JPS58165055A - 免疫学的ラテツクス凝集法 - Google Patents
免疫学的ラテツクス凝集法Info
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- JPS58165055A JPS58165055A JP58028645A JP2864583A JPS58165055A JP S58165055 A JPS58165055 A JP S58165055A JP 58028645 A JP58028645 A JP 58028645A JP 2864583 A JP2864583 A JP 2864583A JP S58165055 A JPS58165055 A JP S58165055A
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- JP
- Japan
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- gamma globulin
- serum
- latex
- test
- antigen
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-
- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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- Processes Of Treating Macromolecular Substances (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はその抗原に対して特異的な抗体を何ら含有しな
いガンマグロブリンの存在下に抗原−抗体反応のパート
ナ−を検出または測定するためのラテックス凝集法に関
する。
いガンマグロブリンの存在下に抗原−抗体反応のパート
ナ−を検出または測定するためのラテックス凝集法に関
する。
周知のように特異的な抗体は相当する抗原またはハプテ
/と結合する。この反応は多くの免疫検定法に利用され
る。ヒトの血清は所定の抗原の存在について相当する抗
体を使用して例えば競争的結合反応によるかまたはラテ
ックス凝集反応によシ検査しうる。これら方法および購
似方法は専門家にはよく知られている。
/と結合する。この反応は多くの免疫検定法に利用され
る。ヒトの血清は所定の抗原の存在について相当する抗
体を使用して例えば競争的結合反応によるかまたはラテ
ックス凝集反応によシ検査しうる。これら方法および購
似方法は専門家にはよく知られている。
かかる方法において出現しうる困難さは、検査すべき血
清中に存在する他の構成要素が妨害しうろことである。
清中に存在する他の構成要素が妨害しうろことである。
特にヒトの血清は蛋白質01q(補体成分)およびリフ
マチ因子(R1)を含有する、この両物質は同様に抗体
に結合する。その他にヒト血清中のりウマチ因子および
Olqの置は非常に広範囲に変動しうるので、それゆえ
血清を予めOlqの不活性化または内因性ソウ1チ因子
の除去のための処、理艷かけることが通常必要である。
マチ因子(R1)を含有する、この両物質は同様に抗体
に結合する。その他にヒト血清中のりウマチ因子および
Olqの置は非常に広範囲に変動しうるので、それゆえ
血清を予めOlqの不活性化または内因性ソウ1チ因子
の除去のための処、理艷かけることが通常必要である。
さもなければ結果および特に定蝋的測定がかなシの誤差
を示しうる。
を示しうる。
ラテックス凝集法を用いる抗原または抗体の検出は、そ
の実施が簡単でそして試験結果が短時間で得られるとい
う利点を有する。
の実施が簡単でそして試験結果が短時間で得られるとい
う利点を有する。
今や驚くべきことに、ラテックス粒子の非特異的凝集に
よル惹起される前記した難点が、ラテックス凝集反応を
測定讐べき抗原と反応しな・1.:11ζ いガン!グロプリリ竺ガン〜グaプリン72クレーンの
存在下に夾−す、ることによシ阻止されうろことが見出
された。
よル惹起される前記した難点が、ラテックス凝集反応を
測定讐べき抗原と反応しな・1.:11ζ いガン!グロプリリ竺ガン〜グaプリン72クレーンの
存在下に夾−す、ることによシ阻止されうろことが見出
された。
従って本発明は免疫学的反応の・ツートナーを負荷され
九ラテックス粒子をその抗原パートナ−に%異的な抗体
を何ら含有しないガンマグロ・プリンの存在下に相当す
る・七−トナーの溶液と一緒にすることを時機とするラ
テックス凝集法に関する。非特異的な凝集を阻止する丸
めのかかるガンマグロブリンとしては動物性ガンマグロ
ブリンまたは熱集合したヒトのガンマグロブリンが適当
である。ガンマグロブリンフラクションは既知方法、例
えば硫酸アンモニウム沈殿またはイオン交換体クロマド
グ2フイーにより取得される。。
九ラテックス粒子をその抗原パートナ−に%異的な抗体
を何ら含有しないガンマグロ・プリンの存在下に相当す
る・七−トナーの溶液と一緒にすることを時機とするラ
テックス凝集法に関する。非特異的な凝集を阻止する丸
めのかかるガンマグロブリンとしては動物性ガンマグロ
ブリンまたは熱集合したヒトのガンマグロブリンが適当
である。ガンマグロブリンフラクションは既知方法、例
えば硫酸アンモニウム沈殿またはイオン交換体クロマド
グ2フイーにより取得される。。
本発明の方法は、哺乳動物特にヒトの血液(血清または
血漿j中に含有される免疫学的に活性′1゜ 1=**1−*惟bftkbof<l0IXT;1tc
1)IITきる。かかる免′疫学的に活性な物質の例は
血清蛋白質である。
血漿j中に含有される免疫学的に活性′1゜ 1=**1−*惟bftkbof<l0IXT;1tc
1)IITきる。かかる免′疫学的に活性な物質の例は
血清蛋白質である。
免疫学的に活性な物質を負荷される(感作される)ラテ
ックス粒子としてはラテックス凝集試験に適するすべて
のラテックスがあげられる。
ックス粒子としてはラテックス凝集試験に適するすべて
のラテックスがあげられる。
例をあげればスチレンのホモポリマーおよびコポリマー
である。粒子寸法α05〜α6μmを有するラテックス
が好ましい。
である。粒子寸法α05〜α6μmを有するラテックス
が好ましい。
前記したラテックス粒子°を抗原ま九は抗体で感作させ
ることは既知方法によp実施されうる。
ることは既知方法によp実施されうる。
好ましくはラテックスを血清蛋白質に対する抗体伺えば
ンオグロビン、β−2−ミクログロブリンま九は免疫グ
ロブリン1、ヒトのホルモン例えばヒトの絨毛性腺刺激
ホルモン、酵素例えば膵臓リパーゼを九は動物性ホルモ
ン例えば妊娠し九雌馬の血清ゴナドトロビ/で負荷する
。
ンオグロビン、β−2−ミクログロブリンま九は免疫グ
ロブリン1、ヒトのホルモン例えばヒトの絨毛性腺刺激
ホルモン、酵素例えば膵臓リパーゼを九は動物性ホルモ
ン例えば妊娠し九雌馬の血清ゴナドトロビ/で負荷する
。
仁れは以下のようKして感作されうみ、抗血清からガン
マグロブリンを常法、例えば硫酸アンモニウムで沈殿さ
せ、ガンマグロブリンフラクションを透析しそして30
〜50p/Iに濃縮する。
マグロブリンを常法、例えば硫酸アンモニウムで沈殿さ
せ、ガンマグロブリンフラクションを透析しそして30
〜50p/Iに濃縮する。
純粋な抗体溶液も免疫吸着的に得られそして2〜10p
/jまで濃縮されうる。約10017Iの濃度を有する
ラテックス粒子の懸濁液にこの抗体溶液を加えそして2
0〜60℃でa5〜5時間培養する。ラテックス粒子に
結合しなかった抗体部分は遠心分離しそして固体物を再
懸濁させることにより除去しうる。使用する帆は、場合
によシ□蛋白質、例えば牛またはヒトアルブミンが添加
されうる緩衝溶液、好ましくはpH7〜a5のグリシン
−NaCfj 81衝液中に試薬を再懸濁させうる。使
用しうる抗血清は動物特に家兎、羊、ヤギを試験で測定
する予定の蛋白質を含有すべきでなめヒトまたは動物起
原の蛋白質で免疫賦与することKよシ調製される。
/jまで濃縮されうる。約10017Iの濃度を有する
ラテックス粒子の懸濁液にこの抗体溶液を加えそして2
0〜60℃でa5〜5時間培養する。ラテックス粒子に
結合しなかった抗体部分は遠心分離しそして固体物を再
懸濁させることにより除去しうる。使用する帆は、場合
によシ□蛋白質、例えば牛またはヒトアルブミンが添加
されうる緩衝溶液、好ましくはpH7〜a5のグリシン
−NaCfj 81衝液中に試薬を再懸濁させうる。使
用しうる抗血清は動物特に家兎、羊、ヤギを試験で測定
する予定の蛋白質を含有すべきでなめヒトまたは動物起
原の蛋白質で免疫賦与することKよシ調製される。
例をあげれば、家兎の抗ヒトエgG血清、家兎の抗ヒト
IgM血清、家兎の抗羊赤血球血清、羊の抗ヒトエgG
血清、羊の抗家兎r−グロプリン血清である0%に適当
なのは家兎の抗羊赤血球血清である。免疫賦与は既知方
法により実施され九。免疫賦与型および時間はその蛋白
質の免疫原性および分子量から出てくる。
IgM血清、家兎の抗羊赤血球血清、羊の抗ヒトエgG
血清、羊の抗家兎r−グロプリン血清である0%に適当
なのは家兎の抗羊赤血球血清である。免疫賦与は既知方
法により実施され九。免疫賦与型および時間はその蛋白
質の免疫原性および分子量から出てくる。
ガンマグロブリン溶液は、抗原または抗体が測定または
検出されるべき溶液中に好ましくは1[11〜2(マ:
マ)の比率で添加される。以下の例によp本発明を説明
する。
検出されるべき溶液中に好ましくは1[11〜2(マ:
マ)の比率で添加される。以下の例によp本発明を説明
する。
例 1
特異的な抗体として家兎のヒト−ミオグロビンに対する
免疫吸着的に取得された抗体をラテックス粒子に結合含
有するラテックス試薬を本発明による以下の試験に用い
た。試薬の感度は標準物を用いて約80 ng /d
、に調整されそして1) この試験は以下のように!J施された。
免疫吸着的に取得された抗体をラテックス粒子に結合含
有するラテックス試薬を本発明による以下の試験に用い
た。試薬の感度は標準物を用いて約80 ng /d
、に調整されそして1) この試験は以下のように!J施された。
希釈された検査すべきヒト血清1%(50μI)を試験
用プレート上の場所に置き、ヒト−ミオグロビンに対す
る抗体を伺ら含有しないガンマグロブリン#敵、すなわ
ち家兎の抗羊赤血球血清5μIを加えそしてラテックス
−ミオグロビン紙業1崗(25sl )を7口え九。撹
拌棒を用いて゛充分に混合した後試験用ブ′−トを回転
して動すしそして3分後に凝集について検査した。陰性
結果が出た場合は試験用プレートをもう1回回転して動
かしそして2分以内に新たに凝集について検査し九。
用プレート上の場所に置き、ヒト−ミオグロビンに対す
る抗体を伺ら含有しないガンマグロブリン#敵、すなわ
ち家兎の抗羊赤血球血清5μIを加えそしてラテックス
−ミオグロビン紙業1崗(25sl )を7口え九。撹
拌棒を用いて゛充分に混合した後試験用ブ′−トを回転
して動すしそして3分後に凝集について検査した。陰性
結果が出た場合は試験用プレートをもう1回回転して動
かしそして2分以内に新たに凝集について検査し九。
以下の表は血清中のミオグロビン測定における本方法の
信頼性について具体的に示している。
信頼性について具体的に示している。
6.1.ンi 。
1 0 パ′110
++ 2 0 、、′520醤 + +″ 丁 3 0 75 ・ −−□ 4 Q 20 −
5 + 40 +”−6+
20 +
−7+ 10 +
−8+ 120
4 +(注)昏臨床上関係ある限界は
約80 ng /dである)この表に示されるように、
リウマチ因子はミオグロビン−ラテックス試験において
糾れる陽性結果を生じうる。血WIINIL5.6およ
び7は、臨床的に前記した値である約80 ng /−
以下である40,20および10ng/dのミオグロビ
ンを有するから、標準試験としてのミオグロビン凪(放
射線免疫検定)で陰性であるにもかかわらず従来技術に
よるラテックス試験で陽性を示した(第4欄)、これに
反し本発明による試験(最右欄)は放射線免疫試験との
望ましい一致を生じた。
++ 2 0 、、′520醤 + +″ 丁 3 0 75 ・ −−□ 4 Q 20 −
5 + 40 +”−6+
20 +
−7+ 10 +
−8+ 120
4 +(注)昏臨床上関係ある限界は
約80 ng /dである)この表に示されるように、
リウマチ因子はミオグロビン−ラテックス試験において
糾れる陽性結果を生じうる。血WIINIL5.6およ
び7は、臨床的に前記した値である約80 ng /−
以下である40,20および10ng/dのミオグロビ
ンを有するから、標準試験としてのミオグロビン凪(放
射線免疫検定)で陰性であるにもかかわらず従来技術に
よるラテックス試験で陽性を示した(第4欄)、これに
反し本発明による試験(最右欄)は放射線免疫試験との
望ましい一致を生じた。
何ら妨害成分(リウマチ因子)を含有しない血清?4a
1〜4においては2ffiC))テックス試験において
同じでそしてRエムと一致する結果が得られる。
1〜4においては2ffiC))テックス試験において
同じでそしてRエムと一致する結果が得られる。
ガ 2
特異的な抗体として家兎のPM8Gに対する抗体をラテ
ックス粒子に結合されて含有する従来技術によシvI4
#され九ラテックス試薬を本発明によシ下記の試験に用
いた。試薬の感度は標準物を用いて約2国際単位(工U
)/dに調整しそしてこの試験を以下のようにして実施
した。
ックス粒子に結合されて含有する従来技術によシvI4
#され九ラテックス試薬を本発明によシ下記の試験に用
いた。試薬の感度は標準物を用いて約2国際単位(工U
)/dに調整しそしてこの試験を以下のようにして実施
した。
希釈され九検査すべき雌鳥の血清1滴(50μ))を試
験用プレート上の場所に置き、ガンマグロブリン溶液(
家兎の抗羊赤血球血清)25plを加えそしてラテック
ス−妊娠雌鳥血清ゴナドトロピン試$1滴(25El
)を添加した。撹拌棒を用いて充分に混合し九後試験プ
レートを回転させて動かしそして1分後に凝集について
検査した。陰性結果が出た場合は試験プレートをもう一
度回転させて動かしそして2分以内に新たに凝集につい
て検査し友。
験用プレート上の場所に置き、ガンマグロブリン溶液(
家兎の抗羊赤血球血清)25plを加えそしてラテック
ス−妊娠雌鳥血清ゴナドトロピン試$1滴(25El
)を添加した。撹拌棒を用いて充分に混合し九後試験プ
レートを回転させて動かしそして1分後に凝集について
検査した。陰性結果が出た場合は試験プレートをもう一
度回転させて動かしそして2分以内に新たに凝集につい
て検査し友。
以下の表は雌鳥の妊娠試験についての比較結果を示す。
1 − −
−2 − 十 −3+
− 4+ ◆ +5
+ +
+6 ÷
+ ◆血清のうち2f!l″は
直腸検査でその雌鳥が妊娠L″(?@I、nj““″′
竺グ゛゛−66f**技術による2テックス試1.1験
で陽性に反応し九(血清鳩2および3 ) 74=れに
反して本発明による試験の結果はナベての場合において
直腸検査の結果と一致し九。
−2 − 十 −3+
− 4+ ◆ +5
+ +
+6 ÷
+ ◆血清のうち2f!l″は
直腸検査でその雌鳥が妊娠L″(?@I、nj““″′
竺グ゛゛−66f**技術による2テックス試1.1験
で陽性に反応し九(血清鳩2および3 ) 74=れに
反して本発明による試験の結果はナベての場合において
直腸検査の結果と一致し九。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1)相当する/セートナーを用いる免疫学的反応のJ=
)ナーを検出または測定する九めのラテックス凝集法に
おいて、その検出ま九は測定を、抗原パートナ−に対し
て特異的な抗体を何ら含有しないガンマグロブリンの存
在下に行なうことを特徴とする方法。 2)ガンマグロブリンが動物性ガンマグロブリンフ2り
ν曹ンの水溶液であることを時機とする前記特許請求の
範囲第1項記戦の方法。 3)ガンマグロブリンが哺乳類の抗羊津血球血清である
ことを時機とする前記特許請求の範l!l第1項記載の
方法。 4)ガンマグロブリンが家兎の抗羊赤血球血清であるこ
とを特徴とする前記特許請求の範囲第1項記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3206729.1 | 1982-02-25 | ||
DE19823206729 DE3206729A1 (de) | 1982-02-25 | 1982-02-25 | Immunologisches agglutinationsverfahren |
DE32067291 | 1982-02-25 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS58165055A true JPS58165055A (ja) | 1983-09-30 |
JPH0616044B2 JPH0616044B2 (ja) | 1994-03-02 |
Family
ID=6156640
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP58028645A Expired - Lifetime JPH0616044B2 (ja) | 1982-02-25 | 1983-02-24 | 免疫学的ラテツクス凝集法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4569919A (ja) |
EP (1) | EP0087728B1 (ja) |
JP (1) | JPH0616044B2 (ja) |
AT (1) | ATE16219T1 (ja) |
AU (1) | AU566742B2 (ja) |
CA (1) | CA1199270A (ja) |
DE (2) | DE3206729A1 (ja) |
ES (1) | ES8404515A1 (ja) |
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FR2577048B1 (fr) * | 1985-02-05 | 1988-05-06 | Pasteur Institut | Reactif pour le dosage par hemagglutination des anticorps contre les toxines bacteriennes, procede de preparation et son application |
WO1987001597A1 (fr) * | 1985-09-19 | 1987-04-26 | Toray Industries, Inc. | COLONNE D'EXTRACTION DE beta2-MICROGLOBULINE |
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- 1983-02-22 EP EP83101692A patent/EP0087728B1/de not_active Expired
- 1983-02-22 AT AT83101692T patent/ATE16219T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-02-22 DE DE8383101692T patent/DE3361048D1/de not_active Expired
- 1983-02-23 ES ES520012A patent/ES8404515A1/es not_active Expired
- 1983-02-24 AU AU11835/83A patent/AU566742B2/en not_active Ceased
- 1983-02-24 JP JP58028645A patent/JPH0616044B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1983-02-24 CA CA000422302A patent/CA1199270A/en not_active Expired
- 1983-02-24 US US06/469,238 patent/US4569919A/en not_active Expired - Lifetime
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JPS63292062A (ja) * | 1987-05-08 | 1988-11-29 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 体液中の血清タンパク質の定量的測定法およびそれに用いられる試薬 |
JPH01118769A (ja) * | 1987-05-23 | 1989-05-11 | Behringwerke Ag | 抗原特異的な抗体の一段階測定法およびそれに適する試薬 |
Also Published As
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