JP2018500012A5 - - Google Patents

Description

本発明のその他の特徴、目的および利益は、以下の詳細な説明において明らかである。しかし、当該詳細な説明は、本発明の実施形態を示しているが、それらは例示の目的で提示されているものであり、限定を目的として提示されていないことを理解されたい。本発明の範囲内のさまざまな変更および修正は、詳細説明から当業者には明らかとなるであろう。
例えば、本発明の実施形態の一部の例が以下に示される。
（項目１）
内因性齧歯類CD47ヌクレオチド配列およびヒトCD47ヌクレオチド配列を備えるCD47遺伝子を備える齧歯類であって、前記CD47遺伝子が内因性齧歯類CD47プロモーターと動作可能なように連結されている、前記齧歯類。
（項目２）
前記内因性齧歯類CD47ヌクレオチド配列が、内因性齧歯類CD47遺伝子のエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンを備えている、項目1に記載の齧歯類。
（項目３）
前記内因性齧歯類CD47遺伝子のエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンが、表3に示されるマウスCD47遺伝子の対応するエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンに対し、少なくとも90%、または少なくとも95%同一である、項目2に記載の齧歯類。
（項目４）
前記ヒトCDヌクレオチド配列がヒトCD47ポリペプチドのアミノ酸19〜127、19〜141、または16〜292をコードする、項目1〜3のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目５）
前記ヒトCDヌクレオチド配列がヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7を備える、項目1〜3のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１２）
前記ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7が、表3に示されるヒトCD47遺伝子の対応するエクソン2〜7に対し、同一であるか、または少なくとも90%もしくは95％同一である、項目5に記載の齧歯類。
（項目１３）
ヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分および任意選択で膜貫通部分、ならびに内因性齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分を備えるCD47ポリペプチドを発現する齧歯類。
（項目１４）
前記CD47ポリペプチドが齧歯類シグナルペプチドとともに前記齧歯類の細胞において翻訳される、項目13に記載の齧歯類。
（項目２１）
前記内因性齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分が、表3に示されるマウスCD47ポリペプチドの細胞質内尾部と同一であるか、または少なくとも90%もしくは少なくとも95％同一であるアミノ酸を有している細胞質内尾部を備える、項目13に記載の齧歯類。
（項目２２）
前記ヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分が、ヒトCD47ポリペプチドの19〜141残基に相当するアミノ酸を備える、項目13〜14および21のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２９）
前記ヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分が、表3に示されるヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分の対応するアミノ酸配列と同一であるか、または少なくとも90%もしくは少なくとも95％同一であるアミノ酸配列を備える、項目13〜14、および21のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目３０）
前記齧歯類が、ヒトSIRPαポリペプチドの細胞外部分と、内因性齧歯類SIRPαポリペプチドの細胞内部分を備えるSIRPαポリペプチドをコードするSIRPα遺伝子をさらに備えており、この場合において、前記SIRPα遺伝子が任意選択で内因性齧歯類SIRPα遺伝子のエクソン1、5、6、7および8、ならびにヒトSIRPα遺伝子のエクソン2〜4を備えている、先行項目のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目３１）
前記齧歯類がラットまたはマウスである、先行項目のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目３２）
先行項目のいずれか一項に記載の齧歯類の遺伝子によりコードされるCD47ポリペプチド。
（項目３３）
前記コードされるポリペプチドが、配列番号17、配列番号18、配列番号19、または配列番号20と同一であるか、または少なくとも90%もしくは少なくとも95%同一であるアミノ酸配列を備えている、項目32に記載のCD47ポリペプチド。
（項目３４）
そのゲノムが、内因性齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分に連結されたヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分、および任意選択で膜貫通部分をコードするCD47遺伝子を備える、単離された齧歯類細胞または組織。
（項目３５）
前記CD47遺伝子が、齧歯類のCD47プロモーターに動作可能に連結されている、項目34に記載の単離された細胞または組織。
（項目３６）
前記CD47遺伝子が、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7を備え、ならびに任意選択で内因性齧歯類CD47遺伝子のエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンを備えている、項目34もしくは35に記載の単離された細胞または組織。
（項目３７）
前記細胞または組織が、ヒトSIRPαポリペプチドの細胞外部分と、内因性齧歯類SIRPαポリペプチドの細胞内部分を備えたSIRPαポリペプチドをコードするSIRPα遺伝子をさらに備えている、項目34〜36のいずれか一項に記載の単離された齧歯類細胞または組織。
（項目３８）
前記齧歯類細胞または組織が、マウス細胞もしくはマウス組織、またはラット細胞もしくはラット組織である、項目34〜37のいずれか一項に記載の単離された齧歯類細胞または組織。
（項目３９）
そのゲノムが、内因性齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分に連結されたヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分、および任意選択で膜貫通部分をコードするCD47遺伝子を備えている、齧歯類胚性幹細胞。
（項目４０）
前記CD47遺伝子が、内因性齧歯類CD47プロモーターに動作可能に連結された、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7、ならびに任意選択で内因性齧歯類CD47遺伝子のエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンを備えている、項目39に記載の齧歯類胚性幹細胞。
（項目４３）
前記齧歯類胚性幹細胞のゲノムが、ヒトSIRPαポリペプチドの細胞外部分、および内因性齧歯類SIRPαポリペプチドの細胞内部分を備えるSIRPαポリペプチドをコードするSIRPα遺伝子をさらに備えており、この場合において、前記SIRPα遺伝子は任意選択で内因性齧歯類SIRPα遺伝子のエクソン1、5、6、7および8、ならびにヒトSIRPα遺伝子のエクソン2〜4を備えている、項目39〜40のいずれか一項に記載の齧歯類胚性幹細胞。
（項目４４）
前記齧歯類胚性幹細胞がマウスまたはラットの胚性幹細胞である、項目39、40、または43のいずれか一項に記載の齧歯類胚性幹細胞。
（項目４５）
項目39〜40および43〜44のいずれか一項に記載の胚性幹細胞から生成される齧歯類胚。
（項目４６）
前記胚は、マウスまたはラットの胚である、項目45に記載の齧歯類胚。
（項目４７）
前記改変が、
(a) 齧歯類胚性幹細胞の内因性齧歯類CD47遺伝子座にゲノム断片を挿入することであって、前記ゲノム断片は前記ヒトCD47ポリペプチドの前記細胞外部分および任意選択で前記膜貫通部分をコードするヌクレオチド配列を備えており、それにより前記内因性齧歯類CD47遺伝子座で前記ヒト化CD47遺伝子を形成すること、
(b)(a)のヒト化CD47遺伝子を備える齧歯類胚性幹細胞を得ること、および
(c)(b)の齧歯類胚性幹細胞を使用して齧歯類を作製すること、
を含む、項目109に記載の方法。
（項目４８）
前記ヒト化CD47ポリペプチドが、ヒトCD47ポリペプチドの19〜127、19〜141、19〜292または16〜292残基に相当するアミノ酸を備えている、項目47に記載の方法。
（項目４９）
前記ヌクレオチド配列がヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7を備えている、項目47または48のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記ヒト化CD47遺伝子が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンを備えている、項目47〜49および109のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記方法が、（a）の齧歯類胚性幹細胞の内因性SIRPα遺伝子へゲノム断片を挿入する工程をさらに含み、前記ゲノム断片は、ヒトSIRPαポリペプチドの全部または一部をコードするヌクレオチド配列を備えており、この場合において、任意選択で前記ゲノム断片がヒトSIRPα遺伝子のエクソン2〜4を備えている、項目47〜49、51および109のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
ヒトSIRPαポリペプチドの全部または一部をコードするヌクレオチド配列を備える前記ゲノム断片が、内因性CD47遺伝子への挿入の前に、（a）の齧歯類胚性幹細胞の内因性SIRPα遺伝子へと挿入される、項目52に記載の方法。
（項目５４）
前記方法が、第二の齧歯類と（c）の齧歯類を交配させることをさらに含み、前記第二の齧歯類はヒトSIRPαポリペプチドの細胞外部分と内因性齧歯類SIRPαポリペプチドの細胞内部分を備えるSIRPαポリペプチドをコードするSIRPα遺伝子を備えるゲノムを有しており、この場合において、任意選択で前記SIRPα遺伝子が内因性SIRPα遺伝子のエクソン1、5、6、7および8、ならびにヒトSIRPα遺伝子のエクソン2〜4を備えている、項目47〜49、51および109のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目47〜49、51〜54および109のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
項目47〜49、51〜55および109のいずれか一項に記載の方法から取得可能な齧歯類。
（項目５７）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目56に記載の齧歯類。
（項目６９）
ヒト細胞を齧歯類に生着させる方法であって、
（a）項目1〜5、12〜14、21〜22、および29〜31のいずれか一項に記載の齧歯類を提供する工程、および
（b）1つ以上のヒト細胞を前記齧歯類に移植する工程、
を含む、前記方法。
（項目７０）
（c）前記齧歯類における前記1つ以上のヒト細胞の生着を分析する工程、をさらに含む項目69に記載の方法。
（項目７２）
前記ヒト細胞が造血幹細胞である、項目69〜70のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記ヒト細胞が、静脈内、腹腔内、または皮下に移植される、項目69〜70、および72のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
ヒト細胞を標的とする薬剤の治療有効性を評価する方法であって、前記方法が、
項目1〜5、12〜14、21〜22、および29〜31のいずれか一項に記載の齧歯類を提供すること、
前記齧歯類に1つ以上のヒト細胞を移植すること、
前記齧歯類に薬剤候補を投与すること、および
前記齧歯類中のヒト細胞をモニターし、前記薬剤候補の治療有効性を決定すること、
を含む、前記方法。
（項目７７）
前記ヒト細胞が、癌細胞であり、前記薬剤候補が、抗癌剤候補である、項目76に記載の方法。
（項目７８）
前記薬剤候補が、抗体である、項目77に記載の方法。
（項目７９）
前記齧歯類が、ヒト免疫細胞をさらに備える、項目78に記載の方法。
（項目８０）
前記薬剤候補が、ヒトCD47、および移植されたヒト癌細胞上の抗原に結合する二特異性抗体である、項目79に記載の方法。
（項目８１）
（a）そのゲノムが、内因性齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分に連結されたヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分をコードするCD47遺伝子を含み、この場合において前記CD47遺伝子は内因性齧歯類CD47プロモーターに動作可能に連結されている、1つ以上の齧歯類細胞を提供する工程、
（b）工程（a）の前記1つ以上の齧歯類の細胞と、標識基質をインキュベートする工程、
および
（c）工程（b）の前記1つ以上の齧歯類の細胞による、前記標識基質の貪食を測定する工程、
を含む方法。
（項目８３）
前記CD47遺伝子が、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7を備え、ならびに内因性齧歯類CD47遺伝子のエクソン1、およびエクソン7の下流のエクソンを備えている、項目81に記載の方法。
（項目８５）
前記基質が、蛍光標識されているか、または抗体で標識されており、および任意選択で前記基質が1つ以上の赤血球、1つ以上の細菌細胞、1つ以上の腫瘍細胞、抗原、または細胞表面上に抗原を発現する1つ以上の細胞である、項目81または83のいずれか一項に記載の方法。
（項目９０）
前記工程（a）の1つ以上の齧歯類細胞のゲノムが、ヒトSIRPαポリペプチドの細胞外部分、および内因性齧歯類SIRPαポリペプチドの細胞内部分を備えるSIRPαポリペプチドをコードするSIRPα遺伝子をさらに備え、任意選択でこの場合において、前記SIRPα遺伝子がヒトSIRPα遺伝子のエクソン2〜4、ならびに内因性齧歯類SIRPα遺伝子のエクソン1およびエクソン5〜8を備えている、項目81、83および85のいずれか一項に記載の方法。
（項目９２）
前記工程（a）の1つ以上の細胞が、マウスまたはラットの細胞である、項目81、83、85および90のいずれか一項に記載の方法。
（項目９９）
ヒトCD47を標的とする薬剤の薬物動態を評価する方法であって、前記方法が、
項目1〜5、12〜14、21〜22、および29〜31のいずれか一項に記載の齧歯類に前記薬剤を投与する工程、および
ヒトCD47を標的とする前記薬剤の1つ以上の薬物動態特性、薬剤の標的毒性に関連した1つ以上のパラメーター、または薬剤の標的外毒性に関連した1つ以上のパラメーターを決定
するためのアッセイを行う工程、
を含む、前記方法。
（項目１０２）
前記ヒトCD47を標的とする薬剤が、CD47拮抗薬またはCD47作動薬である、項目99に記載の方法。
（項目１０３）
前記CD47拮抗薬が、抗CD47抗体である、項目102に記載の方法。
（項目１０５）
前記薬剤が、抗CD47抗体であり、前記アッセイが、前記齧歯類における前記抗体の薬物動態的クリアランスを決定する、項目99に記載の方法。
（項目１０６）
（a）項目1〜5、12〜14、21〜22、および29〜31のいずれか一項に記載の齧歯類を提供すること、
（b）前記齧歯類から赤血球を単離すること、
（c）ヒトCD47タンパク質の調節物質候補の存在下で、前記単離された赤血球をインキュベートすること、および
（d）前記調節物質候補が前記赤血球の凝集を誘導するかどうかを評価すること、
を含む方法。
（項目１０７）
前記調節物質候補が抗体である、項目106に記載の方法。
（項目１０８）
前記評価が、前記調節物質候補が前記赤血球に凝集を誘導する濃度を決定することを含む、項目106または107のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０９）
齧歯類を提供する方法であって、前記方法が、内因性CD47ポリペプチドの細胞内部分に連結されたヒトCD47ポリペプチドの細胞外部分、および任意選択で膜貫通部分を備えるヒト化CD47ポリペプチドをコードするヒト化CD47遺伝子を備えるよう、齧歯類のゲノムを改変することを含む、前記方法。

Claims (23)

1. ヒト化CD47遺伝子を備えるゲノムを有する齧歯類であって、
   前記ヒト化CD47遺伝子は、ヒトCD47ポリペプチドの一部および齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分を備えるヒト化CD47ポリペプチドをコードし；
   前記ヒトCD47ポリペプチドの前記一部は、ヒトCD47ポリペプチドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを備え、そして、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7によってコードされ；そして
   前記ヒト化CD47遺伝子は、齧歯類CD47プロモーターに動作可能なように連結されている、齧歯類。
2. 前記齧歯類CD47ポリペプチドの前記細胞内部分が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン7の下流のエクソンによってコードされている、請求項1に記載の齧歯類。
3. 前記ヒト化CD47遺伝子が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン1をさらに備える、請求項1または2に記載の齧歯類。
4. 前記ヒト化CD47遺伝子が、内因性齧歯類CD47遺伝子座における内因性齧歯類CD47遺伝子のエクソン2〜7を備えるゲノム断片の、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7を備えるゲノム断片による置き換えによって形成される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の齧歯類。
5. 前記齧歯類が、ヒトSIRPαポリペプチドの細胞外部分と、内因性齧歯類SIRPαポリペプチドの細胞内部分とを備えるSIRPαポリペプチドをコードするSIRPα遺伝子をさらに備え、前記SIRPαポリペプチドはCD47と相互作用する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の齧歯類。
6. 前記SIRPα遺伝子が内因性齧歯類SIRPα遺伝子のエクソン1、5、6、7および8、ならびにヒトSIRPα遺伝子のエクソン2〜4を備えている、請求項5に記載の齧歯類。
7. 前記齧歯類がラットまたはマウスである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の齧歯類。
8. ヒト化CD47遺伝子を備えるゲノムを有する単離された齧歯類細胞または組織であって、
   前記ヒト化CD47遺伝子は、ヒトCD47ポリペプチドの一部および齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分を備えるヒト化CD47ポリペプチドをコードし；
   前記ヒトCD47ポリペプチドの前記一部は、ヒトCD47ポリペプチドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを備え、そして、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7によってコードされ；そして
   前記ヒト化CD47遺伝子は、齧歯類CD47プロモーターに動作可能なように連結されている、単離された齧歯類細胞または組織。
9. 前記齧歯類CD47ポリペプチドの前記細胞内部分が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン7の下流のエクソンによってコードされている、請求項8に記載の単離された齧歯類細胞または組織。
10. 前記ヒト化CD47遺伝子が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン1をさらに備える、請求項8または9に記載の単離された齧歯類細胞または組織。
11. 前記齧歯類細胞または組織が、マウス細胞もしくはマウス組織、またはラット細胞もしくはラット組織である、請求項8〜10のいずれか一項に記載の齧歯類細胞または組織。
12. 前記単離された細胞が、マウス胚性幹細胞またはラット胚性幹細胞である、請求項8〜11のいずれか一項に記載の齧歯類細胞または組織。
13. 請求項12に記載の胚性幹細胞から生成される齧歯類胚。
14. 齧歯類モデルの作製における、請求項12に記載の胚性幹細胞の使用。
15. 齧歯類を提供する方法であって、前記方法は、
    齧歯類ゲノムを、改変されたゲノムがヒト化CD47遺伝子を備えるように改変することであって、
    前記ヒト化CD47遺伝子は、ヒトCD47ポリペプチドの一部および齧歯類CD47ポリペプチドの細胞内部分を備えるヒト化CD47ポリペプチドをコードし；
    前記ヒトCD47ポリペプチドの前記一部は、ヒトCD47ポリペプチドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを備え、そして、ヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7によってコードされ；そして
    前記ヒト化CD47遺伝子は、齧歯類CD47プロモーターに動作可能なように連結されている、こと；および
    前記改変されたゲノムを備える齧歯類を得ること
    を含む、方法。
16. 前記改変することが、
    (a)齧歯類胚性幹細胞の内因性齧歯類CD47遺伝子座にゲノム断片を挿入することであって、前記ゲノム断片はヒトCD47遺伝子のエクソン2〜7を備えており、それによりヒト化CD47遺伝子を前記内因性齧歯類CD47遺伝子座において形成すること、
    (b)(a)のヒト化CD47遺伝子を備える齧歯類胚性幹細胞を得ること、および
    (c)(b)の齧歯類胚性幹細胞を使用して齧歯類を作製すること
    を含む、請求項15に記載の方法。
17. 前記齧歯類CD47ポリペプチドの前記細胞内部分が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン7の下流のエクソンによってコードされている、請求項15または16に記載の方法。
18. 前記ヒト化CD47遺伝子が、齧歯類CD47遺伝子のエクソン1をさらに備える、請求項15〜17のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記齧歯類がマウスまたはラットである、請求項15〜18のいずれか一項に記載の方法。
20. ヒト細胞の生着を評価する方法であって、前記方法は、請求項1〜7のいずれか一項に記載の齧歯類におけるヒト細胞の生着を評価することを含む、方法。
21. 前記ヒト細胞が造血幹細胞である、請求項20に記載の方法。
22. ヒト細胞を標的とする薬剤の治療有効性を評価する方法であって、前記方法は、
    一つ以上のヒト細胞が移植されている請求項1〜7のいずれか一項に記載の齧歯類に薬剤候補を投与すること、および
    前記齧歯類中のヒト細胞をモニターし、前記薬剤候補の治療有効性を決定すること
    を含む、方法。
23. ヒトCD47タンパク質の調節物質候補が赤血球の凝集を誘導するかを評価する方法であって、前記方法は、
    請求項1〜7のいずれか一項に記載の齧歯類から単離された赤血球を、前記調節物質候補の存在下でインキュベートすること；および
    前記調節物質候補が前記赤血球の凝集を誘導するかどうかを評価すること
    を含む、方法。