CN112710851A - 一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒。本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于20min；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现胎盘生长因子(PIGF)的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。

Description

一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒
技术领域
本发明属于检测试剂盒领域，特别是胎盘生长因子检测试剂盒。
背景技术
胎盘生长因子(PIGF)主要由胎盘合体滋养细胞分泌，促进滋养细胞增殖、活化，PIGF也可在绒毛间质内皮细胞中丰富表达，促进新生血管形成分枝、非分枝血管形成及建立有效的胎儿胎盘血管网，在胎盘形成及胎儿发育过程中发挥重要作用。正常妊娠时，PIGF的合成随孕周增加逐渐增加，这与妊娠过程中胎盘供氧的变化是一致的。妊娠15周之前PIGF水平较低，妊娠15～26周PIGF表达迅速增加，并在妊娠28～30周达高峰，妊娠后期至分娩期随胎盘成熟老化、功能减退，PIGF水平又逐渐下降。
发明内容
本发明目的在于提供一种采用磁微粒化学发光法测定人体液样本(包含但不限于血清/血浆/脑脊液/腹水/羊水等)中胎盘生长因子(PIGF)含量的试剂盒。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，上述抗试剂为碱性磷酸酶标记的抗胎盘生长因子标记抗体。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，上述磁微粒试剂为磁微粒-抗胎盘生长因子包被抗体连接物。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，上述化学发光底物为AMPPD。
根据本发明的一方面，上述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，上述人体液的样本来源为血清、血浆、脑脊液、腹水或羊水其中一种或多种。
技术原理为：包被抗胎盘生长因子(PIGF)抗体的磁珠与碱性磷酸酶(AP)标记的胎盘生长因子(PIGF)配对抗体和样本、校准品或质控品中的胎盘生长因子结合形成“三明治”复合物。在外加磁场的作用下，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离，清洗复合物后，加入酶促化学发光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光仪检测反应的发光强度。在检测范围内，发光强度与样本中的胎盘生长因子的含量成正比，使用改良的四参数Logistic方程拟合可计算出样本中胎盘生长因子浓度。
本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于20min；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现胎盘生长因子(PIGF)的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。
本发明使用基于磁微粒的化学发光(碱性磷酸酶催化)免疫分析检测胎盘生长因子的方法。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是本发明中实施例中标准曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《精编分子生物学实验指南》(奥斯伯著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒
本实施例提供检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，试剂孔中的试剂为预先封装进试剂条，采用铝塑复合材料进行封膜，这些试剂含有校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物(AMPPD)等试剂。
实施例2、胎盘生长因子检测
(一)样本-磁珠孵育
将100μL血浆样本转移至反应孔中，随后将试剂孔中的100μL含磁微粒-抗胎盘生长因子包被抗体连接物转移至样本所在反应孔，维持反应孔恒温状态，为37度。
(二)磁珠转移清洗
上一步温育结束，仪器的磁分离模块将反应孔中的磁微粒吸附富集，随后将不含磁微粒的废液吸去。然后，将试剂孔中的清洗液加入反应孔中，同时，磁分离模块关闭，对反应孔进行吹打混合，静止30秒，磁分离模块启动，将磁微粒吸附，移液模块将清洗液吸去，完成一次清洗。
(三)检测抗体结合
(四)磁珠转移清洗
(五)信号检测
当上一步清洗完成后，信号测定模块对信号进行信号采集分析，获得对应的浓度值，用时总时间小于20分钟，标准曲线图如图1。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物。
2.根据权利要求1所述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，其特征在于，所述抗试剂为碱性磷酸酶标记的抗胎盘生长因子标记抗体。
3.根据权利要求2所述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂为磁微粒-抗胎盘生长因子包被抗体连接物。
4.根据权利要求3所述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为AMPPD。
5.根据权利要求4所述的一种检测人体液中胎盘生长因子含量的试剂盒，其特征在于，所述人体液的样本来源为血清、血浆、脑脊液、腹水或羊水其中一种或多种。
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