JPH06262067A - 疎水性吸着剤およびリポ蛋白の吸着のためのその使用 - Google Patents

疎水性吸着剤およびリポ蛋白の吸着のためのその使用

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JPH06262067A
JPH06262067A JP6000524A JP52494A JPH06262067A JP H06262067 A JPH06262067 A JP H06262067A JP 6000524 A JP6000524 A JP 6000524A JP 52494 A JP52494 A JP 52494A JP H06262067 A JPH06262067 A JP H06262067A
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 クロマトグラフィーに適当で、ＨＯ−(ＣＨ2
ＣＨ2Ｏ)n−Ｏ−Ｒ型の非イオン性ポリオキシエチレン
界面活性剤のグリシジルエーテルとの化学反応に付され
た、好ましくはアガロースをベースとする多糖支持体か
らなり、式Ｉ 【化１】 （式中、ｎは２〜３０の整数であり、Ｒは４〜２０個の
炭素原子を有するアルキル基、フェニル基、またはアル
キル基が１〜１６個の炭素原子を有するフェニルアルキ
ル基である）で示される吸着剤、それらの製造方法、お
よびヒトまたは動物の体液からリポ蛋白を除去するため
のそれらの使用。 【効果】 この吸着剤によれば、生物学的液体からの定
量的かつ高処理能力でのリポ蛋白の除去が可能になる。
さらにこの吸着剤は高容量で、再生が容易で再現性が高
い。しかも、各種製品原料として使用できるリポ蛋白が
再生過程で損傷なく脱着される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、クロマトグラフィーに適当で、
ＨＯ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n−Ｏ−Ｒ型の非イオン性ポリオ
キシエチレン界面活性剤のグリシジルエーテルとの化学
反応に付された、好ましくはアガロースをベースとする
多糖支持体からなる吸着剤、それらの製造方法、および
ヒトまたは動物の体液からリポ蛋白を除去するためのそ
れらの使用に関する。
【０００２】ヒトまたは動物起源の体液、たとえば血
清、血漿、脳脊髄液、胸膜滲出液または腹水を保存する
と、沈積または濁りを生じることがあり、このことはこ
れらの製品の品質を著しく損う。体液中に存在するリポ
蛋白巨大分子はこれらの不安定性の原因の一部とみなさ
れていて、それらは、水不溶性のリン脂質を含有するた
めにそれ自体凝集する傾向を示す。
【０００３】上述の液体からリポ蛋白を除去すると一般
に、良好な保存安定性が達成される。さらに、多くの医
学的診断試験は、リポ蛋白含量の高い患者サンプルを使
用した場合には、妨害を受けやすい。リポ蛋白の存在は
また、生物学的材料の医薬用または診断試験用成分への
処理を妨害し、妨げる。
【０００４】リポ蛋白をとくに血清または血漿から除去
するための適当な方法を開発する試みは、これまでなか
ったわけではない。しかしながら、これらの既知の方法
は、それらの工業的使用が、制限されあるいは不可能と
いう欠点がある。すなわち、 a) 液体ハロ炭化水素（たとえばLipocleanR）による抽
出は環境保護の理由から異議の余地がある。
【０００５】b) デキストラン硫酸による吸着はすべて
のリポ蛋白について定量的ではない。 c) オクチル−またはフェニル−SepharoseRは容量が低
く，再生には複雑な操作が必要である。 d) ポリヒドロキシメチレン誘導体を用いるＥＰ １３
７２２１に記載の方法はクロマトグラフィーカラムでの
処置に適しているが、制約点としてこの材料の再生はき
わめて困難である。
【０００６】e) 二酸化ケイ素吸着剤で操作する方法
は、たとえばフィブリノーゲンのような凝固性蛋白も結
合するので、血漿には不適当である。 f) 超遠心でのリポ蛋白の浮遊法は、高価な装置を必要
とし、そして低い処理能力をもたらすだけである。
【０００７】本発明の目的は、非処理の生物学的液体か
らの、定量的かつ処理能力でリポ蛋白の除去を可能にす
る吸着剤を製造することであった。さらにこの吸着剤
は、再生が容易で、高くて再現性のある容量を示すこと
が意図された。また、このリポ蛋白が診断試験または治
療用製品の製造原料として使用できるように再生過程で
吸着剤から脱着されて、損傷なくリポ蛋白が得られるこ
とが意図された。
【０００８】本発明は、ヒトまたは動物の体液からリポ
蛋白を除去するための吸着剤において、クロマトグラフ
ィーに適当で、ＨＯ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n−Ｏ−Ｒ型の非
イオン性ポリオキシエチレン界面活性剤のグリシジルエ
ーテルとの化学反応に付された、アガロースを好ましく
はベースとする多糖支持体からなる吸着剤に関する。
【０００９】この種類の吸着剤はとくに式Ｉ
【化３】 （式中、ｎは２〜３０好ましくは６〜２０の整数であ
り、Ｒは４〜２０個好ましくは１０〜１６個の炭素原子
を有するアルキル基、フェニル基、またはアルキル基が
１〜１６個の炭素原子を有し好ましくはｔｅｒｔ−オク
チルであるフェニルアルキル基である）で示すことがで
きる。
【００１０】支持体多糖は好ましくはアガロース含量１
〜６％のマクロポーラスなアガロースゲルである。ＣＬ
−２Ｂ型のSepharoseRの使用が有利である。適当なポリ
オキシエチレン界面活性剤の例には、BrijR、Genapo
lR、NonidetR、TergitolRまたはTritonRの登録商標名で
知られる製品がある。これらの登録製品は均一ではな
く、ポリオキシエチレン鎖の長さが異なるエーテルの混
合物からなるものである。いずれの場合も、製造業者は
主要成分または鎖長範囲を示している。これらの型のポ
リオキシエチレン界面活性剤の構造および組成は、Meth
ods in Enzymology，LVI，734-749 に記載されている。
【００１１】界面活性剤のグリシジルエーテルは、式II
【化４】 で表される。
【００１２】本発明はまた、本発明の吸着剤の製造方法
に関する。アルコールまたはフェノールとエピクロルヒ
ドリンとによりアルキルまたはフェニルグリシジルエー
テルを得る反応は、Journal of Chromatography，101
(1974) 281-284 に記載されている。この方法は、上述
の非イオン界面活性剤のグリシジルエーテルの製造に使
用することができる。これは、非イオン界面活性剤をエ
ピクロルヒドリンのようなエピハロヒドリンとＢＦ3エ
ーテラートのようなルイス酸の存在下に加熱し、ついで
ＮaＯＨの存在下に室温で反応させてグリシジルエーテ
ル誘導体を得ることによって行われる。反応式は、一般
的に以下のように記載される（ＨＯ−Ｒ1＝界面活性
剤）。
【００１３】
【化５】
【００１４】Journal of Chromatography，101 (1974)
281-284 に記載されているアルキルまたはフェニルグリ
シジルエーテルを得る方法は、非イオン界面活性剤のグ
リシジルエーテルと多糖の反応に使用できる。これは、
脱水された多糖を無水不活性溶媒たとえばジオキサンに
懸濁し、ついでＢＦ3エーテラートの存在下に非イオン
界面活性剤のグリシジルエーテルと反応させることによ
って行われる。
【００１５】
【化６】
【００１６】本発明の多糖誘導体（吸着剤）は水性媒体
中に移してそのまま使用される。本発明の吸着剤は、生
物学的液体からリポ蛋白を吸着するためのクロマトグラ
フィーカラムまたはカートリッジに充填するのが有利で
ある。しかしながら、リポ蛋白の吸着は、生物学的液体
に吸着剤を直接添加して実施することもできる。この場
合、吸着剤は乾燥型で添加してもよい。
【００１７】生物学的液体を上述の方法の一つで本発明
の吸着剤と接触させると、それらは、澄明な、リポ蛋白
を含まない液体として得られる。リポ蛋白は、吸着剤上
に吸着後、疎水性結合を切断する物質の溶液によって溶
出させることができる。これらの例には、イオンまたは
非イオン界面活性剤、尿素、ＫＳＣＮまたはグアニジン
塩酸塩の溶液、またはエチレングリコールのようなアル
コールの溶液がある。選択される望ましい物質はリポ蛋
白の変性を生じない物質である。そのグリシジルエーテ
ルが多糖の誘導体化に使用された非イオン界面活性剤の
溶液を用いると、迅速かつ定量的な溶出が達成される。
【００１８】実施例 １． GenapolR Ｔ２５０のグリシジルエーテルの製造 １０ｇのGenapolR Ｔ２５０を４０mlの無水ジオキサン
に溶解し、１mlのＢＦ3エーテラートを添加した。混合
物を、乾燥管接続装置および電磁撹拌器を付した丸底フ
ラスコ中で５０℃に加熱した。２mlのエピクロルヒドリ
ンを加え、混合物を５０℃で２時間撹拌した。
【００１９】混合物をついで室温に冷却し、４ｇのＮa
ＯＨペレットを添加した。混合物を室温で１.５時間撹
拌した。混合物をベンチ遠心分離器で分離すると、上清
としてジオキサン中 GenapolRＴ２５０のグリシジルエ
ーテルの溶液が得られた。
【００２０】２． SepharoseR ＣＬ−２Ｂの脱水 SepharoseR ＣＬ−２Ｂの水性懸濁液１５０mlをガラス
クロマトグラフィーカラムに充填し、ついで以下の溶液
により常圧で洗浄した。 a) １カラム容量の水 b) １カラム容量の２５％エタノール水溶液 c) １カラム容量の５０％エタノール水溶液 d) １カラム容量の９６％エタノール水溶液 e) 最後に２カラム容量の無水ジオキサン 脱水SepharoseR ＣＬ−２Ｂをカラムから容器に移し、
使用時まで湿気を避けて保存した。
【００２１】３． SepharoseR ＣＬ−２ＢへのTritonR
Ｘ−１００のグリシジルエーテルのカップリング 実施例２のようにして脱水した１００ｇのSepharoseRを
密閉攪拌容器中１００mlの無水ジオキサンに懸濁し、２
mlのＢＦ3エーテラートおよびジオキサン中TritonR Ｘ
−１００のグリシジルエーテル２０％溶液１０mlを加
え、混合物を室温で２時間ゆっくりと撹拌した。誘導体
化されたゲルをついで、ガラスクロマトグラフィーカラ
ムに充填し、以下の溶液により洗浄した。 a) １カラム容量のジオキサン １カラム容量の９６％エタノール水溶液 １カラム容量の５０％エタノール水溶液 １カラム容量の２５％エタノール水溶液 誘導体化されたゲルは、使用時まで、２５％エタノール
中に４℃で保存した。
【００２２】４． 加クエン酸ヒト血漿からのリポ蛋白
の吸着 クロマトグラフィーカラム（４×３０cm）にSepharoseR
ＣＬ−２ＢのTritonRＸ−１００誘導体１２０mlを充填
し、０.９％ＮaＣl、１０mMクエン酸ナトリウム、pH７.
０からなる緩衝液（以下、緩衝液Ａと呼ぶ）で平衡化し
た。カラムに新鮮な加クエン酸ヒト血漿を６ml／minの
流速で負荷した。これをついで、緩衝液Ａで洗浄した。
【００２３】最大吸収を示した分画を収集した。コレス
テロール（MonotestR choresterol，Boehringer：＜２.
５mg／dl）も、またはアポリポ蛋白Ａ−Ｉおよびアポリ
ポ蛋白Ｂ（nephelometric tests, Bohringwerke AG： A
poA1＜5mg／dl；ApoB＜７.３mg／dl）も検出されない澄
明なヒト血漿３２０mlを得ることができた。
【００２４】５． ウサギ血清の脱脂質 ウサギ血清４００mlを実施例４の記載と同様にしてカラ
ムに通し、流速を５ml／minに維持した。最大蛋白濃度
を示す分画を収集した。カラムをついで、緩衝液Ａで洗
浄した。コレステロールはもはや検出できない（＜２.
５mg／dl）澄明なウサギ血清３６０mlを得ることができ
た。
【００２５】６． リポ蛋白の溶出 実施例４に記載のカラムにヒトリポ蛋白を負荷し、溶出
液がベースラインの吸収を示すようになるまで緩衝液Ａ
で洗浄した。ついで，カラムからリポ蛋白を、１％Trit
onR Ｘ−１００を含む緩衝液Ａからなる緩衝液で溶出し
た。最大吸収を示す分画を収集した。負荷されたリポ蛋
白の約８０％を、負荷血漿中の濃度の約２倍の濃度で含
有するリポ蛋白濃縮物を得ることができた。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒトまたは動物の体液からリポ蛋白を除
    去するための吸着剤において、クロマトグラフィーに適
    当で、ＨＯ−(ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ)n−Ｏ−Ｒ型の非イオ
    ン性ポリオキシエチレン界面活性剤のグリシジルエーテ
    ルとの化学反応に付された、好ましくはアガロースをベ
    ースとする多糖支持体からなる吸着剤。
  2. 【請求項２】 式Ｉ 【化１】 （式中、ｎは２〜３０の整数であり、Ｒは４〜２０個の
    炭素原子を有するアルキル基、フェニル基、またはアル
    キル基が１〜１６個の炭素原子を有するフェニルアルキ
    ル基である）で示される請求項１に記載の吸着剤。
  3. 【請求項３】 ｎは６〜２０の整数である請求項２に記
    載の吸着剤。
  4. 【請求項４】 Ｒは１０〜１６個の炭素原子を有するア
    ルキル基である請求項２に記載の吸着剤。
  5. 【請求項５】 支持体多糖はアガロース含量１〜６％の
    マクロポーラスなアガロースゲルである請求項２に記載
    の吸着剤。
  6. 【請求項６】 請求項２の式Ｉの吸着剤の製造法におい
    て、式III ＨＯ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n−Ｏ−Ｒ （III） （式中、ｎは２〜３０の整数であり、Ｒは４〜２０個の
    炭素原子を有するアルキル基、フェニル基、またはアル
    キル基が１〜１６個の炭素原子を有するフェニルアルキ
    ル基である）の界面活性剤をエピクロルヒドリンと反応
    させて式II 【化２】 のグリシジルエーテルを得、このグルシジルエーテルを
    ルイス酸の存在下に多糖支持体と反応させて式Iの化合
    物を得ることを特徴とする方法。
  7. 【請求項７】 リポ蛋白の吸着のための請求項１に記載
    の吸着剤の使用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009540274A (ja) * 2006-06-06 2009-11-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 全血試料の特異的溶血
JP2018028548A (ja) * 2013-06-24 2018-02-22 アクゾ ノーベル ケミカルズ インターナショナル ベスローテン フエンノートシャップＡｋｚｏ Ｎｏｂｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ． 変性シリカの粒子
JP2020530780A (ja) * 2017-07-26 2020-10-29 ロゼッタ エクソソーム 疎水性相互作用を利用した細胞外小胞体の分離方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6495140B1 (en) 1998-01-12 2002-12-17 Her Majesty In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada Process for the isolation, recovery and purification of non-polar extractives
WO1999034810A1 (en) * 1998-01-12 1999-07-15 Her Majesty In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada A process for the isolation, recovery and purification of non-polar extractives

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US409583A (en) * 1889-08-20 Refractory compound
US3260648A (en) * 1963-08-16 1966-07-12 Warner Lambert Pharmaceutical Diagnostic aid
US4029583A (en) * 1975-02-28 1977-06-14 Purdue Research Foundation Chromatographic supports and methods and apparatus for preparing the same
DE3330648C2 (de) * 1983-08-25 1986-11-20 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zum Abtrennen von Lipoproteinen mittels derivatisiertem Polyhydroxymethylen
JPS6070353A (ja) * 1983-09-28 1985-04-22 Toyo Soda Mfg Co Ltd 疎水性クロマトグラフィ−用担体
NZ213819A (en) * 1984-10-31 1988-05-30 Kanegafuchi Chemical Ind Lipoprotein adsorbent using hydroxy-containing polymer gel
US4696958A (en) * 1985-11-22 1987-09-29 Beckman Instruments, Inc. Electrophoretic technique for separation of lipoproteins and electrophoretic gel for use therein
JPS62186940A (ja) * 1986-02-10 1987-08-15 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd リポ蛋白用吸着体
EP0263184B1 (en) * 1986-03-28 1992-10-28 Toray Industries, Inc. Immobilized physiologically active material
WO1990004416A1 (en) * 1988-10-25 1990-05-03 Invitron Corporation Specific removal of ldl from blood
DE3932971C2 (de) * 1989-10-03 2003-03-13 Fresenius Ag Zur Eliminierung von Biomakromolekülen, insbesondere LDL und Endotoxinen, aus Vollblut in extrakorporalem Kreislauf geeignetes Adsorbens
US5030352A (en) * 1990-01-25 1991-07-09 Purdue Research Foundation Coated media for chromatography
DE4018778A1 (de) * 1990-06-12 1991-12-19 Braun Melsungen Ag Adsorptionsmaterial zur selektiven entfernung von ldl- oder/und vldl

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009540274A (ja) * 2006-06-06 2009-11-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 全血試料の特異的溶血
JP2018028548A (ja) * 2013-06-24 2018-02-22 アクゾ ノーベル ケミカルズ インターナショナル ベスローテン フエンノートシャップＡｋｚｏ Ｎｏｂｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ． 変性シリカの粒子
JP2020530780A (ja) * 2017-07-26 2020-10-29 ロゼッタ エクソソーム 疎水性相互作用を利用した細胞外小胞体の分離方法

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