JP2023533458A - ソルチリンを認識する抗体 - Google Patents

Abstract

本発明は、ソルチリンに特異的に結合する抗体を提供する。抗体は、プログラニュリンレベルの変化とそれに伴う病状悪化に関連する病態を阻害または遅延させる。一態様では、本発明は、ヒトソルチリンへの結合に対して、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と競合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。いくつかの抗体は、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と同じヒトソルチリン上のエピトープに結合する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月２４日に出願された米国特許出願第６３／０４３，４８１号の利益を主張し、その全体があらゆる目的のために参照により組み込まれる。

配列表の参照
ファイル５６１３０８ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔに記載されている配列表は３５３，８１３バイトであり、２０２１年６月２２日に作成され、参照により本明細書に組み込まれる。

発明の背景
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、米国で５０，０００～６０，０００人の個体が罹患する早期発症型認知症である。プログラニュリン（ＰＧＲＮ）の脳内レベルの低下は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の遺伝的形態と関連している。ヒトプログラニュリン遺伝子におけるヘテロ接合性の機能喪失変異は、ハプロ不全の機構によってＦＴＤを引き起こす（Ｂａｋｅｒ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４４２：９１６－９；Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２００６，４４２，：９２０－９２４）。プログラニュリン遺伝子（ＦＴＤ－ＧＲＮ）の機能的コピーが欠損しており、プログラニュリンレベルが約５０％低下しているＦＴＤの遺伝子型は、全ＦＴＤ集団の約１０％に相当する。プログラニュリンレベルを適度に低下させる変異は、アルツハイマー病およびパーキンソン病のリスクを増加させる（Ｓｈｅｎｇ，Ｊ．ら、Ｇｅｎｅ；２０１４，５４２（２）：１４１－５；Ｍｅｎｄｓａｉｋｈａｎ，Ａ．ら、Ｃｅｌｌｓ：２０１９，８（３），２３０）。プログラニュリンは神経栄養／抗炎症因子であり、欠乏はミクログリアとニューロンとの間の恒常性を破壊し、神経変性を促進し得る。プログラニュリンはまた、リソソームの形成および機能を調節する役割を果たし得る。
ソルチリン（ＳＯＲＴ１）は、そのエンドサイトーシスを媒介することによって、プログラニュリンレベルの調節因子として同定されている（Ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ，Ｍ．Ｍ．ら、Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ２０１０；８７（６）：８９０－７；Ｈｕ，Ｆ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ ２０１０；６８（４）：６５４－６７）。ソルチリン－プログラニュリン相互作用の標的化された破壊は、細胞外プログラニュリンのレベルを増加させ、ＦＴＤ－ＧＲＮ患者における疾患表現型を潜在的に逆転させ得るプログラニュリンレベルの調節は、健康なヒトにおいてプログラニュリンレセプターソルチリン（ＳＯＲＴ１）を標的とする抗体で報告されている。例えば、Ａｌｅｃｔｏｒ社のＡＬ００１はフェーズ１を完了し、現在はフェーズ２にある（ｈｔｔｐｓ：／／ｉｎｖｅｓｔｏｒｓ．ａｌｅｃｔｏｒ．ｃｏｍ／ｓｔａｔｉｃ－ｆｉｌｅｓ／７４１８ｂ６８９－ｃ５ｂ７－４３ａｃ－ａ１６ａ－３ｃ６４ｅ１ａ１４ｅ８０を参照のこと）。ベースラインと比較して血漿およびＣＳＦ中のプログラニュリンの増加が、抗ソルチリン抗体を投与された健康志願者で報告されている。ソルチリンは、他の因子（例えば、ニューロテンシン）のレセプター／トランスポーターでもある。

Ｂａｋｅｒ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４４２：９１６－９ Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２００６，４４２，：９２０－９２４ Ｓｈｅｎｇ，Ｊ．ら、Ｇｅｎｅ；２０１４，５４２（２）：１４１－５ Ｍｅｎｄｓａｉｋｈａｎ，Ａ．ら、Ｃｅｌｌｓ：２０１９，８（３），２３０ Ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ，Ｍ．Ｍ．ら、Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ２０１０；８７（６）：８９０－７ Ｈｕ，Ｆ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ ２０１０；６８（４）：６５４－６７

特許請求の範囲に係る発明の簡単な概要
一態様では、本発明は、ヒトソルチリンへの結合に対して、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と競合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。いくつかの抗体は、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と同じヒトソルチリン上のエピトープに結合する。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体５Ｅ２０の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、５Ｅ２０が、配列番号４を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。例えば、抗体はヒト化抗体であり得る。

いくつかの抗体では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの群から選択される定義のものである。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ重鎖ＣＤＲ（配列番号５～７）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号１４、配列番号６および配列番号７）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号１５、配列番号１６および配列番号７）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号５、配列番号１７および配列番号７）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号１８～２０）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は５Ｅ２０の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号２１～２３）を含む。

いくつかの抗体は、配列番号１６３～１６９のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号１７３～１７６のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む。

いくつかの抗体では、ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ５はＬまたはＶによって占有され、Ｈ４０はＡまたはＴによって占有され、Ｈ４２はＧまたはＤによって占有され、Ｈ４４はＧまたはＲによって占有され、Ｈ４９はＡによって占有され、Ｈ７７はＴまたはＳによって占有され、Ｈ８３はＲまたはＫによって占有され、Ｈ９３はＳによって占有され、Ｈ９４はＲによって占有される。

いくつかの抗体では、ＶＨ領域の提供されるＨ４９位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＡ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ５位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＶ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ５位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＶ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ５位、Ｈ４２位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＶ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ５位、Ｈ４２位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ８３位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＶ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｋ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ５位、Ｈ４０位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＶ、Ｔ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域のＨ５、Ｈ４０、Ｈ４２、Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ９３、およびＨ９４が、それぞれＶ、Ｔ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｓ、およびＲによって占有される。

いくつかの抗体では、ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ１１はＬまたはＶであり、Ｌ３６はＬであり、Ｌ４４はＦであり、Ｌ４６はＧであり、Ｌ６９はＡであり、Ｌ８５はＴまたはＤであり、Ｌ８７はＦであり、Ｌ１００はＧまたはＱであり、Ｌ１０６はＩまたはＫである。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位およびＬ８７位が、それぞれＬ、Ｆ、Ｇ、ＡおよびＦによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ１１位、Ｌ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位およびＬ８７位が、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、ＡおよびＦによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ１１位、Ｌ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位、Ｌ８７位、Ｌ１００位およびＬ１０６位が、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｆ、ＱおよびＫによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ１１位、Ｌ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位、Ｌ８５位、Ｌ８７位、Ｌ１００位およびＬ１０６位が、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｆ、ＱおよびＫによって占有される。

いくつかの抗体は、配列番号１６３～１６９の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１７３～１７６の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体は、配列番号１６３～１６９と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１７３～１７６と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６３～１６９のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３～１７６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７３のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７４のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１７６のアミノ酸配列を有する。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体８Ｈ２４の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、８Ｈ２４が、配列番号２８を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３４を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。例えば、抗体はヒト化抗体であり得る。

いくつかの抗体では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの群から選択される定義のものである。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ重鎖ＣＤＲ（配列番号２９～３１）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号３８、配列番号３０および配列番号３１）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号３９、配列番号４０および配列番号３１）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号２９、配列番号４１および配列番号３１）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号４２～４４）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は８Ｈ２４の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号４５～４７）を含む。

いくつかの抗体は、配列番号１８０～１８１のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号１８５～１８６のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む。

いくつかの抗体では、ＶＨ領域における以下の位置のうちの少なくとも１つが、指定されるようにアミノ酸によって占有される：Ｈ２はＡによって占有され、Ｈ１２はＫまたはＶによって占有され、Ｈ４８はＩによって占有され、Ｈ６７はＡによって占有され、Ｈ７１はＶによって占有され、Ｈ９１はＦによって占有され、Ｈ１０８はＴによって占有される。

いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ２位、Ｈ４８位、Ｈ６７位、Ｈ７１位、Ｈ９１位およびＨ１０８位が、それぞれＡ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＦおよびＴによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ２、Ｈ１２、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ７１、Ｈ９１およびＨ１０８が、それぞれＡ、Ｖ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＦおよびＴによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ２はＶであり、Ｌ９はＬまたはＳであり、Ｌ７４はＫまたはＴである。

いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ２位がＶによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域のＬ２位、Ｌ９位およびＬ７４位が、それぞれＶ、ＳおよびＴによって占有される。

いくつかの抗体は、配列番号１８０～１８１の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１８５～１８６の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体は、配列番号１８０～１８１と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１８５～１８６と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１８０～１８１のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１８５～１８６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１８０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１８５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１８０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１８６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１８１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１８５のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１８１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１８６のアミノ酸配列を有する。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体１１Ｍ１４の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、１１Ｍ１４が、配列番号５２を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするが、ただし、Ｌ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る、マウス抗体を提供する。例えば、抗体はヒト化抗体であり得る。

いくつかの抗体では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの群から選択される定義のものである。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ重鎖ＣＤＲ（配列番号５３～５５）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、Ｌ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号６２、配列番号５４および配列番号５５）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、Ｌ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号６３、配列番号６４および配列番号５５）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は１１Ｍ１４（配列番号５９～６１）の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲを含むが、ただし、Ｌ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号５３、配列番号６５および配列番号５５）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、Ｌ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号６６～６８）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域は１１Ｍ１４の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号６９～７１）を含むが、ただし、Ｌ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る。

いくつかの抗体は、配列番号１９０～１９２のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号１９６～１９９のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む。

いくつかの抗体では、ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ４９はＡによって占有され、Ｈ８０はＬまたはＧによって占有され、Ｈ８２ｃはＬまたはＧによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ４９位がＡによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ４９位およびＨ８２ｃ位が、それぞれＡおよびＧによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＨ領域におけるＨ４９位およびＨ８０位が、それぞれＡおよびＧによって占有される。

いくつかの抗体では、ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ４３はＡまたはＳであり、Ｌ４８はＶであり、Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり、Ｌ７１はＹであり、Ｌ７６はＮまたはＳである。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ４８位およびＬ７１位が、それぞれＶおよびＹによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ４３位、Ｌ４８位、Ｌ７１位およびＬ７６位が、それぞれＳ、Ｖ、ＹおよびＳによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ４３位、Ｌ４８位、Ｌ５４位、Ｌ７１位およびＬ７６位が、それぞれＳ、Ｖ、Ｇ、ＹおよびＳによって占有される。いくつかの抗体では、ＶＬ領域におけるＬ４３位、Ｌ４８位、Ｌ５４位、Ｌ７１位およびＬ７６位が、それぞれＳ、Ｖ、Ｉ、ＹおよびＳによって占有される。

いくつかの抗体は、配列番号１９０～１９２の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１９６～１９９の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体は、配列番号１９０～１９２と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１９６～１９９と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９０～１９２のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９６～１９９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９７のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９８のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９９のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９７のアミノ酸配列を有する。

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９８のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９９のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９６のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９７のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９８のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域は配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は配列番号１９９のアミノ酸配列を有する。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体５Ｍ１３の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、５Ｍ１３が、配列番号７８を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８４を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号７９～８１）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号８５～８７）によって定義されるとおりである。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体２Ｆ１８の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、２Ｆ１８が、配列番号９０を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号９６を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号９１～９３）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号９７～９９）によって定義されるとおりである。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体２Ｐ２２の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、２Ｐ２２が、配列番号１０２を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１０８を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１０３～１０５）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１０９～１１１）によって定義されるとおりである。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体６Ｂ１５の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、６Ｂ１５が、配列番号１１４を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１１５～１１７）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１２１～１２３）によって定義されるとおりである。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体２Ｃ１４の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、２Ｃ１４が、配列番号１２６を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３２を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１２７～１２９）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１３３～１３５）によって定義されるとおりである。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体９Ｎ１８の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、９Ｎ１８が、配列番号１３８を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４４を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１３９～１４１）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１４５～１４７）によって定義されるとおりである。

別の態様では、本発明は、モノクローナル抗体４Ｎ２の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含むヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、４Ｎ２が、配列番号１５０を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１５６を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを特徴とするマウス抗体である、抗体を提供する。いくつかの抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１５１～１５３）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１５７～１５９）によって定義されるとおりである。

例えば、抗体はヒト化抗体であり得る。

抗体は、インタクトな抗体または結合断片であり得る。いくつかの抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプを有するが、他の抗体はヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプを有し得る。いくつかの抗体は、軽鎖定常領域に融合した成熟軽鎖可変領域と重鎖定常領域に融合した成熟重鎖可変領域とを有する。いくつかの抗体の重鎖定常領域は、天然のヒト重鎖定常領域と比較してＦｃγレセプターへの結合が低下している天然のヒト重鎖定常領域の変異型である。

いくつかの抗体の重鎖定常領域は、天然のヒト重鎖定常領域と比較して新生児Ｆｃγレセプターへの結合が増強されている天然のヒト重鎖定常領域の変異型である。

いくつかの抗体は、配列番号２４４の重鎖と配列番号２４５の軽鎖とを含む。いくつかの抗体は、配列番号２４６の重鎖と配列番号２４７の軽鎖とを含む。いくつかの抗体は、配列番号２４８の重鎖と配列番号２４９の軽鎖とを含む。いくつかの抗体は、配列番号２５０の重鎖と配列番号２４５の軽鎖とを含む。いくつかの抗体は、配列番号２５１の重鎖と配列番号２４７の軽鎖とを含む。いくつかの抗体は、配列番号２５２の重鎖と配列番号２４９の軽鎖とを含む。

別の態様では、本発明は、本明細書中に開示される抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物を提供する。別の態様では、本発明は、本明細書中に開示される抗体のいずれかの重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を提供する。

さらに別の態様では、本発明は、本明細書に記載される任意の非ヒト抗体、例えば、マウス抗体５Ｅ２０（ここで、５Ｅ２０は、配列番号４の成熟重鎖可変領域および配列番号１０の成熟軽鎖可変領域によって特徴づけられる）、マウス抗体８Ｈ２４（ここで、８Ｈ２４は、配列番号２８の成熟重鎖可変領域および配列番号３４の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体１１Ｍ１４（ここで、１１Ｍ１４は、配列番号５２の成熟重鎖可変領域および配列番号５８の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体５Ｍ１３（ここで、５Ｍ１３は、配列番号７８の成熟重鎖可変領域および配列番号８４の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体２Ｆ１８（ここで、２Ｆ１８は、配列番号９０の成熟重鎖可変領域および配列番号９６の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体２Ｐ２２（ここで、２Ｐ２２は、配列番号１０２の成熟重鎖可変領域および配列番号１０８の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体６Ｂ１５（ここで、６Ｂ１５は、配列番号１１４の成熟重鎖可変領域および配列番号１２０の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体２Ｃ１４（ここで、２Ｃ１４は、配列番号１２６の成熟重鎖可変領域および配列番号１３２の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体９Ｎ１８（ここで、９Ｎ１８は、配列番号１３８の成熟重鎖可変領域および配列番号１４４の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）、マウス抗体４Ｎ２（ここで、４Ｎ２は、配列番号１５０の成熟重鎖可変領域および配列番号１５６の成熟軽鎖可変領域を特徴とする）をヒト化する方法を提供する。そのような方法は、１またはそれを超えるアクセプター抗体配列を選択するステップと、保持すべきマウス抗体のアミノ酸残基を同定するステップと、マウス抗体重鎖のＣＤＲを含むヒト化重鎖をコードする核酸およびマウス抗体重鎖のＣＤＲを含むヒト化軽鎖をコードする核酸を合成するステップと、核酸を宿主細胞において発現させて、ヒト化抗体を産生するステップとを含み得る。

抗体、例えば、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２のヒト化形態、キメラ形態またはベニアリングされた形態を産生する方法も提供される。そのような方法では、抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞は、細胞が抗体を分泌するように培養される。次いで、抗体を細胞培養培地から精製することができる。

本明細書中に開示される抗体のいずれか、例えば、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２のヒト化形態、キメラ形態またはベニアリング形態を産生する細胞株は、抗体の重鎖および軽鎖をコードするベクターおよび選択可能なマーカーを細胞に導入し、ベクターのコピー数が増加した細胞を選択するための条件下で細胞を増殖させ、選択された細胞から単一細胞を単離し、抗体の収量に基づいて選択された単一細胞からクローニングされた細胞をバンク化することによって産生することができる。

いくつかの細胞は、選択的条件下で増殖させ、少なくとも１００ｍｇ／Ｌ／１０^６細胞／２４時間を自然に発現および分泌する細胞株についてスクリーニングすることができる。

本発明はまた、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を有するかまたは発症するリスクがある対象においてプログラニュリンレベルを増加させる方法であって、本明細書中に開示される有効量の抗体を対象に投与し、それにより、対象におけるプログラニュリンレベルを増加させるステップを含む、方法を提供する。

本発明はまた、対象におけるプログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を処置またはその予防を行う方法であって、本明細書中に開示される有効量の抗体を投与し、それにより、疾患もしくは障害を処置またはその予防を行うステップを含む、方法を提供する。いくつかの方法は、対象におけるプログラニュリンレベルを検出するステップをさらに含む。いくつかの方法は、対象におけるプログラニュリンレベルを監視するステップをさらに含む。

いくつかの方法では、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害である。いくつかの方法では、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害は前頭側頭型認知症である。

本発明はまた、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害に関連する疾患を有するかまたはそのリスクがある対象においてソルチリンを検出する方法であって、本明細書中に開示される抗体を対象に投与するステップと、対象においてソルチリンに結合した抗体を検出するステップとを含む、方法を提供する。

別の態様では、本発明は、残基ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、残基ＥＳＦＬ（配列番号２０３）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、式Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）のモチーフ内のエピトープでヒトソルチリンに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、残基ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ（配列番号２０４）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、残基ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、残基ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、残基ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、配列番号２１５のアミノ酸残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７によって定義されるエピトープに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、配列番号２１５のアミノ酸残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０によって定義されるエピトープに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。別の態様では、本発明は、配列番号２１５のアミノ酸残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５によって定義されるエピトープに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。

本発明はまた、対象におけるプログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を処置またはその予防を行う方法であって、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２が特異的に結合する、配列番号１の連続する最大２０アミノ酸のソルチリンペプチドを含む免疫原を投与するステップを含み、前記ペプチドは、前記対象においてソルチリンに特異的に結合する抗体の形成を誘導する、方法を提供する。

図１は、マウス５Ｅ２０抗体（５Ｅ２０ＶＨ；配列番号４）ならびにヒト化バージョンの５Ｅ２０抗体（ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６およびｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７）の重鎖可変領域と、ヒト生殖細胞系重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ３－２１^＊０１（配列番号１６２）とのアラインメントならびにヒトアクセプター重鎖可変領域配列ＡＥＸ２９０８６－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（ＡＥＸ２９０８６ＶＨ；配列番号１６１）とのアラインメントを示す。ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１（５Ｅ２０ＶＨｖ１）は配列番号１６３であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２（５Ｅ２０ＶＨｖ２）は配列番号１６４であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３（５Ｅ２０ＶＨｖ３）は配列番号１６５であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４（５Ｄ２０ＶＨｖ４）は配列番号１６６であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５（５Ｅ２０ＶＨｖ５）は配列番号１６７であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６（５Ｅ２０ＶＨｖ６）は配列番号１６８であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７（５Ｅ２０ＶＨｖ７）は配列番号１６９である。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるマウス５Ｅ２０ＶＨのＣＤＲは太字である。

図２は、マウス５Ｅ２０抗体（５Ｅ２０ＶＬ、配列番号１０）ならびにヒト化バージョンの５Ｅ２０抗体（ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４）の軽鎖可変領域と、ヒト生殖細胞系軽鎖可変領域配列＃ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）ならびにヒトアクセプターＢＡＨ０４６８７－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ（ＢＡＨ０４６８７ＶＬ；配列番号１７１）とのアラインメントを示す。ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１（５Ｄ２０ＶＬｖ１）は配列番号１７３であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２（５Ｄ２０ＶＬｖ２）は配列番号１７４であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３（５Ｅ２０ＶＬｖ３）は配列番号１７５であり、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４（５Ｅ２０ＶＬｖ４）は配列番号１７６である。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるマウス５Ｅ２０ＶＬのＣＤＲは太字である。

図３は、マウス８Ｈ２４抗体（８Ｈ２４＿ＶＨ、配列番号２８）ならびにヒト化バージョンの８Ｈ２４抗体の（ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２）の重鎖可変領域と、ヒト生殖細胞系重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ１－６９^＊０８＿ＩＧＨＪ１^＊０１（配列番号１７９）ならびにヒトアクセプター重鎖可変領域配列ＡＡＣ５１７１４－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（ＡＡＣ５１７１４ＶＨ Ｆｒｗｋ、配列番号１７８）とのアラインメントを示す。ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１（ｈ８Ｈ２４ＶＬｖ１）は配列番号１８０であり、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２（ｈ８Ｈ２４ＶＨｖ２）は配列番号１８１である。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるマウス８Ｈ２４ＶＨのＣＤＲは太字である。

図４は、マウス８Ｈ２４（８Ｈ２４ＶＬ）配列番号３４）ならびにヒト化バージョンの８Ｈ２４抗体（ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２）の軽鎖可変領域と、ヒト生殖細胞系軽鎖可変領域配列ＩＧＫＶ２－４０^＊０１（ＩＧＫＶ２－４０^＊０１＿ＩＧＫＪ４^＊０１、配列番号１８４）ならびにヒトアクセプターＡＢＣ６６９１４－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ（ＡＢＣ６６９１４ＶＬ Ｆｒｗｋ配列番号１８３）とのアラインメントを示す。ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１（ｈＨ８２４ＶＬｖ１）は配列番号１８５であり、ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２（ｈＨ８２４ＶＬｖ２）は配列番号１８６である。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるマウス８Ｈ２４ＶＬのＣＤＲは太字である。

図５は、マウス１１Ｍ１４抗体（１１Ｍ１４＿ＶＨ；配列番号５２）ならびにヒト化バージョンの１１Ｍ１４抗体（ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ）の重鎖可変領域と、ヒト生殖系列重鎖可変領域配列ＩＧＨＶ３－４８^＊０３（配列番号１８９）ならびにヒトアクセプター重鎖可変領域配列ＡＣＳ９６１９８－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（ＡＳＣ９６１９８ＶＨ ｈＦｒｗｋ、配列番号１８８）とのアラインメントを示し、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ（１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ）は配列番号１９０であり、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ（１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ）は配列番号１９１であり、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ（１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ）は配列番号１９２である。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるマウス１１Ｍ１４ＶＨのＣＤＲは太字である。

図６は、マウス１１Ｍ１４抗体（１１Ｍ１４ＶＬ、配列番号５８）ならびにヒト化バージョンの１１Ｍ１４抗体（ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ）の軽鎖可変領域と、ヒト生殖細胞系軽鎖可変領域配列ＩＧＫＶ１－３９^＊０１（配列番号１９５）およびヒトアクセプターＣＢＺ３９８９２－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ（ＣＢＺ３９８９２ＶＬ ｈＦｒｗｋ、配列番号１９４）とのアラインメントを示す。ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ（１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ）は配列番号１９６であり、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ（１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ）は配列番号１９７であり、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ（１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ）は配列番号１９８であり、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ（１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ）は配列番号１９９である。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるマウス１１Ｍ１４ＶＬのＣＤＲは太字である。

図７は、非クローン性マウス抗体上清によるＥＬＩＳＡによるヒトソルチリンへのヒトプログラニュリンの結合の阻害（パーセンテージＰＧＲＮ結合）を示す。

図８は、ＥＬＩＳＡによる、選択された精製モノクローナル抗体のソルチリンへの結合（左のグラフ）およびプログラニュリンのソルチリンへの結合の阻害（パーセンテージＰＧＲＮブロッキング、右のグラフ）を示す。右側の表は、選択された精製抗体についてのヒトソルチリン－ＥＣＤへのＡｂ結合のＥＣ５０（ｎＭ）および７．４ｎＭ ｍＡｂでのブロッキング率を示す。 同上。 同上。 同上。

図９は、選択されたモノクローナル抗体がニューロテンシンのソルチリンへの結合をブロックするかどうかを決定するためのＢｉａｃｏｒｅによる競合アッセイの結果を示す。表は、選択されたモノクローナル抗体のアッセイの結果をまとめたものである。データの例を３つのグラフに示す：８Ｈ２４に対する競合なし、１ Ｍ１６との弱い競合、および４Ｊ２２との競合。 同上。 同上。 同上。

図１０は、ＨＥＫ２９３細胞によって過剰発現されるヒトソルチリン対親ＨＥＫ細胞株と、ソルチリンを内因的に発現するＵ２５１ＭＧ細胞（ヒト神経膠芽腫細胞株）とへの選択された精製モノクローナル抗体の結合の結果を示す。左側のプロットは、ＨＥＫ２９３細胞アッセイ（プロットの左側の列）およびＵ２５１ＭＧ細胞アッセイ（プロットの右側の列）におけるモノクローナル抗体６Ｂ１５、７Ｂ１８、１０Ｂ６および１０Ｏ１６の結合を示す。右側の表は、選択されたモノクローナル抗体のアッセイの結果をまとめたものである。 同上。 同上。

図１１は、選択された精製モノクローナル抗体によるヒトソルチリン発現ＨＥＫ２９３細胞へのｈｕＰＧＲＮ結合の阻害（ＰＧＲＮブロッキング率）を示す。

図１２は、細胞表面ヒトソルチリン発現ＨＥＫ２９３細胞へのｈｕＰＧＲＮ結合の阻害の用量応答を示す。左側のプロットは、異なる効力を有する抗体の結合曲線を示す。右側の表は、選択されたモノクローナル抗体についてのアッセイの結果をまとめたものである。（１１ｎＭ ｍＡｂでの最大結合（％）） 同上。

図１３は、Ｕ２５１ＭＧ細胞を選択された精製モノクローナル抗体で処置した後の細胞外ＰＧＲＮおよび細胞表面ソルチリンレベルを示す。左側のプロットは、選択されたモノクローナル抗体についてのアッセイ結果を相関グラフとして示す。右側の表は、選択されたモノクローナル抗体についてのアッセイの結果をまとめたものである。 同上。

図１４は、カニクイザルにおける６０ｍｇ／ｋｇ投与後および３０ｍｇ／ｋｇ投与後の血漿中の抗ソルチリン抗体ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡレベルを示す（薬物動態研究）。カニクイザルにおける３０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの抗体投与後の血漿中の抗ソルチリン抗体レベル。Ａｂ群あたりの動物数Ｎ＝３。動物に３０ｍｇ／ｋｇの用量を投与し、４８日後に６０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ソルチリン抗体を投与した。

図１５は、非ヒト霊長類におけるｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡの６０ｍｇ／ｋｇ投与後および３０ｍｇ／ｋｇ投与後の血漿中ＰＧＲＮレベルを示す（薬力学研究）。カニクイザルにおける３０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの抗体単回投与後の血漿中のＰＧＲＮレベルの倍増。Ａｂ群あたりの動物数Ｎ＝３。三角形は、検出可能なレベルの抗薬物抗体を示した動物を示す。

図１６は、カニクイザルにおけるｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡの６０ｍｇ／ｋｇ投与後および３０ｍｇ／ｋｇ投与後のＣＳＦ ＰＧＲＮレベルを示す（薬力学研究）。カニクイザルにおける３０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの抗体単回投与後のＣＳＦ中のＰＧＲＮレベルの倍増。Ａｂ群あたりの動物数Ｎ＝３。三角形は、抗薬物抗体の存在を示した動物を示す。３０ｍｇ／ｋｇの抗ソルチリン抗体で処置した動物において７日目にＣＳＦ試料を採取しなかった。

図１７は、カニクイザルにおける６０ｍｇ／ｋｇのｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥを１週間ごとに４回反復投与した後の血漿中の抗ソルチリン抗体レベルを示す（薬物動態研究）。平均値±ＳＤ ６０ｍｇ／ｋｇのＡｂの１週間ごとに４回の反復投与による抗ソルチリン抗体血漿中レベル。Ｎ＝４。

図１８は、カニクイザルにおける６０ｍｇ／ｋｇのｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥを１週間ごとに４回反復投与した後のＣＳＦ中の抗ソルチリン抗体レベルを示す（薬物動態研究）。平均値±ＳＤ ６０ｍｇ／ｋｇのＡｂの１週間ごとに４回の反復投与による抗ソルチリンＡｂ ＣＳＦ中レベル。ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡについてはＮ＝４、およびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥについてはＮ＝３。

図１９は、６０ｍｇ／ｋｇのｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥを１週間ごとに４回反復投与した後のカニクイザルにおける血漿中プログラニュリンレベルを示す（薬力学研究）。血漿中の平均値±ＳＤ カニクイザルにおける血漿中のＰＧＲＮレベルの倍数。Ａｂ群あたりの動物数Ｎ＝４。

図２０は、６０ｍｇ／ｋｇのｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥを１週間ごとに４回反復投与した後のカニクイザルにおけるＣＳＦ中プログラニュリンレベルを示す（薬力学研究）。平均値±ＳＤ カニクイザルにおけるＣＳＦ中のＰＧＲＮレベルの倍数。ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ群の動物数Ｎ＝４、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ群の動物数Ｎ＝３。

図２１は、６０ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ＿ＹＴＥを１週間ごとに４回反復投与した後のカニクイザルＰＢＭＣ中のソルチリンレベルを示す。平均値±ＳＤ ６０ｍｇ／ｋｇ抗ソルチリン抗体を１週間ごとに４回投与したベースラインのパーセントとしてのカニクイザルＰＢＭＣ中ソルチリンレベル。１群あたりの動物数Ｎ＝４。総タンパク質レベルに対して正規化されたソルチリンレベル。

配列の簡単な説明
配列番号１は、ヒトソルチリン細胞外ドメインのアミノ酸配列を示す。

配列番号２は、マウス５Ｅ２０ＶＨ（ｍＩｇＧ１）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号３は、マウス５Ｅ２０ＶＨに対するシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号４は、マウス５Ｅ２０ＶＨのアミノ酸配列を示す。

配列番号５は、マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号６は、マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号７は、マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号８は、マウス５Ｅ２０ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号９は、マウス５Ｅ２０ＶＬに対するシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１０は、マウス５Ｅ２０ＶＬＶｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１１は、マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２は、マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１３は、マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４は、マウス５Ｅ２０抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７は、マウス５Ｅ２０抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１９は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号２０は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号２１は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２は、マウス５Ｅ２０抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３＞マウス５Ｅ２０抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ３。

配列番号２４は、キメラ５Ｅ２０重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２５は、キメラ５Ｅ２０軽鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２６は、マウス８Ｈ２４ＶＨ（ＩｇＧ２ｃ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号２７は、マウス８Ｈ２４ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２８は、マウス８Ｈ２４Ｖｈのアミノ酸配列を示す。

配列番号２９は、マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号３０は、マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号３１は、マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号３２は、マウス８Ｈ２４ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号３３は、マウス８Ｈ２４ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号３４は、マウス８Ｈ２４Ｖｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号３５は、マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号３６は、マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号３７は、マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号３８は、マウス８Ｈ２４抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号３９は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号４０は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号４１は、マウス８Ｈ２４抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号４２は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号４３は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号４４は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号４５は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号４６は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号４７は、マウス８Ｈ２４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号４８は、キメラ８Ｈ２４重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号４９は、キメラ８Ｈ２４軽鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号５０は、マウス１１Ｍ１４ＶＨ（ＩｇＧ１）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号５１は、マウス１１Ｍ１４ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号５２は、マウス１１Ｍ１４Ｖｈのアミノ酸配列を示す。

配列番号５３は、マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号５４は、マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号５５は、マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号５６は、マウス１１Ｍ１４Ｖｋ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号５７は、マウス１１Ｍ１４Ｖｋシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号５８は、マウス１１Ｍ１４Ｖｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号５９は、マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号６０は、マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号６１は、マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号６２は、マウス１１Ｍ１４抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号６３は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号６４は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号６５は、マウス１１Ｍ１４抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号６６は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号６７は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号６８は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号６９は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号７０は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号７１は、マウス１１Ｍ１４抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号７２は、Ａｌｔｅｒｎａｔｅ Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、配列番号１９８に存在）のアミノ酸配列を示す。

配列番号７３は、Ａｌｔｅｒｎａｔｅ Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ、配列番号１９９に存在）のアミノ酸配列を示す。

配列番号７４は、Ａｌｔｅｒｎａｔｅ Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、配列番号１９８に存在）のアミノ酸配列を示す。

配列番号７５は、Ａｌｔｅｒｎａｔｅ Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ、配列番号１９９に存在）のアミノ酸配列を示す。

配列番号７６は、マウス５Ｍ１３ＶＨ（ＩｇＧ１）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号７７は、マウス５Ｍ１３ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号７８＞マウス５Ｍ１３ＶＨアミノ酸配列。

配列番号７９は、マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号８０は、マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号８１は、マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号８２は、マウス５Ｍ１３ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号８３は、マウス５Ｍ１３ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号８４は、マウス５Ｍ１３ＶＬ Ｖｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号８５は、マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号８６は、マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号８７は、マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号８８は、マウス２Ｆ１８ＶＨ（ｍＩｇＧ１）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号８９は、マウス２Ｆ１８ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号９０は、マウス２Ｆ１８ＶＨのアミノ酸配列を示す。

配列番号９１は、マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号９２は、マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号９３は、マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号９４は、マウス２Ｆ１８ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号９５は、マウス２Ｆ１８ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号９６は、マウスＶｋ＿２Ｆ１８ＶＬのアミノ酸配列を示す。

配列番号９７は、マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号９８は、マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号９９は、マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１００は、マウス２Ｐ２２ＶＨ（ＩｇＧ２ｂ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１０１は、マウス２Ｐ２２ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１０２は、マウス２Ｐ２２ＶＨのアミノ酸配列を示す。

配列番号１０３は、マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１０４は、マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１０５は、マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１０６は、マウス２Ｐ２２ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１０７は、マウス２Ｐ２２ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１０８は、マウスＶｋ＿２Ｐ２２ＶＬのアミノ酸配列を示す。

配列番号１０９は、マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１１０は、マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１１１は、マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１１２は、マウス６Ｂ１５ＶＨ（ＩｇＧ１）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１１３は、６Ｂ１５ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１１４は、マウス６Ｂ１５ＶＨのアミノ酸配列を示す。

配列番号１１５は、マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１１６は、マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１１７は、マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１１８は、マウス６Ｂ１５ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１１９は、６Ｂ１５ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１２０は、マウス６Ｂ１５ＶＬＶｋ＿６Ｂ１５のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２１は、マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２２は、マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２３は、マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２４は、マウス２Ｃ１４ＶＨ（ＩｇＧ１）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１２５は、マウス２Ｃ１４ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１２６は、マウス２Ｃ１４ＶＨのアミノ酸配列を示す。

配列番号１２７は、マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２８は、マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１２９は、マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１３０は、マウス２Ｃ１４ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１３１は、マウス２Ｃ１４ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１３２は、マウス２Ｃ１４ＶＬＶｋ＿２Ｃ１４のアミノ酸配列を示す。

配列番号１３３は、マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１３４は、マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１３５は、マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１３６は、マウス９Ｎ１８ＶＨ（ＩｇＧ２ｂ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１３７は、マウス９Ｎ１８ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１３８は、マウス９Ｎ１８ＶＨのアミノ酸配列を示す。

配列番号１３９は、マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４０は、マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４１は、マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４２は、マウス９Ｎ１８ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１４３は、マウス９Ｎ１８ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１４４は、マウス９Ｎ１８ＶＬＶｋ＿９Ｎ１８のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４５は、マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４６は、マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４７は、マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１４８は、マウス４Ｎ２ＶＨ（ＩｇＧ３）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１４９は、マウス４Ｎ２ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１５０は、マウス４Ｎ２ＶＨＶｈ＿４Ｎ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５１は、マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５２は、マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５３は、マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５４は、マウス４Ｎ２ＶＬ（カッパ）のヌクレオチド配列を示す。

配列番号１５５は、マウス４Ｎ２ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号１５６は、マウス４Ｎ２ＶＬＶｋ＿４Ｎ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５７は、マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５８は、マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１５９は、マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６０は、３Ｖ６Ｆ－ＶＨ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。

配列番号１６１は、ＡＥＸ２９０８６－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１６２は、ＩＧＨＶ３－２１^＊０１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６３は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６４は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６５は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６６は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ４のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６７は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ５のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６８は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ６のアミノ酸配列を示す。

配列番号１６９は、ｈ５Ｅ２０ＶＨｖ７のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７０は、３Ｖ６Ｆ－ＶＬ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。

配列番号１７１は、ＢＡＨ０４６８７－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１７２は、ＩＧＫＶ１－１２^＊０１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７３は、ｈ５Ｅ２０ＶＬｖ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７４は、ｈ５Ｅ２０ＶＬｖ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７５は、ｈ５Ｅ２０ＶＬｖ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７６は、ｈ５Ｅ２０ＶＬｖ４のアミノ酸配列を示す。

配列番号１７７は、１ＭＲＣ－ＶＨ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。

配列番号１７８は、ＡＡＣ５１７１４－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１７９は、ＩＧＨＶ１－６９^＊０８＿ＩＧＨＪ１^＊０１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８０は、ｈ８Ｈ２４ＶＨｖ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８１は、ｈ８Ｈ２４ＶＨｖ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８２は、１ＭＲＣ－ＶＬ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。

配列番号１８３は、ＡＢＣ６６９１４－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１８４は、ＩＧＫＶ２－４０^＊０１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８５は、ｈ８Ｈ２４ＶＬｖ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８６は、ｈ８Ｈ２４ＶＬｖ２のアミノ酸配列を示す。

配列番号１８７は、１ ＭＱＫ－ＶＨ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。

配列番号１８８は、ＡＣＳ９６１９８－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１８９は、ＩＧＨＶ３－４８^＊０３のアミノ酸配列を示す。

配列番号１９０は、ｈ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９１は、ｈ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９２は、ｈ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９３は、１ ＭＱＫ－ＶＬ＿ｍＳｔのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９４は、ＣＢＺ３９８９２－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９５は、ＩＧＫＶ１－３９^＊０１のアミノ酸配列を示す。

配列番号１９６は、ｈ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９７は、ｈ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９８は、ｈ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号１９９は、ｈ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号２００は、ＨＡペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０１は、ｃ－Ｍｙｃペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０２は、抗体５Ｅ２０が結合したペプチドのコンセンサスモチーフのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０３は、抗体５Ｅ２０が結合したペプチドのコンセンサスモチーフのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０４は、抗体５Ｅ２０が結合したペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０５は、抗体５Ｅ２０が結合したペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０６は、抗体５Ｅ２０が結合した配列モチーフのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０７は、リンカーのアミノ酸配列を示す。

配列番号２０８は、キメラ１１Ｍ１４重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２０９は、キメラ１１Ｍ１４軽鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２１０は、ソルチリンの残基５２３～６１０のアミノ酸配列を示す。

配列番号２１１は、ソルチリンペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１２は、ソルチリンペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１３は、抗体８Ｈ２４が結合したペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１４は、抗体１１Ｍ１４が結合したペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１５は、ヒトソルチリン細胞外ドメインマイナスシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１６は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１のアミノ酸配列を示す。

配列番号２１７は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２ａのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１８は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２ｂのアミノ酸配列を示す。

配列番号２１９は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２０は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ４のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２１は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ５のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２２は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ６Ｎのアミノ酸配列を示す。

配列番号２２３は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ８Ｎのアミノ酸配列を示す。

配列番号２２４は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１１Ｎのアミノ酸配列を示す。

配列番号２２５は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１４Ｎのアミノ酸配列を示す。

配列番号２２６は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１６のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２７は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１７のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２８は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１８のアミノ酸配列を示す。

配列番号２２９は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１９のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３０は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２０のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３１は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２１のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３２は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２２のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３３は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２３のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３４は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２４のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３５は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２５のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３６は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２６のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３７は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２７のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３８は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２８のアミノ酸配列を示す。

配列番号２３９は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２９のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４０は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３０のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４１は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３１のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４２は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３２のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４３は、ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３３のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４４は、ｈｕ１１Ｍ１４＿Ｈ１ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ－重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４５は、ｈｕ１１Ｍ１４＿Ｌ３ ｂ－軽鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４６は、ｈｕ８Ｈ２４＿Ｈ１＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ－重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４７は、ｈｕ８Ｈ２４＿Ｌ２＿軽鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４８は、ｈｕ５Ｅ２０＿Ｈ７＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ－重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２４９は、ｈｕ５Ｅ２０＿Ｌ４＿軽鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２５０は、ｈｕ１１Ｍ１４＿Ｈ１ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿－重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２５１は、ｈｕ８Ｈ２４＿Ｈ１＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ－重鎖のアミノ酸配列を示す。

配列番号２５２は、ｈｕ５Ｅ２０＿Ｈ７＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿重鎖のアミノ酸配列を示す。

定義
モノクローナル抗体または他の生物学的実体は、典型的には単離された形態で提供される。これは、抗体または他の生物学的実体が、典型的には、その産生または精製から生じる干渉タンパク質および他の不純物に対して少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋であるが、モノクローナル抗体がその使用を容易にすることを意図した過剰の薬学的に許容され得る担体または他の賦形剤と組み合わされる可能性を排除しないことを意味する。モノクローナル抗体は、産生または精製からの干渉タンパク質および不純物が少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％ ｗ／ｗ純粋である場合がある。多くの場合、単離されたモノクローナル抗体または他の生物学的実体は、その精製後に残存する主要な高分子種である。

抗体のその標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、または１０^１２Ｍ^－１の親和性および／または結合力を意味する。特異的結合は、検出可能な程度に大きく、少なくとも１つの無関係な標的に対して生じる非特異的結合と区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成または特定の空間的適合（例えば、ｌｏｃｋ ａｎｄ ｋｅｙ型）の結果であり得るが、非特異的結合は、通常、ファンデルワールス力の結果である。しかしながら、特異的結合は、抗体がただ１つの標的に結合することを必ずしも意味しない。

基本抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００～１１０個またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含む。この可変領域は、最初に切断可能なシグナルペプチドに連結して発現される。シグナルペプチドを含まない可変領域は、成熟可変領域と呼ばれることがある。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを含まない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を画定する。

軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥと定義する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２個またはそれを超えるアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はまた、約１０個またはそれを超えるアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，Ｃｈ．７（その全体があらゆる目的のために参照により組み込まれる）を参照のこと。

免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域（本明細書ではそれぞれ「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも呼ばれる。）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって中断された「フレームワーク」領域からなる。フレームワーク領域は、抗原のエピトープへの特異的結合のためにＣＤＲを整列させるのに役立つ。ＣＤＲには、主に抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基が含まれる。アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、ＶＬドメインおよびＶＨドメインの両方は、以下のフレームワーク（ＦＲ）およびＣＤＲ領域を含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２および３は、本明細書ではそれぞれＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３とも呼ばれる。ＶＨドメインのＣＤＲ１、２および３は、本明細書ではそれぞれＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３とも呼ばれる。本出願が、ＲをＣ末端残基として有するＶＬ配列を開示する場合、Ｒは、代わりに、軽鎖定常領域のＮ末端残基であると見なすことができる。したがって、本出願はまた、Ｃ末端Ｒを伴わないＶＬ配列を開示するものとして理解されるべきである。

各ＶＬドメインおよびＶＨドメインへのアミノ酸の割り当ては、ＣＤＲの任意の従来の定義に従う。従来の定義には、Ｋａｂａｔの定義（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａの定義（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３，１９８９）；ＣＤＲ－Ｈ１がＣｈｏｔｈｉａおよびＫａｂａｔ ＣＤＲの組み合わせである、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｋａｂａｔ ＣＤＲの組み合わせ；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ社の抗体モデリングソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義；および、Ｍａｒｔｉｎら（ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）の接触定義（表１参照）。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基に同じ番号を割り当てる、広く使用されているナンバリング規則（Ｋａｂａｔナンバリング）を提供する。抗体がＣＤＲの特定の定義（例えば、Ｋａｂａｔ）によってＣＤＲを含むと言われる場合、その定義は、抗体中に存在するＣＤＲ残基の最小数（すなわち、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ）を指定する。別の従来のＣＤＲ定義内にあるが指定された定義外の他の残基も存在することを排除するものではない。例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲを含む抗体としては、他の可能性の中でもとりわけ、ＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含み、他のＣＤＲ残基を含まない抗体、およびＣＤＲ Ｈ１が複合Ｃｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ Ｈ１であり、他のＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含み、他の定義に基づく追加のＣＤＲ残基を含まない抗体が挙げられる。

^＊ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ－Ｈ１は、（ループの長さに応じて）Ｈ３２、Ｈ３３、またはＨ３４で終了し得る。これは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームが３５Ａおよび３５Ｂに余分な残基の挿入を配置するのに対して、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングは３１Ａおよび３１Ｂにそれらを配置するためである。Ｈ３５ＡもＨ３５Ｂも存在しない場合（Ｋａｂａｔナンバリング）、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループはＨ３２で終了する。Ｈ３５Ａのみが存在する場合、Ｈ３３で終了する。Ｈ３５ＡおよびＨ３５Ｂの両方が存在する場合、Ｈ３４で終了する。

「抗体」という用語は、インタクトな抗体およびその結合断片を含む。典型的には、断片は、別個の重鎖、軽鎖Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、Ｄａｂｓ、ナノボディおよびＦｖを含む標的への特異的結合に対して、それらが由来するインタクト抗体と競合する。断片は、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離によって産生することができる。「抗体」という用語には、二重特異性抗体および／またはヒト化抗体も含まれる。二重特異性または二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７－５３（１９９２））を有する人工ハイブリッド抗体である。いくつかの二重特異性抗体では、２つの異なる重鎖／軽鎖対は、ヒト化５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２の重鎖／軽鎖対と、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２によって結合されたものとは異なるソルチリン上のエピトープに特異的な重鎖／軽鎖対とを含む。

いくつかの二重特異性抗体では、一方の重鎖／軽鎖対は、下記にさらに開示されるようなヒト化５Ｅ２０抗体、ヒト化８Ｈ２４抗体、ヒト化１１Ｍ１４抗体、ヒト化５Ｍ１３抗体、ヒト化２Ｆ１８抗体、ヒト化２Ｐ２２抗体、ヒト化６Ｂ１５抗体、ヒト化２Ｃ１４抗体、ヒト化９Ｎ１８抗体またはヒト化４Ｎ２抗体であり、他方の重鎖／軽鎖対は、インスリンレセプター、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）レセプター、レプチンレセプター、もしくはリポタンパク質レセプター、またはトランスフェリンレセプターなどの、血液脳関門上に発現されるレセプターに結合する抗体に由来する（Ｆｒｉｄｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：４７７１－４７７５，１９９１；Ｆｒｉｄｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：３７３－３７７，１９９３）。そのような二重特異性抗体は、レセプター媒介トランスサイトーシスによって血液脳関門を通過して移入され得る。二重特異性抗体の脳取り込みは、血液脳関門レセプターに対するその親和性を低下させるように二重特異性抗体を操作することによってさらに高めることができる。レセプターに対する親和性の低下は、脳におけるより広い分布をもたらした（例えば、Ａｔｗａｌら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４３，２０１１；Ｙｕら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４４，２０１１を参照のこと）。

例示的な二重特異性抗体はまた、以下ものであり得る。（１）各軽鎖および重鎖が短いペプチド結合（Ｗｕら、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））Ｍｏｌｅｃｕｌｅ，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２０１０））を介してタンデムに２つの可変ドメインを含む二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ）；（２）標的抗原の各々に対して２つの結合部位を有する四価二重特異性抗体をもたらす２つの一本鎖ダイアボディの融合物であるＴａｎｄａｂ；（３）多価分子をもたらすｓｃＦｖとダイアボディとの組み合わせであるフレキシボディ（ｆｌｅｘｉｂｏｄｙ）；（４）Ｆａｂに適用した場合に、異なるＦａｂ断片に連結された２つの同一のＦａｂ断片からなる三価二重特異性結合タンパク質を生じ得る、プロテインキナーゼＡの「二量体化ドッキングドメイン」に基づく、いわゆる「ｄｏｃｋ ａｎｄ ｌｏｃｋ」分子；または（５）例えば、ヒトＦｃ領域の両末端に融合した２つのｓｃＦｖを含む、いわゆるＳｃｏｒｐｉｏｎ分子。二重特異性抗体を調製するために有用なプラットフォームの例としては、ＢｉＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社）、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ社）、ＦｃａｂおよびＭａｂ２（Ｆ－ｓｔａｒ社）、Ｆｃ操作型ＩｇＧ１（Ｘｅｎｃｏｒ社）またはＤｕｏＢｏｄｙ（Ｆａｂアーム交換に基づく、Ｇｅｎｍａｂ社）が挙げられる。

「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続したアミノ酸から形成される場合と、１またはそれを超えるタンパク質の三次折り畳みによって並置された非連続のアミノ酸から形成される場合の両方がある。隣接するアミノ酸から形成されたエピトープ（線状エピトープとしても知られる）は、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次折り畳みによって形成されたエピトープ（立体構造エピトープとしても知られる）は、典型的には、変性溶媒での処理時に失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的立体構造で少なくとも３個、より一般的には少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的立体構造を決定する方法には、例えば、Ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が含まれる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照のこと。

同じまたは重複するエピトープを認識する抗体は、１つの抗体が別の抗体の標的抗原への結合と競合する能力を示す単純なイムノアッセイで同定することができる。抗体のエピトープはまた、接触残基を同定するためにその抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によって定義することができる。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原中のすべてのアミノ酸変異が他方の結合を低減または排除する場合、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低減または排除するいくつかのアミノ酸変異が他方の結合を低減または排除する場合、２つの抗体は重複エピトープを有する。

抗体間の競合は、試験中の抗体が共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照のこと）。過剰量の試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍）が、競合結合アッセイで測定される場合、参照抗体の結合を少なくとも５０％阻害する場合、試験抗体は参照抗体と競合する。いくつかの試験抗体は、参照抗体の結合を少なくとも７５％、９０％または９９％阻害する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および立体障害が生じるように参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近位の隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。

「薬学的に許容され得る」という用語は、担体、希釈剤、医薬品添加剤または助剤が製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに実質的に有害ではないことを意味する。

「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。

対象が少なくとも１つの既知のリスク因子（例えば、遺伝的、生化学的、家族歴および状況的曝露）を有し、リスク因子を有する個体が、リスク因子を有しない個体よりも、疾患を発症するリスクが統計学的に有意に高い場合、個体は疾患のリスクが高い。

「生物学的試料」という用語は、生物源、例えばヒトまたは哺乳動物対象内の、または生物源から得ることができる生物学的材料の試料を指す。そのような試料は、器官、細胞小器官、組織、組織切片、体液、末梢血、血漿、血清、細胞、タンパク質およびペプチドなどの分子、ならびにそれらに由来する任意の部分または組み合わせであり得る。生物学的試料という用語はまた、試料を処理することによって誘導される任意の材料を包含し得る。誘導された材料は、細胞またはその子孫を含み得る。生物学的試料の処理は、濾過、蒸留、抽出、濃縮、固定、干渉成分の不活性化などのうちの１つまたはそれを超えるものを含み得る。

「コントロール試料」という用語は、プログラニュリン関連疾患に罹患した組織を含むことが知られていないもしくは疑われていない、または所与の種類の疾患組織を含むことが少なくとも知られていないもしくは疑われていない生物学的試料を指す。コントロール試料は、プログラニュリン関連疾患に罹患していない個体から得ることができる。あるいは、コントロール試料は、プログラニュリン関連疾患に罹患している患者から得ることができる。そのような試料は、プログラニュリン関連疾患を含むと考えられる生物学的試料と同時に、または異なる機会に得ることができる。生体試料およびコントロール試料の両方を同じ組織から得ることができる。好ましくは、コントロール試料は、本質的にまたは完全に正常な健康な組織からなり、プログラニュリン関連疾患に罹患した領域を含むと考えられる生物学的試料と比較して使用することができる。好ましくは、コントロール試料中の組織は、生体試料中の組織と同じタイプである。好ましくは、生物学的試料中にあると考えられるプログラニュリン関連疾患に罹患した細胞は、コントロール試料中の細胞のタイプと同じ細胞タイプ（例えば、ニューロンまたはグリア）から生じる。

「疾患」という用語は、生理学的機能を損なう任意の異常な状態を指す。この用語は、病因の性質にかかわらず、生理学的機能が損なわれている任意の障害、疾病、異常、病理、病気、症状または症候を包含するために広く使用される。

「症候」という用語は、対象によって知覚されるような、歩行の変化などの疾患の主観的な証拠を指す。「徴候」は、医師によって観察される疾患の客観的な証拠を指す。

「処置に対する陽性応答」という用語は、処置を受けていないコントロール集団の平均応答と比較して、個々の患者におけるより好ましい応答または患者の集団における平均応答を指す。

アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は以下のように分類される：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のメンバーと交換することを構成する。

配列同一性の割合は、Ｋａｂａｔナンバリング規則によって最大にアラインメントされた抗体配列を用いて決定される。アラインメント後に、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が参照抗体の同じ領域と比較されている場合、対象と参照抗体領域との間の配列同一性のパーセンテージは、対象と参照抗体領域との両方において同じアミノ酸によって占有される位置の数を、ギャップをカウントしないで、２つの領域のアラインメントされた位置の総数で割ったものに１００を乗じてパーセンテージに変換したものである。

列挙された１つまたは複数の要素を「含む」もしくは「備える」組成物または方法は、具体的に列挙されていない他の要素を含んでもよい。例えば、抗体を「含む」もしくは「備える」組成物は、抗体を単独でまたは他の成分と組み合わせて含有し得る。

値の範囲の指定は，範囲内のすべての整数，または範囲を定義するすべての整数，および範囲内の整数によって定義されるすべての部分範囲を含む。

文脈から明らかでない限り、「約」という用語は、記載された値の測定の標準誤差（例えば、ＳＥＭ）内の値などの実質的でない変動を包含する。

統計学的有意性はｐ≦０．０５を意味する。

本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の参照を含む。例えば、「化合物」または「少なくとも１つの化合物」という用語は、それらの混合物を含む複数の化合物を含むことができる。
詳細な説明
Ｉ．全般

本発明は、ソルチリンに結合する抗体を提供する。

本発明の例示的な抗体は、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２である。本発明のいくつかの抗体は、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を処置し、その進行を阻害し、または遅延させるのに役立つ。機構の理解は本発明の実施に必要ではないが、他の機構の中でも、抗体結合ソルチリンの結果として細胞外プログラニュリンレベルの上昇が起こり得る。本発明の抗体またはそのような抗体を誘導する薬剤は、前頭側頭型認知症、ならびにアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病（神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）の一種、神経変性障害、および老化に関連する神経変性障害を含むプログラニュリンレベルの変化に関連する他の疾患および障害を処置または予防する方法において使用することができる。加齢に関連する神経変性障害は、不可逆的に進行する傾向があり、典型的には、加齢の１つまたは複数の生物学的特徴：ゲノム不安定性、テロメア短縮、エピジェネティック変化、タンパク質恒常性の喪失、ミトコンドリア機能不全、細胞老化、栄養感知制御不全、幹細胞枯渇および細胞間コミュニケーション変化（例えば、Ｈｏｕ，Ｙら、２０１９，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ １５，ｐａｇｅｓ ５６５－５８１を参照のこと）に関連する。
ＩＩ．標的分子

文脈から明らかでない限り、ソルチリンへの言及は、翻訳後修飾（例えば、リン酸化、糖化またはアセチル化）が存在するかどうかにかかわらず、可溶性形態を含むすべてのアイソフォームを含む、天然のヒト形態のソルチリンを意味する。ソルチリンの細胞外ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。３３アミノ酸シグナルペプチドを太字で示す。

３３アミノ酸シグナルペプチドを含まないソルチリンの細胞外ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。

ソルチリンへの言及には、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースに列挙されている既知の自然変異およびその並べ替え、ならびに病状に関連する突然が含まれる。

さらに、ソルチリンへの言及は、既知の翻訳後修飾を有するソルチリンを含む。既知の翻訳後修飾の例は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースに列挙されている。

文脈から明らかでない限り、ソルチリンまたはその断片への言及は、そのアイソフォーム、変異体および対立遺伝子バリアントを含む天然のヒトアミノ酸配列を含む。
ＩＩＩ．抗体
Ａ．結合特異性および機能特性

本発明は、ソルチリンに特異的に結合する抗体を提供する。実施例は、ヒトソルチリンに対する８つのマウスモノクローナル抗体の単離を記載する。これらの抗体のうちの３つのエピトープ特異性がマッピングされている。

一次スクリーニングから、抗体５Ｅ２０のエピトープ特異性を、配列番号２１５のヒトソルチリンＥＣＤの約残基５５５～５６１（ＦＴＥＳＦＬＴ、配列番号２０２）内にあるようにマッピングした。更なるスクリーニングで、エピトープを配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０ Ｐ５１０およびＹ５３５にマッピングした。

一次スクリーニングから、抗体８Ｈ２４のエピトープ特異性を、配列番号２１５のヒトソルチリンＥＣＤの約残基１３４～１４３（ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ、配列番号２１３）内にあるようにマッピングした。更なるスクリーニングで、エピトープを配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７にマッピングした。

一次スクリーニングから、抗体１１Ｍ１４のエピトープ特異性を、配列番号２１５のヒトソルチリンＥＣＤの約残基５５３～５６２内にあるようにマッピングした。更なるスクリーニングで、エピトープを、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０にマッピングした。

いくつかの抗体は、Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）内のエピトープに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基５８８～５９４（配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基５５５～５６１に対応する）、すなわち残基ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基５９０～５９３（配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基５５７～５６０に対応する）、すなわちＥＳＦＬ（配列番号２０３）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基６３２～６４３（配列番号２１５の残基５９９～６１０に対応する）、すなわちＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基６６３－６７４（配列番号１５のソルチリンＥＣＤの残基６３０－６４１に対応する）、すなわち残基ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。本発明のいくつかの抗体は、コンセンサスモチーフＥ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。

いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＨＹＹＴＩＬＤＳＧＧＩＩＶＡＩＥＨＳＳＲＰＩＮＶＩＫＦＳＴＤＥＧＱＣＷＱＴＹＴＦＴＲＤＰＩＹＦＴＧＬＡＳＥＰＧＡＲＳＭＮＩＳＩＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳＱＷＶＳＹＴＩＤＦＫＤＩＬＥＲ（配列番号２１０）（配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基５２３～６１０に対応する）内で結合する。いくつかの抗体は、先行する配列内のペプチドに特異的に結合する。この配列内のペプチドには、ＴＧＬ、ＦＴＥＳＦＬＴＳＱＷ（配列番号２１１）またはＬＴＳＱＷ（配列番号２１２）を含むかまたはそれからなるアミノ酸配列が含まれる。

いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３、配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基１６７～１７６に対応する、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基１３４～１４３に対応する）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４、配列番号１のソルチリンＥＣＤの残基５８６～５９５に対応する、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基５５３～５６２に対応する）を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７に特異的に結合する。いくつかの抗体は、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０に特異的に結合する。いくつかの抗体は、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５に特異的に結合する。すなわち、抗体のソルチリンＥＣＤへの結合は、エピトープを形成すると指定された残基のいずれかの変異によって減少させることができる。

これらの抗体は、天然源から精製されたまたは組換え発現されたソルチリンポリペプチドで免疫化することによって得ることができる。本発明はまた、前述の抗体のいずれかと同じエピトープ、例えば、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２のエピトープなどに結合する抗体を提供する。例えば、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と競合するなど、前述の抗体のいずれかとソルチリンへの結合に対して競合する抗体も含まれる。一実施形態では、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２などの参照抗体と同じエピトープに結合するか、または参照抗体と競合する抗体は、細胞へのプログラニュリン内在化を阻害する能力などのその機能的特性の１つまたはそれを超えるものを共有する。必要に応じて、そのような特性は、実験誤差内で同じ程度まで、または参照抗体のそれよりも大きい程度まで有する。ソルチリンに特異的に結合するいくつかの抗体は、他のＳＯＲＴ１リガンド、例えば、ニューロテンシンのソルチリンへの結合を阻害することなく、プログラニュリンレベルを増加させる。ソルチリンに特異的に結合するいくつかの抗体は、ソルチリンの内在化を誘導することなく結合するものである。

上記の抗体は、アミノ酸配列ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＥＳＦＬ（配列番号２０３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ）（配列番号２１３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチドで免疫化することによって、またはそのような残基を含む全長ソルチリンＥＣＤポリペプチドもしくはその断片で免疫化し、そのような残基を含むペプチドへの特異的結合についてスクリーニングすることによってデノボで生成することができる。配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０を含むかもしくはそれからなる、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５を含むかもしくはそれからなる、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７を含むかもしくはそれからなるエピトープなどの立体構造エピトープに対する抗体は、エピトープの残基を含む全長ＥＣＤまたはその断片で免疫化することによって生成することができる。そのようなソルチリンペプチドは、好ましくは、ペプチドに対する抗体応答を誘発するのに役立つ異種コンジュゲート分子に結合している。結合は、直接であっても、スペーサーペプチドまたはアミノ酸を介してであってもよい。システインは、その遊離ＳＨ基が担体分子の結合を容易にするので、スペーサーアミノ酸として使用される。グリシンとペプチドとの間にシステイン残基を含むかまたは含まないポリグリシンリンカー（例えば、２～６個のグリシン）も使用することができる。担体分子は、ペプチドに対する抗体応答を誘発するのに役立つＴ細胞エピトープを提供するのに用いられる。いくつかの担体、特にキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、オボアルブミンおよびウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が一般的に使用されている。ペプチドスペーサーは、固相ペプチド合成の一部としてペプチド免疫原に添加することができる。担体は、典型的には化学架橋によって添加される。使用され得る化学的架橋剤のいくつかの例としては、クロス－Ｎ－マレイミド－６－アミノカプロイルエステルまたはｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．１９８８；Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａら、Ｎａｔｕｒｅ，３３６：７７８－７８０（１９８８）；Ｃｈｉｃｚら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７８：２７－４７（１９９３）；Ｈａｍｍｅｒら、Ｃｅｌｌ ７４：１９７－２０３（１９９３）；Ｆａｌｋ Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，３９：２３０－２４２（１９９４）；国際公開第９８／２３６３５号；および、Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６０：３３６３－３３７３（１９９８）を参照のこと）が挙げられる。存在する場合、担体およびスペーサーは、免疫原のいずれかの末端に結合され得る。

任意選択のスペーサーおよび担体を有するペプチドは、以下により詳細に記載されるように、実験動物またはＢ細胞を免疫化するために使用され得る。ハイブリドーマ上清を、アミノ酸配列ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＥＳＦＬ（配列番号２０３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチドに結合する能力について試験することができる。立体構造エピトープについては、ソルチリンの細胞外ドメインに結合する抗体を、参照抗体との競合についてスクリーニングすることができ、および／または結合がエピトープ内の一部または全部の残基の変異によって減少することを決定することができる。立体構造エピトープのいくつかの残基が典型的な線状エピトープの長さ内にクラスター化している場合（例えば、最大約１５残基）、これらの残基を含むかまたはこれらからなるペプチドを使用して抗体を誘発することができる。したがって、例えば、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７によって定義されるエピトープについては、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基５５７～５６０を含むかまたはそれからなるペプチドを使用して抗体を誘発することができる。配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０によって定義されるエピトープについては、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基５５７～５６１を含むかまたはそれからなるペプチドを使用して抗体を誘発することができる。配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５によって定義されるエピトープについては、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基５５７～５６０を含むかまたはそれからなるペプチドを使用して抗体を誘発することができる。ペプチドは、スクリーニングアッセイを容易にするために、担体または他のタグに結合することができる。この場合、担体またはタグは、優先的には、ソルチリンペプチドよりもむしろスペーサーまたは担体に特異的な抗体を排除するための免疫化に使用されるスペーサーおよび担体分子の組み合わせとは異なる。

５Ｅ２０と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する例示的な抗体である。５Ｅ２０は、それぞれ配列番号４および配列番号１０によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、５Ｅ２０への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。抗体は［寄託番号］として寄託されている。この抗体は、アミノ酸配列ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＥＳＦＬ（配列番号２０３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ（配列番号２０４）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）を含むかもしくはそれからなる、またはアミノ酸配列Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）を含むかもしくはそれからなるペプチドに特異的に結合し、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０およびＰ５１０およびＹ５３５に特異的に結合する。５Ｅ２０の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号５～７と示し、５Ｅ２０の軽鎖のＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１１～１３と示す。マウス５Ｅ２０可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号３である。マウス５Ｅ２０可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号９である。

８Ｈ２４と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。８Ｈ２４は、それぞれ配列番号２８および配列番号３４によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、８Ｈ２４への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。８Ｈ２４は［寄託番号］として寄託されている。この抗体は、アミノ酸配列ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）を含むかもしくはそれからなるペプチドに特異的に結合するか、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７に特異的に結合する。８Ｈ２４の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号２９～３１と示し、８Ｈ２４の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号３５～３７と示す。マウス８Ｈ２４可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号２７である。マウス８Ｈ２４可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号３３である。

１１Ｍ１４と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。１１Ｍ１４は、それぞれ配列番号５２および配列番号５８によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、１１Ｍ１４への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。１１Ｍ１４は［寄託番号］として寄託されている。この抗体は、アミノ酸配列ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかもしくはそれからなるペプチドに特異的に結合するか、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０に特異的に結合する。１１Ｍ１４の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号５３～５５と示し、１１Ｍ１４の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号５９～６１と示す。マウス１１Ｍ１４可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号５１である。マウス１１Ｍ１４可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号５７である。

５Ｍ１３と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。５Ｍ１３は、それぞれ配列番号７８および配列番号８４によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、５Ｍ１３への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。５Ｍ１３は［寄託番号］として寄託されている。５Ｍ１３の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号７９～８１と示し、５Ｍ１３の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号８５～８７と示す。マウス５Ｍ１３可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号７７である。マウス５Ｍ１３可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号８３である。

２Ｆ１８と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。２Ｆ１８は、それぞれ配列番号９０および配列番号９６によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、２Ｆ１８への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。２Ｆ１８は［寄託番号］として寄託されている。２Ｆ１８の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号９１～９３と示し、２Ｆ１８の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号９７～９９と示す。マウス２Ｆ１８可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号８９である。マウス２Ｆ１８可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号９５である。

２Ｐ２２と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。２Ｐ２２は、それぞれ配列番号１０２および配列番号１０８によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、２Ｐ２２への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。２Ｐ２２は［寄託番号］として寄託されている。２Ｐ２２の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１０３～１０５と示し、２Ｐ２２の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１０９～１１１と示す。マウス２Ｐ２２可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１０１である。マウス２Ｐ２２可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１０７である。

６Ｂ１５と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。６Ｂ１５は、それぞれ配列番号１１４および配列番号１２０によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、６Ｂ１５への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。６Ｂ１５は［寄託番号］として寄託されている。６Ｂ１５の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１１５～１１７と示し、６Ｂ１５の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１２１～１２３と示す。マウス６Ｂ１５可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１１３である。マウス６Ｂ１５可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１１９である。

２Ｃ１４と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。２Ｃ１４は、それぞれ配列番号１２６および配列番号１３２によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、２Ｃ１４への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。２Ｃ１４は［寄託番号］として寄託されている。２Ｃ１４の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲは、それぞれ配列番号１２７～１２９と呼ばれ、２Ｃ１４の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲは、それぞれ配列番号１３３～１３５と呼ばれる。マウス２Ｃ１４可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１２５である。マウス２Ｃ１４可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１３１である。

９Ｎ１８と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。９Ｎ１８は、それぞれ配列番号１３８および配列番号１４４によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、９Ｎ１８への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。９Ｎ１８は［寄託番号］として寄託されている。９Ｎ１８の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１３９～１４１と示し、９Ｎ１８の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１４５～１４７と示す。マウス９Ｎ１８可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１３７である。マウス９Ｎ１８可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１４３である。

４Ｎ２と呼ばれる抗体は、ソルチリンに特異的に結合する別の例示的な抗体である。４Ｎ２は、それぞれ配列番号１５０および配列番号１５６によって特徴付けられる成熟可変重鎖および軽鎖領域（シグナルペプチドの切断後）を有する。文脈から明らかでない限り、４Ｎ２への言及は、この抗体のマウス、キメラ、ベニアリングおよびヒト化形態のいずれかを指すと理解されるべきである。４Ｎ２は［寄託番号］として寄託されている。４Ｎ２の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１５１～１５３と示し、４Ｎ２の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１５７～１５９と示す。マウス４Ｎ２可変重鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１４９である。マウス４Ｎ２可変軽鎖の例示的なシグナルペプチド配列は、配列番号１５５である。

本発明のいくつかの抗体は、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と呼ばれる抗体と同じまたは重複するエピトープに結合する。そのような結合特異性を有する他の抗体は、所望のエピトープ（例えば、アミノ酸配列ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＥＳＦＬ（配列番号２０３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ（配列番号２０４）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）を含むかもしくはそれからなる、またはアミノ酸配列Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ）（配列番号２１３）を含むかもしくはそれからなる、アミノ酸配列ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかもしくはそれからなるソルチリンもしくはその一部でマウスを免疫化することによって産生することができる。配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０を含むかもしくはそれらからなる、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７を含むかもしくはそれらからなる立体構造エピトープ、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５を含むかもしくはそれらからなるエピトープに結合する抗体を誘発するために、ペプチドの残基を含む全長ＥＣＤまたはその断片を使用することができる。得られた抗体を、必要に応じて、マウス５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２の可変領域を有する抗体と競合してソルチリンへの結合についてスクリーニングすることができる。所望のエピトープを含むソルチリンの断片は、断片に対する抗体応答を誘発するのに役立つ担体に連結することができ、および／またはそのような応答を誘発するのに役立つアジュバントと組み合わせることができる。そのような抗体は、特定の残基の変異体と比較して、ソルチリンまたはその断片への示差的結合についてスクリーニングすることができる。そのような変異体に対するスクリーニングは、結合が特定の残基の変異誘発によって阻害され、他の例示された抗体の機能的特性を共有する可能性が高い抗体の同定を可能にする結合特異性をより正確に定義する。変異は、標的全体またはエピトープが存在することが知られているその部分全体にわたって、一度に１残基ずつ、またはより広く間隔を置いて配置された間隔でのアラニン（またはアラニンが既に存在する場合はセリン）による系統的な置換であり得る。同じ変異のセットが２つの抗体の結合を著しく低下させる場合、２つの抗体は同じエピトープに結合する。

選択されたマウス抗体の結合特異性を有する抗体（例えば、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２）は、ファージディスプレイ法の変形を用いて産生することもできる。Ｗｉｎｔｅｒ，国際公開第９２／２０７９１を参照のこと。この方法は、ヒト抗体を産生するのに特に適している。この方法では、選択されたマウス抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のいずれかが出発物質として使用される。例えば、軽鎖可変領域が出発物質として選択される場合、メンバーが同じ軽鎖可変領域（すなわち、マウス出発物質）および異なる重鎖可変領域を示すファージライブラリーが構築される。重鎖可変領域は、例えば、再編成されたヒト重鎖可変領域のライブラリーから得ることができる。ソルチリンまたはその断片（例えば、少なくとも１０^８、好ましくは少なくとも１０^９Ｍ^－１）に対して強い特異的結合を示すファージを選択する。次いで、このファージ由来の重鎖可変領域は、更なるファージライブラリーを構築するための出発材料として用いられる。このライブラリーでは、各ファージは、同じ重鎖可変領域（すなわち、第１のディスプレイライブラリーから同定された領域）および異なる軽鎖可変領域を提示する。軽鎖可変領域は、例えば、再編成されたヒト可変軽鎖領域のライブラリーから得ることができる。ここでも、ソルチリンまたはその断片に対する強い特異的結合を示すファージを選択する。得られた抗体は、通常、マウス出発物質と同じまたは類似のエピトープ特異性を有する。

５Ｅ２０の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号５～７と示し、５Ｅ２０の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１１～１３と示す。

表２は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔとの組み合わせ（本明細書では「Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ」とも呼ばれる）、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔによって定義される５Ｅ２０ ＣＤＲを示す。

８Ｈ２４の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号２９～３１と示し、８Ｈ２４の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号３５～３７と示す。

表３は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔとの組み合わせ（本明細書では「Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ」とも呼ばれる）、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔによって定義される８Ｈ２４ ＣＤＲを示す。

１１Ｍ１４の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号５３～５５と示し、１１Ｍ１４の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号５９～６１と示す。

表４は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔとの組み合わせ（本明細書では「Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ」とも呼ばれる）、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔによって定義される１１Ｍ１４ ＣＤＲを示す。

５Ｍ１３の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号７９～８１と示し、５Ｍ１３の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号８５～８７と示す。

２Ｆ１８の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号９１～９３と示し、２Ｆ１８の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号９７～９９と示す。

２Ｐ２２の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１０３～１０５と示し、２Ｐ２２の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１０９～１１１と示す。

６Ｂ１５の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１１５～１１７と示し、６Ｂ１５の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１２１～１２３と示す。

２Ｃ１４の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲは、それぞれ配列番号１２７～１２９と呼ばれ、２Ｃ１４の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲは、それぞれ配列番号１３３～１３５と呼ばれる。

９Ｎ１８の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１３９～１４１と示し、９Ｎ１８の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１４５～１４７と示す。

４Ｎ２の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１５１～１５３と示し、４Ｎ２の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲをそれぞれ配列番号１５７～１５９と示す。

他の抗体、例えば、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２を、例示的な抗体の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発によって得ることができる。成熟重鎖および／または軽鎖可変領域のアミノ酸配列において５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、その機能的特性を維持し、かつ／または少数の機能的に不連続なアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失もしくは挿入によってそれぞれの抗体と異なるモノクローナル抗体も本発明に含まれる。５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２の対応するＣＤＲと９０％、９５％、９９％または１００％同一である、任意の従来の定義、好ましくはＫａｂａｔによって定義される少なくとも１つまたはすべての６つのＣＤＲを有するモノクローナル抗体も含まれる。

本発明はまた、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２由来の一部または全部の（例えば、３、４、５および６）ＣＤＲを完全にまたは実質的に有する抗体を提供する。そのような抗体は、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８もしくは４Ｎ２の重鎖可変領域から完全にもしくは実質的に少なくとも２つ、通常は３つすべてのＣＤＲを有する重鎖可変領域、および／または５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８もしくは４Ｎ２の軽鎖可変領域から完全にもしくは実質的に少なくとも２つ、通常は３つすべてのＣＤＲを有する軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、重鎖および軽鎖の両方を含み得る。ＣＤＲは、ＣＤＲ－Ｈ２（Ｋａｂａｔによって定義される場合）が６、５、４、３、２もしくは１つ以下の置換、挿入または欠失を有し得ることを除いて、４、３、２もしくは１つ以下の置換、挿入または欠失を含む場合、対応する５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２ ＣＤＲに実質的に由来する。そのような抗体は、成熟重鎖および／または軽鎖可変領域のアミノ酸配列において５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有し、それらの機能的特性を維持することができ、かつ／または少数の機能的に不連続なアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失または挿入によって５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２とは異なり得る。

そのようなアッセイによって同定されたいくつかの抗体は、ソルチリンに結合することができる。

本発明はさらに、残基Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）、残基ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、残基ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、残基ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ（配列番号２０４）または残基ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）からなるペプチドに特異的に結合するための手段、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５に特異的に結合するための手段を提供する。例示的な手段は、配列番号５～７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１１～１３の軽鎖ＣＤＲを含む抗体である。

本発明はさらに、残基ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）からなるペプチドに特異的に結合するための手段、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７に特異的に結合するための手段を提供する。例示的な手段は、配列番号２９～３１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号３５～３７の軽鎖ＣＤＲを含む抗体である。

本発明はさらに、残基ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）からなるペプチドに特異的に結合するための手段、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０に特異的に結合するための手段を提供する。例示的な手段は、配列番号５３～５５の重鎖ＣＤＲおよび配列番号５９～６１の軽鎖ＣＤＲを含む抗体である。
Ｂ．非ヒト抗体

ソルチリンまたはその断片（例えば、ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、またはＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ）（配列番号２１３）、またはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）のアミノ酸配列を含むペプチド）に対する他の非ヒト抗体、例えばマウス、モルモット、霊長類、ウサギまたはラットの産生は、例えば、動物をソルチリンまたはその断片で免疫化することによって達成することができる。Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ＣＳＨＰ ＮＹ，１９８８）（あらゆる目的のために参照により組み込まれる）を参照のこと。配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、およびＱ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９、およびＬ５６０、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０およびＰ５１０、ならびにＹ５３５を含むエピトープなどの立体的エピトープに対する抗体は、全長ＥＣＤまたはエピトープ残基にまたがるのに十分なＥＣＤを使用して誘発することができる。必要に応じて、免疫原は、Ｃ末端ＨＩＳタグを有する組換えヒトソルチリンの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ）であり得る。必要に応じて、動物を、担体に連結されたＥ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）によって表されるペプチドを含むソルチリン断片で免疫化する。必要に応じて、ペプチドは、ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）またはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）である。そのような免疫原は、天然源から、ペプチド合成によって、または組換え発現によって得ることができる。必要に応じて、免疫原は、担体タンパク質と融合されて投与され得るか、または別の方法で複合化され得る。必要に応じて、免疫原はアジュバントと共に投与され得る。以下に記載されるように、いくつかのタイプのアジュバントを使用することができる。完全フロイントアジュバント、続いて不完全アジュバントを実験動物の免疫化に使用することができる。ウサギまたはモルモットは、典型的には、ポリクローナル抗体を作製するために使用される。マウスは、典型的には、モノクローナル抗体を作製するために使用される。抗体を、ソルチリンまたはソルチリン内のエピトープ（例えば、ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）、ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）への、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７によって定義されるエピトープへの、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０によって定義されるエピトープへの、または配列番号２１５の残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０およびＰ５１０、ならびにＹ５３５によって定義されるエピトープへの特異的結合についてスクリーニングする。必要に応じて、スクリーニングは、ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）、もしくはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）、またはＥ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）によって表されるコンセンサスモチーフを含む１５アミノ酸ペプチドに対して行うことができる。必要に応じて、ペプチドは、ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）、またはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかまたはそれからなる。そのようなスクリーニングは、配列番号２１６～２４３のソルチリンバリアント、または配列番号１のアミノ酸残基５８８～５９４もしくは５９０～５９３もしくは６３２～６４３もしくは６６３～６７４もしくは１６７～１７６もしくは５８６～５９５を含むかもしくはそれからなるソルチリンバリアント、またはこれらの残基内の変異体などのソルチリンバリアントの集合に対する抗体の結合を決定し、どのソルチリンバリアントが抗体に結合するかを決定することによって達成することができる。結合は、例えば、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳまたはＥＬＩＳＡによって評価することができる。
Ｃ．ヒト化抗体

ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体由来のＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列に移植された遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ、米国特許第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｃａｒｔｅｒ、米国特許第６，４０７，２１３号；Ａｄａｉｒ、米国特許第５，８５９，２０５号；およびＦｏｏｔｅ、米国特許第６，８８１，５５７号を参照のこと）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、そのような配列の組み合わせ、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的にドナー抗体由来の少なくとも３つ、４つ、５つまたはすべてのＣＤＲと、存在する場合、完全にまたは実質的にヒト抗体配列由来の可変領域フレームワーク配列および定常領域とを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体重鎖由来の少なくとも１つ、２つ、および通常は３つすべてのＣＤＲと、存在する場合、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列由来の重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域とを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体軽鎖由来の少なくとも１つ、２つ、および通常は３つすべてのＣＤＲと、存在する場合、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列由来の軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域とを有する。ナノボディおよびｄＡｂ以外に、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖およびヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体中のＣＤＲは、対応する残基（任意の従来の定義によって定義されるが、好ましくはＫａｂａｔによって定義される）の少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一である場合、非ヒト抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔによって定義される対応する残基の少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％が同一である場合、それぞれヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来する。ヒト化抗体の２０１４年世界保健機関（ＷＨＯ）国際一般名称（ＩＮＮ）定義の下でヒト化と分類されるためには、抗体は、ヒト生殖細胞系抗体配列（すなわち、体細胞高頻度変異の前）に対して少なくとも８５％の同一性を有しなければならない。混合抗体は、一方の抗体鎖（例えば、重鎖）が閾値を満たすが、他方の鎖（例えば、軽鎖）が閾値を満たさない抗体である。両方の鎖の可変フレームワーク領域がいくつかのマウス復帰変異を有する実質的にヒトであったとしても、どちらの鎖も閾値を満たさない場合、抗体はキメラとして分類される。Ｊｏｎｅｓら、（２０１６）Ｔｈｅ ＩＮＮ ａｎｄ ｏｕｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ，ｍＡｂｓ８：１，１－９，ＤＯＩ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１５．１１１４３２０を参照のこと。「ＷＨＯ－ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）」（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ）２０１４も参照のこと。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆから入手可能であり、参照により本明細書に組み込まれる。誤解を避けるために、本明細書で使用される「ヒト化」という用語は、ヒト化抗体の２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義に限定されることを意図しない。本明細書で提供されるヒト化抗体のいくつかは、ヒト生殖細胞系配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、本明細書で提供されるヒト化抗体のいくつかは、ヒト生殖細胞系配列に対して８５％未満の配列同一性を有する。本明細書で提供されるヒト化抗体の重鎖のいくつかは、ヒト生殖系列配列に対して約６０％～１００％の配列同一性、例えば、約６０％～６９％、７０％～７９％、８０％～８４％または８５％～８９％の範囲の配列同一性を有する。いくつかの重鎖は、２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義を下回り、例えば、ヒト生殖系列配列に対して約６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％または８２％、８３％または８４％の配列同一性を有するが、他の重鎖は、２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義を満たし、ヒト生殖系列配列に対して約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％またはそれを超える配列同一性を有する。本明細書で提供されるヒト化抗体の軽鎖のいくつかは、ヒト生殖系列配列に対して約６０％～１００％の配列同一性、例えば、約８０％～８４％または８５％～８９％の範囲の配列同一性を有する。いくつかの軽鎖は２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義を下回り、例えば、ヒト生殖系列配列に対して約８１％、８２％、８３％または８４％の配列同一性を有するが、他の軽鎖は２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義を満たし、ヒト生殖系列配列に対して約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％またはそれを超える配列同一性を有する。２０１４年のＷＨＯのＩＮＮ定義のもとで「キメラ」である本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、ヒト生殖系列配列に対して８５％未満の同一性を有する重鎖と、対になるヒト生殖系列配列に対して８５％未満の同一性を有する軽鎖とを有する。本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、例えば、ヒト生殖系列配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖と、対になるヒト生殖系列配列に対して８５％未満の配列同一性を有する軽鎖とを有するか、またはその逆である、２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義の「混合」である。本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、「ヒト化」の２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義を満たし、ヒト生殖系列配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖と、対になるヒト生殖系列配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖とを有する。本明細書で提供されるいくつかのヒト化抗体は、「混合」の２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの定義を満たす。２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの「混合」の定義を満たす例示的な５Ｅ２０抗体には、配列番号１６３～１６６および配列番号１６８のいずれかのアミノ酸配列を有する成熟重鎖と、対になる配列番号１７３～１７６のいずれかのアミノ酸配列を有する成熟軽鎖配列とを有する抗体が含まれる。２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの「混合」の定義を満たす例示的な８Ｈ２４抗体には、配列番号１８０または配列番号１８１のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖配列と、対をなす配列番号１８５または配列番号１８６のアミノ酸配列を有する成熟重鎖とを有する抗体が含まれる。２０１４年のＷＨＯのＩＮＮの「混合」の定義を満たす例示的な１１Ｍ１４抗体には、配列番号１９６～１９９のいずれかのアミノ酸配列を有する成熟軽鎖配列と、対をなす配列番号１９０～１９２のいずれかのアミノ酸配列を有する成熟重鎖とを有する抗体が含まれる。本発明の更なるヒト化５Ｅ２０抗体には、配列番号１６７または配列番号１６９のアミノ酸配列を有する成熟重鎖と、対をなす配列番号１７３～１７６のいずれかのアミノ酸配列を有する成熟軽鎖とを有する抗体が含まれる。

ヒト化抗体は、しばしばマウス抗体由来の６つのＣＤＲ（任意の従来の定義によるが、好ましくはＫａｂａｔによる定義による）すべてを組み込むが、マウス抗体由来のすべてのＣＤＲ未満（例えば、少なくとも３、４または５つのＣＤＲ）を用いて作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２；Ｖａｊｄｏｓら、Ｊ．ｏｆ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２０：４１５－４２８，２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９－１０９１，１９９９；Ｔａｍｕｒａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：１４３２－１４４１，２０００）。

いくつかの抗体では、ＣＤＲの一部、すなわちＳＤＲと呼ばれる結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットのみが、ヒト化抗体において結合を保持するために必要である。抗原に接触せず、ＳＤＲにないＣＤＲ残基は、以前の研究に基づいて（例えば、ＣＤＲ Ｈ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５はしばしば必要とされない）、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループの外に横たわるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）、分子モデリングによって、かつ／または経験的に、もしくはＧｏｎｚａｌｅｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３，２００４に記載されているように同定することができる。そのようなヒト化抗体では、１つもしくはそれを超えるドナーＣＤＲ残基が存在しないか、またはドナーＣＤＲ全体が省略されている位置では、その位置を占有するアミノ酸は、アクセプター抗体配列の対応する位置（Ｋａｂａｔナンバリング）を占有するアミノ酸であり得る。ＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対するアクセプターのそのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映する。そのような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、その結果、潜在的な免疫原性を減少させること、および／または「ヒト化」のＷＨＯのＩＮＮの定義を満たすことにおいて潜在的に有利である。しかしながら、置換は親和性の変化も引き起こす可能性があり、親和性の著しい低下は好ましくは回避される。置換すべきＣＤＲおよびアミノ酸内の置換位置も経験的に選択することができる。

ヒトアクセプター抗体配列は、必要に応じて、ヒトアクセプター配列可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークとの間に高度の配列同一性（例えば、６５～８５％の同一性）を提供するために、多くの既知のヒト抗体配列の中から選択することができる。

いくつかのヒト化抗体は、それらが由来するマウス抗体として実施例に記載されているように、同じ（実験誤差内で）または改善された機能的特性、例えば、ヒトソルチリンに対する結合親和性を有し、血漿中の細胞外プログラニュリンを増加させながら表面ソルチリンの減少を最小限に抑える。例えば、いくつかのヒト化抗体は、それらが由来するマウス抗体の３、２または１倍以内の結合親和性または実験誤差内で区別できない親和性を有する。いくつかのヒト化抗体は、実施例に記載されているように、血漿中の細胞外プログラニュリンを増加させながら、それらが由来するマウス抗体の３、２または１倍以内の表面ソルチリンの減少を最小限に抑えるか、またはそれらが由来するマウス抗体と実験誤差内で減少を阻害する。

５Ｅ２０重鎖のアクセプター配列の例は、ヒト抗体ＡＥＸ２９０８６ＶＨ（ＡＥＸ２９０８６－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ；配列番号１６１）のヒト成熟重鎖可変領域である。５Ｅ２０およびＡＥＸ２９０８６ＶＨの重鎖可変ドメインは、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２ループについて同一の長さを共有する。５Ｅ２０重鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟重鎖可変領域ＩＭＧＴ＃ＩＧＨＶ３－２１^＊０１（配列番号１６２）である。５Ｅ２０軽鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟軽鎖可変領域ヒト抗体ＢＡＨ０４６８７ＶＬ（ＢＡＨ０４６８７－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ；配列番号１７１）である。５Ｅ２０およびＢＡＨ０４６８７抗体の可変軽鎖ドメインは、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループについて同一の長さを共有する。５Ｅ２０軽鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟軽鎖可変領域ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）である。

８Ｈ２４重鎖のアクセプター配列の例は、ヒト抗体ＡＡＣ５１７１４ＶＨ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．＃ＡＡＣ５１７１４－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ；配列番号１７８）である。８Ｈ２４およびＡＡＣ５１７１４の可変重鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２ループについて同一の長さを共有する。８Ｈ２４重鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟重鎖可変領域ＩＭＧＴ＃ＩＧＨＶ１－６９^＊０８＿ＩＧＨＪ１＊０１（配列番号１７９）である。８Ｈ２４軽鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟軽鎖可変領域ヒト抗体ＡＢＣ６６９１４ＶＬ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．＃ＡＢＣ６６９１４－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ；配列番号１８３））である。８Ｈ２４およびＡＢＣ６６９１４抗体の可変軽鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループについて同一の長さを共有する。８Ｈ２４軽鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟軽鎖可変領域ＩＭＧＴ＃ＩＧＫＶ２－４０^＊０１（配列番号１８４）である。

１１Ｍ１４重鎖のアクセプター配列の例は、ヒトＩｇ重鎖ＡＣＳ９６１９８（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．＃ＡＣＳ９６１９８－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（配列番号１８８）のヒト成熟重鎖可変領域である。ヒトＩｇ重鎖ＡＣＳ９６１９８は、１１Ｍ１４重鎖可変領域ＣＤＲと同じカノニカルクラスを有する。１１Ｍ１４重鎖のアクセプター配列の例は、ヒト成熟重鎖可変領域ＩＭＧＴ＃ＩＧＨＶ３－４８^＊０３（配列番号１８９）である。１１Ｍ１４軽鎖のアクセプター配列の一例は、ＮＣＢＩアクセッションコードＣＢＺ３９８９２（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．＃ＣＢＺ３９８９２－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ（配列番号１９４）である。これは、ＣＤＲ－Ｌ１およびＬ２について同じカノニカルクラスを有する。１１Ｍ１４軽鎖のアクセプター配列の例は、ＩＭＧＴ＃ＩＧＫＶ１－３９^＊０１（配列番号１９５）を有するヒト成熟軽鎖可変領域である。

２つ以上のヒトアクセプター抗体配列が選択される場合、それらのアクセプターの組み合わせまたはハイブリッドを使用することができ、ヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域の異なる位置で使用されるアミノ酸は、使用されるヒトアクセプター抗体配列のいずれかから取得することができる。

ヒト可変領域フレームワーク残基からのある特定のアミノ酸は、ＣＤＲコンフォメーションおよび／または抗原への結合に対するそれらの起こり得る影響に基づいて、置換のために選択され得る。そのような可能性のある影響の調査は、モデリング、特定の位置におけるアミノ酸の特徴の調査、または特定のアミノ酸の置換もしくは変異誘発の効果の経験的観察によるものである。

例えば、マウス可変領域フレームワーク残基と、選択されたヒト可変領域フレームワーク残基との間でアミノ酸が異なる場合、そのアミノ酸が以下のように合理的に予想されるときは、ヒトフレームワークアミノ酸をマウス抗体からの同等のフレームワークアミノ酸で代用することができる：
（１）抗原に非共有結合的に直接結合する；
（２）Ｃｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲ領域に隣接しているかまたはＣＤＲ内にあるが、Ｋａｂａｔではない；
（３）他の点では、ＣＤＲ領域（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内である）と相互作用する（例えば、相同な既知の免疫グロブリン鎖の解明された構造上の軽鎖または重鎖をモデル化することによって同定される）；または
（４）ＶＬ－ＶＨ界面に関与する残基である。

一実施形態では、ヒト化配列は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ部位特異的変異誘発［Ｗａｎｇ，ＷおよびＭａｌｃｏｌｍ，Ｂ．Ａ．（１９９９）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２６：６８０－６８２）］を用いた複数の変異、欠失および挿入の導入を可能にする２段階ＰＣＲプロトコルを用いて生成される。

Ｑｕｅｅｎ（米国特許第５，５３０，１０１号）によって定義されたクラス（１）～（３）のフレームワーク残基は、カノニカル残基およびバーニア（ｖｅｒｎｉｅｒ）残基と呼ばれることもある。ＣＤＲループの立体構造を定義するのに役立つフレームワーク残基は、カノニカル残基（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ｔｈｏｒｎｔｏｎ＆Ｍａｒｔｉｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００－８１５（１９９６））と呼ばれることがある。抗原結合ループ立体構造を支持し、抗体の抗原への適合を微調整する役割を果たすフレームワーク残基は、バーニア残基（Ｆｏｏｔｅ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ２２４：４８７－４９９（１９９２））と呼ばれることがある。

置換の候補である他のフレームワーク残基は、潜在的なグリコシル化部位を形成する残基である。置換のさらに別の候補は、その位置のヒト免疫グロブリンには珍しいアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の等価な位置またはより典型的なヒト免疫グロブリンの等価な位置からのアミノ酸で置換することができる。

置換の候補である他のフレームワーク残基は、ピログルタミン酸変換の可能性を最小限に抑えるためにグルタミン酸（Ｅ）で置換され得るＮ末端グルタミン残基（Ｑ）である［Ｙ．Ｄｉａｎａ Ｌｉｕら、２０１１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８６：１１２１１－１１２１７］。グルタミン酸（Ｅ）からピログルタミン酸（ｐＥ）への変換は、グルタミン（Ｑ）からよりもゆっくり起こる。グルタミンからｐＥへの変換における第一級アミンの喪失のために、抗体はより酸性になる。不完全な変換は、電荷に基づく分析方法を使用して複数のピークとして観察され得る抗体の不均一性をもたらす。不均一性の違いは、プロセス制御の欠如を示し得る。

例示的なヒト化抗体には、Ｈｕ５Ｅ２０と呼ばれるマウス５Ｅ２０のヒト化形態が含まれる。

マウス抗体５Ｅ２０は、それぞれ配列番号４および配列番号１０を含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域を含む。本発明は、７つの例示的なヒト化成熟重鎖可変領域：ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６およびｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７を提供する。本発明はさらに、４つの例示的な成熟軽鎖可変領域ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４を提供する。図１および図２は、マウス５Ｅ２０および様々なヒト化抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアラインメントをそれぞれ示す。

ＣＤＲ立体構造および／または抗原への結合に対する可能性のある影響、重鎖と軽鎖との間の相互作用の媒介、定常領域との相互作用、所望のまたは望ましくない翻訳後修飾のための部位であること、ヒト可変領域配列におけるその位置の異常な残基であり、したがって潜在的に免疫原性であること、凝集能を低下させること、および他の理由などの理由のために、以下の１８個の可変領域フレームワーク位置を、実施例においてさらに特定されるように、４つの例示的なヒト成熟軽鎖可変領域および７つの例示的なヒト成熟重鎖可変領域における置換の候補とみなした：Ｌ１１（Ｌ１１Ｖ）、Ｌ３６（Ｙ３６Ｌ）、Ｌ４４（Ｐ４４Ｆ）、Ｌ４６（Ｌ４６Ｇ）、Ｌ６９（Ｔ６９Ａ）、Ｌ８５（Ｔ８５Ｄ）、Ｌ８７（Ｙ８７Ｆ）、Ｌ１００（Ｇ１００Ｑ）、Ｌ１０６（Ｉ１０６Ｋ）、Ｈ５（Ｌ５Ｖ）、Ｈ４０（Ａ４０Ｔ）、Ｈ４２（Ｇ４２Ｄ）、Ｈ４４（Ｇ４４Ｒ）、Ｈ４９（Ｓ４９Ａ）、Ｈ７７（Ｔ７７Ｓ）、Ｈ８３（Ｒ８３Ｋ）、Ｈ９３（Ａ９３Ｓ）、Ｈ９４（Ｋ９４Ｒ）。

ここで、他の箇所と同様に、最初に言及される残基は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたは組み合わせＣｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１の場合）をヒトアクセプターフレームワークにグラフト化することによって形成されたヒト化抗体の残基であり、２番目に言及される残基は、そのような残基を置換するために考慮されている残基である。したがって、可変領域フレームワーク内では、最初に言及される残基はヒトであり、ＣＤＲ内では、最初に言及される残基はマウスである。

例示的な抗体は、例示的な成熟重鎖および軽鎖可変領域の任意の並べ替えまたは組み合わせを含む：ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７／ ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４。

例示的な抗体は、例示的な成熟重鎖可変領域ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１（配列番号１６３）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２（配列番号１６４）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３（配列番号１６５）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４（配列番号１６６）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５（配列番号１６７）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６（配列番号１６８）およびｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７（配列番号１６９）と、例示的な成熟軽鎖可変領域ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１（配列番号１７３）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２（配列番号１７４）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３（配列番号１７５）およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４（配列番号１７６）のいずれかとの任意の並べ替えまたは組み合わせを含む。

本発明は、ヒト化成熟重鎖可変領域が、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１（配列番号１６３）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２（配列番号１６４）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３（配列番号１６５）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４（配列番号１６６）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５（配列番号１６７）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６（配列番号１６８）またはｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７（配列番号１６９）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示し、ヒト化成熟軽鎖可変領域が、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１（配列番号１７３）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２（配列番号１７４）、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３（配列番号１７５）およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４（配列番号１７６）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す、５Ｅ２０ヒト化抗体のバリアントを提供する。いくつかのそのような抗体では、配列番号１６３～１６９および配列番号１７３～１７６における復帰変異または他の変異の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８個すべてが保持される。

いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ５はＬまたはＶによって占有され、Ｈ４０はＡまたはＴによって占有され、Ｈ４２はＧまたはＤによって占有され、Ｈ４４はＧまたはＲによって占有され、Ｈ４９はＡによって占有され、Ｈ７７はＴまたはＳによって占有され、Ｈ８３はＲまたはＫによって占有され、Ｈ９３はＳによって占有され、Ｈ９４はＲによって占有される。

いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ４９位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１の場合と同様に、それぞれＡ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ５位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２の場合と同様に、それぞれＶ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ５位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３の場合と同様に、それぞれＶ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ５位、Ｈ４２位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４の場合と同様に、それぞれＶ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ５位、Ｈ４２位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ８３位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５の場合と同様に、それぞれＶ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｋ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ５位、Ｈ４０位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６の場合と同様に、それぞれＶ、Ｔ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＨ領域のＨ５位、Ｈ４０位、Ｈ４２位、Ｈ４４位、Ｈ４９位、Ｈ７７位、Ｈ９３位およびＨ９４位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７の場合と同様に、それぞれＶ、Ｔ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される。

いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ１１はＬまたはＶであり、Ｌ３６はＬであり、Ｌ４４はＦであり、Ｌ４６はＧであり、Ｌ６９はＡであり、Ｌ８５はＴまたはＤであり、Ｌ８７はＦであり、Ｌ１００はＧまたはＱであり、Ｌ１０６はＩまたはＫである。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＬ領域のＬ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位およびＬ８７位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１の場合と同様に、それぞれＬ、Ｆ、Ｇ、ＡおよびＦによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＬ領域のＬ１１位、Ｌ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位およびＬ８７位は、５Ｅ２０ＶＬｖ２の場合と同様に、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、ＡおよびＦによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＬ領域のＬ１１位、Ｌ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位、Ｌ８７位、Ｌ１００位およびＬ１０６は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３の場合と同様に、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｆ、ＱおよびＫによって占有される。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、ＶＬ領域のＬ１１位、Ｌ３６位、Ｌ４４位、Ｌ４６位、Ｌ６９位、Ｌ８５位、Ｌ８７位、Ｌ１００位およびＬ１０６位は、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４の場合と同様に、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｆ、ＱおよびＫによって占有される。

いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、可変重鎖はヒト配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、可変軽鎖はヒト配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、可変重鎖および可変軽鎖の各々がヒト生殖細胞系配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化５Ｅ２０抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号５～７）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１１～１３）によって定義されるとおりである。

例示的なヒト化抗体には、Ｈｕ８Ｈ２４と呼ばれるマウス８Ｈ２４のヒト化形態が含まれる。

マウス抗体８Ｈ２４は、それぞれ配列番号２８および配列番号３４を含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖および軽鎖可変領域を含む。本発明は、２つの例示的なヒト化成熟重鎖可変領域：ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２を提供する。本発明はさらに、２つの例示的な成熟軽鎖可変領域ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２を提供する。図３および図４は、マウス８Ｈ２４および様々なヒト化抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアラインメントをそれぞれ示す。

ＣＤＲ立体構造および／または抗原への結合に対する可能性のある影響、重鎖と軽鎖との間の相互作用の媒介、定常領域との相互作用、所望のまたは望ましくない翻訳後修飾のための部位であること、ヒト可変領域配列におけるその位置の異常な残基であり、したがって潜在的に免疫原性であること、凝集能を低下させること、および他の理由などの理由のために、以下の１０個の可変領域フレームワーク位置を、実施例においてさらに特定されるように、２つの例示的なヒト成熟軽鎖可変領域および２つの例示的なヒト成熟重鎖可変領域における置換の候補とみなした：Ｌ２（Ｉ２Ｖ）、Ｌ９（Ｌ９Ｓ）、Ｌ７４（Ｋ７４Ｔ）、Ｈ２（Ｖ２Ａ）、Ｈ１２（Ｋ１２Ｖ）、Ｈ４８（Ｍ４８Ｉ）、Ｈ６７（Ｖ６７Ａ）、Ｈ７１（Ａ７１Ｖ）、Ｈ９１（Ｙ９１Ｆ）、Ｈ１０８（Ｌ１０８Ｔ）。

ここで、他の箇所と同様に、最初に言及される残基は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたは組み合わせＣｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１の場合）をヒトアクセプターフレームワークにグラフト化することによって形成されたヒト化抗体の残基であり、２番目に言及される残基は、そのような残基を置換するために考慮されている残基である。したがって、可変領域フレームワーク内では、最初に言及される残基はヒトであり、ＣＤＲ内では、最初に言及される残基はマウスである。

例示的な抗体は、例示的な成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１／ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１／ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２／ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２／ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２の任意の並べ替えまたは組み合わせを含む。

例示的な抗体は、例示的な成熟重鎖可変領域ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１（配列番号１８０）およびｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２（配列番号１８１）と、例示的な成熟軽鎖可変領域ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１（配列番号１８５）およびｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２（配列番号１８６）のいずれかとの任意の並べ替えまたは組み合わせを含む。

本発明は、ヒト化成熟重鎖可変領域が、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１（配列番号１８０）またはｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２（配列番号１８１）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示し、ヒト化成熟軽鎖可変領域が、ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１（配列番号１８５）またはｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２（配列番号１８６）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す、８Ｈ２４ヒト化抗体のバリアントを提供する。いくつかのそのような抗体では、配列番号１８０～１８１および配列番号１８５～１８６における復帰変異または他の変異の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個が保持される。

いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、ＶＨ領域における以下の位置のうちの少なくとも１つが、指定されるようにアミノ酸によって占有される：Ｈ２はＡによって占有され、Ｈ１２はＫまたはＶによって占有され、Ｈ４８はＩによって占有され、Ｈ６７はＡによって占有され、Ｈ７１はＶによって占有され、Ｈ９１はＦによって占有され、Ｈ１０８はＴによって占有される。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、ＶＨ領域のＨ２位、Ｈ４８位、Ｈ６７位、Ｈ７１位、Ｈ９１位およびＨ１０８位は、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１の場合と同様に、それぞれＡ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＦおよびＴによって占有される。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、ＶＨ領域のＨ２位、Ｈ１２位、Ｈ４８位、Ｈ６７位、Ｈ７１位、Ｈ９１位およびＨ１０８位は、ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２の場合と同様に、それぞれＡ、Ｖ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＦおよびＴによって占有される。

いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ２はＶであり、Ｌ９はＬまたはＳであり、Ｌ７４はＫまたはＴである。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、ＶＬ領域のＬ２位は、ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１と同様に、Ｖによって占有される。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、ＶＬ領域のＬ２位、Ｌ９位およびＬ７４位は、ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２の場合と同様に、それぞれＶ、ＳおよびＴによって占有される。

いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、可変重鎖はヒト配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、可変軽鎖はヒト配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、可変重鎖および可変軽鎖のそれぞれがヒト生殖細胞系配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化８Ｈ２４抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号２９～３１）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号３５～３７）によって定義されるとおりである。

例示的なヒト化抗体には、Ｈｕ１１Ｍ１４と呼ばれるマウス１１Ｍ１４のヒト化形態が含まれる。

マウス抗体１１Ｍ１４は、それぞれ配列番号５２および配列番号５８を含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域を含む。本発明は、３つの例示的なヒト化成熟重鎖可変領域：ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂを提供する。本発明はさらに、４つの例示的な成熟軽鎖可変領域ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂを提供する。図５および図６は、マウス１１Ｍ１４および様々なヒト化抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアラインメントをそれぞれ示す。

ＣＤＲ立体構造および／または抗原への結合に対する可能性のある影響、重鎖と軽鎖との間の相互作用の媒介、定常領域との相互作用、所望のまたは望ましくない翻訳後修飾のための部位であること、ヒト可変領域配列におけるその位置の異常な残基であり、したがって潜在的に免疫原性であること、凝集能を得ること、および他の理由などの理由のために、以下の７個の可変領域フレームワーク位置を、実施例においてさらに特定されるように、４つの例示的なヒト成熟軽鎖可変領域および３つの例示的なヒト成熟重鎖可変領域における置換の候補とみなした：Ｌ４３（Ａ４３Ｓ）、Ｌ４８（Ｉ４８Ｖ）、Ｌ７１（Ｆ７１Ｙ）、Ｌ７６（Ｎ７６Ｓ）、Ｈ４９（Ｓ４９Ａ）、Ｈ８０（Ｌ８０Ｇ）、Ｈ８２ｃ（Ｌ８２ｃＧ）。

以下の可変領域ＣＤＲ位置を、実施例においてさらに明記されるように、４つの例示的なヒト成熟軽鎖可変領域における置換の候補とみなした：Ｌ５４（Ｌ５４Ｇ、Ｌ５４Ｉ）。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７２を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７３を含むアミノ酸配列を有する。

ここで、他の箇所と同様に、最初に言及される残基は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたは組み合わせＣｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１の場合）をヒトアクセプターフレームワークにグラフト化することによって形成されたヒト化抗体の残基であり、２番目に言及される残基は、そのような残基を置換するために考慮されている残基である。したがって、可変領域フレームワーク内では、最初に言及される残基はヒトであり、ＣＤＲ内では、最初に言及される残基はマウスである。

例示的な抗体は、例示的な成熟重鎖および軽鎖可変領域の任意の並べ替えまたは組み合わせを含む：ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ，、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ／ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ。

例示的な抗体は、例示的な成熟重鎖可変領域ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ（配列番号１９０）、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ（配列番号１９１）およびｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ（配列番号１９２）と、例示的な成熟軽鎖可変領域ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ（配列番号１９６）、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ（配列番号１９７）、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ（配列番号１９８）およびｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ（配列番号１９９）のいずれかとの任意の並べ替えまたは組み合わせを含む。

本発明は、ヒト化成熟重鎖可変領域が、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ（配列番号１９０）、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ（配列番号１９１）またはｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ（配列番号１９２）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示し、ヒト化成熟軽鎖可変領域が、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ（配列番号１９６）、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ（配列番号１９７）、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ（配列番号１９８）またはｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ（配列番号１９９）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す、１１Ｍ１４ヒト化抗体のバリアントを提供する。いくつかのそのような抗体では、配列番号１９０～１９２および配列番号１９６～１９９における復帰変異または他の変異を受ける位置の少なくとも１、２、３、４、５、６、７または８つすべてが同様に復帰変異または他の方法で変異される。

いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ４９はＡによって占有され、Ｈ８０はＬまたはＧによって占有され、Ｈ８２ｃはＬまたはＧによって占有される。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＨ領域のＨ４９位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂの場合と同様に、Ａによって占有される。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＨ領域のＨ４９位およびＨ８２ｃ位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂと同様に、それぞれＡおよびＧによって占有される。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＨ領域のＨ４９位およびＨ８０位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂと同様に、それぞれＡおよびＧによって占有される。

いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ４３はＡまたはＳであり、Ｌ４８はＶであり、Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり、Ｌ７１はＹであり、Ｌ７６はＮまたはＳである。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＬ領域のＬ４８位およびＬ７１位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂの場合と同様に、それぞれＶおよびＹによって占有される。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＬ領域のＬ４３位、Ｌ４８位、Ｌ７１位およびＬ７６は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂと同様に、それぞれＳ、Ｖ、ＹおよびＳによって占有される。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＬ領域のＬ４３位、Ｌ４８位、Ｌ５４位、Ｌ７１位およびＬ７６位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂの場合と同様に、それぞれＳ、Ｖ、Ｇ、ＹおよびＳによって占有される。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、ＶＬ領域のＬ４３位、Ｌ４８位、Ｌ５４位、Ｌ７１位およびＬ７６位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂの場合と同様に、それぞれＳ、Ｖ、Ｉ、ＹおよびＳによって占有される。

上記で言及した抗体のいずれかの重鎖可変領域は、免疫原性をさらに低下させるように改変することができる。例えば、いくつかのヒト化抗体では、ＶＨ領域のＨ８０位はＧによって占有される。例えば、いくつかのヒト化抗体では、ＶＨ領域のＨ８２ｃ位はＧによって占有される。上記で言及した抗体のいずれかの軽鎖可変領域は、免疫原性をさらに低下させるように改変することができる。例えば、いくつかのヒト化抗体では、ＶＬ領域のＬ５４位はＧまたはＩによって占有される。

いくつかのヒト化抗体では、ＶＨ領域におけるＨ８２ｃ位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂの場合と同様に、Ｇによって占有される。いくつかのヒト化抗体では、ＶＬ領域のＬ５４位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂと同様に、Ｇによって占有される。いくつかのヒト化抗体では、ＶＬ領域のＬ５４位は、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂと同様に、Ｉによって占有される。

いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７２を含むアミノ酸配列を有する。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７３を含むアミノ酸配列を有する。

いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、可変重鎖はヒト配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、可変軽鎖はヒト配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、可変重鎖および可変軽鎖の各々がヒト生殖細胞系配列に対して８５％以上の同一性を有する。いくつかのヒト化１１Ｍ１４抗体では、３つの重鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号５３～５５）によって定義されるとおりであり、３つの軽鎖ＣＤＲはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号５９～６１）によって定義されるとおりであり、ただしＬ５４位はＬ、ＧまたはＩであり得る。

そのようなヒト化５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２抗体のＣＤＲ領域は、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２のＣＤＲ領域と同一または実質的に同一であり得る。ＣＤＲ領域は、任意の従来の定義（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔとの組み合わせ）によって定義され得るが、好ましくはＫａｂａｔによって定義されるとおりである。

可変領域フレームワークの位置は、特に明記しない限り、Ｋａｂａｔのナンバリングに従う。他のそのようなバリアントは、典型的には、少数（例えば、典型的には、１、２、３、５、１０もしくは１５以下）の置換、欠失または挿入によって、例示されたＨｕ５Ｅ２０、Ｈｕ８Ｈ２４またはＨｕ１１Ｍ１４の重鎖および軽鎖の配列とは異なる。そのような違いは、通常、フレームワークにあるが、ＣＤＲにも起こり得る。

ヒト化５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２バリアントにおける更なる変異の可能性は、可変領域フレームワークにおける更なる復帰変異である。ヒト化ｍＡｂ中のＣＤＲと接触していないフレームワーク残基の多くは、ドナーマウスｍＡｂまたは他のマウスもしくはヒト抗体の対応する位置からのアミノ酸の置換に適応することができ、多くの潜在的なＣＤＲ接触残基でさえも置換に適している。ＣＤＲ内のアミノ酸であっても、例えば、可変領域フレームワークを供給するために使用されるヒトアクセプター配列の対応する位置に見出される残基によって、改変され得る。さらに、例えば、重鎖および／または軽鎖には、代替のヒトアクセプター配列を使用することができる。異なるアクセプター配列が使用される場合、対応するドナー残基およびアクセプター残基が復帰変異なしで既に同じであるため、上記で推奨された１つまたはそれを超える復帰変異は実行されなくてもよい。

好ましくは、ヒト化５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２バリアントにおける置換または復帰変異（保存的であるか否かにかかわらず）は、ヒト化ｍＡｂの結合親和性または結合効力、すなわち、ソルチリンに結合するその能力に実質的な影響を及ぼさない。

ヒト化バリアントｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ、ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡおよびｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡは、非ヒト霊長類において血漿中およびＣＳＦプログラニュリンレベルを増加させる（実施例２１～２２、図１５～１６および１９～２０）。ヒト化バリアントｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿およびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥは、非ヒト霊長類由来のＰＢＭＣ中のソルチリンレベルを低下させる（実施例２３、図２１）。ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿－ＹＴＥは、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡよりも改善された薬物動態および血漿薬力学プロファイルを示す（実施例２３、図１７～図１８）。

Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂＶＬｖ３ｂは、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂとも呼ばれる。Ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７ＶＬｖ４は、ｈｕ５Ｅ２０Ｈ７Ｌ４とも呼ばれる。Ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１ＶＬｖ２は、ｈｕ８Ｈ２４Ｈ１Ｌ２とも呼ばれる。
Ｄ．キメラ抗体およびベニアリングされた抗体

本発明はさらに、非ヒト抗体のキメラおよびベニアリングされた形態、特に実施例の５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２抗体を提供する。

キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖および重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖および重鎖定常領域と組み合わされた抗体である。そのような抗体は、マウス抗体の結合特異性を実質的にまたは完全に保持し、約２／３のヒト配列である。

ベニアリングされた抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲの一部および通常は全部ならびに非ヒト可変領域フレームワーク残基の一部を保持するが、ＢまたはＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば露出残基（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）をヒト抗体配列の対応する位置からの残基で置き換えるタイプのヒト化抗体である。その結果、ＣＤＲが完全にまたは実質的に非ヒト抗体に由来し、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが置換によってよりヒト様になる抗体が得られる。５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８、および４Ｎ２抗体のベニアリングされた形態が本発明に含まれる。
Ｅ．ヒト抗体

ソルチリンまたはその断片（例えば、アミノ酸配列ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ）（配列番号２１３）、ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかもしくはそれからなるペプチド、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７によって定義されるエピトープ、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０によって定義されるエピトープ、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５によって定義されるエピトープ）に特異的に結合するヒト抗体が、以下に記載される様々な技術によって提供される。いくつかのヒト抗体は、競合結合実験によって、上記のＷｉｎｔｅｒのファージディスプレイ法によって、または別の方法では、特定のマウス抗体、例えば実施例に記載されるマウスモノクローナル抗体の１つと同じエピトープ特異性を有するように選択される。ヒト抗体はまた、標的抗原として、ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ）（配列番号２１３）もしくはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるソルチリン断片などのソルチリンの断片のみを使用することによって、および／または配列番号２１６～２４３のソルチリンバリアント、または配列番号１のアミノ酸残基５８８～５９４もしくは５９０～５９３もしくは６３２～６４３もしくは６６３～６７４もしくは１６７～１７６もしくは５８６～５９５内に様々な変異を含むソルチリンバリアントなどのソルチリンバリアントの集合に対する抗体をスクリーニングすることによって、特定のエピトープ特異性についてスクリーニングすることができる。

ヒト抗体を産生するための方法としては、Ｏｅｓｔｂｅｒｇら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１－３６７（１９８３）のトリオーマ法；Ｏｅｓｔｂｅｒｇ、米国特許第４，６３４，６６４号；およびＥｎｇｌｅｍａｎら、米国特許第４，６３４，６６６号、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら、国際公開第９３／１２２２７号（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号；米国特許第５，８７４，２９９号；米国特許第５，８１４，３１８号；米国特許第５，７８９，６５０号；米国特許第５，７７０，４２９号；米国特許第５，６６１，０１６号；米国特許第５，６３３，４２５号；米国特許第５，６２５，１２６号；米国特許第５，５６９，８２５号；米国特許第５，５４５，８０６号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６））；およびＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、国際公開第９１／１０７４１号（１９９１）を参照のこと）、ファージディスプレイ法（例えば、Ｄｏｗｅｒら、国際公開第９１／１７２７１号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開第９２／０１０４７号；米国特許第５，８７７，２１８号；米国特許第５，８７１，９０７号；米国特許第５，８５８，６５７号；米国特許第５，８３７，２４２号；米国特許第５，７３３，７４３号；および米国特許第５，５６５，３３２号を参照のこと）：ならびに国際公開第２００８／０８１００８号（例えば、ヒトから単離されたメモリーＢ細胞を、例えばＥＢＶで不死化すること、所望の特性についてスクリーニングすること、および組換え形態をクローニングおよび発現させること）に記載されている方法が挙げられる。
Ｆ．定常領域の選択

キメラ抗体、ベニアリングされた抗体またはヒト化抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結することができる。定常領域の選択は、部分的には、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、抗体依存性細胞食作用および／または補体依存性細胞傷害が望ましいかどうかに依存する。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１およびＩｇＧ３は補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２およびＩｇＧ４は有しない。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２およびＩｇＧ４よりも強い細胞媒介性エフェクター機能を誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。定常領域のナンバリング規則としては、ＥＵナンバリング（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９））、Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１）、ＩＭＧＴユニークナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．ら、ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｃ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９，１８５－２０３（２００５）、およびＩＭＧＴエクソンナンバリング（上掲のＬｅｆｒａｎｃ）が挙げられる。

重鎖のＣ末端リジンなどの軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端の１つもしくはいくつかのアミノ酸は、分子の一部または全部が欠損しているかまたは誘導体化されていてもよい。補体媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を減少または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；およびＬａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６を参照のこと）、またはヒトにおける半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照のこと）、定常領域において置換を行うことができる。例示的な置換としては、抗体の半減期を増加させるための、２５０位のＧｌｎおよび／または４２８位のＬｅｕ（定常領域についてはＥＵナンバリングが本段落で使用される）が挙げられる。２３４位、２３５位、２３６位および／または２３７位のいずれかもしくはすべてにおける置換は、Ｆｃγレセプター、特にＦｃγＲＩレセプター（例えば、米国特許第６，６２４，８２１号を参照のこと）に対する親和性を低下させる。ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位および２３７位におけるアラニン置換を、エフェクター機能を低下させるために使用することができる。いくつかの抗体は、エフェクター機能を低下させるためにヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位および２３７位にアラニン置換を有する。必要に応じて、ヒトＩｇＧ２の２３４位、２３６位および／または２３７位はアラニンに置換され、２３５位はグルタミンに置換される（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照のこと）。いくつかの抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵナンバリングでの２４１位、２６４位、２６５位、２７０位、２９６位、２９７位、３２２位、３２９位および３３１位のうちの１つまたはそれを超える位置での変異が使用される。いくつかの抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵナンバリングでの３１８位、３２０位および３２２位のうちの１つまたはそれを超える位置での変異が使用される。いくつかの抗体では、２３４位および／または２３５位がアラニンで置換され、および／または３２９位がグリシンで置換される。いくつかの抗体では、２３４位および２３５位がアラニンで置換される。いくつかの抗体では、アイソタイプはヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。

いくつかの抗体では、「ＬＡＬＡ」二重変異（Ｌｅｕ２３４ＡｌａとＬｅｕ２３５Ａｌａ）が、低下したエフェクター機能のために使用される。（Ｌｕｎｄ，Ｊ．ら（１９９２）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９，５３－５９；Ｔａｍｍ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｄｔ，１９９７，Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６（１－２）：５７－８５）。ＦｃバリアントＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）（ナンバリングはＥＵ命名法による）変異体は、ＦｃγＲとの相互作用を排除または低減し（ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａ）、有意に低減したエフェクター機能を示すことが明らかになっている。さらに、Ｆｃ ＬＡＬＡ変異体は、補体タンパク質との相互作用が減少し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が減少することも明らかになっている。ＬＡＬＡ変異を組み込んだ例示的な抗体重鎖配列は、配列番号２４４、配列番号２４６、配列番号２４８、配列番号２５０、配列番号２５１および配列番号２５２である。

いくつかの抗体では、Ｆｃ領域における「ＹＴＥ」（Ｍ２５２Ｔ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）（ナンバリングはＥｕ命名法による）変異が使用される（Ｗ．Ｆ．Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、２００６ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４－２３）。ＹＴＥ変異体は、新生児型Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）に対する結合／相互作用が増強されていることが明らかになっており、それにより、抗体の循環半減期延長をもたらす。いくつかの抗体では、「ＬＡＬＡ」二重変異およびＹＴＥ変異が使用される。ＬＡＬＡおよびＹＴＥ変異を組み込んだ例示的な抗体重鎖配列は、配列番号２４４、配列番号２４６および配列番号２４８である。

抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖとして、または重鎖および軽鎖成熟可変ドメインがスペーサーを介して連結されている単鎖抗体として発現され得る。

ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ変異およびイソアロタイプ変異を示し、すなわち、定常領域は、１つまたはそれを超える多型位置で異なる個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つまたはそれを超える他のイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。したがって、例えば、別の重鎖定常領域は、Ｃ末端リジンを含むかまたは含まないＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３のものである。ヒト定常領域への言及は、任意の天然アロタイプまたは天然アロタイプ中の位置を占める残基の任意の並べ替えを有する定常領域を含む。
Ｇ．組換え抗体の発現

抗体発現細胞株を使用してキメラ抗体およびヒト化抗体を産生するためのいくつかの方法が知られている（例えば、ハイブリドーマ）。例えば、抗体の免疫グロブリン可変領域は、周知の方法を使用してクローニングおよび配列決定することができる。１つの方法では、重鎖可変ＶＨ領域を、ハイブリドーマ細胞から調製したｍＲＮＡを使用してＲＴ－ＰＣＲによってクローニングする。５’プライマーとしての翻訳開始コドンおよび３’プライマーに特異的なｇ２ｂ定常領域を包含するＶＨ領域リーダーペプチドには、コンセンサスプライマーが用いられる。例示的なプライマーは、Ｓｃｈｅｎｋらによる米国特許出願公開第２００５／０００９１５０号（以下、「Ｓｃｈｅｎｋ」）に記載されている。複数の独立して誘導されたクローン由来の配列を比較して、増幅中に変化が導入されないことを確実にすることができる。ＶＨ領域の配列はまた、５’ＲＡＣＥ ＲＴ－ＰＣＲ法および３’ｇ２ｂ特異的プライマーによって得られたＶＨ断片を配列決定することによって決定または確認することができる。

軽鎖可変ＶＬ領域は、類似の様式でクローニングすることができる。１つのアプローチでは、翻訳開始コドンを包含するＶＬ領域にハイブリダイズするように設計された５’プライマーおよびＶ－Ｊ連結領域の下流のＣｋ領域に特異的な３’プライマーを使用して、ＶＬ領域を増幅するためのコンセンサスプライマーセットを設計する。第２のアプローチでは、５’ＲＡＣＥ ＲＴ－ＰＣＲ法を用いて、ｃＤＮＡをコードするＶＬをクローニングする。例示的なプライマーは、上記のＳｃｈｅｎｋに記載されている。次いで、クローン化配列を、ヒト（または他の非ヒト種）定常領域をコードする配列と組み合わせる。

１つのアプローチでは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれのＶＤＪまたはＶＪ連結部の下流のスプライスドナー配列をコードするように再操作し、哺乳動物発現ベクター、例えば重鎖のｐＣＭＶ－ｈγ１および軽鎖のｐＣＭＶ－Ｍｃｌにクローニングする。これらのベクターは、挿入された可変領域カセットの下流にエクソン断片としてヒトγ１およびＣｋ定常領域をコードする。配列検証後、重鎖および軽鎖発現ベクターをＣＨＯ細胞に同時トランスフェクトしてキメラ抗体を産生することができる。馴化培地をトランスフェクションの４８時間後に回収し、抗体産生についてはウエスタンブロット分析によって、抗原結合についてはＥＬＩＳＡによってアッセイする。キメラ抗体は、上記のようにヒト化される。

キメラ抗体、ベニアリングされた抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体は、典型的には組換え発現によって産生される。組換えポリヌクレオチド構築物は、典型的には、プロモーターなどの天然に会合したまたは異種の発現制御エレメントを含む、抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。発現制御配列は、真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができるベクター中のプロモーター系であり得る。ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに交差反応性抗体の回収および精製に適した条件下で維持される。

これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分として、宿主生物において複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えばアンピシリン耐性またはハイグロマイシン耐性を含む。

Ｅ．ｃｏｌｉ（大腸菌）は、抗体、特に抗体断片を発現させるのに有用な１つの原核生物宿主である。酵母などの微生物も発現に有用である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（サッカロミセス属）は、所望に応じて発現制御配列、複製起点、終結配列などを有する適切なベクターを有する酵母宿主である。典型的なプロモーターには、３－ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖酵素が含まれる。誘導性酵母プロモーターには、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソシトクロムＣ、ならびにマルトースおよびガラクトースの利用に関与する酵素からのプロモーターが含まれる。

哺乳動物細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現させるために使用することができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照のこと。インタクトな異種タンパク質を分泌することができるいくつかの適切な宿主細胞株が開発されており、ＣＨＯ細胞株、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、ならびにＳｐ２／０およびＮＳ０を含む非抗体産生骨髄腫が含まれる。細胞は非ヒトであり得る。これらの細胞の発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製起点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、ならびに必要なプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位および転写ターミネーター配列を含み得る。発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターを含み得る。Ｃｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照のこと。

あるいは、抗体コード配列は、トランスジェニック動物のゲノムへの導入およびその後のトランスジェニック動物の乳での発現のために導入遺伝子に組み込むことができる（例えば、第５，７４１，９５７号；米国特許第５，３０４，４８９号；および米国特許第第５，８４９，９９２号を参照のこと）。適切な導入遺伝子には、カゼインまたはベータラクトグロブリンなどの乳腺特異的遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能に連結された軽鎖および／または重鎖のコード配列が含まれる。

目的のＤＮＡセグメントを含むベクターは、細胞宿主の種類に応じた方法によって宿主細胞に移入することができる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは原核細胞に一般的に利用されるが、リン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポフェクション、バイオリスティックス、またはウイルスベースのトランスフェクションは他の細胞宿主に使用することができる。哺乳動物細胞を形質転換するために使用される他の方法には、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーションおよびマイクロインジェクションの使用が含まれる。トランスジェニック動物の作製のために、導入遺伝子を受精卵母細胞に微量注入することができ、または胚性幹細胞もしくは人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）のゲノムに組み込むことができ、そのような細胞の核を脱核卵母細胞に移入することができる。

抗体の重鎖および軽鎖をコードするベクターを細胞培養物に導入すると、無血清培地中で細胞プールの増殖生産性および製品品質についてスクリーニングすることができる。次いで、上位産生細胞プールをＦＡＣＳベースの単一細胞クローニングに供して、モノクローナル株を生成することができる。７．５ｇ／Ｌ培養物を超える産生物力価に対応する、１日あたり細胞あたり５０ｐｇまたは１００ｐｇを超える比産生性を使用することができる。単一細胞クローンによって産生された抗体は、濁度、濾過特性、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＵＶスキャン、ＨＰ－ＳＥＣ、炭水化物－オリゴ糖マッピング、質量分析、およびＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅなどの結合アッセイについても試験することができる。次いで、選択されたクローンを複数のバイアルに入れ、その後の使用のために凍結保存することができる。

発現されると、抗体は、プロテインＡ捕捉、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当該技術分野の標準的な手順に従って精製することができる（一般に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照のこと）。

コドン最適化、プロモーターの選択、転写エレメントの選択、ターミネーターの選択、無血清単一細胞クローニング、細胞バンキング、コピー数の増幅のための選択マーカーの使用、ＣＨＯターミネーター、またはタンパク質力価の改善を含む、抗体の商業生産のための方法論を使用することができる（例えば、米国特許第５，７８６，４６４号；米国特許第６，１１４，１４８号；米国特許第６，０６３，５９８号；米国特許第７，５６９，３３９号；国際公開第２００４／０５０８８４号；国際公開第２００８／０１２１４２号；国際公開第２００８／０１２１４２号；国際公開第２００５／０１９４４２号；国際公開第２００８／１０７３８８号；国際公開第２００９／０２７４７１号；および米国特許第５，８８８，８０９号）。
ＩＶ．活性免疫原

能動免疫に使用される薬剤は、上記の受動免疫に関連して記載されたのと同じタイプの抗体を患者に誘導するのに役立つ。能動免疫化に使用される薬剤は、実験動物においてモノクローナル抗体を作製するために使用される同じタイプの免疫原、例えば、配列番号１の残基５８８～５９４もしくは５９０～５９３もしくは６３２～６４３もしくは６６３～６７４もしくは１６７～１７６もしくは５８６～５９５に対応するソルチリンの領域からの３～１５もしくは３～１２もしくは５～１２、または５～８個の連続アミノ酸のペプチド、例えば、配列番号１の残基５８８～５９４もしくは５９０～５９３もしくは６３２～６４３もしくは６６３～６７４もしくは１６７～１７６もしくは５８６～５９５を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチドなど、またはアミノ酸配列ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、アミノ酸配列ＥＳＦＬ（配列番号２０３）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、アミノ酸配列ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ（配列番号２０４）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、またはアミノ酸配列ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、またはアミノ酸配列Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、アミノ酸配列ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ）（配列番号２１３）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、アミノ酸配列ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤのアミノ酸残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７の一部もしくは全部を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、配列番号２１５のソルチリンＥＣＤのアミノ酸残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９、およびＬ５６０の一部もしくは全部を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチド、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤのアミノ酸残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５の一部または全部を含むかもしくはそれからなるソルチリンペプチドであり得る。大きく離れた残基を有する立体構造エピトープの場合、ペプチドは、線状エピトープを形成するために互いに十分に近接した残基のいくつかに対して選択され得る。５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２と同じまたは重複するエピトープに結合する抗体を誘導するために、これらの抗体のエピトープ特異性をマッピングすることができる（例えば、ソルチリンにまたがる一連の重複ペプチドへの結合を試験することによって）。次いで、エピトープからなるかまたはエピトープを含むかまたはエピトープと重複するソルチリンの断片を免疫原として使用することができる。

異種担体およびアジュバントは、使用される場合、モノクローナル抗体を作製するために使用されるものと同じであり得るが、ヒトにおける使用のためのより良好な薬学的適合性のためにも選択され得る。適切な担体としては、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイド、またはジフテリア（例えばＣＲＭ１９７）、Ｅ．Ｃｏｌｉ（大腸菌）、コレラ、もしくはピロリ菌などの他の病原性細菌由来のトキソイド、または弱毒化毒素誘導体が挙げられる。Ｔ細胞エピトープも適切な担体分子である。いくつかのコンジュゲートは、本発明の薬剤を免疫賦活性ポリマー分子（例えば、トリパルミトイル－Ｓ－グリセリンシステイン（Ｐａｍ_３ Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）、またはグルカン（β１→２ポリマー））、サイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１αおよびβペプチド、ＩＬ－２、γ－ＩＮＦ、ＩＬ－１０、ＧＭ－ＣＳＦ）、ならびにケモカイン（例えば、ＭＩＰ１－αおよびβ、およびＲＡＮＴＥＳ）に連結することによって形成され得る。免疫原は、スペーサーアミノ酸（例えば、ｇｌｙ－ｇｌｙ）の有無にかかわらず担体に連結され得る。追加の担体には、ウイルス様粒子が含まれる。シュードビリオンまたはウイルス由来粒子とも呼ばれるウイルス様粒子（ＶＬＰ）は、インビボで定義された球形対称性のＶＬＰに自己集合することができるウイルスキャプシドおよび／またはエンベロープタンパク質の複数のコピーで構成されるサブユニット構造を表す。（Ｐｏｗｉｌｌｅｉｔら、（２００７）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２（５）：ｅ４１５．）あるいは、ペプチド免疫原を、大部分のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができる少なくとも１つの人工Ｔ細胞エピトープ、例えば、ｐａｎ ＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）に連結することができる。ＰＡＤＲＥは、米国特許第５，７３６，１４２号、国際公開第９５／０７７０７号、およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：７５１－７６１（１９９４）に記載されている。活性免疫原は、免疫原および／またはその担体の複数のコピーが単一の共有結合分子として提示される多量体形態で提示され得る。

断片は、多くの場合、薬学的に許容され得るアジュバントと共に投与される。アジュバントは、ペプチドが単独で使用された場合の状況と比較して、誘導された抗体の力価および／または誘導された抗体の結合親和性を増加させる。様々なアジュバントをソルチリンの免疫原性断片と組み合わせて使用して、免疫応答を誘発することができる。いくつかのアジュバントは、応答の定性的形態に影響を及ぼす免疫原の立体構造変化を引き起こすことなく、免疫原に対する固有の応答を増強する。いくつかのアジュバントとしては、アルミニウム塩、例えば水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム、３Ｄｅ－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））（例えば、英国特許出願公開第 ２２２０２１１号（ＲＩＢＩ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔａｎａ，ｎｏｗ ｐａｒｔ ｏｆ Ｃｏｒｉｘａ））が挙げられる。Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ－２１は、南米に生息するＱｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮から単離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌら、ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）；米国特許第５，０５７，５４０号を参照のこと）（Ａｑｕｉｌａ ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ；現Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）。他のアジュバントは、水中油型エマルジョン（スクアレンまたはピーナッツ油など）であって、必要に応じて、免疫刺激剤、例えばモノホスホリルリピドＡ（例えば、Ｓｔｏｕｔｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６－９１（１９９７））を参照のこと）、プルロニック（登録商標）ポリマーおよび死滅化マイコバクテリアと組み合わせたものである。Ｒｉｂｉアジュバントは水中油型エマルジョンである。Ｒｉｂｉは、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０を含有する生理食塩水で乳化された代謝可能な油（スクアレン）を含有する。Ｒｉｂｉはまた、免疫賦活剤および細菌モノホスホリルリピドＡとして作用する精製マイコバクテリア産物を含有する。別のアジュバントはＣｐＧ（国際公開第９８／４０１００号）である。アジュバントは、活性剤と共に治療組成物の成分として投与することができ、または治療剤の投与前、投与と同時もしくは投与後に別々に投与することができる。

ソルチリンに対する抗体を誘導するソルチリンの天然断片の類似体も使用することができる。例えば、そのようなペプチドでは、１つもしくはそれを超えるまたはすべてのＬ－アミノ酸をＤアミノ酸で置換することができる。アミノ酸の順序も逆にすることができる（レトロペプチド）。任意選択で、ペプチドは、逆順ですべてのＤ－アミノ酸を含む（ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒｓｏ型ペプチド）。ソルチリンペプチドと有意なアミノ酸配列類似性を必ずしも有しないが、それでもなお、ソルチリンペプチドの模倣物として働き、同様の免疫応答を誘導するペプチドおよび他の化合物。上記のようなソルチリンに対するモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプ抗体も使用することができる。そのような抗Ｉｄ抗体は、抗原を模倣し、それに対する免疫応答を生成する（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｉｔ ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ ６ｔｈ ｅｄ．，ｐ．１８１を参照のこと）。

ペプチド（および必要に応じてペプチドに融合した担体）を、ペプチドをコードする核酸の形態で投与し、患者においてｉｎ ｓｉｔｕで発現させることもできる。免疫原をコードする核酸セグメントは、典型的には、患者の意図される標的細胞におけるＤＮＡセグメントの発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーなどの調節エレメントに連結される。血液細胞における発現のために、免疫応答の誘導のために望ましいように、軽鎖もしくは重鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサーエレメント、またはＣＭＶ主要中間初期プロモーターおよびエンハンサーは、発現を指示するのに適している。連結された調節エレメントおよびコード配列は、ベクターにクローニングされることが多い。抗体は、抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸の形態で投与することもできる。重鎖および軽鎖の両方が存在する場合、それらの鎖は好ましくは単鎖抗体として連結される。受動投与用の抗体はまた、例えばペプチド免疫原で処置された患者の血清からのアフィニティークロマトグラフィーによって調製することもできる。

ＤＮＡは裸の形態（すなわち、コロイド状またはカプセル化材料なし）で送達され得る。あるいは、ＭＭＬＶ、ＨＩＶ－１およびＡＬＶなどのレトロウイルス由来ベクターを含むレトロウイルス系（例えば、Ｌａｗｒｉｅ ａｎｄ Ｔｕｍｉｎ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３，１０２－１０９（１９９３）を参照のこと）；アデノウイルスベクター（例えば、Ｂｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７，５９１１（１９９３）を参照のこと）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えば、Ｚｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９，１８６７（１９９４））、レンチウイルスベクター、例えばＨＩＶまたはＦＩＶ ｇａｇ配列に基づくもの、ワクシニアウイルスおよびトリポックスウイルスを含むポックスファミリーからのウイルスベクター、アルファウイルス属、例えばシンドビスおよびセムリキ森林ウイルス（例えば、Ｄｕｂｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０，５０８－５１９（１９９６）を参照のこと）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（米国特許第５，６４３，５７６参照）およびラブドウイルス、例えば水疱性口内炎ウイルス（国際公開第９６／３４６２５号を参照のこと）およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，６，３２５～３３３（１９９５）；Ｗｏｏら、国際公開第９４／１２６２９号およびＸｉａｏ＆Ｂｒａｎｄｓｍａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４，２６３０－２６２２（１９９６））由来のものなどのウイルスベクターを含むいくつかのウイルスベクター系を使用することもできる。

免疫原をコードするＤＮＡ、または抗体の重鎖および／もしくは軽鎖をコードするＤＮＡ、またはそれらを含有するベクターをリポソームにパッケージングすることができる。適切な脂質および関連類似体は、米国特許第５，２０８，０３６号、米国特許第５，２６４，６１８号、米国特許第５，２７９，８３３号および米国特許第５，２８３，１８５号に記載されている。免疫原をコードする、または抗体の重鎖および／または軽鎖をコードするベクターおよびＤＮＡは、粒子状担体に吸着または会合することもでき、その例としては、ポリメチルメタクリレートポリマーおよびポリラクチドならびにポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（例えば、ＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．１９９６を参照のこと）が挙げられる。
抗体の重鎖および／または軽鎖をコードするベクターまたはそのセグメントは、例えば、個々の患者から摘出された細胞（例えば、リンパ球、骨髄吸引、組織生検）または万能ドナー造血幹細胞にｅｘ ｖｉｖｏで組み込むことができ、その後、通常は導入遺伝子を組み込んだ細胞を選択した後に、その細胞を患者に再移植することができる。（例えば、国際公開第２０１７／０９１５１２号を参照のこと）。例示的な患者由来細胞には、患者由来の人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または他のタイプの幹細胞（胚性、造血性、神経性もしくは間葉性）が含まれる。
抗体の重鎖および／または軽鎖をコードするベクターまたはそのセグメントは、アルブミン遺伝子または他のセーフハーバー遺伝子などの細胞の目的の任意の領域にｅｘ ｖｉｖｏで導入することができる。ベクターを組み込んだ細胞は、事前の分化の有無にかかわらず移植することができる。細胞は、分泌組織もしくは病変の位置などの特定の組織に、または血液への注入などによって全身的に移植することができる。例えば、細胞は、患者の分泌組織、例えば肝臓に移植することができ、必要に応じて、その組織中に存在する細胞、例えば肝臓の場合は肝細胞に事前に分化させることができる。肝臓における抗体の発現は、血液に対する抗体の分泌をもたらす。
Ｈ．抗体スクリーニングアッセイ

抗体は、上記のように意図された結合特異性について最初にスクリーニングすることができる。活性免疫原も同様に、そのような結合特異性を有する抗体を誘導する能力についてスクリーニングすることができる。この場合、活性免疫原を使用して実験動物を免疫化し、得られた血清を適切な結合特異性について試験する。

次いで、所望の結合特異性を有する抗体を、細胞モデルおよび動物モデルにおいて試験することができる。例示的な細胞モデルは、表面に組換えｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ（ヒトソルチリン）を発現するＨＥＫ２９３細胞である。別の例示的な細胞モデルは、細胞表面にソルチリンを内因的に発現するＵ２５１ＭＧ細胞（ヒト神経膠芽腫細胞株）である。ヒト細胞モデルには、ＦＴＤ－ＧＲＮ変異を発現するＩＰＳＣ由来皮質ニューロンまたはミクログリアが含まれる。例示的なマウス細胞モデルは、ＧＲＮ＋／－および／またはＧＲＮ－／－トランスジェニックマウス＋ＡＡＶ－ＴＤＰ４３ＣＴ－ＧＦＰ（Ｃｈａｎｇ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ ２０１７；２１４（９）：２６１１－２６２８）由来の初代ニューロンである。ＴＤＰ４３ＣＴは細胞質クラスターを形成し、ＧＲＮ－／－ニューロンはＷＴニューロンよりも約４０％高いレベルのＴＤＰ４３ＣＴを蓄積した。この表現型は、組換えＰＲＧＮ（１０μＭ）の添加によって回復した。

抗体または活性薬剤の活性は、細胞外プログラニュリンの増加および阻害または遅延または行動障害を含む様々な基準によって評価することができる。活性免疫原を血清中の抗体の誘導について試験することもできる。受動免疫原および能動免疫原の両方を、野生型動物またはトランスジェニック動物の脳への血液脳関門を通過する抗体の通過について試験することができる。抗体を誘導する抗体または断片はまた、疾患を有しない非ヒト霊長類において、または自然にもしくは誘導により、プログラニュリンレベルの変化を特徴とする疾患の症状を発症する非ヒト霊長類において試験することができる（例えば、実施例２１～２２および図１４～２１のように）。抗体または活性薬剤に対する試験は、通常、抗体または活性薬剤が存在しない（例えば、賦形剤に置き換えられる）ことを除いて、並行実験を行うコントロールと併せて行われる。次いで、試験中の抗体または活性薬剤に起因する疾患の徴候または症候の減少、遅延または阻害をコントロールと比較して評価することができる。
Ｖ．治療に適した患者

プログラニュリンレベルの変化は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、および老化に関連する神経変性障害を含むいくつかの疾患で見出されている。本レジメンは、これらの疾患のいずれかの処置または予防にも使用することができる。神経疾患および症状とプログラニュリンレベルの変化との間の広範な関連のために、本レジメンは、神経疾患を有しない個体における平均値と比較して低下したプログラニュリン（例えば、血漿中またはＣＳＦ中）レベルを示す任意の対象の処置または予防に使用することができる。本レジメンは、神経疾患に関連するプログラニュリンに変異を有する個体における神経疾患の処置または予防にも使用することができる。本方法は、前頭側頭型認知症の処置または予防に特に適している。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。

処置に適した患者には、疾患のリスクがあるが症候を示さない個体、ならびに現在症候を示している患者が含まれる。疾患のリスクがある患者には、疾患の既知の遺伝的リスクを有する患者が含まれる。そのような個体には、この疾患を経験したことがある血縁者を有する個体、およびそのリスクが遺伝的マーカーまたは生化学的マーカーの分析によって決定される個体が含まれる。リスクの遺伝子マーカーには、上記のＦＴＤ－ＧＲＮなどのプログラニュリンの変異が含まれる。前頭側頭型認知症に現在罹患している個体は、ＰＥＴ画像化によって、特徴的な認知症、ならびに上記の危険因子の存在から認識することができる。さらに、前頭側頭型認知症を有する個体を同定するために、いくつかの診断検査が利用可能である。これらには、ＣＳＦおよび血漿プログラニュリンレベルの測定が含まれる。

無症候性患者では、処置は任意の年齢（例えば、１０、２０、３０歳）で開始することができる。しかしながら、通常、患者が４０、５０、６０または７０歳になるまで処置を開始する必要はない。処置は、典型的には、ある期間にわたって複数回の投与を必要とする。処置は、抗体レベルを経時的にアッセイすることによって監視することができる。応答が低下する場合、ブースター投与が適応となる。
Ｉ．核酸

本発明はさらに、上記の重鎖および軽鎖のいずれかをコードする核酸を提供する（例えば、配列番号４、１０、２４～２５、２８、３４、４８～４９、５２、５８、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６３～１６９、１７３～１７６、１８０～１８１、１８５～１８６、１９０～１９２、１９６～１９９）。例示的なヌクレオチド配列には、配列番号２、８、２６、３２、５０、５６、７６、８２、８８、９４、１００、１０６、１１２、１１８、１２４、１３０、１３６、１４２、１４８および１５４が含まれる。必要に応じて、そのような核酸は、シグナルペプチドをさらにコードし、可変領域に連結されたシグナルペプチドで発現され得る。核酸のコード配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなどのコード配列の発現を確実にするために調節配列と作動可能に連結することができる。調節配列は、プロモーター、例えば原核生物プロモーターまたは真核生物プロモーターを含み得る。重鎖または軽鎖をコードする核酸は、宿主細胞における発現のためにコドン最適化することができる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、選択可能な遺伝子をコードすることができる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、単離された形態で存在し得るか、または１もしくはそれを超えるベクターにクローニングされ得る。核酸は、例えば、重複するオリゴヌクレオチドの固相合成またはＰＣＲによって合成することができる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で１つの連続した核酸として連結され得るか、または別々であり得、例えば各々が独自の発現ベクターにクローニングされ得る。
Ｊ．コンジュゲート抗体

ソルチリンなどの抗原に特異的に結合するコンジュゲート抗体は、ソルチリンの存在を検出すること、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害と診断された患者を処置するために使用されている治療薬の有効性を監視および評価すること、細胞外プログラニュリンレベルを上昇させること、またはプログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または患者の加齢に関連する神経変性障害を処置するかまたはその予防を行うことに有用である。例えば、そのような抗体は、他の治療部分、他のタンパク質、他の抗体、および／または検出可能な標識とコンジュゲートすることができる。国際公開第０３／０５７８３８号；米国特許第８，４５５，６２２号を参照のこと。そのような治療部分は、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害など、患者の望ましくない症状もしくは疾患を処置、対抗、改善、予防または改善するために使用することができる任意の薬剤であり得る。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。

コンジュゲート治療部分には、神経栄養剤、神経保護剤、放射線治療剤、放射性（放射性医薬品）、蛍光、常磁性トレーサー、超音波造影剤、免疫調節剤、または抗体の活性を促進もしくは増強するか、またはバイオアベイラビリティを改変する任意の生物学的に活性な薬剤、および体内または臓器内の分布が含まれ得る。神経栄養剤は、ニューロンの維持、成長、または分化を促進する、化学物質またはタンパク質性物質を含む任意の薬剤であり得る。神経保護剤は、急性傷害または変性プロセスからニューロンを保護する、化学薬剤またはタンパク質性薬剤を含む薬剤であり得る。免疫調節薬は、免疫学的応答の発生または維持を刺激もしくは阻害する任意の薬剤であり得る。放射線治療剤は、放射線を放出する任意の分子または化合物であり得る。そのような治療部分が、本明細書に記載される抗体などのソルチリン特異的抗体にカップリングされる場合、カップリングされた治療部分は、正常細胞に対して、ソルチリンおよびプログラニュリン関連疾患に罹患した細胞に対する特異的親和性を有するであろう。さらに、より少量の治療部分を使用することができる。

いくつかのそのような抗体は、免疫毒素として作用するように修飾することができる。例えば、米国特許第５，１９４，５９４号を参照のこと。例えば、植物由来の細胞毒素であるリシンは、抗体には二官能性試薬Ｓ－アセチルメルカプトコハク酸無水物を使用し、リシンにはスクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネートを使用することによって、抗体に結合することができる。Ｐｉｅｔｅｒｓｚら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４８（１６）：４４６９－４４７６（１９９８）を参照のこと。カップリングは、リシンのＢ鎖結合活性の喪失をもたらすが、リシンのＡ鎖の毒性能も抗体の活性も損なわない。同様に、リボソームアセンブリの阻害剤であるサポリンは、化学的に挿入されたスルフヒドリル基間のジスルフィド結合を介して抗体に結合することができる。Ｐｏｌｉｔｏら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ１８：１２１５－１２２２（２００４）を参照のこと。

いくつかのそのような抗体は、放射性同位体に連結することができる。放射性同位元素の例としては、例えば、イットリウム^９０（９０Ｙ）、インジウム^１１１（１１１Ｉｎ）、^１３１Ｉ、^９９ｍＴｃ、放射性銀－１１１、放射性銀－１９９およびビスマス^２１３が挙げられる。放射性同位体の抗体への結合は、従来の二官能性キレートを用いて行うことができる。放射性銀－１１１および放射性銀－１９９の結合には、硫黄系リンカーを使用することができる。Ｈａｚｒａら、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４－２５：１－７（１９９４）。銀放射性同位体の結合は、アスコルビン酸で免疫グロブリンを還元することを含み得る。１１１Ｉｎおよび９０Ｙなどの放射性同位体の場合、イブリツモマブチウキセタンを使用することができ、そのような同位体と反応して、それぞれ１１１Ｉｎ－イブリツモマブチウキセタンおよび９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタンを形成する。Ｗｉｔｚｉｇ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ９１－Ｓ９５（２００１）を参照のこと。

いくつかのそのような抗体は、他の治療部分に連結され得る。そのような治療部分は、例えば、細胞傷害性、細胞増殖抑制性、神経栄養性または神経保護性であり得る。例えば、抗体は、メイタンシン、ゲルダナマイシン、チューブリン結合剤（例えば、アウリスタチン）などのチューブリン阻害剤、またはカリケアマイシンなどの副溝結合剤などの毒性化学療法薬とコンジュゲートさせることができる。他の代表的な治療部分としては、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害の処置、管理、または改善に有用であることが知られている薬剤が挙げられる。

抗体はまた、他のタンパク質とカップリングされ得る。例えば、抗体をフィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）とカップリングさせることができる。フィノマーは、ヒトＦｙｎ ＳＨ３ドメインに由来する小さな結合タンパク質（例えば、７ｋＤａ）である。それらは安定で可溶性であり得、システイン残基およびジスルフィド結合を欠くことができる。フィノマーは、抗体と同じ親和性および特異性で標的分子に結合するように操作することができる。それらは、抗体に基づく多重特異性融合タンパク質の作製に適している。例えば、Ｆｙｎｏｍｅｒを抗体のＮ末端および／またはＣ末端に融合して、異なるアーキテクチャを有する二重特異性および三重特異性ＦｙｎｏｍＡｂを作製することができる。フィノマーは、ＦＡＣＳ、Ｂｉａｃｏｒｅ、および最適な特性を有するフィノマーの効率的な選択を可能にする細胞ベースのアッセイを使用するスクリーニング技術を介して、フィノマーライブラリーを使用して選択することができる。フィノマーの例は、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６－３２０４（２００７）；Ｂｅｒｔｓｃｈｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２０：５７－６８（２００７）；Ｓｃｈｌａｔｔｅｒら、ＭＡｂｓ．４：４９７－５０８（２０１１）；Ｂａｎｎｅｒら、Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６９（Ｐｔ６）：１１２４－１１３７（２０１３）；およびＢｒａｃｋら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１３：２０３０－２０３９（２０１４）に開示されている。

本明細書中に開示される抗体はまた、１つまたはそれを超える他の抗体（例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを形成するために）にカップリングされ得るかまたはコンジュゲートされ得る。そのような他の抗体は、ソルチリン内の異なるエピトープに結合することができ、または異なる標的抗原に結合することができる。

抗体はまた、検出可能な標識とカップリングされ得る。そのような抗体は、例えば、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、もしくは加齢に関連する神経変性障害を有するかまたはそれらについて処置されている対象においてソルチリンを検出するため、および／または処置の有効性を評価するために使用することができる。そのような抗体は、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、もしくは加齢に関連する神経変性障害を有するかまたはそれらの影響を受けやすい対象、またはそのような対象から得られた適切な生物学的試料においてそのような決定を行うのに特に有用である。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。抗体にカップリングまたは連結され得る代表的な検出可能な標識としては、様々な酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ；補欠分子族、例えばストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン；蛍光材料、例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリン；発光材料、例えばルミノール；生物発光物質、例えばルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン；放射性物質、例えば放射性銀－１１１、放射性銀－１９９、ビスマス^２１３、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１１５Ｉｎ，^１１３Ｉｎ，^１１２Ｉｎ，^１１１Ｉｎ，）、テクネチウム（^９９Ｔｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、フッ素（^１８Ｆ）、^１５３Ｓｍ、^１７７Ｌｕ、^１５９Ｇｄ、^１４９Ｐｍ、^１４０Ｌａ、^１７５Ｙｂ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^４７Ｓｃ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１４２Ｐｒ、^１０５Ｒｈ、^９７Ｒｕ、^６８Ｇｅ、^５７Ｃｏ、^６５Ｚｎ、^８５Ｓｒ、^３２Ｐ、^１５３Ｇｄ、^１６９Ｙｂ、^５１Ｃｒ、^５４Ｍｎ、^７５Ｓｅ、^１１３Ｓｎおよび^１１７Ｔｉｎ；様々な陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属；非放射性常磁性金属イオン；および放射性標識されているか、または特定の放射性同位体にコンジュゲートされている分子が挙げられる。

放射性同位体の抗体への結合は、従来の二官能性キレートを用いて行うことができる。放射性銀－１１１および放射性銀－１９９の結合には、硫黄系リンカーを使用することができる。Ｈａｚｒａら、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ。２４－２５：１－７（１９９４）。銀放射性同位体の結合は、アスコルビン酸で免疫グロブリンを還元することを含み得る。１１１Ｉｎおよび９０Ｙなどの放射性同位体の場合、イブリツモマブチウキセタンを使用することができ、そのような同位体と反応して、それぞれ１１１Ｉｎ－イブリツモマブチウキセタンおよび９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタンを形成する。Ｗｉｔｚｉｇ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ９１－Ｓ９５（２００１）を参照のこと。

治療部分、他のタンパク質、他の抗体、および／または検出可能な標識は、中間体（例えば、リンカー）を介して直接的または間接的に、本発明の抗体にカップリングまたはコンジュゲートされ得る。例えば、Ａｒｎｏｎら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙにおける「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、ｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）における「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓにおける「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙにおける「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）；およびＴｈｏｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）を参照のこと。適切なリンカーとしては、例えば、切断可能なリンカーおよび切断不可能なリンカーが挙げられる。カップリングされた治療部分、タンパク質、抗体、および／または検出可能な標識を、酸性もしくは還元条件下、特異的プロテアーゼへの曝露時、または他の定義された条件下で放出する異なるリンカーを使用することができる。
ＶＩ．医薬組成物および使用方法

予防的適用では、抗体または抗体を誘導するための薬剤またはその医薬組成物は、疾患（例えば、前頭側頭型認知症）に罹患しやすいか、そうでなければ疾患のリスクがある患者に、疾患のリスクを低下させるか、重症度を低下させるか、または疾患の少なくとも１つの徴候もしくは症候の発症を遅延させるのに有効なレジメン（用量、頻度および投与経路）で投与される。特に、レジメンは、好ましくは、脳または血漿中の細胞外プログラニュリンレベルを上昇させる、および／または行動障害の発症を阻害および／または遅延させるのに有効である。治療用途では、抗体または抗体を誘導するための薬剤は、疾患の少なくとも１つの徴候または症候を改善または更なる悪化を少なくとも抑制するのに有効なレジメン（用量、頻度および投与経路）で、疾患（例えば、前頭側頭型認知症）が疑われるか、または既に疾患に罹患している患者に投与される。特に、レジメンは、好ましくは、プログラニュリンおよび／または行動障害のレベルを増加または少なくとも正常化するのに有効である。

個々の処置患者が、本発明の方法によって処置されていない同等の患者のコントロール集団における平均成績よりも良好な成績を達成する場合、またはより良好な結果が、コントロール臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相または第ＩＩＩ相試験）においてコントロール患者に対して処置患者においてｐ＜０．０５もしくは０．０１もしくはさらには０．００１レベルで実証される場合、レジメンは治療的または予防的に有効であると見なされる。

有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がＦＴＤ－ＧＲＮ担体であるかどうか、患者がヒトであるか動物であるかどうか、投与される他の薬物、および処置が予防的であるか治療的であるかどうかなどの多くの異なる要因に応じて変化する。

抗体の例示的な投与量範囲は、患者の体重の約０．０１～６０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１～３ｍｇ／ｋｇ、または０．１５～２ｍｇ／ｋｇ、または０．１５～１．５ｍｇ／ｋｇである。抗体は、そのような用量を毎日、代替日、毎週、隔週、毎月、四半期毎に、または経験的分析によって決定される任意の他のスケジュールに従って投与することができる。例示的な処置は、例えば、少なくとも６ヶ月の長期間にわたる複数の投与量での投与を必要とする。更なる例示的な処置レジメンは、２週間に１回または１ヶ月に１回または３～６ヶ月に１回の投与を必要とする。

活性投与のための薬剤の量は、患者あたり０．１～５００μｇ、より通常はヒト投与のための注射あたり１～１００または１～１０μｇで変動する。注射のタイミングは、１日１回から１年１回、１０年１回まで大幅に変動し得る。典型的なレジメンは、免疫化とそれに続く時間間隔、例えば６週間間隔または２ヶ月間隔でのブースター注射からなる。別のレジメンは、免疫化とそれに続く１、２および１２ヶ月後のブースター注射からなる。別のレジメンは、生涯にわたって２ヶ月毎の注射を必要とする。あるいは、免疫応答の監視によって示されるように、ブースター注射は不規則に行われ得る。非ヒト霊長類に対する例示的な用量および投与レジメンは、実施例２１～２２および図１４～２１にある。

抗体または抗体を誘導するための薬剤は、好ましくは末梢経路（すなわち、投与または誘導された抗体が血液脳関門を通過して脳内の意図された部位に到達するものである）を介して投与される。投与経路には、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内、眼内、皮内または筋肉内が含まれる。抗体の投与のためのいくつかの経路は、静脈内および皮下である。能動免疫化のためのいくつかの経路は、皮下および筋肉内である。このタイプの注射は、最も典型的には腕または脚の筋肉で行われる。いくつかの方法では、薬剤は、例えば頭蓋内注射など、沈着物が蓄積している特定の組織に直接注射される。

非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは無菌で実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための投与量）で提供することができる。医薬組成物は、１またはそれを超える生理学的に許容され得る担体、希釈剤、医薬品添加剤または剤を使用して製剤化することができる。製剤は、選択される投与経路に依存する。注射のために、抗体を水溶液、好ましくは生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス液、リンガー液、または生理食塩水もしくは酢酸緩衝液（注射部位の不快感を軽減するため）に製剤化することができる。溶液は、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの配合剤を含有することができる。あるいは、抗体は、使用前に、適切な賦形剤、例えば滅菌パイロジェンフリー水で構成するために凍結乾燥形態であり得る。

本レジメンは、処置されている疾患の処置または予防に有効な別の薬剤と組み合わせて投与することができる。例えば、前頭側頭型認知症の場合、本レジメンを、トラゾドンおよび選択的セロトニン再取り込み阻害剤（例えば、シタロプラム（Ｃｅｌｅｘａ）、パロキセチン（Ｐａｘｉｌ）またはセルトラリン（Ｚｏｌｏｆｔ））などの抗うつ薬、および／または抗精神病性鎮静（例えば、オランザピン（Ｚｙｐｒｅｘａ）もしくはケチアピン（Ｓｅｒｏｑｕｅｌ）、ＡｌｅｃｔｏｒのＡＬ００１、または公開された米国特許出願公開第２０１７０２６７７６１号に記載されている抗体）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。

抗体は、処置されている障害の少なくとも１つの徴候または症候の発症を遅延させ、重症度を低下させ、更なる悪化を阻害し、および／または改善する投与量、投与経路および投与頻度を意味する有効なレジメンで投与される。患者が既に障害に罹患している場合、レジメンは治療上有効なレジメンと呼ぶことができる。患者が一般集団と比較して障害のリスクが高いが、まだ症候を経験していない場合、レジメンは予防的に有効なレジメンと呼ばれ得る。いくつかの例では、治療的または予防的有効性は、履歴コントロールまたは同じ患者の過去の経験と比較して、個々の患者で観察することができる。他の例では、治療的または予防的有効性は、未処置患者のコントロール集団と比較して、処置患者の集団における前臨床または臨床試験で実証することができる。

抗体の例示的な投与量は、０．１～６０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５、３、１０、３０もしくは６０ｍｇ／ｋｇ）、または０．５～５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．５、１、２、３、４もしくは５ｍｇ／ｋｇ）、または固定投与量として１０～４０００ｍｇもしくは１０～１５００ｍｇである。投与量は、他の要因の中でも、患者の症状および以前の処置に対する応答（存在する場合）、処置が予防的であるか治療的であるか、および障害が急性であるか慢性であるかに依存する。

投与は、非経口、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、局所、鼻腔内または筋肉内であり得る。いくつかの抗体は、静脈内または皮下投与によって全身循環に投与され得る。静脈内投与は、例えば、３０～９０分などの期間にわたる注入によるものであり得る。

投与頻度は、とりわけ、抗体の循環半減期、患者の症状および投与経路に依存する。頻度は、処置されている障害の患者の症状の変化または進行に応じて、毎日、毎週、毎月、四半期毎、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、連続的な処置要因にわたって毎週と３ヶ月毎との間であるが、より多いまたはより少ない投与も可能である。皮下投与の場合、例示的な投与頻度は毎日～毎月であるが、より多いまたはより少ない投与も可能である。

投与される投与量の数は、障害が急性であるか慢性であるか、および処置に対する障害の応答に依存する。急性障害または慢性障害の急性増悪の場合、１回～１０回の投与で十分であることが多い。場合によっては、単回ボーラス用量は、必要に応じて分割形態で、急性障害または慢性障害の急性増悪に十分である。急性障害の再発または急性増悪に対して処置を繰り返すことができる。慢性障害の場合、抗体は、一定の間隔で、例えば、少なくとも１、５もしくは１０年間、または患者の生涯にわたって、毎週、２週間毎、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎に投与することができる。
Ａ．診断および監視方法

例えば、対象からの試料中のソルチリンを測定することによって、または対象中のソルチリンのインビボイメージングによって、対象中のソルチリンを検出する方法も提供される。そのような方法は、ソルチリンもしくはプログラニュリンまたはそれらに対する感受性に関連する疾患を診断または確認するのに有用である。本方法は、無症候性の対象にも使用することができる。本方法はまた、例えば、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または老化に関連する神経変性障害などの、ソルチリンおよびプログラニュリンに関連する疾患と以前に診断された対象における疾患進行および／または処置に対する応答を監視するのに有用である。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。

本方法は、本出願に記載されるソルチリンに結合する任意の抗体（例えば、マウス、ヒト化、キメラまたはベニアリングされた５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８および４Ｎ２抗体）などの試薬を対象に投与し、次いで、それが結合した後に薬剤を検出することによって機能する。アミノ酸残基ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、もしくはＥ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０７）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）、もしくはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）内のエピトープで、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７によって定義されるエピトープに、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０によって定義されるエピトープに、または配列番号２１５のソルチリンＥＣＤの残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５によって定義されるエピトープに特異的に結合する抗体を使用することができる。いくつかの方法では、抗体は、アミノ酸残基ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）、ＥＳＦＬ（配列番号２０３）、ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ）（配列番号２０４）、ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）、Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０７）、ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）、またはＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）内のエピトープからなるペプチドに結合する。抗体は、典型的には、ソルチリンのエピトープに結合する。所望であれば、Ｆａｂなどの全長定常領域を欠く抗体断片を使用することによって、クリアリング応答（ｃｌｅａｒｉｎｇ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を回避することができる。いくつかの方法では、同じ抗体が処置および診断試薬の両方として機能することができる。

診断試薬は、患者の体内への静脈内注射によって、または頭蓋内注射によってもしくは頭蓋骨に穴を開けることによって脳に直接投与することができる。試薬の投与量は、処置方法と同じ範囲内であるべきである。典型的には、試薬は標識されるが、いくつかの方法では、ソルチリンに対する親和性を有する一次試薬は標識されず、二次標識剤が一次試薬に結合するために使用される。標識の選択は、検出手段に依存する。例えば、蛍光標識が光学的検出に適している。常磁性標識の使用は、外科的介入を伴わない断層撮影検出に適している。放射性標識は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出することもできる。

診断は、標識された遺伝子座の数、サイズおよび／または強度を対応するベースライン値と比較することによって行われる。ベースライン値は、罹患していない個体の集団における平均レベルを表すことができる。ベースライン値はまた、同じ対象において決定された以前のレベルを表すことができる。例えば、処置を開始する前に対象においてベースライン値を決定し、その後の測定値をベースライン値と比較することができる。患者が細胞表面ソルチリンの減少を有する場合、処置は、細胞表面ソルチリンを正常レベルまで増加させるように調整することができる。

ソルチリンのインビボイメージングの方法は、細胞外プログラニュリンを増加させる薬剤で処置されている患者、例えば、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、もしくは加齢に関連する神経変性障害、またはそのような疾患に対する感受性について処置されている患者の細胞表面ソルチリンを監視するのに有用である。例えば、本方法は、前頭側頭型認知症の処置を受けている患者に使用することができる。患者が細胞表面ソルチリンの減少を有する場合、処置は、細胞表面ソルチリンを正常レベルまで増加させるように調整することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。

いくつかの患者では、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害の診断は、ＰＥＴスキャンを実施することによって補助され得る。ＰＥＴスキャンは、例えば、従来のＰＥＴイメージャおよび補助機器を使用して実行することができる。スキャンは、典型的には、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害に関連することが一般に知られている脳の１つまたはそれを超える領域と、コントロールとして用いられる１つまたはそれを超える領域とを含む。

ＰＥＴスキャンで検出された信号は、多次元画像として表すことができる。多次元画像は、脳を通る断面を表す２次元、３次元脳を表す３次元、または経時的な３次元脳の変化を表す４次元とすることができる。カラースケールは、異なる量の標識、および本質的には検出されたソルチリンタンパク質を示す異なる色で使用することができる。スキャンの結果はまた、検出された標識の量およびその結果としてのソルチリンの量に関連する数字と共に数値的に提示され得る。プログラニュリンレベル（例えば、前頭側頭型認知症）の変化に関連する特定の疾患もしくは障害に関連することが知られている脳の領域に存在する標識を、疾患もしくは障害に関連しないことが知られている領域に存在する標識と比較して、前者の領域内の沈着物の程度を示す比を提供することができる。同じ放射性標識リガンドについて、そのような比は、異なる患者間で同等のソルチリンの測定値およびその変化を提供する。

いくつかの方法では、ＰＥＴスキャンは、ＭＲＩまたはＣＡＴスキャンと同時または同じ患者訪問で実行される。ＭＲＩまたはＣＡＴスキャンは、ＰＥＴスキャンよりも脳の解剖学的詳細を提供する。しかしながら、ＰＥＴスキャンの画像は、ＭＲＩまたはＣＡＴスキャンの画像と重ね合わせることで、より正確にＰＥＴリガンドおよび推測されるソルチリンの脳内の解剖学的構造との位置を示すことができる。いくつかのマシンは、患者がスキャン間で位置を変えることなくＰＥＴスキャンとＭＲＩまたはＣＡＴスキャンとの両方を実行することができ、画像の重ね合わせを容易にする。

適切なＰＥＴリガンドには、本発明の放射性標識抗体（例えば、マウス、ヒト化、キメラまたはベニアリングされた５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２抗体）が含まれる。使用される放射性同位体は、例えば、Ｃ^１１、Ｎ^１３、Ｏ^１５、Ｆ^１８またはＩ^１２３であり得る。ＰＥＴリガンドの投与とスキャンの実施との間の間隔は、ＰＥＴリガンド、特にその脳への取り込みおよび除去の速度、ならびにその放射性標識の半減期に依存し得る。

ＰＥＴスキャンはまた、無症候性患者または軽度認知障害の症候を有するが、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害とまだ診断されていないが、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を発症するリスクが高い患者において予防的手段として実施することができる。無症候性患者の場合、スキャンは、家族歴、遺伝的もしくは生化学的危険因子、または成熟年齢のために、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害のリスクが高いと考えられる個体に特に有用である。予防的スキャンは、例えば、４５歳～７５歳の患者の年齢で開始することができる。いくつかの患者では、最初のスキャンは５０歳で実施される。

予防的スキャンは、例えば、６ヶ月～１０年、好ましくは１～５年の間隔で行うことができる。いくつかの患者では、予防的スキャンが毎年行われる。

ソルチリンおよびプログラニュリンに関連する疾患および障害の診断、監視、および処置の調整に関する前述の説明は、主にＰＥＴスキャンの使用に焦点を当ててきた。しかしながら、そのような方法を実施するために、ＰＥＴスキャンの代わりに、本発明のソルチリン抗体（例えば、マウス、ヒト化、キメラまたはベニアリングされた５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２抗体）の使用に適した、ソルチリンを可視化および／または測定するための任意の他の技術を使用することができる。

また、ソルチリンおよびプログラニュリンに関連する疾患および障害に罹患しているかまたは罹患しやすい患者において、ソルチリンに対する免疫応答を検出する方法も提供される。本方法は、本明細書で提供される薬剤による一連の治療的および予防的処置を監視するために使用することができる。受動免疫化後の抗体プロファイルは、典型的には、抗体濃度の即時ピークとそれに続く指数関数的減衰を示す。更なる投与がなければ、崩壊は、投与された抗体の半減期に応じて数日～数ヶ月以内に処置前のレベルに近づく。例えば、いくつかのヒト抗体の半減期は２０日程度である。

いくつかの方法では、対象におけるソルチリンに対する抗体のベースライン測定を投与前に行い、その後すぐに２回目の測定を行ってピーク抗体レベルを決定し、１またはそれを超える更なる測定を間隔を置いて行い、抗体レベルの減衰を監視する。抗体のレベルがベースラインまたはベースラインより低いピークの所定のパーセンテージ（例えば、５０％、２５％または１０％）まで低下した場合、更なる用量の抗体の投与を行う。いくつかの方法では、ピークレベルまたはその後に測定されたバックグラウンドのより少ないレベルは、他の対象において有益な予防的または治療的処置レジメンを構成するために以前に決定された参照レベルと比較される。測定された抗体レベルが基準レベル（例えば、処置から利益を受ける対象の集団における基準値の平均マイナス１または好ましくは２標準偏差未満）より著しく低い場合、追加用量の抗体の投与が適応とされる。

プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害を有するかまたは有すると疑われるかまたは有するリスクがある対象から得られた生物学的試料を、本明細書中に開示される抗体と接触させて、ソルチリンの存在を評価することができる。例えば、そのような対象におけるソルチリンのレベルを、健康な対象に存在するものと比較することができる。あるいは、疾患の処置を受けているそのような対象のソルチリンのレベルを、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害の処置を受けていない対象のレベルと比較することができる。いくつかのそのような検査は、そのような対象から得られた組織の生検を含む。ＥＬＩＳＡアッセイはまた、例えば、流体試料中のソルチリンを評価するための有用な方法であり得る。
ＶＩＩ．キット

本発明はさらに、本明細書中に開示される抗体および使用説明書（例えば、添付文書）などの関連資料を含むキット（例えば、容器）を提供する。使用説明書は、例えば、抗体および必要に応じて１つまたはそれを超える更なる薬剤の投与についての説明書を含み得る。抗体の容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）、またはサブ単位用量であり得る。

添付文書は、そのような治療用製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含む治療用製品の市販パッケージに通例含まれる説明書を指す。

キットはまた、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液を含む第２の容器を含み得る。それはまた、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的観点およびユーザの観点から望ましい他の材料を含むことができる。
ＶＩＩＩ．その他の用途

抗体は、臨床診断もしくは処置の状況において、または研究において、ソルチリンまたはその断片を検出するために使用することができる。例えば、抗体を使用して、生物学的試料中のソルチリンの存在を検出することができる。生物学的試料への抗体の結合を、コントロール試料への抗体の結合と比較することができる。コントロール試料および生物学的試料は、同じ組織起源の細胞を含むことができる。コントロール試料および生物学的試料は、同じ個体または異なる個体から、同じ機会または異なる機会に得ることができる。必要に応じて、複数の生物学的試料および複数のコントロール試料を複数の機会で評価して、試料間の差とは無関係にランダムな変動から保護する。次いで、生物学的試料とコントロール試料との間で直接比較を行って、生物学的試料への抗体結合（すなわち、ソルチリンの存在）がコントロール試料への抗体結合と比較して増加、減少、または同じであるかどうかを決定することができる。コントロール試料と比較した生物学的試料への抗体の結合の増加は、生物学的試料中のソルチリンの存在を示す。場合によっては、抗体結合の増加は統計学的に有意である。必要に応じて、生物学的試料への抗体結合は、コントロール試料への抗体結合よりも少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍高い。

さらに、抗体を使用して、生物学的試料中のソルチリンの存在を検出して、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害と診断された患者を処置するために使用されている治療薬の有効性を監視および評価することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害と診断された患者からの生物学的試料を評価して、治療薬による治療を開始する前に、試料への抗体の結合のベースラインを確立する（すなわち、試料中のソルチリンの存在についてのベースライン）。場合によっては、患者からの複数の生物学的試料を複数回評価して、処置とは無関係にベースラインおよびランダム変動の尺度の両方を確立する。次いで、治療剤をレジメンで投与する。レジメンは、一定期間にわたる薬剤の複数回投与を含み得る。必要に応じて、抗体の結合（すなわち、ソルチリンの存在）は、ランダムな変動の尺度を確立するためと、免疫療法に応答する傾向を示すためとの両方のために、患者からの複数の生物学的試料において複数回評価される。次いで、生物学的試料への抗体結合の様々な評価を比較する。２つの評価のみが行われる場合、抗体結合（すなわち、ソルチリンの存在）が２つの評価の間で増加したか、減少したか、または同じままであったかどうかを決定するために、２つの評価の間で直接比較を行うことができる。３つ以上の測定が行われる場合、測定は、治療剤による処置前に開始し、治療期間中の時間経過として分析することができる。生物学的試料への抗体結合が減少した患者（すなわち、細胞表面ソルチリンの減少）では、細胞表面ソルチリンを正常レベルまで増加させるように治療を調整することができる。抗体結合の評価は、プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害の他の徴候および症候の評価と併せて行うことができる。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば実施例８のように、プログラニュリンレベルを検出、測定および／または監視することをさらに含む。

抗体はまた、ソルチリンまたはその断片を検出する際の実験室研究のための研究試薬として使用することができる。そのような使用では、抗体を蛍光分子、スピン標識分子、酵素、または放射性同位体で標識することができ、検出アッセイを実施するために必要なすべての試薬と共にキットの形態で提供することができる。抗体はまた、例えばアフィニティークロマトグラフィーによって、ソルチリンまたはソルチリンの結合パートナーを精製するために使用することができる。

上記または下記に引用されるすべての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号などは、各個々の項目が参照によりそのように組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。配列の異なるバージョンが異なる時点でアクセッション番号と関連付けられる場合、本出願の有効出願日におけるアクセッション番号と関連付けられるバージョンを意味する。有効出願日とは、実際の出願日または該当する場合には受託番号に言及する優先権出願の出願日のうち早い方を意味する。同様に、刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時点で公開されている場合、特に明記しない限り、本出願の有効出願日において最も新しく公開されたバージョンを意味する。本発明の任意の特徴、ステップ、要素、実施形態、または態様は、特に明記しない限り、他の任意のものと組み合わせて使用することができる。本発明は、明確さおよび理解のために例示および例としてある程度詳細に説明されているが、添付の特許請求の範囲内で特定の変更および修正が実施され得ることは明らかであろう。

実施例１．マウス抗ヒトソルチリン抗体の作製

Ａ．免疫

様々な染色の約６週齢の雌マウス８匹（２×スイスウェブスター、２×ＮＺＢ／ｗ、２×ＡＪ、１×ＳＪＬおよび１×Ｂａｌｂ／Ｃ）に、以下の表５のように飛節（足首のすぐ上の外側足根部）でＣ末端ＨＩＳタグを有する組換えヒトソルチリンの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ）を皮下免疫化した。ＰＢＳ中の免疫原を、最初の８回の注射のために適切なアジュバント（以下の表を参照）と１：１で混合し、次いで、アジュバントなしで最終的な注射を受けた。次いで、マウスをＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）および無関係のＨＩＳタグ付きタンパク質に対して力価測定して、２８日間の免疫スケジュールの１７および２４日目にソルチリンに対する特異性を確保した。

Ｂ．融合＆スクリーニング

すべてのマウスは抗原特異的力価を示し、犠牲にした。膝窩リンパ節、鼠径リンパ節および腸間膜リンパ節ならびに脾臓を採取し（すべてのマウス由来の脾臓をプールし、すべてのマウス由来のリンパ節をプールした）、処理した。脾細胞を凍結保存し、Ｂ細胞濃縮（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を製造元のプロトコルに従ってプール済みリンパ球に対して行った。およそ８０００万個のＢ細胞を、電気融合によってＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ）と１：１の比で融合した。融合した細胞の１／３を融合培地（８０μｌ／ウェル）中の１１×３８４ウェルプレートに播種し、３７℃－５％ＣＯ_２でインキュベートし、残りの細胞を凍結保存した。

８～１０日後、上清をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。一次スクリーニングのために、３８４ウェルＥＬＩＳＡプレート（化学発光適合性）を１μｇ／ｍＬの組換えＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ（２０μＬ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。すべてのプレートをＰＢＳ中３％ＢＳＡで室温で１時間ブロックした。次いで、プレートを、０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０（ＴＢＳＴ）を含有するトリス緩衝生理食塩水で３回洗浄した。２０μＬの上清をＥＬＩＳＡプレートの類似のウェルに添加し、インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。次いで、ＴＢＳＴ中１％ＢＳＡで１：７０００に希釈したヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）を２０μＬ／ウェルで添加して、結合した抗体と反応させ、１時間インキュベートした後、上記のように洗浄した。Ｓｕｐｅｒ ｓｉｇｎａｌ Ｐｉｃｏ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ＥＬＩＳＡ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を検出に使用した。２０μＬの基質を各ウェルに添加し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐａｒａｄｉｇｍ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して相対光単位（ＲＬＵ）を直ちに測定した。上部５７６ウェル（ＲＬＵシグナルに基づく）を９６ウェルプレートに移し、２日間培養した。次いで、ＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳおよび無関係なＨｉｓタンパク質を使用して確認スクリーニングを行い、抗体がソルチリン特異的であるかどうかを決定した。１０５個の非クローン性ハイブリドーマを確認スクリーニングから選択し、凍結保存および更なる試験のための飽和上清の生成の両方のためにさらに培養した。１０５個の飽和上清を、ＥＬＩＳＡ（実施例４のような方法）によって、ソルチリンに結合するプログラニュリン（ソルチリンのリガンド）のブロッキングについて試験した。結果を図７に示す。２９個の抗体が、プログラニュリンのソルチリンへの結合をブロックした。２９個のブロッキングハイブリドーマおよび２個の非ブロッキング（陰性コントロール）ハイブリドーマを解凍し、クローン化してモノクローナル抗体を作製した。

実施例２：クローニングおよびモノクローナル抗体の精製

ハイブリドーマのクローニングを、連続希釈によって、またはｃｌｏｎｅｐｉｘ ２（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して行った。Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ２を使用してクローニングしたハイブリドーマを、製造元のプロトコルに従ってそのように行った。段階希釈クローニングのために、細胞を計数し、０．５細胞／ウェルの密度でクローニング培地中の３８４ウェルプレートの１／２に播種し、３７℃－５％ＣＯ_２でインキュベートした。翌日、各ウェルを顕微鏡下で視覚的に検査し、細胞の単一コロニーを有するウェルをモノクローナルとしてマークした。７～８日の培養後、上清を、ＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳへの結合についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。２８個のモノクローナル抗体のクローニングに成功した。２８個のハイブリドーマを凍結保存および抗体精製のために増殖させた。抗体を、標準的な方法を利用するプロテインＡクロマトグラフィーを使用して精製した。精製後、抗体を１×ＰＢＳに交換し、タンパク質濃度を２８０ｎｍでの吸光度によって決定した。次いで、精製モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を更なるスクリーニングのために移動させた。

実施例３：ソルチリン結合ＥＬＩＳＡ

ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎに結合する精製抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ ｍＡｂを、ｍＡｂ濃度の１２点力価測定を使用するＥＬＩＳＡ（実施例１のようなＥＬＩＳＡプロトコル）によって特徴付けた。ｍＡｂを６７ｎＭの開始濃度から２倍希釈し、次いで、ＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ被覆プレートに加えた。データを分析し、グラフ化されたＰｒｉｓｍを用いてＥＣ_５０（ｎＭ）を計算した。市販のヤギ抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を陽性コントロールとして使用した。結果を図８に示す。

実施例４ プログラニュリンブロッキングＥＬＩＳＡ

非クローン性の飽和上清を用いたブロッキングＥＬＩＳＡ

どのハイブリドーマをクローニングするかを選択するために、飽和上清を、プログラニュリンのソルチリンへの結合をブロックするかどうかを調べた。タグなしのヒトプログラニュリン（ｈｕＰＧＲＮ、Ａｄｉｐｏｇｅｎ社）を、製造元のプロトコルに従って、ＥＺ－Ｌｉｎｋ ＮＨＳ－ＰＥＧ４－ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社）およびＺｅｂａＳｐｉｎカラムを使用して５：１の比で最初にビオチン化した。結果を図７に示す。

３８４ウェルＥＬＩＳＡプレートを２μｇ／ｍＬの組換えＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ（２０μＬ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。すべてのプレートをＰＢＳ中３％ＢＳＡで室温で１時間ブロックした。次いで、プレートをＴＢＳＴで３回洗浄した。飽和上清をＴＢＳＴ中１％ＢＳＡで４倍希釈した。２０μＬの希釈上清をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートをＴＢＳＴで洗浄し、２０μＬの２μｇ／ｍＬ ｈｕＰＧＲＮ－ビオチンを各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。次いで、ＴＢＳＴ中１％ＢＳＡ中１：１０，０００に希釈したストレプトアビジン－ＨＲＰ（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を２０μＬ／ウェルで添加して、結合したｈｕＰＧＲＮ－ビオチンと反応させ、１時間インキュベートした後、洗浄し、上記のようにＳｕｐｅｒ ｓｉｇｎａｌ Ｐｉｃｏ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ＥＬＩＳＡ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用して検出した。Ａｂコントロールなしと比較してｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎへのｈｕＰＧＲＮの結合を少なくとも３０％ブロックした（対応する上清の）ハイブリドーマをクローニングのために選択した。

精製ｍＡｂを用いたブロッキングＥＬＩＳＡ

２８個の精製抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ ｍＡｂを、ソルチリンへのＰＧＲＮ結合をブロックする能力についてさらに特徴付けた。ブロッキングＥＬＩＳＡを、１３４ｎＭで開始するＴＢＳＴ中１％ＢＳＡにおけるｍＡｂの６点３倍希釈物を使用して上記のように行った。データを分析し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ＥｘｃｅｌおよびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してブロッキング（％）を計算した。結果を図８に示す。

実施例５：ニューロテンシン競合Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ

ＰＧＲＮおよびニューロテンシン（ＮＴ）は、ソルチリン上の同様の領域に結合することが知られている。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器）を使用して、抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ ｍＡｂがＮＴのソルチリンへの結合をブロックするかどうかを調べた。簡潔には、２５ｎＭ抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ ｍＡｂをＣＭ５抗マウスＦｃチップ上に捕捉した（６０秒の会合）。次いで、０ｎｍ、１００ｎＭ、５００ｎＭまたは１０００ｎＭのＮＴ（Ｔｏｃｒｉｓ社）とプレインキュベートした１００ｎＭ組換えＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ（６０秒会合、３０秒解離）を、捕捉されたｍＡｂ表面上に流した。サイクル間に１０ｎＭグリシンｐＨ１．５を使用してチップ表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア２．０．１５．１２９３３を使用してデータを分析し、グラフ化した。１８個の抗ソルチリンｍＡｂは、ソルチリンへの結合についてＮＴと競合せず、６個はいくらかの競合を示し、３個はソルチリンへの結合についてＮＴと明確に競合した。結果を図９に示す。

実施例６：ソルチリン結合細胞ベースアッセイ

次いで、ＨＥＫ２９３細胞の表面上に発現された組換えｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ、および細胞表面上にソルチリンを内因的に発現するＵ２５１ＭＧ細胞（ヒト神経膠芽腫細胞株）に結合する精製抗ソルチリンｍＡｂの能力を調べた。親ＨＥＫ２９３細胞を陰性コントロールとして使用した。２８個すべての精製抗ソルチリンｍＡｂを単一濃度（６７ｎＭ）で試験した。細胞を採取し、９６ウェルプレートにウェルあたり２０Ｋ細胞で播種した。ＰＢＳ＋２％ＦＢＳで希釈したｍＡｂをウェルに添加し（５０μＬ／ウェル）、細胞を氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳ＋２％ＦＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中５０μＬ／ウェル５μｇ／ｍＬ Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ６４７ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）と共に氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を上記のように２回洗浄し、１００μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁した。ＢＤ ＬＳＲ ＩＩを用いてデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．６を用いて分析した。蛍光強度中央値（ＭＦＩ）値の計算は、２８個すべての抗ソルチリンｍＡｂが、ＨＥＫ２９３細胞を発現するｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎに結合することを示した。そのうちの３個はまた、親ＨＥＫ細胞に対するバックグラウンド結合を示した。２２ｍＡｂは、Ｕ２５１ＭＧ細胞の表面上のソルチリンに対する様々な程度の結合を示した。６ｍＡｂはＵ２５１細胞への結合を示さなかった。結果を図１０に示す。

実施例７：プログラニュリンブロッキング力価測定細胞ベースアッセイ

２８個すべての精製抗ソルチリンｍＡｂを単一濃度（６７ｎＭ）で試験して、ＨＥＫ２９３細胞を発現する細胞表面ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎへのｈｕＰＧＲＮ－ビオチン結合をブロックする能力を決定した。細胞を、標準的な方法を使用して培養した。細胞を採取し、９６ウェルプレートにウェルあたり２０Ｋ細胞で播種した。３０ｎＭのｈｕＰＧＲＮ－ビオチンを含有するＰＢＳ＋２％ＦＢＳに希釈したｍＡｂをウェルに添加し（５０μＬ／ウェル）、細胞を氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳ＋２％ＦＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中１：２００ステプタアビジン－ＡＰＣ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）５０μＬ／ウェルで氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を上記のように洗浄し、１００μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁した。ＢＤ ＬＳＲ ＩＩを使用してデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．６およびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ ｅｘｃｅｌを使用して分析した。１２個の抗ソルチリンｍＡｂが、３０％を超えるｈｕＰＧＲＮの％ブロッキングを示し、これを更なる特徴づけのために選択した。結果を図１１に示す。

細胞ベースのブロッキングアッセイを、６７ｎＭ～０．４ｎＭの用量漸増を使用して上位１２個のブロッキングｍＡｂで繰り返した。ブロッキングアッセイを上記のように行った。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．６およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析した。結果を図１２に示す。

１２ｍＡｂは３つの層に分けられた。層１は、ｈｕＰＧＲＮブロッキングに関して高い効力を示したｍＡｂを含み（８Ｈ２４、５Ｅ２０、２Ｃ１４）、７つのｍＡｂ（層２）は中程度のブロッキング効力を示した（２Ｆ１８、６Ｂ１５、１１Ｍ１４、１１Ｈ２４、６Ｍ２３、２Ｐ２２および９Ｎ１８）。最後の２つのｍＡｂ（７Ａ２２および５Ｌ１６）は、低いｈｕＰＧＲＮブロック効力を示した。

実施例８：細胞外プログラニュリンレベルおよび表面ソルチリンレベル

Ｕ２５１ＭＧ細胞を９６ウェルプレートに播種し、３７℃－５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、培地を除去し、抗ソルチリンｍＡｂ、市販のヤギ抗ｈＳｏｒｔｉｌｉｎ（陽性ブロッキング抗体、Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）またはアイソタイプコントロール抗体のいずれか５０ｎＭを含有する新鮮な培地をウェルに添加した。次いで、細胞を７２時間培養した。次いで、上清を使用して細胞外ｈｕＰＧＲＮレベルを決定し、細胞を採取して細胞表面ソルチリンレベルを調べた。

ＰＧＲＮレベルの増加を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を使用してプレートベースの電気化学発光によって測定した。標準的な結合性９６ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのマウス抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳ中の３％ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロックした。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。５０μＬの細胞上清をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける５０μＬの１μｇ／ｍＬビオチン化ヤギ抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける０５μｇ／ｍＬ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ－ストレプトアビジン（ＭＳＤ）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。１５０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。データを、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用して分析し、１００ ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）で開始する３倍段階希釈を使用して標準曲線に対して定量した。コントロールに対するＰＧＲＮレベルの倍数、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ｅｘｃｅｌを使用して計算した。試験した２５個のマウス抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ ｍＡｂのうち１９個がｍＡｂコントロールウェルまたはアイソタイプコントロールウェルなしでｈｕＰＧＲＮの＞１．５倍の増加を示した。結果を図１３に示す。

表面ソルチリンレベルの減少パーセントをフローサイトメトリーによって決定した。Ｕ２５１ＭＧ細胞を採取し、９６ウェル未処理プレートに播種した。２．５μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトソルチリン抗体（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し（５０μＬ／ウェル）、細胞を氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳ＋２％ＦＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中の５０μＬ／ウェル５μｇ／ｍＬ Ａｌｅｘａ－ｆｌｕｏｒ６４７－ロバ抗ヤギ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）二次抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を上記のように２回洗浄し、１００μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁した。ＢＤ ＬＳＲ ＩＩを使用してデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．６を使用して中央蛍光強度（ＭＦＩ）を決定するために分析した。ＭＦＩ値を使用して、ｍＡｂコントロールウェルなしと比較した細胞表面ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎのパーセントを、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ｅｘｃｅｌを使用して計算した。ほとんどのｍＡｂは、Ｕ２５１細胞における細胞表面ソルチリンレベルの減少を様々な程度まで示した。１３／２５マウス抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ ｍＡｂは、細胞外ｈｕＰＧＲＮレベルを１．５倍超増加させ、細胞表面ソルチリンを最大６０％減少させた。結果を図１３に示す。

実施例９：ＢＩＡｃｏｒｅによるマウスｍＡｂの特性決定

マウス抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ抗体の結合親和性を組換えヒトソルチリンと比較するために、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して分析を行った。アミンカップリングを介して抗マウス抗体をセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上に固定化し、マウス抗体（リガンド）を、５０ＲＵ（およそ１００ＲＵのリガンド結合）の検体の最大結合を確実にするレベルまで捕捉した。１８０～３００秒の会合時間および３００～９００秒の解離時間の間、泳動用緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％ Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中、５０μＬ／分で、様々な濃度のソルチリン（０．１ｎＭ～３００ｎＭの範囲）を捕捉リガンド上に通過させた。チップ表面の再生を、ｐＨ１．７の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌの２回の短い注入によって達成した。データは、リガンドを含まないセンサと０ｎＭの分析物濃度の両方に対してブランクを差し引いた。分析は、バルク屈折率を０ＲＵに設定したＢｉａｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ２．０）による全体的な１：１フィットを使用して行った。結合データを表６に示す。

実施例１０：マウス５Ｅ２０のエピトープマッピング

ＰＥＰｐｅｒＭＡＰ線状エピトープマッピングは、ＰＥＰｐｅｒＰｒｉｎｔ ＧｍｂＨ社によって行った。５Ｅ２０のエピトープ分析をペプチドマイクロアレイ分析によって行った。ヒトソルチリン（７５６アミノ酸、配列番号１）の細胞外ドメインの配列を、切断型ペプチドを回避するためにＣ末端およびＮ末端に中性ＧＳＧＳＧＳＧ（配列番号２０７）リンカーを用いて伸長させた。連結され伸長した抗原配列を、１４アミノ酸のペプチドペプチド重複を有する直鎖１５アミノ酸ペプチドに翻訳した。得られたヒトソルチリンペプチドマイクロアレイは、二連でプリントされた７５６個の異なるペプチドを含有し（１，５１２スポット）、更なるＨＡ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡＧ、配列番号２００、４６スポット）およびｃ－Ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、配列番号２０１、４６スポット）コントロールペプチドによってフレーム化された。

合成後、非特異的結合を防ぐためにマイクロアレイをブロックした（Ｒｏｃｋｌａｎｄカタログ番号ＭＢ－０７０）。次いで、マウス５Ｅ２０を、陽性コントロールマウスモノクローナル抗ＨＡ（１２ＣＡ５）ＤｙＬｉｇｈｔ８００（０．５μｇ／ｍｌ）と共に１μｇ／ｍＬの濃度で、１４０ｒｐｍで振盪しながら４℃で１６時間マイクロアレイに適用した。マイクロアレイを洗浄し、二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＤｙＬｉｇｈｔ ６８０（０．２μｇ／ｍｌ）を室温で４５分間適用した。さらに洗浄した後、Ｌｉｃｏｒ Ｏｄｙｓｓｅｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いてマイクロアレイを画像化した。

スポット強度の定量化およびペプチドアノテーションは、１６ビットのカラー化されたｔｉｆｆファイルよりも高いダイナミックレンジを示す７／７の走査強度での２４ビットのグレースケールｔｉｆｆファイルに基づいた。マイクロアレイ画像解析は、ＰｅｐＳｌｉｄｅ（登録商標）Ａｎａｌｙｚｅｒを用いて行った。ソフトウェアアルゴリズムは、各スポットの蛍光強度を生信号、前景信号および背景信号に分離し、スポット複製の平均前景強度中央値およびスポット間偏差を計算する（「生データ」タブを参照のこと）。平均化された前景強度の中央値に基づいて、強度マップが生成され、ペプチドマップにおける相互作用は、高いスポット強度については赤色、低いスポット強度については白色を有する強度カラーコードによって強調された。４０％の最大スポット間偏差は許容され、それ以外の場合、対応する強度値はゼロにされた。

コンセンサスモチーフＦＴＥＳＦＬＴを有する隣接ペプチドによって形成されたエピトープ様スポットパターンに対する非常に強いモノクローナル抗体応答がマウス５Ｅ２０について観察された（配列番号２０２）。本発明者らはまた、コンセンサスモチーフ

を有するペプチドに対する２つの非常に弱い更なる応答を、おそらくわずかな配列類似性に基づく交差反応に起因して観察した（下線付きアミノ酸位置を参照のこと）。

実施例１１：ヒト化ｍＡｂの特性決定：フソルチリン結合ＥＬＩＳＡ

３８４ウェルＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ｍＬの組換えＥＣＤ－ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ－ＨＩＳ（２０μＬ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。すべてのプレートをＰＢＳ中３％ＢＳＡで室温で１時間ブロックした。次いで、プレートを、０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０（ＴＢＳＴ）を含有するトリス緩衝生理食塩水で３回洗浄した。ＴＢＳＴ中１％ＢＳＡにおける２０μｇ／ｍＬから０．３ｎｇ／ｍＬに３倍希釈した２０μＬのヒト化抗ソルチリンｍＡｂをウェルに添加し、室温で１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。次いで、ＴＢＳＴ中１％ＢＳＡで１：７０００に希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ特異的ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）を２０μＬ／ウェルで添加して結合抗体と反応させ、プレートを１時間インキュベートした後、上記のように洗浄した。Ｓｕｐｅｒ ｓｉｇｎａｌ Ｐｉｃｏ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ＥＬＩＳＡ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を検出に使用した。２０μＬの基質を各ウェルに添加し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐａｒａｄｉｇｍ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して相対光単位（ＲＬＵ）を直ちに測定した。データを分析し、グラフ化されたＰｒｉｓｍを用いてＥＣ_５０を計算した。ヒト化５Ｅ２０バリアントの選択された組み合わせについての結果を表７に示す。ヒト化８Ｈ２４バリアントの選択された組み合わせの結果を表８に示す。ヒト化１１Ｍ１４バリアントの選択された組み合わせの結果を表９に示す。

実施例１２：ヒト化ｍＡｂの特性決定：機能的アッセイ

Ｕ２５１ＭＧ細胞を９６ウェルプレートに播種し、３７℃－５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、培地を除去し、５０ｎＭ～０．５ｎＭの１０倍希釈（５Ｅ２０ラウンド２および１１Ｍ１４ラウンド２）または５０ｎＭ～５．６ｎＭの３倍希釈（５Ｅ２０ラウンド１および８Ｈ２４）のヒト化、マウスおよびキメラバリアントの抗ソルチリンｍＡｂまたはアイソタイプコントロール抗体を含む新鮮培地をウェルに添加した。細胞を７２時間培養した。次いで、上清を使用して細胞外ｈｕＰＧＲＮレベルを決定し、細胞を採取して細胞表面ソルチリンレベルを調べた。

ＰＧＲＮレベルの増加を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を使用してプレートベースの電気化学発光によって測定した。標準的な結合性９６ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのマウス抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、次いで、ＰＢＳ中の３％ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロックした。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。５０μＬの上清をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける５０μＬの１μｇ／ｍＬビオチン化ヤギ抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける０５μｇ／ｍＬ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ－ストレプトアビジン（ＭＳＤ）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。１５０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。データを、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用して分析し、１００ ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）で開始する３倍段階希釈を使用して標準曲線に対して定量した。コントロールに対するＰＧＲＮレベルの倍数、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ｅｘｃｅｌを使用して計算した。ヒト化５Ｅ２０バリアントの選択された組み合わせの結果を表１０に示す。ヒト化８Ｈ２４バリアントの選択された組み合わせの結果を表１１に示す。ヒト化１１Ｍ１４バリアントの選択された組み合わせの結果を表１２に示す。

表面ソルチリンレベルの減少パーセントをフローサイトメトリーによって決定した。Ｕ２５１ＭＧ細胞を採取し、未処理の９６ウェルプレートに播種した。２．５μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトソルチリン抗体（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し（５０μＬ／ウェル）、細胞を氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳ＋２％ＦＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中の５０μＬ／ウェル５μｇ／ｍＬ Ａｌｅｘａ－ｆｌｕｏｒ６４７－ロバ抗ヤギ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）二次抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を上記のように２回洗浄し、１００μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁した。ＢＤ ＬＳＲ ＩＩを使用してデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．６を使用して中央蛍光強度（ＭＦＩ）を決定するために分析した。ＭＦＩ値を使用して、ｍＡｂコントロールウェルなしと比較した細胞表面ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎのパーセントを、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ｅｘｃｅｌを使用して計算した。ヒト化５Ｅ２０バリアントの選択された組み合わせの結果を表１０に示す。ヒト化８Ｈ２４バリアントの選択された組み合わせの結果を表１１に示す。ヒト化１１Ｍ１４バリアントの選択された組み合わせの結果を表１２に示す。

実施例１３：ＢＩＡｃｏｒｅによるヒト化ｍＡｂの特性決定

Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して分析を行い、キメラ抗体およびヒト化抗体の組換えヒトソルチリンに対する結合親和性を比較した。アミンカップリングを介して抗ヒト抗体をセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上に固定化し、ヒト化抗体（リガンド）を、５０ＲＵ（およそ１００ＲＵのリガンド結合）の検体の最大結合を確実にするレベルまで捕捉した。３００秒の会合時間および１２００秒の解離時間の間、泳動用緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％ Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中、５０μＬ／分で、様々な濃度のソルチリン（０．１ｎＭ～３００ｎＭの範囲）を捕捉リガンド上に通過させた。チップ表面の再生は、３ｍＭｇＣｌの２回の短い注入によって達成された。データは、リガンドを含まないセンサと０ｎＭの分析物濃度の両方に対してブランクを差し引いた。分析は、バルク屈折率を０ＲＵに設定したＢｉａｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ２．０）による全体的な１：１フィットを使用して行った。８Ｈ２４ヒト化バリアント、５Ｅ２０ヒト化バリアント、キメラ５Ｅ２０、１１Ｍ１４ヒト化バリアントおよびキメラ１１Ｍ１４の選択された組み合わせについての結合データを表１３に示す。

実施例１４：ヒト化５Ｅ２０抗体の設計

ヒト化のための出発点またはドナー抗体は、マウス抗体５Ｅ２０であった。成熟ｍ５Ｅ２０の重鎖可変アミノ酸配列は、配列番号４として提供される。成熟ｍ５Ｅ２０の軽鎖可変アミノ酸配列は、配列番号１０として提供される。重鎖Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５～７として提供される。軽鎖Ｋａｂａｔ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１１～１３として提供される。Ｋａｂａｔナンバリングが全体を通して使用される。

５Ｅ２０の可変κ（Ｖｋ）は、ヒトＶｋサブグループ１に対応するマウスＶｋサブグループ１ｂに属し、可変重鎖（Ｖｈ）は、ヒトＶｈサブグループ１に対応するマウスＶｈサブグループ３ｄに属する［Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら、（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２］。１１残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス２に類似しており、７残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似しており、９残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似している［Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ．（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ Ｓ（編）．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＡＧ．［Ｍａｒｔｉｎ，２０１０］。１０残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似しており、１７残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス３に類似している［Ｍａｒｔｉｎ，２０１０］。５残基ＣＤＲ－Ｈ３はカノニカルクラスを有しない。ＰＤＢデータベース［Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ Ｎら、（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ ２３３－７］中のタンパク質配列を検索して、５Ｅ２０の大まかな構造モデルを提供する構造を見つけた。抗体ｆａｂ ＰＤＢコード３Ｖ６Ｆ［Ｄｉｍａｔｔｉａ，Ｍ．Ａ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２１：１３３－１４２，２０１３］の結晶構造は、５Ｅ２０ ＶｈおよびＶｋに対して良好な分解能（２．５２Ａ°）および全体的な配列類似性を有し、ループについて同じカノニカル構造を保持していたため、ＶｈおよびＶｋ構造の両方について３Ｖ６Ｆコードである。

５Ｅ２０ＶＨのフレームワークは、Ｂｏｗｅｒｓ，Ｅ．ら、（ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（１），Ｅ８１９１３（２０１４））によってクローン化されたヒト抗体ＡＥＸ２９０８６ＶＨの対応する領域と高度の配列類似性を共有する。５Ｅ２０およびＡＥＸ２９０８６の可変重鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２ループについて同一の長さを共有する。同様に、５Ｅ２０ＶＬのフレームワークは、Ｋｕｒｏｓａｗａ，Ｙ．ら、（Ｄｉｒｅｃｔ ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ ２０１６）によってクローニングされたヒト抗体ＢＡＨ０４６８７ＶＬの対応する領域と高度の配列類似性を共有する。５Ｅ２０およびＢＡＨ０４６８７抗体の可変軽鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループについて同一の長さを共有する。したがって、ＡＥＸ２９０８６ＶＨおよびＢＡＨ０４６８７ＶＬのフレームワーク領域を、５Ｅ２０のＣＤＲのアクセプター配列として選択した。ＶＨおよびＶＬのそれぞれのヒトフレームワークに移植された５Ｅ２０ ＣＤＲのモデルを構築し、更なる復帰変異のガイダンスとして使用した。

抗体ヒト化プロセスから得られた重鎖および軽鎖変異体配列を、ＩＭＧＴ Ｄｏｍａｉｎ ＧａｐＡｌｉｇｎツールを使用してヒト生殖細胞系列配列にさらにアラインメントして、ＷＨＯのＩＮＮ委員会ガイドラインによって概説されているように重鎖および軽鎖のヒト性を評価した。（ＷＨＯ－ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）」（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ）２０１４。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆから入手可能である）。可能であれば、ヒト性を高め、潜在的な免疫原性を低下させるために、残基を、対応するヒト生殖系列配列とアラインメントするように変更した。ヒト化ＶＬｖ２、ＶＬｖ３、ＶＬｖ４およびＶＬｖ５バリアントについては、配列をヒト生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）により類似させるために変異を導入した。ヒト化ＶＨｖ２、ＶＨｖ３、ＶＨｖ４、ＶＨｖ５、ＶＨｖ６およびＶＨｖ７バリアントについては、配列をヒト生殖系列遺伝子ＩＧＨＶ３－２１^＊０１（配列番号１６２）により類似させるために変異を導入した。

ｈｕ５Ｅ２０－ＶＨおよびｈｕ５Ｅ２０－ＶＬの更なるバージョンを、抗原結合、熱安定性、展開性（脱アミノ化、酸化、Ｎ－グリコシル化、タンパク質分解および凝集）および免疫原性に対するそれらの寄与についての様々なフレームワーク残基の評価を可能にするように設計した。変異のために考慮される位置には、
－カノニカルＣＤＲ立体構造を定義するもの（Ｍａｒｔｉｎに要約）、
－バーニアゾーン内にあるもの（ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ）、
－ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在化するもの（ＬｅｇｅｒおよびＳａｌｄａｎｈａに要約）、
－グリコシル化またはピログルタミル化などの翻訳後修飾を受けやすいもの、
－ＶＨおよびＶＬフレームワーク上に移植された５Ｅ２０ ＣＤＲのモデルに従って、ＣＤＲと衝突すると予測される残基によって占有されているもの、または
－配列決定されたヒト抗体の中では稀な残基によって占有されており、親マウス５Ｅ２０残基または他の何らかの残基のいずれかがヒト抗体レパートリー内ではるかに優勢であるもの
が含まれる。

マウス５Ｅ２０および様々なヒト化抗体のアラインメントを、軽鎖可変領域（表１５および図２）および重鎖可変領域（表１４および図１）について示す。

置換の異なる並べ替えを含む７つのヒト化重鎖可変領域バリアントおよび４つのヒト化軽鎖可変領域バリアントを構築した：ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６またはｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７（それぞれ配列番号１６３～１６９）；およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３またはｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４（それぞれ配列番号１７３～１７６）（表１４および表１５）。選択されたヒトフレームワークに基づく復帰変異および他の変異を有する例示的なヒト化ＶｋおよびＶｈ設計を、それぞれ表１４および１５に示す。表１４および１５の太字の領域は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるＣＤＲを示す。表１４および表１５の欄の「－」は、表示位置に残基がないことを示す。配列番号１６３～１６９および配列番号１７３～１７６は、表１６に示されるような復帰変異および他の変異を含む。ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６、およびｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７の位置のアミノ酸を表１７に列挙する。ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４の位置のアミノ酸を表１８に列挙する。

ヒト化ＶＨ鎖ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ３、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ４、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ５、ｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ６、およびｈｕ５Ｅ２０ＶＨｖ７（それぞれ配列番号１６３～１６９）について、最も類似したヒト生殖細胞系遺伝子ＩＧＨＶ３－２１^＊０１（配列番号１６２）に対する、また、ヒト化ＶＬ鎖ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ１、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ２、ｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ３、およびｈｕ５Ｅ２０ＶＬｖ４（それぞれ配列番号１７３～１７６）について、最も類似したヒト生殖細胞系遺伝子ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）に対するヒト化率を表１９に示す。

カノニカル残基、バーニア残基または界面残基がマウスおよびヒトアクセプター配列間で異なる位置が、置換の候補である。カノニカル／ＣＤＲ相互作用残基の例としては、表１４のＫａｂａｔ残基Ｈ９４が挙げられる。バーニア残基の例としては、表１４のカバット残基Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４、ならびに表１５のＬ３６、Ｌ４６およびＬ６９が挙げられる。界面／パッキング（ＶＨ＋ＶＬ）残基の例としては、表１５のＫａｂａｔ残基Ｌ３６、Ｌ４４、Ｌ４６およびＬ８７が挙げられる。

重鎖可変領域の表１４に示す位置を置換候補として選択する根拠は以下のとおりである。

重鎖可変領域

ｈｕ５Ｅ２０－ＶＨ＿ｖ１
－ＡＥＸ２９０８６のフレームワーク上に移植された５Ｅ２０－ＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２およびＨ３ループからなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、バーニアゾーンの一部であるか、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻す

Ｈｕ５Ｅ２０－ＶＨ＿ｖ２～Ｈｕ５Ｅ２０－ＶＨ＿ｖ７
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、バーニアゾーンの一部であるか、ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在するか、または構造安定性に寄与する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻し、また、復帰変異または所与の位置での最も高頻度の残基による置換を組み込む。

Ｌ５Ｖ：頻度ベースの生殖系列整列変異である。Ｌｅｕはこの位置では稀であるが、Ｖａｌが最も高頻度である。生殖細胞系遺伝子ＩＧＨＶ３－２１^＊０１（配列番号１６２）は、この位置にＶａｌを有する。

Ａ４０Ｔ：復帰変異である。この位置のＴｈｒは、Ｋ４３重鎖と結合してループを安定化し、次にＣＤＲ－Ｈ２の立体構造を維持する。

Ｇ４２Ｄ：Ａｓｐは、両方とも重鎖においてＫ４３およびＴ４０と結合することによってループを安定化する。このテトラループ架橋は、ループの立体構造を維持する。この位置のＧｌｙは、Ｒ４４重鎖とＦ９８軽鎖との間の結合を可能にしない立体構造を歪ませる。この復帰変異は、立体構造を保存するために行われる。

Ｇ４４Ｒ：Ａｒｇ４４は、軽鎖Ｐｈｅ９８と鎖間結合を形成する。この位置のＧｌｙは、軽鎖Ｐｈｅ９８と鎖間結合を形成せず、抗体を不安定にする可能性がある。位置４４でのＡｒｇによる安定化は、ＣＤＲ立体構造を保存し得る。立体構造および安定性を保存するために、復帰変異が行われる。

Ｓ４９Ａ：バーニアゾーン残基の復帰変異。

Ｔ７７Ｓ：生殖系列整列変異である。生殖系列遺伝子ＩＧＨＶ３－２１^＊０１（配列番号１６２）は、この位置にＳｅｒを有する。

Ｒ８３Ｋ：Ａｓ ＡｒｇとＬｙｓとは非常に類似した残基であるため、安定性を高めるためにＬｙｓに変異させる。

Ａ９３Ｓ：バーニアゾーンおよびＶＨ／ＶＬドメイン界面残基の復帰変異

Ｋ９４Ｒ：カノニカルおよびバーニアゾーン残基の復帰変異

表１５に示す軽鎖可変領域の位置を置換候補として選択する根拠は以下のとおりである。

κ軽鎖可変領域
ｈｕ５Ｅ２０－ＶＬ＿ｖ１
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーンの一部であるか、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に位置する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻すことと共に、ＢＡＨ０４６８７ＶＬのフレームワーク上に移植された５Ｅ２０－ＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３ループからなる。
Ｈｕ５Ｅ２０－ＶＬ＿ｖ２、ｈｕ５Ｅ２０－ＶＬ＿ｖ３およびｈｕ５Ｅ２０－ＶＬ＿ｖ４
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーンの一部であるか、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に位置する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻すことと共に、ＢＡＨ０４６８７ＶＬのフレームワーク上に移植された５Ｅ２０－ＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３ループからなる。
－構造安定性に寄与するかまたは抗体のヒト性を増加させる置換も含む。

Ｌ１１Ｖ：生殖系列整列変異である。生殖系列遺伝子配列ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）は、この位置にＶａｌを有する。

Ｙ３６Ｌ：バーニアゾーンおよびＶＨ／ＶＬドメイン界面残基の復帰変異

Ｐ４４Ｆ：ＶＨ／ＶＬドメイン界面残基の復帰変異

Ｌ４６Ｇ：バーニアゾーンおよびＶＨ／ＶＬドメイン界面残基の復帰変異

Ｔ６９Ａ：バーニアゾーン残基の復帰変異

Ｔ８５Ｄ：鎖間結合を高める変異である。

Ｙ８７Ｆ：ＶＨ／ＶＬドメイン界面残基の復帰変異

Ｇ１００Ｑ：生殖系列アラインメントおよび頻度ベースの変異である。生殖系列遺伝子配列ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）は、この位置にＧｌｎを有する。Ｇｌｎはこの位置で最も高頻度である。

Ｉ１０６Ｋ：生殖系列アラインメントおよび頻度ベースの変異である。生殖系列遺伝子配列ＩＧＫＶ１－１２^＊０１（配列番号１７２）は、この位置にＬｙｓを有する。この位置のＬｙｓはより頻度が高い。

重鎖可変領域の配列

配列番号１６３＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン１（８７．８．％ヒト）

配列番号１６４＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン２（８９．８％ヒト）

配列番号１６５＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン３（８６．７％ヒト）

配列番号１６６＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン４（８５．７％ヒト）

配列番号１６７＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン５（８４．７％ヒト）

配列番号１６８＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン６（８５．７％ヒト）

配列番号１６９＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン７（８４．７％ヒト）

κ軽鎖可変領域の配列

配列番号１７３＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン１（７８．９％ヒト）

配列番号１７４＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン２（８０．０％ヒト）

配列番号１７５＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン３（８０．０％ヒト）

配列番号１７６＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン４（７８．９％ヒト）

実施例１５：ヒト化８Ｈ２４抗体の設計

ヒト化のための出発点またはドナー抗体は、マウス抗体８Ｈ２４であった。成熟ｍ８Ｈ２４の重鎖可変アミノ酸配列は、配列番号２８として提供される。成熟ｍ８Ｈ２４の軽鎖可変アミノ酸配列は、配列番号３４として提供される。重鎖Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２９～３１として提供される。軽鎖Ｋａｂａｔ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３５～３７として提供される。Ｋａｂａｔナンバリングが全体を通して使用される。

８Ｈ２４の可変κ（Ｖｋ）は、ヒトＶｋサブグループ１に対応するマウスＶｋサブグループ１ｂに属し、可変重鎖（Ｖｈ）は、ヒトＶｈサブグループ１に対応するマウスＶｈサブグループ３ｄに属する［Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら、（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２］。１６残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス４に類似しており、７残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似しており、９残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似している［Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ．（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ Ｓ（編）．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＡＧ．［Ｍａｒｔｉｎ，２０１０］。１０残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似しており、１７残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス２に類似している［Ｍａｒｔｉｎ，２０１０］。３残基ＣＤＲ－Ｈ３はカノニカルクラスを有しない。ＰＤＢデータベース［Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ Ｎら、（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ ２３３－７］中のタンパク質配列を検索して、８Ｈ２４の大まかな構造モデルを提供する構造を見つけた。抗体ｆａｂ ＰＤＢコード１ＭＲＣ［Ｐｏｋｋｕｌｕｒｉ，Ｐ．Ｒ．ら、（１９９４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４３：２８３－２９７］の結晶構造は、８Ｈ２４ ＶｈおよびＶｋに対して良好な分解能（２．４Å）および全体的な配列類似性を有し、ループについて同じカノニカル構造を保持していたため、ＶｈおよびＶｋ構造の両方について１ＭＲＣをコードする。

８Ｈ２４ ＶＨのフレームワークは、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ら、（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（１），２３５－２４６，１９９７）によってクローン化されたヒト抗体ＡＡＣ５１７１４ＶＨの対応する領域と高度の配列類似性を共有する。８Ｈ２４およびＡＡＣ５１７１４の可変重鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２ループについて同一の長さを共有する。同様に、８Ｈ２４ＶＬのフレームワークは、Ｓｈｒｉｎｅｒ Ａ．Ｋ．ら、（Ｖａｃｃｉｎｅ ２４（４９－５０），７１５９－７１６６（２００６））によってクローニングされたヒト抗体ＡＢＣ６６９１４ ＶＬの対応する領域と高度の配列類似性を共有する。８Ｈ２４およびＡＢＣ６６９１４抗体の可変軽鎖ドメインもまた、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループについて同一の長さを共有する。したがって、ＡＡＣ５１７１４ＶＨおよびＡＢＣ６６９１４ＶＬのフレームワーク領域を、８Ｈ２４のＣＤＲのアクセプター配列として選択した。ＶＨおよびＶＬのそれぞれのヒトフレームワークに移植された８Ｈ２４ ＣＤＲのモデルを構築し、更なる復帰変異のガイダンスとして使用した。

抗体ヒト化プロセスから得られた重鎖および軽鎖変異体配列を、ＩＭＧＴ Ｄｏｍａｉｎ ＧａｐＡｌｉｇｎツールを使用してヒト生殖細胞系列配列にさらにアラインメントして、ＷＨＯのＩＮＮ委員会ガイドラインによって概説されているように重鎖および軽鎖のヒト性を評価した。（ＷＨＯ－ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）」（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ）２０１４。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆから入手可能である）。可能であれば、ヒト性を高め、潜在的な免疫原性を低下させるために、残基を、対応するヒト生殖系列配列とアラインメントするように変更した。

ＡＡＣ５１７１４ＶＨヒトフレームワークおよび８Ｈ２４ ＣＤＲからなるアミノ酸配列をｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１と呼び、ＡＢＣ６６９１４ＶＬヒトフレームワークおよび８Ｈ２４ ＣＤＲからなるアミノ酸配列をｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１と呼ぶ。ｈｕ８Ｈ２４－ＶＨおよびｈｕ８Ｈ２４－ＶＬの更なるバージョンを、抗原結合、熱安定性、展開性（脱アミノ化、酸化、Ｎ－グリコシル化、タンパク質分解および凝集）および免疫原性に対するそれらの寄与についての様々なフレームワーク残基の評価を可能にするように設計した。変異のために考慮される位置には、
－カノニカルＣＤＲ立体構造を定義するもの（Ｍａｒｔｉｎに要約）、
－バーニアゾーン内にあるもの（ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ）、
－ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在化するもの（ＬｅｇｅｒおよびＳａｌｄａｎｈａに要約）、
－グリコシル化またはピログルタミル化などの翻訳後修飾を受けやすいもの、
－ＶＨおよびＶＬフレームワーク上に移植された８Ｈ２４ ＣＤＲのモデルに従って、ＣＤＲと衝突すると予測される残基によって占有されているもの、または
－配列決定されたヒト抗体の中では稀な残基によって占有されており、親マウス８Ｈ２４残基または他の何らかの残基のいずれかがヒト抗体レパートリー内ではるかに優勢であるもの
が含まれる。

マウス８Ｈ２４および様々なヒト化抗体のアラインメントを、軽鎖可変領域（表２１および図４）および重鎖可変領域（表２０および図３）について示す。

置換の異なる並べ替えを含む２つのヒト化重鎖可変領域バリアントおよび２つのヒト化軽鎖可変領域バリアントを構築した：ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１またはｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２（それぞれ配列番号１８０～１８１）；およびｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１またはｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２（それぞれ配列番号１８５～１８６）（表２０および表２１）。選択されたヒトフレームワークに基づく復帰変異および他の変異を有する例示的なヒト化ＶｋおよびＶｈ設計を、それぞれ表２１および２０に示す。表２０および２１の太字の領域は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるＣＤＲを示す。表２０および表２１の欄の「－」は、表示位置に残基がないことを示す。配列番号１８０～１８１および配列番号１８５～１８６は、表２２に示されるような復帰変異および他の変異を含む。ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２の位置のアミノ酸を表２３に列挙する。ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２の位置のアミノ酸を表２４に列挙する。

ヒト化ＶＨ鎖ｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＨｖ２（それぞれ配列番号１８０～１８１）について、最も類似したヒト生殖細胞系遺伝子ＩＭＧＴ＃ＩＧＨＶ１－６９＊０８＿ＩＧＨＪ１^＊０１（配列番号１７９）に対する、また、ヒト化ＶＬ鎖ｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ１およびｈｕ８Ｈ２４ＶＬｖ２（それぞれ配列番号１８５～１８６）について、最も類似したヒト生殖細胞系遺伝子ＩＭＧＴ＃ＩＧＫＶ２－４０^＊０１（配列番号１８４）に対するヒト化率を表２５に示す。

カノニカル残基、バーニア残基または界面残基がマウスおよびヒトアクセプター配列間で異なる位置が、置換の候補である。カノニカル／ＣＤＲ相互作用残基の例としては、表２０のＫａｂａｔ残基Ｈ７１および表２１のＬ２が挙げられる。バーニア残基の例としては、表２０のＫａｂａｔ残基Ｈ２、Ｈ４８、Ｈ６７およびＨ７１ならびに表２１のＬ２が挙げられる。界面／パッキング（ＶＨ＋ＶＬ）残基の例としては、表２０のＫａｂａｔ残基Ｈ９１が挙げられる。

重鎖可変領域の表２０に示す位置を置換候補として選択する根拠は以下のとおりである。

重鎖可変領域
ｈｕ８Ｈ２４－ＶＨ＿ｖ１
－ＡＡＣ５１７１４ ＶＨのフレームワーク上に移植された８Ｈ２４－ＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２およびＨ３ループからなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、バーニアゾーンの一部であるか、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻す
Ｈｕ８Ｈ２４－ＶＨ＿ｖ２
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーンの一部であるか、ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在するか、または構造安定性に寄与する位置での全てのフレームワーク置換を元に戻す。Ｈ８２４－ＶＨ＿ｖ２は、所定の位置に最も高頻度の残基を有する復帰変異または置換を組み込む。

Ｖ２Ａ：バーニアゾーン残基の逆変異

Ｋ１２Ｖ：Ｌｙｓの側鎖はＶａｌ１８と衝突し、この位置のマウス配列はＶａｌであり、Ｖａｌはこの位置で最も頻度の高い残基である。復帰変異はまた、配列のヒト性を増加させる。

Ｍ４８Ｉ：バーニアゾーン残基の逆変異

Ｖ６７Ａ：バーニアゾーン残基の逆変異

Ａ７１Ｖ：カノニカル残基およびバーニアゾーン残基の逆変異

Ｙ９１Ｆ：ＶＨ／ＶＬドメイン界面残基の復帰変異

Ｌ１０８Ｔ：この復帰変異は、免疫原性を低下させるために作製される

表２１に示す軽鎖可変領域の位置を置換候補として選択する根拠は以下のとおりである。

κ軽鎖可変領域
ｈｕ８Ｈ２４－ＶＬ＿ｖ１
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーンの一部であるか、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に位置する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻すことと共に、ＡＢＣ６６９１４ＶＬのフレームワーク上に移植された８Ｈ２４－ＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３ループからなる。
Ｈｕ８Ｈ２４－ＶＬ＿ｖ２
－Ｈｕ８Ｈ２４－ＶＬｖ２は、構造安定性に寄与するかまたは抗体のヒト性を増加させる置換を含む。

Ｉ２Ｖ：カノニカル残基およびバーニアゾーン残基の逆変異

Ｌ９Ｓ：対応する生殖系列配列はこの位置にＬｅｕを有するが、Ｓｅｒはこの位置で最も頻度が高い。これが表面露出残基であり、Ｌｅｕが疎水性であるのに対してＳｅｒが親水性であると仮定すると、この位置に親水性残基を有することで展開性を高めることができる（脱アミノ化、酸化、Ｎ－グリコシル化、タンパク質分解および凝集の最適化）。

Ｋ７４Ｔ：マウスおよび生殖細胞系はこの位置にＬｙｓを有するが、Ｔｈｒはこの位置で最も高頻度の残基である。表面露出したＬｙｓは、表面電荷パッチの増加をもたらし得る。この位置でのＴｈｒは、展開性（脱アミノ化、酸化、Ｎ－グリコシル化、タンパク質分解および凝集の最適化）を高めることができる。

重鎖可変領域の配列

＞ｈ８Ｈ２４ＶＨバージョン１（８１．６．％ヒト）

＞ｈ８Ｈ２４ＶＨバージョン２（８０．６％ヒト）

κ軽鎖可変領域の配列

＞ｈ８Ｈ２４ＶＬバージョン１（８８．４％ヒト）

＞ｈ８Ｈ２４ＶＬバージョン２（８６．３％ヒト）

実施例１６．ヒト化１１Ｍ１４抗体の設計

ヒト化のための出発点またはドナー抗体は、マウス抗体１１Ｍ１４であった。成熟ｍ１１Ｍ１４の重鎖可変アミノ酸配列は、配列番号５２として提供される。成熟ｍ１１Ｍ１４の軽鎖可変アミノ酸配列は、配列番号５８として提供される。重鎖Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５３～５５として提供される。軽鎖Ｋａｂａｔ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５９～６１として提供される。Ｋａｂａｔナンバリングが全体を通して使用される。

１１Ｍ１４の可変κ（Ｖｋ）は、ヒトＶｋサブグループ５に対応するマウスＶｋサブグループ１に属し、可変重鎖（Ｖｈ）は、ヒトＶｈサブグループ３に対応するマウスＶｈサブグループ３ｄに属する［Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら、（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２］。１１残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス２に類似しており、７残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似しており、１０残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３はいずれのＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラスにも類似していない［Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ．（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ Ｓ（編）．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＡＧ．［Ｍａｒｔｉｎ，２０１０］。１０残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に類似しており、１７残基Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２はＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラス３に類似している［Ｍａｒｔｉｎ，２０１０］。８残基ＣＤＲ－Ｈ３はカノニカルクラスを有しない。ＰＤＢデータベース［Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ Ｎら、（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ ２３３－７］中のタンパク質配列を検索して、１１Ｍ１４の大まかな構造モデルを提供する構造を見つけた。抗体ｆａｂ ＰＤＢコード１ＭＱＫ ［Ｅｓｓｅｎ，Ｌ．Ｏ．ら、２００３，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．，Ｓｅｃｔ．Ｄ５９：６７７－６８７］の結晶構造は、１１Ｍ１４ ＶｈおよびＶｋに対して良好な分解能（１．２８Å）および全体的な配列類似性を有し、ループについて同じカノニカル構造を保持していたため、ＶｈおよびＶｋ構造の両方について１ＭＱＫをコードする。

ＮＣＢＩからの非冗長タンパク質配列データベースの検索により、マウス１１Ｍ１４ ＣＤＲを移植する適切なヒトフレームワークの選択が可能になった。Ｖｋについては、ＮＣＢＩアクセッションコードＣＢＺ３９８９２（ＥＭＢＬアクセッション：ＦＲ８２０８８２）［Ｃｏｌｏｍｂｏ，Ｍ．ら、Ｄｉｒｅｃｔ Ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ ２０１１］を有するヒトκ軽鎖を選択した。これは、ＣＤＲ－Ｌ１およびＬ２について同じカノニカルクラスを有し、ＩＭＧＴ慣例に従ってヒト生殖系列ＩＧＫＶ１ Ｄ－３９’０１に属する。これは、Ｋａｂａｔヒトカッパサブグループ１のメンバーである。Ｖｈについては、ヒトＩｇ重鎖ＡＣＳ９６１９８（ＤＢＳＯＵＲＣＥ：ＦＪ４８９０３７）［Ｊｉｍｅｎｚ－Ｇｏｍｅｚ，Ｇ．ら、２０１０，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８７（３），５２３－５３０］を、ここでも同じカノニカルクラスを有し、ヒト生殖細胞系ＩＧＨＶ３－４８’０３に属するものとして選択した。これは、Ｋａｂａｔヒト重鎖サブグループ３のメンバーである。したがって、ＡＣＳ９６１９８ＶＨおよびＣＢＺ３９８９２ＶＬのフレームワーク領域を、１１Ｍ１４のＣＤＲのアクセプター配列として選択した。ＶＨおよびＶＬのそれぞれのヒトフレームワークに移植された１１Ｍ１４ ＣＤＲのモデルを構築し、更なる復帰変異のガイダンスとして使用した。

抗体ヒト化プロセスから得られた重鎖および軽鎖変異体配列を、ＩＭＧＴ Ｄｏｍａｉｎ ＧａｐＡｌｉｇｎツールを使用してヒト生殖細胞系列配列にさらにアラインメントして、ＷＨＯのＩＮＮ委員会ガイドラインによって概説されているように重鎖および軽鎖のヒト性を評価した。（ＷＨＯ－ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）」（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ）２０１４。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆから入手可能である）。可能であれば、ヒト性を高め、潜在的な免疫原性を低下させるために、残基を、対応するヒト生殖系列配列とアラインメントするように変更した。ヒト化ＶＬｖ２ｂ、ＶＬ３ｂおよびＶＬ４ｂバリアントについては、配列をヒト生殖系列ＩＧＫＶ１－３９^＊０１（配列番号１９５）により類似させるために変異を導入した。

ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＨおよび ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＨの更なるバージョンを、抗原結合、熱安定性、展開性（脱アミノ化、酸化、Ｎ－グリコシル化、タンパク質分解および凝集）および免疫原性に対するそれらの寄与についての様々なフレームワーク残基の評価を可能にするように設計した。変異のために考慮される位置には、
－カノニカルＣＤＲ立体構造を定義するもの（Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ．（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ Ｓ（編）．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＡＧ）、
－バーニアゾーン内にあるもの（Ｆｏｏｔｅ Ｊ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ Ｇ．（１９９２）Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｌｏｏｐｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２２４（２）：４８７－９９）、
－ＶＨ／ＶＬドメイン境界面に局在化するもの（Ｌｅｇｅｒ ＯＪＰ ａｎｄ Ｓａｌｄａｎｈａ Ｊ．（２０００）Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｉｍｍｕｎｅ ｒｏｄｅｎｔ ｓｐｌｅｅｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＤＲ ｇｒａｆｔｉｎｇ．Ｉｎ：Ｓｈｅｐｈｅｒｄ Ｐ ａｎｄ Ｄｅａｎ Ｃ（編）．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）、
－グリコシル化またはピログルタミル化などの翻訳後修飾を受けやすいもの、
－ＶＨおよびＶＬフレームワーク上に移植された１１Ｍ１４ ＣＤＲのモデルに従って、ＣＤＲと衝突すると予測される残基によって占有されているもの、または
－配列決定されたヒト抗体の中では稀な残基によって占有されており、親マウス１１Ｍ１４残基または他の何らかの残基のいずれかがヒト抗体レパートリー内ではるかに優勢であるもの
が含まれる。

マウス１１Ｍ１４および様々なヒト化抗体のアラインメントを、軽鎖可変領域（表２７および図６）および重鎖可変領域（表２６および図５）について示す。

置換の異なる並べ替えを含む３つのヒト化重鎖可変領域バリアントおよび４つのヒト化軽鎖可変領域バリアントを構築した：ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂまたはｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ（それぞれ配列番号１９０～１９２；およびｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂまたはｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ（それぞれ配列番号１９６～１９９）（表２６および表２７）。選択されたヒトフレームワークに基づく復帰変異および他の変異を有する例示的なヒト化ＶｋおよびＶｈ設計を、それぞれ表２７および２６に示す。表２６および２７の太字の領域は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせによって定義されるＣＤＲを示す。表２６および表２７の欄の「－」は、表示位置に残基がないことを示す。配列番号１９０～１９２および配列番号１９６～１９９は、表２８に示されるような復帰変異および他の変異を含む。ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂ、およびｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂの位置のアミノ酸を表２９に列挙する。ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂの位置のアミノ酸を表３０に列挙する。

ヒト化ＶＨ鎖ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ２ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ３ｂ（それぞれ配列番号１９０～１９２）について、最も類似したヒト生殖細胞系遺伝子ＩＧＨＶ３－４８^＊０３（配列番号１８９）に対する、また、ヒト化ＶＬ鎖ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ１ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ２ｂ、ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ（それぞれ配列番号１９６～１９９）について、最も類似したヒト生殖細胞系遺伝子ＩＧＫＶ１－３９^＊０１（配列番号１９５）に対するヒト化率を表３１に示す。

カノニカル残基、バーニア残基または界面残基がマウスおよびヒトアクセプター配列間で異なる位置が、置換の候補である。カノニカル／ＣＤＲ相互作用残基の例としては、表２７のＫａｂａｔ残基Ｌ７１が挙げられる。バーニア残基の例としては、表２６のカバット残基Ｈ４９および表２７のＬ４８およびＬ７１が挙げられる。

重鎖可変領域の表２６に示す位置を置換候補として選択する根拠は以下のとおりである。

重鎖可変領域

ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＨ＿ｖ１ｂ
－ＡＣＳ９６１９８ ＶＨのフレームワーク上に移植された１１Ｍ１４－ＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２およびＨ３ループからなる。そして、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーンの一部であるか、ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在するか、または構造安定性に寄与する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻す。

ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＨ＿ｖ２ｂおよびｈｕ１１Ｍ１４－ＶＨ＿ｖ３ｂ
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、バーニアゾーンの一部であるか、ＶＨ／ＶＬドメイン界面に局在するか、または構造安定性に寄与する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻すことと共に、復帰変異または所与の位置での最も高頻度の残基による置換を組み込む。

Ｓ４９Ａ：バーニアゾーン残基の復帰変異。

Ｌ８０Ｇ：この位置のＬｅｕは、ＩＥＤＢ分析によって示されるように免疫原性である。脱免疫分析は、Ｇｌｙ置換による免疫原性の低下を予測する。免疫原性を緩和するための８０位および８２ｃ位でのＧｌｙ置換は相互に排他的であり、異なるＶＨバージョンで試みられる。

Ｌ８２ｃＧ：この位置のＬｅｕは、ＩＥＤＢ分析によって示されるように免疫原性である。脱免疫分析は、Ｇｌｙ置換による免疫原性の低下を予測する。

表２７に示す軽鎖可変領域の位置を置換候補として選択する根拠は以下のとおりである。

κ軽鎖可変領域

ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＬ＿ｖ１ｂ
－Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するために重要であるか、Ｖｅｒｎｉｅｒゾーンの一部であるか、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面に位置する位置でのすべてのフレームワーク置換を元に戻すことと共に、ＣＢＺ３９８９２ ＶＬのフレームワーク上に移植された１１Ｍ１４－ＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３ループからなる。

ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＬ＿ｖ２ｂ，ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＬ＿ｖ３ｂ，ｈｕ１１Ｍ１４－ＶＬ＿ｖ４ｂ
－構造安定性に寄与するかまたは抗体のヒト性を増加させるかまたは免疫原性を低下させる置換を含む。

Ａ４３Ｓ：安定性増強変異。Ｓｅｒは、両方とも重鎖においてＴｙｒ９１およびＧｌｙ１０４と鎖間結合を作ることによって構造を安定化する。この復帰変異は、立体構造を維持し、抗体構造を安定に保つために行われる。

Ｉ４８Ｖ：バーニアゾーン残基の復帰変異。

Ｌ５４Ｇ：この位置のＬｅｕは、ＩＥＤＢ分析によって示されるように免疫原性である；脱免疫分析は、Ｇｌｙ置換による免疫原性低下を予測する。位置５４でのＧｌｙ置換は免疫原性を軽減すると予測される。

Ｌ５４Ｉ：この位置のＬｅｕは、ＩＥＤＢ分析によって示されるように免疫原性である；脱免疫分析は、Ｉｌｅ置換による免疫原性低下を予測する。位置５４でのＩｌｅ置換は免疫原性を軽減すると予測される。

Ｆ７１Ｙ：カノニカル残基およびバーニアゾーン残基の復帰変異。

Ｎ７６Ｓ：生殖系列整列変異。生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ１－３９^＊０１（配列番号１９５）は、この位置にＳｅｒを有する。

これらのヒトフレームワークに基づく設計は以下のとおりであった：

重鎖可変領域の配列

配列番号１９０＞ｈ１１Ｍ１４ＶＨバージョン１ｂ（８６．７％ヒト）

配列番号１９１＞ｈ１１Ｍ１４ＶＨバージョン２ｂ（８５．７％ヒト）

配列番号１９２＞ｈ１１Ｍ１４ＶＨバージョン３ｂ（８５．７％ヒト）

κ軽鎖可変領域の配列

配列番号１９６＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン１ｂ（８３．２％ヒト）

配列番号１９７＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン２ｂ（８３．２％ヒト）

配列番号１９８＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン３ｂ（８２．１％ヒト）

配列番号１９９＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン４ｂ（８２．１％ヒト）

実施例１７．ペプチドマイクロアレイ分析による抗体エピトープマッピング

ＰＥＰｐｅｒＭＡＰ立体構造エピトープマッピングをＰＥＰｐｅｒＰｒｉｎｔ ＧｍｂＨ社によって行った。ペプチドマイクロアレイ分析によって１１Ｍ１４および８Ｈ２４のエピトープ分析を行った。ヒトソルチリン（７５６アミノ酸；配列番号１）の細胞外ドメインの配列を、切断型ペプチドを回避するためにＣ末端およびＮ末端に中性ＧＳＧＳＧＳＧ（配列番号２０７）リンカーを用いて伸長させた。連結され伸長した抗原配列を、６、９および１２アミノ酸のペプチドペプチド重複を有する７、１０および１３アミノ酸ペプチドに翻訳した。ペプチド合成後、すべてのペプチドを、Ｃ末端システインと適切に修飾されたＮ末端との間のチオエーテル結合を介して環化した。得られた立体構造ペプチドマイクロアレイは、二連でプリントされた２，２８３個の異なるペプチドを含有し（４，５６６個のペプチドスポット）、更なるＨＡ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡＧ、配列番号２００；７０スポット）およびｃ－Ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、配列番号２０１；７０スポット）コントロールペプチド線状１５アミノ酸ペプチドによってフレーム化され、ペプチド－ペプチド重複部分は１４アミノ酸であった。得られたヒトソルチリンペプチドマイクロアレイは、二連でプリントされた７５６個の異なるペプチドを含有し（１，５１２スポット）、更なるＨＡ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡＧ、配列番号２００；４６スポット）およびｃ－Ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、配列番号２０１；４６スポット）コントロールペプチドによってフレーム化された。

合成後、非特異的結合を防ぐためにマイクロアレイをブロックした（Ｒｏｃｋｌａｎｄカタログ番号ＭＢ－０７０）。次いで、マウス１１Ｍ１４または８Ｈ２４を、陽性コントロールマウスモノクローナル抗ＨＡ（１２ＣＡ５）ＤｙＬｉｇｈｔ８００（０．５μｇ／ｍｌ）と共に１０μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの範囲の濃度で、１４０ｒｐｍで振盪しながら４℃で１６時間マイクロアレイに適用した。マイクロアレイを洗浄し、二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＤｙＬｉｇｈｔ ６８０（０．２μｇ／ｍｌ）を室温で４５分間適用した。さらに洗浄した後、Ｌｉｃｏｒ Ｏｄｙｓｓｅｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いてマイクロアレイを画像化した。

スポット強度の定量化およびペプチドアノテーションは、１６ビットのカラー化ｔｉｆｆファイルよりも高いダイナミックレンジを示す２４ビットのグレースケールｔｉｆｆファイルに基づいた。マイクロアレイ画像分析は、ＰｅｐＳｌｉｄｅを用いて行った。ソフトウェアアルゴリズムは、各スポットの蛍光強度を生信号、前景信号および背景信号に分離し、スポット複製の平均前景強度中央値およびスポット間偏差を計算する。平均化された前景強度の中央値に基づいて、強度マップを生成し、ペプチドマップにおける相互作用を、高いスポット強度については赤色、低いスポット強度については白色を用いた強度カラーコードによって強調した。４０％の最大スポット間偏差を許容し、それ以外の場合、対応する強度値はゼロにした。

結果

８Ｈ２４について、コンセンサスモチーフＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰを有するペプチドによって形成されたエピトープ様スポットパターンに対する抗体応答（配列番号２１３）。

１１Ｍ１４について、コンセンサスモチーフＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳを有する隣接ペプチドによって形成されたエピトープ様スポットパターンに対して非常に弱い抗体応答が観察された（配列番号２１４）。

実施例１８．構造的誘導変異誘発による抗体エピトープマッピング

理論的根拠：

５Ｅ２０抗体の粗エピトープは、ＰＥＰｐｅｒＰｒｉｎｔ ＧｍｂＨ社のペプチドアレイを使用して、配列番号２１５（ＥＳＦＬ；配列番号２０３）のアミノ酸５５７～５６０内にあることが以前に決定された。実施例１０を参照のこと。同様に、ＳＯＲＴ１－プログラニュリン相互作用実験データは、ソルチリンへのプログラニュリン結合が５Ｅ２０ ｍＡｂによってブロックされることを示した（実施例７を参照のこと）。８Ｈ２４および１１Ｍ２４抗体のＳＯＲＴ１－ＰＲＧＮ相互作用データは、それらがソルチリンへのＰＧＲＮの結合もブロックすることを示した（実施例７を参照のこと）。したがって、８Ｈ２４および１１Ｍ１４は、３Ｄ構造上の同様の平面に突出するＳＯＲＴ１ループ／ドメインにも結合しなければならないと推論された。

第１ラウンドの変異誘発中に、ｈＳＯＲＴ１における複数のアミノ酸変異が、５Ｅ２０エピトープに構造的に隣接したループ／ドメイン内で行われた。第１ラウンドの変異誘発中にＡｔｕｍ Ｂｉｏ（ＣＲＯ）でのデノボＤＮＡ合成中に、標的ループ領域に複数のアミノ酸変異を有する１４個のｈＳＯＲＴ１変異体を生成した（表３２）。ループ領域および変異のナンバリングは、３３アミノ酸シグナルペプチドを含まないソルチリンＥＣＤに基づく（配列番号２１５）。これらの変異体を発現ベクターにサブクローニングし、Ｈｉｓｘ８タグをすべての変異体のＣ末端に結合させた。変異体タンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞へのプラスミドの一過性トランスフェクションによって作製した。馴化培地をＥＬＩＳＡアッセイに直接使用して抗体結合を測定し、野生型ＳＯＲＴ１タンパク質をコントロールとして使用した。

抗ＳＯＲＴ１抗体エピトープ－変異誘発ラウンド２を決定するためのヒトソルチリン細胞外ドメイン変異体のアミノ酸配列：

抗体エピトープをさらに精製するために、抗体のいずれか（５Ｅ２０、８Ｈ２４または１１Ｍ１４）への結合の減少を示したｈＳＯＲＴ１ ＥＣＤループドメイン変異体を第２ラウンドの変異誘発のために検討した。エピトープ精製ラウンド２の間に、１３個の単一アミノ酸変異体と１個の二重変異体とを生成した（表３３）。変異のナンバリングは、３３アミノ酸のシグナルペプチドを含まないソルチリンＥＣＤに基づく（配列番号２１５）。ＥＬＩＳＡアッセイおよびＢｉａｃｏｒｅを使用して、抗体への変異体結合を測定した。結合の減少または消失を示した変異体は、それぞれの抗体を構成すると見なされた。これらの変異体をｈＳＯＲＴ１ ３Ｄモデルにマッピングした。

結果：

２回の変異誘発および構造解析の後、８Ｈ２４および１１Ｍ１４のエピトープを以下に列挙するアミノ酸にマッピングした。さらに、変異誘発は、以下にも列挙する５Ｅ２０のエピトープの更なる精製を可能にした。以下のエピトープ中の残基のナンバリングは、３３アミノ酸のシグナルペプチドを含まないソルチリンＥＣＤ（配列番号２１５）に基づく。

８Ｈ２４エピトープ：Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７
１１Ｍ１４エピトープ：Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０
５Ｅ２０エピトープ（精製）：Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５

実施例１９．Ｆｃ ＬＡＬＡおよびＹＴＥ変異体の生成

ヒトＩｇＧ抗体（ｈＩｇＧ）のＦｃ領域は、複数のＦｃγレセプター（ＦｃγＲ）および補体タンパク質と相互作用し、多くの治療用途、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食（ＡＤＣＰ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介した標的細胞の排除に重要な免疫エフェクター機能を媒介する。

免疫エフェクター機能が低下した抗体を開発するために、異なるＦｃ変異を使用した。いわゆる「ＬＡＬＡ」二重変異（Ｌｅｕ２３４ＡｌａとＬｅｕ２３５Ａｌａ）は、エフェクター機能が低下した分子として最初に記載された（Ｌｕｎｄ，Ｊ．ら、（１９９２）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９，５３－５９；Ｔａｍｍ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｄｔ，１９９７，Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６（１－２）：５７－８５）。ＦｃバリアントＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）（ナンバリングはＥＵ命名法による）変異体は、ＦｃγＲとの相互作用を排除または低減し（ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａ）、有意に低減したエフェクター機能を示すことが明らかになっている。さらに、Ｆｃ ＬＡＬＡ変異体は、補体タンパク質との相互作用が減少し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が減少することも明らかになっている。

ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂ重鎖（配列番号２５０）、ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１重鎖（配列番号２５１）およびｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７重鎖（配列番号２５２）は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域にＬＡＬＡ変異を組み込んでいる。

さらに、改善された薬物動態を有するようにこれらの抗体を操作するために、Ｆｃ領域におけるＹＴＥ（Ｍ２５２Ｔ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）（ＥＵ命名法によるナンバリング）変異（Ｗ．Ｆ．Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、２００６ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４－２３）を組み込んだ。ＹＴＥ変異体は、新生児型Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）に対する結合／相互作用が増強されていることが明らかになっており、それにより、抗体の循環半減期延長をもたらす。Ａｔｕｍ ＣＲＯでのデノボＤＮＡ合成中に、ＬＡＬＡ変異と共にＹＴＥ変異を同時に生成した。改変Ｆｃ領域を、改変Ｆｃ領域３’を可変重鎖ドメインに配置する発現ベクターにサブクローニングして、ＬＡＬＡおよびＹＴＥ変異を組み込んだ完全長重鎖を発現させた。

ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂ重鎖（配列番号２４４）、ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１重鎖（配列番号２４６）およびｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７重鎖（配列番号２４８）は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域にＬＡＬＡおよびＹＴＥ変異を組み込んでいる。

実施例２１：非ヒト霊長類における複数回投与の薬物動態および薬力的学研究

非ヒト霊長類で複数回投与の薬物動態および薬力学研究を行った。カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）［雄：３６～４２月齢、体重２．６～３．１ ｋｇ；雌：３２～４７月齢、体重２．１～３．２ ｋｇ］に、以下のプロトコルに従って試験化合物を投与した。カニクイザルを３０ｍｇ／ｋｇおよび６０ｍｇ／ｋｇの用量のｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ、ｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡで処置した。

Ａ．複数回投与研究：投与

投与経路：静脈内（スローボーラス）注射
頻度＆持続時間：１日目および５０日目に１回

方法：投与の初日を１日目とした。動物を用量投与のために一時的に拘束し、鎮静剤は使用しなかった。試験品を、適切な末梢静脈を介して適切な動物に投与した。各動物の用量体積は、最新の体重測定に基づいた。

Ｂ．複数回投与研究：薬物動態評価

投与後の複数の時点で動物から血液およびＣＳＦを採取して（表３７～３８を参照のこと）、抗ソルチリン抗体の薬物動態の測定値である血漿および脳脊髄液（ＣＳＦ）中の抗ソルチリン抗体濃度を得た。試料採取は表３７のとおりであり、方法、標的体積および抗凝固薬は表３８のとおりであった。

１．薬物動態学的分析、複数回投与研究

抗ソルチリン抗体濃度を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を使用してプレートベースの電気化学発光を使用してアッセイした。標準的な結合性９６ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬのヒトソルチリンタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳにおける３％ ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロッキング処理した。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。５０μＬの適切に希釈したＣＳＦまたは血漿をウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける５０μＬの１μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＳＴ（Ｂｅｔｈｙｌ ｌａｂｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。１４０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用してデータを分析し、研究で使用した各抗ソルチリン抗体０．５μｇ／ｍＬで開始する４倍段階希釈を使用して、標準曲線に対して抗体レベルを定量化した。

２．薬物動態学的分析、複数回投与研究の結果
３０ｍｇ／ｋｇの単回用量で、３つすべての抗体、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡおよびｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡで迅速な抗体クリアランスが観察された。６０ｍｇ／ｋｇでは、曝露量がわずかに増加しただけであった。（表３９および図１４）

Ｃ．複数回投与研究：薬力学的評価

薬力学の測定値であるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）レベルも血漿および脳脊髄液（ＣＳＦ）から決定した。試料採取は表４０のとおりであり、方法、標的体積および抗凝固薬は表４１のとおりであった。

１．複数回投与研究のための薬力学的試料採取、血漿

２．複数回投与研究のための薬力学的試料採取、ＣＳＦ
時点：すべての動物：－１週目
第１群～第３群：１５、２９、４８、５７、６４、７８日目
標的体積：約０．５ｍＬ
手順：動物にブプレノルフィンＳＲ（０．２０ｍｇ／ｋｇ）ＳＱ ＳＩＤおよびメロキシカムＳＲ（０．６０ｍｇ／ｋｇ）ＳＱ ＳＩＤを事前手順で与えた。
動物をケタミンＨＣｌ（１０～１５ｍｇ／ｋｇ）ＩＭで事前麻酔した。更なる麻酔のために、デキストマー０．０６ｍｇ／ｋｇをＩＭで投与した。

３．薬力学的試料分析複数回投与研究

プログラニュリンレベルを、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を使用してプレートベースの電気化学発光によって測定した。標準的な結合性３８４ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのヤギ抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳ中の３％ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロックした。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。２０μＬの適切に希釈したＣＳＦまたは血漿をウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける２０μＬの１μｇ／ｍＬビオチン化ヤギ抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける０５μｇ／ｍＬ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ－ストレプトアビジン（ＭＳＤ）をウェルに添加し、プレートを室温で３０分～１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。４０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。データを、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用して分析し、２００ ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）で開始する３倍段階希釈を使用して標準曲線に対して定量した。コントロールに対するＰＧＲＮレベルの倍数、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用して計算した。

４．薬力学的分析による複数回用量研究の結果
３つすべての抗体、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ、ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１Ｌ２＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡおよびｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７Ｌ４＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡについて、血漿中のＰＧＲＮレベル（表４２および図１５）は用量依存的様式で増加し、投与後７日目に６０ｍｇ／ｋｇ用量でＰＧＲＮレベルの２倍超の増加を示した。ＣＳＦ中のＰＧＲＮレベル（表４３および図１６）は、６０ｍｇ／ｋｇ用量で７日目に１．５倍以上の増加を示す。

実施例２２：非ヒト霊長類における反復投与薬物動態および薬力学研究

反復投与の薬物動態および薬力学研究を非ヒト霊長類で行った。カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）［雄：３６～４２月齢、体重２．６～３．１ ｋｇ；雌：３２～４７月齢、体重２．１～３．２ ｋｇ］に、以下のプロトコルに従って試験化合物を投与した。カニクイザルを、６０ｍｇ／ｋｇの１週間ごとに４回の反復投与で、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥにより処置した。

Ａ．反復投与試験：投与

Ｂ．薬物動態評価、反復投与研究

投与後の複数の時点で動物から血液およびＣＳＦを採取して（表４５～４６を参照のこと）、抗ソルチリン抗体の薬物動態の測定値である血漿および脳脊髄液（ＣＳＦ）中の抗ソルチリン抗体濃度を得た。

１．反復投与研究のための薬物動態学的試料収集、血漿

２．薬物動態学的分析、反復投与研究

抗ソルチリン抗体（ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ）濃度を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を用いてプレートベースの電気化学発光を用いてアッセイした。標準的な結合性９６ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬのヒトソルチリンタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳにおける３％ ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロッキング処理した。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。５０μＬの適切に希釈したＣＳＦまたは血漿をウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける５０μＬの１μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＳＴ（Ｂｅｔｈｙｌ ｌａｂｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。１４０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用してデータを分析し、研究で使用した各抗ソルチリン抗体０．５μｇ／ｍＬで開始する４倍段階希釈を使用して、標準曲線に対して抗体レベルを定量化した。

表４７および図１７は、６０ｍｇ／ｋｇのｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥの１週間ごとに４回の反復投与によるｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥの血漿中レベルを示す。

表４８は、試験した各抗体、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥについての血漿平均Ｃ_ｍａｘ、１回目および４回目の投与後の平均ＡＵＣ^{０－１６８時間}および総ＡＵＣ^{０－８４０時間}を含む。各ＡｂについてＮ＝４。

表４９および図１８は、６０ｍｇ／ｋｇのｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥの１週間ごとに４回の反復投与によるｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ ＣＳＦレベルを示す。

３．薬物動態学的分析、反復投与研究の結果
結果：ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥのいずれかによる反復投与は、血漿およびＣＳＦ中の抗体曝露の増加を示した。ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥバリアントは、経時的に抗体のより大きな集積および僅かに強い持続的な応答を示した。

Ｃ．反復投与試験：薬力学的評価

薬力学の測定値であるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）レベルも血漿およびＣＳＦから決定した。試料を表５０のように採取した。

１．反復投与研究、血漿およびＣＳＦのための薬力学的試料採取

２．薬力学的試料分析反復投与研究、ＣＳＦおよび血漿中ＰＧＲＮレベル

プログラニュリンレベルを、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を使用してプレートベースの電気化学発光によって測定した。標準的な結合性３８４ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのヤギ抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳ中の３％ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロックした。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。２０μＬの適切に希釈したＣＳＦまたは血漿をウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける２０μＬの１μｇ／ｍＬビオチン化ヤギ抗ｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける０５μｇ／ｍＬ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ－ストレプトアビジン（ＭＳＤ）をウェルに添加し、プレートを室温で３０分～１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。４０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。データを、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用して分析し、２００ ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕＰＧＲＮ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）で開始する３倍段階希釈を使用して標準曲線に対して定量した。コントロールに対するＰＧＲＮレベルの倍数、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用して計算した。

３．血漿およびＣＳＦプログラニュリンの薬力学分析、反復投与研究の結果：
４血漿中ＰＧＲＮレベルは、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥのいずれかで処置した動物において、血漿中のベースラインの２倍を超えて増加する（表５１および図１９）。両方の抗体群（ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡまたはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ）は、最終投与の２週間後にベースラインを超える持続的なＰＧＲＮレベルを示す。全体的な血漿中ＰＧＲＮレベルは、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥの方が高かった。表５２および図２０に見られるように、ＣＳＦ ＰＧＲＮレベルは、最終投与の２週間後にベースラインレベルに低下しない≧１．５倍の増加を示す。

４．薬力学的試料分析反復投与研究、白血球中のソルチリンレベル

全血から単離した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を細胞溶解緩衝液で溶解した。ソルチリンレベルを、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ社）を使用してプレートベースの電気化学発光によって測定した。標準的な結合性３８４ウェルＭＳＤプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのヤギ抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳ中の３％ＭＳＤ緩衝液Ａにおいて室温で１時間にわたってブロックした。次いで、プレートをＴＢＳＴ中で３回洗浄した。２０μＬの希釈溶解物をウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける２０μＬの１μｇ／ｍＬビオチン化ヤギ抗ｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを上記のように洗浄し、ＰＢＳ中の１％ＭＳＤ緩衝液Ａにおける０．５μｇ／ｍＬ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ－ストレプトアビジン（ＭＳＤ）をウェルに添加し、プレートを室温で３０分～１時間インキュベートし、次いで上記のように洗浄した。４０μＬの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔをウェルに加え、Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００を用いて電気化学発光シグナルを読み取った。データを、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙワークベンチソフトウェア（ＭＳＤ）を使用して分析し、１００ ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕＳｏｒｔｉｌｉｎで開始する３倍段階希釈を使用して標準曲線に対して定量した。

５．白血球中のソルチリンレベルについての薬力学的分析からの結果

表５３および図２１に示されるように、ＰＢＭＣ中のソルチリンタンパク質レベルは、両方の抗体、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡおよびｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥによる処理後に減少する。

６．反復投与試験の全体的な結果：

まとめると、インビボ非ヒト霊長類の結果は持続的応答を示す。毎週６０ｍｇ．ｋｇの用量は、抗体曝露を増加させ、ベースラインを超えるＰＧＲＮレベルの増加をもたらす。ＰＭＢＣでは、ソルチリンレベルのおおよそ７５％の持続的減少が、最初の投与後から観察される。ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥバリアントは、ｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡよりも僅かに優れたなＰＫおよび血漿中ＰＤプロファイルを示しているが、これはｈｕ１１Ｍ１４ Ｈ１ｂＬ３ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥバリアントのＡｂ半減期延長特性に起因していると考えられる。

配列のリスト

配列番号１＞ヒトソルチリン細胞外ドメインのアミノ酸配列

配列番号２＞マウス５Ｅ２０ＶＨヌクレオチド配列（ｍＩｇＧ１）：

配列番号３＞マウス５Ｅ２０ＶＨ用シグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLALILKGVQC

配列番号４＞マウス＞５Ｅ２０ＶＨアミノ酸配列

配列番号５＞マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GFTFSTYGMS

配列番号６＞マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
IISSGGSYTYYSDTVKG

配列番号７＞マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
SSSHWYFDV

配列番号８＞マウス５Ｅ２０ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）：

配列番号９＞マウス５Ｅ２０ＶＬ用シグナルペプチドのアミノ酸配列
MVLAQFLAFLLLWFPGARC

配列番号１０＞マウス５Ｅ２０ＶＬＶｋのアミノ酸配列

配列番号１１＞マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列
HASQGISSNIG

配列番号１２＞マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列
HGTNLKD

配列番号１３＞マウス５Ｅ２０＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列
VQYAQFPYT

配列番号１４＞マウス５Ｅ２０抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１
TYGMS

配列番号１５＞マウス５Ｅ２０抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１
GFTFSTY

配列番号１６＞マウス５Ｅ２０抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２
SSGGSY

配列番号１７＞マウス５Ｅ２０抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２
IISSGGSYTY

配列番号１８＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス５Ｅ２０抗体のＣＤＲ－Ｈ１
STYGMS

配列番号１９＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス５Ｅ２０抗体のＣＤＲ－Ｈ２
WVAIISSGGSYTY

配列番号２０＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス５Ｅ２０抗体のＣＤＲ－Ｈ３
SRSSSHWYFD

配列番号２１＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス５Ｅ２０抗体のＣＤＲ－Ｌ１
SSNIGWL

配列番号２２＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス５Ｅ２０抗体のＣＤＲ－Ｌ２
GLIYHGTNLK

配列番号２３＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス５Ｅ２０抗体のＣＤＲ－Ｌ３
VQYAQFPY

配列番号２４＞キメラ５Ｅ２０重鎖のアミノ酸配列

配列番号２５＞キメラ５Ｅ２０軽鎖のアミノ酸配列

配列番号２６＞マウス８Ｈ２４ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ２ｃ）：

配列番号２７＞マウス＞マウス８Ｈ２４ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MGFSRIFLFLLSVTTGVHS

配列番号２８＞マウス８Ｈ２４Ｖｈのアミノ酸配列

配列番号２９＞マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GYTFTSYSMH

配列番号３０＞マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
GAIYPGNDATSYNQKFKG

配列番号３１＞マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
EGYYGSSFEAWFAS

配列番号３２＞マウス８Ｈ２４ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）：

配列番号３３＞マウス８Ｈ２４ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MKLPVRLLVLMFWIPGSSS

配列番号３４＞マウス８Ｈ２４Ｖｋのアミノ酸配列

配列番号３５＞マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RSSQSIVHSNGNTYLE

配列番号３６＞マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
KVSNRFS

配列番号３７＞マウス８Ｈ２４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
FQGSHVLPT

配列番号３８＞マウス８Ｈ２４抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１
SYSMH

配列番号３９＞マウス８Ｈ２４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１
GYTFTSY

配列番号４０＞マウス８Ｈ２４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２
YPGNDA

配列番号４１＞マウス８Ｈ２４抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２
AIYPGNDATS

配列番号４２＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス８Ｈ２４抗体のＣＤＲ－Ｈ１
TSYSMH

配列番号４３＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス８Ｈ２４抗体のＣＤＲ－Ｈ２
WIGAIYPGNDATS

配列番号４４＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス８Ｈ２４抗体のＣＤＲ－Ｈ３
AREGYYGSSFEAWFA

配列番号４５＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス８Ｈ２４抗体のＣＤＲ－Ｌ１
NTYLEWY

配列番号４６＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス８Ｈ２４抗体のＣＤＲ－Ｌ２
LLIYKVSNRF

配列番号４７＞Ｃｏｎｔａｃｔ マウス８Ｈ２４抗体のＣＤＲ－Ｌ３
FQGSHVLP

配列番号４８＞キメラ８Ｈ２４重鎖のアミノ酸配列

配列番号４９＞キメラ８Ｈ２４軽鎖のアミノ酸配列

配列番号５０＞マウス１１Ｍ１４ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ１）：

配列番号５１＞マウス１１Ｍ１４ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLALILKGVQC

配列番号５２＞マウス１１Ｍ１４Ｖｈのアミノ酸配列

配列番号５３＞マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GFTFNIYGMS

配列番号５４＞マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
TISSGGIYTYYPDILKG

配列番号５５＞マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
HPGGAMDY

配列番号５６＞マウス１１Ｍ１４Ｖｋの塩基配列（カッパ）

配列番号５７＞マウス１１Ｍ１４Ｖｋシグナルペプチドのアミノ酸配列
MSVPTQVLGLLLLWLTDARC

配列番号５８＞マウス１１Ｍ１４Ｖｋのアミノ酸配列

配列番号５９＞マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RVSENIYSNLA

配列番号６０＞マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
AATNLAD

配列番号６１＞マウス１１Ｍ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
QHFWGTPPWT

配列番号６２＞マウス１１Ｍ１４抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１
IYGMS

配列番号６３：マウス１１Ｍ１４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１
GFTFNIY

配列番号６４：マウス１１Ｍ１４抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２
SSGGIY

配列番号６５マウス１１Ｍ１４抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２
TISSGGIYTY

配列番号６６：Ｃｏｎｔａｃｔ マウス１１Ｍ１４抗体のＣＤＲ－Ｈ１
NIYGMS

配列番号６７：Ｃｏｎｔａｃｔ マウス１１Ｍ１４抗体のＣＤＲ－Ｈ２
WVATISSGGIYTY

配列番号６８：Ｃｏｎｔａｃｔ マウス１１Ｍ１４抗体のＣＤＲ－Ｈ３と
ARHPGGAMD

配列番号６９：Ｃｏｎｔａｃｔ マウス１１Ｍ１４抗体のＣＤＲ－Ｌ１
YSNLAWY

配列番号７０：Ｃｏｎｔａｃｔ マウス１１Ｍ１４抗体のＣＤＲ－Ｌ２
LLVYAATNLA

配列番号７１：Ｃｏｎｔａｃｔ マウス１１Ｍ１４抗体のＣＤＲ－Ｌ３
QHFWGTPPW

配列番号７２代替Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、配列番号１９８に存在）
AATNGAD

配列番号７３：代替Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ、配列番号１９９に存在）
AATNIAD

配列番号７４：Ａｌｔｅｒｎａｔｅ Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ３ｂ、配列番号１９８に存在）
LLVYAATNGA

配列番号７５：Ａｌｔｅｒｎａｔｅ Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２（Ｈｕ１１Ｍ１４ＶＬｖ４ｂ、配列番号１９９に存在）
LLVYAATNIA

配列番号７６＞マウス５Ｍ１３ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ１）：

配列番号７７＞マウス５Ｍ１３ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MRVLILLWLFTAFPGILS

配列番号７８＞マウス５Ｍ１３ＶＨアミノ酸配列

配列番号７９＞マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GYSITSDYAWN

配列番号８０＞マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
YISSSGSTSYNPSLKS

配列番号８１＞マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
VTTTMDY

配列番号８２＞マウス５Ｍ１３ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）：

配列番号８３＞マウス５Ｍ１３ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MKLPVRLLVLMFWIPASSS

配列番号８４＞マウス５Ｍ１３ＶＬＶｋのアミノ酸配列：

配列番号８５＞マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RSSQSLVHSNGNTYLH

配列番号８６＞マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
TVSNRFS

配列番号８７＞マウス５Ｍ１３＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
SQSTHVPFT

配列番号８８＞マウス２Ｆ１８ＶＨヌクレオチド配列（ｍＩｇＧ１）：

配列番号８９＞マウス２Ｆ１８ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLALILQGVQC

配列番号９０＞マウス＞アミノ酸配列２Ｆ１８ＶＨ

配列番号９１＞マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GFTFNIYGMS

配列番号９２＞マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
TISTGGIYTYYPDSVKG

配列番号９３＞マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
HPVGALDY

配列番号９４＞マウス２Ｆ１８ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）

配列番号９５＞マウス２Ｆ１８ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MSVPTQVLGLLLLWLTDARC

配列番号９６＞マウスＶｋ＿２Ｆ１８ＶＬのアミノ酸配列

配列番号９７＞マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RASENIYSNLA

配列番号９８＞マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
TATTLAD

配列番号９９＞マウス２Ｆ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
QHFWGTPPWT

配列番号１００＞マウス２Ｐ２２ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ２ｂ）：

配列番号１０１＞マウス２Ｐ２２ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLALILKGVQC

配列番号１０２＞マウス２Ｐ２２ＶＨアミノ酸配列

配列番号１０３＞マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列
GFTFSIYGMS

配列番号１０４＞マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列
AISSGGIYTYYPDSVKG

配列番号１０５＞マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列
NDYDWFAY

配列番号１０６＞マウス２Ｐ２２ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）

配列番号１０７＞２Ｐ２２ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MRAPAQIFGFLLLLFPGTRC

配列番号１０８＞マウス＞Ｖｋ＿２Ｐ２２ＶＬアミノ酸配列

配列番号１０９＞マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RASQDIGSSLN

配列番号１１０＞マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
ATSSLDS

配列番号１１１＞マウス２Ｐ２２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
LQYASSPYT

配列番号１１２＞マウス６Ｂ１５ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ１）：

配列番号１１３＞６Ｂ１５ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLALILKGVQC

配列番号１１４＞マウス６Ｂ１５ＶＨアミノ酸配列

配列番号１１５＞マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GFTFSTYGMS

配列番号１１６＞マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
IISSGGSYTYYSDTVKG

配列番号１１７＞マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
SSSHWYFDV

配列番号１１８＞マウス６Ｂ１５ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）

配列番号１１９＞６Ｂ１５ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MVLAQFLAFLLLWFPGARC

配列番号１２０＞マウス６Ｂ１５ＶＬＶｋ＿６Ｂ１５アミノ酸配列

配列番号１２１＞マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
HASQGISSNIG

配列番号１２２＞マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
HGTNLKD

配列番号１２３＞マウス６Ｂ１５＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
VQYAQFPYT

配列番号１２４＞マウス２Ｃ１４ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ１）：

配列番号１２５＞２Ｃ１４ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLALILKGVQC

配列番号１２６＞マウス２Ｃ１４ＶＨアミノ酸配列

配列番号１２７＞マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GFTFNTHGMS

配列番号１２８＞マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
TISTGGFYTSYPDSVKG

配列番号１２９＞マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
SSSHWYFDV

配列番号１３０＞マウス２Ｃ１４ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）

配列番号１３１＞２Ｃ１４ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MVLAQFLAFLLLWFPGARC

配列番号１３２＞マウス２Ｃ１４ＶＬＶｋ＿２Ｃ１４アミノ酸配列

配列番号１３３＞マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
HASQGISSNIG

配列番号１３４＞マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
HGTNLED

配列番号１３５＞マウス２Ｃ１４＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
VQYAHFPYT

配列番号１３６＞マウス９Ｎ１８ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ２ｂ）：

配列番号１３７＞９Ｎ１８ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MGWNWIFILILSVTTGVHS

配列番号１３８＞マウス９Ｎ１８ＶＨアミノ酸配列

配列番号１３９＞マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GYSFTGYYMN

配列番号１４０＞マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
EINPITGGTTYNQNFKA

配列番号１４１＞マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
DYFGSNSWFAY

配列番号１４２＞マウス９Ｎ１８ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）

配列番号１４３＞９Ｎ１８ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MKLPVRLLVVMFWIPASSS

配列番号１４４＞マウス９Ｎ１８ＶＬＶｋ＿９Ｎ１８アミノ酸配列

配列番号１４５＞マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RSSQSIVHRNGNTYLE

配列番号１４６＞マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：

配列番号１４７＞マウス９Ｎ１８＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
FQGSHVPYTF

配列番号１４８＞マウス４Ｎ２ＶＨヌクレオチド配列（ＩｇＧ３）：

配列番号１４９＞マウス４Ｎ２ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列
MNFGLSLIFLVLILKGVQC

配列番号１５０＞マウス４Ｎ２ＶＨＶｈ＿４Ｎ２アミノ酸配列

配列番号１５１＞マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列：
GFTFSNYVMS

配列番号１５２＞マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列：
TISGGGRYSYYPDSVKG

配列番号１５３＞マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列：
QDDYDSFPY

配列番号１５４＞マウス４Ｎ２ＶＬのヌクレオチド配列（カッパ）

配列番号１５５＞マウス４Ｎ２ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列
MVSTPQFLVFLLFWIPASRG

配列番号１５６＞マウス＞マウス４Ｎ２ＶＬＶｋ＿４Ｎ２アミノ酸配列

配列番号１５７＞マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列：
RASQSIGTSIH

配列番号１５８＞マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列：
YASEPIS

配列番号１５９＞マウス４Ｎ２＿Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列：
QQSKSWPIT

配列番号１６０ ＞３Ｖ６Ｆ－ＶＨ＿ｍＳｔ

配列番号１６１＞ＡＥＸ２９０８６－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ

配列番号１６２＞ＩＧＨＶ３－２１＊０１

配列番号１６３＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン１（８７．８．％ヒト）

配列番号１６４＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン２（８９．８％ヒト）

配列番号１６５＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン３（８６．７％ヒト）

配列番号１６６＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン４（８５．７％ヒト）

配列番号１６７＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン５（８４．７％ヒト）

配列番号１６８＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン６（８５．７％ヒト）

配列番号１６９＞ｈ５Ｅ２０ＶＨバージョン７（８４．７％ヒト）

配列番号１７０＞３Ｖ６Ｆ－ＶＬ＿ｍＳｔ

配列番号１７１＞ＢＡＨ０４６８７－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ

配列番号１７２＞ＩＧＫＶ１－１２^＊０１

配列番号１７３＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン１（ＩＧＫＶ２－２９^＊０２に対して測定された７８．９％ヒト）

配列番号１７４＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン２（８０．０％ヒト）

配列番号１７５＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン３（８０．０％ヒト）

配列番号１７６＞ｈ５Ｅ２０ＶＬバージョン４（７８．９％ヒト）

配列番号１７７＞１ＭＲＣ－ＶＨ＿ｍＳｔ

配列番号１７８＞ＡＡＣ５１７１４－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ

配列番号１７９＞ＩＧＨＶ１－６９＊０８＿ＩＧＨＪ１^＊０１

配列番号１８０＞ｈ８Ｈ２４ＶＨバージョン１（８１．６．％ヒト）

配列番号１８１＞ｈ８Ｈ２４ＶＨバージョン２（８０．６％ヒト）

配列番号１８２＞１ＭＲＣ－ＶＬ＿ｍＳｔ

配列番号１８３＞ＡＢＣ６６９１４－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ

配列番号１８４＞ＩＧＫＶ２－４０＊０１

配列番号１８５＞ｈ８Ｈ２４ＶＬバージョン１（８８．４％ヒト）

配列番号１８６＞ｈ８Ｈ２４ＶＬバージョン２（８６．３％ヒト）

配列番号１８７＞１ ＭＱＫ－ＶＨ＿ｍＳｔ

配列番号１８８＞ＡＣＳ９６１９８－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ

配列番号１８９＞ＩＧＨＶ３－４８＊０３

配列番号１９０＞ｈ１１Ｍ１４ＶＨバージョン１ｂ（８６．７％ヒト）

配列番号１９１＞ｈ１１Ｍ１４ＶＨバージョン２ｂ（８５．７％ヒト）

配列番号１９２＞ｈ１１Ｍ１４ＶＨバージョン３ｂ（８５．７％ヒト）

配列番号１９３＞１ ＭＱＫ－ＶＬ＿ｍＳｔ

配列番号１９４＞ＣＢＺ３９８９２－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ

配列番号１９５＞ＩＧＫＶ１－３９^＊０１

配列番号１９６＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン１ｂ（８３．２％ヒト）

配列番号１９７＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン２ｂ（８３．２％ヒト）

配列番号１９８＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン３ｂ（８２．１％ヒト）

配列番号１９９＞ｈ１１Ｍ１４ＶＬバージョン４ｂ（８２．１％ヒト）

配列番号２００ ＨＡペプチド
YPYDVPDYAG

配列番号２０１ ｃ－Ｍｙｃペプチド
EQKLISEEDL

配列番号２０２抗体５Ｅ２０が結合したペプチドのコンセンサスモチーフ
FTESFLT

配列番号２０３：抗体５Ｅ２０が結合したペプチドのコンセンサスモチーフ
ESFL

配列番号２０４抗体５Ｅ２０が結合したペプチド
DGCILGYKEQFL

配列番号２０５抗体５Ｅ２０が結合したペプチド
PSICLCSLEDFL

配列番号２０６抗体５Ｅ２０が結合した配列モチーフ
E(S／Q／D)FL

配列番号２０７リンカー配列
GSGSGSG

配列番号２０８キメラ１１Ｍ１４重鎖のアミノ酸配列

配列番号２０９キメラ１１Ｍ１４軽鎖のアミノ酸配列

配列番号２１０ソルチリンの残基５２３～６１０のアミノ酸配列

配列番号２１１ソルチリンペプチドのアミノ酸配列
FTESFLTSQW

配列番号２１２ソルチリンペプチドのアミノ酸配列
LTSQW

配列番号２１３抗体８Ｈ２４が結合したペプチドのアミノ酸配列
RTEFGMAIGP

配列番号２１４抗体１１Ｍ１４が結合したペプチドのアミノ酸配列
WGFTESFLTS

配列番号２１５；シグナルペプチドを含まないヒトソルチリン細胞外ドメインのアミノ酸配列

配列番号２１６ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１のアミノ酸配列：

配列番号２１７ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２ａのアミノ酸配列：

配列番号２１８ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２ｂのアミノ酸配列：

配列番号２１９ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３のアミノ酸配列：

配列番号２２０ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ４のアミノ酸配列：

配列番号２２１ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ５のアミノ酸配列：

配列番号２２２ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ６Ｎのアミノ酸配列：

配列番号２２３ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ８Ｎのアミノ酸配列：

配列番号２２４ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１１Ｎのアミノ酸配列：

配列番号２２５ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１４Ｎのアミノ酸配列：

配列番号２２６ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１６のアミノ酸配列：

配列番号２２７ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１７のアミノ酸配列：

配列番号２２８ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１８のアミノ酸配列：

配列番号２２９ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ１９のアミノ酸配列：

配列番号２３０ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２０のアミノ酸配列：

配列番号２３１ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２１のアミノ酸配列：

配列番号２３２ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２２のアミノ酸配列：

配列番号２３３ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２３のアミノ酸配列：

配列番号２３４ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２４のアミノ酸配列：

配列番号２３５ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２５のアミノ酸配列：

配列番号２３６ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２６のアミノ酸配列：

配列番号２３７ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２７のアミノ酸配列：

配列番号２３８ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２８のアミノ酸配列：

配列番号２３９ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ２９のアミノ酸配列：

配列番号２４０ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３０のアミノ酸配列：

配列番号２４１ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３１のアミノ酸配列：

配列番号２４２ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３２のアミノ酸配列：

配列番号２４３ ｈＳＯＲＴ１＿ＥＣＤ＿Ｅｍｕｔ３３のアミノ酸配列：

配列番号２４４ ｈｕ１１Ｍ１４＿Ｈ１ｂ＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ－重鎖アミノ酸配列：

配列番号２４５ ｈｕ１１Ｍ１４＿Ｌ３ｂ＿－軽鎖アミノ酸配列：

配列番号２４６ ｈｕ８Ｈ２４＿Ｈ１ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ－重鎖アミノ酸配列：

配列番号２４７ ｈｕ８Ｈ２４＿Ｌ２＿－軽鎖アミノ酸配列：

配列番号２４８ ｈｕ５Ｅ２０＿Ｈ７＿ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ＿ＹＴＥ－重鎖アミノ酸配列：

配列番号２４９ ｈｕ５Ｅ２０＿Ｌ４＿－軽鎖アミノ酸配列：

配列番号２５０ ｈｕ１１Ｍ１４ＶＨｖ１ｂ＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ重鎖アミノ酸配列

配列番号２５１ ｈｕ８Ｈ２４ Ｈ１＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ重鎖アミノ酸配列

配列番号２５２ ｈｕ５Ｅ２０ Ｈ７＿ＩｇＧ１＿ＬＡＬＡ重鎖アミノ酸配列

Claims (162)

1. ヒトソルチリンへの結合に対して、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と競合する単離されたモノクローナル抗体。
2. 抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２と同じヒトソルチリン上のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
3. モノクローナル抗体５Ｅ２０の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、５Ｅ２０が、配列番号４を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
4. 前記抗体がヒト化抗体である、請求項３に記載の抗体。
5. 前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの群から選択される定義のものである、請求項４に記載のヒト化抗体。
6. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ重鎖ＣＤＲ（配列番号５～７）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む、請求項５に記載のヒト化抗体。
7. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号１４、配列番号６および配列番号７）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む、請求項５に記載のヒト化抗体。
8. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号１５、配列番号１６および配列番号７）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む、請求項５に記載のヒト化抗体。
9. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号５、配列番号１７および配列番号７）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１～１３）を含む、請求項５に記載のヒト化抗体。
10. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号１８～２０）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が５Ｅ２０の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号２１～２３）を含む、請求項５に記載のヒト化抗体。
11. 配列番号１６３～１６９のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号１７３～１７６のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項４から１０までのいずれか１項に記載のヒト化抗体。
12. 前記ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ５はＬまたはＶによって占有され、Ｈ４０はＡまたはＴによって占有され、Ｈ４２はＧまたはＤによって占有され、Ｈ４４はＧまたはＲによって占有され、Ｈ４９はＡによって占有され、Ｈ７７はＴまたはＳによって占有され、Ｈ８３はＲまたはＫによって占有され、Ｈ９３はＳによって占有され、Ｈ９４はＲによって占有される、請求項１１に記載のヒト化抗体。
13. 前記ＶＨ領域の提供されるＨ４９位、Ｈ９３位およびＨ９４位が、それぞれＡ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
14. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ５、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ９３およびＨ９４が、それぞれＶ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
15. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ５、Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ９３およびＨ９４が、それぞれＶ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
16. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ５、Ｈ４２、Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ９３およびＨ９４が、それぞれＶ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
17. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ５、Ｈ４２、Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ８３、Ｈ９３およびＨ９４が、それぞれＶ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｋ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
18. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ５、Ｈ４０、Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ９３およびＨ９４が、それぞれＶ、Ｔ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
19. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ５、Ｈ４０、Ｈ４２、Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ７７、Ｈ９３およびＨ９４が、それぞれＶ、Ｔ、Ｄ、Ｒ、Ａ、Ｓ、ＳおよびＲによって占有される、請求項１２に記載のヒト化抗体。
20. 前記ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ１１はＬまたはＶであり、Ｌ３６はＬであり、Ｌ４４はＦであり、Ｌ４６はＧであり、Ｌ６９はＡであり、Ｌ８５はＴまたはＤであり、Ｌ８７はＦであり、Ｌ１００はＧまたはＱであり、Ｌ１０６はＩまたはＫである、請求項１１に記載のヒト化抗体。
21. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ３６、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ６９およびＬ８７が、それぞれＬ、Ｆ、Ｇ、ＡおよびＦによって占有される、請求項２６に記載のヒト化抗体。
22. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ１１、Ｌ３６、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ６９およびＬ８７が、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、ＡおよびＦによって占有される、請求項２６に記載のヒト化抗体。
23. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ１１、Ｌ３６、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ６９、Ｌ８７、Ｌ１００およびＬ１０６が、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｆ、ＱおよびＫによって占有される、請求項２６に記載のヒト化抗体。
24. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ１１、Ｌ３６、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ６９、Ｌ８５、Ｌ８７、Ｌ１００およびＬ１０６が、それぞれＶ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｆ、ＱおよびＫによって占有される、請求項２６に記載のヒト化抗体。
25. 配列番号１６３～１６９の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１７３～１７６の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項１１に記載のヒト化抗体。
26. 配列番号１６３～１６９と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１７３～１７６と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項２５に記載のヒト化抗体。
27. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６３～１６９のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３～１７６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、請求項２６に記載のヒト化抗体。
28. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
29. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
30. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
31. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
32. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
33. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
34. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７３のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
35. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
36. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
37. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
38. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
39. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
40. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
41. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７４のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
42. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
43. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
44. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
45. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
46. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
47. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
48. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
49. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
50. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
51. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６５のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
52. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６６のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
53. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
54. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
55. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１７６のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のヒト化抗体。
56. モノクローナル抗体８Ｈ２４の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、８Ｈ２４が、配列番号２８を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３４を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
57. ヒト化抗体である、請求項５６に記載の抗体。
58. 前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの群から選択される定義のものである、請求項５７に記載のヒト化抗体。
59. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ重鎖ＣＤＲ（配列番号２９～３１）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。
60. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号３８、配列番号３０および配列番号３１）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。
61. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号３９、配列番号４０および配列番号３１）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。
62. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号２９、配列番号４１および配列番号３１）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号３５～３７）を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。
63. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号４２～４４）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が８Ｈ２４の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号４５～４７）を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。
64. 配列番号１８０～１８１のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号１８５～１８６のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項５７から６３までのいずれか１項に記載のヒト化抗体。
65. 前記ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ２はＡによって占有され、Ｈ１２はＫまたはＶによって占有され、Ｈ４８はＩによって占有され、Ｈ６７はＡによって占有され、Ｈ７１はＶによって占有され、Ｈ９１はＦによって占有され、Ｈ１０８はＴによって占有される、請求項６４に記載のヒト化抗体。
66. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ２、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ７１、Ｈ９１およびＨ１０８が、それぞれＡ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＦおよびＴによって占有される、請求項６５に記載のヒト化抗体。
67. 前記ＶＨ領域の提供されるＨ２、Ｈ１２、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ７１、Ｈ９１、およびＨ１０８が、それぞれＡ、Ｖ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＦおよびＴによって占有される、請求項６５に記載のヒト化抗体。
68. 前記ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ２はＶであり、Ｌ９はＬまたはＳであり、Ｌ７４はＫまたはＴである、請求項６４に記載のヒト化抗体。
69. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ２がＶによって占有される、請求項６８に記載のヒト化抗体。
70. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ２、Ｌ９およびＬ７４が、それぞれＶ、ＳおよびＴによって占有される、請求項６８に記載のヒト化抗体。
71. 配列番号１８０～１８１の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１８５～１８６の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項６４に記載のヒト化抗体。
72. 配列番号１８０～１８１と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１８５～１８６と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項７１に記載のヒト化抗体。
73. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１８０～１８１のいずれか１つのアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１８５～１８６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、請求項７２に記載のヒト化抗体。
74. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１８０のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１８５のアミノ酸配列を有する、請求項７３に記載のヒト化抗体。
75. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１８０のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１８６のアミノ酸配列を有する、請求項７３に記載のヒト化抗体。
76. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１８１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１８５のアミノ酸配列を有する、請求項７３に記載のヒト化抗体。
77. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１８１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１８６のアミノ酸配列を有する、請求項７３に記載のヒト化抗体。
78. モノクローナル抗体１１Ｍ１４の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ソルチリンに特異的に結合する抗体であって、１１Ｍ１４が、配列番号５２を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするが、ただし、位置Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり得る、マウス抗体。
79. ヒト化抗体である、請求項７８に記載の抗体。
80. 前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの群から選択される定義のものである、請求項７９に記載のヒト化抗体。
81. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ重鎖ＣＤＲ（配列番号５３～５５）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、位置Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり得る、請求項８０に記載のヒト化抗体。
82. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号６２、配列番号５４および配列番号５５）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、位置Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり得る、請求項８０に記載のヒト化抗体。
83. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号６３、配列番号６４および配列番号５５）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、位置Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり得る、請求項８０に記載のヒト化抗体。
84. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号５３、配列番号６５および配列番号５５）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号５９～６１）を含むが、ただし、位置Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり得る、請求項８０に記載のヒト化抗体。
85. 前記ヒト化成熟重鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号６６～６８）を含み、前記ヒト化成熟軽鎖可変領域が１１Ｍ１４の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号６９～７１）を含むが、ただし、位置Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり得る、請求項８０に記載のヒト化抗体。
86. 配列番号１９０～１９２のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号１９６～１９９のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項７９から８５までのいずれか１項に記載のヒト化抗体。
87. 前記ＶＨ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｈ４９はＡによって占有され、Ｈ８０はＬまたはＧによって占有され、Ｈ８２ｃはＬまたはＧによって占有される、請求項８６に記載のヒト化抗体。
88. ＶＨ領域の提供される位置Ｈ４９がＡによって占有される、請求項８７に記載のヒト化抗体。
89. 前記ＶＨ領域の提供される位置Ｈ４９およびＨ８２ｃが、それぞれＡおよびＧによって占有される、請求項８７に記載のヒト化抗体。
90. 前記ＶＨ領域の位置Ｈ４９およびＨ８０位が、それぞれＡおよびＧによって占有される、請求項８７に記載のヒト化抗体。
91. ＶＬ領域における以下の位置の少なくとも１つが、指定されるアミノ酸によって占有され、Ｌ４３はＡまたはＳであり、Ｌ４８はＶであり、Ｌ５４はＬ、ＧまたはＩであり、Ｌ７１はＹであり、Ｌ７６はＮまたはＳである、請求項８６に記載のヒト化抗体。
92. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ４８およびＬ７１が、それぞれＶおよびＹによって占有される、請求項９１に記載のヒト化抗体。
93. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ４３、Ｌ４８、Ｌ７１およびＬ７６が、それぞれＳ、Ｖ、ＹおよびＳによって占有される、請求項９１に記載のヒト化抗体。
94. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ４３、Ｌ４８、Ｌ５４、Ｌ７１およびＬ７６が、それぞれＳ、Ｖ、Ｇ、ＹおよびＳによって占有される、請求項９１に記載のヒト化抗体。
95. 前記ＶＬ領域の提供される位置Ｌ４３、Ｌ４８、Ｌ５４、Ｌ７１およびＬ７６が、それぞれＳ、Ｖ、Ｉ、ＹおよびＳによって占有される、請求項９１に記載のヒト化抗体。
96. 配列番号１９０～１９２の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１９６～１９９の少なくとも１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項８６に記載のヒト化抗体。
97. 配列番号１９０～１９２と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１９６～１９９と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項９６に記載のヒト化抗体。
98. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９０～１９２のいずれか１項のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９６～１９９のいずれか１項のアミノ酸配列を有する、請求項９７に記載のヒト化抗体。
99. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９６のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
100. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９７のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
101. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９８のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
102. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９０のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９９のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
103. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９６のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
104. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９７のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
105. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９８のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
106. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９９のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
107. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９６のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
108. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９７のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
109. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９８のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
110. 前記成熟重鎖可変領域が配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号１９９のアミノ酸配列を有する、請求項９８に記載のヒト化抗体。
111. モノクローナル抗体５Ｍ１３の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、５Ｍ１３が、配列番号７８を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８４を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
112. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号７９～８１）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号８５～８７）によって定義されるとおりである、請求項１１１に記載の抗体。
113. モノクローナル抗体２Ｆ１８の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、２Ｆ１８が、配列番号９０を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号９６を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
114. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号９１～９３）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号９７～９９）によって定義されるとおりである、請求項１１３に記載の抗体。
115. モノクローナル抗体２Ｐ２２の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、２Ｐ２２が、配列番号１０２を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０８を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
116. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１０３～１０５）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１０９～１１１）によって定義されるとおりである、請求項１１５に記載の抗体。
117. モノクローナル抗体６Ｂ１５の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、６Ｂ１５が、配列番号１１４を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
118. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１１５～１１７）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１２１～１２３）によって定義されるとおりである、請求項１１７に記載の抗体。
119. モノクローナル抗体２Ｃ１４の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、２Ｃ１４が、配列番号１２６を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
120. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１２７～１２９）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１３３～１３５）によって定義されるとおりである、請求項１１９に記載の抗体。
121. モノクローナル抗体９Ｎ１８の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、９Ｎ１８が、配列番号１３８を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４４を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
122. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１３９～１４１）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１４５～１４７）によって定義されるとおりである、請求項１２１に記載の抗体。
123. モノクローナル抗体４Ｎ２の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲを含む、ヒトソルチリンに特異的に結合する抗体であって、４Ｎ２が、配列番号１５０を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１５６を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を特徴とするマウス抗体である、抗体。
124. 前記３つの重鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１５１～１５３）によって定義されるとおりであり、前記３つの軽鎖ＣＤＲがＫａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ（配列番号１５７～１５９）によって定義されるとおりである、請求項１２３に記載の抗体。
125. ヒト化抗体である、請求項１１１から１２４までのいずれか１項に記載の抗体。
126. インタクトな抗体である、請求項１から１２５までのいずれか１項に記載の抗体。
127. 結合断片である、請求項１から１２５までのいずれか１項に記載の抗体。
128. 前記アイソタイプがヒトＩｇＧ１である、先行する請求項のいずれか１項に記載の抗体。
129. 前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合され、前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合される、請求項１から１２５までのいずれか１項に記載の抗体。
130. 前記重鎖定常領域が、天然のヒト重鎖定常領域と比較してＦｃγレセプターへの結合が低下している天然のヒト重鎖定常領域の変異型である、請求項１２９に記載の抗体。
131. 前記重鎖定常領域が、天然のヒト重鎖定常領域と比較して新生児Ｆｃγレセプターへの結合が増強されている天然のヒト重鎖定常領域の変異型である、請求項１２９に記載の抗体。
132. 配列番号２４４の重鎖と配列番号２４５の軽鎖とを含む、請求項１２９に記載の抗体。
133. 配列番号２４６の重鎖と配列番号２４７の軽鎖とを含む、請求項１２９に記載の抗体。
134. 配列番号２４８の重鎖と配列番号２４９の軽鎖とを含む、請求項１２９に記載の抗体。
135. 配列番号２５０の重鎖と配列番号２４５の軽鎖とを含む、請求項１２９に記載の抗体。
136. 配列番号２５１の重鎖と配列番号２４７の軽鎖とを含む、請求項１２９に記載の抗体。
137. 配列番号２５２の重鎖と配列番号２４９の軽鎖とを含む、請求項１２９に記載の抗体。
138. 前記アイソタイプがヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１から１２７および１２９から１３７までのいずれか１項に記載の抗体。
139. 請求項１から１３８までのいずれかにおいて定義される抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
140. 請求項１から１３９までのいずれか１項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
141. マウス抗体をヒト化する方法であって、前記方法が、
     （ａ）１またはそれを超えるアクセプター抗体配列を選択するステップと、
     （ｂ）保持すべきマウス抗体のアミノ酸残基を同定するステップと、
     （ｃ）マウス抗体重鎖のＣＤＲを含むヒト化重鎖をコードする核酸およびマウス抗体軽鎖のＣＤＲを含むヒト化軽鎖をコードする核酸を合成するステップと、
     （ｄ）核酸を宿主細胞において発現させて、ヒト化抗体を産生するステップと
     を含み、
     前記マウス抗体が５Ｅ２０であり、５Ｅ２０は、配列番号４の成熟重鎖可変領域および配列番号１０の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体が８Ｈ２４であり、８Ｈ２４は、配列番号２８の成熟重鎖可変領域および配列番号３４の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体が１１Ｍ１４であり、１１Ｍ１４は、配列番号５２の成熟重鎖可変領域および配列番号５８の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体が５Ｍ１３であり、５Ｍ１３は、配列番号７８の成熟重鎖可変領域および配列番号８４の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体は２Ｆ１８であり、２Ｆ１８は、配列番号９０の成熟重鎖可変領域および配列番号９６の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体は２Ｐ２２であり、２Ｐ２２は、配列番号１０２の成熟重鎖可変領域および配列番号１０８の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体が６Ｂ１５であり、６Ｂ１５は、配列番号１１４の成熟重鎖可変領域および配列番号１２０の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体は２Ｃ１４であり、２Ｃ１４は、配列番号１２６の成熟重鎖可変領域および配列番号１３２の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体が９Ｎ１８であり、９Ｎ１８は、配列番号１３８の成熟重鎖可変領域および配列番号１４４の成熟軽鎖可変領域を特徴とし、
     前記マウス抗体が４Ｎ２であり、４Ｎ２は、配列番号１５０の成熟重鎖可変領域および配列番号１５６の成熟軽鎖可変領域を特徴とする、方法。
142. ヒト化抗体、キメラ抗体またはベニアリングされた抗体を産生する方法であって、前記方法は、
     （ａ）抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞を、前記細胞が前記抗体を分泌するように培養するステップと、
     （ｂ）細胞培養培地から前記抗体を精製するステップと
     を含み、
     前記抗体は、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２のヒト化形態、キメラ形態、またはベニアリングされた形態である、方法。
143. ヒト化抗体、キメラ抗体またはベニアリングされた抗体を産生する細胞株を産生する方法であって、前記方法は、
     （ａ）抗体の重鎖および軽鎖ならびに選択マーカーをコードするベクターを細胞に導入するステップと、
     （ｂ）前記ベクターのコピー数が増加した細胞を選択する条件下で前記細胞を増殖させるステップと、
     （ｃ）前記選択された細胞から単一細胞を単離するステップと、
     （ｄ）抗体の収量に基づいて選択された単一細胞からクローニングされた細胞をバンク化するステップと
     を含み、
     前記抗体は、５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２のヒト化形態、キメラ形態、またはベニアリングされた形態である、方法。
144. 前記細胞を選択的条件下で増殖させ、少なくとも１００ｍｇ／Ｌ／１０^６細胞／２４時間を自然に発現および分泌する細胞株についてスクリーニングするステップをさらに含む、請求項１４３に記載の方法。
145. プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を有するかまたは発症するリスクがある対象においてプログラニュリンレベルを増加させる方法であって、前記対象に有効量の請求項１から１４０までのいずれか１項に記載の抗体を投与し、それにより、前記対象におけるプログラニュリンレベルを増加させるステップを含む、方法。
146. 対象におけるプログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を処置またはその予防を行う方法であって、有効量の請求項１から１４０までのいずれか１項によって定義される抗体を投与し、それにより、前記疾患もしくは障害を処置またはその予防を行うステップを含む、方法。
147. 対象におけるプログラニュリンレベルを検出するステップをさらに含む、請求項１４６に記載の方法。
148. 対象におけるプログラニュリンレベルを監視するステップをさらに含む、請求項１４７に記載の方法。
149. 前記プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害が、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、神経変性障害、または加齢に関連する神経変性障害である、請求項１４６に記載の方法。
150. 前記プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害が前頭側頭型認知症である、請求項１４９に記載の方法。
151. プログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害に関連する疾患を有するかまたはそのリスクがある対象においてソルチリンを検出する方法であって、請求項１から１４０までのいずれか１項によって定義される抗体を対象に投与するステップと、前記対象においてソルチリンに結合した前記抗体を検出するステップとを含む、方法。
152. 残基ＦＴＥＳＦＬＴ（配列番号２０２）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
153. 残基ＥＳＦＬ（配列番号２０３）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
154. 式Ｅ（Ｓ／Ｑ／Ｄ）ＦＬ（配列番号２０６）のモチーフ内のエピトープでヒトソルチリンに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
155. 残基ＤＧＣＩＬＧＹＫＥＱＦＬ（配列番号２０４）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
156. 残基ＰＳＩＣＬＣＳＬＥＤＦＬ（配列番号２０５）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
157. 残基ＲＴＥＦＧＭＡＩＧＰ（配列番号２１３）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
158. 残基ＷＧＦＴＥＳＦＬＴＳ（配列番号２１４）からなるペプチドに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
159. 配列番号２１５のアミノ酸残基Ｄ７４、Ｒ７６、Ｆ９７、Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｌ５６０およびＥ５５７によって定義されるエピトープに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
160. 配列番号２１５のアミノ酸残基Ｋ１１０、Ｙ５３５、Ｅ５５７、Ｔ５６１、Ｑ５６３、Ｄ７４、Ｐ５１０、Ｓ５５８、Ｆ５５９およびＬ５６０によって定義されるエピトープに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
161. 配列番号２１５のアミノ酸残基Ｅ５５７、Ｓ５５８、Ｆ５５９、Ｌ５６０、Ｐ５１０およびＹ５３５によって定義されるエピトープに特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
162. 対象におけるプログラニュリンレベルの変化に関連する疾患もしくは障害を処置またはその予防を行う方法であって、抗体５Ｅ２０、８Ｈ２４、１１Ｍ１４、５Ｍ１３、２Ｆ１８、２Ｐ２２、６Ｂ１５、２Ｃ１４、９Ｎ１８または４Ｎ２が特異的に結合する、配列番号１の連続する最大２０アミノ酸のソルチリンペプチドを含む免疫原を投与するステップを含み、前記ペプチドは、前記対象においてソルチリンに特異的に結合する抗体の形成を誘導する、方法。

Images