JP2018502581A5

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Publication number: JP2018502581A5
Application number: JP2017536568A
Authority: JP
Filing date: 2016-01-06
Publication date: 2019-01-10

Description

前記目的を達成するために、本発明は、下記で選択された一つ以上の特性を有するルテリオンを提供する：
（ａ）５０〜８００ｎｍの円形ないし楕円形で、運動性がある；
（ｂ）核酸含有；
（ｃ）免疫化学蛍光染色時ミトコンドリアと類似の反応を示す；
（ｄ）融合（ｆｕｓｉｏｎ）および／または分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）生態様式を示す；
（ｅ）融合がない場合には大きさが５００ｎｍまで成熟して、ＤＮＡ含有類似ミトコンドリアに成熟して、ＳＥＭまたはＴＥＭ電子顕微鏡写真上でミトコンドリアと類似する構造を示す；
（ｆ）エキソソームとは異なる光反応を示す；
（ｇ）ＩＲ照射時または加圧時分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）が発生する；
（ｈ）表面抗原としてＣＤ３３２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３またはＣＤ３９を発現する；
（ｉ）自家蛍光（ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示す；
（ｊ）２００〜４００ｎｍ大きさでＡＴＰを産生する；
（ｋ）二重膜または多重膜構造；
（ｌ）付着性がある；
（ｍ）癌細胞のテロメラーゼ活性抑制；
（ｎ）正常細胞のテロメラーゼ活性化促進；
（ｏ）細胞透過能保有；及び
（ｐ）血液脳関門（ＢＢＢ）透過能保有。

一観点において、本発明は、下記で選択された一つ以上の特性を有する分離されたルテリオンに関する：
（ａ）５０〜８００ｎｍの円形ないし楕円形で、運動性がある；
（ｂ）核酸含有；
（ｃ）免疫化学蛍光染色時ミトコンドリアと類似の反応を示す；
（ｄ）融合（ｆｕｓｉｏｎ）および／または分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）生態様式を示す；
（ｅ）融合がない場合には大きさが５００ｎｍまで成熟して、ＤＮＡ含有類似ミトコンドリアに成熟して、ＳＥＭまたはＴＥＭ電子顕微鏡写真上でミトコンドリアと類似する構造を示す；
（ｆ）エキソソームとは異なる光反応を示す；
（ｇ）ＩＲ照射時または加圧時分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）が発生する；
（ｈ）表面抗原としてＣＤ３３２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３またはＣＤ３９を発現する；
（ｉ）自家蛍光（ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示す；
（ｊ）２００〜４００ｎｍ大きさでＡＴＰを産生する；
（ｋ）二重膜または多重膜構造；
（ｌ）付着性がある；
（ｍ）癌細胞のテロメラーゼ活性抑制；
（ｎ）正常細胞のテロメラーゼ活性化促進；
（ｏ）細胞透過能保有；及び
（ｐ）血液脳関門（ＢＢＢ）透過能保有。

以後、約８００ｎｍのフィルターで濾過された下層部を収集して、プラズマなど内部植物またはエクソソームなど細胞死骸（Ｄｅｂｒｉｓ）ペレットを除去する。以後、再び１４０，０００ｇ以上で遠心分離してペレットが含まれない上澄み液を収集することができる。上澄み液を４００ｎｍのフィルターで濾過して下層部を収集した後、再びＣＤ３３２を染色して運動性を確認することができる。さらに、５００ｎｍのフィルターで濾過して、フィルターの上にかかった上澄み液を集めてルテリオンを収集することができ、ｐＨ１または−９０℃以下の温度で保存することができる。

以後、特定ｐＨ条件および温度条件でルテリオンを保存する段階を追加で含むことができる。例えば、ｐＨ７以下および０℃以下の条件で保存することができる。好ましくは、ｐＨ１〜５および−９０℃〜０℃で保存することができる。本発明の一実施例で、特にｐＨ１〜３の条件で０℃以下の温度で保存する場合、運動性を有するルテリオンを保存することができることを確認した。ルテリオンを保存すると分離効率を向上させることができる。

また、追加増殖段階、例えば分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）誘導段階を含むことができる。２５，０００ｐｓｉ（ｐｏｕｎｄｐｅｒｓｑｕａｒｅｉｎｃｈ）以上の圧力を加えて分裂を誘導することができるが、本発明の一実施例で、特に２５，０００〜３５，０００ｐｓｉの圧力を加えると、分裂が誘導されることを確認した。この時、温度は１０〜２０℃に維持し、保存時使用したｐＨ１〜３条件を維持した。

さらに他の観点において、本発明は、ルテリオンを糖含有培地でｐＨ５〜９（保存時はｐＨ１〜３）および１８〜３０℃の条件で増殖させる段階を含むルテリオンの培養方法に関する。

約８００ｎｍのフィルターで濾過された下層部を収集して、プラズマなど内部植物またはエクソソームなど細胞死骸（Ｄｅｂｒｉｓ）ペレットを除去した後、再び１４０，０００ｇ以上で遠心分離してペレットが含まれない上澄み液を収集した。上澄み液を４００ｎｍのフィルターで濾過して下層部を収集した後、再びＣＤ３３２を染色して運動性を確認した。５００ｎｍのフィルターで濾過して、フィルターの上にかかった上澄み液を集めてルテリオンを収集して、ｐＨ１または−９０℃以下の温度で保存した。

実施例２：ルテリオンの保存
運動性があるルテリオンおよびＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１３３またはＣＤ３３２を表面抗原として含むルテリオンを保存して数を確認した。ＩＲを照射して集まるルテリオンを確認して、ルテリオンに抗−ＣＤ３３２、抗−ＣＤ３９、抗−ＣＤ１３３または抗−ＣＤ７３抗体を結合させて、抗−ＦＩＴＣを結合させて発色が確認されたルテリオン、ミトトラッカーで染色して染色されたルテリオンの数をカウトした。この時、ｐＨ１〜３、０℃以下、−９０〜０℃条件でルテリオンを保存してルテリオン数をカウントした結果をｐＨおよび温度条件により下記の表７および８に示した（＋はカウントされたルテリオンの数を示す）。

表７および８によると、ｐＨ１〜３および−９０〜０℃条件で１〜３ヶ月維持する場合、ルテリオン数に影響せずに保存を維持できることを確認することができる。

実施例４：ルテリオンの特性
（１）構造
実施例１で取得されたルテリオン中約５０〜４００ｎｍの大きさを有するルテリオンを共焦点レーザー走査顕微鏡（ＣｏｎｆｏｃａｌＬａｓｅｒＳｃａｎｎｉｎｇＭｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、Ｚｅｉｓｓ）、透過電子顕微鏡（ＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎＥｌｅｃｔｒｏｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、走査電子顕微鏡（ＳｃａｎｎｉｎｇＥｌｅｃｔｒｏｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、原子力顕微鏡（ＡｔｏｍｉｃＦｏｒｃｅＭｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）および共焦点スキャナ（ＬｅｉｃａＴＣＳ−ＳＰ８）で撮影して、ルテリオンもミトコンドリアと類似するように二重膜または多重膜を有する膜構造として内部クリステ（ｃｒｉｓｔａｅ）構造を完成しなかった状態の構造を有して、ミトコンドリアと同じレーザー波長範囲で観察されることを確認した。また、その形態は円形ないし楕円形であることを観察することができた（図６）。

以上、本発明の内容の特定の部分を詳述したが、当業界における通常の知識を持った者にとって、このような具体的な記述は単なる好適な実施態様に過ぎず、これにより本発明の範囲が制限されることはないという点は明らかである。よって、本発明の実質的な範囲は特許請求の範囲とこれらの等価物により定義されると言える。
[項目１]
下記で選択された一つ以上の特性を有するルテリオン：
（ａ）５０〜８００ｎｍの円形ないし楕円形で、運動性がある；
（ｂ）核酸含有；
（ｃ）免疫化学蛍光染色時ミトコンドリアと類似の反応を示す；
（ｄ）融合（ｆｕｓｉｏｎ）および／または分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）生態様式を示す；
（ｅ）融合がない場合には大きさが５００ｎｍまで成熟して、ＤＮＡ含有類似ミトコンドリアに成熟して、ＳＥＭまたはＴＥＭ電子顕微鏡写真上でミトコンドリアと類似する構造を示す；
（ｆ）エキソソームとは異なる光反応を示す；
（ｇ）ＩＲ照射時または加圧時分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）が発生する；
（ｈ）表面抗原としてＣＤ３３２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３またはＣＤ３９を発現する；
（ｉ）自家蛍光（ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示す；
（ｊ）２００〜４００ｎｍ大きさでＡＴＰを産生する；
（ｋ）二重膜または多重膜構造；
（ｌ）付着性がある；
（ｍ）癌細胞のテロメラーゼ活性抑制；
（ｎ）正常細胞のテロメラーゼ活性化促進；
（ｏ）細胞透過能保有；及び
（ｐ）血液脳関門（ＢＢＢ）透過能保有。
[項目２]
ローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）、ミトトラッカー（Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ）、アクリジンオレンジ（ＡｃｒｉｄｉｎｅＯｒａｎｇｅ）、ＤＡＰＩ、およびヤヌスグリーンＢ（ＪａｎｕｓｇｒｅｅｎＢ）で構成される群から選択される一つ以上の染色剤で染色する場合、陽性に染色される特性を有することを特徴とする項目１に記載のルテリオン。
[項目３]
下記の段階を含むルテリオンの分離方法：
（ａ）植物または食品の水蒸気またはガス振盪抽出物を冷却して取得した凝縮液を０．８〜１．２μｍの空隙を有するフィルターを利用して濾過する段階；
（ｂ）前記濾過された凝縮液を遠心分離する段階；および
（ｃ）前記遠心分離された上澄み液からルテリオンを分離する段階。
[項目４]
前記植物は、表１〜４で選択される薬用植物であることを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目５]
前記植物は、当帰、漆皮およびキウィで構成された群から選択されることを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目６]
前記段階（ａ）の振盪抽出は、植物または食品に溶媒を添加して、５０〜９０℃で気体を利用して間欠的にバブリングさせながら振盪するように進行することを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目７]
前記振盪抽出は、８〜１０時間振盪して、２〜３時間毎に２０〜３０分間バブリングして植物または食品のルテリオンがかたまらないようにすることを特徴とする項目６に記載の分離方法。
[項目８]
前記（ａ）段階で取得された凝縮液にＩＲ光線を照射する段階をさらに含むことを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目９]
前記遠心分離は、１２００〜５０００ｒｐｍで５〜１０分間繰り返し行われることを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１０]
前記段階（ｃ）は、遠心分離された上澄み液に２００〜６００ｕｍ波長のＩＲ光線を照射して運動性を有して集まるルテリオン粒子を分離すること、またはルテリオン表面抗原ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１３３またはＣＤ３３２を認知する結合体との結合の有無を確認してルテリオン粒子を分離することを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１１]
前記分離されたルテリオン粒子を５０ｎｍフィルターで濾過した後、フィルターにかかった部位を収集する段階をさらに含むことを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１２]
２００ｎｍ、４００ｎｍ、６００ｎｍ、８００ｎｍおよび１０００ｎｍのフィルターを順次利用して、それぞれ５０〜２００ｎｍ、２００〜４００ｎｍ、４００〜６００ｎｍ、６００〜８００ｎｍおよび８００〜１０００ｎｍの大きさのルテリオンに分類することをさらに含むことを特徴とする項目１１に記載の分離方法。
[項目１３]
ｐＨ７以下および０℃以下の条件で保存する段階をさらに含むことを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１４]
ｐＨ１〜５および−９０℃〜０℃で保存する段階をさらに含むことを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１５]
２５，０００〜３５，０００ｐｓｉ（ｐｏｕｎｄｐｅｒｓｑｕａｒｅｉｎｃｈ）以上の圧力を加えて分裂を誘導する段階をさらに含むことを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１６]
ｐＨ１〜３および１０〜２０℃で分裂を誘導して増殖させる段階をさらに含むことを特徴とする項目３に記載の分離方法。
[項目１７]
下記の段階を含むルテリオンの分離方法：
（ａ）ルテリオンを含有する抽出物にルテリオン表面抗原に特異的に結合する抗体またはアプタマーが固定された粒子を添加してルテリオンと粒子の結合を誘導する段階；および（ｂ）前記粒子に結合されたルテリオンを回収する段階。
[項目１８]
（ｃ）粒子に結合されたルテリオンからルテリオンのみを分離する段階をさらに含むことを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目１９]
前記ルテリオンを含有する抽出物は、植物抽出物または食品抽出物であることを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２０]
前記ルテリオンを含有する抽出物は、（ｉ）植物または食品の熱水抽出物、（ｉｉ）植物または食品の溶媒抽出物、または（ｉｉｉ）溶媒存在下に植物または食品の加熱によって発生するガスの凝縮液であることを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２１]
前記凝縮液は、下記段階を経て製造されたことを特徴とする項目２０に記載の分離方法：
（ａ）植物または食品に溶媒を添加して、５０〜９０℃で気体を利用して間欠的にバブリングしながら振盪する段階；および
（ｂ）前記振盪によって気化される水蒸気またはガスを捕集した後、冷却させて凝縮液を取得する段階。
[項目２２]
前記ルテリオン表面抗原は、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１３３またはＣＤ３３２であることを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２３]
前記粒子は、磁性粒子、シリカ粒子、量子ドット粒子、ガラス粒子、高分子粒子、繊維粒子および蛍光粒子で構成された群から選択されることを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２４]
前記磁性粒子は、鉄、アルミニウム、コバルト、ニッケル、マンガン、錫、亜鉛、カドミウム、マグネシウム、銅、バリウム、リチウムまたはイットリウムの酸化物で構成された群から選択されることを特徴とする項目２３に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２５]
前記磁性粒子は、炭素および抗体またはアプタマー結合のための官能基で二重コーティングされたことを特徴とする項目２３に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２６]
前記官能基は、アミド基（ａｍｉｄｅｇｒｏｕｐ）、エステル基（ｅｓｔｅｒｇｒｏｕｐ）、アミン基（ａｍｉｎｅｇｒｏｕｐ）およびカルボキシル基（ｃａｒｂｏｘｙｌｇｒｏｕｐ）で構成された群から選択されることを特徴とする項目２５に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２７]
前記粒子の大きさは、１０〜１，０００ｎｍであることを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２８]
前記粒子は、磁性ナノ粒子であり、前記（ｂ）段階は、外部から磁力を加えてルテリオンが結合された磁性ナノ粒子を集めた後、回収することを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目２９]
前記粒子は、蛍光粒子であり、前記（ｂ）段階は、蛍光利用セルソーターを利用してルテリオンが結合された蛍光粒子を回収することを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目３０]
前記粒子は、静電気を帯びた粒子であり、前記（ｂ）段階は、不均一な電場を形成して静電気的引力でルテリオンが結合された粒子を回収することを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目３１]
前記粒子は、イオン性粒子であり、前記（ｂ）段階は、静電気的引力を利用してルテリオンが結合された粒子を回収することを特徴とする項目１７に記載のルテリオンの分離方法。
[項目３２]
項目１に記載のルテリオンに水分を添加してＩＲ光線照射または加圧下に１８〜３０℃で増殖させる段階を含むルテリオンの培養方法。
[項目３３]
項目１に記載のルテリオンを糖含有培地でｐＨ５〜９および１８〜３０℃の条件で増殖させる段階を含むルテリオンの培養方法。
[項目３４]
前記糖は、ラムノース（ｒｈａｍｎｏｓｅ）、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）、ガラクトース（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、フルクトース（ｆｒｕｃｔｏｓｅ）またはキシロース（ｘｙｌｏｓｅ）であることを特徴とする項目３３に記載の培養方法。
[項目３５]
前記培養前および後のルテリオンの大きさは、それぞれ５０〜２００ｎｍおよび３００〜５００ｎｍであることを特徴とする項目３２または項目３３に記載の培養方法。

Claims

下記の特性を有する、ミトコンドリア類似微細物質であるルテリオン：
（ａ）５０〜８００ｎｍの円形ないし楕円形で、運動性がある；
（ｂ）核酸含有；
（ｃ）免疫化学蛍光染色時ミトコンドリアと類似の反応を示す；
（ｄ）融合（ｆｕｓｉｏｎ）および／または分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）生態様式を示す；
（ｅ）融合がない場合には大きさが５００ｎｍまで成熟して、ＤＮＡ含有類似ミトコンドリアに成熟して、ＳＥＭまたはＴＥＭ電子顕微鏡写真上でミトコンドリアと類似する構造を示す；
（ｆ）エキソソームとは異なる光反応を示す；
（ｇ）ＩＲ照射時または加圧時分裂（ｆｉｓｓｉｏｎ）が発生する；
（ｈ）表面抗原としてＣＤ３３２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３またはＣＤ３９を発現する；
（ｉ）自家蛍光（ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示す；
（ｊ）２００〜４００ｎｍ大きさでＡＴＰを産生する；
（ｋ）二重膜または多重膜構造；
（ｌ）付着性がある；
（ｍ）癌細胞のテロメラーゼ活性抑制；
（ｎ）正常細胞のテロメラーゼ活性化促進；
（ｏ）細胞透過能保有；
（ｐ）血液脳関門（ＢＢＢ）透過能保有；および
（ｑ）ローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）、ミトトラッカー（Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ）、アクリジンオレンジ（ＡｃｒｉｄｉｎｅＯｒａｎｇｅ）、ＤＡＰＩ、およびヤヌスグリーンＢ（ＪａｎｕｓｇｒｅｅｎＢ）で構成される群から選択される一つ以上の染色剤で染色する場合、陽性に染色される。
下記の段階を含む、ミトコンドリア類似微細物質であるルテリオンの分離方法：
（ａ）植物または食品の水蒸気またはガス振盪抽出物を冷却して取得した凝縮液を０．８〜１．２μｍの空隙を有するフィルターを利用して濾過する段階；
（ｂ）前記濾過された凝縮液を遠心分離する段階；および
（ｃ）前記遠心分離された上澄み液に２００〜６００ｕｍ波長のＩＲ光線を照射して運動性を有して集まるルテリオン粒子を分離すること、またはＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１３３またはＣＤ３３２といったルテリオン表面抗原を認知する結合体との結合の有無を確認してルテリオンを分離する段階。
前記植物は、表１〜４で選択される薬用植物であることを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
前記植物は、当帰、漆皮およびキウィで構成された群から選択されることを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
前記段階（ａ）の振盪抽出は、植物または食品に溶媒を添加して、５０〜９０℃で気体を利用して間欠的にバブリングさせながら振盪するように進行することを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
前記振盪抽出は、８〜１０時間振盪して、２〜３時間毎に２０〜３０分間バブリングして植物または食品のルテリオンがかたまらないようにすることを特徴とする請求項５に記載の分離方法。
前記（ａ）段階で取得された凝縮液にＩＲ光線を照射する段階をさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
前記遠心分離は、１２００〜５０００ｒｐｍで５〜１０分間繰り返し行われることを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
２００ｎｍ、４００ｎｍ、６００ｎｍ、８００ｎｍおよび１０００ｎｍのフィルターを順次利用して、それぞれ５０〜２００ｎｍ、２００〜４００ｎｍ、４００〜６００ｎｍ、６００〜８００ｎｍおよび８００〜１０００ｎｍの大きさのルテリオンに分類することをさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
ｐＨ７以下および０℃以下の条件で保存する段階をさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
ｐＨ１〜５および−９０℃〜０℃で保存する段階をさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
２５，０００〜３５，０００ｐｓｉ（ｐｏｕｎｄｐｅｒｓｑｕａｒｅｉｎｃｈ）以上の圧力を加えて分裂を誘導する段階をさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
ｐＨ１〜３および１０〜２０℃で分裂を誘導して増殖させる段階をさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の分離方法。
下記の段階を含む、ミトコンドリア類似微細物質であるルテリオンの分離方法：
（ａ）ルテリオンを含有する抽出物にルテリオン表面抗原ＣＤ３３２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３またはＣＤ３９に特異的に結合する抗体またはアプタマーが固定された粒子を添加してルテリオンと粒子の結合を誘導する段階；および（ｂ）前記粒子に結合されたルテリオンを回収する段階。
（ｃ）粒子に結合されたルテリオンからルテリオンのみを分離する段階をさらに含むことを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記ルテリオンを含有する抽出物は、（ｉ）植物または食品の熱水抽出物、（ｉｉ）植物または食品の溶媒抽出物、または（ｉｉｉ）溶媒存在下に植物または食品の加熱によって発生するガスの凝縮液であることを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記凝縮液は、下記段階を経て製造されたことを特徴とする請求項１６に記載の分離方法：
（ａ）植物または食品に溶媒を添加して、５０〜９０℃で気体を利用して間欠的にバブリングしながら振盪する段階；および
（ｂ）前記振盪によって気化される水蒸気またはガスを捕集した後、冷却させて凝縮液を取得する段階。
前記粒子は、磁性粒子、シリカ粒子、量子ドット粒子、ガラス粒子、高分子粒子、繊維粒子および蛍光粒子で構成された群から選択されることを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記磁性粒子は、鉄、アルミニウム、コバルト、ニッケル、マンガン、錫、亜鉛、カドミウム、マグネシウム、銅、バリウム、リチウムまたはイットリウムの酸化物で構成された群から選択されることを特徴とする請求項１８に記載のルテリオンの分離方法。
前記磁性粒子は、炭素および抗体またはアプタマー結合のための官能基で二重コーティングされたことを特徴とする請求項１８に記載のルテリオンの分離方法。
前記官能基は、アミド基（ａｍｉｄｅｇｒｏｕｐ）、エステル基（ｅｓｔｅｒｇｒｏｕｐ）、アミン基（ａｍｉｎｅｇｒｏｕｐ）およびカルボキシル基（ｃａｒｂｏｘｙｌｇｒｏｕｐ）で構成された群から選択されることを特徴とする請求項２０に記載のルテリオンの分離方法。
前記粒子の大きさは、１０〜１，０００ｎｍであることを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記粒子は、磁性ナノ粒子であり、前記（ｂ）段階は、外部から磁力を加えてルテリオンが結合された磁性ナノ粒子を集めた後、回収することを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記粒子は、蛍光粒子であり、前記（ｂ）段階は、蛍光利用セルソーターを利用してルテリオンが結合された蛍光粒子を回収することを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記粒子は、静電気を帯びた粒子であり、前記（ｂ）段階は、不均一な電場を形成して静電気的引力でルテリオンが結合された粒子を回収することを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
前記粒子は、イオン性粒子であり、前記（ｂ）段階は、静電気的引力を利用してルテリオンが結合された粒子を回収することを特徴とする請求項１４に記載のルテリオンの分離方法。
請求項１に記載のルテリオンに水分を添加してＩＲ光線照射または加圧下に１８〜３０℃で増殖させる段階を含むルテリオンの培養方法。
請求項１に記載のルテリオンを糖含有培地でｐＨ５〜９および１８〜３０℃の条件で増殖させる段階を含むルテリオンの培養方法。
前記糖は、ラムノース（ｒｈａｍｎｏｓｅ）、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）、ガラクトース（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、フルクトース（ｆｒｕｃｔｏｓｅ）またはキシロース（ｘｙｌｏｓｅ）であることを特徴とする請求項２８に記載の培養方法。
前記培養前および後のルテリオンの大きさは、それぞれ５０〜２００ｎｍおよび３００〜５００ｎｍであることを特徴とする請求項２７または請求項２８に記載の培養方法。