JPH0989889A - 遊離ハプテンの免疫学的測定法 - Google Patents
遊離ハプテンの免疫学的測定法Info
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- JPH0989889A JPH0989889A JP26647795A JP26647795A JPH0989889A JP H0989889 A JPH0989889 A JP H0989889A JP 26647795 A JP26647795 A JP 26647795A JP 26647795 A JP26647795 A JP 26647795A JP H0989889 A JPH0989889 A JP H0989889A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 遊離ハプテンの免疫学的測定法において、遊
離ハプテンの検体中の濃度値を精度良く測定すること。 【解決手段】 遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対す
る抗体を免疫反応させる遊離ハプテンの免疫学的測定法
において、免疫反応の際の反応液中に、ポリエチレング
リコールなどの水溶性ポリオキシアルキレンアルコール
を含有させる。
離ハプテンの検体中の濃度値を精度良く測定すること。 【解決手段】 遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対す
る抗体を免疫反応させる遊離ハプテンの免疫学的測定法
において、免疫反応の際の反応液中に、ポリエチレング
リコールなどの水溶性ポリオキシアルキレンアルコール
を含有させる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遊離ハプテンの免
疫学的測定法に関する。さらに詳しくは、遊離ハプテン
の検体中の濃度値を精度良く測定できる遊離ハプテンの
免疫学的測定法に関する。
疫学的測定法に関する。さらに詳しくは、遊離ハプテン
の検体中の濃度値を精度良く測定できる遊離ハプテンの
免疫学的測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来の遊離ハプテンの免疫学的測定法で
は、遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対する抗体が反
応する際の反応液組成としては、遊離ハプテン、遊離ハ
プテンに対する抗体、これらの付加物など免疫反応に直
接関与する物質を除けば、バルビタールやリン酸系の緩
衝液に、測定検体の成分、ウシ血清アルブミンやゼラチ
ンなどのタンパク質、ＮａＣｌ2やＭｇＣｌ2等の塩類な
どが含有される反応液組成であった。具体的には、「特
公昭６０−５０１６７４の明細書」や「特開昭６２−１
８０２９６」の反応液組成が挙げられる。
は、遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対する抗体が反
応する際の反応液組成としては、遊離ハプテン、遊離ハ
プテンに対する抗体、これらの付加物など免疫反応に直
接関与する物質を除けば、バルビタールやリン酸系の緩
衝液に、測定検体の成分、ウシ血清アルブミンやゼラチ
ンなどのタンパク質、ＮａＣｌ2やＭｇＣｌ2等の塩類な
どが含有される反応液組成であった。具体的には、「特
公昭６０−５０１６７４の明細書」や「特開昭６２−１
８０２９６」の反応液組成が挙げられる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
免疫学的測定法では、遊離ハプテンの検体中濃度が低く
すぎるため精度良く測定することができなかった。例え
ば、「特開昭６３−８５３５８」に記載の遊離トリヨー
ドサイロニン（以下、ＦＴ3とする）の免疫学的測定法
においては、測定検体のＦＴ3濃度が１．７ｐｇ／ｍｌ
の場合、同時再現性（ＣＶ）が９％であり、測定精度の
面で不十分な遊離ハプテンの免疫学的測定法であった。
免疫学的測定法では、遊離ハプテンの検体中濃度が低く
すぎるため精度良く測定することができなかった。例え
ば、「特開昭６３−８５３５８」に記載の遊離トリヨー
ドサイロニン（以下、ＦＴ3とする）の免疫学的測定法
においては、測定検体のＦＴ3濃度が１．７ｐｇ／ｍｌ
の場合、同時再現性（ＣＶ）が９％であり、測定精度の
面で不十分な遊離ハプテンの免疫学的測定法であった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題を
解決するため鋭意検討した結果、低濃度の遊離ハプテン
でも精度良く測定することができる遊離ハプテンの免疫
学的測定法を見出し、本発明に到達した。すなわち本発
明は、遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対する抗体を
免疫反応させる遊離ハプテンの免疫学的測定法におい
て、免疫反応の際の反応液中に、下記一般式（１）又は
（２）式で示される水溶性ポリオキシアルキレンアルコ
ール（Ａ）を含有させることを特徴とする免疫学的測定
法。 Ｒ［Ｏ（ＡＯ）x（ＥＯ）y］Ｈ （１） 但し、 Ｒ ＝Ｈまたは炭素数１〜６のアルキル基 （ＡＯ）x＝炭素数２〜４のアルキレンオキサイド（Ａ
Ｏ）のｘモルにより 形成されるポリ
オキシアルキレン基を示す。 （ＥＯ）y＝エチレンオキサイド（ＥＯ）のｙモルによ
り形成されるポリオ キシエチレン基
を示す。 ｘ ＝０又は１〜２０００ ｙ ＝３０〜５０００ ［ｘ＋ｙは、この化合物の重量平均分子量が１０3〜２
×１０5になる数である。］ Ｒ’〔［Ｏ（ＡＯ）a（ＥＯ）b］Ｈ〕c （２） 但し、 Ｒ’ ＝炭素数２〜６のアルカンポリオール
の水酸基を除いた残基 （ＡＯ）a＝炭素数２〜４のアルキレンオキサイド（Ａ
Ｏ）のａモルにより 形成されるポリ
オキシアルキレン基を示す。 （ＥＯ）b＝エチレンオキサイド（ＥＯ）のｂモルによ
り形成されるポリオ キシエチレン基
を示す。 ａ ＝０又は１〜１０００ ｂ ＝２０〜１５００ ｃ ＝２〜６ ［ａ＋ｂは、この化合物の重量平均分子量が１０3〜１
０5になる数である。］
解決するため鋭意検討した結果、低濃度の遊離ハプテン
でも精度良く測定することができる遊離ハプテンの免疫
学的測定法を見出し、本発明に到達した。すなわち本発
明は、遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対する抗体を
免疫反応させる遊離ハプテンの免疫学的測定法におい
て、免疫反応の際の反応液中に、下記一般式（１）又は
（２）式で示される水溶性ポリオキシアルキレンアルコ
ール（Ａ）を含有させることを特徴とする免疫学的測定
法。 Ｒ［Ｏ（ＡＯ）x（ＥＯ）y］Ｈ （１） 但し、 Ｒ ＝Ｈまたは炭素数１〜６のアルキル基 （ＡＯ）x＝炭素数２〜４のアルキレンオキサイド（Ａ
Ｏ）のｘモルにより 形成されるポリ
オキシアルキレン基を示す。 （ＥＯ）y＝エチレンオキサイド（ＥＯ）のｙモルによ
り形成されるポリオ キシエチレン基
を示す。 ｘ ＝０又は１〜２０００ ｙ ＝３０〜５０００ ［ｘ＋ｙは、この化合物の重量平均分子量が１０3〜２
×１０5になる数である。］ Ｒ’〔［Ｏ（ＡＯ）a（ＥＯ）b］Ｈ〕c （２） 但し、 Ｒ’ ＝炭素数２〜６のアルカンポリオール
の水酸基を除いた残基 （ＡＯ）a＝炭素数２〜４のアルキレンオキサイド（Ａ
Ｏ）のａモルにより 形成されるポリ
オキシアルキレン基を示す。 （ＥＯ）b＝エチレンオキサイド（ＥＯ）のｂモルによ
り形成されるポリオ キシエチレン基
を示す。 ａ ＝０又は１〜１０００ ｂ ＝２０〜１５００ ｃ ＝２〜６ ［ａ＋ｂは、この化合物の重量平均分子量が１０3〜１
０5になる数である。］
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明において、水溶性ポリオキ
シアルキレンアルコール（Ａ）は、一般式（１）又は
（２）で示される。式中ではＡＯとＥＯがブロック型で
配列した化合物を示しているが、実際はＡＯとＥＯがラ
ンダムで結合した化合物も含まれる。一般式（１）のＲ
がＨの化合物としては、ＥＯを付加重合させた化合物
［ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧと略す）］お
よびＥＯとＡＯをランダムに付加重合させた化合物があ
る。一方Ｒ’がアルキル基の化合物としては、エタノー
ル，ｎプロパノール，ｎブタノールまたはｎヘキサノー
ルにＥＯを付加重合させた化合物およびＥＯとＡＯをラ
ンダムに付加重合させた化合物がある。また一般式
（２）としてはグリセリンなどにＥＯを付加重合させた
化合物およびＥＯおよびＡＯを付加重合させた化合物が
ある。また一般式（１）のＡＯのｎ数は０又は１〜２０
００、ＥＯのｎ数は３０〜５０００（ｘ＋ｙは、一般式
（１）の分子量が１０3〜２×１０5になる数）である。
また一般式（２）のＡＯのｎ数は０又は１〜１０００、
ＥＯのｎ数は２０〜１５００（ａ＋ｂは、一般式（２）
の分子量が１０3〜１０5になる数）である。これらのう
ち、ＰＥＧは、工業品や医薬品として多量に市販されて
おり、好ましく使用される。また、（Ａ）は２種以上併
用してもよい。
シアルキレンアルコール（Ａ）は、一般式（１）又は
（２）で示される。式中ではＡＯとＥＯがブロック型で
配列した化合物を示しているが、実際はＡＯとＥＯがラ
ンダムで結合した化合物も含まれる。一般式（１）のＲ
がＨの化合物としては、ＥＯを付加重合させた化合物
［ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧと略す）］お
よびＥＯとＡＯをランダムに付加重合させた化合物があ
る。一方Ｒ’がアルキル基の化合物としては、エタノー
ル，ｎプロパノール，ｎブタノールまたはｎヘキサノー
ルにＥＯを付加重合させた化合物およびＥＯとＡＯをラ
ンダムに付加重合させた化合物がある。また一般式
（２）としてはグリセリンなどにＥＯを付加重合させた
化合物およびＥＯおよびＡＯを付加重合させた化合物が
ある。また一般式（１）のＡＯのｎ数は０又は１〜２０
００、ＥＯのｎ数は３０〜５０００（ｘ＋ｙは、一般式
（１）の分子量が１０3〜２×１０5になる数）である。
また一般式（２）のＡＯのｎ数は０又は１〜１０００、
ＥＯのｎ数は２０〜１５００（ａ＋ｂは、一般式（２）
の分子量が１０3〜１０5になる数）である。これらのう
ち、ＰＥＧは、工業品や医薬品として多量に市販されて
おり、好ましく使用される。また、（Ａ）は２種以上併
用してもよい。
【０００６】本発明の水溶性ポリオキシアルキレンアル
コール（Ａ）の重量平均分子量（以下、特に明示しなけ
れば単に分子量とする）は、好ましくは、４×１０3〜
７×１０4である。
コール（Ａ）の重量平均分子量（以下、特に明示しなけ
れば単に分子量とする）は、好ましくは、４×１０3〜
７×１０4である。
【０００７】本発明において、遊離ハプテンおよび遊離
ハプテンに対する抗体が反応する際の、反応液中に水溶
性ポリオキシアルキレンアルコール（Ａ）を含有させる
割合は、好ましくは、０．０１〜４重量／容量％（以
下、特に明示しなければ単に％とする）であり、さらに
好ましくは、０．０５〜１％含有させる。
ハプテンに対する抗体が反応する際の、反応液中に水溶
性ポリオキシアルキレンアルコール（Ａ）を含有させる
割合は、好ましくは、０．０１〜４重量／容量％（以
下、特に明示しなければ単に％とする）であり、さらに
好ましくは、０．０５〜１％含有させる。
【０００８】本発明の遊離ハプテンに対する抗体は、ポ
リクローナル抗体またはポリクローナル抗体のどちらで
も使用できるが、安定的な品質の抗体が永続的に得られ
るモノクローナル抗体が好ましく使用される。
リクローナル抗体またはポリクローナル抗体のどちらで
も使用できるが、安定的な品質の抗体が永続的に得られ
るモノクローナル抗体が好ましく使用される。
【０００９】本発明において、遊離ハプテンとは、液体
中のタンパク質などに結合したり遊離したりすることの
できるハプテンの遊離部分であり、例えば、ＦＴ3、遊
離サイロキシン（以下ＦＴ4とする）、コルチゾル、プ
ロゲステロン、オエストラジオール、テストステロン等
がある。これらのうち好ましくは、ＦＴ3とＦＴ4であ
る。
中のタンパク質などに結合したり遊離したりすることの
できるハプテンの遊離部分であり、例えば、ＦＴ3、遊
離サイロキシン（以下ＦＴ4とする）、コルチゾル、プ
ロゲステロン、オエストラジオール、テストステロン等
がある。これらのうち好ましくは、ＦＴ3とＦＴ4であ
る。
【００１０】本発明において、遊離ハプテンおよび遊離
ハプテンに対する抗体が反応する際の、反応液中の水溶
性ポリオキシアルキレンアルコール（Ａ）以外の組成と
しては、免疫反応に直接関与する物質［例えば、遊離ハ
プテン、遊離ハプテンに対する抗体及びこれらの付加物
（ビオチン化遊離ハプテン、遊離ハプテン結合標識物、
遊離ハプテン結合不溶化担体、遊離ハプテンに対する抗
体結合標識物、遊離ハプテンに対する抗体結合不溶化担
体など）］を除けば、バルビタールやリン酸系の緩衝液
に、測定検体の成分、ウシ血清アルブミンやゼラチンな
どのタンパク質、ＮａＣｌ2やＭｇＣｌ2等の塩類などが
含有される反応液組成である。
ハプテンに対する抗体が反応する際の、反応液中の水溶
性ポリオキシアルキレンアルコール（Ａ）以外の組成と
しては、免疫反応に直接関与する物質［例えば、遊離ハ
プテン、遊離ハプテンに対する抗体及びこれらの付加物
（ビオチン化遊離ハプテン、遊離ハプテン結合標識物、
遊離ハプテン結合不溶化担体、遊離ハプテンに対する抗
体結合標識物、遊離ハプテンに対する抗体結合不溶化担
体など）］を除けば、バルビタールやリン酸系の緩衝液
に、測定検体の成分、ウシ血清アルブミンやゼラチンな
どのタンパク質、ＮａＣｌ2やＭｇＣｌ2等の塩類などが
含有される反応液組成である。
【００１１】また、本発明の遊離ハプテンの免疫学的測
定法の測定系としては、例えば、ＦＴ3の測定系の場
合、抗トリヨードサイロニン（Ｔ3）抗体を不溶化担
体に結合したものに対して、測定検体中ＦＴ3とＴ3標識
物を競合的に反応させる測定系（以下、を固相抗体法
とする）や、抗Ｔ3抗体の標識物に対して、Ｔ3または
その類似体［ジヨードサイロニン（Ｔ2）など）を不溶
化担体に結合させたものと測定検体中ＦＴ3とを競合的
に反応させる測定系（以下、を固相抗原法とする）な
どいずれも公知の測定系が使用できる。
定法の測定系としては、例えば、ＦＴ3の測定系の場
合、抗トリヨードサイロニン（Ｔ3）抗体を不溶化担
体に結合したものに対して、測定検体中ＦＴ3とＴ3標識
物を競合的に反応させる測定系（以下、を固相抗体法
とする）や、抗Ｔ3抗体の標識物に対して、Ｔ3または
その類似体［ジヨードサイロニン（Ｔ2）など）を不溶
化担体に結合させたものと測定検体中ＦＴ3とを競合的
に反応させる測定系（以下、を固相抗原法とする）な
どいずれも公知の測定系が使用できる。
【００１２】測定系の不溶化担体としては、ケイ酸質無
機担体［ガラス（ポ−ラス、ツヤ消しガラスなど）、シ
リカゲル、ベンナイトなど］、磁性体、有機担体（プラ
スチック、デキストラン、ロ紙など）などいずれも公知
のものが使用される。また、これらの不溶化担体は微粒
子にされ懸濁の状態で使用される場合もある。
機担体［ガラス（ポ−ラス、ツヤ消しガラスなど）、シ
リカゲル、ベンナイトなど］、磁性体、有機担体（プラ
スチック、デキストラン、ロ紙など）などいずれも公知
のものが使用される。また、これらの不溶化担体は微粒
子にされ懸濁の状態で使用される場合もある。
【００１３】遊離ハプテンや遊離ハプテンに対する抗体
［合わせて以下、（Ｂ）とする］を不溶化担体に結合さ
せる方法としては、（Ｂ）をガラスに化学的に結合させ
る方法（例えば、米国特許第４２８０９９２号明細書及
び同第３６５２７６１号明細書）や、（Ｂ）をプラスチ
ックに物理吸着させる方法（例えば、イ−・エングバル
等；バイオシム・バイオフィズ・アクタ、２５１巻、４
２７貢、１９７１年）等がある。さらに、（Ｂ）にビオ
チンを結合させ不溶化担体にはストレプトアビジンを結
合させることにより（Ｂ）を不溶化担体に結合させる方
法や、（Ｂ）に対する抗体をあらかじめ不溶化担体に結
合させておくことにより（Ｂ）を不溶化担体に結合させ
る方法（例えば、特願平０４−１７４９１１号明細書）
等、間接的に（Ｂ）を不溶化担体に結合させる方法があ
る。
［合わせて以下、（Ｂ）とする］を不溶化担体に結合さ
せる方法としては、（Ｂ）をガラスに化学的に結合させ
る方法（例えば、米国特許第４２８０９９２号明細書及
び同第３６５２７６１号明細書）や、（Ｂ）をプラスチ
ックに物理吸着させる方法（例えば、イ−・エングバル
等；バイオシム・バイオフィズ・アクタ、２５１巻、４
２７貢、１９７１年）等がある。さらに、（Ｂ）にビオ
チンを結合させ不溶化担体にはストレプトアビジンを結
合させることにより（Ｂ）を不溶化担体に結合させる方
法や、（Ｂ）に対する抗体をあらかじめ不溶化担体に結
合させておくことにより（Ｂ）を不溶化担体に結合させ
る方法（例えば、特願平０４−１７４９１１号明細書）
等、間接的に（Ｂ）を不溶化担体に結合させる方法があ
る。
【００１４】標識物としては、アイソト−プ［Ｉ１２５
など］、酵素［ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファ
ターゼ、βガラクトシダーゼなど］、蛍光物質［ユーロ
ピウム誘導体など］、発光物質［アクリジウム誘導体な
ど］等いずれも公知のものが使用される。
など］、酵素［ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファ
ターゼ、βガラクトシダーゼなど］、蛍光物質［ユーロ
ピウム誘導体など］、発光物質［アクリジウム誘導体な
ど］等いずれも公知のものが使用される。
【００１５】（Ｂ）を標識物に結合させる方法として
は、（Ｂ）を標識物に結合させる方法［例えば、生化学
実験法１５、東京化学同人、ｐ．３０８〜３３０（１９
９３）］がある。さらに、（Ｂ）にストレプトアビジン
を結合させ標識物にビオチンを結合させることにより
（Ｂ）を標識物に結合させる方法や、（Ｂ）に対する抗
体をあらかじめ標識物に結合させておくことにより
（Ｂ）を標識物に結合させる方法（例えば、特願昭６３
−２６２４７９号明細書）等、間接的に（Ｂ）を標識物
に結合させる方法がある。
は、（Ｂ）を標識物に結合させる方法［例えば、生化学
実験法１５、東京化学同人、ｐ．３０８〜３３０（１９
９３）］がある。さらに、（Ｂ）にストレプトアビジン
を結合させ標識物にビオチンを結合させることにより
（Ｂ）を標識物に結合させる方法や、（Ｂ）に対する抗
体をあらかじめ標識物に結合させておくことにより
（Ｂ）を標識物に結合させる方法（例えば、特願昭６３
−２６２４７９号明細書）等、間接的に（Ｂ）を標識物
に結合させる方法がある。
【００１６】
【作用】免疫反応する際の反応液中に水溶性ポリオキシ
アルキレンアルコール（Ａ）を含有させると、この水溶
性ポリマーの作用によって、分子量が１万以下の被測定
物質（例えば、遊離ハプテン）が水溶性ポリマーのネッ
トワークから押し出されることにより、遊離ハプテンに
対する抗体と接触し易くなり、両者の反応性は高まり、
低濃度の遊離ハプテンでも精度良く測定することが可能
になると推測される。
アルキレンアルコール（Ａ）を含有させると、この水溶
性ポリマーの作用によって、分子量が１万以下の被測定
物質（例えば、遊離ハプテン）が水溶性ポリマーのネッ
トワークから押し出されることにより、遊離ハプテンに
対する抗体と接触し易くなり、両者の反応性は高まり、
低濃度の遊離ハプテンでも精度良く測定することが可能
になると推測される。
【００１７】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。
が、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１８】水溶性ポリオキシアルキレンアルコール含
有の免疫反応用緩衝液の調製；０．０２Ｍのリン酸緩衝
液（ｐＨ８．０）に、牛血清アルブミンを１２．５ｇ／
Ｌおよび塩化ナトリウムを１０．６ｇ／Ｌの濃度になる
ように添加し、免疫反応用緩衝液（ａ）を調製した。ま
た、（ａ）の水溶性ポリオキシアルキレンアルコール濃
度が０．０１２５％、０．０６２５％、０．２５％、
１．２５％、５％になる免疫反応用緩衝液を調製した。
この調製で、水溶性ポリオキシアルキレンアルコール
が、分子量１０3のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｂ１），
（ｂ２），（ｂ３），（ｂ４），（ｂ５）とし、分子量
４×１０3のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｃ１），（ｃ
２），（ｃ３），（ｃ４），（ｃ５）とし、分子量、２
×１０4のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｄ１），（ｄ
２），（ｄ３），（ｄ４），（ｄ５）とし、分子量７×
１０4のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｅ１），（ｅ２），
（ｅ３），（ｅ４），（ｅ５）とし、分子量２×１０5
のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｆ１），（ｆ２），（ｆ
３），（ｆ４），（ｆ５）とし、グリセリンにＥＯ８０
モルとプロピレンオキサイド（以下、ＰＯとする）１０
モルをランダムに付加重合させた分子量２．８×１０3
の化合物（以下、化合物Ａとする）の場合には（ｇ
１），（ｇ２），（ｇ３），（ｇ４），（ｇ５）とし、
ｎ−ブタノールにＥＯ２００モルとＰＯ５０モルをラン
ダムに付加重合させた分子量８×１０3の化合物（以
下、化合物Ｂとする）の場合には（ｈ１），（ｈ２），
（ｈ３），（ｈ４），（ｈ５）とし、ヘキシレングリコ
ールにＥＯ５００モルとＰＯ５０モルをランダムに付加
重合させた分子量１．７×１０4の化合物（以下、化合
物Ｃとする）の場合はそれぞれ（ｉ１），（ｉ２），
（ｉ３），（ｉ４），（ｉ５）とした。
有の免疫反応用緩衝液の調製；０．０２Ｍのリン酸緩衝
液（ｐＨ８．０）に、牛血清アルブミンを１２．５ｇ／
Ｌおよび塩化ナトリウムを１０．６ｇ／Ｌの濃度になる
ように添加し、免疫反応用緩衝液（ａ）を調製した。ま
た、（ａ）の水溶性ポリオキシアルキレンアルコール濃
度が０．０１２５％、０．０６２５％、０．２５％、
１．２５％、５％になる免疫反応用緩衝液を調製した。
この調製で、水溶性ポリオキシアルキレンアルコール
が、分子量１０3のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｂ１），
（ｂ２），（ｂ３），（ｂ４），（ｂ５）とし、分子量
４×１０3のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｃ１），（ｃ
２），（ｃ３），（ｃ４），（ｃ５）とし、分子量、２
×１０4のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｄ１），（ｄ
２），（ｄ３），（ｄ４），（ｄ５）とし、分子量７×
１０4のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｅ１），（ｅ２），
（ｅ３），（ｅ４），（ｅ５）とし、分子量２×１０5
のＰＥＧの場合はそれぞれ（ｆ１），（ｆ２），（ｆ
３），（ｆ４），（ｆ５）とし、グリセリンにＥＯ８０
モルとプロピレンオキサイド（以下、ＰＯとする）１０
モルをランダムに付加重合させた分子量２．８×１０3
の化合物（以下、化合物Ａとする）の場合には（ｇ
１），（ｇ２），（ｇ３），（ｇ４），（ｇ５）とし、
ｎ−ブタノールにＥＯ２００モルとＰＯ５０モルをラン
ダムに付加重合させた分子量８×１０3の化合物（以
下、化合物Ｂとする）の場合には（ｈ１），（ｈ２），
（ｈ３），（ｈ４），（ｈ５）とし、ヘキシレングリコ
ールにＥＯ５００モルとＰＯ５０モルをランダムに付加
重合させた分子量１．７×１０4の化合物（以下、化合
物Ｃとする）の場合はそれぞれ（ｉ１），（ｉ２），
（ｉ３），（ｉ４），（ｉ５）とした。
【００１９】比較例１および実施例１〜４０ ＦＴ3免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の固相
抗体法） 第一反応として、（ａ），（ｂ１），（ｂ２），（ｂ
３），（ｂ４），（ｂ５），（ｃ１），（ｃ２），（ｃ
３），（ｃ４），（ｃ５），（ｄ１），（ｄ２），（ｄ
３），（ｄ４），（ｄ５），（ｅ１），（ｅ２），（ｅ
３），（ｅ４），（ｅ５），（ｆ１），（ｆ２），（ｆ
３），（ｆ４），（ｆ５），（ｇ１），（ｇ２），（ｇ
３），（ｇ４），（ｇ５），（ｈ１），（ｈ２），（ｈ
３），（ｈ４），（ｈ５），（ｉ１），（ｉ２），（ｉ
３），（ｉ４），（ｉ５）各々［以下、（ａ）〜（ｉ
５）とする］の０．４ｍＬと、標準ＦＴ3液またはＦＴ3
含有検体の０．１ｍＬと、抗Ｔ3ポリクローナル抗体結
合ガラスビーズ（以下Ｇ１とする）１個とを試験管に分
注し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ
3＋Ｇ１複合体を形成した。反応後、試験管中の液をア
スピレーターで除き、ＦＴ3＋Ｇ１ 複合体を生食水３ｍ
Ｌで３回洗浄した。
抗体法） 第一反応として、（ａ），（ｂ１），（ｂ２），（ｂ
３），（ｂ４），（ｂ５），（ｃ１），（ｃ２），（ｃ
３），（ｃ４），（ｃ５），（ｄ１），（ｄ２），（ｄ
３），（ｄ４），（ｄ５），（ｅ１），（ｅ２），（ｅ
３），（ｅ４），（ｅ５），（ｆ１），（ｆ２），（ｆ
３），（ｆ４），（ｆ５），（ｇ１），（ｇ２），（ｇ
３），（ｇ４），（ｇ５），（ｈ１），（ｈ２），（ｈ
３），（ｈ４），（ｈ５），（ｉ１），（ｉ２），（ｉ
３），（ｉ４），（ｉ５）各々［以下、（ａ）〜（ｉ
５）とする］の０．４ｍＬと、標準ＦＴ3液またはＦＴ3
含有検体の０．１ｍＬと、抗Ｔ3ポリクローナル抗体結
合ガラスビーズ（以下Ｇ１とする）１個とを試験管に分
注し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ
3＋Ｇ１複合体を形成した。反応後、試験管中の液をア
スピレーターで除き、ＦＴ3＋Ｇ１ 複合体を生食水３ｍ
Ｌで３回洗浄した。
【００２０】第二反応として、試験管中のＦＴ3＋Ｇ１
複合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ3（以下Ｐ１と
する）を０．２ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i5)各々を０．
４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応さ
せ、ＦＴ3＋Ｇ１＋Ｐ１複合体を形成した。反応後、試
験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ3＋Ｇ１＋Ｐ
１複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
複合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ3（以下Ｐ１と
する）を０．２ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i5)各々を０．
４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応さ
せ、ＦＴ3＋Ｇ１＋Ｐ１複合体を形成した。反応後、試
験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ3＋Ｇ１＋Ｐ
１複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００２１】第三反応として、試験管中のＦＴ3＋Ｇ１
＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００２２】最後に、各標準ＦＴ3液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
【００２３】比較例２および実施例４１〜８０ ＦＴ3免疫学的測定法（モノクローナル抗体使用の固相
抗体法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ3液またはＦＴ3含有検体の０．１ｍＬと、抗Ｔ3モ
ノクローナル抗体結合ガラスビーズ（以下Ｇ２とする）
１個とを試験管に分注し、試験管中で３７℃，１５分間
免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ２複合体を形成した。反応
後、試験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ3＋Ｇ
２複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
抗体法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ3液またはＦＴ3含有検体の０．１ｍＬと、抗Ｔ3モ
ノクローナル抗体結合ガラスビーズ（以下Ｇ２とする）
１個とを試験管に分注し、試験管中で３７℃，１５分間
免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ２複合体を形成した。反応
後、試験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ3＋Ｇ
２複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００２４】第二反応として、試験管中のＦＴ3＋Ｇ２
複合体１個に、Ｐ１を０．１ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i
5)各々を０．４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分
間免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を形成し
た。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除き、Ｆ
Ｔ3＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄し
た。
複合体１個に、Ｐ１を０．１ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i
5)各々を０．４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分
間免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を形成し
た。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除き、Ｆ
Ｔ3＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄し
た。
【００２５】第三反応として、試験管中のＦＴ3＋Ｇ２
＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００２６】最後に、各標準ＦＴ3液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
【００２７】比較例３および実施例８１〜１２０ ＦＴ3免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の固相
抗原法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ3液またはＦＴ3含有検体の０．１ｍＬと、Ｔ3結合
ガラスビーズ（以下、Ｇ３とする）１個と、ペルオキシ
ダーゼ標識抗Ｔ3ポリクローナル抗体（以下、Ｐ２とす
る）の０．３μｇを試験管に分注し、試験管中で３７
℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ３＋Ｐ２複合体
を形成した。反応後、試験管中の液をアスピレーターで
除き、複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
抗原法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ3液またはＦＴ3含有検体の０．１ｍＬと、Ｔ3結合
ガラスビーズ（以下、Ｇ３とする）１個と、ペルオキシ
ダーゼ標識抗Ｔ3ポリクローナル抗体（以下、Ｐ２とす
る）の０．３μｇを試験管に分注し、試験管中で３７
℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ３＋Ｐ２複合体
を形成した。反応後、試験管中の液をアスピレーターで
除き、複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００２８】第二反応として、試験管中のＦＴ3＋Ｇ３
＋Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００２９】最後に、各標準ＦＴ3液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
【００３０】比較例４および実施例１２１〜１６０ ＦＴ3免疫学的測定法（モノクローナル抗体使用の固相
抗原法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ3液またはＦＴ3含有検体の０．１ｍＬと、Ｇ３の１
個と、ペルオキシダーゼ標識抗Ｔ3モノクローナル抗体
（以下、Ｐ３とする）の０．２μｇを試験管に分注し、
試験管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ
３＋Ｐ３複合体を形成した。反応後、試験管中の液をア
スピレーターで除き、複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄
した。
抗原法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ3液またはＦＴ3含有検体の０．１ｍＬと、Ｇ３の１
個と、ペルオキシダーゼ標識抗Ｔ3モノクローナル抗体
（以下、Ｐ３とする）の０．２μｇを試験管に分注し、
試験管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ3＋Ｇ
３＋Ｐ３複合体を形成した。反応後、試験管中の液をア
スピレーターで除き、複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄
した。
【００３１】第二反応として、試験管中のＦＴ3＋Ｇ３
＋Ｐ３複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ３複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００３２】最後に、各標準ＦＴ3液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ3含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ3測定値とした。
【００３３】比較例５および実施例１６１〜２００ ＦＴ4免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の固相
抗体法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、抗Ｔ4ポ
リクローナル抗体結合ガラスビーズ（以下Ｇ４とする）
１個とを試験管に分注し、試験管中で３７℃，１５分間
免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ４複合体を形成した。反応
後、試験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ4＋Ｇ
４ 複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
抗体法） 第一反応として、(ａ)〜(i5)各々の０．４ｍＬと、標準
ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、抗Ｔ4ポ
リクローナル抗体結合ガラスビーズ（以下Ｇ４とする）
１個とを試験管に分注し、試験管中で３７℃，１５分間
免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ４複合体を形成した。反応
後、試験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ4＋Ｇ
４ 複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００３４】第二反応として、試験管中のＦＴ4＋Ｇ４
複合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ4（以下Ｐ４と
する）を０．５ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i5)各々を０．
４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応さ
せ、ＦＴ4＋Ｇ４＋Ｐ４複合体を形成した。反応後、試
験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ4＋Ｇ４＋Ｐ
４複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
複合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ4（以下Ｐ４と
する）を０．５ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i5)各々を０．
４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応さ
せ、ＦＴ4＋Ｇ４＋Ｐ４複合体を形成した。反応後、試
験管中の液をアスピレーターで除き、ＦＴ4＋Ｇ４＋Ｐ
４複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００３５】第三反応として、試験管中のＦＴ4＋Ｇ４
＋Ｐ４複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ４複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００３６】最後に、各標準ＦＴ4液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
【００３７】比較例６および実施例２０１〜２４０ ＦＴ4免疫学的測定法（モノクローナル抗体使用の固相
抗体法） 第一反応として、（ａ）〜（ｉ５）各々の０．４ｍＬ
と、標準ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、
抗Ｔ4モノクローナル抗体結合ガラスビーズ（以下Ｇ５
とする）１個とを試験管に分注し、試験管中で３７℃，
１５分間免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ５複合体を形成し
た。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除き、Ｆ
Ｔ4＋Ｇ５複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
抗体法） 第一反応として、（ａ）〜（ｉ５）各々の０．４ｍＬ
と、標準ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、
抗Ｔ4モノクローナル抗体結合ガラスビーズ（以下Ｇ５
とする）１個とを試験管に分注し、試験管中で３７℃，
１５分間免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ５複合体を形成し
た。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除き、Ｆ
Ｔ4＋Ｇ５複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００３８】第二反応として、試験管中のＦＴ4＋Ｇ５
複合体１個に、Ｐ４を０．３ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i
5)各々を０．４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分
間免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ５＋Ｐ４複合体を形成し
た。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除き、Ｆ
Ｔ4＋Ｇ５＋Ｐ４複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄し
た。
複合体１個に、Ｐ４を０．３ｍｇ／Ｌ含有する(ａ)〜(i
5)各々を０．４ｍＬ添加し、試験管中で３７℃，１５分
間免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ５＋Ｐ４複合体を形成し
た。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除き、Ｆ
Ｔ4＋Ｇ５＋Ｐ４複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄し
た。
【００３９】第三反応として、試験管中のＦＴ4＋Ｇ５
＋Ｐ４複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ４複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００４０】最後に、各標準ＦＴ4液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
【００４１】比較例７および実施例２４１〜２８０ ＦＴ4免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の固相
抗原法） 第一反応として、（ａ）〜（ｉ５）各々の０．４ｍＬ
と、標準ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、
Ｔ4結合ガラスビーズ（以下、Ｇ６とする）１個と、ペ
ルオキシダーゼ標識抗Ｔ4ポリクローナル抗体（以下、
Ｐ５とする）の０．６μｇを試験管に分注し、試験管中
で３７℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ６＋Ｐ５
複合体を形成した。反応後、試験管中の液をアスピレー
ターで除き、複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
抗原法） 第一反応として、（ａ）〜（ｉ５）各々の０．４ｍＬ
と、標準ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、
Ｔ4結合ガラスビーズ（以下、Ｇ６とする）１個と、ペ
ルオキシダーゼ標識抗Ｔ4ポリクローナル抗体（以下、
Ｐ５とする）の０．６μｇを試験管に分注し、試験管中
で３７℃，１５分間免疫反応させ、ＦＴ4＋Ｇ６＋Ｐ５
複合体を形成した。反応後、試験管中の液をアスピレー
ターで除き、複合体を生食水３ｍＬで３回洗浄した。
【００４２】第二反応として、試験管中のＦＴ4＋Ｇ６
＋Ｐ５複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ５複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００４３】最後に、各標準ＦＴ4液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
【００４４】比較例８および実施例２８１〜３２０ ＦＴ4免疫学的測定法（モノクローナル抗体使用の固相
抗原法） 第一反応として、（ａ）〜（ｉ５）各々の０．４ｍＬ
と、標準ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、
Ｇ６の１個と、ペルオキシダーゼ標識抗Ｔ4モノクロー
ナル抗体（以下、Ｐ６とする）の０．４μｇを試験管に
分注し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｆ
Ｔ4＋Ｇ６＋Ｐ６複合体を形成した。反応後、試験管中
の液をアスピレーターで除き、複合体を生食水３ｍＬで
３回洗浄した。
抗原法） 第一反応として、（ａ）〜（ｉ５）各々の０．４ｍＬ
と、標準ＦＴ4液またはＦＴ4含有検体の０．１ｍＬと、
Ｇ６の１個と、ペルオキシダーゼ標識抗Ｔ4モノクロー
ナル抗体（以下、Ｐ６とする）の０．４μｇを試験管に
分注し、試験管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｆ
Ｔ4＋Ｇ６＋Ｐ６複合体を形成した。反応後、試験管中
の液をアスピレーターで除き、複合体を生食水３ｍＬで
３回洗浄した。
【００４５】第二反応として、試験管中のＦＴ4＋Ｇ６
＋Ｐ６複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
＋Ｐ６複合体１個に、過酸化水素を０．２ｇ／Ｌおよび
オルト−フェニレンジアミン３ｇ／Ｌを含有するクエン
酸−リン酸緩衝液０．４ｍＬを加え３７℃，１５分間発
色反応させ、反応後、１．５規定の硫酸３ｍｌを加えて
酵素反応を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い４９
２ｎｍで測光した。
【００４６】最後に、各標準ＦＴ4液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ＦＴ4含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をＦＴ4測定値とした。
【００４７】比較例１〜８および実施例１〜３２０の評
価 低濃度の遊離ハプテンでも精度良く測定することがで
きる遊離ハプテンの免疫学的測定法であることを確かめ
るため、比較例１〜４および実施例１〜１６０のＦＴ3
免疫学的測定法で、低濃度（２．５ｐｇ／ｍｌ）のＦＴ
3含有検体をそれぞれｎ＝２０で測定し同時再現性［測
定値の標準偏差値／平均値×１００（％）］を求めた。
比較例１および実施例１〜４０のＦＴ3免疫学的測定法
（ポリクローナル抗体使用の固相抗体法）の結果を表１
に示し、比較例２および実施例４１〜８０のＦＴ3免疫
学的測定法（モノクローナル抗体使用の固相抗体法）の
結果を表２に示し、比較例３および実施例８１〜１２０
のＦＴ3免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の固
相抗原法）の結果を表３に示し、比較例４および実施例
１２１〜１６０のＦＴ3免疫学的測定法（モノクローナ
ル抗体使用の固相抗原法）の結果を表４に示す。
価 低濃度の遊離ハプテンでも精度良く測定することがで
きる遊離ハプテンの免疫学的測定法であることを確かめ
るため、比較例１〜４および実施例１〜１６０のＦＴ3
免疫学的測定法で、低濃度（２．５ｐｇ／ｍｌ）のＦＴ
3含有検体をそれぞれｎ＝２０で測定し同時再現性［測
定値の標準偏差値／平均値×１００（％）］を求めた。
比較例１および実施例１〜４０のＦＴ3免疫学的測定法
（ポリクローナル抗体使用の固相抗体法）の結果を表１
に示し、比較例２および実施例４１〜８０のＦＴ3免疫
学的測定法（モノクローナル抗体使用の固相抗体法）の
結果を表２に示し、比較例３および実施例８１〜１２０
のＦＴ3免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の固
相抗原法）の結果を表３に示し、比較例４および実施例
１２１〜１６０のＦＴ3免疫学的測定法（モノクローナ
ル抗体使用の固相抗原法）の結果を表４に示す。
【００４８】
【表１】
【００４９】
【表２】
【００５０】
【表３】
【００５１】
【表４】
【００５２】さらに、比較例５〜８および実施例１６
１〜３２０のＦＴ4免疫学的測定法で、低濃度（１ｎｇ
／ｄｌ）のＦＴ4含有検体をそれぞれｎ＝２０で測定
し、同時再現性［測定値の標準偏差値／平均値×１００
（％）］を求めた。比較例５および実施例１６１〜２０
０のＦＴ4免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の
固相抗体法）の結果を表５に、比較例６および実施例２
０１〜２４０のＦＴ4免疫学的測定法（モノクローナル
抗体使用の固相抗体法）の結果を表６に、比較例７およ
び実施例２４１〜２８０のＦＴ4免疫学的測定法（ポリ
クローナル抗体使用の固相抗原法）の結果を表７に、比
較例８および実施例２８１〜３２０のＦＴ4免疫学的測
定法（モノクローナル抗体使用の固相抗原法）の結果を
表８に示す。
１〜３２０のＦＴ4免疫学的測定法で、低濃度（１ｎｇ
／ｄｌ）のＦＴ4含有検体をそれぞれｎ＝２０で測定
し、同時再現性［測定値の標準偏差値／平均値×１００
（％）］を求めた。比較例５および実施例１６１〜２０
０のＦＴ4免疫学的測定法（ポリクローナル抗体使用の
固相抗体法）の結果を表５に、比較例６および実施例２
０１〜２４０のＦＴ4免疫学的測定法（モノクローナル
抗体使用の固相抗体法）の結果を表６に、比較例７およ
び実施例２４１〜２８０のＦＴ4免疫学的測定法（ポリ
クローナル抗体使用の固相抗原法）の結果を表７に、比
較例８および実施例２８１〜３２０のＦＴ4免疫学的測
定法（モノクローナル抗体使用の固相抗原法）の結果を
表８に示す。
【００５３】
【表５】
【００５４】
【表６】
【００５５】
【表７】
【００５６】
【表８】
【００５７】
【発明の効果】従来は、低濃度の遊離ハプテンを精度良
く測定することができなかったが、本発明によって、低
濃度の遊離ハプテンを極めて精度良く測定することがで
きるようになる。さらに、本発明によって液体中の遊離
ハプテン濃度が正確に得られ、血中の遊離ハプテン濃度
が臨床診断に利用される場合には、従来よりも極めて正
確な診断が可能となり、さらには極めて正確な治療も可
能となる。
く測定することができなかったが、本発明によって、低
濃度の遊離ハプテンを極めて精度良く測定することがで
きるようになる。さらに、本発明によって液体中の遊離
ハプテン濃度が正確に得られ、血中の遊離ハプテン濃度
が臨床診断に利用される場合には、従来よりも極めて正
確な診断が可能となり、さらには極めて正確な治療も可
能となる。
Claims (4)
- 【請求項１】 遊離ハプテンおよび遊離ハプテンに対す
る抗体を免疫反応させる遊離ハプテンの免疫学的測定法
において、免疫反応の際の反応液中に、下記一般式
（１）又は（２）式で示される水溶性ポリオキシアルキ
レンアルコール（Ａ）を含有させることを特徴とする免
疫学的測定法。 Ｒ［Ｏ（ＡＯ）x（ＥＯ）y］Ｈ （１） 但し、 Ｒ ＝Ｈまたは炭素数１〜６のアルキル基 （ＡＯ）x＝炭素数２〜４のアルキレンオキサイド（Ａ
Ｏ）のｘモルにより 形成されるポリ
オキシアルキレン基を示す。 （ＥＯ）y＝エチレンオキサイド（ＥＯ）のｙモルによ
り形成されるポリオ キシエチレン基
を示す。 ｘ ＝０又は１〜２０００ ｙ ＝３０〜５０００ ［ｘ＋ｙは、この化合物の重量平均分子量が１０3〜２
×１０5になる数である。］ Ｒ’〔［Ｏ（ＡＯ）a（ＥＯ）b］Ｈ〕c （２） 但し、 Ｒ’ ＝炭素数２〜６のアルカンポリオール
の水酸基を除いた残基 （ＡＯ）a＝炭素数２〜４のアルキレンオキサイド（Ａ
Ｏ）のａモルにより 形成されるポリ
オキシアルキレン基を示す。 （ＥＯ）b＝エチレンオキサイド（ＥＯ）のｂモルによ
り形成されるポリオ キシエチレン基
を示す。 ａ ＝０又は１〜１０００ ｂ ＝２０〜１５００ ｃ ＝２〜６ ［ａ＋ｂは、この化合物の重量平均分子量が１０3〜１
０5になる数である。］ - 【請求項２】（Ａ）を反応液中に０．０１〜４％含有さ
せる請求項１記載の免疫学的定量法。 - 【請求項３】（Ａ）がポリエチレングリコールである請
求項１または２記載の免疫学的定量法。 - 【請求項４】遊離ハプテンに対する抗体がモノクローナ
ル抗体である請求項１〜３記載の免疫学的測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26647795A JPH0989889A (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 遊離ハプテンの免疫学的測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26647795A JPH0989889A (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 遊離ハプテンの免疫学的測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0989889A true JPH0989889A (ja) | 1997-04-04 |
Family
ID=17431480
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26647795A Pending JPH0989889A (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 遊離ハプテンの免疫学的測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0989889A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2485053A1 (en) | 2011-02-03 | 2012-08-08 | Arkray, Inc. | Liquid reagent of thyroid hormone-immobilized carrier and use thereof |
-
1995
- 1995-09-19 JP JP26647795A patent/JPH0989889A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2485053A1 (en) | 2011-02-03 | 2012-08-08 | Arkray, Inc. | Liquid reagent of thyroid hormone-immobilized carrier and use thereof |
| US9551723B2 (en) | 2011-02-03 | 2017-01-24 | Arkray, Inc. | Liquid reagent of thyroid hormone-immobilized carrier and use thereof |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20031224 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20040218 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20040615 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |