端側のタウ配列のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９０は、３Ｄ６により結合されたＭＢＴＲ１におけるタウのコアモチーフのＣ末端側のタウ配列のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９１は、３Ｄ６のエピトープのアミノ酸配列を示す。
配列番号１９２は、３Ｄ６により結合されたＭＢＴＲ２におけるタウのコアモチーフのアミノ酸配列を示す。
配列番号１９３は、３Ｄ６により結合されたＭＢＴＲ３におけるタウのコアモチーフのアミノ酸配列を示す。
配列番号１９４は、３Ｄ６により結合されたＭＢＴＲ４におけるタウのコアモチーフのアミノ酸配列を示す。
定義
モノクローナル抗体またはその他の生物学的実体は典型的には、単離型で提供される。これは、抗体またはその他の生物学的実体が典型的には、干渉タンパク質およびその製造または精製から生じる他の混入物に対して少なくとも５０％ｗ／ｗの純度であることを意味するが、そのモノクローナル抗体が、過剰の薬学的に許容されるキャリア（単一または複数）または使用を容易にすることが意図される他のビークルと組み合わされる可能性を排除しない。時には、モノクローナル抗体は、干渉タンパク質および製造または精製から生じる他の混入物に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％ｗ／ｗの純度である。単離モノクローナル抗体またはその他の生物学的実体は、多くの場合、その精製後に残る主要な巨大分子種である。
抗体のその標的抗原に対する特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、または１０１２Ｍ－１の親和性および／または結合活性を意味する。特異的結合は、それが大きさにおいて検出可能なほど高く、さらに少なくとも１つの無関係な標的に生じる非特異的結合と区別可能である結合である。特異的結合は、特定の官能基または特定の空間的嵌合（例えば、ロック・アンド・キータイプ）間の結合の形成の結果であり得るが、非特異的結合は、通常、ファンデルワールス力の結果である。しかし、特異的結合は、必ずしも抗体が唯一の標的に結合することを意味するものではない。
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。四量体はそれぞれ、ポリペプチド鎖の２つの同一の対を含み、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含む。切断可能なシグナルペプチドに連結されたこの可変領域が、最初に発現される。シグナルペプチドを含まない可変領域は、しばしば成熟可変領域と呼ばれる。したがって、例えば、軽鎖の成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを含まない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を規定する。
軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はまた、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（概論としては、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，Ｃｈ．７（本出願において、参照によりその全体が組み込まれる））。
免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域（本明細書においては、それぞれ、「軽鎖可変ドメイン」（ＶＬドメイン）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）としても参照される）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」により分断された「フレームワーク」領域からなる。フレームワーク領域は、抗原のエピトープに特異的に結合するためにＣＤＲを整列させる役割をする。ＣＤＲは、主に抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を含む。アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＶＬおよびＶＨの両ドメインは、次のフレームワーク（ＦＲ）およびＣＤＲ領域：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２、および３はまた、本明細書では、それぞれ、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３；ＶＨドメインのＣＤＲ１、２、および３はまた、本明細書では、それぞれ、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３とも呼ばれる。本出願が、Ｃ末端残基としてＲを有するＶＬ配列を開示する場合、このＲは代わりに、軽鎖定常領域のＮ末端残基であると見なすことができる。したがって本出願は、Ｃ末端Ｒを有しないＶＬ配列を開示していることも理解されなければならない。
アミノ酸のそれぞれＶＬおよびＶＨドメインへの帰属は、ＣＤＲのいずれかの従来の定義と一致する。従来の定義は、カバットによる定義（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）、コチアによる定義（Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３，１９８９）；コチア・カバットＣＤＲの組合せ、この場合、ＣＤＲ－Ｈ１がコチアおよびカバットＣＤＲの組み合わせである；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅにより使用されるＡｂＭの定義；および、Ｍａｒｔｉｎら（ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）によるｃｏｎｔａｃｔの定義を含む（表１参照）。カバットは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基に同じ番号が割り当てられる、広く使用されているナンバリング規則（カバットナンバリング）を提供する。抗体が特定のＣＤＲ定義（例えば、カバット）によるＣＤＲを含むと言われる場合、その定義は、抗体中に存在する最小数のＣＤＲ残基（すなわち、カバットＣＤＲ）を規定する。別の従来のＣＤＲ定義内に入るが、その指定定義外であるその他の残基も同様に存在することを排除しない。例えば、カバットにより定義されるＣＤＲを含む抗体は、他の可能性の内で、ＣＤＲがカバットＣＤＲ残基を含み、他のＣＤＲ残基を含まない抗体、およびＣＤＲ Ｈ１がコチア－カバットの組み合わせＣＤＲ Ｈ１であり、その他のＣＤＲがカバットＣＤＲ残基を含み、他の定義に基づくさらなるＣＤＲ残基を含まない抗体を含む。
Figure 2022524588000002
「抗体」という用語は、完全な抗体およびその結合フラグメントを含む。典型的には、単離された重鎖、軽鎖Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、Ｄａｂ、ナノボディ、およびＦｖを含む、フラグメントは、由来元の完全な抗体と標的への特異的結合を競合する。フラグメントは、組換えＤＮＡ技術によって、または完全な免疫グロブリンの酵素的または化学的分離により生成できる。用語「抗体」はまた、二重特異性抗体および／またはヒト化抗体も含む。二重特異性または二価抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７－５３（１９９２）参照）。いくつかの二重特異性抗体では、２つの異なる重鎖／軽鎖対は、ヒト化３Ｄ６重鎖／軽鎖対および３Ｄ６により結合されるものよりタウ上の異なるエピトープに特異的な重鎖／軽鎖対を含む。
いくつかの二重特異性抗体では、１つの重鎖／軽鎖対は、以下でさらに開示されるヒト化３Ｄ６抗体であり、もう一方の重鎖／軽鎖対は、血液脳関門上に発現した受容体、例えば、インスリン受容体、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）受容体、レプチン受容体、またはリポタンパク質受容体、またはトランスフェリン受容体に結合する抗体由来である（Ｆｒｉｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：４７７１－４７７５，１９９１；Ｆｒｉｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：３７３－３７７，１９９３）。このような二重特異性抗体は、受容体媒介トランスサイトーシスにより、血液脳関門を横切って移送できる。二重特異性抗体の脳による取込は、特異的抗体を血液脳関門受容体に対する親和性を減らすように設計することにより、さらに高めることができる。受容体に対する低下した親和性により、脳内でのより広汎な分布が得られる（例えば、Ａｔｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４３，２０１１；Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４４，２０１１参照）。
代表的二重特異性抗体は、次記であってもよい：（１）二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ）、この場合、各軽鎖および重鎖は、短ペプチド結合を介して直列の２つの可変ドメインを含む（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））Ｍｏｌｅｃｕｌｅ，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２０１０））；（２）Ｔａｎｄａｂ、これは、２つの単鎖ディアボディの融合体で、それぞれの標的抗原に対し２つの結合部位を有する四価の二重特異性抗体を生じる。（３）フレキシボディ（ｆｌｅｘｉｂｏｄｙ）、これは、ｓｃＦｖとダイアボディの組み合わせで、多価分子を生ずる；（４）いわゆる「ｄｏｃｋ ａｎｄ ｌｏｃｋ」分子、プロテインキナーゼＡにおける「二量体化およびドッキングドメイン」に基づいたもので、これをＦａｂに適用すると、異なるＦａｂフラグメントに結合した２つの同じＦａｂフラグメントからなる三価の二重特異性結合タンパク質を得ることができる；または（５）いわゆるスコーピオン分子、これは、例えば、ヒトＦｃ領域の両方の終端に融合した２つのｓｃＦｖを含む。二重特異性抗体を調製するのに有用なプラットホームの例は、ＢｉＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、ＦｃａｂおよびＭａｂ２（Ｆ－ｓｔａｒ）、Ｆｃ改変ＩｇＧｌ（Ｘｅｎｃｏｒ）またはＤｕｏＢｏｄｙ（Ｆａｂアーム交換に基づく、Ｇｅｎｍａｂ）を含む。
用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原上の部位を意味する。エピトープは、連続アミノ酸または１つもしくは複数のタンパク質の３次折り畳み構造によって並置された非連続アミノ酸から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープ（線形エピトープとしても知られる）は典型的には、変性溶媒に曝露されても保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープ（立体構造エピトープとしても知られる）は典型的には、変性溶媒での処理で失われる。エピトープは、典型的には独特の空間高次構造において少なくとも３個以上、通常は少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的高次構造を決定する方法は、例えば、ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
同じまたは重なり合うエピトープを認識する抗体は、標的抗原に対して他方の抗体の結合と競合する一方の抗体の能力を示す簡単な免疫アッセイで特定できる。抗体のエピトープはまた、その抗原に結合した抗体のＸ線結晶解析により接触残基を特定して、決定することもできる。あるいは、一方の抗体の結合を低減または解消する抗原内の全てのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または解消する場合は、２つの抗体は同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低減または解消するいくつかのアミノ酸変異が、他方抗体の結合を低減または解消する場合は、２つの抗体は重なり合うエピトープを有する。
抗体間の競合は、検査抗体が共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０）。競合結合アッセイで測定した時、過剰（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍）の検査抗体が参照抗体の結合を少なくとも５０％阻害する場合、検査抗体は参照抗体と競合する。いくつかの検査抗体は、参照抗体の結合を、少なくとも７５％、９０％または９９％阻害する。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および立体障害が起こるために、参照抗体が結合するエピトープに充分近位にある隣接エピトープに結合する抗体を含む。
用語の「薬学的に許容可能な」は、キャリア、希釈剤または賦形剤、または補助材料が、他の製剤成分と適合し、レシピエントに実質的に有害ではないことを意味する。
「患者」という用語は、予防的処置または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。
対象が、少なくとも１つの既知のリスク因子（例えば、遺伝的、生化学的、家族歴、状況暴露）を有し、そのリスク因子を有する個体で、そのリスク因子がない個体よりも疾患を発症するリスクが統計的に有意に高くなる場合、個体は疾患のリスクが高い。
用語の「生物試料」は、生物源、例えば、ヒトまたは哺乳動物対象内のまたはそれから得ることができる生体物質の試料を意味する。このような試料は、臓器、オルガネラ、組織、組織の切片、体液、末梢血、血漿、血清、細胞、タンパク質およびペプチドなどの分子、およびこれら由来の任意の部分またはその組み合わせであってよい。用語の「生物試料」はまた、試料の処理により得られる任意の材料を包含し得る。由来材料には、細胞またはそれらの子孫を含み得る。生物試料の処理は、濾過、蒸留、抽出、濃縮、固定、干渉成分の不活化、などの１種または複数を含み得る。
用語の「コントロール試料」は、タウ関連疾患罹患領域を含むことが知られていないもしくはそのように疑われていないか、または少なくとも所定のタイプの疾患領域を含むと知られていないもしくはそれを含むと疑われていない生物試料を意味する。コントロール試料は、タウ関連疾患に罹患していない個体から得ることができる。あるいは、コントロール試料は、タウ関連疾患に罹患していない患者から得ることができる。このような試料は、生物試料がタウ関連疾患を含むと考えられるのと同時にまたは別の時期に得ることができる。生物試料およびコントロール試料は両方とも、同じ組織から得ることができる。好ましくは、コントロール試料は、基本的にまたは完全に、健常な領域からなり、タウ関連疾患罹患領域を含むと思われる生物試料と比較して使用できる。好ましくは、コントロール試料の組織は、生物試料中の組織と同じタイプである。好ましくは、生物試料中にあると思われるタウ関連疾患罹患細胞は、コントロール試料中の細胞型と同じ細胞型（例えば、ニューロンまたはグリア）から生ずるのが好ましい。
用語の「疾患」は、生理学的機能を損なう何らかの異常な状態を意味する。この用語は、病因の性質に関係なく、生理学的機能が障害される、任意の障害、疾病、異常性、病理学、病的状態、状態、または症候群を包含する広い意味で使用される。
用語の「症状」は、対象が気付くような歩調の変化などの疾患の主観的証拠を意味する。「徴候」は、医師が認めるような疾患の客観的証拠を意味する。
用語の「処置に対する陽性応答」は、処置を受けていないコントロール集団での平均的応答に比較して、患者集団中の個々の患者におけるより好ましい応答または平均的応答を意味する。
アミノ酸置換を保存的または非保存的アミノ酸置換として分類する目的のために、アミノ酸は次のようにグループ化される：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖の配向に影響を与える残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ族（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することである。
パーセント配列同一性は、カバットナンバリング規則により最大限整列させた抗体配列を用いて決定される。整列後、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の全体の成熟可変領域）を参照抗体の同じ領域と比較する場合、対象抗体領域と参照抗体領域の間のパーセント配列同一性は、対象抗体領域と参照抗体領域の両方において同じアミノ酸が占有する位置の数を、整列させた２つの領域中の位置の総数（ギャップはカウントしない）で割り、１００を乗じてパーセンテージに変換したものである。
１つまたは複数の記述要素を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」組成物または方法は、特に記述していない他の要素を含んでよい。例えば、抗体を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」組成物は、抗体単独、または他の成分と組み合わせた抗体を含んでもよい。本開示が、指定した要素を含む特色を指す場合、本開示は、代わりに、指定した要素から本質的になる、または要素からなる特色を指すと理解されるべきである。
値の範囲の表記は、その範囲内またはその範囲を規定する全ての整数、およびその範囲内の整数により規定される全ての部分範囲を含む。
文脈から別義が明らかでない限り、用語の「約」は、ごくわずかな変動、例えば、示した値の測定の標準的許容誤差（例えば、ＳＥＭ）を包含する。
統計的有意性とは、ｐ＜０．０５を意味する。
冠詞の単数形（「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」）は、文脈により明確に別義が示されない限り、複数の参照物を包含する。例えば、用語「化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または用語「少なくとも１つの化合物」は、その混合物を含めて、複数の化合物を包含することができる。
詳細な説明
Ｉ．概要
本発明は、タウに結合する抗体を提供する。いくつかの抗体は、配列番号１のおよそ残基２４４～３７２により定義されるヒトのタウの微小管結合領域（ＭＴＢＲ）の領域中の１つまたは複数のエピトープに特異的に結合する。ＭＴＢＲ領域は配列リピートを含むため、単一抗体は、この領域内の複数のリピートされた部位で結合し得る。いくつかの抗体は、ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）のエピトープに特異的に結合する。いくつかの抗体は、配列番号３の残基１９９～２１３および／または２６２～２７６（配列番号１のそれぞれ残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応する）内で結合する。いくつかの抗体は、配列番号１の残基２５９～２６８および／または２９０～２９９および／または３２１～３３０および／または３５３～３６２内で結合する。いくつかの抗体では、残基３５３～３６２でのＭＴＢＲ４領域への結合は、ＭＴＢＲ１、２および３への結合より弱い。いくつかの抗体は、リン酸化状態に関係なくタウに結合する。本発明のいくつかの抗体は、タウに関連する病勢悪化およびタウに関連する病状悪化を抑制するかまたは遅らせるのに役立つ。機序を理解することは本発明の実施に必要ではないが、数ある機序の中でも特に、非毒性高次構造を安定化することにより、病原性タウ形態の細胞間もしくは細胞内伝播を抑制することにより、タウのリン酸化の阻害により、タウの細胞への結合を妨害することにより、またはタウのタンパク質切断を誘導することにより、抗体による、タウの食作用の誘導、タウの分子間もしくは分子内凝集の抑制または他の分子に対する結合の抑制がもたらされる結果として、毒性の低下が生じ得る。このような抗体を誘導する本発明の抗体または薬剤は、アルツハイマー病およびタウと関連する他の疾患の処置法または効果的な予防法に使用できる。
ＩＩ．標的分子
文脈から別義が明らかな場合を除き、タウへの言及は、翻訳後修飾（例えば、リン酸化、糖化、またはアセチル化）が存在するか否かにかかわらず、全てのアイソフォームを含む天然のヒト型タウを意味する。ヒトの脳にはタウの６つの主要なアイソフォーム（スプライスバリアント）が生じる。これらのバリアントの最長のものは、最初のメチオニン残基が切断された４４１個のアミノ酸を有する。残基は、４４１アイソフォームに従って番号が付けられている。したがって、例えば、位置４０４でのリン酸化への言及は、４４１アイソフォームの位置４０４、または４４１アイソフォームと最大限整列させた場合には任意の他のアイソフォームの対応する位置を意味する。アイソフォームのアミノ酸配列およびスイスプロット番号を以下に示す。
Ｐ１０６３６－８（配列番号１）
１０ ２０ ３０
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶ ＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬ ＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴ
４０ ５０ ６０
ＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤ ＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴ ＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧ
７０ ８０ ９０
ＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰ ＴＡＥＤＶＴＡＰＬＶ ＤＥＧＡＰＧＫＱＡＡ
１００ １１０ １２０
ＡＱＰＨＴＥＩＰＥＧ ＴＴＡＥＥＡＧＩＧＤ ＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧ
１３０ １４０ １５０
ＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫ ＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫ ＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫ
１６０ １７０ １８０
ＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰ ＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲ ＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫ
１９０ ２００ ２１０
ＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫ ＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰ ＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳ
２２０ ２３０ ２４０
ＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴ ＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲ ＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫ
２５０ ２６０ ２７０
ＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭ ＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩ ＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰ
２８０ ２９０ ３００
ＧＧＧＫＶＱＩＩＮＫ ＫＬＤＬＳＮＶＱＳＫ ＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶ
３１０ ３２０ ３３０
ＰＧＧＧＳＶＱＩＶＹ ＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳ ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ
３４０ ３５０ ３６０
ＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫ ＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶ ＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩ
３７０ ３８０ ３９０
ＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫ ＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥ ＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡ
４００ ４１０ ４２０
ＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳ ＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮ ＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶ
４３０ ４４０
ＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤ ＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧ Ｌ
Ｐ１０６３６－７（配列番号２）
１０ ２０ ３０
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶ ＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬ ＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴ
４０ ５０ ６０
ＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤ ＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴ ＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧ
７０ ８０ ９０
ＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰ ＴＡＥＡＥＥＡＧＩＧ ＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡ
１００ １１０ １２０
ＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳ ＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤ ＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴ
１３０ １４０ １５０
ＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰ ＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴ ＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰ
１６０ １７０ １８０
ＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰ ＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳ ＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲ
１９０ ２００ ２１０
ＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰ ＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶ ＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡ
２２０ ２３０ ２４０
ＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰ ＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫ ＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱ
２５０ ２６０ ２７０
ＰＧＧＧＫＶＱＩＩＮ ＫＫＬＤＬＳＮＶＱＳ ＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ
２８０ ２９０ ３００
ＶＰＧＧＧＳＶＱＩＶ ＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴ ＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨ
３１０ ３２０ ３３０
ＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶ ＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲ ＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮ
３４０ ３５０ ３６０
ＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫ ＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲ ＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧ
３７０ ３８０ ３９０
ＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶ ＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳ ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭ
４００ ４１０
ＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡ ＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱ ＧＬ
Ｐ１０６３６－６（４Ｒ０Ｎヒトタウ）（配列番号３）
１０ ２０ ３０
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶ ＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬ ＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴ
４０ ５０ ６０
ＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤ ＡＧＬＫＡＥＥＡＧＩ ＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡ
７０ ８０ ９０
ＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶ ＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤ ＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫ
１００ １１０ １２０
ＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡ ＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡ ＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡ
１３０ １４０ １５０
ＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰ ＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳ ＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳ
１６０ １７０ １８０
ＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰ ＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶ ＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳ
１９０ ２００ ２１０
ＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶ ＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳ ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ
２２０ ２３０ ２４０
ＱＰＧＧＧＫＶＱＩＩ ＮＫＫＬＤＬＳＮＶＱ ＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫ
２５０ ２６０ ２７０
ＨＶＰＧＧＧＳＶＱＩ ＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶ ＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩ
２８０ ２９０ ３００
ＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥ ＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤ ＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤ
３１０ ３２０ ３３０
ＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮ ＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦ ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨ
３４０ ３５０ ３６０
ＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶ ＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ ＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
３７０ ３８０
ＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬ ＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫ ＱＧＬ
Ｐ１０６３６－５（配列番号４）
１０ ２０ ３０
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶ ＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬ ＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴ
４０ ５０ ６０
ＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤ ＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴ ＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧ
７０ ８０ ９０
ＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰ ＴＡＥＤＶＴＡＰＬＶ ＤＥＧＡＰＧＫＱＡＡ
１００ １１０ １２０
ＡＱＰＨＴＥＩＰＥＧ ＴＴＡＥＥＡＧＩＧＤ ＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧ
１３０ １４０ １５０
ＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫ ＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫ ＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫ
１６０ １７０ １８０
ＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰ ＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲ ＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫ
１９０ ２００ ２１０
ＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫ ＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰ ＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳ
２２０ ２３０ ２４０
ＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴ ＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲ ＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫ
２５０ ２６０ ２７０
ＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭ ＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩ ＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰ
２８０ ２９０ ３００
ＧＧＧＫＶＱＩＶＹＫ ＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫ ＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫ
３１０ ３２０ ３３０
ＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳ ＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱ ＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴ
３４０ ３５０ ３６０
ＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩ ＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮ ＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥ
３７０ ３８０ ３９０
ＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧ ＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶ ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ
４００ ４１０
ＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥ ＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
Ｐ１０６３６－４（配列番号５）
１０ ２０ ３０
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶ ＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬ ＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴ
４０ ５０ ６０
ＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤ ＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴ ＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧ
７０ ８０ ９０
ＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰ ＴＡＥＡＥＥＡＧＩＧ ＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡ
１００ １１０ １２０
ＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳ ＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤ ＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴ
１３０ １４０ １５０
ＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰ ＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴ ＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰ
１６０ １７０ １８０
ＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰ ＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳ ＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲ
１９０ ２００ ２１０
ＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰ ＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶ ＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡ
２２０ ２３０ ２４０
ＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰ ＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫ ＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱ
２５０ ２６０ ２７０
ＰＧＧＧＫＶＱＩＶＹ ＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳ ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ
２８０ ２９０ ３００
ＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫ ＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶ ＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩ
３１０ ３２０ ３３０
ＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫ ＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥ ＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡ
３４０ ３５０ ３６０
ＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳ ＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮ ＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶ
３７０ ３８０
ＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤ ＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧ Ｌ
Ｐ１０６３６－２（配列番号６）
１０ ２０ ３０
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶ ＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬ ＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴ
４０ ５０ ６０
ＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤ ＡＧＬＫＡＥＥＡＧＩ ＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡ
７０ ８０ ９０
ＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶ ＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤ ＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫ
１００ １１０ １２０
ＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡ ＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡ ＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡ
１３０ １４０ １５０
ＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰ ＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳ ＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳ
１６０ １７０ １８０
ＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰ ＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶ ＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳ
１９０ ２００ ２１０
ＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶ ＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳ ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ
２２０ ２３０ ２４０
ＱＰＧＧＧＫＶＱＩＶ ＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴ ＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨ
２５０ ２６０ ２７０
ＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶ ＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲ ＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮ
２８０ ２９０ ３００
ＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫ ＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲ ＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧ
３１０ ３２０ ３３０
ＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶ ＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳ ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭ
３４０ ３５０
ＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡ ＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱ ＧＬ
タウへの言及は、スイスプロットデータベースおよびその順列に列挙されている約３０個の既知の天然の多様性、ならびに認知症、ピック病、核上性麻痺などのタウ病理と関連する変異を含む（例えば、スイスプロットデータベースおよびＰｏｏｒｋａｊ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ．４３：８１５－８２５（１９９８）参照）。４４１アイソフォームにより番号付けされたタウ変異のいくつかの例としては、アミノ酸残基２５７におけるリシンからスレオニンへの変異（Ｋ２５７Ｔ）、アミノ酸位置２６０におけるイソロイシンからバリンへの変異（Ｉ２６０Ｖ）、アミノ酸位置２７２におけるグリシンからバリンへの変異（Ｇ２７２Ｖ）、アミノ酸位置２７９におけるアスパラギンからリシンへの変異（Ｎ２７９Ｋ）、アミノ酸位置２９６におけるアスパラギンからヒスチジンへの変異（Ｎ２９６Ｈ）、アミノ酸位置３０１におけるプロリンからセリンへの変異（Ｐ３０１Ｓ）、アミノ酸３０１におけるプロリンからロイシンへの変異（Ｐ３０１Ｌ）、アミノ酸位置３０３におけるグリシンからバリンへの変異（Ｇ３０３Ｖ）、位置３０５におけるセリンからアスパラギンへの変異（Ｓ３０５Ｎ）、アミノ酸位置３３５におけるグリシンからセリンへの変異（Ｇ３３５Ｓ）、位置３３７におけるバリンからメチオニンへの変異（Ｖ３３７Ｍ）、位置３４２におけるグルタミン酸からバリンへの変異（Ｅ３４２Ｖ）、アミノ酸位置３６９におけるリシンからイソロイシンへの変異（Ｋ３６９ｌ）、アミノ酸位置３８９におけるグリシンからアルギニンへの変異（Ｇ３８９Ｒ）、位置４０６におけるアルギニンからトリプトファンへの変異（Ｒ４０６Ｗ）が挙げられる。
タウは、アミノ酸位置１８、２９、９７、３１０、および３９４におけるチロシン、アミノ酸位置１８４、１８５、１９８、１９９、２０２、２０８、２１４、２３５、２３７、２３８、２６２、２９３、３２４、３５６、３９６、４００、４０４、４０９、４１２、４１３、および４２２におけるセリン、ならびにアミノ酸位置１７５、１８１、２０５、２１２、２１７、２３１、および４０３におけるスレオニンを含む１つまたは複数のアミノ酸残基がリン酸化され得る。文脈から別義が明らかでない限り、タウまたはそれらのフラグメントへの言及は、そのアイソフォーム、変異体、およびアレルバリアントを含む天然のヒトアミノ酸配列を含む。
ＩＩＩ．抗体
Ａ．結合特異性および機能特性
本発明は、タウに結合する抗体を提供する。いくつかの抗体は、ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基２５９～２６８を含む、アミノ酸残基から本質的になる、またはアミノ酸残基からなるペプチドに結合する。いくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基２９０～２９９を含む、アミノ酸残基から本質的になる、またはアミノ酸残基からなるペプチドに結合する。いくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基３２１～３３０を含む、アミノ酸残基から本質的になる、またはアミノ酸残基からなるペプチドに結合する。いくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基３５３～３６２を含む、アミノ酸残基から本質的になる、またはアミノ酸残基からなるペプチドに結合する。いくつかの抗体は、３８３アミノ酸の４Ｒ０Ｎヒトタウタンパク質（配列番号３）の残基１９９～２１３（配列番号１の残基２５７～２７１に対応する）内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの抗体は、３８３アミノ酸の４Ｒ０Ｎヒトタウタンパク質（配列番号３）の残基２６２～２７６（配列番号１の残基３２０～３３４に対応する）内のエピトープに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質（配列番号１）の残基２５７～２７１からなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質（配列番号１）の残基３２０～３３４からなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質 配列番号１の残基２５９～２６８、すなわち、ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）からなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質 配列番号１の残基２９０～２９９、すなわち、ＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）からなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質 配列番号１の残基３２１～３３０、すなわち、ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）からなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質 配列番号１の残基３５３～３６２、すなわち、ＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ（配列番号１９４）からなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、コンセンサスモチーフＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）からなるペプチドに結合する。いくつかの抗体は、４４１アミノ酸のタウタンパク質 配列番号１の残基２５９、２６２、２６５、２６７、２６８、残基２９０、２９３、２９６、２９８、２９９、残基３２１、３２４、３２７、３２９、３３０、または残基３５３、３５６、３５９、３６２を含むエピトープに結合する。いくつかの抗体は、リン酸化状態に関係なくタウに結合する。いくつかの抗体は、リン酸化を受ける残基を含まないエピトープに結合する。これらの抗体は、天然源から精製するかまたは組換え発現させたタウポリペプチドで免疫することにより取得できる。抗体は、非リン酸化型のタウ、およびリン酸化を受け易い１つもしくは複数の残基がリン酸化された形態のタウへの結合に関してスクリーニングできる。このような抗体は、好ましくは、非リン酸化タウと比較して、区別できない親和性で結合するか、またはリン酸化タウに少なくとも１．５倍、２倍または３倍の係数の範囲内で結合する（すなわち、「汎特異的である」）。３Ｄ６は、汎特異的モノクローナル抗体の一例である。本発明はまた、例えば、３Ｄ６のエピトープなどの上記の抗体のいずれかと同じエピトープに結合する抗体を提供する。また、例えば、３Ｄ６と競合するものなどの上記の抗体のいずれかとタウへの結合に関して競合する抗体も含まれる。
上述の抗体は、配列番号３の残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれ残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応する）を含む、残基から本質的になる、もしくは残基からなるペプチドで免疫化すること、または配列番号１の残基２５９～２６８、２９０～２９９、３２１～３３０、もしくは３５３～３６２を含む、残基から本質的になる、もしくは残基からなるペプチドで免疫化すること、またはこのような残基を含む完全長タウポリペプチドもしくはそのフラグメントで免疫化すること、およびこのような残基を含むペプチドへの特異的結合についてスクリーニングすることにより、デノボ生成され得る。このようなペプチドは好ましくは、ペプチドへの抗体応答の誘発を支援する異種コンジュゲート分子に結合される。結合は、直接的であってよく、またはスペーサーペプチドもしくはアミノ酸を介してもよい。システインの遊離ＳＨ基はキャリア分子の結合を容易にするため、システインが、スペーサーアミノ酸として用いられる。グリシンとペプチドの間にシステイン残基を有する、または有しないポリグリシンリンカー（例えば、２～６のグリシン）も、用いられ得る。キャリア分子は、ペプチドに対する抗体応答の誘発を支援するＴ細胞エピトープを提供するのに役立つ。複数のキャリア、特にスカシガイ由来ヘモシアニン（ＫＬＨ）、オボアルブミンおよびウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が、一般に用いられる。ペプチドスペーサーが、固相ペプチド合成の一部としてペプチド免疫原に付加され得る。キャリアは典型的には、化学架橋により付加される。用いられ得る化学架橋剤のいくつかの例としては、クロス－Ｎ－マレイミド－６－アミノカプロイルエステルまたはｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）が挙げられる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．１９８８；Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：７７８－７８０（１９８８）；Ｃｈｉｃｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７８：２７－４７（１９９３）；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ７４：１９７－２０３（１９９３）；Ｆａｌｋ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，３９：２３０－２４２（１９９４）；国際公開第９８／２３６３５号；およびＳｏｕｔｈｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６０：３３６３－３３７３（１９９８）参照）。キャリアおよびスペーサーは、存在するならば、免疫原のどちらかの末端に結合され得る。
任意のスペーサーおよびキャリアを有するペプチドは、以下により詳細に記載される通り実験動物またはＢ細胞を免疫化するために用いられ得る。ハイブリドーマ上清が、配列番号３の残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれ残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応する）を含む、残基から本質的になる、もしくは残基からなる１つもしくは複数のペプチド、または配列番号１の残基２５９～２６８、２９０～２９９、３２１～３３０、もしくは３５３～３６２を含む、残基から本質的になる、もしくは残基からなる１つもしくは複数のペプチド、および／またはタウのリン酸化もしくは非リン酸化型、例えばリン酸化型の位置４０４を有するタウの完全長アイソフォームなどに結合する能力について検査され得る。ペプチドは、スクリーニングアッセイを容易にするためにキャリアまたは他のタグに結合され得る。この例では、キャリアまたはタグは選択的に、タウペプチドよりむしろスペーサーまたはキャリアに特異的な抗体を排除するため免疫化に用いられるスペーサーとキャリア分子との組み合わせと異なる。いずれかのタウアイソフォームが、用いられ得る。
本発明は、タウ内のエピトープに結合するモノクローナル抗体を提供する。３Ｄ６と呼称される抗体は、１つのこのような代表的マウス抗体である。文脈から別義が明らかでない限り、３Ｄ６への言及は、この抗体の、マウス、キメラ、ベニヤおよびヒト化型のいずれかに言及していると理解されるべきである。この抗体は、［受託番号］として寄託されている。この抗体は、ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）のエピトープに特異的に結合する。この抗体は、３８３アミノ酸の４Ｒ０Ｎヒトタウタンパク質（配列番号３）のアミノ酸残基１９９～２１３および／または２６２～２７６（配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１および／または３２０～３３４に対応する）内で結合する。抗体は、配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８または２９０～２９９または３２１～３３０または３５３～３６２、およびそれらのいずれか２つ、３つまたは全４つの組み合わせ内で特異的に結合する。この抗体は、リン酸化および非リン酸化タウの両方、非病理学的および病理学的形態ならびに高次構造のタウの両方、および誤って折り畳まれた／凝集した形態のタウに結合する能力をさらに特徴とする。６Ａ１０と呼称される抗体は、１つのこのような代表的マウス抗体である。文脈から別義が明らかでない限り、６Ａ１０への言及は、この抗体の、マウス、キメラ、ベニヤおよびヒト化型のいずれかに言及していると理解されるべきである。６Ａ１０の重鎖のカバット／コチアの組み合わせＣＤＲは、配列番号６７、６８、および６９にそれぞれ示されており、また、６Ａ１０の軽鎖のカバットＣＤＲは、それぞれ、配列番号１２、１３、および１４に示されている。マウス６Ａ１０は、マウス３Ｄ６のＶＨ鎖およびＶＬ鎖と、それぞれ、８２．１％のＶＨ配列同一性および１００％のＶＬ配列同一性を共有している。
本発明のいくつかの抗体は、３Ｄ６と呼称される抗体と、同じまたは重なり合うエピトープに結合する。この抗体の重鎖および軽鎖成熟可変領域の配列は、それぞれ、配列番号７および１１に示されている。このような結合特異性を有する他の抗体は、所望のエピトープ（例えば、配列番号１のそれぞれ残基２５７～２７１および／もしくは３２０～３３４に対応する配列番号３の１９９～２１３および／もしくは２６２～２７６、または配列番号１の残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２、またはそれらの２つ、３つもしくは全４つの任意の組み合わせ）を含む、エピトープから本質的になる、またはエピトープからなるタウまたはその一部でマウスを免疫化すること、および場合によりマウス３Ｄ６の可変領域（ＩｇＧ１カッパ）を有する抗体と競合させて、得られた抗体をタウへの結合についてスクリーニングすること、により生成され得る。所望のエピトープを含むタウのフラグメントが、フラグメントへの抗体応答の誘発を支援するキャリアに連結され得、および／またはこのような応答の誘発を支援するアジュバントと混和され得る。このような抗体は、指定された残基の変異体と比較して、タウまたはそのフラグメントへの差次的結合についてスクリーニングされ得る。このような変異体に対するスクリーニングは、結合特異性をより精密に定義して、その結合が特定の残基の変異原性により阻害される抗体、および他の例示された抗体の機能的特性を共有する可能性がある抗体の同定を可能にする。変異は、エピトープが存在することが知られた標的全体もしくはその区分全体で、一度に１つの残基を、またはより広範囲の空間的距離をアラニン（またはアラニンが既に存在するならばセリン）で系統的に置き換えることであってよい。同じセットの変異が２つの抗体の結合を有意に低減するならば、その２つの抗体は、同じエピトープに結合する。
選択されたマウス抗体（例えば、３Ｄ６）の結合特異性を有する抗体はまた、ファージディスプレイ法のバリアントを用いて生成され得る。Ｗｉｎｔｅｒの国際公開第９２／２０７９１号を参照されたい。この方法は、ヒト抗体を生成するのに特に適する。この方法では、選択されたマウス抗体の重鎖または軽鎖可変領域のどちらかが、出発原料として用いられる。例えば、軽鎖可変領域が出発原料として選択される場合、メンバーが同じ軽鎖可変領域（すなわち、マウスの出発原料）および異なる重鎖可変領域を提示するファージディスプレイが、構築される。重鎖可変領域は、例えば再配列されたヒト重鎖可変領域のライブラリーから得られる。タウまたはそのフラグメントへの強力な特異的結合（例えば、少なくとも１０８、好ましくは少なくとも１０９Ｍ－１）を示すファージが、選択される。このファージからの重鎖可変領域はその後、さらなるファージライブラリーを構築するための出発原料として役立つ。このライブラリーでは、各ファージは、同じ重鎖可変領域（すなわち、最初のディスプレイライブラリーから同定された領域）および異なる軽鎖可変領域を提示する。軽鎖可変領域は、例えば、再配列されたヒト可変軽鎖領域のライブラリーから得られる。再度、タウまたはそのフラグメントへの強力な特異的結合を示すファージが、選択される。得られた抗体は通常、マウス出発原料と同じまたは類似のエピトープ特異性を有する。
３Ｄ６の重鎖のカバット／コチアの組み合わせＣＤＲは、配列番号８、９、および１０にそれぞれ示されており、また、３Ｄ６の軽鎖のカバットＣＤＲは、それぞれ、配列番号１２、１３、および１４に示されている。
表２は、カバット、コチア、コチアとカバットの組み合わせ（これは、本明細書では、「カバット／コチアの組み合わせ」とも呼ばれる）、ＡｂＭ、およびＣｏｎｔａｃｔにより定義される３Ｄ６ ＣＤＲを示す。
Figure 2022524588000003
他の抗体は、３Ｄ６などの代表的な抗体の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発によって取得できる。成熟重鎖および／または軽鎖可変領域のアミノ酸配列において３Ｄ６と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、その機能特性を保持するモノクローナル抗体、および／または少数の機能的に重要でないアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失、もしくは挿入によってそれぞれの抗体とは異なるモノクローナル抗体も、本発明に含まれる。カバットによって定義されるような、３Ｄ６の対応するＣＤＲと９０％、９５％、９９％または１００％同一であるいずれか従来の定義、好ましくはカバットの定義による少なくとも１つ、または全６つのＣＤＲを有するモノクローナル抗体も含まれる。
本発明はまた、完全にまたは実質的に３Ｄ６に由来するいくつかのまたは全ての（例えば、３、４、５、および６つの）ＣＤＲを有する抗体も提供する。このような抗体には、完全にまたは実質的に３Ｄ６の重鎖可変領域に由来する、少なくとも２つの、および通常３つ全てのＣＤＲを有する重鎖可変領域および／または完全にまたは実質的に３Ｄ６の軽鎖可変領域に由来する、少なくとも２つの、および通常３つ全てのＣＤＲを有する軽鎖可変領域を含めることができる。抗体は、重鎖および軽鎖の両方を含むことができる。ＣＤＲは、４、３、２、または１以下の置換、挿入、または欠失を含む場合、ＣＤＲ－Ｈ２（カバットにより定義される場合）が６、５、４、３、２、または１以下の置換、挿入、または欠失を有することができることを除いて、実質的に、対応する３Ｄ６ ＣＤＲ由来である。このような抗体は、成熟重鎖および／または軽鎖可変領域のアミノ酸配列で３Ｄ６と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有し、その機能特性を保持し得、および／または少数の機能的に重要でないアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失、もしくは挿入によって３Ｄ６の抗体とは異なり得る。
このようなアッセイにより特定されたいくつかの抗体は、モノマー、誤って折り畳まれた、凝集した、リン酸化された、または非リン酸化型のタウ等に結合できる。同様に、いくつかの抗体は、タウの非病理学的および病理学的形態および高次構造に対し免疫反応性である。
Ｂ．非ヒト抗体
タウまたはそのフラグメント（例えば、配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１もしくは３２０～３３４に対応する配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２）に対する他の非ヒト抗体、例えばマウス、モルモット、霊長類、ウサギまたはラットの抗体の生成は、例えば動物をタウまたはそのフラグメントで免疫化すること、により成し遂げられ得る。Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ＣＳＨＰ ＮＹ，１９８８）（参照により組み込まれる）を参照されたい。このような免疫原は、ペプチド合成により、または組換え発現により、天然の供給源から得られる。場合により免疫原は、キャリアタンパク質で融合、または他の方法で複合体化されて、投与され得る。場合により免疫原は、アジュバントと共に投与され得る。複数のタイプのアジュバントが、以下に記載される通り用いられ得る。完全フロイントアジュバントに続く不完全アジュバントが、実験動物の免疫化に好ましい。ウサギまたはモルモットが典型的に、ポリクローナル抗体を作製するのに用いられる。マウスが典型的に、モノクローナル抗体を作製するのに用いられる。抗体は、タウまたはタウ内のエピトープ（例えば、配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１もしくは３２０～３３４に対応する配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６の１つまたは複数を含むエピトープ、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２の１つもしくは複数を含むエピトープ）への特異的結合についてスクリーニングされる。このようなスクリーニングは、配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１もしくは３２０～３３４に対応）を含むタウバリアント、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２を含むタウバリアント、またはこれらの残基内の変異などのタウバリアントの収集物への抗体の結合を決定すること、およびどのタウバリアントが抗体に結合するかを決定すること、により成し遂げられ得る。結合は、例えばウェスタンブロット、ＦＡＣＳまたはＥＬＩＳＡにより評価され得る。
Ｃ．ヒト化抗体
ヒト化抗体は遺伝子改変された抗体であり、非ヒト「ドナー」抗体由来のＣＤＲがヒト「受容体」抗体配列にグラフト化されている（例えば、Ｑｕｅｅｎの米国特許第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号；Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号、Ｃａｒｔｅｒの米国特許第６，４０７，２１３号、Ａｄａｉｒの米国特許第５，８５９，２０５号、およびＦｏｏｔｅの米国特許第６，８８１，５５７号参照）。受容体抗体の配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、このような配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖細胞系列領域の配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、完全にもしくは実質的にドナー抗体由来の少なくとも３つ、４つ、５つまたは全てのＣＤＲ、ならびに可変領域フレームワーク配列および存在する場合には、完全にもしくは実質的にヒト抗体配列に由来する定常領域を有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全にもしくは実質的にドナー抗体重鎖由来の少なくとも１つ、２つ、通常は全３つＣＤＲ、存在する場合には、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列由来の重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域を有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全にもしくは実質的にドナー抗体軽鎖由来の少なくとも１つ、２つ、通常は全３つＣＤＲ、存在する場合には、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列由来の軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域を有する。ナノボディおよびｄＡｂ以外に、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖およびヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体中のＣＤＲは、対応する残基（いずれかの従来の方式により定義されるが好ましくは、カバットにより定義される）の少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一である場合に、実質的に非ヒト抗体中の対応するＣＤＲに由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、カバットによって定義される対応する残基の少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％が同一である場合に、それぞれ実質的にヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に由来する。２０１４年世界保健機関（ＷＨＯ）ヒト化抗体の国際一般的名称（ＩＮＮ）定義に従いヒト化として分類されるためには、ヒト生殖細胞系列抗体配列と（すなわち、体細胞超変異の前に）少なくとも８５％の同一性がなければならない。混合抗体は、１つの抗体鎖（例えば、重鎖）が閾値を満たし、残りの鎖（例えば、軽鎖）が閾値を満たさない抗体である。いずれの鎖も閾値を満たさない場合には、たとえ、両方の鎖の可変フレームワーク領域がいくつかの逆突然変異を有する実質的にヒトであるとしても、抗体はキメラとして分類される。Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｔｈｅ ＩＮＮｓ ａｎｄ ｏｕｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ，ｍＡｂｓ ８：１，１－９，ＤＯＩ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１５．１１１４３２０を参照されたい。また、“ＷＨＯ－ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）”（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ）２０１４．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆ）から入手可能。本文献は、参照により本明細書に組み込まれる。誤解を避けるために記すと、本明細書で使用される場合、用語の「ヒト化」は、２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮヒト化抗体の定義に限定されることを意図していない。本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系列配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、また、本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系列配列に対し８５％未満の配列同一性を有する。本明細書で提供されるヒト化抗体のいくつかの重鎖は、ヒト生殖細胞系列配列に対し約６０％～１００％の配列同一性、例えば、約６０％～６９％、７０％～７９％、８０％～８４％、または８５％～８９％の範囲などの配列同一性を有する。いくつかの重鎖は２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮ定義を下回り、例えば、ヒト生殖細胞系列配列に対し、約６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、または８２％、８３％または８４％の配列同一性を有し、一方、他の重鎖は２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮ定義に適合し、ヒト生殖細胞系列配列に対し、約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％またはそれを超える配列同一性を有する。本明細書で提供されるヒト化抗体のいくつかの軽鎖は、ヒト生殖細胞系列配列に対し約６０％～１００％の配列同一性、例えば、８０％～８４％、または８５％～８９％の範囲などの配列同一性を有する。いくつかの軽鎖は２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮ定義を下回り、例えば、ヒト生殖細胞系列配列に対し、約８１％、８２％、８３％、または８４％の配列同一性を有し、一方、他の軽鎖は２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮ定義を満たし、ヒト生殖細胞系列配列に対し、約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％またはそれを超える配列同一性を有する。本明細書で提供される、２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮ定義により「キメラ」であるいくつかのヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系列配列に対して８５％未満の同一性を有する重鎖を、ヒト生殖細胞系列配列に対して８５％未満の同一性を有する軽鎖と対をなして、有する。例えば、ヒト生殖細胞系列配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖を、ヒト生殖細胞系列配列に対して８５％未満の同一性を有する軽鎖と対をなして有する本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮ定義により「混合」であり、またはその逆も「混合」である。本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮの「ヒト化」の定義に適合し、ヒト生殖細胞系列配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖を、ヒト生殖細胞系列配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖と対をなして有する。本発明のさらなるヒト化抗体は、２０１４ ＷＨＯ ＩＮＮの「混合」の定義に適合する。
ヒト化抗体は、マウス抗体由来の全６つのＣＤＲ（いずれかの従来方式により定義されるが、好ましくはカバットによって定義されるような）を包含する場合が多いが、マウス抗体由来の全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも３、４、または５個のＣＤＲ）でも作製できる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２；Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２０：４１５－４２８，２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９－１０９１，１９９９；Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：１４３２－１４４１，２０００）。
いくつかの抗体では、ＣＤＲの一部のみ、すなわち、ＳＤＲと呼ばれる結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットは、ヒト化抗体において結合を保持するために必要とされる。抗原に接触せず、ＳＤＲ中に存在しないＣＤＲ残基は、以前の研究に基づいて（例えば、ＣＤＲ Ｈ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５は必要とされない場合が多い）、コチア高頻度可変性ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）の外側にあるカバットＣＤＲの領域から分子モデリングおよび／もしくは経験的に、またはＧｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３，２００４に記載された通りに特定することができる。このようなヒト化抗体では、１つまたは複数のドナーＣＤＲ残基が存在しないか、またはドナーＣＤＲ全体が除去されている位置において、その位置を占めるアミノ酸は、受容体抗体配列中の対応する位置（カバットナンバリングによる）を占めるアミノ酸であり得る。ＣＤＲ中に包含するドナーアミノ酸のための受容体のこのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映している。このような置換は、潜在的に、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、結果として潜在的な免疫原性を減少させる点で、および／またはＷＨＯ ＩＮＮの「ヒト化」の定義に適合させるために、都合がよい。しかし、置換はまた、親和性の変化を生ずることがあり、親和性の顕著な低下は避けるのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸も経験的に選択できる。
ヒト受容体抗体配列は、ヒト受容体配列の可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークとの間に高度な配列同一性（例えば、６５～８５％の同一性）を提供するために、必要に応じて、多くの既知のヒト抗体配列の中から選択できる。
いくつかのヒト化およびキメラ抗体は、誘導されたマウス抗体と同じ（実験誤差内で）または改善された機能的特性、例えば実施例に記載されたヒトタウへの結合親和性、ニューロンへのタウ内在化の阻害を有する。例えば、いくつかのヒト化およびキメラ抗体は、それらがそこから誘導されたマウス抗体の３倍、２倍もしくは１倍以内の結合親和性、または実験誤差以内で識別不能の親和性を有する。いくつかのヒト化およびキメラ抗体は、それらがそこから誘導されたマウス抗体の３倍、２倍もしくは１倍以内で実施例に記載されたニューロンへのタウ内在化を阻害するか、またはそれらがそこから誘導されたマウス抗体と実験誤差内で同じくタウ内在化を阻害する。いくつかのヒト化抗体は、３Ｄ６抗体の過去に記載されたヒト化型に比較して低減した免疫原性、増加した親和性、増加した熱安定性および／または改善された発現を呈し（国際公開第２０１７／１９１５６０号参照）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４は、オンレート、オフレートおよびＫｄ数により示される通り、親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２より改善された親和性を示した。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４は、親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２より高い熱安定性および力価を示した。
重鎖の受容体配列の例は、ＰＤＢアクセッションコード２ＲＣＳ－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（配列番号７５）のヒト化４８Ｇ７Ｆａｂのヒト成熟重鎖可変領域である。３Ｄ６および４８Ｇ７Ｆａｂの可変ドメインはまた、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２ループについて同一の長さを共有する。重鎖の受容体配列の例は、ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）のヒト成熟重鎖可変領域である。ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）は、正準型のマウス３Ｄ６重鎖ＣＤＲ－Ｈ１およびＨ２を共有する。ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）は、ヒト重鎖サブグループ１に属する。軽鎖の受容体配列の例は、ＰＤＢアクセッションコードヒト抗体ＡＲＸ７１３３５ＶＬ（配列番号８２）のヒト成熟軽鎖可変領域である。３Ｄ６およびＡＲＸ７１３３５ＶＬ抗体の可変軽鎖ドメインはまた、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループについて同一の長さを共有する。軽鎖の受容体配列の例は、ＩＭＧＴ番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）のヒト成熟軽鎖可変領域である。ＩＭＧＴ番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）は、マウス３Ｄ６と同じＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＬ３の正準クラスを有する。ＩＭＧＴ番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）は、ヒトカッパサブグループ２に属する。
２つ以上のヒト受容体抗体配列が選択される場合、これらの受容体の複合体またはハイブリッドを使用でき、ヒト化軽鎖および重鎖可変領域の異なる位置で使用されるアミノ酸は、いずれかの使われるヒト受容体抗体配列から選択できる。例えば、ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）およびＰＤＢアクセションコード番号２ＲＣＳ－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（配列番号７５）のヒト成熟重鎖可変領域が、３Ｄ６成熟重鎖可変領域のヒト化のための受容体配列として使用された。これらの２つの受容体が異なる位置の例が、位置Ｈ１７（ＴまたはＳ）である。３Ｄ６重鎖可変領域のヒト化型は、この位置にどちらかのアミノ酸を含めることができる。例えば、ヒト成熟軽鎖可変領域ＩＭＧＴ番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）およびＰＤＢコード番号ＡＲＸ７１３３５ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ（配列番号８２）は、３Ｄ６成熟軽鎖可変領域のヒト化のための受容体配列として用いられた。これらの２つの受容体が異なる位置の例は、位置Ｌ１００（ＱまたはＡ）である。３Ｄ６軽鎖可変領域のヒト化型は、この位置のどちらかのアミノ酸を含んでよい。
ヒト可変領域フレームワーク残基由来の特定のアミノ酸は、ＣＤＲ高次構造および／または抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づいて置換に関し選択できる。このような可能な影響の研究は、モデリング、特定の位置でのアミノ酸の特徴の検査、または特定のアミノ酸の置換もしくは変異誘発の効果の経験的観察によるものである。
例えば、アミノ酸がマウス可変領域フレームワーク残基と選択したヒト可変領域フレームワーク残基との間で異なる場合、ヒトフレームワークアミノ酸は、マウス抗体由来の等価のフレームワークアミノ酸によって置換でき、その際、アミノ酸が、
（１）直接抗原と非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接しているまたはカバットではなくコチアにより定義されたＣＤＲ内にある、
（３）そうでなければ、ＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å内である）、（例えば、相同な既知免疫グロブリン鎖の解析された構造上で軽鎖または重鎖をモデリングすることにより識別される）、または
（４）ＶＬ－ＶＨ界面に関与する残基である、
ことを想定することは理にかなっている。
ある実施形態では、ヒト化配列は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ部位特異的変異誘発［Ｗａｎｇ，Ｗ．ａｎｄ Ｍａｌｃｏｌｍ，Ｂ．Ａ．（１９９９）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２６：６８０－６８２］を用いて複数の変異、欠失、および挿入が導入可能な２段ＰＣＲプロトコルを用いて生成される。
Ｑｕｅｅｎの米国特許第５，５３０，１０１号により定義されるとおり、クラス（１）～（３）のフレームワーク残基は、交互に正準およびバーニア（ｖｅｒｎｉｅｒ）残基と呼ばれることもある。ＣＤＲループの高次構造の決定を支援するフレームワーク残基は、正準残基と呼ばれることもある（Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１－９１７（１９８７），Ｔｈｏｒｎｔｏｎ ＆ Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６３：８００－８１５（１９９６））。抗原結合ループの高次構造を支持し、抗原に対する抗体の適合を微調整する役割を果たすフレームワーク残基は、バーニア残基と呼ばれることもある（Ｆｏｏｔｅ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ ２２４：４８７－４９９（１９９２））。
置換候補である他のフレームワーク残基は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。さらなる他の置換候補は、ヒト免疫グロブリンにとってその位置のものとしては通常とは異なる受容体ヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の等価位置のアミノ酸またはより典型的なヒト免疫グロブリンの等価位置由来のアミノ酸で置換できる。
置換候補であるその他のフレームワーク残基は、ピログルタミン酸変換の可能性を最小化するためにグルタミン酸（Ｅ）を置換されてもよいＮ末端グルタミン残基（Ｑ）である［Ｙ．Ｄｉａｎａ Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８６：１１２１１－１１２１７］。ピログルタミン酸（ｐＥ）へのグルタミン酸（Ｅ）の変換は、グルタミン（Ｑ）からよりもゆっくり起こる。グルタミンのｐＥへの変換での一級アミンの減少のために、抗体はより酸性になる。不完全な変換は、抗体の不均一性をもたらし、これは、電荷に基づく分析方法により複数のピークとして観察できる。不均一性の差異は、プロセス制御が不充分であることを示し得る。
代表的ヒト化抗体は、Ｈｕ３Ｄ６と呼称されるマウス３Ｄ６のヒト化型である。
マウス抗体３Ｄ６は、それぞれ配列番号７および１１を含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖および軽鎖可変領域を含む。本発明は、１０の例示されたヒト化成熟重鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１（配列番号７６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２（配列番号７７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３（配列番号７８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４（配列番号７９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５（配列番号８０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６（配列番号９０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、配列番号１４６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｌ８２ｃＶ（配列番号１４７）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９、配列番号１４８））と、５６の例示されたヒト成熟軽鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１（配列番号８３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２（配列番号８４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３（配列番号８５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｎ（配列番号９５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｅ（配列番号９６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｅ（配列番号９７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｑ（配列番号９８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｄ（配列番号９９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ（配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｇ（配列番号１０４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｄ（配列番号１０５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｇ（配列番号１０６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｙ４９Ｅ（配列番号１０７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｖ（配列番号１０８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｓ（配列番号１０９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｎ（配列番号１１１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｄ（配列番号１１２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｅ（配列番号１１３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｐ（配列番号１１４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｔ（配列番号１１５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｓ（配列番号１１６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ａ（配列番号１１７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｖ（配列番号１１８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｇ１００Ｑ（配列番号１４４））を含むマウス３Ｄ６抗体のヒト化型を提供する。
図２および３は、マウス３Ｄ６および様々なヒト化抗体の、それぞれ重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列比較を示す。図９Ａおよび９Ｂは、マウス３Ｄ６の重鎖可変領域と様々なヒト化抗体の重鎖可変領域の配列比較を示す。図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄは、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の軽鎖可変領域と様々なヒト化抗体の軽鎖可変領域の配列比較を示す。
ＣＤＲ高次構造および／または抗原への結合、重鎖と軽鎖間の相互作用の媒介、定常領域との相互作用、望ましいまたは望ましくない翻訳後修飾のための部位であること、ヒト可変領域中のその位置にとって通常とは異なる残基であるために免疫原性の可能性があること、凝集潜在能力の取得、に対し影響を与える可能性などの理由のために、およびその他の理由のために、さらに例により明示されるように、次の３５の可変領域フレームワーク位置を、５６の例示されたヒト成熟軽鎖可変領域および１０の例示されたヒト成熟重鎖可変領域における置換候補として検討した：Ｌ７（Ｔ７Ｓ）、Ｌ１０（Ｔ１０Ｓ）、Ｌ１５（Ｉ１５Ｌ）、Ｌ１７（Ｑ１７Ｅ）、Ｌ３７（Ｌ３７Ｑ）、Ｌ４５（Ｋ４５Ｒ）、Ｌ４７（Ｌ４７Ｇ、Ｌ４７Ｎ、Ｌ４７Ｄ、Ｌ４７Ｅ、Ｌ４７Ｐ、Ｌ４７Ｔ、Ｌ４７Ｓ、またはＬ４７Ａ） 、Ｌ４８（Ｉ４８ＧまたはＩ４８Ｄ）、Ｌ４９（Ｙ４９Ｅ）、Ｌ８３（Ｌ８３Ｖ）、Ｌ８６（Ｈ８６Ｙ）、Ｌ１００（Ａ１００Ｑ）、Ｌ１０６（Ｌ１０６Ｉ）、Ｈ１（Ｑ１Ｅ）、Ｈ５（Ｑ５Ｖ）、Ｈ１１（Ｌ１１Ｖ）、Ｈ１７（Ｓ１７Ｔ）、Ｈ２０（Ｌ２０Ｉ）、Ｈ２３（Ｔ２３Ｋ）、Ｈ３８（Ｋ３８Ｒ）、Ｈ４２（Ｅ４２Ｇ）、Ｈ４３（Ｑ４３Ｋ）、Ｈ６６（Ｋ６６Ｒ）、Ｈ６７（Ａ６７Ｖ）、Ｈ７５（Ｓ７５Ｔ）、Ｈ７６（Ｎ７６Ｄ）、Ｈ８０（Ｌ８０Ｍ）、Ｈ８１（Ｑ８１Ｅ）、Ｈ８２ｃ（Ｌ８２ｃＶ）、Ｈ８３（Ｔ８３Ｒ）、Ｈ９１（Ｙ９１Ｆ）、Ｈ９３（Ａ９３Ｓ）、Ｈ９４（Ｓ９４Ｔ）、Ｈ１０８（Ｔ１０８Ｌ）、およびＨ１０９（Ｌ１０９Ｖ）。次の９の可変領域ＣＤＲ位置を、さらに例により明示されるように、５６の例示されたヒト成熟軽鎖可変領域および１０の例示されたヒト成熟重鎖可変領域における置換候補として検討した：Ｌ２４（Ｋ２４Ｒ）、Ｌ５０（Ｌ５０Ｅ、Ｌ５０Ｄ、Ｌ５０Ｇ、またはＬ５０Ｖ）、Ｌ５２（Ｓ５２Ｇ）、Ｌ５４（Ｌ５４Ｄ、Ｌ５４Ｇ、Ｌ５４Ｎ、Ｌ５４Ｅ、Ｌ５４Ｑ、Ｌ５４Ｋ、Ｌ５４Ｒ、Ｌ５４Ｔ、Ｌ５４Ｖ、またはＬ５４Ｓ）、Ｈ２８（Ｎ２８Ｔ）、Ｈ５４（Ｎ５４Ｄ）、Ｈ５６（Ｄ５６Ｅ）、Ｈ５８（Ｖ５８Ｉ）、およびＨ６０（Ｄ６０Ｅ）。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８７を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１４９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有し、カバットＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８７を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有し、カバットＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８８を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有し、カバットＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号９２を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号８９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１５０～１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
ここでは、他の箇所と同様に、最初に言及される残基は、カバットＣＤＲまたはＣＤＲ－Ｈ１の場合にはコチア－カバットの組み合わせＣＤＲをヒト受容体フレームワークにグラフト化することにより形成されたヒト化抗体の残基であり、２番目に言及される残基は、このような残基を置換するために検討されている残基である。したがって、可変領域フレームワーク内で最初に言及される残基はヒトであり、ＣＤＲ内で最初に言及される残基はマウスである。
例示された抗体は、次に例示された成熟重鎖および軽鎖可変領域の任意の順列または組み合わせを含む：ＶＨｖｂ１／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ１／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ１／ＶＬｖｂ３、ＶＨｖｂ２／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ２／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ２／ＶＬｖｂ３、ＶＨｖｂ３／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ３／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ３／ＶＬｖｂ３、ＶＨｖｂ４／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ４／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ４／ＶＬｖｂ３、ＶＨｖｂ５／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ５／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ５／ＶＬｖｂ３、ＶＨｖｂ６／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ６／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ６／ＶＬｖｂ３、ＶＨｖｂ７／ＶＬｖｂ１、ＶＨｖｂ７／ＶＬｖｂ２、ＶＨｖｂ７／ＶＬｖｂ３。例示された抗体は、例示された成熟重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１（配列番号７６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２（配列番号７７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３（配列番号７８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４（配列番号７９）、ｈｕ３Ｄ６Ｈｖｂ５（配列番号８０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６（配列番号９０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、配列番号１４６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｌ８２ｃＶ（配列番号１４７）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９、配列番号１４８）と、ヒト化３Ｄ６ＶＬ軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１（配列番号８３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２（配列番号８４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３（配列番号８５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｎ（配列番号９５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｅ（配列番号９６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｅ（配列番号９７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｑ（配列番号９８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｄ（配列番号９９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ（配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｇ（配列番号１０４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｄ（配列番号１０５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｇ（配列番号１０６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｙ４９Ｅ（配列番号１０７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｖ（配列番号１０８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｓ（配列番号１０９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｎ（配列番号１１１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｄ（配列番号１１２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｅ（配列番号１１３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｐ（配列番号１１４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｔ（配列番号１１５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｓ（配列番号１１６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ａ（配列番号１１７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｖ（配列番号１１８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｇ１００Ｑ（配列番号１４４）のいずれかとの任意の順列または組み合わせを含む。
例示された抗体は、例示された成熟重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１（配列番号７６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２（配列番号７７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３（配列番号７８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４（配列番号７９）、ｈｕ３Ｄ６Ｈｖｂ５（配列番号８０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６（配列番号９０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、配列番号１４６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｌ８２ｃＶ（配列番号１４７）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９、配列番号１４８）と、ヒト化３Ｄ６ＶＬ軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ１（配列番号２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（配列番号２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ３（配列番号２２）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ４（配列番号２２）のいずれかとの任意の順列または組み合わせを含む。例示された抗体は、例示された成熟軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１（配列番号８３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２（配列番号８４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３（配列番号８５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｎ（配列番号９５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｅ（配列番号９６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｅ（配列番号９７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｑ（配列番号９８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｄ（配列番号９９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ（配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｇ（配列番号１０４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｄ（配列番号１０５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｇ（配列番号１０６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｙ４９Ｅ（配列番号１０７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｖ（配列番号１０８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｓ（配列番号１０９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｎ（配列番号１１１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｄ（配列番号１１２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｅ（配列番号１１３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｐ（配列番号１１４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｔ（配列番号１１５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｓ（配列番号１１６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ａ（配列番号１１７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｖ（配列番号１１８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｇ１００Ｑ（配列番号１４４）と、ヒト化３Ｄ６重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１（配列番号１５）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ２（配列番号１６）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂ（配列番号１７）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１（配列番号１８）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ５（配列番号１９）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ｂ６Ｇ２（配列番号４６）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ｂ６Ｈ３（配列番号４７）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｃ（配列番号４８）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄ（配列番号４９）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｅ（配列番号５０）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆ（配列番号５１）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３（配列番号５２）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂ（配列番号５３）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃ（配列番号５４）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４（配列番号５５）；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂ（配列番号５６）；およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃ（配列番号５７）のいずれかとの任意の順列または組み合わせを含む。
本発明は、ｈ３Ｄ６Ｈｕ５（配列番号１８）としても知られるヒト化重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（Ｌ２－ＤＩＭ４、配列番号１２２）と組み合わせた抗体を提供する。本発明は、ｈ３Ｄ６Ｈｕ５（配列番号１８）としても知られるヒト化重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（Ｌ２－ＤＩＭ５、配列番号１２３）と組み合わせた抗体を提供する。本発明は、ヒト化重鎖可変領域ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８（配列番号１４６）をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（Ｌ２－ＤＩＭ４、配列番号１２２）と組み合わせた抗体を提供する。本発明は、ｈ３Ｄ６Ｈｕ５（配列番号１８）としても知られるヒト化重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（Ｌ２－ＤＩＭ３、配列番号１２１）と組み合わせた抗体を提供する。本発明は、ｈ３Ｄ６Ｈｕ５（配列番号１８）としても知られるヒト化重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（Ｌ２－ＤＩＭ９、配列番号１１０）と組み合わせた抗体を提供する。本発明は、ヒト化重鎖可変領域ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８（配列番号１４６）をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（Ｌ２－ＤＩＭ７、配列番号９４）と組み合わせた抗体を提供する。本発明は、ｈ３Ｄ６Ｈｕ５（配列番号１８）としても知られるヒト化重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１をヒト化軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（Ｌ２－ＤＩＭ２２、配列番号１０３）と組み合わせた抗体を提供する。
本発明は、例示されたヒト化重鎖可変領域の任意の１つをヒト重鎖定常領域と組み合わせた抗体を提供する。代表的ヒト重鎖定常領域は、配列番号１７６（ＩｇＧ１：アロタイプＧ１ｍ１７，１）として提供される。例えば、配列番号１７８は、３Ｄ６ヒト化バリアントの成熟重鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）を示す。例えば、配列番号１８０は、Ｎ末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの重鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）を示す。本発明は、例示されたヒト化軽鎖可変領域の任意の１つを軽鎖定常領域と組み合わせた抗体を提供する。代表的軽鎖定常領域は、配列番号１７７（カッパ）として提供される。例えば、配列番号１７９は、３Ｄ６ヒト化バリアントの成熟軽鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）を示す。例えば、配列番号１８１は、Ｎ末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの軽鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）を示す。
本発明は、３Ｄ６ヒト化抗体のバリアントを提供し、これは、ヒト化成熟重鎖可変領域が、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１（配列番号７６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２（配列番号７７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３（配列番号７８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４（配列番号７９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５（配列番号８０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６（配列番号９０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、配列番号１４６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｌ８２ｃＶ（配列番号１４７）、またはｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９、配列番号１４８）に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示し、ヒト化成熟軽鎖可変領域が、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１（配列番号８３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２（配列番号８４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３（配列番号８５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｎ（配列番号９５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｅ（配列番号９６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｅ（配列番号９７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｑ（配列番号９８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｄ（配列番号９９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ（配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｇ（配列番号１０４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｄ（配列番号１０５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｇ（配列番号１０６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｙ４９Ｅ（配列番号１０７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｖ（配列番号１０８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｓ（配列番号１０９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｎ（配列番号１１１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｄ（配列番号１１２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｅ（配列番号１１３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｐ（配列番号１１４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｔ（配列番号１１５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｓ（配列番号１１６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ａ（配列番号１１７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｖ（配列番号１１８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、またはｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｇ１００Ｑ（配列番号１４４）に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示す、３Ｄ６ヒト化抗体のバリアントを提供する。いくつかのこのような抗体では、配列番号７６～８０、配列番号９０～９１、配列番号１４６～１４８、配列番号８３～８５、および配列番号９３～１４５の中の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または全４４の逆突然変異またはその他の変異が保持される。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが、指定したアミノ酸により占められる：Ｈ９３はＳにより占められ、Ｈ９４はＴにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｈ９３およびＨ９４は、それぞれ、ＳおよびＴにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ９１は、Ｆにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１はＥにより占められ、Ｈ５はＶにより占められ、Ｈ１１はＶにより占められ、Ｈ２０はＩにより占められ、Ｈ２３はＫにより占められ、Ｈ３８はＲにより占められ、Ｈ４２はＧにより占められ、Ｈ４３はＫにより占められ、Ｈ６６はＲにより占められ、Ｈ７５はＴにより占められ、Ｈ７６はＤにより占められ、Ｈ８１はＥにより占められ、Ｈ１０８はＬにより占められ、Ｈ１０９はＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ６６、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８１、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、およびＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１７はＴにより占められ、Ｈ８０はＭにより占められ、Ｈ８３はＲにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１７、Ｈ８０、およびＨ８３は、それぞれ、Ｔ、Ｍ、およびＲにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ５８は、Ｉにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ２８はＴにより占められ、Ｈ６７はＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ２８およびＨ６７は、それぞれ、ＴおよびＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ５４はＤにより占められ、Ｈ５６はＥにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ５４およびＨ５６は、それぞれＤおよびＥにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１はＱまたはＥにより占められ、Ｈ５はＱまたはＶにより占められ、Ｈ１１はＬまたはＶにより占められ、Ｈ１７はＳまたはＴにより占められ、Ｈ２０はＬまたはＩにより占められ、Ｈ２３はＴまたはＫにより占められ、Ｈ２８はＮまたはＴにより占められ、Ｈ３８はＫまたはＲにより占められ、Ｈ４２はＥまたはＧにより占められ、Ｈ４３はＱまたはＫにより占められ、Ｈ５４はＮまたはＤにより占められ、Ｈ５６はＤまたはＥにより占められ、Ｈ５８はＶまたはＩにより占められ、Ｈ６６はＫまたはＲにより占められ、Ｈ６７はＡまたはＶにより占められ、Ｈ７５はＳまたはＴにより占められ、Ｈ７６はＮまたはＤにより占められ、Ｈ８０はＬまたはＭにより占められ、Ｈ８１はＱまたはＥにより占められ、Ｈ８３はＴまたはＲにより占められ、Ｈ９１はＦまたはＹにより占められ、Ｈ９３はＳにより占められ、Ｈ９４はＴにより占められ、Ｈ１０８はＴまたはＬにより占められ、Ｈ１０９はＬまたはＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ９１、Ｈ９３、およびＨ９４は、ｈｕＶＨｖｂ１と同様に、それぞれ、Ｆ、Ｓ、およびＴにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ６６、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８１、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、ｈｕＶＨｖｂ２と同様に、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｉ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５８、Ｈ６６、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、ｈｕＶＨｖｂ３と同様に、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｉ、Ｒ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、ｈｕＶＨｖｂ４と同様に、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｉ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、ｈｕＶＨｖｂ５と同様に、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、ｈｕＶＨｖｂ６と同様に、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＨ領域中の位置Ｈ１、Ｈ５、Ｈ１１、Ｈ１７、Ｈ２０、Ｈ２３、Ｈ２８、Ｈ３８、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８３、Ｈ９３、Ｈ９４、Ｈ１０８、およびＨ１０９は、ｈｕＶＨｖｂ７と同様に、それぞれ、Ｅ、Ｖ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｄ、Ｍ、Ｅ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、およびＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６では、位置Ｈ６０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８）と同様に、Ｅにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６では、位置Ｈ８２Ｃは、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｌ８２ｃＶと同様に、Ｖにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６では、位置Ｈ６０、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８２ｃ、およびＨ８３は、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ Ｄ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒ（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９）と同様に、Ｅ、Ｍ、Ｅ、Ｖ、およびＲにより占められる。
先に参照されたいずれかの抗体の重鎖可変領域は、免疫原性をさらに低減するために修飾され得る。例えば、ヒト化抗体のいくつかでは、位置Ｈ８０は、Ｍにより占められ、かつ／または位置Ｈ８２ｃは、Ｖにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＬ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｌ７はＳにより占められ、Ｌ１０はＳにより占められ、Ｌ１５はＬにより占められ、Ｌ８３はＶにより占められ、Ｌ８６はＹにより占められ、Ｌ１０６はＩにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ７、Ｌ１０、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８６、およびＬ１０６は、それぞれ、Ｓ、Ｓ、Ｌ、Ｖ、Ｙ、およびＹにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＬ領域中の次の位置の少なくとも１つが指定したアミノ酸により占められる：Ｌ７はＴまたはＳにより占められ、Ｌ１０はＴまたはＳにより占められ、Ｌ１５はＩまたはＬにより占められ、Ｌ１７はＱまたはＥにより占められ、Ｌ２４はＫまたはＲにより占められ、Ｌ３７はＬまたはＱにより占められ、Ｌ４５はＫまたはＲにより占められ、Ｌ８３はＬまたはＶにより占められ、Ｌ８６はＨまたはＹにより占められ、Ｌ１００はＡまたはＱにより占められ、Ｌ１０６はＬまたはＩにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＬ領域中の位置Ｌ７、Ｌ１０、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８６、およびＬ１０６は、ｈｕＶＬｖｂ２と同様に、それぞれ、Ｓ、Ｓ、Ｌ、Ｖ、Ｙ、およびＩにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、ＶＬ領域中の位置Ｌ７、Ｌ１０、Ｌ１５、Ｌ１７、Ｌ２４、Ｌ３７、Ｌ４５、Ｌ８３、Ｌ８６、Ｌ１００およびＬ１０６は、ｈｕＶＬｖｂ３と同様に、それぞれ、Ｓ、Ｓ、Ｌ、Ｅ、Ｒ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｙ、ＱおよびＩにより占められる。
先に参照された抗体のいずれかの軽鎖可変領域は、免疫原性をさらに低減するために修飾され得る。例えば、ヒト化抗体のいくつかでは、位置Ｌ４７はＧ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、ＳもしくはＡにより占められ；位置Ｌ４８はＧもしくはＤにより占められ；位置Ｌ４９はＥにより占められ；位置Ｌ５０はＥ、Ｄ、Ｇ、もしくはＶにより占められ；位置Ｌ５２はＧにより占められ；かつ／または位置Ｌ５４はＤ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、ＶもしくはＳにより占められる。先に参照された抗体のいずれかの重鎖可変領域は、免疫原性をさらに低減するために修飾され得る。例えば、ヒト化抗体のいくつかでは、位置Ｈ８０はＭにより占められ、かつ／またはＨ８２ｃはＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄと同様にＤにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇと同様にＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｎと同様にＮにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｅと同様にＥにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｅと同様にＥにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｑと同様にＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｄと同様にＤにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋと同様にＫにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒと同様にＲにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔと同様にＴにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇと同様にＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｇと同様にＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４８は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｉ４８Ｄと同様にＤにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｇと同様にＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｙ４９Ｅと同様にＥにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｖと同様にＶにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｓと同様にＳにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇと同様にＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｎと同様にＮにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｄと同様にＤにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｅと同様にＥにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｐと同様にＰにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｔと同様にＴにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ｓと同様にＳにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ４７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ４７Ａと同様にＡにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ５０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｖと同様にＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒと同様に、それぞれＱ、Ｇ、およびＲにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇと同様に、それぞれＱ、Ｇ、およびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇと同様に、それぞれＱ、Ｇ、およびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒと同様に、それぞれＱ、Ｇ、およびＲにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔと同様に、それぞれＱ、Ｇ、およびＴにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄと同様に、それぞれＱ、Ｇ、およびＤにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒと同様に、それぞれＱおよびＲにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇと同様に、それぞれＱおよびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄと同様に、それぞれＱおよびＤにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇと同様に、それぞれＱおよびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５０は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄと同様に、それぞれＱおよびＤにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔと同様に、それぞれＱおよびＴにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇと同様に、それぞれＱおよびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅと同様に、それぞれＱおよびＥにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇと同様に、それぞれＱ、Ｄ、およびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒと同様に、それぞれＱ、Ｄ、およびＲにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇと同様に、それぞれＱ、Ｅ、およびＧにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、およびＬ５４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒと同様に、それぞれＱ、Ｅ、およびＲにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｇ、Ｒ、およびＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｇ、Ｇ、およびＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２０、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｇ、Ｒ、およびＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５２、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｇ、Ｄ、およびＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｄ、Ｇ、およびＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｄ、Ｒ、およびＱにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７、Ｌ５０、Ｌ５４およびＬ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑと同様に、それぞれＱ、Ｖ、Ｄ、およびＱにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ３７は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑと同様に、Ｑにより占められる。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、位置Ｌ１００は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｇ１００Ｑと同様に、Ｑにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体は、位置Ｈ２８がＮまたはＴにより占められ得ること、Ｈ５４がＮまたはＤにより占められ得ること、Ｈ５６がＤまたはＥにより占められ得ること、位置Ｈ５８がＶまたはＩにより占められること、および位置Ｈ６０がＤまたはＥにより示され得ること以外は、それぞれ配列番号８、９、および１０を含むＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３を含む成熟重鎖可変領域と、位置Ｌ２４がＫまたはＲにより占められ得ること、位置Ｌ５０がＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ得ること、位置Ｌ５２がＳまたはＧにより占められ得ること、および位置Ｌ５４がＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ得ること以外は、それぞれ配列番号１２、１３、および１４を含むＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３を含む成熟軽鎖可変領域とを含み、次の位置の少なくとも１つは指定したアミノ酸により占められる：Ｈ１はＱにより占められ、Ｈ５はＱにより占められ、Ｈ１１はＬにより占められ、Ｈ２０はＬにより占められ、Ｈ２３はＴにより占められ、Ｈ３８はＫにより占められ、Ｈ７５はＳにより占められ、Ｈ５６はＥにより占められ、Ｈ５８はＩにより占められ、Ｈ６０はＥにより占められ、Ｈ８２はＶにより占められ、Ｌ１０はＴにより占められ、Ｌ１７はＥにより占められ、Ｌ２４はＲにより占められ、Ｌ３７はＱにより占められ、Ｌ４７はＧ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、Ｓ、またはＡにより占められ、Ｌ４８はＧまたはＤにより占められ、Ｌ４９はＥにより占められ、Ｌ５０はＥ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、Ｌ５２はＧにより占められ、Ｌ５４はＤ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ、Ｌ８３はＬにより占められ、Ｌ８６はＨにより占められ、Ｌ１００はＱにより占められ、Ｌ１０６はＬにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体は、モノクローナル抗体３Ｄ６の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含み、３Ｄ６は、位置Ｈ２７がＦまたはＹにより占められ得ること、位置Ｈ２８がＮまたはＴにより占められ得ること、位置Ｈ２９がＩまたはＦにより占められ得ること、位置Ｈ３０がＫまたはＴにより占められ得ること、位置Ｈ５１がＩまたはＶにより占められ得ること、位置Ｈ５４がＮまたはＤにより占められ得ること、位置Ｈ６０がＤ、ＡまたはＥにより占められ得ること、位置Ｈ６１がＰまたはＥにより占められ得ること、位置Ｈ１０２がＦまたはＹにより占められ得ること、位置Ｌ５０がＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ得ること、位置Ｌ５２がＳまたはＧにより占められ得ること、位置Ｌ５４がＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、ＶまたはＳにより占められ得ること以外は、配列番号７を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を特徴とするマウス抗体であり、次の位置の少なくとも１つは指定したアミノ酸により占められる：Ｌ３７はＱにより占められ、Ｌ４７はＧ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｔ、Ｓ、またはＡにより占められ、Ｌ４８はＧまたはＤにより占められ、Ｌ４９はＥにより占められ、Ｌ５０はＥ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、Ｌ５２はＧにより占められ、Ｌ５４はＤ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められ、Ｌ１００はＱにより占められ、Ｈ６０はＥにより占められ、Ｈ８２ｃはＶにより占められる。
いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、重鎖可変領域は、ヒト配列に、≧８５％の同一性を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、軽鎖可変領域は、ヒト配列に、≧８５％の同一性を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれは、ヒト生殖細胞系列配列に、≧８５％の同一性を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、３つの重鎖ＣＤＲは、カバット／コチアの組み合わせにより定義される通り（配列番号８、９、および１０）であり、３つの軽鎖ＣＤＲは、カバット／コチアの組み合わせにより定義される通り（配列番号１２、１３、および１４）であるが、但し、位置Ｈ２８がＮまたはＴにより占められ、位置Ｈ５４がＮまたはＤより占められ、位置Ｈ５６がＤまたはＥにより占められ、位置Ｈ５８がＶまたはＩにより占められ、位置Ｈ６０がＤまたはＥにより占められ、位置Ｌ２４がＫまたはＲにより占められ、位置Ｌ５０がＬ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、またはＶにより占められ、位置Ｌ５２がＳまたはＧにより占められ、位置Ｌ５４がＬ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、またはＳにより占められるという条件の場合である。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバット／コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号８６を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８７、配列番号８８、配列番号９２、または配列番号１４９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号８９を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化３Ｄ６抗体では、カバットＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１５０～１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
このようなヒト化抗体のＣＤＲ領域は、３Ｄ６のＣＤＲ領域と同一または実質的に同一であり得る。ＣＤＲ領域は、任意の従来の定義（例えば、コチア、またはコチアとカバットの組み合わせ）によって定義できるが、好ましくはカバットによって定義されるものである。
別に定める場合を除き、可変領域フレームワーク位置は、カバットナンバリングと一致する。その他のこのようなバリアントは典型的には、例示Ｈｕ３Ｄ６重鎖および軽鎖の配列とは、少数（例えば、典型的には１、２、３、５、１０、または１５個）の置換、欠失または挿入だけ異なる。このような差異は通常、フレームワーク中にあるが、ＣＤＲ中でも発生し得る。
ヒト化３Ｄ６バリアントにおけるさらなる多様性の１つの可能性は、可変領域フレームワークでのさらなる逆突然変異である。ヒト化ｍＡｂ中のＣＤＲと接触しないフレームワーク残基の多くは、ドナーマウスｍＡｂまたは他のマウスもしくはヒトの抗体の対応する位置のアミノ酸の置換に順応でき、さらに多くの潜在的なＣＤＲ接触残基もまた置換を受け易い。ＣＤＲ内のアミノ酸でさえ、例えば、可変領域フレームワークを提供するために使用されるヒト受容体配列の対応する位置に見られる残基で変更され得る。さらに、例えば、重鎖および／または軽鎖に対し、別のヒト受容体配列が使用できる。異なる受容体配列が使用される場合、対応するドナーおよび受容体残基はすでに逆突然変異を含まないものであるため、上記で推奨する逆突然変異のうちの１つまたは複数は実行されなくてもよい。
ヒト化３Ｄ６バリアントにおける置換または逆突然変異は（保存的であるか、そうでないかにかかわらず）、ヒト化ｍＡｂの結合親和性または能力、すなわち、タウに結合する能力、に実質的に影響を与えないのが好ましい。
ヒト化３Ｄ６抗体は、リン酸化および非リン酸化タウの両方、ならびに誤って折り畳まれた／凝集した形態のタウに結合する能力をさらに特徴とする。
Ｄ．キメラおよびベニヤ抗体
本発明は、非ヒト抗体、特に実施例の３Ｄ６抗体のキメラおよびベニヤ型をさらに提供する。
キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖および重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖および重鎖定常領域と組み合わされた抗体である。このような抗体は、マウス抗体の結合特異性を実施質的に、または全体的に保持し、ヒト配列の約３分の２である。ある実施形態では、キメラ３Ｄ６抗体は、配列番号７２の重鎖アミノ酸配列および配列番号７３の軽鎖アミノ酸配列を有する。
ベニヤ抗体は、ＣＤＲのいくつか、および通常は全てと、非ヒト抗体の非ヒト可変領域フレームワーク残基のいくつかを保持するが、ＢまたはＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば露出した残基（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）を、ヒト抗体配列の対応する位置からの残基と置き換える、ヒト化抗体の型である。その結果は、ＣＤＲが全体的または実質的に非ヒト抗体に由来し、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが置換によってよりヒト様にされた、抗体である。ベニヤ型の３Ｄ６抗体は、本発明に含まれる。
Ｅ．ヒト抗体
タウまたはそのフラグメント（例えば、配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１および／もしくは３２０～３３４に対応する配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３および／もしくは２６２～２７６、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２、またはそれらの２つ、３つもしくは全４つの任意の組み合わせ）に対するヒト抗体は、以下に記載される種々の技術により提供される。いくつかのヒト抗体は、競合結合実験により、上記のＷｉｎｔｅｒのファージディスプレイ法により、または他の方法により、実施例に記載されたマウスモノクローナル抗体の１種などの特定のマウス抗体と同じエピトープ特異性を有するように選択される。ヒト抗体はまた、標的抗原として、配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応）のみを含む、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２のみを含むタウフラグメントなどのタウのフラグメントのみを用いることにより、および／あるいは配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応）内の、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２内の様々な変異を含むタウバリアントなどのタウバリアントの収集物に対して抗体をスクリーニングすることにより、特定のエピトープ特異性についてスクリーニングされ得る。
ヒト抗体を生成するための方法としては、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１－３６７（１９８３）；Ｏｅｓｔｂｅｒｇ，米国特許第４，６３４，６６４号；およびＥｎｇｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，６３４，６６６号のトリオーマ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む遺伝子導入マウスの使用（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．、ＷＯ国際公開第９３／１２２２７号（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；同第５，８１４，３１８号；同第５，７８９，６５０号；同第５，７７０，４２９号；同第５，６６１，０１６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，５４５，８０６号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；およびＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、国際公開第９１／１０７４１号（１９９１）参照）、ファージディスプレイ法（例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９１／１７２７１号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９２／０１０４７号；米国特許第５，８７７，２１８号；同第５，８７１，９０７号；同第５，８５８，６５７号；同第５，８３７，２４２号；同第５，７３３，７４３号；および同第５，５６５，３３２号参照)；および国際公開第２００８／０８１００８号に記載された方法（例えば、ヒトから単離されたメモリーＢ細胞を、例えばＥＢＶで、不死化すること、所望の特性についてスクリーニングすること、ならびに組換え形態をクローニングおよび発現させること）が挙げられる。
Ｆ．定常領域の選択
キメラ抗体、ベニヤ抗体、またはヒト化抗体の重鎖および軽鎖の可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結できる。定常領域の選択は、ある程度、抗体依存性細胞傷害、抗体依存性細胞食作用および／または補体依存細胞毒性が所望されるか否かに依存する。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、補体依存性細胞傷害を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２およびＩｇＧ４は有しない。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２およびＩｇＧ４より強力な細胞媒介エフェクター機能を誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。定常領域のナンバリング規則には、ＥＵナンバリング（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９））、カバットナンバリング（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１）、ＩＭＧＴ独自ナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｃ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９，１８５－２０３（２００５））、およびＩＭＧＴエキソンナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ、上掲書）が挙げられる。
重鎖のＣ末端リシンなどの軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端における１つまたはいくつかのアミノ酸は、分子の一部または全てを欠損していても、または誘導体化されていてもよい。置換は、補体媒介性細胞傷害もしくはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒらの米国特許第５，６２４，８２１号、Ｔｓｏらの米国特許第５，８３４，５９７号、およびＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６参照）、またはヒトにおける半減期を延長するために定常領域で行われ得る（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４参照）。抗体の半減期を増加させるための代表的な置換は、位置２５０におけるＧｌｎおよび／または位置４２８におけるＬｅｕを含む（定常領域のＥＵナンバリングがこの段落で使用される）。位置２３４、２３５、２３６および／もしくは２３７のいずれかまたは全ての置換は、Ｆｃγ受容体、特に、ＦｃγＲＩ受容体の親和性を低下させる（例えば、米国特許第６，６２４，８２１号参照）。ヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５および２３７でのアラニン置換は、エフェクター機能を低下させるために使用できる。いくつかの抗体は、エフェクター機能を低下させるために、ヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５および２３７でのアラニン置換を有する。必要に応じて、ヒトＩｇＧ２中の２３４、２３６および／または２３７はアラニンと置換され、位置２３５はグルタミンと置換されている（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号参照）。いくつかの抗体では、ＥＵナンバリングで、ヒトＩｇＧ１の位置２４１、２６４、２６５、２７０、２９６、２９７、３２２、３２９および３３１の１つまたは複数の位置での変異が使用される。いくつかの抗体では、ＥＵナンバリングで、ヒトＩｇＧ１の位置３１８、３２０、および３２２の１つまたは複数の位置での変異が使用される。いくつかの抗体では、位置２３４および／または２３５はアラニンで置換され、および／または位置３２９はグリシンで置換される。いくつかの抗体では、位置２３４および２３５はアラニンで置換される。いくつかの抗体では、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。
抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または重鎖および軽鎖の成熟可変ドメインがスペーサーを介して連結されている単鎖抗体として発現させることができる。
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ変異およびイソアロタイプ変異を示す。すなわち、定常領域は、１つまたは複数の多型位置で別々の個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つまたは複数の他のアイソタイプの非多型領域に結合する点で、アロタイプとは異なる。したがって、例えば、別の重鎖定常領域は、Ｃ末端リシンを有する、または有さないＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３である。ヒト定常領域への言及は、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプ中の位置を占める残基の任意の順列を有する定常領域を含む。代表的な重鎖定常領域は、Ｃ末端リシンを有する、または有しない配列番号１７６であり、代表的な軽鎖定常領域は、配列番号１７７である。
Ｇ．組換え抗体の発現
抗体発現細胞株（例えば、ハイブリドーマ）を用いた、キメラおよびヒト化抗体の生成に関するいくつかの方法が知られている。例えば、抗体の免疫グロブリン可変領域は、よく知られた方法を用いて、クローン化および配列決定できる。一方法では、重鎖可変ＶＨ領域は、ハイブリドーマ細胞から調製したｍＲＮＡを用いてＲＴ－ＰＣＲによりクローン化される。コンセンサスプライマーを、翻訳開始を５’プライマーとして、ｇ２ｂ定常領域を特異的３’プライマーとして包含するＶＨ領域リーダーペプチドに用いる。代表的プライマーは、Ｓｃｈｅｎｋらによる米国特許出願公開第２００５／０００９１５０号（以降では「Ｓｃｈｅｎｋ」）に記載されている。複数の独立に誘導されたクローン由来の配列を比較して、増幅中に変化が導入されていないことを保証できる。ＶＨ領域の配列はまた、５’ＲＡＣＥ ＲＴ－ＰＣＲ法および３’ ｇ２ｂ特異的プライマーにより得たＶＨフラグメントをシーケンシングすることにより決定または確認できる。
軽鎖可変ＶＬ領域は、類似の方法でクローン化できる。一手法では、コンセンサスプライマーセットが、翻訳開始コドンを包含するＶＬ領域およびＶ－Ｊ結合領域の下流にあるＣｋ領域に特異的な３’プライマーにハイブリッド形成するように設計された５’プライマーを用いてＶＬ領域の増幅のために設計される。２つ目の手法では、５’ＲＡＣＥ ＲＴ－ＰＣＲ法を用いて、ＶＬをコードするｃＤＮＡをクローン化する。代表的プライマーはＳｃｈｅｎｋ（上記参照）に記載されている。クローン化配列はその後、ヒト（またはその他の非ヒト種）定常領域をコードする配列と結合される。
一手法では、重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれのＶＤＪまたはＶＪ接合部の下流にスプライスドナー配列をコードするように再改変され、重鎖用のｐＣＭＶ－ｈγ１および軽鎖用のｐＣＭＶ－Ｍｃｌなどの哺乳動物発現ベクター中に挿入される。これらのベクターは、ヒトγ１およびＣｋ定常領域を、挿入された可変領域カセットの下流にエキソンフラグメントとして、コードする。配列検証後に、重鎖および軽鎖発現ベクターを、ＣＨＯ細胞中に同時形質導入して、キメラ抗体を生成することができる。遺伝子導入の４８時間後に培養上清を収集し、ウェスタンブロット分析により抗体生成を、またはＥＬＩＳＡにより抗原結合を分析する。キメラ抗体は上述のようにヒト化される。
キメラ、ベニヤ、ヒト化抗体およびヒト抗体は典型的には、組換え発現により生成される。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、天然関連または異種発現制御配列、例えば、プロモーター、を含む抗体鎖コード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換または遺伝子導入することができるベクター中のプロモーター系であり得る。ベクターが適切な宿主に組み込まれた後、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現、ならびに交差反応抗体の収集および精製に好適する条件下で維持される。
これらの発現ベクターは典型的には、宿主生物中で、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの一体化部分として、複製可能である。一般に、発現ベクターは、例えば、アンピシリン耐性またはヒグロマイシン耐性などの選択マーカーを含み、目的のＤＮＡ配列で形質転換されたこれらの細胞の検出を可能とする。
大腸菌は、抗体、特に、抗体フラグメントを発現させるのに有用な原核生物宿主の１種である。酵母などの微生物も発現に有用である。サッカロミセス属は、必要に応じて、発現制御配列、複製起点、および終止配列などを有する適切なベクターを有する酵母宿主である。典型的なプロモーターは、３－ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の糖分解酵素を含む。誘導性酵母プロモーターは、特に、アルコール脱水素酵素、イソチトクロームＣ、およびマルトースおよびガラクトース利用に関与する酵素由来のプロモーターを含む。
哺乳動物細胞は、免疫グロブリンまたはそのフラグメントをコードするヌクレオチドセグメントを発現するために使用できる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。完全な異種タンパク質を分泌することができるいくつかの適切な宿主細胞株が開発されており、これらは、ＣＨＯ細胞株、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、ならびにＳＰ２／０およびＮＳ０を含む非抗体生成骨髄腫を含む。細胞は、非ヒトであり得る。これらの細胞用の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写終結配列などの必要な情報処理部位を含んでよい。発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、およびウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターを含んでよい。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
あるいは、遺伝子導入動物のゲノムへの導入およびその後の遺伝子導入動物のミルク中での発現のために、抗体コード配列を導入遺伝子中に組み込むことができる（例えば、米国特許第５，７４１，９５７号、同第５，３０４，４８９号、および同第５，８４９，９９２号参照）。好適な導入遺伝子は、乳腺特異的遺伝子、例えば、カゼインまたはベータラクトグロブリン由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能に連結された軽鎖および／または重鎖のコード配列を含む。
目的のＤＮＡセグメントを含むベクターは、宿主細胞型の種類に応じた方法を用いて、宿主細胞中に導入できる。例えば、塩化カルシウム遺伝子導入は通常、原核細胞に用いられ、一方、リン酸カルシウム処理、電気穿孔、リポフェクション、遺伝子銃、またはウイルス系遺伝子導入は、その他の細胞宿主に使用できる。哺乳動物細胞を形質転換するのに使用される他の方法には、ポリブレン、原形質融合、リポソーム、電気穿孔、および微量注入の使用が含まれる。遺伝子導入動物の生成のために、導入遺伝子は、受精卵母細胞中に微量注入でき、または胚性幹細胞もしくは人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）のゲノム中に組み込みことができ、このような細胞の細胞核は、除核卵母細胞中に導入できる。
細胞培養物中に抗体の重鎖および軽鎖をコードするベクター（単一または複数）を導入し、無血清培地中で増殖生産性および製品品質に関して細胞プールをスクリーニングできる。その後、最高生成細胞プールをＦＡＣＳベースの単細胞クローニングに供し、モノクローナル株を生成できる。７．５ｇ／Ｌ超の培養物の製品力価に相当する、一日あたり細胞あたり５０ｐｇまたは１００ｐｇを上回る比生産性を使用できる。単細胞クローンが生成する抗体はまた、濁度、濾過特性、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＵＶスキャン、ＨＰ－ＳＥＣ、炭水化物－オリゴ糖マッピング、質量分析、およびＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅなどの結合アッセイの検査をすることができる。その後、選択されたクローンは、複数のバイアルに入れ、後の使用のために凍結保存され得る。
発現されると、抗体は、プロテインＡ捕捉、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法などを含む、当技術分野の標準的な手順に従って精製できる（概要については、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ ＰｕｒｉｆｉｃａＴｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）参照）。
コドン最適化、プロモーターの選択、転写要素の選択、ターミネーターの選択、無血清の単細胞クローニング、細胞保存、コピー数の増幅のための選択マーカーの使用、ＣＨＯターミネーター、またはタンパク質力価の改善を含む抗体の商業生産のための方法論を用いることができる（例えば、米国特許第５，７８６，４６４号、同第６，１１４，１４８号、同第６，０６３，５９８号、同第７，５６９，３３９号、国際公開第２００４／０５０８８４号、同第２００８／０１２１４２号、同第２００８／０１２１４２号、同第２００５／０１９４４２号、同第２００８／１０７３８８号、および同第２００９／０２７４７１号、ならびに米国特許第５，８８８，８０９号参照）。
ＩＶ．能動免疫原
能動免疫化に用いられる薬剤は、上記の受動免疫化に関連して記載された抗体の同じ型を患者において誘導するのに役立つ。能動免疫化に用いられる薬剤は、実験動物においてモノクローナル抗体を作製するために用いられる免疫原の同じ型、例えば、配列番号３の残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれ残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応）に対応するタウの領域からの３～１５もしくは３～１２もしくは５～１２もしくは５～８の隣接するアミノ酸のペプチド、例えば配列番号３の残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれ残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応）を含むペプチドなど、または配列番号１の残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２に対応するタウの領域、例えば配列番号１の残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２を含むペプチドなどであり得る。３Ｄ６と同じまたは重なり合うエピトープに結合する抗体を誘導するために、これらの抗体のエピトープ特異性が、マッピングされ得る（例えば、タウにわたる一連の重なり合うペプチドへの結合を検査することにより）。エピトープからなる、またはエピトープを含む、またはエピトープに重なり合うタウのフラグメントはその後、免疫原として用いられ得る。このようなフラグメントは、典型的には非リン酸化型で用いられ得る。
用いられるならば、異種キャリアおよびアジュバントは、モノクローナル抗体を作製するのに用いられるものと同じであってよいが、ヒトでの使用へのより良好な薬学的好適性（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙ）について選択されてもよい。適切なキャリアとしては、血清アルブミン、スカシガイ由来ヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、テタヌス毒素、またはジフテリア（例えば、ＣＲＭ１９７）、大腸菌、コレラ、もしくはＨ．ピロリなどの他の病原性細菌からの毒素類、または弱毒性誘導体が挙げられる。Ｔ細胞エピトープもまた、適切なキャリア分子である。いくつかのコンジュゲートは、本発明の薬剤を免疫刺激性ポリマー分子（例えば、トリパルミトイル－Ｓ－グリセリンシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｃ）、マンナン（マンノースポリマー）、またはグルカン（αβ１→２ポリマー））、サイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１アルファおよびβペプチド、ＩＬ－２、γ－ＩＮＦ、ＩＬ－１０、ＧＭ－ＣＳＦ）、およびケモカイン（例えば、ＭＩＰ１－αおよびβ、ならびにＲＡＮＴＥＳ）に連結することにより形成され得る。免疫原は、スペーサーアミノ酸（例えば、ｇｌｙ－ｇｌｙ）を用いて、または用いずにキャリアに連結されてよい。さらなるキャリアとしては、ウイルス様粒子が挙げられる。シュードビリオンまたはウイルス誘導粒子とも呼ばれるウイルス様粒子（ＶＬＰ）は、インビボで定義された球形対称のＶＬＰへ自己組織化できるウイルスカプシドおよび／またはエンベロープタンパク質の複数のコピーで構成されたサブユニット構造を表す（Ｐｏｗｉｌｌｅｉｔ，ｅｔ ａｌ．，（２００７） ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２（５）：ｅ４１５）。あるいはペプチド免疫原は、ｐａｎＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）などの、ＭＨＣクラスＩＩ分子の大部分を結合できる少なくとも１種の人工Ｔ細胞エピトープに連結され得る。ＰＡＤＲＥは、米国特許第５，７３６，１４２号、国際公開第９５／０７７０７号、およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：７５１－７６１（１９９４）に記載される。能動免疫原は、複数のコピーの免疫原および／またはそのキャリアが単一の共有結合分子として提供される多量体形態で提供され得る。
フラグメントは多くの場合、薬学的に許容可能なアジュバントと共に投与される。アジュバントは、ペプチドが単独で使用された場合の状況に比較して、誘導された抗体の力価および／または誘導された抗体の結合親和性を増加させる。種々のアジュバントが、免疫応答を誘発するためにタウの免疫原性フラグメントと組み合わせて用いられ得る。好ましいアジュバントは、応答の性質形態に影響を及ぼす免疫原の立体構造変化を引き起こさずに、免疫原への内在的応答を増進する。好ましいアジュバントとしては、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩、３－Ｏ－脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））（英国特許２２２０２１１号（ＲＩＢＩ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，モンタナ州ハミルトン、現在はＣｏｒｉｘａに属する)が挙げられる。Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ－２１は、南米で見出されるキラジャサポナリアモリーナの樹皮から単離されるトリテルペングリコシドまたはサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌ ｅｔ ａｌ．のＶａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）；米国特許第５，０５７，５４０号参照)、(Ａｑｕｉｌａ ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、マサチューセッツ州フレイミングハム；現在はＡｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州ニューヨーク)。他のアジュバントは、水中油エマルジョン（スクアレンまたはピーナッツ油など）であり、それは場合によりモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６－９１（１９９７）参照)、Ｐｌｕｒｏｎｉｃポリマー、およびマイコバクテリアの死菌などの免疫刺激物質と組み合わされる。Ｒｉｂｉアジュバントは、水中油エマルジョンである。Ｒｉｂｉは、Ｔｗｅｅｎ８０を含有する生理食塩水で乳化された代謝可能な油（スクアレン）を含有する。Ｒｉｂｉはまた、免疫刺激物質として作用する精製マイコバクテリア産物、および細菌のモノホスホリルリピドＡを含有する。別のアジュバントは、ＣｐＧ（国際公開第９８／４０１００号）である。アジュバントは、活性剤を有する治療組成物の成分として投与でき、または別個に治療薬の投与前、投与と同時、または投与後に投与できる。
タウに対する抗体を誘導する、タウの天然のフラグメントの類似体もまた、用いられ得る。例えば１つまたは複数または全てのＬ－アミノ酸が、このようなペプチド中でＤ－アミノ酸で置換され得る。また、アミノ酸の順序が、逆転され得る（レトロペプチド）。場合によりペプチドは、逆順のＤ－アミノ酸（レトロインベルソペプチド）の全てを包含する。タウペプチドとの有意なアミノ酸配列類似性を必ずしも有しないペプチドおよび他の化合物は、それでもタウペプチドの模倣体として役立ち、類似の免疫応答を誘導する。上記のタウへのモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプ抗体もまた、用いられ得る。このような抗Ｉｄ抗体は、抗原を模倣し、それへの免疫応答を生じる（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｉｔ ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ ６ｔｈ ｅｄ．，ｐ．１８１参照）。
ペプチド（および場合によりペプチドに融合されたキャリア）もまた、ペプチドをコードする核酸の形態で投与され、患者においてインサイチュで発現され得る。免疫原をコードする核酸セグメントは典型的には、患者の意図する標的細胞中のＤＮＡセグメントの発現を可能にする、プロモーターおよびエンハンサーなどの調節要素に連結される。血液細胞中での発現では、免疫応答の誘導に望ましいため、軽鎖および重鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサー要素、またはＣＭＶ主要前初期プロモーターおよびエンハンサーが、発現を指示するのに適する。連結された調節要素およびコード配列は多くの場合、ベクター中にクローニングされる。抗体はまた、抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸の形態で投与され得る。重鎖および軽鎖の両方が存在する場合、鎖は好ましくは、単鎖抗体として連結される。受動的投与のための抗体はまた、例えば、ペプチド免疫原で処置した患者の血清からアフィニティークロマトグラフィーにより調製できる。
ＤＮＡは、裸の形態で（すなわち、コロイド状またはカプセル化材料なしで）送達できる。あるいは、レトロウイルス系（例えば、Ｌａｗｒｉｅ ａｎｄ Ｔｕｍｉｎ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３，１０２－１０９（１９９３）参照）；ＭＭＬＶ、ＨＩＶ－１、およびＡＬＶなどのレトロウイルス由来のベクターを含むアデノウイルスベクター（例えば、Ｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７，５９１１（１９９３）参照）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９，１８６７（１９９４）参照）；ＨＩＶまたはＦＩＶｇａｇ配列に基づくものなどのレンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスおよびトリのポックスウイルスを含むポックスファミリーのウイルスベクター、シンドビスおよびセムリキ森林ウイルス由来のものなどのアルファウイルス属のウイルスベクター（例えば、Ｄｕｂｅｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０，５０８－５１９（１９９６）参照）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（米国特許第５，６４３，５７６号参照）および水疱性口内炎ウイルスなどのラブドウイルス（国際公開第９６／３４６２５号参照）ならびにパピローマウイルス（Ｏｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６，３２５－３３３（１９９５）；Ｗｏｏ ｅｔ ａｌ，国際公開第９４／１２６２９号およびＸｉａｏ ＆ Ｂｒａｎｄｓｍａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４，２６３０－２６２２（１９９６））を含むいくつかのウイルスベクター系が使用できる。
免疫原をコードするＤＮＡ、または抗体重鎖および／もしくは軽鎖をコードするＤＮＡ、またはそれを含有するベクターは、リポソームにパッケージすることができる。適切な脂質および関連類似体は、米国特許第５，２０８，０３６号、同第５，２６４，６１８号、同第５，２７９，８３３号および同第５，２８３，１８５号に記載されている。免疫原をコードする、または抗体重鎖および／もしくは軽鎖をコードするベクターおよびＤＮＡはまた、微粒子キャリアに吸着または結合させることもでき、その例としては、ポリメチルメタクリレートポリマーおよびポリラクチドならびにポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）が挙げられる（例えば、ＭｃＧｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．１９９６参照）。
抗体重鎖および／または軽鎖をコードするそれらからのベクターまたはセグメントは、エクスビボで細胞中に、例えば個々の患者から外移植された細胞（例えば、リンパ球、骨髄吸引物、組織生検）または汎用ドナー造血幹細胞に組み込まれ、続いて、通常はトランスジーンを取り込んだ細胞を選択した後に、細胞を患者に再移植することができる（例えば、国際公開第２０１７／０９１５１２号参照）。代表的な患者由来細胞としては、患者由来の多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または他の型の幹細胞（胚、造血、神経、または間葉系）挙げられる。
抗体重鎖および／または軽鎖をコードするベクターまたはそれからのセグメントは、アルブミン遺伝子または他の安全なハーバー遺伝子などの細胞中の目的のいずれかの領域にエクスビボで導入できる。ベクターを組み込む細胞は、予め分化を行い、または行わずに、移植できる。細胞は、病変の分泌組織もしくは場所などの特異的組織に、または血液中への輸液などにより全身に、移植できる。例えば細胞は、肝臓などの、患者の分泌組織中に、場合により、肝臓の場合には肝細胞などの、その組織中に存在する細胞に予め分化させて、移植できる。肝臓中での抗体の発現は、血液への抗体の分泌をもたらす。
Ｈ．抗体スクリーニングアッセイ
上記のように、抗体は、最初に目的とする結合特異性に関しスクリーニングされ得る。能動免疫原は、同様に、このような結合特異性を有する抗体を誘導する能力に関しスクリーニングされ得る。この場合、能動免疫原を用いて実験動物を免疫し、得られた血清を適切な結合特異性に関し検査する。
その後、目的とする結合特異性を有する抗体を、細胞および動物モデルで検査できる。このようなスクリーニングに使用される細胞としては神経細胞を優先すべきである。神経芽腫細胞に、必要に応じてタウ病理と関連する変異と共に、タウの４リピートドメインを遺伝子導入したタウ病理の細胞モデルが報告されている（例えば、デルタＫ２８０、Ｋｈｌｉｓｔｕｎｏｖａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４，５４４－５４６（２００７）参照）。別のモデルでは、ドキシサイクリンを添加することにより、タウが神経芽細胞腫Ｎ２ａ細胞株中で誘導される。この細胞モデルは、可溶性または凝集状態で細胞に対するタウの毒性、タウ遺伝子発現のスイッチをオンにした後のタウ凝集体の外観、再び遺伝子発現のスイッチをオフにした後のタウ凝集体の溶解、ならびにタウ凝集体の形成抑制またはそれらを脱凝集における抗体の効率を研究するのを可能とする。
抗体または能動免疫原はまた、タウと関連する疾患の遺伝子導入動物モデルでスクリーニングできる。このような遺伝子導入動物は、タウ導入遺伝子（例えば、ヒトアイソフォームのいずれか）および必要に応じて、とりわけタウ、ＡｐｏＥ、プレセニリンまたはアルファ－シヌクレインをリン酸化するキナーゼなどのヒトＡＰＰ導入遺伝子を含み得る。このような遺伝子導入動物は、タウと関連する疾患の少なくとも１つの徴候または症状を発症するように処理されている。
代表的な遺伝子導入動物は、マウスのＫ３株である（Ｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５（４１）：１５９９７－６００２（２００８））。これらのマウスは、Ｋ３６９Ｉ変異（この変異はピック病と関連している）およびＴｈｙ１．２プロモーターを有するヒトタウ導入遺伝子を有する。このモデルは、神経変性、運動障害ならびに求心性繊維および小脳顆粒細胞の変性の急速な経過を示す。別の代表的な動物は、マウスのＪＮＰＬ３株である。これらのマウスは、Ｐ３０１Ｌ変異（この変異は前頭側頭型認知症と関連している）およびＴｈｙ１．２プロモーターを有するヒトタウ導入遺伝子を有する（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｎ．Ｙ．，Ｌｅｗｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．２５：４０２－４０５（２０００））。これらのマウスは、神経変性のより緩やかな経過を有する。このマウスは、いくつかの脳領域および脊髄における神経原線維濃縮体を発症し、これは本明細書にその全体が参照により組み込まれる。これは、濃縮体の発症の結果を研究するため、およびこれらの凝集体の生成を抑制することができる治療法をスクリーニングするための優れたモデルである。これらの動物の別の利点は、病変の比較的早い段階での発症である。ホモ接合系統では、タウ病理と関連する行動異常は、少なくとも、早ければ３ヶ月目に観察できるが、これらの動物は少なくとも生後８ヶ月まで比較的健康を維持する。つまり、８ヶ月の時点で、これらの動物は歩き回り、それら自体で摂食し、処置効果の監視を可能にするのに充分なほど行動タスクを実行できる。６～１３ヶ月間、これらのマウスをＡＩ ｗＩ ＫＬＨ－ＰＨＦ－１で能動免疫することにより、約１，０００の力価を生じさせ、未処置のコントロールアイス（ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｃｅ）と比較して神経原線維濃縮体はより少なく、ｐＳｅｒ４２２も、体重減少も低下した。
抗体または活性剤の活性は、総タウまたはリン酸化タウの量の減少、Αβのアミロイド沈着物などの他の病理学的特徴の減少、および阻害または遅延または行動欠陥を含む様々な基準によって評価できる。能動免疫原はまた、血清中の抗体の誘導について検査され得る。受動および能動免疫原の両方は、遺伝子導入動物の血液脳関門から脳内への抗体の通過に関し検査され得る。抗体または抗体を誘発するフラグメントはまた、天然または誘導を介してタウを特徴とする疾患の症状を発症する非ヒト霊長類で検査され得る。抗体または活性剤の検査は通常、抗体または活性剤が存在しない（例えば、ビークルで置き換えられる）ことを除いて並列に行われるコントロール実験と同時に実行される。その後、検査中の抗体または活性剤に起因する疾患の徴候または症状の減少、遅延または抑制がコントロールと比較して評価され得る。
Ｖ．処置の対象となる患者
神経原線維濃縮体の存在は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、および進行性核上麻痺（ＰＳＰ）を含むいくつかの疾患で認められている。本投与計画はまた、これらの疾患のいずれかの処置または予防にも使用できる。神経疾患および病状とタウの間の広範囲に及ぶ関係のために、本投与計画は、神経疾患のない個体の平均値と比較して、（例えば、ＣＳＦ内の）タウもしくはリン酸化タウのレベルの上昇を示す任意の対象の処置または予防に使用できる。本投与計画は、神経疾患と関連するタウの変異を有する個体における神経疾患の処置または予防にも使用できる。本方法は、アルツハイマー病、および特に患者における処置または予防に特に適している。
処置の対象となる患者は、疾患のリスクはあるが、症状を示さない個体および現在症状を示す患者を含む。疾患のリスクのある患者は、疾患の既知の遺伝的リスクを有する患者を含む。このような個体は、この疾患を経験している親族を有する個体、およびそのリスクが遺伝子マーカーまたは生化学的マーカーの分析によって決定されている個体を含む。リスクの遺伝子マーカーは、上述したものなどのタウの変異、ならびに神経疾患と関連する他の遺伝子の変異を含む。例えば、ヘテロ接合型でのＡｐｏＥ４対立遺伝子およびさらにホモ接合型でのＡｐｏＥ４対立遺伝子も、アルツハイマー病のリスクと関連している。アルツハイマー病のリスクの他のマーカーは、ＡＰＰ遺伝子の変異、特に位置７１７での変異およびハーディ変異およびスウェーデン変異と呼ばれる位置６７０および６７１での変異、プレセニリン遺伝子のＰＳ１およびＰＳ２の変異、ＡＤ、高コレステロール血症またはアテローム性動脈硬化症の家族歴を含む。現在アルツハイマー病に罹患している個体は、特徴的な認知症、および上述の危険因子の存在から、ＰＥＴイメージングによって認識できる。さらに、いくつかの診断検査は、ＡＤを有する個体を同定するために利用可能である。これらは、ＣＳＦタウまたはリン酸化タウおよびΑβ４２レベルの測定を含む。タウまたはリン酸化タウのレベルの上昇およびΑβ４２レベルの低下は、ＡＤの存在を意味する。いくつかの変異はパーキンソン病と関連する。Ａｌａ３０ＰｒｏもしくはＡｌａ５３、またはロイシンリッチリピートキナーゼのＰＡＲＫ８などの他の遺伝子の変異は、パーキンソン病と関連する。個体はまた、ＤＳＭ ＩＶ ＴＲの基準によって、上述の神経疾患のいずれかであると診断され得る。
無症状の患者では、処置は全ての年齢（例えば、１０、２０、３０）で開始できる。しかし、通常、患者が４０、５０、６０または７０歳に達するまでは処置を開始する必要はない。処置は典型的には、一定の期間にわたり複数投薬を必要とする。処置は、経時的に抗体レベルをアッセイすることにより監視できる。応答が低下した場合は、追加免疫投与が必要である。潜在的なダウン症候群患者の場合には、母親に治療薬を投与することによって処置を出生前に開始するか、または出生直後に開始できる。
Ｉ．核酸
本発明はさらに、上記重鎖および軽鎖のいずれか（例えば、配列番号７、配列番号１１、配列番号７６～８０、配列番号９０～９１、配列番号１４６～１４８、配列番号８３～８５、配列番号９３～１４５、および配列番号１７８～１８１）をコードする核酸を提供する。本発明の重鎖をコードする代表的な核酸は、配列番号１８２であり、本発明の軽鎖をコードする代表的な核酸は、配列番号１８３である。場合によりこのような核酸はさらに、シグナルペプチドをコードし、可変領域に連結されたシグナルペプチドを発現できる。核酸のコード配列は、調節配列に作動可能に連結され、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナル、などのコード配列の発現を確実にできる。調節配列は、プロモーター、例えば原核生物プロモーターまたは真核生物プロモーターを含んでよい。重鎖または軽鎖をコードする核酸は、宿主細胞中での発現のためにコドン最適化できる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、選択可能な遺伝子をコードできる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、単離型で生じ得、または１つまたは複数のベクター中に挿入できる。核酸は、例えば、固相合成またはオーバーラッピングオリゴヌクレオチドのＰＣＲにより合成できる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、例えば、発現ベクター内の１つの連続した核酸として連結でき、または別々の、例えば、それぞれ自身の発現ベクター中に挿入できる。
Ｊ．コンジュゲート抗体
タウなどの抗原に特異的に結合するコンジュゲート抗体は、タウの存在の検出；アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）と診断された患者を処置するのに使用される治療薬の効力の監視および評価；タウの凝集の抑制または低減；タウ原線維形成の抑制または低減；タウ沈着物の低減または除去；タウの非毒性高次構造の安定化；または患者のアルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）の処置もしくは予防、に有用である。例えば、このような抗体は、他の治療薬の部分、他のタンパク質、他の抗体、および／または検出可能な標識とコンジュゲート化できる。国際公開第０３／０５７８３８号；米国特許第８，４５５，６２２号を参照されたい。このような治療薬の部分は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）などの患者の望ましくない状態または疾患を処置する、と戦う、緩和する、防止する、または改善するのに使用できる任意の薬剤であり得る。
コンジュゲート化した治療薬部分は、細胞傷害薬、細胞分裂阻害剤、神経分化誘導物質、神経保護薬、放射線治療薬、免疫調節物質、または抗体の活性を推進または強化するいずれかの生理活性物質を含み得る。細胞傷害薬は、細胞に対し毒性である任意の薬剤であり得る。細胞傷害薬は、細胞増殖を阻害する任意の薬剤であり得る。神経分化誘導物質は、ニューロン維持、増殖、または分化を促進する化学またはタンパク質物質を含む任意の薬剤であり得る。神経保護薬は、急性侵襲または変性過程からニューロンを保護する、化学またはタンパク質物質を含む、薬剤であり得る。免疫調節物質は、免疫応答の発生または維持を刺激または抑制する任意の薬剤であり得る。放射線治療薬は、放射線を放出する任意の分子または化合物であり得る。このような治療薬部分が、本明細書に記載された抗体などのタウ特異的抗体に結合される場合、結合された治療薬部分は、正常細胞に勝るタウ関連疾患罹患細胞に対する特異的親和性を有するであろう。したがって、コンジュゲート抗体の投与は、周囲の健常な組織に対しては最小限の損傷で、癌細胞を直接標的とする。これは、治療薬部分がそれら単独で投与されるには毒性が高すぎる場合には特に有用であり得る。さらに、より少ない量の治療薬部分を使用できる。
いくつかのこのような抗体は、免疫毒素として作用するように修正できる。例えば、米国特許第５，１９４，５９４号を参照されたい。例えば、植物に由来する細胞毒素であるリシンを、抗体に対する二官能性試薬Ｓ－アセチルメルカプトコハク酸無水物およびリシンに対するスクシンイミジル ３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネートを用いて、抗体に結合させることができる。Ｐｉｅｔｅｒｓｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４８（１６）：４４６９－４４７６（１９９８）を参照されたい。結合により、リシンのＢ鎖結合活性は低下するが、リシンＡ鎖の毒性潜在能力および抗体活性のいずれも損なわれない。同様に、リボソームアセンブリーの阻害剤であるサポリンも、化学的に挿入されたスルフヒドリル基間のジスルフィド結合を介して抗体に結合させることができる。Ｐｏｌｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １８：１２１５－１２２２（２００４）を参照されたい。
いくつかのこのような抗体は、放射性同位元素に連結できる。放射性同位元素の例には、としては、例えば、イットリウム９０（９０Ｙ）インジウム１１１（１１１Ｉｎ）、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、放射性銀－１１１、放射性銀－１９９、およびビスマス２１３が挙げられる。放射性同位元素の抗体への連結は、従来の二官能キレートで実施し得る。放射性銀－１１１および放射性銀－１９９の連結に対しては、硫黄系リンカーを使用し得る。Ｈａｚｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４－２５：１－７（１９９４）を参照されたい。銀放射性同位元素の連結は、免疫グロブリンのアスコルビン酸による還元を必要とする場合がある。１１１Ｉｎおよび９０Ｙなどの放射性同位元素に対しては、イブリツモマブチウキセタンを使用でき、このような同位体と反応して、それぞれ１１１Ｉｎ－イブリツモマブチウキセタンおよび９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタンを形成する。Ｗｉｔｚｉｇ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ９１－Ｓ９５（２００１）を参照されたい。
いくつかのこのような抗体は、その他の治療薬の部分に連結できる。このような治療薬部分は、例えば、細胞傷害性、細胞分裂停止性、神経栄養性、または神経保護性であり得る。例えば、抗体は、メイタンシン、ゲルダナマイシン、チューブリン結合剤（例えば、オーリスタチン）などのチューブリン阻害剤、またはカリチアマイシンなどの小溝結合剤などの毒性化学療法剤と結合できる。他の代表的治療薬の部分は、患者のアルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）の処置、管理、もしくは改善に有用であることが知られている薬剤を含む。
抗体はまた、他のタンパク質と結合されてよい。例えば、抗体はフィノマーと結合されてよい。フィノマーは、ヒト癌遺伝子Ｆｙｎ ＳＨ３ドメイン由来の小さい結合タンパク質（例えば、７ｋＤａ）である。それらは、安定で可溶性であり得、システイン残基およびジスルフィド結合を欠いている場合がある。フィノマーは、抗体と同じ親和性および特異性で標的分子に結合するように遺伝子改変できる。それらは、抗体をベースにした多重特異的融合タンパク質を生成するのに好適である。例えば、フィノマーを抗体のＮ末端および／またはＣ末端に融合して、異なる構造を有する二重または三重特異性ＦｙｎｏｍＡｂを生成できる。フィノマーは、フィノマーライブラリーに対し、最適特性を有するフィノマーの効率的な選択を可能にするＦＡＣＳ、Ｂｉａｃｏｒｅ、および細胞に基づくアッセイを用いるスクリーニング技術を通して、選択できる。フィノマーの例は、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６－３２０４（２００７）；Ｂｅｒｔｓｃｈｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２０：５７－６８（２００７）；Ｓｃｈｌａｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．４：４９７－５０８（２０１１）；Ｂａｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６９（Ｐｔ６）：１１２４－１１３７（２０１３）；およびＢｒａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１３：２０３０－２０３９（２０１４）に開示されている。
本明細書で開示の抗体はまた、１種または複数の他の抗体に結合またはコンジュゲート化できる（例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを形成するために）。このような他の抗体は、タウ内の異なるエピトープに結合でき、または異なる標的抗原に結合できる。
抗体はまた、検出可能な標識とも結合されてよい。このような抗体は、例えば、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）の診断、および／または処置の効力を評価するために使用できる。このような抗体は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、の対象またはこれらの病気に罹患し易い対象における、またはこのような対象から得た適切な生物試料におけるこのような判断を行うのに特に有用である。抗体に結合または連結し得る検出可能な代表的標識としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどの種々の酵素；ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子団；ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンなどの蛍光材料；ルミノールなどの発光材料；ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンなどの生物発光材料；放射性銀－１１１、放射性銀－１９９、ビスマス２１３、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、および１１７Ｔｉｎスズなどの放射性の材料；種々のポジトロン放射型断層撮影法を用いたポジトロン放出金属；非放射性常磁性金属イオン；および放射標識されたまたは特定の放射性同位元素にコンジュゲート化された分子、が挙げられる。
放射性同位元素の抗体への連結は、従来の二官能キレートで実施し得る。放射性銀－１１１および放射性銀－１９９の連結に対しては、硫黄系リンカーを使用し得る。Ｈａｚｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４－２５：１－７（１９９４）を参照されたい。銀放射性同位元素の連結は、免疫グロブリンのアスコルビン酸による還元を必要とする場合がある。１１１Ｉｎおよび９０Ｙなどの放射性同位元素に対しては、イブリツモマブチウキセタンを使用でき、このような同位体と反応して、それぞれ１１１Ｉｎ－イブリツモマブチウキセタンおよび９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタンを形成する。Ｗｉｔｚｉｇ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ９１－Ｓ９５（２００１）を参照されたい。
治療薬の部分、他のタンパク質、他の抗体、および／または検出可能な標識は、仲介物（例えば、リンカー）を介して本発明の抗体に直接的にまたは間接的に、結合またはコンジュゲート化され得る。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）中のＡｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，”；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）中のＴｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，”；“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）中のＡｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，”；およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）を参照されたい。好適なリンカーとしては、例えば、切断可能および非切断可能リンカーが挙げられる。酸性または還元条件下で特定のプロテアーゼに曝露時に、またはその他の所定の条件下で、結合した治療薬部分、タンパク質、抗体、および／または検出可能標識を放出する異なるリンカーを用いることができる。
ＶＩ．医薬組成物および使用方法
予防的用途では、抗体、または抗体を誘導するための薬剤、またはその医薬組成物は、疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患し易い患者、あるいは、疾患のリスクのある患者に、疾患のリスクを低減する、疾患の重症度を軽減する、または疾患の少なくとも１つの徴候もしくは症状の発症を遅延させるのに有効な投与計画（投与の用量、頻度および経路）で投与される。特に、投与計画は、好ましくは脳内でタウもしくはリン酸化タウおよびそれから形成されるフィラメント対を抑制もしくは遅延させるか、および／またはその毒性作用を抑制もしくは遅延させるか、および／または行動欠陥の発症を抑制もしくは遅延させるのに有効である。治療用途では、抗体、または抗体を誘導する薬剤は、疾患の少なくとも１つの徴候または症状の改善または少なくともさらなる悪化を抑制するのに効果的な投与計画（投与の用量、頻度および経路）で疾患（例えば、アルツハイマー病）の疑いのある患者、または既に疾患に罹患している患者に投与される。特に、この投与計画は、タウ、リン酸化タウ、もしくはそれから形成されるフィラメント対のレベルのさらなる上昇、関連する毒性および／または行動障害を低減または少なくとも抑制するのに効果的であるのが好ましい。
個々の処置された患者が、本発明の方法によって処置されない同等の患者のコントロール集団における平均的な治療成績よりも良好な治療成績を達成した場合、または比較臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相または第ＩＩＩ相試験）で、コントロール患者に対する処置患者のより良好な治療成績がｐ＜０．０５または０．０１、あるいはさらに０．００１のレベルで示される場合には、投与計画は治療的または予防的に効果的であると見なされる。
多くの異なる要因、例えば、投与手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がＡｐｏＥ保因者であるか否か、患者がヒトまたは動物であるか否か、他の薬剤が投与されるか、処置が予防的または治療的であるか否かに応じて、有効用量は変化する。
抗体の代表的な用量範囲は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１～６０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１～３ｍｇ／ｋｇまたは０．１５～２ｍｇ／ｋｇまたは０．１５～１．５ｍｇ／ｋｇである。抗体は、このような用量で毎日、一日置きに、毎週、隔週、毎月、四半期ごと、または実証的分析によって決定された任意の他のスケジュールに従って投与できる。代表的な処置は、長期間にわたって、例えば、少なくとも６ヶ月間、複数回投与での投与を必要とする。さらなる代表的な投与計画は、２週間に１回ごと、または月に１回、または３～６ヶ月に１回の投与を必要とする。
能動的投与のための薬剤の量は、ヒト投与では０．１～５００μｇ／患者、より通常には１～１００または１～１０μｇ／注射で変動する。注射のタイミングは、１日１回～１年に１回、１０年に１回で大きく変動し得る。典型的なレジメンは、６週間間隔または２ヶ月間隔などの時間間隔での免疫化とその後のブースター注射からなる。別のレジメンは、免疫化と、１、２および１２ヶ月後のブースター注射からなる。別のレジメンは、生涯にわたり２ヶ月毎の注射を必要とする。あるいは、ブースター注射は、免疫応答の監視により示される通り、不規則な基準であり得る。
抗体、または抗体を誘導するための薬剤は、好ましくは末梢経路（すなわち、投与または誘導される抗体が血液脳関門を通過し、脳内の意図された部位に到達する経路）を介して投与される。投与経路は、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内、眼内または筋肉内投与を含む。好ましい抗体の投与経路は、静脈内および皮下経路である。能動免疫に好ましい経路は、皮下および筋肉内経路である。この種の注射は、最も典型的には、腕または脚の筋肉に行われる。いくつかの方法では、薬剤は、沈着物が蓄積した特定の組織に直接注射、例えば、頭蓋内注射される。
非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは無菌であり、実質的に等張で、ＧＭＰ条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための投与量）で提供され得る。医薬組成物は、１つまたは複数の生理学的に許容されるキャリア、希釈剤、賦形剤または補助剤を用いて処方できる。製剤は、選択された投与経路に依存する。注射のために、抗体は、水溶液で、好ましくは、（注射部位での不快感を軽減するために）ハンクス液、リンゲル液、もしくは生理食塩水または酢酸緩衝液などの生理的に適合性のある緩衝液で処方できる。溶液は、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤を含有できる。あるいは、抗体は、使用前に適切なビークル、例えば、無菌で発熱物質を含まない水で構成するために凍結乾燥形態であり得る。
本投与計画は、処置される疾患の処置または予防に有効な別の薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、アルツハイマー病の場合、本投与計画は、Ａβ（国際公開第２０００／０７２８８０号）、コリンエステラーゼ阻害剤もしくはメマンチンに対する免疫療法と組み合わせることができ、またはパーキンソン病の免疫療法の場合には、α－シヌクレイン（国際公開第２００８／１０３４７２号）、レボドパ、ドーパミン作動薬、ＣＯＭＴ阻害剤、ＭＡＯ－Ｂ阻害剤、アマンタジン、もしくは抗コリン薬に対する免疫療法と組み合わせることができる。
抗体は効果的投与計画で投与され、これは、発症を遅らせる、重症度を低減する、さらなる悪化を抑制する、および／または処置される障害の少なくとも１つの徴候または症状を改善する投与量、投与経路および投与頻度を含む投与計画を意味する。患者が既に障害に罹患している場合は、投与計画は治療的に効果的な投与計画と称される場合もある。患者が母集団に比べて障害の高いリスクを有するが、まだ症状がない場合、投与計画は、予防的に効果的な投与計画と称される場合もある。いくつかの事例では、治療的または予防的効力は、同じ患者のヒストリカルコントロールまたは過去の経験に対して個別の患者で観察され得る。他のケースでは、治療的または予防的効力は、非処置患者のコントロール集団に比べて、処置患者集団の臨床前または臨床試験中に実証できる。
抗体の代表的投与量は、０．１～６０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５、３、１０、３０、または６０ｍｇ／ｋｇ）、または０．５～５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．５、１、２、３、４または５ｍｇ／ｋｇ）または固定投与量として、１０～４０００ｍｇまたは１０～１５００ｍｇである。投与量は、特に、患者の状態および前の処置がある場合その応答に、処置が予防的であるかまたは治療的であるか、および障害が急性であるかまたは慢性であるかに依存する。
投与は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内または筋肉内投与であり得る。いくつかの抗体は、静脈内または皮下投与により体循環中に投与できる。静脈内投与は、例えば、３０～９０分にわたる輸注であり得る。
投与頻度は、特に、循環中の抗体の半減期、患者の状態および投与経路に依存する。頻度は、患者の状態または処置される障害の進行の変化に応じて、毎日、毎週、毎月、３ヶ月毎、または不規則な間隔とすることができる。静脈内投与の代表的頻度は、処置の原因によって毎週～３ヶ月毎であるが、さらに多いまたは少ない頻度の投与も可能である。皮下投与としては、代表的投与頻度は、毎日から毎月であるが、さらに多いまたは少ない頻度の投与も可能である。
投薬の回数は、障害が急性であるか慢性であるかおよび処置に対する障害の応答に依存する。急性障害または慢性障害の急性悪化に対しては、多くの場合１～１０回の服用量である。時には、急性障害または慢性障害の急性悪化に対しては、必要に応じ分割形態とした、単一急速投与量で充分である。急性障害または急性悪化の再発に対しては、処置を反復し得る。慢性障害に対しては、抗体は、規則的な間隔、例えば、毎週、隔週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎を少なくとも１、５または１０年間、または患者の一生の間投与され得る。
Ａ．診断および監視方法
インビボイメージング、診断方法、および最適化免疫療法
本発明は、患者のタウタンパク質沈着物（例えば、神経原線維濃縮体およびタウ封入体）をインビボイメージングする方法を提供する。本方法は、タウに結合する抗体などの試薬（例えば、マウスの、ヒト化された、キメラのまたはベニヤ化された３Ｄ６抗体）を患者に投与し、その後、それが結合した後の薬剤を検出することにより作用する。配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３もしくは２６２～２７６（配列番号１のそれぞれアミノ酸残基２５７～２７１または３２０～３３４に対応）内の、または配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８もしくは２９０～２９９もしくは３２１～３３０もしくは３５３～３６２内のタウのエピトープに結合する抗体が、好ましい。いくつかの方法では、抗体は、配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３（配列番号１のアミノ酸残基２５７～２７１に対応）内の、または配列番号３のアミノ酸２６２～２７６（配列番号１のアミノ酸残基３２０～３３４に対応）内のエピトープに結合する。いくつかの方法では、抗体は、配列番号１のアミノ酸残基２５９～２６８内、配列番号１のアミノ酸２９０～２９９内、配列番号１のアミノ酸３２１～３３０内、または配列番号１のアミノ酸３５３～３６２内のエピトープに結合する。投与した抗体の除去反応は、Ｆａｂなどの完全長の定常領域を欠く抗体フラグメントを使用することによって回避または低減することができる。いくつかの方法では、同じ抗体は、処置および診断試薬の両方として機能し得る。
診断試薬は、患者の体内への静脈内注射によって、または頭蓋内注射によるかもしくは、頭蓋骨に孔を穿孔することによって脳に直接投与できる。試薬の投与量は、処置方法の場合と同じ範囲内である必要がある。典型的には、試薬は標識されるが、いくつかの方法では、タウに対する親和性を有する一次試薬は標識されず、二次標識剤を一次試薬に結合させるために使用される。標識の選択は検出の手段に依存する。例えば、蛍光標識は光学的検出に適する。常磁性標識の使用は、外科的介入を用いない断層撮影検出に適する。放射性標識はまた、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出できる。
タウタンパク質沈着物のインビボイメージングの方法は、アルツハイマー病、前頭側頭葉変性症、進行性核上性麻痺およびピック病、またはこのような疾患に対する感受性などのタウオパチーを診断するのに、またはその診断を確定するのに有用である。例えば、本方法は、認知症の症状を示す患者に使用できる。患者に異常な神経原線維濃縮体がある場合、その患者は、アルツハイマー病を罹患している可能性がある。別の選択肢としては、患者に異常なタウ封入体がある場合には、封入体の位置に応じて、その患者は前頭側頭葉変性症に罹患している可能性がある。本方法はまた、無症状の患者にも使用できる。異常なタウタンパク質沈着物の存在は、将来、症候性疾患に罹り易いことを示す。この方法はまた、以前にタウ関連疾患と診断された患者における疾患の進行および／または処置に対する応答を監視するのに有用である。
診断は、標識された遺伝子座の数、サイズ、および／または強度を対応するベースライン値と比較することによって行われ得る。ベースライン値は、非疾患個体集団における平均レベルを表し得る。ベースライン値はまた、同じ患者で決定された以前のレベルを表し得る。例えば、患者のベースライン値は、タウ免疫療法処置を開始する前に測定することができ、その後、測定値とベースライン値と比較できる。ベースラインシグナルに対する値の減少は、処置に対する陽性応答を示す。
一部の患者では、タウオパチーの診断は、ＰＥＴスキャンを実行することによって支援され得る。ＰＥＴスキャンは、例えば、従来のＰＥＴ撮像装置および補助装置を用いて実施され得る。スキャンは典型的には、タウタンパク質沈着物と関連することが一般に知られている脳の１つまたは複数の領域、およびあったとしても少数の沈着物が通常、存在してコントロールとしての役割を果たす１つまたは複数の領域を含む。
ＰＥＴスキャンで検出したシグナルは、多次元画像として表すことができる。多次元画像は、二次元では脳の断面を表し、三次元では三次元脳を表すか、または四次元では三次元脳の経時的変化を表し得る。カラースケールは、異なる色を用いて行うことができ、異なる標識量および検出される推定タウタンパク質沈着物を示す。スキャンの結果はまた、検出される標識の量およびその結果としてのタウタンパク質沈着物の量と関連する数で数値的に提示できる。特定のタウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の、沈着物と関連することが知られている脳の領域に存在する標識は、前者の領域における沈着物の程度を表す比率を提供するために、沈着物と関連することが知られていない領域中に存在する標識と比較できる。同じ放射性標識リガンドに対するこのような比率は、タウタンパク質沈着物の比較可能な尺度および異なる患者間でのその変化を与える。
いくつかの方法では、ＰＥＴスキャンは、ＭＲＩまたはＣＡＴスキャンと同時に、またはＭＲＩまたはＣＡＴスキャンと同じ患者の訪問で実施される。ＭＲＩまたはＣＡＴスキャンは、ＰＥＴスキャンよりも脳のより解剖学的詳細を提供する。しかし、ＰＥＴスキャンからの画像は、脳内の解剖学的構造に対するＰＥＴリガンドおよび推定タウ沈着物の位置をより正確に示すＭＲＩまたはＣＡＴスキャン画像上に重ね合わせることができる。一部の装置は、スキャンの間に患者が位置を変えることなく患者のＰＥＴスキャンとＭＲＩまたはＣＡＴスキャンの両方を実行し、画像の重ね合わせを容易にすることできる。
好適なＰＥＴリガンドは、本発明の放射標識抗体（例えば、マウス、ヒト化、キメラまたはベニヤ３Ｄ６抗体）を含む。使用される放射性同位体は、例えば、Ｃ１１、Ｎ１３、Ｏ１５、Ｆ１８、またはＩ１２３であり得る。ＰＥＴリガンドの投与と、スキャンを実行する間隔は、ＰＥＴリガンド、特に脳への取り込み速度および除去速度、ならびにその放射性標識物の半減期に依存し得る。
ＰＥＴスキャンはまた、無症状の患者または軽度認知障害の症状を有するが、タウオパチーと診断されておらず、それでもタウオパチーを発症するリスクが高い患者で予防処置として実施することもできる。無症状の患者では、スキャンは、家族歴、遺伝的もしくは生化学的危険因子または熟年のためにタウオパチーのリスクが高いと考えられる個体に特に有用である。予防的スキャンは、例えば、４５～７５歳の年齢の患者で開始できる。一部の患者では、最初のスキャンは５０歳で行われる。
予防的スキャンは、例えば、６ヶ月～１０年、好ましくは、１～５年の間隔で行われ得る。一部の患者では、予防的スキャンが毎年行われる。予防的措置として行われるＰＥＴスキャンが異常に高いレベルのタウタンパク質沈着物を示す場合、免疫療法が開始され、その後、ＰＥＴスキャンが、タウオパチーと診断された患者と同様に開始できる。予防処置として行われるＰＥＴスキャンが正常レベル内にあるタウタンパク質沈着物のレベルを示す場合、さらにＰＥＴスキャンが、前述のように、６ヶ月～１０年、好ましくは、１～５年の間隔で、またはタウオパチーもしくは軽度認知障害の徴候および症状の出現に応答して行われ得る。上記の正常レベルのタウタンパク質沈着物が検出される場合、予防的スキャンとタウ標的化免疫療法の投与を組み合わせることによって、タウタンパク質沈着物のレベルは正常レベルまで低下するかもしくはそれにより近いレベルになるか、または少なくともさらに増加するのを防ぐことができ、患者は、予防的スキャンおよびタウ標的化免疫療法を受けていない場合よりも長い期間（例えば、少なくとも５、１０、１５もしくは２０年、または患者の残りの人生の間）、タウオパチーのない状態のままであり得る。
正常レベルのタウタンパク質沈着物は、特定のタウオパチー（例えば、アルツハイマー病）と診断されておらず、このような疾患を発症するリスクが高いとみなされていない母集団の個体の代表的な試料（例えば、年齢が５０歳未満の無病の個体の代表的な試料）の脳内における神経原線維濃縮体またはタウ封入体の量によって決定され得る。あるいは、タウタンパク質沈着物が生じることが知られている脳の領域における、本発明の方法によるＰＥＴシグナルが、このような沈着物が通常生じることが知られている脳の領域からのシグナルと（測定の精度内で）異なっていない場合には、正常なレベルが個々の患者で認識され得る。個体におけるレベルの上昇は、正常レベルとの比較（例えば、平均＋標準偏差の分散の外側のレベル）によってまたは、単に、沈着物と関連することが知られていない領域と比較したタウタンパク質沈着物と関連する脳の領域における実験誤差を超えて上昇したシグナルから認識され得る。個体および集団におけるタウタンパク質沈着物のレベルを比較する目的の場合、タウタンパク質沈着物は、好ましくは、脳の同じ領域（単一または複数）において決定されるべきであり、これらの領域は、特定のタウオパチー（例えば、アルツハイマー病）と関連するタウタンパク質沈着物を形成することが知られている少なくとも１つの領域を含む。タウタンパク質沈着物のレベルが上昇した患者は、免疫療法を開始するための候補である。
免疫療法を開始した後のタウタンパク質沈着物のレベルの低下は、最初に、処置が所望の効果を有していることを示すものとして見ることができる。観察された減少は、例えば、ベースライン値の１～１００％、１～５０％、または１～２５％の範囲内であり得る。このような効果は、沈着物を形成することが知られている脳の１つまたは複数の領域で測定できるか、またはこのような領域の平均値から測定できる。処置の総合効果は、処置しない場合に、平均的な非処置患者で生じるタウタンパク質沈着物の増加にベースラインに対する減少率を加えることによって概算できる。
タウタンパク質沈着物のほぼ一定のレベルでの維持またはタウタンパク質沈着物が少しでも増加することは、準最適な応答ではあるが、処置に対する応答の指標となり得る。このような応答は、免疫療法がタウタンパク質沈着物のさらなる増加を抑制する効果を有するか否かを決定するために、処置を受けていない特定のタウオパチー（例えば、アルツハイマー病）を有する患者におけるタウタンパク質沈着物のレベルの時間経過と比較できる。
タウタンパク質沈着物の変化の監視は、その処置に応答した免疫療法または他の治療計画の調整を可能にする。ＰＥＴ監視は、処置に対する応答の性質および程度の指標を提供する。その後、処置の調整を行うべきか否かを判断することができ、必要であれば、処置はＰＥＴ監視に応じて調整できる。したがって、他のバイオマーカー、ＭＲＩまたは認知の測定が検出可能なほど応答する前に、ＰＥＴ監視は、タウ標的化免疫療法または他の処置の投与計画の調整を可能にする。著しい変化は、ベースに対する処置後のパラメータの値を比較することで、処置が有益な効果をもたらしたかまたはもたらしていないという証拠が得られることを意味する。いくつかの事例では、患者自身におけるパラメータの値の変化は、処置が有益な効果をもたらしたかまたはもたらしていないという証拠を与える。他の例では、患者における値の変化がある場合、免疫療法を受けていない患者の代表的なコントロール集団における値の変化がある場合にはその変化と比較される。特定の患者の応答とコントロール患者の正常な応答との差異（例えば、平均値プラス標準偏差の分散）はまた、免疫療法の投与計画が患者において有益な効果を達成しているかまたはしていないかという証拠を提供できる。
一部の患者では、監視はタウタンパク質沈着物の検出可能な低下を示すが、タウタンパク質沈着物のレベルは正常を上回ったままである。このような患者では、許容できない副作用がない場合、そのままの投与頻度および／もしくは用量で、または最大推奨用量でない場合は、投与頻度および／もしくは用量を増加させて、治療計画を継続することができる。
監視が、患者におけるタウタンパク質沈着物のレベルが正常またはほぼ正常まで低下したことを示す場合は、免疫療法の投与計画は、誘導の投与計画（すなわち、タウタンパク質沈着物のレベルを低下させる計画）から維持の投与計画（すなわち、ほぼ一定のレベルでタウタンパク質沈着物を維持する計画）に調整されてよい。このような投与計画は、免疫療法の用量および／または投与頻度を減少させることによって行われ得る。
他の患者では、監視は、免疫療法がいくつかの有益な効果を有しているが準最適な効果であることを示し得る。最適な効果は、治療の開始後の所定の時点で免疫療法を受けているタウオパチー患者の代表的な試料の（タウタンパク質沈着物が形成することが知られているその全体脳もしくは代表的な領域（単一または複数）にわたって測定または計算された）タウタンパク質沈着物の変化の上半分または四分位内のタウタンパク質沈着物のレベルの減少率として定義され得る。タウタンパク質沈着物が少し低下した患者、またはタウタンパク質沈着物が一定のままの患者、または増加するが、免疫療法の非存在下で（例えば、免疫療法を投与されていない患者のコントロール群から推測したときに）予想される値よりも低い程度までの増加である患者は、陽性ではあるが準最適な反応を経験する患者として分類され得る。このような患者には、必要に応じて、薬剤の用量および／または投与頻度を増加させる投与計画の調整が施され得る。
一部の患者では、タウタンパク質沈着物は、免疫療法を受けていない患者におけるタウ沈着と同様にまたはそれを上回って増加し得る。このような増加が、１８ヶ月または２年などの期間にわたって継続する場合は、薬剤の頻度または用量が増加した後であっても、必要に応じて、他の処置を優先して免疫療法が中断され得る。
タウオパチーの診断、監視、および処置の調整に関する前述の説明は、主にＰＥＴスキャンの使用に焦点を置いてきた。しかし、本発明のタウ抗体（例えば、マウス、ヒト化、キメラもしくはベニヤ３Ｄ６抗体）の使用の影響を受け易いタウタンパク質沈着物の視覚化および／または測定ための任意の他の技術が、このような方法を実行するためにＰＥＴスキャンの代わりに使用できる。
タウ関連疾患に罹患しているまたは罹患し易い患者のタウに対する免疫応答の検出方法も提供される。この方法を用いて、本明細書で提供される作用物質による治療および予防処置の過程を監視することができる、受動免疫化後の抗体プロファイルは典型的には、直後の抗体濃度のピークとそれに続く指数関数的減衰を示す。さらに投与がなければ、減衰は、投与され多孔体の半減期に応じて、数日から数ヶ月の期間内に処置前のレベルに近付く。例えば、いくつかのヒト抗体の半減期は、２０日の程度である。
いくつかの方法では、対象のタウに対する抗体のベースライン測定は投与前に行われ、第２の測定は、その直ぐ後に、抗体のピークレベルを測定するために行われ、さらに１回または複数回のさらなる測定は、抗体のレベルの減衰を監視するために間隔を置いて行われる。抗体のレベルがベースラインまたはベースラインを差し引いたピークの所定のパーセンテージ（５０％、２５％または１０％）まで低下すると、さらなる用量の抗体の投与が行われる。いくつかの方法では、ピークまたはバックグラウンドを差し引いたその後の測定レベルがあらかじめ決定した基準レベルと比較され、他の対象に対する有益な予防または治療処置投与計画が作成される。測定抗体レベルが基準レベルより大きく低い場合（例えば、処置から利益を受ける対象集団の基準値の平均マイナス１標準偏差、好ましくは２標準偏差未満の場合）には、さらなる抗体投与量が必要である。
例えば、対象由来の試料中のタウを測定することにより、または対象のタウのインビボイメージングにより、対象のタウを検出する方法も提供される。このような方法は、タウに関連する疾患、またはそれに対する罹りやすさの診断または診断の確定に有用である。この方法はまた、無症状の対象にも使用できる。タウの存在は、将来、症候性疾患に罹り易いことを示す。この方法はまた、以前に、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）と診断されたことがある対象の疾患進行および／または処置に対する応答を監視するのに有用である。
アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）を有する、有すると疑われる、または有するリスクのある対象から得た生物試料を、本明細書で開示の抗体に接触させて、タウの存在を評価することができる。例えば、このような対象のタウのレベルが健康な対象に存在するタウのレベルと比較され得る。あるいは、疾患の処置を受けているこのような対象のタウのレベルが、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）の処置を受けたことがない対象のタウのレベルと比較され得る。いくつかのこのような検査は、このような対象から得た組織の生検材料を必要とする。ＥＬＩＳＡアッセイはまた、例えば、流体試料中のタウを評価するために有用な方法であり得る。
ＶＩＩ．キット
本発明は、さらにキット（例えば、容器）を提供し、キットは、本明細書で開示の抗体および関連物、例えば、使用説明書（例えば、添付文書）を含む。使用説明書は、例えば、抗体および必要に応じ、１種または複数のさらなる薬剤の投与のための説明書を含んでよい。抗体の容器は、単位用量、大量包装（例えば、複数回投与用包装）または分割単位用量であってよい。
添付文書は、適応症、使用法、投与量、投与、このような治療薬の使用に関する禁忌および／または警告についての情報を含む治療薬の商業用パッケージに習慣的に含められる説明書を意味する。
キットはまた、無菌注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容可能な緩衝液を含む第２の容器を含む。キットはまた、商業上およびユーザーの点から見て望ましい他の材料を含んでもよく、これらは、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、シリンジを含む。
ＶＩＩＩ．その他の用途
臨床診断または処置または研究の場合、抗体は、タウまたはそのフラグメントの検出に使用できる。例えば、抗体を使用して、生物試料がタウ沈着物を含むという指標として生物試料中のタウの存在を検出することができる。抗体の生物試料への結合は、抗体のコントロール試料への結合と比較できる。コントロール試料および生物試料は、同じ組織起源の細胞を含み得る。コントロール試料および生物試料は、同じ個体または異なる個体から、同じ時期または異なる時期に得ることができる。必要に応じ、複数の生物試料および複数のコントロール試料が複数の時期に評価され、試料間の差異とは関係のないランダムな変動に対し保護される。その後、生物試料（単一または複数）とコントロール試料（単一または複数）との間の直接比較が行われ、生物試料（単一または複数）に対する抗体結合（すなわち、タウの存在）がコントロール試料（単一または複数）に対する抗体結合と比べて、増加、減少、または同じであるかどうかが判定される。抗体の、コントロール試料（単一または複数）に対する結合と比べて、生物試料（単一または複数）に対する結合の増加は、生物試料（単一または複数）中のタウの存在を示す。いくつかの事例では、抗体結合の増加は統計的に有意である。場合により、生物試料に対する抗体結合は、コントロール試料に対する抗体結合よりも、少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍である。
さらに、抗体を使用して、生物試料中のタウの存在を検出し、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）と診断された患者の処置に使用されている治療薬の効力を監視および評価することができる。アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）と診断された患者由来の生物試料を評価して、その治療薬による治療を開始する前に、その試料に対する抗体の結合のベースライン（すなわち、試料中のタウの存在に対するベースライン）が確定される。いくつかの事例では、患者由来の複数の生物試料が複数の時期に評価されて、処置には無関係のランダムな変動のベースラインおよび基準の両方が確定される。その後、治療薬が投与計画により投与される。投与計画は、一定の期間にわたり薬剤の複数の投与を含んでもよい。場合により、抗体の結合（すなわち、タウの存在）は、複数の時期に複数の生物試料で評価され、ランダムな変動の基準を確定し、免疫療法に応答する傾向を示す。生物試料に対する抗体結合の種々の比較評価がその後行われる。２つのみの評価を行う場合には、２つの評価間で直接評価がなされて、抗体結合（すなわち、タウの存在）が、２つの評価間で増加、減少、または同じで維持されるかどうかが決定される。３回以上の測定がなされる場合は、測定値は、治療薬による処置前に開始される経時変化としておよび治療過程を介して進行する経時変化として分析できる。患者において、生物試料に対する抗体結合（すなわち、タウの存在）が低減した場合、患者のアルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）の処置に治療薬が効果的であると結論できる。抗体結合の低減は統計的に有意である。場合により、結合は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％減少する。抗対結合の評価は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）の徴候および症状の評価と併せて行うことができる。
抗体は、タウまたはそのフラグメント検出研究用の研究試薬としても使用できる。このような用途では、抗体は、蛍光分子、スピン標識分子、酵素、放射性同位元素で標識でき、検出アッセイの実施に必要な全ての試薬と共に、キットの形で提供できる。また、抗体を用いて、例えば、親和性クロマトグラフィーにより、タウ、またはタウの結合相手を精製することができる。
上記または下記で引用した全ての特許申請、ウェブサイト、その他の刊行物、受入番号などは、あたかも個別の項目が具体的に、個別に参照により組み込まれることが示される場合と同じ程度に、参照によりその全体が、本出願において組み込まれる。配列の異なるバージョンが異なる時間の受入番号と関連する場合は、本出願の有効な出願日の受入番号に関連するバージョンを意味している。有効な出願日は、実際の出願日または該当する場合は、受入番号に関する優先権出願の出願日より早い日付を意味する同様に、刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時間に発表された場合には、別段の指示がない限り、出願の有効出願日で、最近発表されたバージョンを意味する。本発明の任意の特徴、工程、要素、実施形態、または態様は、特に別義が示されない限り、任意の他のものと組み合わせて使用できる。本発明は、明確さおよび理解の目的のために例示および実施例によっていくらか詳細に説明してきたが、特定の変更および修正が、添付の特許請求の範囲内で実施され得ることは明らかであろう。
実施例
実施例１．タウモノクローナル抗体の特定
タウに対するモノクローナル抗体を以下のように生成した。Ｐ３０１Ｓ変異を含む組換えＮ末端Ｈｉｓタグ付き３８３ａ．ａ．ヒトタウ（４Ｒ０Ｎ）［免疫原Ａ］またはＰ３０１Ｓ変異を含み、Ｎ末端Ｈｉｓタグを欠く組換え３８３ａ．ａ．ヒトタウ（４Ｒ０Ｎ）［免疫原Ｂ］を用いて、免疫化を実施した。免疫原は、ＲＩＢＩアジュバント中に乳化した。
５週齢雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを２５μｇの免疫原Ａで０日目に腹腔内免疫し、また、１０μｇの免疫原Ａで各７、１４、２１、２７、３４、４８、５５、および６２日目に腹腔内免役した。マウスを７６および９０日目に１０μｇの免疫原Ｂで免役した。４３および９８日目に、マウスを採血し、免疫原Ａに対する力価を測定した；１０１日目に最高力価の動物に５０μｇの免疫原Ｂの終末免疫で追加免疫した。この追加免疫は、１／２を腹腔内送達し、１／２を静脈内に送達した。融合ハイブリドーマをＥＬＩＳＡにより両方の免疫原に対しスクリーニングし、最も高いシグナルを有するものをエピトープマッピングした（実施例２参照）。３Ｄ６は、配列番号３のアミノ酸残基１９９～２１３および配列番号３のアミノ酸残基２６２～２７６（タウの最長ＣＮＳアイソフォームのナンバリングに従い、これは、配列番号１のアミノ酸残基２５７～２７１および配列番号１のアミノ酸残基３２０～３３４に対応する）に対応するペプチドと反応した。
実施例２．抗体３Ｄ６のエピトープマッピング
３８３ａａ ４Ｒ０Ｎヒトタウタンパク質全体にわたる一連の重なり合うビオチン化ペプチドをマウス３Ｄ６抗体のマッピングに使用した。別のペプチドを使用して、タンパク質のＣ末端およびＮ末端の潜在的翻訳後修飾のモデル化を行った。
ビオチン化ペプチドを、ストレプトアビジンコートＥＬＩＳＡプレートの別々のウェルに結合させた。プレートをブロッキングし、マウス３Ｄ６で処理し、続けて、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗マウス抗体と共にインキュベートした。完全な洗浄後、ＯＰＤをプレートに適用し、発色させた。４５０ｎｍでプレートの吸光度を読み取った。一次抗体を含まないウェル由来の吸光度値のバックグラウンド除去を実施し、陽性結合の閾値０．２吸光度単位に設定した。陽性結合を、アミノ酸残基１９９～２１３（配列番号３の）およびアミノ酸残基２６２～２７６（配列番号３の）に架かるペプチドについて検出した。完全長４Ｒ２Ｎヒトタウタンパク質（４４１アミノ酸）のナンバリングを用いて、これらのペプチドは、アミノ酸残基２５７～２７１（配列番号１の）および３２０～３３４（配列番号１の）に対応する。（図１）
実施例３．ヒト化３Ｄ６の設計
ヒト化のための出発点またはドナー抗体は、マウス抗体３Ｄ６であった。成熟ｍ３Ｄ６の重鎖可変アミノ酸配列は、配列番号７として提供されている。成熟ｍ３Ｄ６の軽鎖可変アミノ酸配列は、配列番号１１として提供されている。重鎖カバット／コチアの組み合わせＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列は、配列番号８～１０としてそれぞれ提供されている。軽鎖カバットＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列は、配列番号１２～１４としてそれぞれ提供されている。カバットナンバリングが全体を通して使用される。
３Ｄ６抗体の可変カッパ（Ｖκ）は、ヒトカバットサブグループ２に対応するマウスカバットサブグループ２に属し、可変重質（Ｖｈ）は、ヒトカバットサブグループ１に対応するマウスカバットサブグループ２ｃに属する［Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２］。１６個の残基のコチアＣＤＲ－Ｌ１はＶκの正準クラス４に属し、７個の残基のコチアＣＤＲ－Ｌ２はクラス１に属し、９個の残基のコチアＣＤＲ－Ｌ３はクラス１に属する［Ｍａｒｔｉｎ Ａ．Ｃ，ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ Ｊ．Ｍ．（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００－１５．［Ｍａｒｔｉｎ ＆ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，１９９６］。１０個残基のコチアＣＤＲ－Ｈ１はクラス１に属し、１７個の残基のコチアＣＤＲ－Ｈ２はクラス２に属する［Ｍａｒｔｉｎ ＆ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，１９９６］。ＣＤＲ－Ｈ３は、正準クラスを有さない。３Ｄ６の抗体の大まかな構造モデルを与える構造を見つけるために、ＰＤＢデータベースのタンパク質配列に対し検索した［Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ Ｎ，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ２３３－７］。３Ｄ６のＦｖモデルを構築するために、１．４Åの解像度を有するマウス抗ピログルタミン酸Ａベータ抗体Ｆａｂ ｃ番号２４（ｐｄｂコード５ＭＹＸ）［Ｐｉｅｃｈｏｔｔａ ，Ａ． ｅｔ ａｌ．， ２０１７，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２９２: １２７１３－１２７２４］の構造を使用した。これは、３Ｄ６のループと同じ正準構造を保持していた。
３Ｄ６ ＶＨのフレームワークは、Ｗｅｄｅｍａｙｅｒ, Ｇ. Ｊ., ｅｔ ａｌ.（１９９７；Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６： １６６５－１６６９）により設計されたヒト化４８Ｇ７ Ｆａｂ ＰＤＢ：２ＲＣＳの対応する領域と高度の配列類似性を共有する。３Ｄ６および４８Ｇ７ Ｆａｂの可変ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２ループについて同一の長さを共有する。同様に、３Ｄ６ ＶＬのフレームワークは、Ｄａｆｆｅｒｎｅｒ, Ａ． Ｊ., ｅｔ ａｌ.（２０１７;. Ｄｉｒｅｃｔ Ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ）によりクローニングされたヒト抗体ＡＲＸ７１３３５ ＶＬの対応する領域と高度の配列類似性を共有する。３Ｄ６およびＡＲＸ７１３３５抗体の可変軽鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループについて同一の長さを共有する。したがって４８Ｇ７ ＶＨ（２ＲＣＳ－ＶＨ）およびＡＲＸ７１３３５ ＶＬのフレームワーク領域を、３Ｄ６のＣＤＲのための受容体配列として選択した。ＶＨおよびＶＬの各ヒトフレームワーク上にグラフト化された３Ｄ６ ＣＤＲのモデルを構築し、さらなる逆突然変異のガイダンスとして使用した。
抗体ヒト化プロセスから生じた重鎖および軽鎖バリアント配列を、ＩＭＧＴ Ｄｏｍａｉｎ ＧａｐＡｌｉｇｎツールを用いて、ヒト生殖細胞系列配列にさらに整列させて、ＷＨＯ ＩＮＮ 委員会ガイドラインに概要が示されているように、重鎖および軽鎖のヒト化度を評価した。（ＷＨＯ－ＩＮＮ：生物学的および生物工学的物質のための国際一般名称（ＩＮＮ）（概説）（インターネット）２０１４。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆから入手可能）可能であれば、残基を、対応するヒト生殖細胞系列配列に対応するように変更し、ヒト化度を高め、かつ潜在的免疫原性を低下させた。ヒト化ＶＬｖｂ２およびＶＬｖｂ３バリアントでは、配列をヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）により類似させるために、変異を導入した。ヒト化ＶＨｖｂ２、ＶＨｖｂ３、ＶＨｖｂ４、ＶＨｖｂ５、ＶＨｖｂ６、およびＶＨｖｂ６バリアントでは、配列をヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）により類似させるために、変異を導入した。
ｈｕ３Ｄ６－ＶＨおよびｈｕ３Ｄ６－ＶＬの型を、抗原結合、熱安定性、および免疫原性へのそれらの寄与について、ならびにグリコシル化、凝集、Ｎ末端異種性、熱安定性、表面露出電荷パッチ（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｃｈａｒｇｅｄ ｐａｔｃｈｅｓ）、表面露出電荷パッチ、脱アミノ化、およびプロテイナーゼ感受性の最適化について様々なフレームワーク残基の評価を可能にするように設計した。変異について検討された位置としては、
－ 正準ＣＤＲ立体構造を定義する位置（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ Ｓ（ｅｄｓ）．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ ，Ｇｅｒｍａｎｙ： Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＡＧ．の中の、Ｍａｒｔｉｎ ，Ａ．Ｃ．Ｒ．（２０１０） Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｓｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ．で要約される）、
－ バーニアゾーン内にある位置（Ｆｏｏｔｅ Ｊ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ Ｇ．（１９９２） Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｌｏｏｐｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２２４（２）：４８７－９９．）、
－ ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在する位置（Ｓｈｅｐｈｅｒｄ Ｐ ａｎｄ Ｄｅａｎ Ｃ（ｅｄｓ）．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｏｘｆｏｒｄ ，ＵＫ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．の中の、Ｌｅｇｅｒ ＯＪＰ ａｎｄ Ｓａｌｄａｎｈａ Ｊ．（２０００） Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｉｍｍｕｎｅ ｒｏｄｅｎｔ ｓｐｌｅｅｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＤＲ ｇｒａｆｔｉｎｇ．で要約される）、
－ グリコシル化もしくはピログルタミン酸化などの、翻訳後修飾を受け易い位置、
－ ＶＨおよびＶＬフレームワーク上にグラフト化された３Ｄ６ ＣＤＲのモデルに従い、ＣＤＲと衝突すると予測される残基により占められる位置、または
－ 親マウス３Ｄ６残基もしくはいくつかの他の残基のどちらかがヒト抗体レパートリー内ではるかに多く見られる、シーケンシングされたヒト抗体の中で希少な残基により占められる位置、
が挙げられる。
マウス３Ｄ６および様々なヒト化抗体の配列比較を、軽鎖可変領域（表４および図３）および重鎖可変領域（表３および図２）について示す。
７個のヒト化重鎖可変領域バリアントおよび３個のヒト化軽鎖可変領域バリアントを、異なる置換順列ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、またはｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（それぞれ配列番号７６～８０および９０～９１）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２、またはｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３（それぞれ配列番号８３～８５）（表３および４）を含んで構築した。選択ヒトフレームワークに基づく逆突然変異およびその他の変異を有する、代表的ヒト化ＶｋおよびＶｈの設計をそれぞれ、表３および４に示す。表３および４の太字の領域は、カバット／コチアの組み合わせにより定義されるＣＤＲを示している。配列番号：７６～８０および配列番号：９０～９１は、表５に示すように、逆突然変異およびその他の変異を含む。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７中の位置でのアミノ酸を、表６に示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３中の位置でのアミノ酸を、表７に示す。
Figure 2022524588000004
Figure 2022524588000005
Figure 2022524588000006
Figure 2022524588000007
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Figure 2022524588000011
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Figure 2022524588000015

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Figure 2022524588000017
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マウスとヒト受容体配列の間で、正準残基、バーニア残基、または界面残基が異なる位置は、置換の候補である。正準／ＣＤＲ相互作用残基の例としては、表３中のカバット残基Ｈ５４およびＨ９４が挙げられる。バーニア残基の例としては、表３中のカバット残基Ｈ２８、Ｈ６７、Ｈ９３、およびＨ９４が挙げられる。界面／パッキング（ＶＨ＋ＶＬ）残基の例としては、表３中のカバット残基Ｈ９１およびＨ９３が挙げられる。
重鎖可変領域中の表３に示す位置の置換候補としての選択の原理は、以下の通りである。
重鎖可変領域
ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１
－ 位置Ｈ９１（Ｙ９１Ｆ）、Ｈ９３（Ａ９３Ｓ）、およびＨ９４（Ｓ９４Ｔ）に逆突然変異を有する４８Ｇ７－ＶＨ（ＲＣＳ－ＶＨ）のフレームワーク上にグラフト化された３Ｄ６－ＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３ループからなる。
ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２
－ コチア正準クラスを定義するのに重要である位置、バーニアゾーンの一部である位置、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在する位置、または構造安定性に寄与する位置の全てのフレームワーク置換を復元する。３Ｄ６－ＶＨ＿ｖｂ２は、逆突然変異または置換Ｑ１Ｅ、Ｑ５Ｖ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ２０Ｉ、Ｔ２３Ｋ、Ｋ３８Ｒ、Ｅ４２Ｇ、Ｑ４３Ｋ、Ｋ６６Ｒ、Ｓ７５Ｔ、Ｎ７６Ｄ、Ｑ８１Ｅ、Ｙ９１Ｆ、Ａ９３Ｓ、Ｓ９４Ｔ、Ｔ１０８Ｌ、およびＬ１０９Ｖを組み込んで、これらの位置の、抗原結合親和性および免疫原性への寄与の評価を可能にする。
ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７
は、さらなる置換からなり、かつ抗体安定性を増大させるならびに／またはグリコシル化、凝集、Ｎ末端異種性、熱安定性、表面露出電荷パッチ、表面露出電荷パッチ、脱アミノ化およびプロテイナーゼ感受性の最適化を増す。
Ｑ１Ｅは、ピログルタミン酸形成能を軽減するために安定性を増強する変異である（Ｌｉｕ、上掲書）。
Ｑ５Ｖは、頻度に基づく変異（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ－ｂａｓｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ）および生殖細胞系列整列変異（ｇｅｒｍ ｌｉｎｅ－ａｌｉｇｎｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎ）である。Ｖａｌは、この位置でヒト配列中に最も多く存在する。Ｖａｌはこの位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｌ１１Ｖは、生殖細胞系列整列変異である。Ｖａｌは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｓ１７Ｔは、生殖細胞系列整列変異である。Ｔｈｒは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｌ２０Ｉは、生殖細胞系列整列変異である。Ｉｌｅは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｔ２３Ｋは、頻度に基づくおよび生殖細胞系列整列変異である。Ｌｙｓは、この位置で最も多く存在する。Ｌｙｓは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｎ２８Ｔ：これは、ＴｈｒへのＣＤＲ－Ｈ１残基置換である。
Ｋ３８Ｒは、頻度に基づく逆突然変異である。Ａｒｇは、この位置で最も多く存在する。この位置でのＡｒｇは、１つのＨ結合に加えＧｌｕ４６との２つのＨ結合、重鎖中の各々Ａｓｐ８６およびＴｙｒ９０とのＨ結合を生成すると予測され、それゆえＡｒｇは、この位置でのＬｙｓよりも安定性を増強する可能性がある。
Ｅ４２Ｇは、頻度に基づくおよび生殖細胞系列整列変異である。Ｇｌｙは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。Ｇｌｙは、この位置で最も多く存在する。Ｇｌｙ置換は、安定性に影響を及ぼさないと予測される。
Ｑ４３Ｋ：この位置でのＬｙｓ側鎖は、主鎖に加えＧ４２側鎖とＨ結合を生成しＧｌｎ３９およびＡｒｇ４０とＨ結合を生成すると予測され、それによりＬｙｓ置換は、この位置でのＱよりも安定性を増強する可能性がある。
Ｎ５４ＤおよびＤ５６Ｅは、ＣＤＲ残基の置換であり、相同性モデルによる非抗原接触位置であると予測される。Ｎ５４ＤおよびＤ５６Ｅ置換は、抗体構造を安定化すると予測される。
Ｖ５８Ｉは、ＣＤＲ－Ｈ２残基の置換である。生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）は、この位置でＩｌｅを有する。この残基は、抗原と接触しないと予測される。
Ｋ６６Ｒ：この位置でのＡｒｇは、Ａｓｐ８６とＨ結合および塩架橋を生成することに加え、Ｓｅｒ８２ａおよびＴｈｒ８３とＨ結合を生成すると予測される。
Ａ６７Ｖは、バーニアゾーン残基の置換である。生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）は、この位置でＶａｌを有する。
Ｓ７５Ｔ：この位置でのＳｅｒは、Ａｓｐ７２およびＴｙｒ７６とＨ結合を生成すると予測される。この位置でのＴｈｒはまた、これらの接触を生成すると予測されるが、表面露出残基であるＴｈｒは、抗体安定性を増強する可能性がある。
Ｎ７６Ｄ：Ａｓｐは、生殖細胞系列整列変異である。Ａｓｐは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｌ８０Ｍ：Ｍｅｔは、生殖細胞系列整列変異である。Ｍｅｔは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
Ｑ８１Ｅ：Ｇｌｕは、Ｋ１９とＨ結合＋塩架橋を生成すると予測され、このためこの位置でのＧｌｕは、抗体安定性を増強させる。
熱安定性を増強し、ヒト化度を上昇させるＴ８３Ｒ。Ａｒｇは、生殖細胞系列整列変異である。Ａｒｇは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。Ａｒｇは、この位置で最も多く存在する。
Ｆ９１Ｙは、界面残基の変異であり、頻度に基づく逆変異である。Ｔｙｒは、典型的にはこの位置にあり、抗体安定性を増強する可能性がある。
Ａ９３Ｓは、バーニアゾーンおよび界面ゾーン残基の逆突然変異である。
Ｓ９４Ｔは、コチアが定義した正準構造残基およびバーニア残基の逆突然変異である。
Ｔ１０８Ｌ：Ｌｅｕは、生殖細胞系列整列変異である。Ｌｅｕは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＭＧＴ番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。この位置でのＬｅｕは、抗体の免疫原性を低下させ、抗体安定性への影響を有しないと予測される。
Ｌ１０９Ｖは、頻度に基づく変異である。Ｖａｌは、この位置で最も多く存在する。
軽鎖可変領域中の表４に示す位置の置換候補としての選択の原理は、以下の通りである。
カッパ軽鎖可変領域
ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１
－ ＡＲＸ７１３３５ＶＬのフレームワーク上にグラフト化された３Ｄ６－ＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３ループからなる。
ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３
－ コチア正準クラスを定義するのに重要である位置、バーニアゾーンの一部である位置、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在する位置の全てのフレームワーク置換を復元する。Ｈｕ３Ｄ６－ＶＬｖｂ２およびｈｕ３Ｄ６－ＶＬｖｂ３はまた、構造安定性に寄与する置換を含み、ｈｕ３Ｄ６－ＶＬ－ｖｂ２は、逆突然変異Ｔ７Ｓ、Ｉ１５Ｌ、Ｌ８３Ｖ、Ｈ８６ＹおよびＬ１０６Ｉを組み込んで、これらの位置の、抗原結合親和性および免疫原性への寄与の評価を可能にする。Ｈｕ３Ｄ６－ＶＬ－ｖｂ３の全ての置換は、Ｑ１７Ｅ、Ｋ２４Ｒ、Ｌ３７Ｑ、Ｋ４５Ｒ、およびＬ１０６Ｉでの追加的変化と共にｖｂ２について述べられる。
Ｔ７Ｓは、生殖細胞系列整列変異である。Ｓｅｒは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｔ１０Ｓは、頻度に基づくおよび生殖細胞系列整列変異である。Ｓｅｒは、この位置で多く存在する。Ｓｅｒは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｉ１５Ｌは、生殖細胞系列整列変異である。Ｌｅｕは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｑ１７Ｅ：この位置でのＧｌｕは、両者とも軽鎖残基である、Ｔ１４とのＨ結合およびＬｙｓ１０７との塩架橋を生成すると予測され、抗体安定性を増強すると予測される。
Ｋ２４Ｒは、ＣＤＲ残基の変異である。ＬｙｓおよびＡｒｇは両者とも、軽鎖中のＡｓｐ７０とＨ結合および塩架橋を生成すると予測される。Ａｒｇは、立体構造においてより良好にフィットすると予測される。Ａｒｇはまた、生殖細胞系列整列変異である。Ａｒｇは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｌ３７Ｑ：これは、深く埋め込まれた残基であると予測され、Ｌｅｕは、周囲の残基と相互作用すると予測されないが、Ｇｌｎは、軽鎖中のＱ３８およびＡｓｐ８２とＨ結合を生成すると予測される。Ｇｌｎはまた、生殖細胞系列整列変異である。Ｇｌｎは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｋ４５Ｒ：Ｌｙｓは、Ｓ５６およびＧｌｙ５７とＨ結合を生成すると予測され；Ｄ５５との塩架橋、Ａｒｇ４６とのＨ結合、およびＳ５６との二重Ｈ結合を形成すると予測されるため、Ａｒｇの、隣接残基との予測される相互作用は、はるかに広範囲である。Ａｒｇはまた、生殖細胞系列整列変異である。Ａｒｇは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｌ８３Ｖ：これは、表面が露出されていると予測される残基の頻度に基づく変異である。Ｖａｌはまた、生殖細胞系列整列変異である。Ｖａｌは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｈ８６Ｙ：マウス３Ｄ６ ＶＬは、この位置でＴｙｒを有する。Ｔｙｒはまた、この位置で最も多い残基である。
Ａ１００Ｑ：Ａｌａは、この位置では希少である。Ａｌａは、表面露出残基であると予測され、周辺残基と相互作用すると予測されない。Ｇｌｎは、この位置で最も多く、生殖細胞系列整列変異でもある。Ｇｌｎは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。Ｇｌｎは、Ｓｅｒ７とＨ結合を生成し鎖内を安定化すると予測される。
Ｌ１０６Ｉは、頻度に基づくおよび生殖細胞系列整列変異である。Ｉｌｅは、この位置で最も多く存在する。Ｉｌｅは、この位置でヒト生殖細胞系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
これらのヒトフレームワークに基づく設計を以下に示す：
重鎖可変領域
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１（配列番号７６）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２（配列番号７７）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３（配列番号７８）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＩＹＤＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４（配列番号７９）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＩＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５（配列番号８０）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＥＴＩＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６（配列番号９０）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＥＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７（配列番号９１）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＥＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
カッパ軽鎖可変領域
ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１（配列番号８３）
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＨＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２（配列番号８４）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＳＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
＞ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３（配列番号８５）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＳＶＴＬＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ヒト化配列は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ部位特異的変異誘発を用いて複数の変異、欠失、および挿入を導入可能な２段ＰＣＲプロトコルを用いて生成される［Ｗａｎｇ，Ｗ．ａｎｄ Ｍａｌｃｏｌｍ，Ｂ．Ａ．（１９９９）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２６：６８０－６８２］。
実施例４．マウスモノクローナル抗体はＥＬＩＳＡアッセイでタウに結合する
方法：間接ＥＬＩＳＡ：９６ウェルポリスチレンプレートを、１ｘＰＢＳ中に懸濁させた捕捉抗体の抗－６ｘＨｉｓ（図４Ａ）またはポリクローナル抗タウ（Ｄａｋｏ＃Ａ２００２４、図４Ｂ）で、室温で２時間または４℃で１６時間コートした。コーティング液を除去し、プレートを１ｘＰＢＳ中の１％ＢＳＡで１時間ブロッキングし、続けて、ヒト組換えタウと共に、タンパク質のＮ末端にポリヒスチジンタグを付加した場合（図５Ａ）と付加しない場合（図４Ｂ）について、インキュベートした。洗浄後、プレートを示した抗体と共にインキュベートし、ＨＲＰ標識ヤギ抗マウス二次抗体と共にインキュベートした。プレートをＴＭＢで発色させ、Ａ４５０をプレートリーダーで測定した。
サンドウィッチＥＬＩＳＡ：９６ウェルポリスチレンプレートを、１ｘＰＢＳ中の抗マウス抗体を用いて、室温で２時間または４℃で１６時間コートした。コーティング液を除去し、プレートを１ｘＰＢＳ中の１％ＢＳＡで１時間ブロッキングした。次に、プレートを示した同じ濃度の抗体と共にインキュベートし、１ｘＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで希釈した。プレートを、ヒトタウ、ポリクローナルウサギ抗タウ（Ｄａｋｏ＃Ａ００２４）、およびＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギ抗体で連続的に処理した。全て、ＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで希釈し、各ステップの間で洗浄を行った。ストレプトアビジン－ＨＲＰを加え、プレートをＴＭＢで発色させ、Ａ４５０をプレートリーダーで測定した。図４Ｃを参照されたい。
結果：いくつかの異なるＥＬＩＳＡフォーマットにより、一連のハイブリドーマ生成抗体のタウへの結合に関し、アッセイした。タウの検出は、間接フォーマットを用い、タウのＮ末端に融合したポリヒスチジンタグにより固定されたタウタンパク質を使って確証された（図４Ａ）。未変性の非タグタンパク質も同様に確証された（図４Ｂ）。種々の抗体の養液親和性を評価するために、検査したハイブリドーマ抗体を捕捉試薬として使用するサンドイッチＥＬＩＳＡフォーマットを使用した（図４Ｃ）。
実施例５．タウに対するマウスモノクローナル抗体の親和性
方法：Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使って、ＳＰＲ分析を実施し、マウス抗体の組換えヒトタウに対する結合動力学を測定した。センサー表面を調製するために、抗マウス抗体（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、アミンカップリングを介してセンサーチップＣＭ５上に固定し、５０ＲＵの最大結合を確保するレベルで抗体を捕捉した。１０～０．１４ｎＭの範囲の種々の濃度の組換えタウを、１８０秒の結合および９００秒の解離のために、ランニングバッファー（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中で、５０μＬ／分の流速で捕捉リガンド上を通過させた。データを、捕捉部分からのリガンドの解離を捕捉するために、抗体リガンド不含の無関係のセンサー、および０ｎＭの分析物濃度の両方に対する二重基準とした。その後、データを、グローバル１：１フィットを用いて分析した。
結果：複数のマウス抗体を一連のＥＬＩＳＡアッセイの成績に基づいて選択し、それらの結合親和性をＳＰＲにより評価した。抗体を同時に数セット検査し、それらの結合と解離速度を比較して組換えヒトタウに対する最高結合物質を選択した。最大結合親和性は、抗体クローン３Ｄ６で観察された。結合親和性を図５に示す。
実施例６．マウスモノクローナル抗体はヒトタウの不死化神経細胞表面に対する結合を妨害する
方法：Ｂ１０３神経芽腫細胞へのタウの結合の抗タウモノクローナル抗体による阻害
１．Ｂ１０３細胞を５ｘ１０５細胞／ｍＬの濃度で再懸濁する。ＭＳＤ高結合プレートにウェル当たり５０μＬの細胞懸濁液を蒔く。これにより、２５ｋ細胞／ウェルが得られる。プレートを覆い、３７℃、５％ＣＯ２下で２時間細胞を付着させる。
２．細胞付着後、プレートを反転することにより、ウェルからＰＢＳを除去し、静かにタッピングして過剰緩衝液を除去する。５０μｌのＰＢＳ中の３％ＭＳＤブロッカーＡ緩衝液または他の好適するブロッキング緩衝液を各ウェルに加え、震盪せずに室温でプレートを１時間インキュベートした。
３．プレートブロッキングステップ中に、タウおよび抗タウ抗体を以下のように共インキュベートする：
ａ．２ｍｇ／ｍＬの抗タウ抗体から出発し、ＰＢＳで１：２の系列希釈によりさらなる７種の希釈を行う。
ｂ．タウをＰＢＳ中２０ｎＭに希釈する。タウ濃度はそれぞれのウェルで一定になる。
ｃ．１０ｎＭの最終タウ濃度となるように、また１ｍｇ／ｍＬの開始抗タウ濃度として、タウおよび抗タウ抗体を１：１で混合する。
ｄ．混合物を室温で約１時間震盪（６００ｒｐｍ）しながらインキュベートする。
４．ステップ２のプレートブロッキング後、プレートを反転してウェルからブロッキング緩衝液を除去し、静かにタッピング後、マルチチャンネルピペットを用いてプレートをＰＢＳで２回洗浄した。過剰緩衝液を確実に完全に除去する。タウ：抗タウ複合体を加える前に、蒔いた細胞を４℃に冷却する。
５．ステップ３の５０μＬの冷却した複合体を播種した細胞に加え、氷上で３０分間インキュベートする。
６．以前記載したように、プレートを冷却ＰＢＳで２回洗浄する。
７．細胞表面結合タウの検出のために、ウェル当たり５０μＬの１６Ｂ５．ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧを加える。氷上で３０分間インキュベートする。
８．以前記載したように、プレートを再度、冷却ＰＢＳで２回洗浄する。
９．ウェル当たり１５０μＬの１Ｘ界面活性剤不含リードバッファＴ（Ｈ２Ｏで希釈）を加え、ＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ（商標）６００測定器で直ちに読み取る。リードバッファを加えるときに、気泡の混入を避ける。
１０．ＭＳＤシグナル対タウの濃度を報告する。
検査した抗体は、抗タウ抗体３Ｄ６、１６Ｇ７、３Ｈ９、４Ｃ５、および５Ｇ８、ならびにアイソタイプコントロールであった。
結果：検査抗体の増加と共に生じるスルホタグ抗タウシグナルの減少は、タウの神経細胞への結合の機能的ブロッキングを示す。アイソタイプコントロール、１６Ｇ７、または３Ｈ９では、ブロッキングは観察されなかった。機能的ブロッキング活性の量の増加が４Ｃ５、５Ｇ８、および３Ｄ６で観察された。３Ｄ６は、検査した抗体の中で最も強いブロッキング活性を示した。図６を参照されたい。
実施例７．脱凝集活性
方法：組換えタウ－Ｎ末端６ｘＨｉｓタグを有する精製組換えタウを、１ｘＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の等モル量の低分子量ヘパリンと混合し、旋回装置を用いて３７℃で９６時間インキュベートした。チオフラビンＴに対する結合により、試料の凝集を確認した。
抗体とインキュベーション－凝集した組換えタウと共に抗体を、回転または旋回装置を用いないで３７℃で９６時間インキュベートした。実験の終わりに、試料を２５ｍＭのチオフラビンＴと共にインキュベートし、放出蛍光（４５０／４８２ ｅｘ／ｅｍ）を測定することにより、凝集を測定した。シグナルから、緩衝液試料までバックグラウンドを差し引いた。
結果：図７に示すように、３Ｄ６は、完全なタウ原線維を選択的に分解する。種々のモル比の３Ｄ６（三角形）、アイソタイプコントロール（円）および１６Ｇ７（四角）をアミロイド含有タウ原線維と共に９６時間インキュベートした。この期間の最後に、チオフラビンＴに対する結合により凝集の程度が評価された。３Ｄ６は、アイソタイプコントロール抗体ならびに異なる領域のタウに結合する抗タウ抗体の１６Ｇ７と比べて、試料中に存在するチオフラビンＴシグナルを選択的に低減させる。
実施例８．３Ｄ６および５Ｇ８がヒト疾患組織由来のタウを免疫捕獲する。
方法：高塩可溶性タンパク質画分を１ｍｇ／ｍｌに調製した。それぞれの免疫沈殿に対し、２００μｇの試料を使用した。１０μｇの示した抗体（アイソタイプコントロール、３Ｄ６、または抗タウ抗体５Ｇ８）を高塩試料調製物に加え、２時間インキュベートした。その後、プロテインＧ磁気ビーズを混合物に加え、さらに１時間インキュベートして、抗体／抗原複合体を捕捉した。試料を１ｘＰＢＳで完全に洗浄し、ビーズを還元／変性試料緩衝液中で煮沸し、捕捉したタンパク質を放出させた。得られた試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離し、ポリクローナル抗タウ抗体（Ｄａｋｏ、＃Ａ００２４）を用いて、ウェスタンブロッティングを実施した。
結果：図８に示すように、３Ｄ６および５Ｇ８は、アルツハイマー疾患組織由来タウと免疫沈降した。高塩可溶性画分を示した抗体で免疫沈降し、３Ｄ６とタウ抗体Ａの結合部位から分離したタウ分子の領域に対するポリクローナル抗タウ抗体で検出した。３Ｄ６は、この画分からタウを確実に捕捉した。インプット（高塩可溶性試料）を右側に示す。
実施例９．３Ｄ６の免疫組織化学による免疫反応性
前頭側頭皮質を、死後評価時に確証された、神経変性疾患のない患者またはアルツハイマー病の患者から得た。免疫組織化学を、スライドにマウントし、軽くアセトン固定した１０ｕｍの凍結切片上で行った。Ｌｅｉｃａ ＢＯＮＤ Ｒｘ自動免疫染色装置とＬｅｉｃａ消耗品を用いて全染色ステップを実施した。マウスまたはヒト型の３Ｄ６を組織切片とともにインキュベートし、続けて、ＨＲＰポリマーにコンジュゲートした、種に適切な二次抗体を加えた。ヒト化抗体をヒト組織に対して使用した場合の内在性免疫グロブリンの非特異的結合を防ぐために、組織のインキュベーションの前に、抗体を、ビオチンコンジュゲート抗ヒト一価Ｆａｂフラグメントで非共有結合によりインビトロ標識した。一次抗体－ビオチンＦａｂフラグメント複合体で標識した組織を、アビジン－ビオチン増幅システム（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を用いてさらに増殖した。染色を、ＤＡＢ色素原を用いて可視化し、これにより褐色の沈着物が生成した。ネガティブコントロールは、ＩｇＧアイソタイプコントロール抗体を用いて、隣接切片上で全免疫組織化学的手順を実行することにより作成した。
検査した抗体は、マウスＣＤ６、キメラ３Ｄ６（これは、ヒト定常領域を有するマウス抗体由来のＶＨとＶＬ、重鎖配列番号７２および軽鎖配列番号７３を含んでいた）、およびヒト化バリアントｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ５／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２であった。
マウス、キメラ、およびヒト化型の３ｄ６に実施した染色を、染色強度および輝度、ならびに免疫反応性の局在化を定性的に比較し、評価した。染色輝度は、マウス型の抗体と比較して、３Ｄ６のキメラおよびヒト化型で類似であり、類似の局在化パターンを示した。神経原線維濃縮体、原線維、糸屑状構造物中、および変性した軸索中でタウを検出した。顕著な細胞体染色も検出された。
実施例１０．ヒト化バリアントのタウに対する親和性
方法；間接ＥＬＩＳＡ：９６ウェルポリスチレンプレートを、１ｘＰＢＳ中に懸濁したヒト組換えタウを用いて、室温で２時間または４℃で１６時間コートする。コーティング液を除去し、プレートを１ｘＰＢＳ中の１％ＢＳＡで１時間ブロッキングする。１ｘＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡ中の１μｇ／ｍＬのヒト化バリアント抗体をプレートに加え、１時間の保持に続けて洗浄し、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒト抗体を加える。プレートをＴＭＢで発色させ、Ａ４５０をプレートリーダーで測定する。
サンドイッチＥＬＩＳＡ：９６ウェルポリスチレンプレートを、１ｘＰＢＳ中の抗ヒト抗体を用いて、室温で２時間または４℃で１６時間コートする。コーティング液を除去し、プレートを１ｘＰＢＳ中の１％ＢＳＡで１時間ブロッキングする。種々の濃度のヒト化バリアント抗体を、１ｘＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで希釈してプレートに加え、１時間の保持に続けて洗浄し、１ｘＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで希釈したビオチン化組換えヒトタウを加える。洗浄後、ストレプトアビジン－ＨＲＰを加え、プレートをＴＭＢで発色させ、Ａ４５０をプレートリーダーで測定する。
ＳＰＲ分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて実施して、組換えヒトタウに対するｈ３Ｄ６－ＶＨｖ５－Ｌ２の結合動力学を測定する。センサー表面を調製するために、抗ヒト抗体（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、アミンカップリングを介してセンサーチップＣＭ５上に固定し、ヒト化バリアント抗体を、５０ＲＵの最大結合を確保するレベルで捕捉する。１０～０．１４ｎＭの範囲の種々の濃度の組換えタウを、１８０秒結合および９００秒解離で、ランニングバッファー（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中５０μＬ／分の流速で捕捉リガンド上を通過させる。データを、抗体リガンド不含の無関係のセンサーと、捕捉部分からのリガンドの解離を説明するための０ｎＭの分析物濃度の両方に対し二重に参照する。データをその後、１：１のグローバルフィットを用いて分析する。
実施例１１．ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２軽鎖可変領域の免疫原性
ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２１）を、ｉｅｄｂ．ｏｒｇ Ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ（Ｄｈａｎｄａ ｅｔ ａｌ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． ２０１８ Ｊａｎ；１５３（１）：１１８－１３２）を用いて分析した。表９は、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の脱免疫化のために選択され得るペプチド、すなわち潜在的免疫原性を低減するためにさらなる置換が行われ得るエリアを示す。
Figure 2022524588000019
表９に示された分析の結果に基づき、表１０で太字で示されるアミノ酸残基を標的とする、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２軽鎖可変領域のバリアントを設計した。各バリアントは、表１１に示された通り次のアミノ酸の１つを組み込む。
Figure 2022524588000020
Figure 2022524588000021
Figure 2022524588000022
表１０で強調されたアミノ酸の１つまたは２つで置換を組み込む、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２軽鎖可変領域のさらなるバリアントを、表１２に示す通り設計した。表１２のいくつかのバリアントは、置換Ｌ３７Ｑ（配列番号１１９～１３５および１４５）、または置換Ｌ３７Ｑと置換Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６～１４２）の両方も組み込む。
置換の候補として軽鎖可変領域中の表１２および表１３に示された位置Ｌ３７ＱおよびＧ１００Ｑの選択の原理は、次の通りである。
Ｌ３７Ｑは、配列のヒト化度を上昇させる変異である。Ｇｌｎは、生殖系列整列変異である。Ｇｌｎは、この位置でヒト生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Ｇ１００Ｑは、配列のヒト化度を上昇させる変異である。Ｇｌｎは、生殖系列整列変異である。Ｇｌｎは、この位置でヒト生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０＊０２（配列番号２７）中にある。
Figure 2022524588000023
Figure 2022524588000024
ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２軽鎖可変領域のさらなるバリアントを、表１３に示す通りＬ３７Ｑ（配列番号１４３）を組み込むため、またはＧ１００Ｑ（配列番号１４４）を組み込むために設計した。
Figure 2022524588000025
図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄは、３Ｄ６抗体のヒト化型の軽鎖可変領域の整列比較を示す：ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（配列番号２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ（配列番号１４３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇ（配列番号１０３）、 ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇ（配列番号１１０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇ（配列番号９４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄ（配列番号９３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋ（配列番号１００）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒ（配列番号１０１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔ（配列番号１０２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ（配列番号１２８）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ（配列番号１２９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ（配列番号１３１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１３０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅ（配列番号１４５）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１１９）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１３３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１３２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ（配列番号１２４）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇ（配列番号１２１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔ（配列番号１２３）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ（配列番号１２２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４０）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４１）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３６）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３７）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１４２）、ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３９）、およびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑ（配列番号１３８）。
実施例１２ ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１（重鎖可変領域）の免疫原性
ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１（ｈ３Ｄ６Ｈｕ５としても知られる）（配列番号１８）のさらなる重鎖可変領域バリアントを、表１４に示す通り設計した。
図９Ａおよび９Ｂは、マウス３Ｄ６の重鎖可変領域（配列番号７）および３Ｄ６抗体のヒト化型の重鎖可変領域（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８、およびｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９）とヒト生殖系列重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）およびヒト受容体重鎖可変領域配列２ＲＣＳ ＶＨ ｈＦｒｗｋ（配列番号７５）との整列比較を示す。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１は配列番号７６であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２は配列番号７７であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３は配列番号７８であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４は配列番号７９であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５は配列番号８０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６は配列番号９０であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７は配列番号９１であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１は配列番号１８であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ８１は配列番号１４６であり、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ９は配列番号１４８である。
Figure 2022524588000026
置換の候補として重鎖可変領域中の表１４で示した位置の選択のための原理は、次の通りである。
Ｄ６０Ｅ：潜在的タンパク質分解を減少させるため。Ａｓｐ－Ｐｒｏモチーフは、潜在的なタンパク質分解部位であることが知られる。カバット位置６０～６１のｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１（ｈ３Ｄ６Ｈｕ５）ＶＨにはＡｓｐ－Ｐｒｏモチーフがある。相同性モデルに基づき、位置６０のＧｌｕ置換は、立体構造保存と見なされる。それゆえＤ６０Ｅ置換は、潜在的タンパク質分解を低減するために作製される。
熱安定性を増強するための、かつヒト化度を上昇させるためのＱ８１Ｅ。Ｇｌｕは、水素結合に加えＫ１９との塩架橋を作製すると予測され、このためこの位置でのＧｌｕは、抗体安定性を増強させる。Ｇｌｕは、ヒト生殖系列整列変異である。Ｇｌｕは、この位置でヒト生殖系列遺伝子ＩＭＧＴ＃ ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
免疫原性を低減するためのＬ８２ｃＶ。ＩＥＤＢ（免疫エピトープデータベース）免疫原性分析ツールを用いるヒト化ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１（ｈ３Ｄ６Ｈｕ５）の免疫原性のインシリコ分析は、Ｌ８２ｃを含む潜在的免疫原性ペプチドを予測した。Ｌ８２ｃＶ置換を、免疫原性を低減するために設計する。この位置でのバリン置換は、ループ立体構造を保存する。
免疫原性を低減するため、かつヒト化度を上昇させるためのＬ８０Ｍ。Ｍｅｔは、生殖系列整列変異である。Ｍｅｔは、この位置でヒト生殖系列遺伝子ＩＭＧＴ＃ ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。
熱安定性を増強し、かつヒト化度を上昇させるためのＴ８３Ｒ。Ａｒｇは、生殖系列整列変異である。Ａｒｇは、この位置でヒト生殖系列遺伝子ＩＭＧＴ＃ ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１（配列番号２５）中にある。Ａｒｇは、この位置で最も多く存在する。
実施例１３ヒト化３Ｄ６バリアントの分析
予測された脱免疫化置換を有するヒト化３Ｄ６バアリアントを、標的結合親和性、細胞に基づくアッセイでの活性、熱安定性、発現特性、および置換数を含む複数の特徴について分析した。すべての例で、結果を、親配列ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２と比較して、活性または安定性の任意の損失が記録されるかどうかを決定した。
標的結合分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて実施して、組換えヒト４Ｒ０Ｎタウに対するヒト化３Ｄ６バリアントの結合親和性を比較した。抗ヒトＦｃ抗体を、アミンカップリングを介してセンサーチップＣＭ３上に固定し、ヒト化３Ｄ６バリアントを、同等のレベルに捕捉した。様々な濃度の組換え４Ｒ０Ｎヒトタウ（０．０２ｎＭ～１２．５ｎＭの範囲）を、１８０秒結合／４２０秒解離の１回の周期で、ランニングバッファー（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中５０μＬ／分で捕捉リガンド上を通過させた。データは、抗体不含の無関係なセンサーおよび０ｎＭ分析物濃度の両方に対するブランク値を差し引いた。分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウエアでの１：１のグローバルフィットを利用して実施した。
親和性の決定は、親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２のＫＤに対する各抗体のＫＤの比較により決定された、親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の親和性を保持する複数の脱免疫化バリアントを明らかにした。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２の４倍以内に相当するＫＤを有することが決定された抗体（表１５）としては、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ９、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ５、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ３、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８／Ｌ２－ＤＩＭ４、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ７、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８／Ｌ２－ＤＩＭ７、ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８／Ｌ２－ＤＩＭ８、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ１２、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ２１、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ２２が挙げられる。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４は、親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２を超えるオンレート、オフレート、およびＫｄ数により示される改善された親和性を実証した。
Figure 2022524588000027
加えて、第二の特徴として、熱安定性および力価を、全ての脱免疫化バリアントについて分析した。熱安定性および力価レベルを、親和性測定に基づいてｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２に相当する抗体について比較し、表１６の抗体は、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２のＴｍからの分散を基にした順序で列挙される。
熱安定性値を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を利用して測定した。ＤＳＣ走査は全て、ＶＰ－キャピラリーＤＳＣシステム（Ｍａｌｖｅｒｎ）を利用して実施した。試料を全て、１ｘＰＢＳ中で０．５ｍｇ／ｍＬに調製し、１ｘＰＢＳを参照にした。およそ０．５ｍＬのタンパク質溶液および緩衝液を、試料および参照細胞に導入した。熱量の走査速度を、一定圧力の下、２５℃～１１０℃で６０℃／時の走査速度で実行した。分析を、独自のソフトウエアを用いて実施した。報告値は、Ｆａｂピークの最大熱量が記録される温度である。
力価を、以下のとおり測定した。２９３浮遊細胞での発現の後、抗体を、標準法を利用するプロテインＡクロマトグラフィーを用いて精製した。精製の後、抗体を１ｘＰＢＳ中に交換し、タンパク質濃度を、２８０ｎｍでの吸光度により測定した。力価を、精製タンパク質の最終収量を発現培養物の出発容量で割ることにより計算し、ミリグラム／リットルで報告した。ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４は、親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２より高い熱安定性および力価を示した。熱安定性および一過的発現レベル（力価）は両者とも、医薬品開発の重要な検討事項である。
Figure 2022524588000028
先に列挙された知見の分析に基づき、表１６の７種の抗体の中和活性を、タウ内在化の細胞に基づくモデルにおけるさらなる分析のために選択した。親ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２に関する重鎖および軽鎖での置換を、記録する。
蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）を用いる内在化アッセイを実施して、タウの神経細胞内在化をブロッキングする様々な抗体の能力を評価した。内在化をブロッキングする抗体は、タウの伝播をブロッキングするようである。
可溶性タウ凝集体を、組換え完全長タウと等モル量の低分子量ヘパリンの３７℃で３日間のインキュベーションにより作製した。インキュベーション後に、不溶性タウと可溶性タウを、１０，０００×ｇでの１５分間の遠心分離により分離した。上清をその後、分取用サイズ排除クロマトグラフィーにより分解し、凝集体のピーク（１００ｋＤａを超える）を収集し、濃縮した。内在化を測定するために、可溶性凝集体画分を、エンドリソソーム経路に内在化されると蛍光を発する、ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄスクシンイミジルエステルで標識した。
ｐＨｒｏｄｏ標識された４Ｒ０ＮヒトタウＰ３０１Ｌ可溶性オリゴマー（１．５μｇ／ｍｌ最終濃度）を、細胞培地中で室温にて３０分間、抗タウ抗体（用量力価：８０μｇ／ｍｌ出発濃度、続いて４倍系列希釈）とプレインキュベートした。タウ／抗体混合物をその後、５００，０００細胞／ｍｌ最終濃度のＢ１０３神経芽細胞腫細胞系列に添加し、組織培養インキュベーター（５％ＣＯ２）中で３７℃にて３～４時間インキュベートした。細胞をその後、培地で３回洗浄し、次に培地と１０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の１％ＦＢＳ）で２回洗浄した。細胞を１００μｌ ＦＡＣＳ緩衝液に懸濁し、テキサスレッド平均蛍光強度をＦＡＣＳ ＬＳＲ ＩＩにより測定した。ｐＨｒｏｄｏからのテキサスレッド蛍光は、内在化によるリソソーム内コンパートメントに関連して低ｐＨで活性化される。ＦＡＣＳは内在化による細胞およびｐＨｒｏｄｏのみの蛍光を検出するため、細胞により内在化されたタウだけが、検出される。平均蛍光強度が低いほど、内在化されたタウの量は少なく、検査された抗体のブロッキング活性がより大きいことを示唆する。
ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ２２を除き、検査されたバリアントは全て、同等の濃度でタウ内在化のモデルにおいてより高度の阻害活性を示した（図１１および表１７）。
Figure 2022524588000029
実施例１４３Ｄ６のエピトープマッピングの精密化
最初のペプチドマッピングは、３Ｄ６のためのエピトープが微小管結合リピート領域（ＭＴＢＲ、図１）中に存在することを示した。さらに、ペプチドマッピングは、３Ｄ６がＭＴＢＲ中の複数の部位に結合することを示し、繰り返し存在する不連続のエピトープを示唆した。
エピトープ研究に用いられた最初のペプチドマッピングは、完全な微小管結合リピートを含まない重なり合うペプチドを利用したため、さらなるペプチドマッピングを、個々の完全な微小管リピートで実行した。ＭＴＢＲリピート１～４についてのアミノ酸に対応するビオチン化ペプチドを、ストレプトアビジンをコートしたＥＬＩＳＡプレートに添加し、洗浄し、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中でブロッキングした。様々な量の３Ｄ６（５０μｇ／ｍｌ～１０ｎｇ／ｍｌの範囲）をその後、プレート上でインキュベートした。洗浄した後、ヤギ抗マウスＨＲＰをＥＬＩＳＡプレートに添加し、洗浄し、ＯＰＤを用いて発色させた。吸光度を４９０ｎｍで検出し、結合曲線を、４パラメータロジスティック曲線を用いてフィットさせて、ＥＣ５０値を決定した（表１８）。３Ｄ６は、ＭＴＢＲ１～３に比較的同等に結合し、ＥＣ５０値はそれぞれ７２．５、３５．５および２５．１ｎｇ／ｍｌであった。しかしＭＴＢＲ４への結合は、およそ６０～１７０倍低く、見かけのＥＣ５０は４３０９ｎｇ／ｍｌであった。ＭＴＢＲ１、２、３および４からのＭＴＢＲ４中の繰り返されたエピトープにおける配列変動は、ＭＴＢＲ４への結合がより弱いことを説明する可能性がある。
Figure 2022524588000030
３Ｄ６結合を担う特異的アミノ酸をより緻密に解明するために、マイクロアレイを介した置換マッピングを、完全長タウアイソフォームのナンバリングを用いて残基２５５～２７１の配列であるペプチドＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧ（配列１８４）を用いて実施した。このアッセイは、ペプチド配列内のアミノ酸それぞれを２０種のアミノ酸全てと交換して、３Ｄ６のコアエピトープを高度な正確さで決定した。マイクロアレイを、ＨＡコントロールペプチドと共に全てのペプチドで三重測定によりプリンティングして、アッセイの性能を確実にした。アッセイを実施するために、アレイを、ブロッキングバッファー中で３Ｄ６（１０μｇ／ｍｌ）とインキュベートし、ＰＢＳ－Ｔで洗浄した後、ＤｙＬｉｇｈｔ－６８０にコンジュゲートされたヤギ抗マウス二次抗体とインキュベートした。加えて、マイクロアレイを、ＤｙＬｉｇｈｔ－８００に直接コンジュゲートされた抗ＨＡ抗体１２ＣＡ５とインキュベートした。マイクロアレイを、ＬｉＣｏｒスキャナーを用いてスキャンし、三重測定の強度を平均した。
各残基の置換効果を、ネイティブ残基が他の１９種のアミノ酸全ての合計に変異された場合の３Ｄ６結合損失の比率を決定することにより計算した。結果を、図１２Ａにプロットする。５０％を超える結合損失（破線）は、３Ｄ６結合の重要な残基を意味する。プローブペプチド（４４１ａａアイソフォームの残基２５５～２７１）と３Ｄ６の結合は、両者とも結合にとって重要でない可変的なＮおよびＣ末端伸長ＮＶＫＳ（配列番号１８９）およびＱＰＧ（配列番号１９０）により囲まれている、保存されたコアモチーフＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列１８８）を有するエピトープ置換パターンを明らかにした。このコアエピトープ内で、置換が可能でない残基は、Ｌｙｓ５、Ａｓｎ１１、およびＨｉｓ１４であり、加えて位置１３は、ＬｙｓおよびＨｉｓ以外の残基への置換耐容性（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）が低いことを示す。これらの重要な残基に加えて、Ｓｅｒ８のみが、限定的な置換を可能にする。これは、図１２Ｂに示す通り、ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）の不連続なエピトープをもたす。タウ微小管結合リピートの関連する区分を、配列比較で表し、重要な３Ｄ６結合残基を強調している。タウ中の微小管リピートに比較すると、重要な残基が、コアエピトープ中の関連する位置（Ｋ／Ｈ、＾で示す）以外の全てのリピートにおいて存在する。この位置で、リピート４は、トレオニンを含有し、それがより低い３Ｄ６ ＥＬＩＳＡ結合を担う可能性がある。コアエピトープは、ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８、ＭＢＴＲリピート１中の配列番号１の残基２５９～２６８）、ＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２、ＭＢＴＲリピート２中の配列番号１の残基２９０～２９９）、ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３、ＭＢＴＲリピート３中の配列番号１の残基３２１～３３０）およびより弱い結合のＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ（配列番号１９４、ＭＢＴＲリピート４中の配列番号１の残基３５３～３６２）で定義される。
実施例１５ マウス３Ｄ６はアルツハイマー病患者からの患者試料を結合する 免疫組織化学的実験
新鮮な凍結ヒト脳試料（約０．５ｇ）の検死ブロックを、ＯＣＴに包埋し、クライオスタットを用いて切断して、１０μｍ切片を作製した。切片を、アジ化ナトリウムの存在下でグルコースオキシダーゼおよびベータＤ－グルコースの溶液に入れて、内在性ペルオキシダーゼをブロックした。組織切片を調製したら、それらを、製造業者の使用説明に従い抗マウスポリマーおよびＤＡＢに基づく検出キット（Ｌｅｉｃａ ＢＯＮＤ精密検出キット）を用いて、示された濃度の３Ｄ６で染色した。結果を図１３に示す。
ＡＤ組織では、３Ｄ６は、神経原線維変化および変性神経突起を含む、タウのホールマークとなる病理学的特色を結合する。加えて、３Ｄ６は、可溶性細胞内タウを結合し、これは、健常コントロール組織中に存在する染色により明白である。
実施例１６ マウス３Ｄ６は可溶性タウ凝集体を結合する 架橋した高質量（ｈｉｇｈ－ｍａｓｓ）ＭＡＬＤＩ質量分析実験
３Ｄ６が単一または複数のタウサブユニットに結合したかどうかを決定するために、架橋した高質量ＭＡＬＤＩ質量分析を利用して、結合化学量論を評価した。架橋は、非共有結合的相互作用の直接的分析を可能にする。非共有結合的相互作用を含むタンパク質試料を架橋混合物と混合することにより（Ｂｉｃｈ，Ｃ ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，８２（１）、ｐｐ１７２－１７９）、非共有結合複合体を高感度で特異的に検出することが可能である。このアッセイで、３Ｄ６と可溶性タウ凝集体の相互作用を検査した。可溶性タウ凝集体を、組換え完全長タウと等モル量の低分子量ヘパリンとの３７℃での３日間のインキュベーションにより作製した。インキュベーションの後、不溶性タウと可溶性タウを、１０，０００×ｇでの１５分間の遠心分離により分離した。上清をその後、分取用サイズ排除クロマトグラフィーにより分解し、凝集体のピーク（１００ｋＤａを超える）を、収集し濃縮した。
３Ｄ６を、様々な比率の可溶性タウ凝集体と混合し、高質量ＭＡＬＤＩ質量分析により検出した。加えて、コントロール実験を、個々の成分で実施して、検出されたピークの正しい標識を可能にした。分析を、線形陽性モードで、ＨＭ４相互作用モジュール（ＣｏｖａｌＸ）および標準の窒素レーザを用い、０～１５００ｋＤａの質量範囲に照準を合わせて実施した。
結果を図１４に示す。コントロール（非架橋）の結果では、タウと３Ｄ６は両者とも、それぞれ４０．９３および１４６．９３８ｋＤａの個々の物体として検出される。しかし、架橋されると、３Ｄ６の抗体ピークは消失し、一方で３Ｄ６と１種および２種の抗原の相互作用を表す２つの新しいピークが出現する（それぞれ１９４．７８８および２２８．９６３）。オーバーレイの挿入図で検出された通り、１４６．９２８ｋＤａでの３Ｄ６ピークは特に、架橋試料に存在しない。これらのデータは、３Ｄ６ピークがタウの可溶性凝集体に非常に強力に結合し、抗体あたり１つまたは２つのどちらかの複合体の結合を通してこれを実行することを示唆する。
実施例１７ マウス３Ｄ６はアルツハイマー病の病態のインビボ疾患モデルにおいてタウシーティングを中断する
タウシーティングを中断する３Ｄ６の能力を、ＡＤの病態の伝播のインビボ疾患モデルにおいて検討した。病理学的シードを、終末期ｈＴａｕＰ３０１Ｌマウスまたは野生型コントロールからの脳幹ホモジネートを用いて作製した。病態を誘導するために、シードを、自然な病態の進行が開始する充分前に、３．５月齢マウスの海馬の片側に注射した。タウのシーティングに影響を及ぼす抗体の能力を検査するために、抗体を、注射前にプレインキュベートした。１ヶ月後に、マウスの同側にシーディングした量を、ＡＴ８免疫反応性により評価し、海馬の区分あたりのニューロン数を、決定した。
結果を図１５に示す。アイソタイプコントロールに比較して、タウシードと３Ｄ６のプレインキュベーションは、１ヶ月後のマウスで検出されたシーディングの量を有意に減少させることができ、注射部位の近位でのタウ内在化の中断を示唆し、３Ｄ６がタウ取込みおよび伝播を減じ得ることを示唆する。
実施例１８ マウス３Ｄ６およびヒト化バリアントはインビボでヘパリンとのタウの相互作用を中断する
複数の研究は、細胞へのタウ内在化が、表面結合したヘパリン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）とのタウの内部相互作用に媒介されること、およびこの相互作用が、タウ取込み、シーティングおよび伝播に至る本質的な初期ステップであることを示す（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１１０（３３）、２０１３；Ｋａｔｓｉｎｅｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ，２３，２０１８）。それゆえ、治療性抗タウ抗体の好適な特性は、タウと細胞表面に存在するヘパリンとの相互作用をブロックする能力であろう。
タウとヘパリンの相互作用を中断するマウスおよびヒト化３Ｄ６バリアントの能力を検査するために、低分子量ヘパリンをコートされたＥＬＩＳＡプレートを最初に、ＰＢＳ中の２％ＢＳＡにより室温で２時間ブロックした。プレートをＴＢＳＴで洗浄した。ブロッキングの後、プレートを、ビオチン化組換えタウおよび１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の示された濃度の非標識抗体と室温で１時間インキュベートした。プレートを再度、洗浄し、その後０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中のストレプトアビジン－ＨＲＰと４５分間インキュベートした。プレートをその後、洗浄し、ＯＰＤで発色させ、吸光度を４９０ｎｍで測定した。阻害曲線を、４パラメータロジスティック式フィットを利用して分析した。
結果を図１６および表１９に示す。アッセイで検査された３Ｄ６のマウス型および両方のヒト化型は、タウ／ヘパリン相互作用をブロックする能力を示し、３Ｄ６エピトープがこの相互作用にとって重要であること、および抗体がこの相互作用を阻害し得ることを示す。これは、細胞へのタウ取込みを中断する能力を示唆している。検査されたすべての抗体が阻害活性を示したが、バリアントｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４は、抗体のマウス型により近い活性を保持した（マウスの４０９．２ｐＭに比較してＩＣ５０＝４２２．７ｐＭ）。対照的に、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２は、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４に比較して、より低い阻害活性（ＩＣ５０＝５６４．６ｐＭ）を示し、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４がマウス抗体特性のより高度の保持を有することを示し、軽鎖のＣＤＲ中のアミノ酸バリアントによるｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４の阻害活性の改善を示唆する。
Figure 2022524588000031
実施例１９ ３Ｄ６ヒト化バリアントはタウの原線維形態を結合する
組換えタウ原線維を、等モル量の低分子量ヘパリンといずれかの４リピートタウ（「原線維タウ」）とのインキュベーション（「原線維タウ」）、または３リピートタウおよび４リピートタウのシーティング成長（「混合原線維」）のどちらかにより作製した。タウを、３７℃で３～５日間インキュベートした。原線維を単離するために、調製された試料を、１００，０００×ｇで３０分間超遠心分離した。ペレットを、それらの本来の容量で再懸濁した後、使用前に－８０℃で貯蔵した。
ＥＬＩＳＡプレートを、あらかじめ形成された原線維でコートし（５０ｍＭ炭酸－重炭酸緩衝液ｐＨ９．６中、４℃で一晩）、洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡでブロックした。ブロッキングの後、プレートを、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の示された濃度のビオチン化一次抗体と室温で１時間インキュベートした。プレートを、洗浄し、その後、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中のストレプトアビジン－ＨＲＰと４５分間インキュベートした。プレートをその後、洗浄しＯＰＤで発色させ、吸光度を４９０ｎｍで測定した。結合曲線を、４パラメータロジスティック式フィットを利用して分析した。
結果を図１７および表２０に示す。アッセイで検査された３Ｄ６のヒト化型は両者とも、原線維が４Ｒタウのみを含むか３Ｒと４Ｒの両方のタウを含むかにかかわらず、タウの原線維型への強力な結合を示した。バリアントｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４は、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２（ＥＣ５０＝２３６．７ｐＭ）に比較して両方の種への結合についての好適性を示し（ＥＣ５０＝１９１．８ｐＭ）、軽鎖のＣＤＲ中のアミノ酸バリアントによるｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１／Ｌ２－ＤＩＭ４の結合能力の改善を示した。
Figure 2022524588000032
実施例２０ 代表的ＣＤＲ
本発明の抗体の代表的ＣＤＲを表２１に表す。
Figure 2022524588000033
Figure 2022524588000034
Figure 2022524588000035
Figure 2022524588000036
配列リスト
Ｐ１０６３６－８（配列番号１）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰＴＡＥＤＶＴＡＰＬＶＤＥＧＡＰＧＫＱＡＡＡＱＰＨＴＥＩＰＥＧＴＴＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＩＮＫＫＬＤＬＳＮＶＱＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
Ｐ１０６３６－７（配列番号２）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰＴＡＥＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＩＮＫＫＬＤＬＳＮＶＱＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
Ｐ１０６３６－６（４ＲＯＮヒトタウ）（配列番号３）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＩＮＫＫＬＤＬＳＮＶＱＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
Ｐ１０６３６－５（配列番号４）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰＴＡＥＤＶＴＡＰＬＶＤＥＧＡＰＧＫＱＡＡＡＱＰＨＴＥＩＰＥＧＴＴＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
Ｐ１０６３６－４（配列番号５）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰＴＡＥＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
Ｐ１０６３６－２（配列番号６）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ
配列番号７；マウス３Ｄ６ ＶＨアミノ酸配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＤＬＶＲＰＧＡＬＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号８；カバット／コチアＨＣＤＲ１：
ＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨ
配列番号９；カバットＨＣＤＲ２：
ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号１０；カバットＨＣＤＲ３：
ＬＤＦ
配列番号１１；マウス３Ｄ６ ＶＬアミノ酸配列：
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２；マウスカバットＬＣＤＲ１：
ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ
配列番号１３；マウスカバットＬＣＤＲ２：
ＬＶＳＫＬＤＳ
配列番号１４；マウスカバットＬＣＤＲ３：
ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ
配列番号１５；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＲＰＧＡＬＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１６；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ２：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１７；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＲＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１８；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１９；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ５：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２０；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ１：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＳＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２１；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２２；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ３：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２３；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ４：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＫＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２４；重鎖可変受容体受入番号ＢＡＣ０１９８６．１
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＧＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＩＰＩＬＧＩＡＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＫＧＥＦＥＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２５；重鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＨＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＬＶＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ
配列番号２６；重鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＫＪ１＊０１
ＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７；軽鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２ＩＭＧＴ 受入番号ＩＧＫＶ２－３０＊０２
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＴＨＷＰ
配列番号２８；軽鎖可変受容体ＩＭＧＴ受入番号ＩＧＫＪ２＊０１
ＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２９；軽鎖可変受容体受入番号ＡＡＺ０９０４８．１
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＴＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＹＳＤＧＮＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＲＶＳＨＷＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＴＹＷＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３０；マウス３Ｄ６ ＶＨ核酸配列：
ＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＣＣＴＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＣＣＴＴＡＧＴＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＴＡＡＡＧＡＣＴＡＣＴＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＧＴＡＴＡＴＧＡＣＣＣＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＣＧＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号３１；マウス３Ｄ６ ＶＬ核酸配列：
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＡＣＴＴＴＧＴＣＧＧＴＴＡＣＣＡＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＡＧＴＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＡＧＡＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＴＧＴＴＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＧＣＣＴＡＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＧＴＡＣＡＣＡＴＴＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴ
配列番号３２；マウスＣＤＲ－Ｈ１カバット
ＤＹＹＬＨ
配列番号３３；マウスＣＤＲ－Ｈ１コチア
ＧＦＮＩＫＤＹ
配列番号３４；マウスＣＤＲ－Ｈ２コチア
ＤＰＥＮＧＤ
配列番号３５；マウスＣＤＲ－Ｈ２ ＡｂＭ
ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶ
配列番号３６；マウスＣＤＲ－Ｌ１ Ｃｏｎｔａｃｔ
ＫＴＹＬＮＷＬ
配列番号３７；マウスＣＤＲ－Ｌ２ Ｃｏｎｔａｃｔ
ＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤ
配列番号３８；マウスＣＤＲ－Ｌ３ Ｃｏｎｔａｃｔ
ＷＱＧＴＨＦＰＹ
配列番号３９；マウスＣＤＲ－Ｈ１ Ｃｏｎｔａｃｔ
ＫＤＹＹＬＨ
配列番号４０；マウスＣＤＲ－Ｈ２ Ｃｏｎｔａｃｔ
ＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶ
配列番号４１；マウスＣＤＲ－Ｈ３ Ｃｏｎｔａｃｔ
ＳＴＬＤ
配列番号４２；別のカバット－コチアＣＤＲ－Ｈ１
ＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨ
配列番号４３；別のカバットＣＤＲ－Ｈ２
ＷＩＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＰＫＦＱＧ
配列番号４４；ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５２５４４号の図２からのコンセンサスＶＨアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＸＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＸＡＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４５；ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５２５４４号の図３のコンセンサスＶＬアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＳＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
配列番号４６；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｇ２：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４７；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｈ３：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４８；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｃ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＲＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＦＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＭＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４９；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＲＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＭＧＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５０；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｅ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＤＶｖｋＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬｅＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号５１；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＤＶＶＫＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号５２；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５３；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＮＦＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＧＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５４；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＤＹＹＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＧＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５５；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５６；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＮＦＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５７；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５８；別のカバット－コチアＣＤＲ－Ｈ１（ｈｕ３Ｄ６ＶＨ１ｃと同様）
ＧＦＮＦＫＤＹＹＬＨ
配列番号５９；別のカバット－コチアＣＤＲ－Ｈ１（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃと同様）
ＧＹＴＦＴＤＹＹＬＨ
配列番号６０；別のカバット－コチアＣＤＲ－Ｈ１（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂおよびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂと同様）
ＧＹＮＦＫＤＹＹＬＨ
配列番号６１；別のカバットＣＤＲ－Ｈ２（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１Ｂ６Ｇ２と同様）
ＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＰＫＦＱＧ
配列番号６２；別のカバットＣＤＲ－Ｈ２（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｃ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｂ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｂと同様）
ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＥＫＦＱＧ
配列番号６３；別のカバットＣＤＲ－Ｈ２（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｄ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆ、ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ３ｃ、およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ４ｃと同様）
ＷＶＤＰＥＤＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧ
配列番号６４；別のカバットＣＤＲ－Ｈ２（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｅと同様）
ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＡＥＫＦＱＧ
配列番号６５；別のカバットＣＤＲ－Ｈ３（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｆと同様）
ＬＤＹ
配列番号６６；マウス６Ａ１０抗体の重鎖可変領域
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＳＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＬＮＩＫＤＹＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＤＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧＲＡＴＬＴＴＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号６７；マウス６Ａ１０抗体のカバット／コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１
ＧＬＮＩＫＤＹＹＩＨ
配列番号６８；マウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ２
ＷＩＤＰＥＮＤＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ
配列番号６９；マウス６Ａ１０抗体のカバットＣＤＲ－Ｈ３
ＬＤＹ
配列番号７０；Ｍｕｓ ＶＨ構造テンプレート（ＰＤＢ番号１ＣＲ９＿Ｈ）
ＫＶＫＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＳＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＩＱＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＮＳＥＹＡＰＲＦＱＧＫＡＴＭＴＡＤＴＬＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＤＬＨＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号７１；ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５２５４４号の図４Ａおよび４ＢからのコンセンサスＶＨアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＬＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＬＥＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７２；キメラ３Ｄ６抗体の重鎖
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＤＬＶＲＰＧＡＬＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７３；キメラ３Ｄ６抗体の軽鎖
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配列番号７４；重鎖可変構造モデル受容体受入番号５ＭＹＸ－ＶＨ＿ｍＳｔのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＩＦＮＮＹＷＩＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＥＧＹＩＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
配列番号７５；重鎖可変受容体受入番号２ＲＣＳ－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＹＹＧＩＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号７６；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ１のアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号７７；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ２のアミノ酸配列
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配列番号７８；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３のアミノ酸配列
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配列番号７９；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４のアミノ酸配列
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配列番号８０；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＥＴＩＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８１；軽鎖可変構造モデル受入番号５ＭＹＸ－ＶＬ＿ｍＳｔのアミノ酸配列
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＶＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＦＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号８２；軽鎖可変受容体受入番号ＡＲＸ７１３３５－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＨＹＣＥＱＧＴＨＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
配列番号８３；ヒト化３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ１のアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＨＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
配列番号８４；ヒト化３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ２のアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＳＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号８５；ヒト化３Ｄ６抗体の軽鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３のアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＳＶＴＬＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号８６；ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバット－コチアの組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列(ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５と同様)
ＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨ
配列番号８７；ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列(ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ３およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ４と同様)
ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＩＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号８８；ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列(ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ５と同様)
ＷＩＤＰＥＤＧＥＴＩＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号８９；ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列(ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖｂ３と同様)
ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ
配列番号９０；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６のアミノ酸配列
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配列番号９１；ヒト化３Ｄ６抗体の重鎖可変領域ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＴＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＫＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＤＧＥＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９２；ヒト化３Ｄ６抗体の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列(ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ６およびｈｕ３Ｄ６ＶＨｖｂ７と同様)
ＷＩＤＰＥＤＧＥＴＶＹＤＰＫＦＱＧ
配列番号９３；Ｌ２－ＤＩＭ２１としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｄの軽鎖可変領域
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配列番号９４；Ｌ２－ＤＩＭ７としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｇの軽鎖可変領域
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配列番号９５；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４５Ｎの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＮＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号９６；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｅの軽鎖可変領域
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配列番号９７；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｅの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＥＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号９８；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｑの軽鎖可変領域
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配列番号９９；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｄの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１００；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｋの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＫＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０１；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｒの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０２；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｔの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＴＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０３；Ｌ２－ＤＩＭ２２としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＧＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０４；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＩ４８Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＧＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０５；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４８Ｄの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＤＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０６；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＧＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０７；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＹ４９Ｅの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＥＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０８；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｖの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＶＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０９；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５４Ｓの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＳＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１０；Ｌ２－ＤＩＭ９としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＳ５２Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１１；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｎの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＮＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１２；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｄの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＤＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１３；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｅの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＥＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１４；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｐの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＰＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１５；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｔの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＴＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１６；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ｓの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＳＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１７；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ４７Ａの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＡＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１８；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ５０Ｖの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＶＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１９；Ｌ２－ＤＩＭ１としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＧＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２０；Ｌ２－ＤＩＭ２としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＥＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２１；Ｌ２－ＤＩＭ３としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２２；Ｌ２－ＤＩＭ４としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２３；Ｌ２－ＤＩＭ５としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＴＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２４；Ｌ２－ＤＩＭ６としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＤＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２５；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２６；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２７；Ｌ２－ＤＩＭ１２としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＤＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２８；Ｌ２－ＤＩＭ１３としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＧＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２９；Ｌ２－ＤＩＭ１４としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３０；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３１；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３２；Ｌ２－ＤＩＭ１７としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３３；Ｌ２－ＤＩＭ１８としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３４；Ｌ２－ＤＩＭ１９としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＥＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３５；Ｌ２－ＤＩＭ２０としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＥＶＳＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３６；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＧＶＳＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３７；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＧＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３８；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３９；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＤＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４０；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＧＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４１；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４２；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＶＶＳＫＤＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４３；Ｌ２－ＤＩＭ８としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４４；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＧ１００Ｑの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４５；ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅの軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＥＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１４６；ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１バリアントＤ６０Ｅの重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＥＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４７；ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１バリアントＬ８２ｃＶの重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＱＬＧＳＶＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４８；ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９としても知られるｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１バリアントＤ６０Ｅ＿Ｌ８０Ｍ＿Ｑ８１Ｅ＿Ｌ８２ｃＶ＿Ｔ８３Ｒの重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＥＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＧＳＶＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４９；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ８およびｈ３Ｄ６ＶＨｖｂ９と同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＥＰＫＦＱＧ
配列番号１５０；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｄおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｄと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＤＤＳ
配列番号１５１；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｇと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＧＤＳ
配列番号１５２；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｎと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＮＤＳ
配列番号１５３；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｅおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｅと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＥＤＳ
配列番号１５４；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｅと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＥＶＳＫＬＤＳ
配列番号１５５；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＱＤＳ
配列番号１５６；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｄおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＤＶＳＫＬＤＳ
配列番号１５７；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｋと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＫＤＳ
配列番号１５８；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｒと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＲＤＳ
配列番号１５９；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｔおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５４Ｔと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＴＤＳ
配列番号１６０；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＧＶＳＫＬＤＳ
配列番号１６１；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｖと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＶＤＳ
配列番号１６２；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５４Ｓと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＳＫＳＤＳ
配列番号１６３；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｓ５２Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＧＫＬＤＳ
配列番号１６４；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ５０Ｖと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＶＶＳＫＬＤＳ
配列番号１６５；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＧＶＳＫＲＤＳ
配列番号１６６；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｇ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＧＶＳＫＧＤＳ
配列番号１６７；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｇと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＧＫＧＤＳ
配列番号１６８；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＧＫＲＤＳ
配列番号１６９；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｔと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＧＫＴＤＳ
配列番号１７０；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＶＧＫＤＤＳ
配列番号１７１；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｇ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＤＶＳＫＧＤＳ
配列番号１７２；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒおよびｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｄ＿Ｌ５４Ｒ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＤＶＳＫＲＤＳ
配列番号１７３；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｇと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＥＶＳＫＧＤＳ
配列番号１７４；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｅ＿Ｌ５４Ｒと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＥＶＳＫＲＤＳ
配列番号１７５；ヒト化３Ｄ６抗体（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２ Ｌ３７Ｑ＿Ｌ５０Ｖ＿Ｌ５４Ｄ＿Ｇ１００Ｑと同様）の別のカバットＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＶＶＳＫＤＤＳ
配列番号１７６；重鎖定常領域のアミノ酸配列（ＩｇＧ１：アロタイプＧ１ｍ１７，１）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１７７；軽鎖定常領域のアミノ酸配列（カッパ）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１７８；３Ｄ６ヒト化バリアントの成熟重鎖のアミノ酸配列(ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ)
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１７９；３Ｄ６ヒト化バリアントの成熟軽鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１８０；Ｎ末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの重鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）
ＭＭＳＦＶＳＬＬＬＶＧＩＬＦＨＡＴＱＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＶＹＤＰＫＦＱＧＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＬＱＬＧＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＳＴＬＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１８１；Ｎ末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの軽鎖のアミノ酸配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）
ＭＭＳＦＶＳＬＬＬＶＧＩＬＦＨＡＴＱＡＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＧＫＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１８２；Ｎ末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの重鎖をコードするヌクレオチド配列（ｈｕ３Ｄ６ＶＨｖ１ｂＡ１１ ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ１７アロタイプ）
ＡＴＧＡＴＧＴＣＣＴＴＴＧＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＴＴＧＧＣＡＴＣＣＴＡＴＴＣＣＡＴＧＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＧＧＴＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＧＣＣＡＣＡＧＴＣＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＴＡＡＡＧＡＣＴＡＣＴＡＴＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＧＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＧＴＧＴＡＴＧＡＣＣＣＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＣＧＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＴＣＴＡＣＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＴＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＡＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＣＧＧＧＡＡＡＴＧＡＴＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧ
配列番号１８３；Ｎ末端にウシアルファ－ラクトアルブミンシグナルペプチドを有する３Ｄ６ヒト化バリアントの軽鎖をコードするヌクレオチド配列 (ｈｕ３Ｄ６ＶＬｖ２バリアントＬ３７Ｑ＿Ｓ５２Ｇ＿Ｌ５４Ｒ、Ｌ２－ＤＩＭ４カッパ）
ＡＴＧＡＴＧＴＣＣＴＴＴＧＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＴＴＧＧＣＡＴＣＣＴＡＴＴＣＣＡＴＧＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＴＴＴＧＣＣＣＧＴＴＡＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＡＧＴＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＡＧＡＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＴＧＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＧＧＣＧＣＣＴＡＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＴＧＧＧＣＡＡＡＣＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＣＴＴＡＡＧＴＣＣＧＧＡＡＣＴＧＣＴＡＧＣＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＴＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧ
配列番号１８４；タウ微小管結合リピート１の領域のアミノ酸配列（配列番号１のアミノ酸残基２５５～２７１）
ＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧ
配列番号１８５；タウ微小管結合リピート２の領域のアミノ酸配列（配列番号１のアミノ酸残基２８６～３０２）
ＮＶＱＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶＰＧ
配列番号１８６；タウ微小管結合リピート３の領域のアミノ酸配列（配列番号１のアミノ酸残基３１７～３３３）
ＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧ
配列番号１８７；タウ微小管結合リピート４の領域のアミノ酸配列（配列番号１のアミノ酸残基３４９～３６５）
ＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧ
配列番号１８８；３Ｄ６により結合されたタウのコアモチーフのアミノ酸配列
ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ
配列番号１８９；３Ｄ６により結合されたタウのコアモチーフのＮ末端側のタウ配列のアミノ酸配列
ＮＶＫＳ
配列番号１９０；３Ｄ６により結合されたタウのコアモチーフのＣ末端側のタウ配列のアミノ酸配列
ＱＰＧ
配列番号１９１；３Ｄ６のエピトープのアミノ酸配列
ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ
配列番号１９２；３Ｄ６により結合されたタウのコアモチーフのアミノ酸配列
ＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ
配列番号１９３；３Ｄ６により結合されたタウのコアモチーフのアミノ酸配列
ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ
配列番号１９４；３Ｄ６により結合されたタウのコアモチーフのアミノ酸配列
ＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ

Claims (73)

  1. 配列番号８を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９または配列番号１４９を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号１０を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、配列番号１８と少なくとも９０％同一である成熟重鎖可変領域と、
    配列番号１２を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１５０、１５１、１５３、１５６、１５８、１５９、１６０、１６３、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３または１７４を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号１４を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、配列番号１２２と少なくとも９０％同一である成熟軽鎖可変領域、
    を含む、ヒトタウに特異的に結合する単離された抗体。
  2. 位置Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１７、Ｈ２４、Ｈ４０、Ｈ４３、Ｈ４８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８１、およびＨ９１の少なくとも１つが、それぞれ、Ｖ、Ｋ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｑ、Ｉ、Ｒ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、およびＦにより占められ得、かつ位置Ｌ２、Ｌ１２、Ｌ１５、Ｌ３７、Ｌ３９、Ｌ４５、Ｌ６０およびＬ１００の少なくとも１つが、それぞれＶ、Ｐ、Ｌ、Ｑ、Ｒ、Ｒ、ＤおよびＱにより占められ得る、請求項１に記載の抗体。
  3. ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１５０、１５１、１６３、１６７、１６８、または１６９を含む、請求項１に記載の抗体。
  4. 前記重鎖可変領域が、配列番号１８を含みかつ前記軽鎖可変領域が、配列番号１１０、１２１、１２２または１２３を含む、請求項３に記載の抗体。
  5. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１１０を含む、請求項４に記載の抗体。
  6. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１２１を含む、請求項４に記載の抗体。
  7. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１２２を含む、請求項４に記載の抗体。
  8. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１２３を含む、請求項４に記載の抗体。
  9. 前記重鎖可変領域が、配列番号１４６を含みかつ前記軽鎖可変領域が、配列番号９４または１２２を含む、請求項３に記載の抗体。
  10. 前記軽鎖可変領域が、配列番号９４を含む、請求項９に記載の抗体。
  11. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１２２を含む、請求項９に記載の抗体。
  12. 前記重鎖可変領域が、配列番号１８または１４６を含みかつ前記軽鎖可変領域が、配列番号１２２を含む、請求項３に記載の抗体。
  13. キメラ抗体、ベニヤ抗体（ｖｅｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、またはヒト化抗体である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体。
  14. 完全抗体である請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  15. 結合フラグメントである請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  16. 前記結合フラグメントが、単鎖抗体、Ｆａｂ、またはＦａｂ’２フラグメントである、請求項１５に記載の抗体。
  17. Ｆａｂフラグメント、または単鎖Ｆｖである請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  18. 前記アイソタイプが、ヒトＩｇＧ１である、前記請求項のいずれか１項に記載の抗体。
  19. 前記成熟軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合されかつ前記成熟重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合される、請求項１～１４および１８のいずれか１項に記載のヒト化抗体。
  20. 前記重鎖定常領域が、天然のヒト重鎖定常領域と比較してＦｃγ受容体への低減された結合を有する前記天然のヒト重鎖定常領域の変異型である、請求項１９に記載のヒト化抗体。
  21. 前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１９または２０に記載のヒト化抗体。
  22. 前記重鎖定常領域が、配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項21に記載のヒト化抗体。
  23. 前記重鎖定常領域に融合された成熟重鎖可変領域が、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する、請求項１９に記載のヒト化抗体。
  24. 前記成熟重鎖および／または軽鎖可変領域に融合された単一ペプチドをさらに含む、請求項１９に記載のヒト化抗体。
  25. 前記重鎖が、配列番号１８０のアミノ酸配列を有する、請求項２３に記載のヒト化抗体。
  26. 前記軽鎖定常領域が、配列番号１７７のアミノ酸配列を有する、請求項１９に記載のヒト化抗体。
  27. 前記軽鎖定常領域に融合された成熟軽鎖可変領域が、配列番号１７９のアミノ酸配列を有する、請求項１９に記載のヒト化抗体。
  28. 前記軽鎖が、配列番号１８１のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
  29. 前記重鎖が、配列番号１７８のアミノ酸配列を有しかつ前記軽鎖が、配列番号１７９のアミノ酸配列を有する、請求項２３に記載のヒト化抗体。
  30. 前記重鎖が、配列番号１８０のアミノ酸配列を有しかつ前記軽鎖が、配列番号１８１のアミノ酸配列を有する、請求項２５に記載のヒト化抗体。
  31. 前記定常領域中に少なくとも１つの変異を有する前記請求項のいずれか１項に記載の抗体。
  32. 前記変異が、前記定常領域による補体の結合または活性化を低減する、請求項３１に記載の抗体。
  33. ＥＵナンバリングによる位置２４１、２６４、２６５、２７０、２９６、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９および３３１の１つまたは複数で変異を有する請求項３２に記載の抗体。
  34. 位置３１８、３２０および３２２でアラニンを有する請求項３３に記載の抗体。
  35. 前記アイソタイプが、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１～２０のいずれか１項に記載の抗体。
  36. 少なくとも９５％ｗ／ｗ純粋である、請求項１～３５のいずれか１項に記載の抗体。
  37. 治療薬、細胞傷害剤、細胞分裂停止剤、神経栄養剤、または神経保護剤にコンジュゲートされる、いずれかの前記請求項に記載の抗体。
  38. 請求項１～３７のいずれか１項で定められる抗体および薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
  39. 請求項１～３８のいずれか１項に記載の抗体の前記重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
  40. 前記重鎖が、配列番号１８２を含む配列によりコードされ、前記軽鎖が、配列番号１８３を含む配列によりコードされる、請求項３９に記載の核酸。
  41. ヒト化抗体を生産する方法であって、
    （ａ）細胞が前記抗体を分泌するように、請求項４０に記載の核酸で形質転換された前記細胞を培養すること；および
    （ｂ）細胞培地から前記抗体を精製すること、
    を含む、方法。
  42. ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体を生産する細胞株を生産する方法であって、
    （ａ）請求項４０に記載の核酸および選択マーカーをコードするベクターを細胞に導入すること；
    （ｂ）前記ベクターの増加されたコピー数を有する細胞について選択するための条件下で前記細胞を増殖させること；
    （ｃ）前記選択された細胞から単細胞を単離すること；ならびに
    （ｄ）抗体の収率に基づいて選択された単細胞からクローニングされた細胞をバンキングすること、
    を含む、方法。
  43. ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体を生産する方法であって、
    （ａ）細胞が前記抗体を分泌するように、請求項１に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された前記細胞を培養すること；ならびに
    （ｂ）細胞培地から前記抗体を精製すること、
    を含む、方法。
  44. ヒト化抗体、キメラ抗体またはベニヤ抗体を生産する細胞株を生産する方法であって、
    （ａ）請求項１に記載の抗体の重鎖および軽鎖と選択マーカーとをコードするベクターを細胞に導入すること；
    （ｂ）前記ベクターの増加されたコピー数を有する細胞について選択するための条件下で前記細胞を増殖させること；
    （ｃ）前記選択された細胞から単細胞を単離すること；ならびに
    （ｄ）抗体の収率に基づいて選択された単細胞からクローニングされた細胞をバンキングすること、
    を含む、方法。
  45. タウ媒介アミロイド症の対象またはそれを発症するリスクのある対象におけるタウの凝集を阻害または低減する方法であって、請求項１～３８のいずれか１項に記載の抗体の有効な投与計画を前記対象に投与すること、それにより前記対象におけるタウの凝集を抑制または低減することを含む、方法。
  46. 前記抗体が、３Ｄ６のヒト化型である、請求項４５に記載の方法。
  47. 対象においてタウ関連疾患を処置するまたはその予防を実行する方法であって、請求項１～３８のいずれか１項で定められる抗体の有効な投与計画を投与することおよびそれにより前記疾患を処置するまたはその予防を実行することを含む、方法。
  48. 前記タウ関連疾患が、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）である、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記タウ関連疾患が、アルツハイマー病である、請求項４７に記載の方法。
  50. 前記患者が、ＡｐｏＥ４保因者である、請求項４９に記載の方法。
  51. タウの異常伝播を減らす方法であって、請求項１～３８のいずれかで定められる抗体の有効な投与計画を投与することおよびそれによりタウの伝播を減らすことを含む、方法。
  52. タウの食作用を誘導する方法であって、請求項１～３８のいずれかで定められる抗体の有効な投与計画を投与することおよびそれによりタウの食作用を誘導することを含む、方法。
  53. タウの凝集または沈着を抑制する方法であって、請求項１～３８のいずれかで定められる抗体の有効な投与計画を投与することおよびそれによりタウの凝集または沈着を抑制することを含む、方法。
  54. タウの濃縮体の形成を抑制する方法であって、請求項１～３８のいずれかで定められる抗体の有効な投与計画を投与することを含む、方法。
  55. タウ凝集または沈着に関連する疾患を有するまたはその疾患のリスクのある対象におけるタウタンパク質沈着物を検出する方法であって、請求項１～３８のいずれかで定められる抗体を対象に投与すること、および前記対象においてタウに結合した抗体を検出することを含む、方法。
  56. 前記タウの凝集または沈着に関連する疾患が、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認知障害、原発性年齢関連タウオパチー、脳炎後パーキンソニズム、外傷後認知症またはボクサー認知症、ピック病、Ｃ型ニーマン・ピック病、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、嗜銀性顆粒病、球状グリア性タウオパチー、グァム筋萎縮性側索硬化症－パーキンソン病／認知症複合；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、レビー小体型痴呆、レビー小体型アルツハイマー病（ＬＢＶＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、球状グリア性タウオパチー（ＧＧＴ）、または進行性核上麻痺（ＰＳＰ）である、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記抗体が、前記対象の身体中に静脈内注射により投与される、請求項５５に記載の方法。
  58. 前記抗体が、頭蓋内注射によりまたは前記対象の頭蓋骨を通る孔をあけることにより前記対象の脳に直接投与される、請求項５５に記載の方法。
  59. 前記抗体が、標識される、請求項５５に記載の方法。
  60. 前記抗体が、蛍光標識、常磁性標識、または放射性標識により標識される、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記放射性標識が、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出される、請求項６０に記載の方法。
  62. タウ凝集または沈着に関連する疾患について処置される対象における処置の効力を測定する方法であって、
    （ａ）請求項１～３８のいずれか１項で定められる抗体を対象に投与することによる処置の前に前記対象中のタウタンパク質沈着物の第１のレベルを測定すること、および前記対象中のタウに結合した抗体の第１の量を検出すること、
    （ｂ）前記対象に前記処置を投与すること、
    （ｃ）前記抗体を対象に投与することによる処置の後で前記対象中のタウタンパク質沈着物の第２のレベルを測定すること、および前記対象中のタウに結合した抗体を検出すること、
    を含み、
    前記タウタンパク質沈着物のレベルにおける低下が、処置に対する陽性応答を示す、方法。
  63. タウ凝集または沈着に関連する疾患について処置される対象における処置の効力を測定する方法であって、
    （ａ）請求項１～３８のいずれか１項で定められる抗体を対象に投与することによる処置の前に前記対象中のタウタンパク質沈着物の第１のレベルを測定すること、および前記対象中のタウに結合した抗体の第１の量を検出すること、
    （ｂ）前記対象に前記処置を投与すること、
    （ｃ）前記抗体を対象に投与することによる処置の後で前記対象中のタウタンパク質沈着物の第２のレベルを測定すること、および前記対象中のタウに結合した抗体の第２の量を検出すること、
    を含み、
    タウタンパク質沈着物のレベルにおいて変化のないことまたはタウタンパク質沈着物におけるわずかな増加が、処置に対する陽性応答を示す、方法。
  64. 式ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）またはＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ（配列番号１９４）のモチーフ内のエピトープでヒトタウに特異的に結合する抗体を生産する方法であって、ヒトタウまたはそのフラグメントで動物を免疫化して抗体を生産すること、および前記モチーフ内で特異的に結合する前記生産された抗体の一抗体についてスクリーニングすること、を含む、方法。
  65. 残基ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）またはＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨ（配列番号１９４）からなるペプチドに特異的に結合する抗体を生産する方法であって、ヒトタウまたはそのフラグメントで動物を免疫化して抗体を生産すること、および前記ペプチドに特異的に結合する前記生産された抗体の一抗体についてスクリーニングすること、を含む、方法。
  66. ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）を含むエピトープに特異的に結合する抗体を生産する方法であって、ヒトタウまたはそのフラグメントで動物を免疫化すること、および前記エピトープに特異的に結合する抗体についてスクリーニングすること、を含む、方法。
  67. 前記動物が、３８３のアミノ酸ヒトタウ（４Ｒ０Ｎ）で免疫化される、請求項６４～６６のいずれか１項に記載の方法。
  68. 前記ヒトタウが、Ｐ３０１Ｓ変異を含む、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記ヒトタウが、組換えＮ末端Ｈｉｓタグ付けされる、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記スクリーニングが、前記抗体とそれぞれＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）、ＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）、ＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）を含む１５以下のアミノ酸の１種もしくは複数のペプチドまたはＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）により表される任意の他のコンセンサスモチーフとの間の特異的結合を決定する、請求項６６に記載の方法。
  71. 前記１種または複数のペプチドが、それぞれＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）またはＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）またはＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）を含む、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記動物が、キャリアに連結された、ＫＸＸＳＸＸＮＸ（Ｋ／Ｈ）Ｈ（配列番号１９１）を含む最大で１５アミノ酸のタウフラグメントで免疫化される、請求項６６に記載の方法。
  73. 前記ペプチドが、ＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨ（配列番号１８８）またはＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨ（配列番号１９２）またはＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨ（配列番号１９３）である、請求項７２に記載の方法。
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