JP5997446B2 - 甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬およびその用途 - Google Patents
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Description
本発明の甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬は、前述のように、甲状腺ホルモン固定化担体および溶媒を含み、前記甲状腺ホルモン固定化担体を含む前記溶媒のpHが、pH8.7〜11.5の範囲であることを特徴とする。
本発明の溶媒中の甲状腺ホルモン固定化担体の安定化方法は、前述のように、甲状腺ホルモン固定化担体を含む溶媒のpHを、pH8.7〜11.5に設定することを特徴とする。本発明の安定化方法は、前記甲状腺ホルモン固定化担体を含む前記溶媒のpHを前述の範囲に設定することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。前記溶媒のpHの設定は、例えば、前述した本発明の液体試薬の説明を引用できる。
本発明の甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬の製造方法は、前述のように、溶媒中の甲状腺ホルモン固定化担体の安定化工程を含み、前記安定化工程が、前記本発明の安定化方法によって実施されることを特徴とする。本発明の製造方法は、前記本発明の安定化方法により安定化工程を行うことが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。本発明の製造方法は、例えば、前述した本発明の液体試薬および本発明の安定化方法の説明を引用できる。
本発明の甲状腺ホルモンの検出方法は、前述のように、抗甲状腺ホルモン抗体に、検体中の甲状腺ホルモンおよび前記本発明の液体試薬の甲状腺ホルモン固定化担体を競合的に結合させる結合工程、および、前記甲状腺ホルモン固定化担体と前記抗甲状腺ホルモン抗体との複合体を検出する工程を含むことを特徴とする。
(A1)反応液において、前記検体、前記抗甲状腺ホルモン抗体および前記液体試薬を同時に接触させて、前記第1の複合体および前記第2の複合体を形成する複合体形成工程
(A2)反応液において、前記検体および前記抗甲状腺ホルモン抗体を接触させて、前記第1の複合体を形成し、さらに、前記反応液に、前記液体試薬を添加して、前記第2の複合体を形成する複合体形成工程
(A3)反応液において、前記液体試薬および前記抗甲状腺ホルモン抗体を接触させて、前記第2の複合体を形成し、さらに、前記反応液に、前記検体を添加して、前記第1の複合体を形成する複合体形成工程
本発明の甲状腺ホルモンの検出キットは、前記本発明の甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬、および、抗甲状腺ホルモン抗体を含み、前記本発明の検出方法に使用することを特徴とする。本発明の検出キットは、例えば、前述した本発明の液体試薬および本発明の検出方法の説明を引用できる。前記検出キットは、前記甲状腺ホルモン固定化担体を試薬として含むため、例えば、従来のような前記3試薬系と比較して、試薬数が少なく、低コストである。
本例では、甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬を調製し、保存安定性を評価した。
L−チロキシン(ナカライテスク社製)をビオチン化して、ビオチン化T4を得た。前記ビオチン化は、Biotin Labeling Kit−NH2(商品名、同仁化学研究所社製)を使用し、その取り扱い説明書に準じて行った。そして、前記ビオチン化T4とストレプトアビジン被覆磁性微粒子(Dynal Biotech社製の商品名Dynabeads(登録商標) MyOneTMStreptavidin T1)とを混合し、前記ストレプトアビジン被覆磁性微粒子のストレプトアビジンに、前記ビオチン化T4のビオチンを結合させ、T4が固定化されたT4固定化磁性粒子を得た。前記ビオチンとストレプトアビジンとの結合は、トリス緩衝液溶媒中、37℃、60分、pH7.4の条件で行った。前記溶媒中における前記ビオチン化T4と前記ストレプトアビジン被覆磁性微粒子との添加割合は、総ストレプトアビジン量に対して過剰量のビオチン化T4とした。
50mmol/L Tris
150mmol/L NaCl
0.1% BSA
0.05% NaN3
(緩衝液2:pH7.0〜8.6)
50mmol/L Tris
150mmol/L NaCl
0.1% BSA
0.05% NaN3
抗T4マウスモノクローナル抗体を酵素で標識して、酵素標識抗体を得た。前記酵素標識化は、Alkaline Phosphatase Labeling Kit−SH(商品名、同仁化学研究所社製)を使用し、その取り扱い説明書に準じて行った。そして、下記緩衝液3に、0.2μg/mLとなるように前記酵素標識抗体を混合し、酵素標識抗体液を調製した。
50mmol/L Tris
150mmol/L NaCl
0.1% BSA
0.05% NaN3
0.025mmol/L ZnCl2
5mmol/L MgCl2
前記実施例1および前記比較例1の液体試薬を、それぞれ、37℃で7日間保存した。そして、保存開始前(0日)、および、保存開始から7日後における各液体試薬について、前記(2)に示す競合的酵素免疫測定を行い、検体中の遊離T4を測定した。
活性の残存率(%)=(X7/X0)×100 (I)
Claims (13)
- 甲状腺ホルモン固定化担体および溶媒を含み、
前記甲状腺ホルモン固定化担体を含む前記溶媒のpHが、pH8.7〜11.5の範囲であり、
前記甲状腺ホルモン固定化担体が、ビオチン−アビジン結合またはビオチン−ストレプトアビジン結合により、甲状腺ホルモンが固定化された磁性粒子であることを特徴とする、甲状腺ホルモン固定化担体含有液体試薬。 - 前記甲状腺ホルモン固定化担体を含む前記溶媒のpHが、pH8.7〜10.5の範囲である、請求項1記載の液体試薬。
- 前記甲状腺ホルモン固定化担体が、アビジン固定化磁性粒子またはストレプトアビジン固定化磁性粒子とビオチン化甲状腺ホルモンとの複合体である、請求項1または2記載の液体試薬。
- 前記甲状腺ホルモンが、チロキシン(T4)または3,3’,5−L−トリヨードチロニン(T3)である、請求項1から3のいずれか一項に記載の液体試薬。
- ビオチン−アビジン結合またはビオチン−ストレプトアビジン結合により、甲状腺ホルモンが固定化された磁性粒子である、甲状腺ホルモン固定化担体を含む溶媒のpHを、pH8.7〜11.5に設定することを特徴とする、溶媒中の甲状腺ホルモン固定化担体の安定化方法。
- 前記甲状腺ホルモン固定化担体を含む前記溶媒のpHを、pH8.7〜10.5に設定する、請求項5記載の安定化方法。
- 前記甲状腺ホルモン固定化担体が、アビジン固定化磁性粒子またはストレプトアビジン固定化磁性粒子とビオチン化甲状腺ホルモンとの複合体である、請求項5または6記載の安定化方法。
- 溶媒中の甲状腺ホルモン固定化担体の安定化工程を含み、前記安定化工程が、請求項5から7のいずれか一項に記載の安定化方法によって実施されることを特徴とする、甲状腺ホルモン固定化担体含有液体試薬の製造方法。
- 抗甲状腺ホルモン抗体に、検体中の甲状腺ホルモンおよび請求項1から4のいずれか一項に記載の液体試薬の甲状腺ホルモン固定化担体を競合的に結合させる結合工程、および、前記甲状腺ホルモン固定化担体と前記抗甲状腺ホルモン抗体との複合体を検出する工程を含むことを特徴とする、甲状腺ホルモンの検出方法。
- 前記結合工程が、前記抗甲状腺ホルモン抗体と前記検体中の甲状腺ホルモンとの第1の複合体、および、前記抗甲状腺ホルモン抗体と前記甲状腺ホルモン固定化担体との第2の複合体を形成させる複合体形成工程である、請求項9記載の検出方法。
- 前記複合体形成工程が、下記(A1)、(A2)または(A3)のいずれかの工程である、請求項10記載の検出方法。
(A1)反応液において、前記検体、前記抗甲状腺ホルモン抗体および前記液体試薬を同時に接触させて、前記第1の複合体および前記第2の複合体を形成する複合体形成工程
(A2)反応液において、前記検体および前記抗甲状腺ホルモン抗体を接触させて、前記第1の複合体を形成し、さらに、前記反応液に、前記液体試薬を添加して、前記第2の複合体を形成する複合体形成工程
(A3)反応液において、前記液体試薬および前記抗甲状腺ホルモン抗体を接触させて、前記第2の複合体を形成し、さらに、前記反応液に、前記検体を添加して、前記第1の複合体を形成する複合体形成工程 - さらに、前記甲状腺ホルモン固定化担体と結合した前記抗甲状腺ホルモン抗体を回収する工程を含む、請求項9から11のいずれか一項に記載の検出方法。
- 請求項1から4のいずれか一項に記載の甲状腺ホルモン固定化担体含有液体試薬、および、抗甲状腺ホルモン抗体を含み、
請求項9から12のいずれか一項に記載の検出方法に使用することを特徴とする、甲状腺ホルモンの検出キット。
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