JPH0616044B2 - 免疫学的ラテツクス凝集法 - Google Patents
免疫学的ラテツクス凝集法Info
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- JPH0616044B2 JPH0616044B2 JP58028645A JP2864583A JPH0616044B2 JP H0616044 B2 JPH0616044 B2 JP H0616044B2 JP 58028645 A JP58028645 A JP 58028645A JP 2864583 A JP2864583 A JP 2864583A JP H0616044 B2 JPH0616044 B2 JP H0616044B2
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- Japan
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- gamma globulin
- serum
- latex
- antibody
- partner
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
Description
【発明の詳細な説明】 本発明はその抗原に対して特異的な抗体を何ら含有しな
いガンマグロブリンの存在下に抗原−抗体反応のパート
ナーを検出または測定するためのラテツクス凝集法に関
する。
いガンマグロブリンの存在下に抗原−抗体反応のパート
ナーを検出または測定するためのラテツクス凝集法に関
する。
周知のように特異的な抗体は相当する抗原またはハプテ
ンと結合する。この反応は多くの免疫検定法に利用され
る。ヒトの血清は所定の抗原の存在について相当する抗
体を使用して例えば競争的結合反応によるかまたはラテ
ツクス凝集反応により検査しうる。これら方法および類
似方法は専門家にはよく知られている。
ンと結合する。この反応は多くの免疫検定法に利用され
る。ヒトの血清は所定の抗原の存在について相当する抗
体を使用して例えば競争的結合反応によるかまたはラテ
ツクス凝集反応により検査しうる。これら方法および類
似方法は専門家にはよく知られている。
かかる方法において出現しうる困難さは、検査すべき血
清中に存在する他の構成要素が妨害しうることである。
特にヒトの血清は蛋白質Clq（補体成分）およびリウマ
チ因子（RF）を含有する。この両物質は同様に抗体に結
合する。その他にヒト血清中のリウマチ因子およびClq
の量は非常に広範囲に変動しうるので、それゆえ血清を
予めClqの不活性化または内因性リウマチ因子の除去の
ための処理にかけることが通常必要である。さもなけれ
ば結果および特に定量的測定がかなりの誤差を示しう
る。
清中に存在する他の構成要素が妨害しうることである。
特にヒトの血清は蛋白質Clq（補体成分）およびリウマ
チ因子（RF）を含有する。この両物質は同様に抗体に結
合する。その他にヒト血清中のリウマチ因子およびClq
の量は非常に広範囲に変動しうるので、それゆえ血清を
予めClqの不活性化または内因性リウマチ因子の除去の
ための処理にかけることが通常必要である。さもなけれ
ば結果および特に定量的測定がかなりの誤差を示しう
る。
ラテツクス凝集法を用いる抗原または抗体の検出は、そ
の実施が簡単でそして試験結果が短時間で得られるとい
う利点を有する。
の実施が簡単でそして試験結果が短時間で得られるとい
う利点を有する。
今や驚くべきことに、ラテツクス粒子の非特異的凝集に
より惹起される前記した難点が、ラテツクス凝集反応を
測定すべき抗原と反応しないガンマグロブリンまたはガ
ンマグロブリンフラクシヨンの存在下に実施することに
より阻止されうることが見出された。
より惹起される前記した難点が、ラテツクス凝集反応を
測定すべき抗原と反応しないガンマグロブリンまたはガ
ンマグロブリンフラクシヨンの存在下に実施することに
より阻止されうることが見出された。
従つて本発明は免疫学的反応のパートナーを負荷された
ラテツクス粒子をその抗原パートナーに特異的な抗体を
何ら含有しないがガンマグロブリンの存在下に相当する
パートナーの溶液と一緒にすることを特徴とするラテツ
クス凝集法に関する。非特異的な凝集を阻止するための
かかるガンマグロブリンとしては動物性ガンマグロブリ
ンまたは熱集合したヒトのガンマグロブリンが適当であ
る。ガンマグロブリンフラクシヨンは既知方法、例えば
硫酸アンモニウム沈殿またはイオン交換体クロマトグラ
フイーにより取得される。
ラテツクス粒子をその抗原パートナーに特異的な抗体を
何ら含有しないがガンマグロブリンの存在下に相当する
パートナーの溶液と一緒にすることを特徴とするラテツ
クス凝集法に関する。非特異的な凝集を阻止するための
かかるガンマグロブリンとしては動物性ガンマグロブリ
ンまたは熱集合したヒトのガンマグロブリンが適当であ
る。ガンマグロブリンフラクシヨンは既知方法、例えば
硫酸アンモニウム沈殿またはイオン交換体クロマトグラ
フイーにより取得される。
本発明の方法は、哺乳動物特ににヒトの血液（血清また
は血漿）中に含有される免疫学的に活性な物質を検出す
るためのすべての反応に使用できる。かかる免疫学的に
活性な物質の例は血清蛋白質である。
は血漿）中に含有される免疫学的に活性な物質を検出す
るためのすべての反応に使用できる。かかる免疫学的に
活性な物質の例は血清蛋白質である。
免疫学的に活性な物質を負荷される（感作される）ラテ
ツクス粒子としてはラテツクス凝集試験に適するすべて
のラテツクスがあげられる。例をあげればスチレンのホ
モポリマーおよびコポリマーである。粒子寸法0.05〜0.
6μｍを有するラテツクスが好ましい。
ツクス粒子としてはラテツクス凝集試験に適するすべて
のラテツクスがあげられる。例をあげればスチレンのホ
モポリマーおよびコポリマーである。粒子寸法0.05〜0.
6μｍを有するラテツクスが好ましい。
前記したラテツクス粒子を抗原または抗体で感作させる
ことは既知方法により実施されうる。好ましくはラテツ
クスを血清蛋白質に対する抗体例えばミオグロビン、β
−２−ミクログロブリンまたは免疫グロブリンＥ、ヒト
のホルモン例えばヒトの絨毛性腺刺激ホルモン、酵素例
えば膵臓リパーゼまたは動物性ホルモン例えば妊娠した
雌馬の血清ゴナドトロピンで負荷する。これは以下のよ
うにして感作されうる。抗血清からガンマグロブリンを
常法、例えば硫酸アンモニウムで沈殿させ、ガンマグロ
ブリンフラクシヨンを透析しそして30〜50ｇ／に濃縮
する。純粋な抗体溶液も免疫吸着的に得られそして２〜
10ｇ／まで濃縮されうる。約100ｇ／の濃縮を有す
るラテツクス粒子の懸濁液にこの抗体溶液を加えそして
20〜60℃で0.5〜５時間培養する。ラテツクス粒子に結
合しなかつた抗体部分は遠心分離しそして固体物を再懸
濁させることにより除去しうる。使用するには、場合に
より蛋白質、例えば牛またはヒトアルブミンが添加され
うる緩衝溶液、好ましくはpH〜8.5のグリシン−NaCl緩
衝液中に試薬を再懸濁させうる。使用しうる抗血清は動
物特に家兎、羊、ヤギを試験で測定する予定の蛋白質を
含有すべきでないヒトまたは動物起原の蛋白質で免疫賦
与することにより調製される。
ことは既知方法により実施されうる。好ましくはラテツ
クスを血清蛋白質に対する抗体例えばミオグロビン、β
−２−ミクログロブリンまたは免疫グロブリンＥ、ヒト
のホルモン例えばヒトの絨毛性腺刺激ホルモン、酵素例
えば膵臓リパーゼまたは動物性ホルモン例えば妊娠した
雌馬の血清ゴナドトロピンで負荷する。これは以下のよ
うにして感作されうる。抗血清からガンマグロブリンを
常法、例えば硫酸アンモニウムで沈殿させ、ガンマグロ
ブリンフラクシヨンを透析しそして30〜50ｇ／に濃縮
する。純粋な抗体溶液も免疫吸着的に得られそして２〜
10ｇ／まで濃縮されうる。約100ｇ／の濃縮を有す
るラテツクス粒子の懸濁液にこの抗体溶液を加えそして
20〜60℃で0.5〜５時間培養する。ラテツクス粒子に結
合しなかつた抗体部分は遠心分離しそして固体物を再懸
濁させることにより除去しうる。使用するには、場合に
より蛋白質、例えば牛またはヒトアルブミンが添加され
うる緩衝溶液、好ましくはpH〜8.5のグリシン−NaCl緩
衝液中に試薬を再懸濁させうる。使用しうる抗血清は動
物特に家兎、羊、ヤギを試験で測定する予定の蛋白質を
含有すべきでないヒトまたは動物起原の蛋白質で免疫賦
与することにより調製される。
例をあげれば、家兎の抗ヒトIgG血清、家兎の抗ヒトIgM
血清、家兎の抗羊赤血球血清、羊の抗ヒトIgG血清、羊
の抗家兎γ−グロブリン血清である。特に適当なのは家
兎の抗羊赤血球血清である。免疫賦与は既知方法により
実施された。免疫賦与量および時間はその蛋白質の免疫
原性および分子量から出てくる。
血清、家兎の抗羊赤血球血清、羊の抗ヒトIgG血清、羊
の抗家兎γ−グロブリン血清である。特に適当なのは家
兎の抗羊赤血球血清である。免疫賦与は既知方法により
実施された。免疫賦与量および時間はその蛋白質の免疫
原性および分子量から出てくる。
ガンマグロブリン溶液は、抗原または抗体が測定または
検出されるべき溶液中に好ましくは１：0.1〜２(v:v)の
比率で添加される。以下の例により本発明を説明する。
検出されるべき溶液中に好ましくは１：0.1〜２(v:v)の
比率で添加される。以下の例により本発明を説明する。
例 １ 特異的な抗体として家兎のヒト−ミオグロビンに対する
免疫吸着的に取得された抗体をラテツクス粒子に結合含
有するラテツクス試薬を本発明による以下の試験に用い
た。試薬の感度は標準物を用いて約８０ng／mlに調整さ
れそしてこの試験は以下のように実施された。
免疫吸着的に取得された抗体をラテツクス粒子に結合含
有するラテツクス試薬を本発明による以下の試験に用い
た。試薬の感度は標準物を用いて約８０ng／mlに調整さ
れそしてこの試験は以下のように実施された。
希釈された検査すべきヒト血清１滴（50μ）を試験用
プレート上の場所に置き、ヒト−ミオグロビンに対する
抗体を何ら含有しないガンマグロブリン溶液、すなわち
家兎の抗羊赤血球血清５μを加えそしてラテツクス−
ミオグロビン試薬１滴（25μ）を加えた。撹拌棒を用
いて充分に混合した後試薬用プレートを回転して動かし
そして３分後に凝集について検査した。陰性結果が出た
場合は試験用プレートをもう１回回転して動かしそして
２分以内に新たに凝集について検査した。
プレート上の場所に置き、ヒト−ミオグロビンに対する
抗体を何ら含有しないガンマグロブリン溶液、すなわち
家兎の抗羊赤血球血清５μを加えそしてラテツクス−
ミオグロビン試薬１滴（25μ）を加えた。撹拌棒を用
いて充分に混合した後試薬用プレートを回転して動かし
そして３分後に凝集について検査した。陰性結果が出た
場合は試験用プレートをもう１回回転して動かしそして
２分以内に新たに凝集について検査した。
以下の表は血清中のミオグロビン測定における本方法の
信頼性について具体的に示している。
信頼性について具体的に示している。
この表に示されるように、リウマチ因子はミオグロビン
−ラテツクス試験において誤れる陽性結果を生じうる。
血清No.５、６および７は、臨床的に前記した値である
約８０ng／ml以下である40、20および１０ng／mlのミオ
グロビンを有するから、標準試験としてのミオグロビン
RIA（放射線免疫検定）で陰性であるにもかかわらず従
来技術によるラテツクス試験で陽性を示した（第４
欄）。これに反し本発明による試験（最右欄）は放射線
免疫試験との望ましい一致を生じた。
−ラテツクス試験において誤れる陽性結果を生じうる。
血清No.５、６および７は、臨床的に前記した値である
約８０ng／ml以下である40、20および１０ng／mlのミオ
グロビンを有するから、標準試験としてのミオグロビン
RIA（放射線免疫検定）で陰性であるにもかかわらず従
来技術によるラテツクス試験で陽性を示した（第４
欄）。これに反し本発明による試験（最右欄）は放射線
免疫試験との望ましい一致を生じた。
何ら妨害成分（リウマチ因子）を含有しない血清No.１
〜４においては２種のラテツクス試験において同じでそ
してRIAと一致する結果が得られる。
〜４においては２種のラテツクス試験において同じでそ
してRIAと一致する結果が得られる。
例 ２ 特異的な抗体として家兎のPMSGに対する抗体をラテツク
ス粒子に結合されて含有する従来技術により調製された
ラテツクス試薬を本発明により下記の試験に用いた。試
薬の感度は標準物を用いて約２国際単位(IU)／mlに調整
しそしてこの試験を以下のようにして実施した。
ス粒子に結合されて含有する従来技術により調製された
ラテツクス試薬を本発明により下記の試験に用いた。試
薬の感度は標準物を用いて約２国際単位(IU)／mlに調整
しそしてこの試験を以下のようにして実施した。
希釈された検査すべき雌馬の血清１滴（50μ）を試験
用プレート上の場所に置き、ガンマグロブリン溶液（家
兎の抗羊赤血球血清）２５μを加えそしてラテツクス
−妊娠雌馬血清ゴナドトロピン試薬１滴（２５μ）を
添加した。撹拌棒を用いて充分に混合した後試験プレー
トを回転させて動かしてそして１分後に凝集について検
査した。陰性結果が出た場合は試験プレートをもう一回
転させて動かしそして２分以内に新たに凝集について検
査した。
用プレート上の場所に置き、ガンマグロブリン溶液（家
兎の抗羊赤血球血清）２５μを加えそしてラテツクス
−妊娠雌馬血清ゴナドトロピン試薬１滴（２５μ）を
添加した。撹拌棒を用いて充分に混合した後試験プレー
トを回転させて動かしてそして１分後に凝集について検
査した。陰性結果が出た場合は試験プレートをもう一回
転させて動かしそして２分以内に新たに凝集について検
査した。
以下の表は雌馬の妊娠試験についての比較結果を示す。
血清のうち２件は直腸検査でその雌馬が妊娠していない
ことが示されるにもかかわらず従来技術によるラテツク
ス試験で陽性に反応した（血清No.２および３）。これ
に反して本発明による試験の結果はすべての場合におい
て直腸検査の結果と一致した。
ことが示されるにもかかわらず従来技術によるラテツク
ス試験で陽性に反応した（血清No.２および３）。これ
に反して本発明による試験の結果はすべての場合におい
て直腸検査の結果と一致した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭55−12419（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−31648（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−9723（ＪＰ，Ａ) 特公 昭49−46048（ＪＰ，Ｂ１)
Claims (4)
- 【請求項１】相当するパートナーを用いる免疫学的反応
のパートナーを検出または測定するためのラテツクス凝
集法において、その検出または測定を、測定する予定の
蛋白質を含有しないヒトまたは動物起原の蛋白質で免疫
賦与された動物から得られる、抗原パートナーに対して
特異的な抗体を何ら含有しないガンマグロブリンの存在
下に行なうことを特徴とする方法。 - 【請求項２】ガンマグロブリンが動物性ガンマグロブリ
ンフラクシヨンの水溶液であることを特徴とする前記特
許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】ガンマグロブリンが哺乳類の抗羊赤血球血
清であることを特徴とする前記特許請求の範囲第１項記
載の方法。 - 【請求項４】ガンマグロブリンが家兎の抗羊赤血球血清
であることを特徴とする前記特許請求の範囲第１項記載
の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3206729.1 | 1982-02-25 | ||
| DE32067291 | 1982-02-25 | ||
| DE19823206729 DE3206729A1 (de) | 1982-02-25 | 1982-02-25 | Immunologisches agglutinationsverfahren |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58165055A JPS58165055A (ja) | 1983-09-30 |
| JPH0616044B2 true JPH0616044B2 (ja) | 1994-03-02 |
Family
ID=6156640
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58028645A Expired - Lifetime JPH0616044B2 (ja) | 1982-02-25 | 1983-02-24 | 免疫学的ラテツクス凝集法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4569919A (ja) |
| EP (1) | EP0087728B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0616044B2 (ja) |
| AT (1) | ATE16219T1 (ja) |
| AU (1) | AU566742B2 (ja) |
| CA (1) | CA1199270A (ja) |
| DE (2) | DE3206729A1 (ja) |
| ES (1) | ES520012A0 (ja) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59183369A (ja) * | 1983-04-01 | 1984-10-18 | Kazue Ueno | ラテツクス試薬 |
| JPS60256057A (ja) * | 1984-06-01 | 1985-12-17 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定法 |
| FR2577048B1 (fr) * | 1985-02-05 | 1988-05-06 | Pasteur Institut | Reactif pour le dosage par hemagglutination des anticorps contre les toxines bacteriennes, procede de preparation et son application |
| DE3687751T2 (de) * | 1985-09-19 | 1993-05-27 | Toray Industries | Kolonne zum entfernen von beta-2-mikroglobulin. |
| SE454465B (sv) * | 1986-04-15 | 1988-05-02 | Biopool Ab | Non kompetitiv fast-fas immunanalys med kompensation for ospecifik adsorption |
| US4921787A (en) * | 1987-05-01 | 1990-05-01 | Cambridge Bioscience Corporation | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus by agglutination of antigen coated latex |
| DE3715333A1 (de) * | 1987-05-08 | 1988-11-24 | Behringwerke Ag | Verfahren zur quantitativen bestimmung von serumproteinen in koerperfluessigkeiten und mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| DE3717401A1 (de) * | 1987-05-23 | 1988-12-08 | Behringwerke Ag | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aus einer der immunglobulin-klassen a, m, d oder e und dazu geeignetes mittel |
| US5177023A (en) * | 1987-08-03 | 1993-01-05 | Eastman Kodak Company | Water-insoluble reagent elements containing same and methods of use |
| US4914040A (en) * | 1988-03-03 | 1990-04-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagent and method for determination of a polyvalent substance using an immunoaggregate |
| US5195920A (en) * | 1989-02-16 | 1993-03-23 | Collier Harry B | Radio controlled model vehicle having coordinated sound effects system |
| DE4202924A1 (de) * | 1992-02-01 | 1993-08-05 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von rheumafaktoren und mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| DE4202923A1 (de) * | 1992-02-01 | 1993-08-05 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von antigenen oder antikoerpern in gegenwart eines immunkomplexes |
| CN113030489B (zh) * | 2021-04-01 | 2023-07-25 | 捷和泰（北京）生物科技有限公司 | 一种胱抑素c兔多抗-胶乳粒子的制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4946048A (ja) * | 1972-09-08 | 1974-05-02 | ||
| DE2755689A1 (de) * | 1976-12-16 | 1978-06-22 | Millipore Corp | Verfahren zur bestimmung der anwesenheit einer komponente einer immunchemischen reaktion und diagnostisches immunchemisches testmaterial zur durchfuehrung des verfahrens |
| JPS5512419A (en) * | 1978-07-13 | 1980-01-29 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | Immunological measurement and reagent therefor |
| US4310508A (en) * | 1979-06-19 | 1982-01-12 | Siber George | Diagnostic test and reagent therefor |
| JPS579723A (en) * | 1980-06-20 | 1982-01-19 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Stabilizing agent for immunological reaction and measuring method of antigen-antibody reaction |
-
1982
- 1982-02-25 DE DE19823206729 patent/DE3206729A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-02-22 EP EP83101692A patent/EP0087728B1/de not_active Expired
- 1983-02-22 AT AT83101692T patent/ATE16219T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-02-22 DE DE8383101692T patent/DE3361048D1/de not_active Expired
- 1983-02-23 ES ES520012A patent/ES520012A0/es active Granted
- 1983-02-24 JP JP58028645A patent/JPH0616044B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1983-02-24 US US06/469,238 patent/US4569919A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-02-24 CA CA000422302A patent/CA1199270A/en not_active Expired
- 1983-02-24 AU AU11835/83A patent/AU566742B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8404515A1 (es) | 1984-04-16 |
| JPS58165055A (ja) | 1983-09-30 |
| ES520012A0 (es) | 1984-04-16 |
| AU566742B2 (en) | 1987-10-29 |
| ATE16219T1 (de) | 1985-11-15 |
| AU1183583A (en) | 1983-09-01 |
| CA1199270A (en) | 1986-01-14 |
| US4569919A (en) | 1986-02-11 |
| DE3206729A1 (de) | 1983-09-01 |
| EP0087728B1 (de) | 1985-10-23 |
| DE3361048D1 (en) | 1985-11-28 |
| EP0087728A1 (de) | 1983-09-07 |
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