JP3175822B2 - ハプテンの免疫学的測定法 - Google Patents
ハプテンの免疫学的測定法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ハプテンの免疫学
的測定法に関する。さらに詳しくは、検体中のハプテン
の濃度を精度良く測定できるハプテンの免疫学的測定法
に関する。
的測定法に関する。さらに詳しくは、検体中のハプテン
の濃度を精度良く測定できるハプテンの免疫学的測定法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、ハプテンの免疫学的測定法として
は、検体中のハプテンと、ハプテンを認識する抗体との
免疫反応をハプテン乖離剤の存在下で行う方法であっ
て、検体中のハプテンと、ハプテンを認識する抗体の不
溶化抗体と、標識化ハプテンとを同時または逐次に免疫
反応させる方法（一抗体競合法）が知られていた。具体
的には、「ホルモンと臨床，３１巻，ｐ．８９，１９８
３年（文献）」や「医学と薬学，２１巻，２号，ｐ．
３１５，１９８９年（文献）」に記載のハプテンの免
疫学的測定法が挙げられる。
は、検体中のハプテンと、ハプテンを認識する抗体との
免疫反応をハプテン乖離剤の存在下で行う方法であっ
て、検体中のハプテンと、ハプテンを認識する抗体の不
溶化抗体と、標識化ハプテンとを同時または逐次に免疫
反応させる方法（一抗体競合法）が知られていた。具体
的には、「ホルモンと臨床，３１巻，ｐ．８９，１９８
３年（文献）」や「医学と薬学，２１巻，２号，ｐ．
３１５，１９８９年（文献）」に記載のハプテンの免
疫学的測定法が挙げられる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
一抗体競合法による免疫学的測定法では、検体中のハプ
テンが低濃度の場合、ハプテンの濃度を精度良く測定す
ることができなかった。例えば、文献記載のトリヨー
ドサイロニン（以下、Ｔ3とする）の免疫学的測定法に
おいて、測定検体のＴ3濃度が１．１ｎｇ／ｍＬの場合
の同時再現性（ＣＶ）は７％である。又、文献記載の
サイロキシン（以下、Ｔ4とする）の免疫学的測定法に
おいて、測定検体のＴ4濃度が３．１μｇ／ｄｌの場合
の同時再現性（ＣＶ）は７％である。文献、の何れ
の方法も測定精度の面で不十分なハプテンの免疫学的測
定法であった。
一抗体競合法による免疫学的測定法では、検体中のハプ
テンが低濃度の場合、ハプテンの濃度を精度良く測定す
ることができなかった。例えば、文献記載のトリヨー
ドサイロニン（以下、Ｔ3とする）の免疫学的測定法に
おいて、測定検体のＴ3濃度が１．１ｎｇ／ｍＬの場合
の同時再現性（ＣＶ）は７％である。又、文献記載の
サイロキシン（以下、Ｔ4とする）の免疫学的測定法に
おいて、測定検体のＴ4濃度が３．１μｇ／ｄｌの場合
の同時再現性（ＣＶ）は７％である。文献、の何れ
の方法も測定精度の面で不十分なハプテンの免疫学的測
定法であった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題を
解決するため鋭意検討した結果、低濃度のハプテンでも
精度良く測定することができるハプテンの二抗体競合法
による免疫学的測定法を見出し、本発明に到達した。す
なわち本発明は、検体中のハプテンと、ハプテンを認識
する抗体（Ａ）との免疫反応をハプテン乖離剤（Ｂ）の
存在下で行う方法であり、検体中のハプテンと、抗体
（Ａ）と、抗体（Ａ）を認識する不溶化抗体（Ｃ）と、
標識化ハプテン（Ｄ）とを同時または逐次に免疫反応さ
せることを特徴とするハプテンの免疫学的測定法であ
る。
解決するため鋭意検討した結果、低濃度のハプテンでも
精度良く測定することができるハプテンの二抗体競合法
による免疫学的測定法を見出し、本発明に到達した。す
なわち本発明は、検体中のハプテンと、ハプテンを認識
する抗体（Ａ）との免疫反応をハプテン乖離剤（Ｂ）の
存在下で行う方法であり、検体中のハプテンと、抗体
（Ａ）と、抗体（Ａ）を認識する不溶化抗体（Ｃ）と、
標識化ハプテン（Ｄ）とを同時または逐次に免疫反応さ
せることを特徴とするハプテンの免疫学的測定法であ
る。
【０００５】
【発明の実施の形態】従来の一抗体競合法は、免疫反応
の中で最も重要な、検体中のハプテンと、ハプテンを認
識する抗体との反応が、液相−固相のみの反応である。
それに対し、本発明の二抗体競合法は、検体中のハプテ
ンとハプテンを認識する抗体との反応が、液相−液相お
よび液相−固相の反応である。よって、本発明の方法で
は従来の方法と比べ、免疫反応の効率が格段に向上し、
低濃度のハプテンでも精度良く測定することが可能にな
ると推測される。
の中で最も重要な、検体中のハプテンと、ハプテンを認
識する抗体との反応が、液相−固相のみの反応である。
それに対し、本発明の二抗体競合法は、検体中のハプテ
ンとハプテンを認識する抗体との反応が、液相−液相お
よび液相−固相の反応である。よって、本発明の方法で
は従来の方法と比べ、免疫反応の効率が格段に向上し、
低濃度のハプテンでも精度良く測定することが可能にな
ると推測される。
【０００６】本発明の方法では、検体中のハプテンと、
ハプテンを認識する抗体（Ａ）と、不溶化抗体（Ｃ）
と、標識化ハプテン（Ｄ）とを同時または逐次に免疫反
応させるが、好ましくは、検体中のハプテンと、抗体
（Ａ）と、不溶化抗体（Ｃ）とを同時または逐次に免疫
反応させ、次いで、未反応物を除去した後に標識化ハプ
テン（Ｄ）を免疫反応させる（二抗体競合法＆二段階反
応）。
ハプテンを認識する抗体（Ａ）と、不溶化抗体（Ｃ）
と、標識化ハプテン（Ｄ）とを同時または逐次に免疫反
応させるが、好ましくは、検体中のハプテンと、抗体
（Ａ）と、不溶化抗体（Ｃ）とを同時または逐次に免疫
反応させ、次いで、未反応物を除去した後に標識化ハプ
テン（Ｄ）を免疫反応させる（二抗体競合法＆二段階反
応）。
【０００７】本発明の方法において、ハプテンを認識す
る抗体（Ａ）としては、ポリクローナル抗体および／ま
たはモノクローナル抗体が使用できるが、抗体の特異性
の面からモノクローナル抗体が好ましく使用される。
る抗体（Ａ）としては、ポリクローナル抗体および／ま
たはモノクローナル抗体が使用できるが、抗体の特異性
の面からモノクローナル抗体が好ましく使用される。
【０００８】本発明の方法において、抗体（Ａ）を認識
する不溶化抗体（Ｃ）は、抗体（Ａ）を認識する抗体が
不溶性担体に結合し、不溶化されたものである。抗体
（Ａ）を認識する抗体としては、ポリクローナル抗体お
よび／またはモノクローナル抗体が使用できるが、ＨＡ
ＭＡの影響を避けるために、抗体（Ａ）にモノクローナ
ル抗体を使用した場合は、抗体（Ａ）を認識する抗体に
は、ポリクローナル抗体を使用することが好ましい。
尚、ＨＡＭＡとは、ヒト検体中に存在する抗体で、二つ
のモノクローナル抗体を架橋するように結合するので、
免疫学的測定法における干渉物として知られている「例
えば、臨床化学，１８巻，４号，ｐ．２０２，１９８９
年」。
する不溶化抗体（Ｃ）は、抗体（Ａ）を認識する抗体が
不溶性担体に結合し、不溶化されたものである。抗体
（Ａ）を認識する抗体としては、ポリクローナル抗体お
よび／またはモノクローナル抗体が使用できるが、ＨＡ
ＭＡの影響を避けるために、抗体（Ａ）にモノクローナ
ル抗体を使用した場合は、抗体（Ａ）を認識する抗体に
は、ポリクローナル抗体を使用することが好ましい。
尚、ＨＡＭＡとは、ヒト検体中に存在する抗体で、二つ
のモノクローナル抗体を架橋するように結合するので、
免疫学的測定法における干渉物として知られている「例
えば、臨床化学，１８巻，４号，ｐ．２０２，１９８９
年」。
【０００９】抗体（Ａ）を得るために用いる免疫動物
や、抗体（Ａ）を認識する抗体を得るために用いる免疫
動物としては、抗体を産生できる動物であれば特に限定
されない。好ましい動物は、ウサギ、ヤギ、ロバ、ヒツ
ジ、マウス及びモルモットである。
や、抗体（Ａ）を認識する抗体を得るために用いる免疫
動物としては、抗体を産生できる動物であれば特に限定
されない。好ましい動物は、ウサギ、ヤギ、ロバ、ヒツ
ジ、マウス及びモルモットである。
【００１０】本発明の方法において、検体中のハプテン
は、血中に一部は遊離状態で存在し大部分はキャリアー
蛋白に結合した状態で存在する。ハプテンとしては、例
えば、甲状腺ホルモン（ジヨードサイロニン（Ｔ２）、
Ｔ３、Ｔ４、リバースＴ３（ｒＴ３））、ステロイドホ
ルモン（コーチゾール、エストラジオール、テストステ
ロン、アルドステロン、プロゲステロンおよびそれらの
誘導体など）、薬剤（ジゴキシン、ジギトキシン、ジフ
ェニルヒダントイン、テオフィリン、モルフィン、ペニ
シリンなど）が挙げられる。これらのうち、測定対象と
して好ましいものは、甲状腺ホルモンであり、さらに好
ましいものは、Ｔ３、Ｔ４である。また、標識化ハプテ
ン（Ｄ）に用いられるハプテンとしても、検体中のハプ
テンと同様のものが使用でき、好ましいものも同様であ
る。
は、血中に一部は遊離状態で存在し大部分はキャリアー
蛋白に結合した状態で存在する。ハプテンとしては、例
えば、甲状腺ホルモン（ジヨードサイロニン（Ｔ２）、
Ｔ３、Ｔ４、リバースＴ３（ｒＴ３））、ステロイドホ
ルモン（コーチゾール、エストラジオール、テストステ
ロン、アルドステロン、プロゲステロンおよびそれらの
誘導体など）、薬剤（ジゴキシン、ジギトキシン、ジフ
ェニルヒダントイン、テオフィリン、モルフィン、ペニ
シリンなど）が挙げられる。これらのうち、測定対象と
して好ましいものは、甲状腺ホルモンであり、さらに好
ましいものは、Ｔ３、Ｔ４である。また、標識化ハプテ
ン（Ｄ）に用いられるハプテンとしても、検体中のハプ
テンと同様のものが使用でき、好ましいものも同様であ
る。
【００１１】上記血中のキャリアー蛋白は、例えば、Ｔ
ＢＧ、ＴＢＰＡ、アルブミン、性ホルモン結合グロブリ
ン、コーチゾール結合蛋白などである。
ＢＧ、ＴＢＰＡ、アルブミン、性ホルモン結合グロブリ
ン、コーチゾール結合蛋白などである。
【００１２】本発明の方法において、ハプテン乖離剤
（Ｂ）は、ハプテンとキャリアー蛋白の結合を切断する
ものであれば特に限定されない。また、ハプテン乖離剤
（Ｂ）は、単独でも複数の混合でも使用できる。ハプテ
ン乖離剤（Ｂ）として、好ましいものは、分子量５００
以下のものであり、例えば、８−アニリノ−１−ナフタ
レンスルホン酸、サリチル酸、ジフェニルヒダントイ
ン、トルブタミド、フロセミドなどや、それらの塩類で
ある。ハプテン乖離剤（Ｂ）として、さらに好ましいも
のは、８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸、サリ
チル酸、それらの塩類であり、最も好ましいものは、サ
リチル酸、サリチル酸塩である。
（Ｂ）は、ハプテンとキャリアー蛋白の結合を切断する
ものであれば特に限定されない。また、ハプテン乖離剤
（Ｂ）は、単独でも複数の混合でも使用できる。ハプテ
ン乖離剤（Ｂ）として、好ましいものは、分子量５００
以下のものであり、例えば、８−アニリノ−１−ナフタ
レンスルホン酸、サリチル酸、ジフェニルヒダントイ
ン、トルブタミド、フロセミドなどや、それらの塩類で
ある。ハプテン乖離剤（Ｂ）として、さらに好ましいも
のは、８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸、サリ
チル酸、それらの塩類であり、最も好ましいものは、サ
リチル酸、サリチル酸塩である。
【００１３】不溶化抗体（Ｃ）に用いる不溶性担体の材
質としては、ケイ酸質無機担体［ガラス（ポ−ラス、ツ
ヤ消しガラスなど）、シリカゲル、ベンナイトなど］、
磁性体、有機担体（プラスチック、デキストラン、ロ紙
など）などいずれも公知のものが使用される。また、こ
れらの不溶性担体は微粒子にされ懸濁の状態で使用され
る場合もある。
質としては、ケイ酸質無機担体［ガラス（ポ−ラス、ツ
ヤ消しガラスなど）、シリカゲル、ベンナイトなど］、
磁性体、有機担体（プラスチック、デキストラン、ロ紙
など）などいずれも公知のものが使用される。また、こ
れらの不溶性担体は微粒子にされ懸濁の状態で使用され
る場合もある。
【００１４】上記不溶性担体の形状としては、Ｂ／Ｆ分
離が可能である形状であれば特に限定されない。不溶性
担体の好ましい形状は、Ｂ／Ｆ効率が高いことより、球
体（ビーズ、パーティクル）、試験管、チューブ、ウエ
ルであり、さらに好ましくは、Ｂ／Ｆ効率が最も高いこ
とより、ビーズである。
離が可能である形状であれば特に限定されない。不溶性
担体の好ましい形状は、Ｂ／Ｆ効率が高いことより、球
体（ビーズ、パーティクル）、試験管、チューブ、ウエ
ルであり、さらに好ましくは、Ｂ／Ｆ効率が最も高いこ
とより、ビーズである。
【００１５】抗体（Ａ）を認識する抗体を不溶性担体に
結合させ、不溶化抗体（Ｃ）とする方法としては、抗体
をガラスに化学的に結合させる方法（例えば、米国特許
第４２８０９９２号明細書及び同第３６５２７６１号明
細書）や、抗体をプラスチックに物理吸着させる方法
（例えば、イ−・エングバル等；バイオシム・バイオフ
ィズ・アクタ、２５１巻、４２７貢、１９７１年）など
がある。さらに、抗体にビオチンを結合させ担体にはス
トレプトアビジンを結合させることにより、抗体を不溶
化させる方法など、間接的に抗体を不溶化抗体にさせる
方法がある。
結合させ、不溶化抗体（Ｃ）とする方法としては、抗体
をガラスに化学的に結合させる方法（例えば、米国特許
第４２８０９９２号明細書及び同第３６５２７６１号明
細書）や、抗体をプラスチックに物理吸着させる方法
（例えば、イ−・エングバル等；バイオシム・バイオフ
ィズ・アクタ、２５１巻、４２７貢、１９７１年）など
がある。さらに、抗体にビオチンを結合させ担体にはス
トレプトアビジンを結合させることにより、抗体を不溶
化させる方法など、間接的に抗体を不溶化抗体にさせる
方法がある。
【００１６】標識化ハプテン（Ｄ）は、ハプテンを標識
物に結合させたものである。この標識物としては、アイ
ソト−プ［Ｉ１２５など］、酵素［ペルオキシダーゼ、
アルカリフォスファターゼ、βガラクトシダーゼな
ど］、蛍光物質［ユーロピウム誘導体など］、発光物質
［アクリジウム誘導体など］等いずれも公知のものが使
用される。
物に結合させたものである。この標識物としては、アイ
ソト−プ［Ｉ１２５など］、酵素［ペルオキシダーゼ、
アルカリフォスファターゼ、βガラクトシダーゼな
ど］、蛍光物質［ユーロピウム誘導体など］、発光物質
［アクリジウム誘導体など］等いずれも公知のものが使
用される。
【００１７】ハプテンを標識物に結合させ、標識化ハプ
テン（Ｄ）とする方法としては、ハプテンを標識物に結
合させる方法（例えば、生化学実験法１５、東京化学同
人、ｐ．３０８〜３３０、１９９３年）がある。さら
に、ハプテンにストレプトアビジンを結合させ標識物に
ビオチンを結合させることによりハプテンを標識物に結
合させる方法など、間接的にハプテンを標識物に結合さ
せる方法がある。
テン（Ｄ）とする方法としては、ハプテンを標識物に結
合させる方法（例えば、生化学実験法１５、東京化学同
人、ｐ．３０８〜３３０、１９９３年）がある。さら
に、ハプテンにストレプトアビジンを結合させ標識物に
ビオチンを結合させることによりハプテンを標識物に結
合させる方法など、間接的にハプテンを標識物に結合さ
せる方法がある。
【００１８】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。
が、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１９】免疫反応用緩衝液の調製；０．０２Ｍのリ
ン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に、牛血清アルブミンを３ｇ
／Ｌおよび塩化ナトリウムを８．５ｇ／Ｌの濃度になる
ように添加し、免疫反応用緩衝液（ａ）を調製した。緩
衝液（ａ）中に８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン
酸アンモニウムを０．１ｇ／Ｌ含有させたものを
（ｂ）、緩衝液（ａ）中に８−アニリノ−１−ナフタレ
ンスルホン酸アンモニウムを０．２ｇ／Ｌ含有させたも
のを（ｃ）、緩衝液（ａ）中にサリチル酸ナトリウムを
５ｇ／Ｌ含有させたものを（ｄ）、緩衝液（ａ）中にサ
リチル酸ナトリウムを１０ｇ／Ｌ含有させたものを
（ｅ）とした。
ン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に、牛血清アルブミンを３ｇ
／Ｌおよび塩化ナトリウムを８．５ｇ／Ｌの濃度になる
ように添加し、免疫反応用緩衝液（ａ）を調製した。緩
衝液（ａ）中に８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン
酸アンモニウムを０．１ｇ／Ｌ含有させたものを
（ｂ）、緩衝液（ａ）中に８−アニリノ−１−ナフタレ
ンスルホン酸アンモニウムを０．２ｇ／Ｌ含有させたも
のを（ｃ）、緩衝液（ａ）中にサリチル酸ナトリウムを
５ｇ／Ｌ含有させたものを（ｄ）、緩衝液（ａ）中にサ
リチル酸ナトリウムを１０ｇ／Ｌ含有させたものを
（ｅ）とした。
【００２０】比較例１および２ Ｔ3免疫学的測定法（一抗体競合法＆二段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、
（ｂ）または（ｄ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ3液または
同時再現性用検体の０．０２ｍＬと、抗Ｔ3モノクロー
ナル抗体（ヒツジ）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ１
とする）１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫反応
させ、Ｔ3＋Ｇ１複合体を形成させた。反応後、装置専
用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させ、Ｂ／Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、
（ｂ）または（ｄ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ3液または
同時再現性用検体の０．０２ｍＬと、抗Ｔ3モノクロー
ナル抗体（ヒツジ）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ１
とする）１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫反応
させ、Ｔ3＋Ｇ１複合体を形成させた。反応後、装置専
用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させ、Ｂ／Ｆ分離を行った。
【００２１】第二反応として、反応管中のＴ3＋Ｇ１複
合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ3（以下Ｐ１とす
る）を２００μｇ／Ｌ含有する（ａ）を０．３ｍＬ分注
させ、反応管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ3
＋Ｇ１＋Ｐ１複合体を形成させた。反応後、装置専用の
Ｂ／Ｆ分離液にて洗浄させ、Ｂ／Ｆ分離を行った。
合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ3（以下Ｐ１とす
る）を２００μｇ／Ｌ含有する（ａ）を０．３ｍＬ分注
させ、反応管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ3
＋Ｇ１＋Ｐ１複合体を形成させた。反応後、装置専用の
Ｂ／Ｆ分離液にて洗浄させ、Ｂ／Ｆ分離を行った。
【００２２】第三反応として、反応管中のＴ3＋Ｇ１＋
Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００２３】最後に、各標準Ｔ3液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００２４】実施例１および２ Ｔ3免疫学的測定法（二抗体競合法＆二段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、抗
Ｔ3モノクローナル抗体（ヒツジ）（以下Ｍ１とする）
を２０μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｂ）または
（ｄ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ3液または同時再現性用
検体の０．０２ｍＬと、抗ヒツジＩｇポリクローナル抗
体（ウサギ）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ２とす
る）１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫反応さ
せ、Ｔ3＋Ｍ１＋Ｇ２複合体を形成させた。反応後、装
置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行っ
た。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、抗
Ｔ3モノクローナル抗体（ヒツジ）（以下Ｍ１とする）
を２０μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｂ）または
（ｄ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ3液または同時再現性用
検体の０．０２ｍＬと、抗ヒツジＩｇポリクローナル抗
体（ウサギ）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ２とす
る）１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫反応さ
せ、Ｔ3＋Ｍ１＋Ｇ２複合体を形成させた。反応後、装
置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行っ
た。
【００２５】第二反応として、反応管中のＴ3＋Ｍ１＋
Ｇ２複合体１個に、Ｐ１を４００μｇ／Ｌ含有する
（ａ）を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５
分間免疫反応させ、Ｔ3＋Ｍ１＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を形
成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄さ
せＢ／Ｆ分離を行った。
Ｇ２複合体１個に、Ｐ１を４００μｇ／Ｌ含有する
（ａ）を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５
分間免疫反応させ、Ｔ3＋Ｍ１＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を形
成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄さ
せＢ／Ｆ分離を行った。
【００２６】第三反応として、反応管中のＴ3＋Ｍ１＋
Ｇ２＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｇ２＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００２７】最後に、各標準Ｔ3液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００２８】比較例３および４ Ｔ3免疫学的測定法（一抗体競合法、一段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
１を２００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｂ）ま
たは（ｄ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ3液または同時再現
性用検体の０．０２ｍＬと、Ｇ１の１個とを反応管中で
３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ3＋Ｇ１＋Ｐ１複合
体を形成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて
洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
１を２００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｂ）ま
たは（ｄ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ3液または同時再現
性用検体の０．０２ｍＬと、Ｇ１の１個とを反応管中で
３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ3＋Ｇ１＋Ｐ１複合
体を形成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて
洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
【００２９】第二反応として、反応管中のＴ3＋Ｇ１＋
Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００３０】最後に、各標準Ｔ3液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００３１】実施例３および４ Ｔ3免疫学的測定法（二抗体競合法、一段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
１を５００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｂ）ま
たは（ｄ）の０．１５ｍＬと、Ｍ１を４０μｇ／Ｌの濃
度でそれぞれ含有する（ｂ）または（ｄ）の０．１５ｍ
Ｌと、標準Ｔ3液または同時再現性用検体の０．０２ｍ
Ｌと、Ｇ２の１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫
反応させ、Ｔ3＋Ｍ１＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を形成させ
た。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／
Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
１を５００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｂ）ま
たは（ｄ）の０．１５ｍＬと、Ｍ１を４０μｇ／Ｌの濃
度でそれぞれ含有する（ｂ）または（ｄ）の０．１５ｍ
Ｌと、標準Ｔ3液または同時再現性用検体の０．０２ｍ
Ｌと、Ｇ２の１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫
反応させ、Ｔ3＋Ｍ１＋Ｇ２＋Ｐ１複合体を形成させ
た。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／
Ｆ分離を行った。
【００３２】第二反応として、反応管中のＴ3＋Ｍ１＋
Ｇ２＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｇ２＋Ｐ１複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００３３】最後に、各標準Ｔ3液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００３４】比較例５および６ Ｔ4免疫学的測定法（一抗体競合法、二段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、
（ｃ）または（ｅ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ4液または
同時再現性用検体の０．０２ｍＬと、抗Ｔ4モノクロー
ナル抗体（マウス）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ３
とする）１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫反応
させ、Ｔ4＋Ｇ３複合体を形成させた。反応後、装置専
用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、
（ｃ）または（ｅ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ4液または
同時再現性用検体の０．０２ｍＬと、抗Ｔ4モノクロー
ナル抗体（マウス）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ３
とする）１個とを反応管中で３７℃，１５分間免疫反応
させ、Ｔ4＋Ｇ３複合体を形成させた。反応後、装置専
用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
【００３５】第二反応として、反応管中のＴ4＋Ｇ３複
合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ4（以下Ｐ２とす
る）を３００μｇ／Ｌ含有する（ａ）を０．３ｍＬ分注
させ、反応管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ4
＋Ｇ３＋Ｐ２複合体を形成させた。反応後、装置専用の
Ｂ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
合体１個に、ペルオキシダーゼ標識Ｔ4（以下Ｐ２とす
る）を３００μｇ／Ｌ含有する（ａ）を０．３ｍＬ分注
させ、反応管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ4
＋Ｇ３＋Ｐ２複合体を形成させた。反応後、装置専用の
Ｂ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
【００３６】第三反応として、反応管中のＴ4＋Ｇ３＋
Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００３７】最後に、各標準Ｔ4液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００３８】実施例５および６ Ｔ4免疫学的測定法（二抗体競合法、二段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、抗
Ｔ4モノクローナル抗体（以下Ｍ２とする）を３００μ
ｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｃ）または（ｅ）の
０．３ｍＬと、標準Ｔ4液または同時再現性用検体の
０．０２ｍＬと、抗マウスＩｇポリクローナル抗体（ヤ
ギ）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ４とする）１個と
を反応管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ4＋Ｍ
２＋Ｇ４複合体を形成させた。反応後、装置専用のＢ／
Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、抗
Ｔ4モノクローナル抗体（以下Ｍ２とする）を３００μ
ｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｃ）または（ｅ）の
０．３ｍＬと、標準Ｔ4液または同時再現性用検体の
０．０２ｍＬと、抗マウスＩｇポリクローナル抗体（ヤ
ギ）結合ポリスチレンビーズ（以下Ｇ４とする）１個と
を反応管中で３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ4＋Ｍ
２＋Ｇ４複合体を形成させた。反応後、装置専用のＢ／
Ｆ分離液にて洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
【００３９】第二反応として、反応管中のＴ4＋Ｍ２＋
Ｇ４複合体１個に、Ｐ２を６００μｇ／Ｌ含有する
（ａ）を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５
分間免疫反応させ、Ｔ4＋Ｍ２＋Ｇ４＋Ｐ２複合体を形
成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄さ
せＢ／Ｆ分離を行った。
Ｇ４複合体１個に、Ｐ２を６００μｇ／Ｌ含有する
（ａ）を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５
分間免疫反応させ、Ｔ4＋Ｍ２＋Ｇ４＋Ｐ２複合体を形
成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄さ
せＢ／Ｆ分離を行った。
【００４０】第三反応として、反応管中のＴ4＋Ｍ２＋
Ｇ４＋Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｇ４＋Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００４１】最後に、各標準Ｔ4液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００４２】比較例７および８ Ｔ4免疫学的測定法（一抗体競合法、一段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
２を３００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｃ）ま
たは（ｅ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ4液または同時再現
性用検体の０．０２ｍＬと、Ｇ３の１個とを反応管中で
３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ4＋Ｇ３＋Ｐ２複合
体を形成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて
洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
２を３００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｃ）ま
たは（ｅ）の０．３ｍＬと、標準Ｔ4液または同時再現
性用検体の０．０２ｍＬと、Ｇ３の１個とを反応管中で
３７℃，１５分間免疫反応させ、Ｔ4＋Ｇ３＋Ｐ２複合
体を形成させた。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて
洗浄させＢ／Ｆ分離を行った。
【００４３】第二反応として、反応管中のＴ4＋Ｇ３＋
Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌおよびテ
トラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する酢酸緩
衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，１５．
５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イオン水
を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００４４】最後に、各標準Ｔ4液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００４５】実施例７および８ Ｔ4免疫学的測定法（二抗体競合法、一段階反応） 全自動酵素免疫分析装置ＯＬＹＤＡＳ−１２０（オリン
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
２を８００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｃ）ま
たは（ｅ）の０．１５ｍＬと、Ｍ２を６００μｇ／Ｌの
濃度でそれぞれ含有する（ｃ）または（ｅ）の０．１５
ｍＬと、標準Ｔ4液または同時再現性用検体の０．０２
ｍＬと、Ｇ４の１個とを反応管中で３７℃，１５分間免
疫反応させ、Ｔ4＋Ｍ２＋Ｇ４＋Ｐ２複合体を形成させ
た。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／
Ｆ分離を行った。
パス光学工業株式会社製）を用い、第一反応として、Ｐ
２を８００μｇ／Ｌの濃度でそれぞれ含有する（ｃ）ま
たは（ｅ）の０．１５ｍＬと、Ｍ２を６００μｇ／Ｌの
濃度でそれぞれ含有する（ｃ）または（ｅ）の０．１５
ｍＬと、標準Ｔ4液または同時再現性用検体の０．０２
ｍＬと、Ｇ４の１個とを反応管中で３７℃，１５分間免
疫反応させ、Ｔ4＋Ｍ２＋Ｇ４＋Ｐ２複合体を形成させ
た。反応後、装置専用のＢ／Ｆ分離液にて洗浄させＢ／
Ｆ分離を行った。
【００４６】第二反応として、反応管中のＴ4＋Ｍ２＋
Ｇ４＋Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
Ｇ４＋Ｐ２複合体１個に、過酸化水素を０．１ｇ／Ｌお
よびテトラメチルベンジジンを０．１７ｇ／Ｌ含有する
酢酸緩衝液を０．３ｍＬ分注させ、反応管中で３７℃，
１５．５分間発色反応させ、反応後、０．７ｍＬの脱イ
オン水を混合させ、３８０ｎｍで測光させた。
【００４７】最後に、各標準Ｔ4液の濃度値と測光値を
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
２次式の逆数（１／（Ａｘ2＋Ｂｘ＋Ｃ））で自動回帰
させ、その検量線から、同時再現性用検体の測光値に対
する濃度値を算出させた。
【００４８】比較例１〜４および実施例１〜４のＴ3
免疫学的測定法の同時再現性：低濃度のハプテンでも精
度良く測定することができるハプテンの免疫学的測定法
であることを確かめるため、比較例１〜４および実施例
１〜４のＴ3免疫学的測定法で、低濃度（１ｎｇ／ｍ
Ｌ）および高濃度（４ｎｇ／ｍＬ）の同時再現性用検体
をそれぞれｎ＝４０で測定し、同時再現性［測定値の標
準偏差値／平均値×１００（％）］を求めた。１ｎｇ／
ｍＬの検体の同時再現性の結果を表１に示し、４ｎｇ／
ｍＬの検体の同時再現性の結果を表２に示す。
免疫学的測定法の同時再現性：低濃度のハプテンでも精
度良く測定することができるハプテンの免疫学的測定法
であることを確かめるため、比較例１〜４および実施例
１〜４のＴ3免疫学的測定法で、低濃度（１ｎｇ／ｍ
Ｌ）および高濃度（４ｎｇ／ｍＬ）の同時再現性用検体
をそれぞれｎ＝４０で測定し、同時再現性［測定値の標
準偏差値／平均値×１００（％）］を求めた。１ｎｇ／
ｍＬの検体の同時再現性の結果を表１に示し、４ｎｇ／
ｍＬの検体の同時再現性の結果を表２に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】
【表２】
【００５１】比較例５〜８および実施例５〜８のＴ4
免疫学的測定法の同時再現性：さらに、比較例５〜８お
よび実施例５〜８のＴ4免疫学的測定法で、低濃度（３
μｇ／ｄＬ）および高濃度（１２μｇ／ｄＬ）の同時再
現性用検体をそれぞれｎ＝４０で測定し同時再現性［測
定値の標準偏差値／平均値×１００（％）］を求めた。
３μｇ／ｄＬの検体の同時再現性の結果を表３に示し、
１２μｇ／ｄＬの検体の同時再現性の結果を表４に示
す。
免疫学的測定法の同時再現性：さらに、比較例５〜８お
よび実施例５〜８のＴ4免疫学的測定法で、低濃度（３
μｇ／ｄＬ）および高濃度（１２μｇ／ｄＬ）の同時再
現性用検体をそれぞれｎ＝４０で測定し同時再現性［測
定値の標準偏差値／平均値×１００（％）］を求めた。
３μｇ／ｄＬの検体の同時再現性の結果を表３に示し、
１２μｇ／ｄＬの検体の同時再現性の結果を表４に示
す。
【００５２】
【表３】
【００５３】
【表４】
【００５４】
【発明の効果】従来は、低濃度のハプテンを精度良く測
定することができなかったが、本発明によって、低濃度
のハプテンおよび高濃度のハプテンが極めて精度良く測
定することができるようになる。さらに、本発明によっ
て液体中のハプテン濃度が正確に得られ、血中のハプテ
ン濃度が臨床診断に利用される場合には、従来よりも極
めて正確な診断が可能となり、さらには極めて正確な治
療も可能となる。
定することができなかったが、本発明によって、低濃度
のハプテンおよび高濃度のハプテンが極めて精度良く測
定することができるようになる。さらに、本発明によっ
て液体中のハプテン濃度が正確に得られ、血中のハプテ
ン濃度が臨床診断に利用される場合には、従来よりも極
めて正確な診断が可能となり、さらには極めて正確な治
療も可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平２−302667（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−272156（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−145459（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−177264（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−10590（ＪＰ，Ａ) 特開 昭53−3516（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−38654（ＪＰ，Ａ)
Claims (4)
- 【請求項１】検体中のハプテンと、ハプテンを認識する
抗体（Ａ）との免疫反応をハプテン乖離剤（Ｂ）の存在
下で行う方法であり、検体中のハプテンと、抗体（Ａ）
と、抗体（Ａ）を認識する不溶化抗体（Ｃ）と、標識化
ハプテン（Ｄ）とを同時または逐次に免疫反応させるこ
とを特徴とするハプテンの免疫学的測定法。 - 【請求項２】ハプテン乖離剤（Ｂ）が、８−アニリノ−
１−ナフタレンスルホン酸、サリチル酸またはこれらの
塩類である請求項１記載の免疫学的測定法。 - 【請求項３】検体中のハプテンと、抗体（Ａ）と、不溶
化抗体（Ｃ）とを同時または逐次に免疫反応させ、次い
で、未反応物を除去した後に標識化ハプテン（Ｄ）を免
疫反応させる請求項１または２記載の免疫学的測定法。 - 【請求項４】抗体（Ａ）がモノクローナル抗体であり、
不溶化抗体（Ｃ）がポリクローナル抗体である請求項１
〜３の何れか記載の免疫学的測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07129198A JP3175822B2 (ja) | 1998-03-04 | 1998-03-04 | ハプテンの免疫学的測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07129198A JP3175822B2 (ja) | 1998-03-04 | 1998-03-04 | ハプテンの免疫学的測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11248702A JPH11248702A (ja) | 1999-09-17 |
| JP3175822B2 true JP3175822B2 (ja) | 2001-06-11 |
Family
ID=13456450
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07129198A Expired - Fee Related JP3175822B2 (ja) | 1998-03-04 | 1998-03-04 | ハプテンの免疫学的測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3175822B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5163883B2 (ja) * | 2008-05-30 | 2013-03-13 | 東ソー株式会社 | Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原又はそれに対する抗体の測定方法 |
| EP3425394B1 (en) | 2016-02-29 | 2019-11-27 | FUJIFILM Corporation | Kit for quantitatively determining bile acid in biological sample and method for quantitatively determining bile acid in biological sample |
-
1998
- 1998-03-04 JP JP07129198A patent/JP3175822B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|
| JPH11248702A (ja) | 1999-09-17 |
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