JP2020530780A - 疎水性相互作用を利用した細胞外小胞体の分離方法 - Google Patents
疎水性相互作用を利用した細胞外小胞体の分離方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020530780A JP2020530780A JP2020527718A JP2020527718A JP2020530780A JP 2020530780 A JP2020530780 A JP 2020530780A JP 2020527718 A JP2020527718 A JP 2020527718A JP 2020527718 A JP2020527718 A JP 2020527718A JP 2020530780 A JP2020530780 A JP 2020530780A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- endoplasmic reticulum
- extracellular endoplasmic
- extracellular
- stationary phase
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 title claims abstract description 216
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 title claims description 120
- 230000003993 interaction Effects 0.000 title claims description 35
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 116
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 36
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 106
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 82
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 81
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 75
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 37
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 22
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 21
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 20
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 17
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 16
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 14
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 claims description 13
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 8
- -1 cyanobutyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 8
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 7
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical class [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical class CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical class [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical class [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical class [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 5
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical class I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Chemical class SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 4
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical class [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 4
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 4
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000000527 sonication Methods 0.000 claims description 4
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 claims description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical class [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical class OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 229940031182 nanoparticles iron oxide Drugs 0.000 claims description 3
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 claims description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 3
- 229920006284 nylon film Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000123 paper Substances 0.000 claims description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 claims description 3
- 239000013535 sea water Substances 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 3
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000010408 film Substances 0.000 claims 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 16
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 abstract description 11
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 abstract description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 10
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 73
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 40
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 38
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 29
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 9
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000002298 density-gradient ultracentrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical group 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018616 Apolipoproteins B Human genes 0.000 description 2
- 108010027006 Apolipoproteins B Proteins 0.000 description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010004103 Chylomicrons Proteins 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical group 0.000 description 2
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010056891 Calnexin Proteins 0.000 description 1
- 102000034342 Calnexin Human genes 0.000 description 1
- 229910020366 ClO 4 Inorganic materials 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710103773 Histone H2B Proteins 0.000 description 1
- 102100021639 Histone H2B type 1-K Human genes 0.000 description 1
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 102100033344 Programmed cell death 6-interacting protein Human genes 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000002925 chemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000002893 slag Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/34—Purifying; Cleaning
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
- B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/32—Bonded phase chromatography
- B01D15/325—Reversed phase
- B01D15/327—Reversed phase with hydrophobic interaction
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
- B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
- B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
- B01J20/267—Cross-linked polymers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
- B01J20/287—Non-polar phases; Reversed phases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
[技術的課題]
本発明の目的は、(a)固定相(stationary phase)に疎水性(hydrophobic)官能基を固定させる段階、(b)前記固定相に、細胞外小胞体が含まれた試料をローディングする段階、(c)前記固定相において疎水性官能基に結合していない試料の残余物を洗浄する段階、及び(d)前記固定相から疎水性官能基と結合した細胞外小胞体を溶出させる段階、を含む、細胞外小胞体分離方法を提供することである。
本発明は、上述した問題点を解決するためのものであって、細胞外小胞体の疎水性相互作用(hydrophobic interaction)を利用して、細胞外小胞体より疎水性が大きいか又は小さい物質から、細胞外小胞体を特異的に分離する方法を提供する。本発明で、細胞外小胞体を含む様々な試料を、疎水性官能基が付着した固定相に通過させながら、塩析イオンの濃度を調節すると、疎水性相互作用の強度によって、物理的、化学的変化なしに、迅速かつ容易に、細胞外小胞体を分離することができる。
以下、実施例を通じて、本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は、本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されるものと解釈されないことは、当業界で通常の知識を有する者にとって自明なことである。
新鮮に得られた大腸癌細胞株SW480培養液を500×gで10分間遠心分離(計2回繰り返し)して、残存する細胞及び沈殿物を除去した。前記上澄み液を、再び2,000×gで20分間遠心分離(計2回繰り返し)して、沈殿物を除去した。
疎水性官能基に対する細胞外小胞体の結合を確認するために、HPLCシステムを利用して、前記実施例から分離した標本細胞外小胞体の結合様相を確認した。
塩化ナトリウム濃度によって、疎水性官能基を有する固定相に標本細胞外小胞体が結合する様相を確認するために、下記のような実験を行った。
本発明の方法を利用して、下記のようにヒトの血漿から細胞外小胞体を分離して、脂質タンパク質除去効果を確認した。
Claims (36)
- (a)固定相に疎水性官能基を固定させる段階;
(b)前記固定相に、細胞外小胞体が含まれた試料をローディングして、前記疎水性官能基に細胞外小胞体を結合させる段階;
(c)前記固定相において疎水性官能基に結合していない試料の残余物を洗浄する段階;及び
(d)前記固定相から疎水性官能基と結合した細胞外小胞体を溶出させる段階、
を含む、細胞外小胞体分離方法。 - 前記(b)段階以前に、前記疎水性官能基を有する固定相を、塩析イオンを含む溶液で洗浄する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記塩析イオンの濃度は、前記固定相に細胞外小胞体が結合できるように、固定相の疎水性を調節する濃度であることを特徴とする、請求項2記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記塩析イオンの濃度は、0M〜10Mであることを特徴とする、請求項3記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記(b)段階において、細胞外小胞体が含まれた試料を固定相にローディングする前に、試料に塩析イオンを含む溶液を添加して、試料に含まれた塩析イオンの濃度又は種類を変化させる段階をさらに含むことを特徴とする、請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記(d)段階において、細胞外小胞体を溶出させる前に、塩析イオンの種類又は濃度を調節して、細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が小さい物質を除去する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が小さい物質を除去するための塩析イオンの濃度は、0M〜10Mに調節されることを特徴とする、請求項6記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記塩析イオンは、硫酸塩、リン酸塩、水酸化物、フッ素化物、ギ酸塩、酢酸塩、塩化物、臭化物、硝酸塩、ヨウ化物、チオシアン酸塩、クエン酸塩及び酒石酸塩からなる群から選択される1以上であることを特徴とする、請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記固定相は、アガロースビーズ、セファロースビーズ、セファデックスビーズ、シリカビーズ、磁気ビーズ、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、酸化鉄ナノ粒子、ナイロン膜、ニトロセルロース膜、PVDF膜、紙、プラスチック、ガラス及び金属センサーチップからなる群から選択される1以上であることを特徴とする請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記疎水性官能基は、ブチル基、シアノブチル基、オクチル基、フェニル基及びジフェニル基からなる群から選択される1以上であることを特徴とする請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記試料は、哺乳動物細胞培養培地、バクテリア細胞培養培地、酵母培養培地、組織抽出物、癌組織、血清、血漿、唾液、涙、鼻水、汗、尿、糞便、脳脊髄液、腹水、羊水、気管支洗浄液、胸水、精液、乳、ほこり、淡水、海水、土壌及び発酵食品からなる群から選択される1以上であることを特徴とする請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体分離方法は、前記(b)段階において、細胞外小胞体が含まれた試料を、前記固定相にローディングする前に、前処理する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記試料の前処理段階は、遠心分離法、超遠心分離法、ろ過法、限外ろ過法、透析法、脱塩カラムクロマトグラフィー法、音波処理法、密度勾配法、サイズ排除法、イオン交換クロマトグラフィー法、親和性クロマトグラフィー法、沈殿法及び水溶液二相系法からなる群から選択される1以上の方法であることを特徴とする、請求項12記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体分離方法は、前記(d)段階において溶出された試料中の細胞外小胞体を後処理する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項1記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体の後処理段階は、遠心分離法、超遠心分離法、ろ過法、限外ろ過法、透析法、脱塩カラムクロマトグラフィー法、音波処理法、密度勾配法、サイズ排除法、イオン交換クロマトグラフィー法、親和性クロマトグラフィー法、沈殿法及び水溶液二相系法からなる群から選択される1以上の方法であることを特徴とする、請求項14記載の細胞外小胞体分離方法。
- 請求項1〜15のいずれかに記載の方法で分離された、細胞外小胞体。
- (a)固定相に疎水性官能基を固定させる段階;
(b)前記疎水性官能基が固定された固定相に、細胞外小胞体が含まれた試料をローディングする段階;及び
(c)前記固定相において疎水性官能基に結合していない細胞外小胞体を含む試料を回収する段階を含む、細胞外小胞体分離方法。 - 前記(b)段階の以前に、前記疎水性官能基を有する固定相を、塩析イオンを含む溶液で洗浄する段階をさらに含む、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記塩析イオンの濃度は、0M〜10Mであることを特徴とする、請求項18記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記(b)段階において、細胞外小胞体が含まれた試料を固定相にローディングする前に、試料に塩析イオンを含んだ溶液、又は塩析イオンを含まない溶液を添加して、試料に含まれた塩析イオンの濃度又は種類を変化させる段階をさらに含むことを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記塩析イオンの濃度は、0M〜10Mであることを特徴とする、請求項20記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記塩析イオンは、硫酸塩、リン酸塩、水酸化物、フッ素化物、ギ酸塩、酢酸塩、塩化物、臭化物、硝酸塩、ヨウ化物、チオシアン酸塩、クエン酸塩及び酒石酸塩からなる群から選択される1以上であることを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記固定相は、アガロースビーズ、セファロースビーズ、セファデックスビーズ、シリカビーズ、磁気ビーズ、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、酸化鉄ナノ粒子、ナイロン膜、ニトロセルロース膜、PVDF膜、紙、プラスチック、ガラス及び金属センサーチップからなる群から選択される1以上であることを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記疎水性官能基は、ブチル基、シアノブチル基、オクチル基、フェニル基及びジフェニル基からなる群から選択される1以上であることを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記試料は、哺乳動物細胞培養培地、細菌細胞培養培地、酵母培養培地、組織抽出物、癌組織、血清、血漿、唾液、涙、鼻水、汗、尿、糞便、脳脊髄液、腹水、羊水、気管支洗浄液、胸水、精液、乳、ほこり、淡水、海水、土壌及び発酵食品からなる群から選択される1以上であることを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体の分離方法は、前記(b)段階において細胞外小胞体が含まれた試料を、前記固定相にローディングする前に、前処理する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記試料の前処理段階は、遠心分離法、超遠心分離法、ろ過法、限外ろ過法、透析法、脱塩カラムクロマトグラフィー法、音波処理法、密度勾配法、サイズ排除法、イオン交換クロマトグラフィー法、親和性クロマトグラフィー法、沈殿法及び水溶液二相系法からなる群から選択される1以上の方法であることを特徴とする、請求項26記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体の分離方法は、前記(c)段階において、回収された試料中の細胞外小胞体を後処理する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項17記載の細胞外小胞体分離方法。
- 前記細胞外小胞体の後処理段階は、遠心分離法、超遠心分離法、ろ過法、限外ろ過法、透析法、脱塩カラムクロマトグラフィー法、音波処理法、密度勾配法、サイズ排除法、イオン交換クロマトグラフィー法、親和性クロマトグラフィー法、沈殿法及び水溶液二相系法からなる群から選択される1以上の方法であることを特徴とする、請求項28記載の細胞外小胞体分離方法。
- 請求項17〜29のいずれかに記載の方法で分離された細胞外小胞体。
- (a)固定相に疎水性官能基を固定させる段階;
(b)前記疎水性官能基が固定された固定相に、細胞外小胞体が含まれた試料をローディングする段階;及び
(c)前記固定相から疎水性官能基に結合していない試料を回収する段階、
を含む、細胞外小胞体が含まれた試料から細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質を除去する方法。 - 細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質を除去する方法であって、
前記(b)段階の前に、前記疎水性官能基が固定された固定相を、塩析イオンを含む溶液で洗浄する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項31記載の方法。 - 細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質を除去する方法であって、
前記塩析イオンの濃度は、0M〜10Mであることを特徴とする、請求項32記載の方法。 - 細胞外小胞体が含まれた試料から細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質を除去する方法であって、
前記(b)段階において細胞外小胞体が含まれた試料を固定相にローディングする前に、試料に塩析イオンが含まれた溶液を添加して、試料に含まれた塩析イオンの濃度又は種類を変化させる段階をさらに含むことを特徴とする、請求項30記載の方法。 - 細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質を除去する方法であって、
前記塩析イオンの濃度は、0M〜10Mであることを特徴とする、請求項34記載の方法。 - 細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質を除去する方法であって、
前記細胞外小胞体より疎水性相互作用の強度が高い物質は、脂質タンパク質であることを特徴とする、請求項31記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2017-0094874 | 2017-07-26 | ||
KR1020170094874A KR101999818B1 (ko) | 2017-07-26 | 2017-07-26 | 소수성 상호작용을 이용한 세포밖 소포체의 분리방법 |
PCT/KR2018/008479 WO2019022538A2 (ko) | 2017-07-26 | 2018-07-26 | 소수성 상호작용을 이용한 세포밖 소포체의 분리방법 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020530780A true JP2020530780A (ja) | 2020-10-29 |
JP2020530780A5 JP2020530780A5 (ja) | 2021-09-02 |
JP7364240B2 JP7364240B2 (ja) | 2023-10-18 |
Family
ID=65040826
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020527718A Active JP7364240B2 (ja) | 2017-07-26 | 2018-07-26 | 疎水性相互作用を利用した細胞外小胞体の分離方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240027312A1 (ja) |
EP (1) | EP3660143A4 (ja) |
JP (1) | JP7364240B2 (ja) |
KR (1) | KR101999818B1 (ja) |
CN (1) | CN111065730A (ja) |
WO (1) | WO2019022538A2 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111621471B (zh) * | 2020-06-12 | 2022-03-11 | 成都世联康健生物科技有限公司 | 一种软组织胞外囊泡的提取方法及应用 |
CN111961637A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-11-20 | 暨南大学 | 一种基于尺寸排阻层析与超滤结合的细胞外囊泡分离方法 |
WO2022150818A1 (en) * | 2021-01-06 | 2022-07-14 | Yuvan Research, Inc. | Anti-aging compositions and uses thereof |
CN113092642B (zh) * | 2021-03-30 | 2022-11-01 | 苏州爱宝德生物科技有限公司 | 一种用于细胞外囊泡的快速提取装置 |
KR20220164446A (ko) * | 2021-06-04 | 2022-12-13 | 기초과학연구원 | 염 분별 침전을 이용한 세포외 소포체 분리 방법 |
CN114570152B (zh) * | 2022-03-28 | 2023-12-19 | 南京诺令生物科技有限公司 | 一种分离与提纯低颗粒物气体的集成装置及其分离提纯方法 |
CN116687966A (zh) * | 2023-07-05 | 2023-09-05 | 青岛青薄荷生物科技有限公司 | 一种治疗脚气的药剂、分离方法及盛纳装置 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62186940A (ja) * | 1986-02-10 | 1987-08-15 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | リポ蛋白用吸着体 |
JPH06262067A (ja) * | 1993-01-09 | 1994-09-20 | Behringwerke Ag | 疎水性吸着剤およびリポ蛋白の吸着のためのその使用 |
JP2000512161A (ja) * | 1997-07-16 | 2000-09-19 | アンスティチュ・ナショナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル | 「エキソソーム」と呼ばれる細胞内小胞、調製及び免疫刺激におけるこれらの使用 |
JP2009532474A (ja) * | 2006-04-05 | 2009-09-10 | アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド | 抗体精製 |
JP2013525326A (ja) * | 2010-04-19 | 2013-06-20 | スロムボターゲッツ、エウロペ、ソシエダッド、リミターダ | 止血活性を持つ組織因子を有するリン脂質に富んだ小胞及びその使用 |
WO2016089252A1 (en) * | 2014-12-01 | 2016-06-09 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material and method of manufacturing |
JP2017514519A (ja) * | 2014-05-01 | 2017-06-08 | スティヒティング フェーユーエムセー | バイオマーカーとしての低分子のノンコーディングrna |
WO2017097854A1 (en) * | 2015-12-08 | 2017-06-15 | Umc Utrecht Holding B.V. | Extracellular vesicle markers for stable angina and unstable angina |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE413986B (sv) * | 1973-03-23 | 1980-07-07 | Exploaterings Ab Tbf | Sett att separera amfipatiska emnen innehallande bade hydrofila och hydrofoba grupper samt gelprodukt for genomforande av separationen |
JP5635682B2 (ja) * | 2010-05-19 | 2014-12-03 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 疎水性相互作用クロマトグラフィー法 |
US20140004601A1 (en) * | 2010-12-20 | 2014-01-02 | Agency For Science, Technology And Research | Method of purifying exosomes |
PT2791176T (pt) * | 2011-12-15 | 2018-11-05 | Prestige Biopharma Pte Ltd | Um método de purificação de anticorpos |
CN104994924B (zh) * | 2013-01-29 | 2017-09-22 | 诺伊兰健康科学私人有限公司 | 使用在反相柱上的替代固定相纯化有机化合物 |
KR101761680B1 (ko) * | 2015-03-31 | 2017-08-23 | 포항공과대학교 산학협력단 | 수용액 이상계를 이용한 세포 밖 소포체의 분리방법 |
US10160964B2 (en) * | 2015-05-13 | 2018-12-25 | Norgen Biotek Corp. | Methods for extracellular vesicle isolation and selective removal |
KR101875594B1 (ko) * | 2017-01-13 | 2018-07-06 | ㈜로제타엑소좀 | 금속을 이용한 세포밖 소포체의 분리 방법 |
-
2017
- 2017-07-26 KR KR1020170094874A patent/KR101999818B1/ko active IP Right Grant
-
2018
- 2018-07-26 JP JP2020527718A patent/JP7364240B2/ja active Active
- 2018-07-26 CN CN201880058719.7A patent/CN111065730A/zh active Pending
- 2018-07-26 US US16/634,076 patent/US20240027312A1/en active Pending
- 2018-07-26 WO PCT/KR2018/008479 patent/WO2019022538A2/ko unknown
- 2018-07-26 EP EP18838627.0A patent/EP3660143A4/en active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62186940A (ja) * | 1986-02-10 | 1987-08-15 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | リポ蛋白用吸着体 |
JPH06262067A (ja) * | 1993-01-09 | 1994-09-20 | Behringwerke Ag | 疎水性吸着剤およびリポ蛋白の吸着のためのその使用 |
JP2000512161A (ja) * | 1997-07-16 | 2000-09-19 | アンスティチュ・ナショナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル | 「エキソソーム」と呼ばれる細胞内小胞、調製及び免疫刺激におけるこれらの使用 |
JP2009532474A (ja) * | 2006-04-05 | 2009-09-10 | アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド | 抗体精製 |
JP2013525326A (ja) * | 2010-04-19 | 2013-06-20 | スロムボターゲッツ、エウロペ、ソシエダッド、リミターダ | 止血活性を持つ組織因子を有するリン脂質に富んだ小胞及びその使用 |
JP2017514519A (ja) * | 2014-05-01 | 2017-06-08 | スティヒティング フェーユーエムセー | バイオマーカーとしての低分子のノンコーディングrna |
WO2016089252A1 (en) * | 2014-12-01 | 2016-06-09 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material and method of manufacturing |
WO2017097854A1 (en) * | 2015-12-08 | 2017-06-15 | Umc Utrecht Holding B.V. | Extracellular vesicle markers for stable angina and unstable angina |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
化学と生物, vol. 27, no. 1, JPN6023008103, 1989, pages 46 - 52, ISSN: 0005000693 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3660143A2 (en) | 2020-06-03 |
KR101999818B1 (ko) | 2019-07-12 |
EP3660143A4 (en) | 2021-04-28 |
WO2019022538A3 (ko) | 2019-04-11 |
CN111065730A (zh) | 2020-04-24 |
WO2019022538A2 (ko) | 2019-01-31 |
JP7364240B2 (ja) | 2023-10-18 |
KR20190012022A (ko) | 2019-02-08 |
US20240027312A1 (en) | 2024-01-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7364240B2 (ja) | 疎水性相互作用を利用した細胞外小胞体の分離方法 | |
JP6912823B2 (ja) | 細胞外小胞の回収方法 | |
KR102107844B1 (ko) | 양이온을 이용한 세포밖 소포체의 분리 방법 | |
JP2020530780A5 (ja) | ||
EP3228709A1 (en) | Tim protein-bound carrier, methods for obtaining, removing and detecting extracellular membrane vesicles and viruses using said carrier, and kit including said carrier | |
JP7383162B2 (ja) | 臨床サンプルからグリコシル化エクソソームを分離することに用いられるレクチン-磁性担体カップリング複合体 | |
CN110231207B (zh) | 一种分离外泌体的方法 | |
JP7298929B2 (ja) | サイズ排除クロマトグラフィーを利用した細胞外小胞体の分析方法及びその用途 | |
CN110540961A (zh) | Annexin V-FITC外泌体捕获亲和磁珠、其制备方法及利用其提取外泌体的方法 | |
EP3299816A1 (en) | Separation method, detection method, signal measurement method, disease determination method, drug efficacy assessment method, kit, liquid composition, and specimen diluent | |
Notarangelo et al. | Rapid nickel-based isolation of extracellular vesicles from different biological fluids | |
CN113101737B (zh) | 一种亲和切向流过滤系统及其构建方法和外泌体提取方法及应用 | |
CN116333987A (zh) | 一种外泌体提取方法获得的nk细胞外泌体在抗肿瘤中的应用 | |
EP4353815A1 (en) | Method for isolating extracellular vesicle using salt fractional precipitation | |
KR102161280B1 (ko) | 반건식 크기 배제 크로마토그래피를 이용한 세포밖 소포체의 분리 방법 | |
JP2007139759A (ja) | タンパク質分画デバイスおよびタンパク質の分画・濃縮方法 | |
PT107379A (pt) | Extração líquido-líquido magnética para a purificação e separação de substâncias | |
CN115521894A (zh) | 用于提取细胞外囊泡的试剂盒与方法 | |
EP3397644A1 (en) | Non-recombinant human insulin-like growth factor binding protein concentrate | |
JP2007332080A (ja) | IgM型抗体の精製方法、IgM型抗体認識抗原の吸着材 | |
JP2019504987A (ja) | 非組み換えヒトインスリン様成長因子結合タンパク質の濃縮物 | |
Ribeiro-Rodrigues et al. | Simple and Fast SEC-Based Protocol to Isolate Human Plasma-Derived Extracellular Vesicles for Transcriptional Research | |
KR20220097337A (ko) | 엑소좀 분리용 조성물 및 이를 이용한 엑소좀 분리 방법 | |
Sharma et al. | Method for isolation of small extracellular vesicles from different biofluids and workflow for Mass Spectrometry based-shotgun proteomics and RNA isolation | |
JP2024521372A (ja) | 塩分別沈殿を用いた細胞外小胞体分離方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210726 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210726 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220520 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220531 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220825 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221031 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230228 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230622 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230623 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230712 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230905 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230928 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7364240 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |