DE3687751T2 - Kolonne zum entfernen von beta-2-mikroglobulin. - Google Patents

Kolonne zum entfernen von beta-2-mikroglobulin.

Info

Publication number
DE3687751T2
DE3687751T2 DE8686905431T DE3687751T DE3687751T2 DE 3687751 T2 DE3687751 T2 DE 3687751T2 DE 8686905431 T DE8686905431 T DE 8686905431T DE 3687751 T DE3687751 T DE 3687751T DE 3687751 T2 DE3687751 T2 DE 3687751T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
microglobulin
column
blood
antibody
dialysis machine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
DE8686905431T
Other languages
English (en)
Other versions
DE3687751D1 (de
Inventor
Nobuo Ida
Hiroshi Kataoka
Tetsunosuke Kunitomo
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toray Industries Inc
Original Assignee
Toray Industries Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toray Industries Inc filed Critical Toray Industries Inc
Application granted granted Critical
Publication of DE3687751D1 publication Critical patent/DE3687751D1/de
Publication of DE3687751T2 publication Critical patent/DE3687751T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
    • A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
    • A61M1/3679—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits by absorption
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B01J20/321—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B01J20/3212—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
    • B01J20/3282—Crosslinked polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M2202/00—Special media to be introduced, removed or treated
    • A61M2202/04—Liquids
    • A61M2202/0413—Blood
    • A61M2202/0415—Plasma
    • A61M2202/0421—Beta-2-microglobulin
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G or L chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Description

    TECHNISCHES GEBIET
  • Diese Erfindung bezieht sich auf eine Säule zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin. Insbesondere bezieht sich diese Erfindung auf eine Säule, die β&sub2;-Mikroglobulin im Blut spezifisch adsorbiert und entfernt.
    • HINTERGRUND AUS DEM STAND DER TECHNIK
  • β&sub2;-Mikroglobulin ist eine leichte Kette von doppelsträngigem Protein, das das wichtigste Gewebeverträglichkeits-Antigen darstellt (im Falle des Menschen ist es HLA (menschlisches Leukozytenantigen), Klasse I) und auf den Oberflächen der meisten Zellen auftritt. Es kommt auch in der Körperflüssigkeit in freier Form vor, die physiologische Funktion des freien β&sub2;- Mikroglobulin ist jedoch noch nicht bekannt. Deren vollständige Arminosäuren-Folge wurde für den Menschen und verschiedene Tiere bestimmt und seine dreidimensionale Struktur wurde beim Rind durch Röntgenanalyse bestimmt. Es wurde nachgewiesen, daß es ein einfaches Protein mit einem Molekulargewicht von etwa 12000 ist, das keine Zuckerkette aufweist und eine starke strukturelle Übereinstimmung mit dem C-Bereich (konstantem Bereich) von Immunoglobulin aufweist. Die Übereinstimmung seiner Aminosäuren-Folge zwischen unterschiedlichen Arten beträgt 60 bis 80% und ist folglich beträchtlich hoch (Proc. Natl. Acad. Sci. 257, 2619 (1982)).
  • Der β&sub2;-Mikroglobulin-Wert im Blut der Patienten, die an Nephropathy leiden und über lange Zeit der künstlichen Blutdialyse unterzogen werden, beträgt das 10- bis 100-fache des Wertes beim gesunden Menschen. Es wird angenommen, daß dies auf dem β&sub2;-Mikroglobulin beruht, das in der Niere zersetzt und durch die Blutdialyse nicht entfernt wird und sich folglich im Blut ansammelt.
  • Die Erfinder der vorliegenden Anmeldung führten eine Abtrennung und Analyse der Amyloidproteine durch, die im erkrankten Teil eines Patienten abgelagert wurden, der am Karpaltunnel-Syndrom leidet, und haben herausgefunden, daß die meisten Amyloidproteine β&sub2;-Mikroglobulin sind. Es wird folglich angenommen, daß das Karpaltunnel-Syndrom durch die Ablagerung von β&sub2;-Mikroglobulin auf dem erkrankten Teil hervorgerufen wird, das mit einem hohen Wert im Blut angereichert wird. Es wird folglich erwartet, daß das Karpaltunnel-Syndrom verhindert werden kann, indem β&sub2;-Mikroglobulin im Blut gleichzeitig mit der künstlichen Blutdialyse enternt wird. Es ist außerdem möglich, das β&sub2;-Mikroglobulin in den Ablagerungen von Amyloid auf anderen Teilen als dem Karpaltunnel enthalten ist.
  • Bisher war keine Krankheit bekannt, bei der als Ursache das β&sub2;- Mikroglobulin im Blut erkannt wurde, und folglich wurde die Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin im Blut überhaupt nicht in Betracht gezogen.
  • Für die Bestimmung von β&sub2;-Mikroglobulin in Serumproben ist die Verwendung eines Anti-β&sub2;-mikroglobulin-Antikörpers bekannt, der in einem Träger immobilisiert wurde (US-Patent 4 329 152; GB- 2 030 294; JP-Patent 56/93046).
    • BESCHREIBUNG DIESER ERFINDUNG
  • Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in der Schaffung eines Systems zur selektiven Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin im Blut.
  • Diese Aufgabe kann durch die vorliegende Erfindung mit einem System nach Anspruch 1 gelöst werden.
    • KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
  • Fig. 1 zeigt Beispiele von Schaltungen, die ein Blutdialysegerät zusammen mit einer Säule zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin verwenden, wobei (a) ein Beispiel zeigt, bei dem diese in Reihe verbunden sind, und (b) ein Beispiel darstellt, bei dem sie parallel verbunden sind;
  • Fig. 2 ist eine schematische Darstellung, die die Ergebnisse der Gelelektrophorese mit SDS-Polyacrylamid der in Beispiel 1 erhaltenen Säulenfraktionen zeigt;
  • Fig. 3 zeigt die Gesamtmenge der Proteine und den Wert des β&sub2;- Mikroglobulin der Säulenfraktionen, die in Beispiel 2 erhalten wurden;
  • Fig. 4 zeigt die zeitliche Veränderung der Menge des im Blut verbleibenden β&sub2;-Mikroglobulin, wobei (a) die Ergebnisse zeigt, die unter Verwendung einer Säule erhalten wurden, in der der Anti-β&sub2;-mikroglobulin-Antikörper immobilisiert ist, (b) die Ergebnisse zeigt, die durch Wiederverwendung der Säule von (a) erhalten wurden, und (c) die Ergebnisse zeigt, die durch Verwendung einer Säule erhalten wurden, in der Anti-β&sub2;-mikroglobulin nicht immobilisiert wurde.
    • BESTE ART DER DURCHFÜHRUNG DIESER ERFINDUNG
  • Sowohl der polyklonale Antikörper, der durch Immunisierung von Tieren, wie z. B. Mäusen, Ratten, Hasen, Ziegen und Schafen, erhalten wurde, als auch der monoklonale Antikörper, der durch Verwendung eines Zellhybridisierungsverfahrens gewonnen wurde, können in der vorliegenden Erfindung als Anti-β&sub2;-mikroglobulin- Antikörper verwendet werden. Das zu immunisierende β&sub2;-Mikroglobulin kann von jedem Tier gewonnen werden, wenn der erhaltene Antikörper das menschliche β&sub2;-Mikroglobulin binden kann. Zur Förderung der Wirksamkeit dieser Verbindung ist jedoch das β&sub2;- Mikroglobulin bevorzugt, das vom Menschen oder Affen, insbesondere vom Menschen abgeleitet wurde. Ein Peptidfragment davon oder ein synthetisches Peptid, das die gleiche immunogene Fähigkeit aufweist, können ebenfalls verwendet werden. Um β&sub2;- Mikroglobulin wirksam zu entfernen und die Funktion der Blutzellen nicht zu beeinflussen, ist es bevorzugt, einen monoklonalen Antikörper zu verwenden, der das β&sub2;-Mikroglobulin nicht bindet, das das HLA auf den Oberflächen der Zellen bildet, und der allein das freie β&sub2;-Mikroglobulin bindet.
  • Der in der vorliegenden Erfindung verwendete unlösliche Träger umfaßt Agarose, Cellulose, Dextran, Polyacrylamid und Polystyrol-Derivate. Das Material des unlöslichen Trägers ist vorzugsweise ein hydrophiles Material, an das nur eine geringe Menge von Blutkomponenten unspezifisch adsorbiert sind. Der Träger kann in Form von Kügelchen, Fasern oder Filmen vorliegen. Wenn Kügelchen verwendet werden, ist deren Durchmesser nicht begrenzt, solange das β&sub2;-Mikroglobulin enthaltende Fluid zirkulieren kann. Um den Strömungswiderstand zu verringern, werden jedoch die mit einem Durchmesser von 50 bis 3000 um, insbesondere 200 bis 3000 um vorzugsweise angewendet. Außerdem ist es bevorzugt, Kügelchen zu verwenden, die physikalisch fest sind und deren Durchmesser durch den darauf angewendeten Druck nicht sehr verändert wird.
  • Das Binden des Antikörpers an den unlöslichen Träger kann durch chemische Ausbildung von kovalenten Bindungen durchgeführt werden, wobei ein Kopplungsmittel z. B. Bromcyan und Carbodiimid, oder ein Vernetzungsmittel, wie Glutaraldehyd verwendet wird. Es ist ebenfalls möglich, das Adsorptionsvermögen pro Antikörpermenge zu fördern, in dem β&sub2;-Mikroglobulin durch Protein A gebunden wird, das im unlöslichen Träger vorläufig immobilisiert wird. In diesem Fall ist es jedoch erforderlich, das Protein A und den Antikörper chemisch zu vernetzen, um das Entweichen des Antikörpers zu verhindern.
  • Die Menge des in der Säule immobilisierten Antikörpers und die Größe der Säule sind nicht begrenzt. Um einen besseren Curing- Effekt bzw. eine bessere Heilungswirkung zu erreichen, ist es bevorzugt, daß eine Säule nicht weniger als 50 mg β&sub2;-Mikroglobulin adsorbieren kann. Da 1 g des Antikörpers 50 mg bis 150 mg des Antigen-β&sub2;-mikroglobulin adsorbieren kann, ist es erforderlich, daß eine Säule 300 mg oder mehr des Antikörpers aufweist. Es muß jedoch darauf hingewiesen werden, daß die Menge des Antikörpers pro Säule verringert werden kann, wenn zwei oder mehr Säulen bei der Behandlung verwendet werden.
  • Bei der Behandlung kann die Säule zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin allein verwendet werden. In Anbetracht der Tatsache, daß die meisten behandelten Patienten der künstlichen Blutdialyse unterzogen werden, ist es jedoch, um ein bequemes Verfahren zu erreichen, bevorzugt, die Säule in Reihe oder parallel zum Blutdialysegerät zu verbinden, um eine gleichzeitige Blutzirkulation durchzuführen.
  • Ein Beispiel, bei dem die erfindungsgemäße Säule mit dem Blutdialysegerät verbunden ist, wird unter Bezugnahme auf Fig. 1 nachfolgend beschrieben. Ein Beispiel, bei dem die Säule mit dem Blutdialysegerät in Reihe verbunden ist, ist in Fig. 1 (a) gezeigt. Das aus dem Körper des Patienten entnommene Blut betritt das Blutdialysegerät 2 durch die Blutpumpe 1 und wird dann mit der Dialyseflüssigkeit 4 dialysiert. Das Blut wird dann in der Säule 3 einer Behandlung unterzogen, um β&sub2;-Mikroglobulin zu entfernen, anschließend wird es zum Körper des Patienten zurückgeführt. Obwohl die Säule 3 zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin nach dem Blutdialysegerät 2 eingebunden ist, wie es in Fig. 1 (a) gezeigt ist, kann die Säule auch vor dem Blutdialysegerät 2 eingebunden werden. Ein Beispiel, bei dem die Säule und das Blutdialysegerät parallel verbunden sind, wird nun unter Bezugnahme auf Fig. 1 (b) beschrieben. Das aus dem Körper des Patienten entnommene Blut wird, nachdem es durch die Blutpumpe 1 geleitet wurde, in zwei Richtungen aufgeteilt. Der in eine Richtung fließende Blutstrom betritt das Blutdialysegerät 2, worin das Blut mit der Dialyseflüssigkeit 4 dialysiert wird. Der in die andere Richtung fließende Blutstrom betritt die Säule 3 zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin, worin das β&sub2;-Mikroglobulin entfernt wird, nachdem dessen Strömungsgeschwindigkeit durch eine Hilfspumpe 5 geregelt wurde, es fließt mit der Blutströmung vom Blutdialysegerät 2 zusammen und kehrt in den Körper zurück. Wenn die Säule parallel mit dem Blutdialysegerät verbunden ist, kann die Säule zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin in jeden Abschnitt der Schaltung eingebunden werden. Im Falle der parallelen Verbindung von Säule und Blutdialysegerät kann die Hilfspumpe 5 verwendet werden, um die Strömungsgeschwindigkeit in der Nebenleitung konstant zu machen, dies ist in Fig. 1 (b) gezeigt. Die Regelung der Strömungsgeschwindigkeit kann auch durch geeignete Auswahl der Innendurchmesser der Rohre im Kreislauf erfolgen, ohne daß die Hilfspumpe 5 verwendet wird. Das die Dialysemembran des Blutdialysegeräts bildende Material ist nicht begrenzt und umfaßt Cellulose, Celluloseacetat, Polymethylmethacrylat, Polyacrylnitril, Polysulphone, Polyamide, Polyester, Polyvinylalkohole und Polyvinylalkohol- Copolymere. Um die Menge des entfernten β&sub2;-Mikroglobulin zu erhöhen, ist es bevorzugt, daß die Dialysemembran eine Permeabilität von 2% oder mehr für Proteine mit einem Molekulargewicht von 10000 aufweist.
  • Bei der vorliegenden Erfindung kann das gesamte Blut durch die Säule zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin geleitet werden. Obwohl dieses Verfahren kompliziert ist, kann der gleiche Effekt erreicht werden, indem das Plasma zirkuliert wird, von dem die Blutzellen durch einen herkömmlichen Plasmaabscheider entfernt wurden, statt daß das gesamte Blut zirkuliert wird.
  • Die für die Adsorption verwendete Säule kann regeneriert und wieder verwendet werden, indem eine saure Lösung mit einem pH- Wert von etwa 2 durch die benutzte Säule geleitet wird.
  • Da die erfindungsgemäße Säule β&sub2;-Mikroglobulin selektiv adsorbiert, kann das β&sub2;-Mikroglobulin im Blut bequem und wirksam entfernt werden. Außerdem hat die erfindungsgemäße Säule den Vorteil, daß sie wiederholt verwendet werden kann, indem das adsorbierte β&sub2;-Mikroglobulin eluiert wird.
  • Die vorliegende Erfindung wird nachfolgend unter Bezugnahme auf die Beispiele deutlicher beschrieben.
    • Beispiel 1
  • Zu 1 ml Agarosegel ("Affigel 10", von Bio Rad Laboratories hergestellt), in das N-Hydroxysuccinimidester-Gruppen durch einen Spacer bzw. ein Zwischenstück mit einer Länge von 10 Atomen eingeführt wurden (-OCH&sub2;CONH(CH&sub2;)NHCO(CH&sub2;)&sub2;-), wurden 1,46 mg eines handelsüblichen monoklonalen Antihuman-β&sub2;-mikroglobulin- Antikörpers in 1 ml 0,1 m HEPES-NaoH-Puffer (pH=7,5) zugesetzt und die Mischung wurde über Nacht leicht gerührt.
  • Zu dieser Mischung wurde 0,1 ml 1 m Ethanolamin-HCl (pH=8,0) zugesetzt und die Mischung konnte 1,5 Stunden lang reagieren. Nach Blockierung der unreagierten N-Hydroxysuccinimidester- Gruppen wurde das Gel im Wechsel dreimal mit 1 ml 0,1 m Essigsäure-NaOH (pH=4,0) und 1 ml 0,1 m Carbonsäure-NaOH (pH=9,0) gewaschen, die jeweils 0,5 m NaCl enthielten. Schließlich wurde das Gel mit PBS ins Gleichgewicht gebracht. Die Menge des nach der Immobilisierung verbleibenden Proteins betrug 0,02 mg und somit waren 1,44 mg des Antikörpers in 1 g des Gels immobilisiert.
  • In einer handelsüblichen kleinen Säule (Durchmesser von 0,8 mm) wurden 0,3 ml des so erhaltenen Gels mit dem immobilisierten Antikörper gepackt und durch diese Säule wurde bei Raumtemperatur mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 2,4 ml/h eine Modelllösung geleitet, die 0,1 mg/ml Rinderserumalbumin (BSA) und 0,1 mg/ml Human-β&sub2;-mikroglobulin in PBS enthielt. Zu Beginn der Strömung wurden mit einem Fraktionssammler jeweils Fraktionen von 0,63 ml gewonnen und Teilmengen mit 20 ul jeder Fraktion (2-5) wurden durch Elektrophorese mit SDS-Polyacrylamid analysiert.
  • Die Ergebnisse sind in Fig. 2 gezeigt. Fig. 2 ist eine schematische Darstellung, die die Ergebnisse der Analyse durch Elektrophorese zeigt. Die Bahn 1 zeigt das erhaltene Ergebnis, wenn diese Modellproteinlösung der Elektrophorese unterzogen wurde, ehe sie durch die Säule geleitet wurde, und die Bahnen 2-5 zeigen die Ergebnisse der Elektrophorese der Fraktionen 2-5.
  • Der Pfeil zeigt die migrierte Position von β&sub2;-Mikroglobulin (β&sub2;m) und der Bezugsprobe von BSA.
  • Bei allen analysierten Fraktionen 2-5 ist das Mengenverhältnis von β&sub2;-Mikroglobulin zum BSA geringer als in der Lösung, ehe sie der Säule unterzogen wurde; dies zeigt, daß nur β&sub2;-Mikroglobulin in der Säule selektiv adsorbiert wurde.
  • Nachdem die Proteine in der Säule blieben, wurde sie außerdem mit PBS eluiert, das an den Antikörper gebundene Antigen wurde mit 50 mMol Glycin-HCl-Puffer (pH=2,4) eluiert und es wurde nur das β&sub2;-Mikroglobulin eluiert. Das Ergebnis, das erhalten wurde, indem die eluierte Lösung der Elektrophorese unterzogen wurde, ist in Fig. 2, Bahn 6 gezeigt.
    • Beispiel 2
  • Durch eine in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 hergestellte Säule wurde ein Serum mit einem hohen Wert von β&sub2;-Mikroglobulin von einem Patienten geleitet, der der künstlichen Blutdialyse unterzogen wurde. Von Beginn des Durchlaufs an wurden Fraktionen von jeweils 0,32 ml mit einem Fraktionssammler entnommen.
  • Die Gesamtmenge an Protein (als Absorptionsmaß bei 280 nm ausgedrückt) und der Wert des β&sub2;-Mikroglobulin (β&sub2;m), durch Immunoassay bestimmt, sind in Fig. 3 für jede Fraktion gezeigt. Bei den Fraktionen bis zur Nr. 10 war das Mengenverhältnis von β&sub2;-Mikroglobulin zur gesamten Proteinmenge deutlich geringer als das des Serums, ehe es der Säule unterzogen wurde; dies zeigt, daß β&sub2;-Mikroglobulin durch den Antikörper adsorbiert und entfernt wurde. (Beim Serum betrug das Absorptionsmaß bei 280 nm 72,1 und der β&sub2;-Mikroglobulin-Wert betrug 40,5 mg/ml, ehe es der Säule unterzogen wurde.)
  • Aus den in Fig. 3 gezeigten Ergebnissen ist ersichtlich, daß die gesamte in der Säule adsorbierte Menge an β&sub2;-Mikroglobulin 0,049 mg betrug und somit wurden 0,11 mg β&sub2;-Mikroglobulin pro 1 mg des immobilisierten Antikörpers adsorbiert.
    • Beispiel 3
  • Zwei mg des in den Beispielen 1 und 2 verwendeten handelsüblichen Antihuman-β&sub2;-mikroglobulin wurden mit 2,8 ml Cellulosekügelchen ("Formyl-Cellulofine", von Chisso Corporation hergestellt) in 6 ml Calliumphosphat-Puffer (pH=7,0) vermischt, wobei durch einen Spacer mit einer Länge von 9 Atomen Formylgruppen eingeführt worden waren (-OCH&sub2;CH(OH)CH&sub2;NH(CH&sub2;)&sub4;-). Nach einer zweistündigen Reaktion bei 4ºC wurde Dimethylaminboran zugesetzt und die Reaktion konnte über Nacht bei reduzierenden Bedingungen fortdauern, um Kügelchen herzustellen, bei denen 0,54 mg des Antikörpers pro 1 ml des Trägers immobilisiert waren. Die unreagierten Formylgruppen wurden blockiert, indem sie mit Aminogruppen von Tris zur Reaktion gebracht wurden.
  • In eine kleine Säule wurden 2,1 ml der Kügelchen (1,1 mg in Bezug auf den Antikörper) gepackt und 10 ml normales menschliches Blut, dem β&sub2;-Mikroglobulin zugefügt worden war, wurden 2 Stunden lang bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 1 ml/Minute zirkuliert. Kleine Teilmengen des Bluts wurden zu geeigneten Zeitpunkten entnommen und die Werte von β&sub2;-Mikroglobulin (β&sub2; m) wurden bestimmt. Die Ergebnisse sind in Fig. 4 (a) gezeigt. Die Adsorption war nach Einleitung der Zirkulation innerhalb von 10 Minuten abgeschlossen und die adsorbierte Menge betrug 100 ug, dies ist etwa 1/10 der verwendeten Antikörpermenge.
  • Nach dem Waschen der Säule mit 1 m Glycin-HCl-Puffer (pH=2,8) wurde der gleiche Zirkulationsversuch wiederholt. Wie es in Fig. 4 (b) gezeigt ist, wurde die gleiche oder eine bessere Adsorption als bei der ersten Zirkulation beobachtet. Folglich ist die Säule regenerierbar. In einem Kontrollversuch, bei dem Cellulosekügelchen verwendet wurden, an denen kein Antikörper immobilisiert war, wurde nur eine spärliche Adsorption beobachtet (Fig. 4 (c)).
    • INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT
  • Da die erfindungsgemäße Säule β&sub2;-Mikroglobulin im Blut wie oben beschrieben spezifisch adsorbieren und entfernen kann, ist die erfindungsgemäße Säule für die Verhinderung und Behandlung von Komplikationen sehr hilfreich, die Amyloidose, z. B. das Karpaltunnel-Syndrom, und Osteopathie umfassen.

Claims (2)

1. System zur Dialyse von Blut, das ein Blutdialysegerat (2) umfaßt, dadurch gekennzeichnet, daß eine Saule (3) zur Entfernung von β&sub2;-Mikroglobulin vorgesehen ist, die einen unlöslichen Träger und einen an diesen Träger fixierten Anti-β&sub2;-Mikroglobulin-Antikörper umfaßt, wobei diese Säule (3) mit dem Blutdialysegerät (2) verbunden ist.
2. System nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß diese Säule (3) in Reihe oder parallel mit dem Blutdialysegerät (2) verbunden ist.
DE8686905431T 1985-09-19 1986-09-18 Kolonne zum entfernen von beta-2-mikroglobulin. Expired - Fee Related DE3687751T2 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP20725085 1985-09-19
PCT/JP1986/000485 WO1987001597A1 (en) 1985-09-19 1986-09-18 beta2-MICROGLOBULIN-REMOVING COLUMN

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE3687751D1 DE3687751D1 (de) 1993-03-25
DE3687751T2 true DE3687751T2 (de) 1993-05-27

Family

ID=16536693

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE8686905431T Expired - Fee Related DE3687751T2 (de) 1985-09-19 1986-09-18 Kolonne zum entfernen von beta-2-mikroglobulin.

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4770774A (de)
EP (1) EP0236509B1 (de)
JP (1) JPH06104122B2 (de)
DE (1) DE3687751T2 (de)
WO (1) WO1987001597A1 (de)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5073265A (en) * 1987-02-27 1991-12-17 Johnson Richard J Methods of manufacturing nucleophilic material modified for improved biocompatibility
EP0319144A1 (de) * 1987-11-06 1989-06-07 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Sorbentmittel für beta-2-Mikroglobulin
DE3887114D1 (de) * 1987-12-11 1994-02-24 Akzo Nv Biocompatible Dialysemembran aus Cellulose mit erhöhter Beta-2-Microglobulinadsorption.
US5085779A (en) * 1989-06-07 1992-02-04 J. T. Baker, Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
US5092992A (en) * 1989-06-07 1992-03-03 J. T. Baker Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
US20020164818A1 (en) * 1995-05-23 2002-11-07 Gruber Karl F. Mass spectrometric immunoassay analysis of specific proteins and variants present in various biological fluids
US6878269B2 (en) * 1996-01-31 2005-04-12 Kaneka Corporation Device for body fluid purification and system for body fluid purification
DE69734749T2 (de) * 1996-01-31 2006-09-07 Kaneka Corp. Vorrichtung mit adsorbens zum adsorptiven entfernen von krankheitsbedingten faktoren in körperflüssigkeiten
FR2785200B1 (fr) * 1998-10-30 2001-03-30 Centre Nat Rech Scient Utilisation d'un gel adsorbant pour eliminer et purifier les biomolecules
US6659289B1 (en) * 1998-12-24 2003-12-09 Toray Industries, Inc. Hemocathartic column for purifying blood
UA81216C2 (en) * 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
WO2000074824A1 (en) * 1999-06-03 2000-12-14 Advanced Extravascular Systems One step removal of unwanted molecules from circulating blood
US8865172B2 (en) 2000-05-08 2014-10-21 Advanced Extravascular Systems, Inc. Method for reducing the number of unwanted molecules in bodily fluids
MXPA05005031A (es) * 2002-11-12 2005-11-17 Becton Dickinson Co Diagnostico de la sepsis o sirs usando perfiles de biomarcadores.
AU2003303198A1 (en) 2002-12-19 2004-07-14 New York University Method for treating amyloid disease
AT413336B (de) * 2003-09-12 2006-02-15 Mattner Frank Dr Apherese-vorrichtung
WO2005063335A2 (en) * 2003-12-30 2005-07-14 Statens Serum Institut MONOCLONAL DES-LYS58-β2-MICROGLOBULIN ANTIBODIES FOR MEASUREMENT AND MANAGEMENT OF HEMODIALYSIS COMPLICATIONS
EP1869463A4 (de) 2005-04-15 2010-05-05 Becton Dickinson Co Sepsisdiagnose
AT502691A1 (de) * 2005-10-24 2007-05-15 Univ Fuer Weiterbildung Krems Extrakorporales blut- oder plasmareinigungssystem
US8669113B2 (en) 2008-04-03 2014-03-11 Becton, Dickinson And Company Advanced detection of sepsis
US9675746B2 (en) * 2009-10-18 2017-06-13 Glycorex Ab Method and product for blood treatment and purification
US20160208011A1 (en) 2010-01-28 2016-07-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Ccr3 modulation in the treatment of aging-associated impairments, and compositions for practicing the same
EA035799B1 (ru) * 2015-05-18 2020-08-12 Зе Боард Оф Трастиз Оф Зе Леланд Стэнфорд Джуниор Юниверсити Способ лечения взрослого млекопитающего от когнитивного нарушения, ассоциированного со старением
AU2016279804B2 (en) 2015-06-15 2019-03-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for treating aging-associated conditions
EP3192806A1 (de) 2016-01-13 2017-07-19 Affiris AG Alpha-kette des hochaffinen ige-rezeptors (fceria)
EP3492166A4 (de) * 2016-08-01 2020-03-11 Kaneka Corporation Adsorptionsmittel für calciproteinteilchen, adsorptionsentfernungssystem und verfahren zur verwendung davon
DE102017210134A1 (de) 2016-12-15 2018-06-21 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh System zur extrakorporalen Blutbehandlung, Behandlungsvorrichtung, Kit und Verfahren zum Betreiben eines Systems zur extrakorporalen Blutbehandlung
WO2019084111A1 (en) * 2017-10-24 2019-05-02 DD Innovations Lab, LLC APPARATUS AND METHODS FOR REMOVING TOXINS FROM BLOOD BY PLASMASPHERESIS
DE102017131192A1 (de) 2017-12-22 2019-06-27 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Pufferlösung zur Reduzierung des Kohlendioxidgehaltes in extrakorporalem Blut

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3669878A (en) * 1968-12-02 1972-06-13 Health Education And Welfare U Treatment of dialysate solution for removal of urea
JPS5437821A (en) * 1977-08-29 1979-03-20 Seikagaku Kogyo Co Ltd Blood cells sensitized to antibody against anti-beta2-microglobulin of man, their preparation and determination of beta2-microglobulin of man
JPS5530652A (en) * 1978-08-28 1980-03-04 Seikagaku Kogyo Co Ltd Latex sensitive to antibody of human beta2-microglobulin for quantitizing human beta2-microglobulin and its composite
US4257884A (en) * 1979-04-17 1981-03-24 Damon Corporation Chromatography
JPS5693046A (en) * 1979-11-20 1981-07-28 Fujirebio Inc Determination of beta2-microglobulin by enzime immunity measuring method
US4321192A (en) * 1980-01-10 1982-03-23 Ionics Incorporated Fractionation of protein mixtures by salt addition followed by dialysis treatment
US4329152A (en) * 1980-10-06 1982-05-11 International Lead Zinc Research Organization, Inc. Determination of β2 -microglobulin in human urine and serum by latex immunoassay
DE3206729A1 (de) * 1982-02-25 1983-09-01 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Immunologisches agglutinationsverfahren

Also Published As

Publication number Publication date
EP0236509A4 (de) 1989-05-30
EP0236509A1 (de) 1987-09-16
DE3687751D1 (de) 1993-03-25
US4770774A (en) 1988-09-13
JPH06104122B2 (ja) 1994-12-21
JPH06104122B1 (de) 1994-12-21
EP0236509B1 (de) 1993-02-10
WO1987001597A1 (en) 1987-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3687751T2 (de) Kolonne zum entfernen von beta-2-mikroglobulin.
DE3239360C2 (de)
DE3586536T3 (de) Monoklonaler Antikörper gegen ein Cytotoxin, denselben erzeugendes Hybridoma und Verfahren für die Herstellung des gereinigten Cytotoxin.
DE3346336C2 (de)
DE69808620T3 (de) Universell verwendbares bluttplasma
DE69632476T2 (de) Behandlung von dilatierte kardiomyopathie durch entfernung von autoantikoerpern
DE19714913B4 (de) Verfahren zur Herstellung patientenspezifischer Immunadsorber
DE2725608A1 (de) Verfahren und vorrichtung zum kontinuierlichen entfernen von blutsubstanzen in einem extrakorporalen kreislauf
DE68904732T2 (de) Ionenaustausch und trennungsmethode.
AT12072U1 (de) Dialysemembran zur behandlung von multiplem myelom
DE3039566A1 (de) Verfahren zur reinigung von interferon
WO1997014964A9 (de) Patientenspezifische immunadsorber für die extrakorporale apherese und verfahren für deren herstellung
DE2127159C2 (de) IgG-Immunglobulinfraktion und ihre Herstellung
DE2718542A1 (de) Verfahren zur reinigung von interferon
DE19818790A1 (de) Immunadsorptionsmatrix, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
EP0000134A1 (de) Glykoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung, seine Verwendung zur Gewinnung von Antiserum sowie das Antiserum
DE69905066T2 (de) Verwendung eines adsorbierenden gels zur entfernung und reinigung von biomolekülen
EP0037963B1 (de) Neues Protein PP9, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung
DE10029705A1 (de) Herstellung von IgY(AFc)-Antikörpern und deren Verwendung
CH630643A5 (en) Process for concentrating a placenta-specific glycoprotein.
EP0001812A1 (de) Verfahren zur Herstellung gereinigten Alpha-1-Fetoproteins und dessen Verwendung
DE2732437B2 (de) Wasserunlösliches Haptoglobinpräparat und Verfahren zu seiner Herstellung
CH643861A5 (de) Verfahren zum reinigen eines gamma-globulinderivats.
DE3410694C2 (de)
EP0282018A2 (de) Verfahren zur Isolierung von Basalmembranproteinen aus menschlichen und tierischen Geweben

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee