JP2018526642A5 - - Google Patents
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Claims (16)
- セリン129でリン酸化されたアルファ−シヌクレイン(PS129アルファ−シヌクレイン)を検出する方法であって、
(a)サンプルを、PS129アルファ−シヌクレインに優先的に結合する捕捉抗体及びアルファ−シヌクレインの残基40−55内のエピトープに特異的に結合するレポーター抗体と接触させるステップであって;前記サンプル中にPS129アルファ−シヌクレインが存在する場合、前記捕捉抗体及びレポーター抗体が前記PS129アルファ−シヌクレインに結合してサンドイッチ複合体を形成する、ステップ;及び
(b)ステップ(a)において前記PS129−アルファシヌクレインが存在する場合に前記PS129−アルファシヌクレインに結合する前記レポーター抗体を検出して、前記PS129アルファ−シヌクレインの存在又は非存在を示すステップ
を含む、方法。 - 前記捕捉抗体が11A5であり、前記レポーター抗体が23E8である、請求項1に記載の方法。
- 前記捕捉抗体がリンカーを介して支持物に結合する、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記レポーター抗体が蛍光標識され、単一分子計数によって検出される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルを前記捕捉抗体と接触させ、前記捕捉抗体がPS129アルファ−シヌクレインに結合し、PS129アルファ−シヌクレインに結合した前記捕捉抗体を前記サンプルの他の成分から分離して溶液中に再懸濁し、この溶液を前記レポーター抗体と接触させ、前記レポーター抗体が前記PS129アルファ−シヌクレインに結合して前記サンドイッチ複合体を形成し、前記サンドイッチ複合体を前記再懸濁溶液の他の成分から分離し、前記レポーター抗体を前記サンドイッチ複合体から溶出して検出する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 定量的に実施されて、前記PS129アルファ−シヌクレインの絶対量又は相対量を示す、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、0.1−1.0Mのグアニジンを含有する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記接触ステップの前に、前記捕捉抗体を固相に結合させる、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記捕捉抗体を磁気ビーズに結合させ、磁場を印加することによって、この磁気ビーズを前記サンプルの残り又は再懸濁溶液から分離する、請求項8に記載の方法。
- 前記サンプルが、0.1%のトリトンX−405を含むSingulex標準希釈剤で希釈される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、ヒト由来のサンプルである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルがヒトの脳脊髄液(CSF)である、請求項11に記載の方法。
- 前記CSFサンプルが、0.1%のトリトンX−405を含むSingulex標準希釈剤で1:4に希釈される、請求項12に記載の方法。
- 前記CSFサンプルが、<500ng/mLのヘモグロビンを含む、請求項12に記載の方法。
- PS129アルファ−シヌクレインの存在を0.1pg/mLのレベルで検出する、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 23E8(ATCC受託番号PTA−122711)のKabat CDRを含む、モノクローナル抗体。
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