CN112710850A - 一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种检测人体液中α‑突触核蛋白含量的试剂盒。本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于20min；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现α‑突触核蛋白(SNCA)的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。

Description

一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒
技术领域
本发明属于检测试剂盒领域，特别是α-突触核蛋白检测试剂盒。
背景技术
α-突触核蛋白(SNCA)是最早发现的与帕金森病(PD)存在关联的基因之一，也是揭示帕金森病发病机理的最有希望的靶点之一。SNCA的分子量为14kDa，由140个氨基酸组成。SNCA在脑细胞中表达较高，其主要位于突触前端，该位点对于细胞间的信号传递至关重要。PD是第二常见的神经退行性疾病。其特征是相对特异性的黑质致密部(负责运动控制)多巴胺能神经元细胞损失，及神经元内出现聚集物路易小体。SNCA是路易小体的主要组分，其在多巴胺能神经元细胞内的积聚被认为与这些细胞的功能障碍和最终死亡有关，并最终导致PD相关的运动控制能力丧失。
发明内容
本发明目的在于提供一种采用磁微粒化学发光法测定人体液样本(包含但不限于血清/血浆/脑脊液/腹水/羊水等)中α-突触核蛋白(SNCA)含量的试剂盒。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，上述抗试剂为碱性磷酸酶标记的抗α-突触核蛋白标记抗体。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，上述磁微粒试剂为磁微粒-抗α-突触核蛋白包被抗体连接物。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，上述化学发光底物为AMPPD。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，上述人体液的样本来源为血清、血浆、脑脊液、腹水或羊水其中一种或多种。
技术原理为：包被抗α-突触核蛋白(SNCA)抗体的磁珠与碱性磷酸酶(AP)标记的α-突触核蛋白(SNCA)配对抗体和样本、校准品或质控品中的α-突触核蛋白结合形成“三明治”复合物。在外加磁场的作用下，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离，清洗复合物后，加入酶促化学发光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光仪检测反应的发光强度。在检测范围内，发光强度与样本中的α-突触核蛋白的含量成正比，使用改良的四参数Logistic方程拟合可计算出样本中α-突触核蛋白浓度。
本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于20min；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现α-突触核蛋白(SNCA)的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是本发明中实施例中标准曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《精编分子生物学实验指南》(奥斯伯著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒
本实施例提供检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，试剂孔中的试剂为预先封装进试剂条，采用铝塑复合材料进行封膜，这些试剂含有校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物(AMPPD)等试剂。
实施例2、α-突触核蛋白检测
(一)样本-磁珠孵育
将100μL血浆样本转移至反应孔中，随后将试剂孔中的100μL含磁微粒-抗α-突触核蛋白包被抗体连接物转移至样本所在反应孔，维持反应孔恒温状态，为37度。
(二)磁珠转移清洗
温育结束，仪器的磁分离模块将反应孔中的磁微粒吸附富集，随后将不含磁微粒的废液吸去。然后，将试剂孔中的清洗液加入反应孔中，同时，磁分离模块关闭，对反应孔进行吹打混合，静止30秒，磁分离模块启动，将磁微粒吸附，移液模块将清洗液吸去，完成一次清洗。
(三)检测抗体结合
(四)磁珠清洗
(五)信号检测
当清洗完成后，信号测定模块对信号进行信号采集分析，获得对应的浓度值，用时总时间小于20分钟，标准曲线图如图1。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物。
2.根据权利要求1所述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述抗试剂为碱性磷酸酶标记的抗α-突触核蛋白标记抗体。
3.根据权利要求2所述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂为磁微粒-抗α-突触核蛋白包被抗体连接物。
4.根据权利要求3所述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为AMPPD。
5.根据权利要求4所述的一种检测人体液中α-突触核蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述人体液的样本来源为血清、血浆、脑脊液、腹水或羊水其中一种或多种。
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