JP2018105716A - ラテックス粒子分散液の保管方法 - Google Patents

Abstract

【課題】分散液中における凝集体の経時的な発生を抑制でき、保管後のラテックス粒子を用いても、標的物質を高感度で検出できる新たな技術を提供すること。
【解決手段】アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液を容器中に保管する方法であって、前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合を、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）として容器中に保管することを特徴とする、保管方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、ラテックス粒子分散液の保管方法、容器詰分散液及び当該容器詰分散液を備えるキットに関する。

抗原抗体反応を利用した免疫凝集法が、臨床検査、生化学研究等の種々の分野で広く活用されている。とりわけ、ラテックス凝集法に代表される担体を用いる免疫凝集法は、担体を使用せずに凝集反応を検出する方法に比べて検出感度等が良好であるため、免疫凝集法の主流となっている。

特開２０００−８１４３６号公報

上記ラテックス凝集法は、一般に、ラテックス粒子が分散媒に分散したラテックス粒子分散液中のラテックス粒子を感作し、これを用いて行われる。
しかしながら、製造後の処理や保管環境の変化等によりラテックス粒子分散液中のラテックス粒子が凝集する場合がある（特許文献１）。一度発生した凝集体は再分散させることが困難であり、このような凝集体が発生したものは、診断薬として使用しても凝集体に起因する偽陽性が検出される等してしまうため、診断薬として使用できなくなる。
また、ラテックス凝集法による診断は、ラテックスの凝集により陽性と陰性とを区別するものであるため、ラテックス粒子は微量の標的物質（抗原等）との結合でも容易に凝集するように設計されている。そのため、ラテックス粒子の設計変更等によって分散性を高くすると感度が低下する可能性がある。
したがって、本発明が解決しようとする課題は、分散液中における凝集体の経時的な発生を抑制でき、保管後のラテックス粒子を用いても、標的物質を高感度で検出できる新たな技術を提供することである。

そこで、本発明者が、ラテックス粒子分散液中における凝集体の経時的な発生について鋭意検討したところ、容器の内容積からラテックス粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合と、ラテックス粒子分散液中における凝集体の経時的な発生との間に、一定の関連があることが判明した。
そして、本発明者は更に鋭意検討した結果、容器の内容積からラテックス粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合が０〜２５％（ｖ／ｖ）という特定の割合となるように、ラテックス粒子分散液を容器中に保管することによって、分散液中における凝集体の経時的な発生を抑制でき、保管後のラテックス粒子を用いても、標的物質を高感度で検出できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、以下の＜１＞〜＜１１＞を提供するものである。

＜１＞ アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液を容器中に保管する方法であって、前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合を、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）として容器中に保管することを特徴とする、保管方法（以下、本発明の保管方法ともいう）。

＜２＞ １〜４５℃の範囲で保管するものである、＜１＞に記載の保管方法。

＜３＞ 前記粒子分散液の２５℃におけるｐＨが３〜１２である、＜１＞又は＜２＞に記載の保管方法。

＜４＞ 前記空隙部の体積の割合が、前記容器の内容積に対して０〜７．５％（ｖ／ｖ）である、＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の保管方法。

＜５＞ 前記粒子分散液が、アニオン界面活性剤を更に含有する、＜１＞〜＜４＞のいずれかに記載の保管方法。

＜６＞ 前記ラテックス粒子の表面荷電量が、０．１５ｍｍｏｌ／ｇ以上である、＜１＞〜＜５＞のいずれかに記載の保管方法。

＜７＞ 前記容器が、前記粒子分散液が収容されるとともに前記粒子分散液の減少に伴いしぼみ変形する可撓性に富む収容部を備える容器である、＜１＞〜＜６＞のいずれかに記載の保管方法。

＜８＞ 前記容器が、前記空隙部の体積の割合を一定に保つ機能を有する容器である、＜１＞〜＜７＞のいずれかに記載の保管方法。

＜９＞ アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液が、容器に収容されてなる容器詰分散液であって、前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合が、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）である、容器詰分散液（以下、本発明の容器詰分散液ともいう）。

＜１０＞ 前記粒子分散液に含まれる粒子を０．８〜１００μｍの粒径範囲で測定したときの円相当径（個数基準）のＣＶ値が５０％以下である、＜９＞に記載の容器詰分散液。

＜１１＞ ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、＜９＞又は＜１０＞に記載の容器詰分散液を備える、キット（以下、本発明のキットともいう）。

本発明の保管方法及び容器詰分散液によれば、分散液中における凝集体の経時的な発生を抑制でき、保管後のラテックス粒子を用いても、標的物質を高感度で検出できる。

〔保管方法〕
本発明の保管方法は、アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液を容器中に保管する方法であって、前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合（以下、「空隙率」ともいう）を、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）として容器中に保管することを特徴とするものである。

（空隙率）
本発明の保管方法は、容器の内容積１００％に対して、空隙率を０〜２５％（ｖ／ｖ）として容器中に保管するものである。空隙率が２５％（ｖ／ｖ）を超えると、経時的な凝集体の発生が増大し、保管後のラテックス粒子を用いて標的物質の検出を行った場合に感度低下が生じやすくなる。
上記空隙率としては、本発明の所望の効果を高める点で、０〜２０％（ｖ／ｖ）が好ましく、０〜１５％（ｖ／ｖ）がより好ましく、０〜１２．５％（ｖ／ｖ）が更に好ましく、０〜１０％（ｖ／ｖ）が更に好ましく、０〜７．５％（ｖ／ｖ）が更に好ましく、０〜５％（ｖ／ｖ）が特に好ましい。特に、空隙率を７．５％（ｖ／ｖ）以下又は５％（ｖ／ｖ）以下とすることにより、本発明の所望の効果を飛躍的に高めることができ、高温条件下で長期間保管した場合でも凝集体が発生しにくくなる。
なお、本発明の保管方法は、未開封の容器中で空隙率を０〜２５％（ｖ／ｖ）として保管すること、開封後の容器中で空隙率を０〜２５％（ｖ／ｖ）として保管することのいずれをも包含するものである。

本発明の保管方法において、保管温度は、好ましくは１〜４５℃の範囲、より好ましくは２〜４０℃の範囲、更に好ましくは２〜３０℃の範囲、特に好ましくは３〜２７℃の範囲であるが、本発明の保管方法によれば、保管温度が常温を超える温度（例えば３０℃以上）でも、凝集体の発生を抑えることが可能である。

（体外診断用ラテックス粒子）
本発明で用いる粒子分散液に含まれるラテックス粒子は、アリール基を有するモノマー（以下、モノマー（ａ）ともいう）に由来するモノマー単位を含む重合体を含有するものである。上記ラテックス粒子は、合成高分子系ポリマー粒子でも天然高分子系ポリマー粒子でもよい。
モノマー（ａ）としては、フェニル基を有するモノマー、ナフチル基を有するモノマーが挙げられ、１種を単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。フェニル基を有するモノマーとしては、スチレン系モノマーが好ましい。フェニル基を有するモノマーの具体例としては、スチレン、α−メチルスチレン、アミノスチレン、２−メチルスチレン、４−メチルスチレン、４−クロロスチレン、４−ビニル安息香酸、ジビニルベンゼン、ビニルトルエン等が挙げられる。また、ナフチル基を有するモノマーとしては、ナフチル基を有する不飽和モノマーが好ましい。ナフチル基を有するモノマーの具体例としては、１−ビニルナフタレン、２−ビニルナフタレン、（メタ）アクリル酸１−ナフチル、（メタ）アクリル酸２−ナフチル等が挙げられる。これらの中でも、モノマー（ａ）としては、スチレン系モノマーが好ましく、スチレンが特に好ましい。

モノマー（ａ）に由来するモノマー単位の含有量は、全モノマー単位に対して、７０〜１００質量％である。当該含有量が７０質量％未満であると、検出感度が大幅に低下する。モノマー（ａ）に由来するモノマー単位の含有量は、本発明の所望の効果を高める観点からは、全モノマー単位に対して、好ましくは７５〜９９．８質量％、より好ましくは８０〜９９．５質量％、更に好ましくは８５〜９７質量％、特に好ましくは９０〜９５質量％である。
なお、重合体中の各モノマー単位の含有量は、ＮＭＲ等により測定することができる。

また、上記重合体は、モノマー（ａ）以外のモノマー（以下、モノマー（ｂ）ともいう）に由来するモノマー単位を含んでいてもよい。
モノマー（ｂ）としては、（メタ）アクリル酸、イタコン酸、無水マレイン酸、クロトン酸、これらの塩等の不飽和カルボン酸モノマー、不飽和無水カルボン酸モノマー又はそれらの塩；２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、イソプレンスルホン酸、スチレンスルホン酸、ジビニルベンゼンスルホン酸、２−メチルスチレンスルホン酸、４−メチルスチレンスルホン酸、これらの塩等の不飽和スルホン酸モノマー又はその塩；

（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロプル（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリロイルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドのメチルクロライド４級塩、ダイアセトンアクリルアミド、Ｎ−ビニルアセトアミド等の（メタ）アクリルアミドモノマー；

（メタ）アクリル酸メトキシエチル、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロピル、（メタ）アクリル酸ラウリル、（メタ）アクリル酸シクロヘキシル、（メタ）アクリル酸イソボルニル、（メタ）アクリル酸ベンジル、グリセロール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等の（メタ）アクリレートモノマー；

アクロレイン等の不飽和アルデヒドモノマーの他、アリルアミン、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン等が挙げられ、１種を単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。

これらの中でも、モノマー（ｂ）としては、不飽和カルボン酸モノマー、不飽和無水カルボン酸モノマー、不飽和スルホン酸モノマー又はそれらの塩が好ましい。なお、不飽和カルボン酸モノマーの塩、不飽和無水カルボン酸モノマーの塩、不飽和スルホン酸モノマーの塩は特に限定されるものではなく、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩等が挙げられる。

モノマー（ｂ）に由来するモノマー単位の含有量は、本発明の所望の効果を高める観点からは、全モノマー単位に対して、好ましくは０〜３０質量％、より好ましくは０．２〜２５質量％、更に好ましくは０．５〜２０質量％、更に好ましくは３〜１５質量％、特に好ましくは５〜１０質量％である。

また、上記重合体の含有量は、体外診断薬用ラテックス粒子全質量に対して、好ましくは５０〜１００質量％であり、より好ましくは７０〜１００質量％であり、特に好ましくは９０〜１００質量％である。

上記重合体を含有する体外診断薬用ラテックス粒子は、常法に従い製造できる。具体的には、熱ラジカル発生剤を用いて重合する方法が挙げられる。
熱ラジカル発生剤としては、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）２塩酸塩などの水溶性重合開始剤；２、２’−アゾビス（イソブチロニトリル）、ビス（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキサイドなどの油溶性重合開始剤等が挙げられる。これらの中でも、本発明の所望の効果を高める観点から、水溶性重合開始剤が好ましく、過硫酸カリウムなどの過硫酸塩がより好ましい。熱ラジカル発生剤の使用量は、本発明の所望の効果を高める観点から、全モノマーの合計１００質量部に対して、好ましくは０．０１〜１０質量部、より好ましくは０．１〜５質量部、特に好ましくは０．５〜２質量部である。

本発明で用いる粒子分散液に含まれるラテックス粒子は、体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである。体積平均粒子径は、本発明の所望の効果や製造コストの点で、好ましくは２０〜７５０ｎｍ、より好ましくは５０〜５００ｎｍである。
本明細書において体積平均粒子径は、動的光散乱法で測定した体積平均粒子径を意味し、ナノトラック粒度分布測定装置ＵＰＡ−ＥＸ１５０（日機装（株）社製）、ＡＬＶ５０００（ＡＬＶ社製）、ＦＰＡＲ−１０００（大塚電子（株）製）、ゼータサイザーシリーズ（Ｍａｌｖｅｒｎ社製）等の粒度分布測定装置を用いて測定できる。なお、体積平均粒子径は、粒子分散液を遠心分離し、凝集体を沈降させた後、その上澄み液を用いて上記粒度分布測定装置で測定する方法によっても測定できる。

本発明で用いる粒子分散液に含まれるラテックス粒子の表面荷電量としては、本発明の所望の効果を高める観点からは、０〜２０ｍｍｏｌ／ｇが好ましく、０．０１〜１０ｍｍｏｌ／ｇがより好ましく、０．１５〜５ｍｍｏｌ／ｇが更に好ましく、０．２〜２．５ｍｍｏｌ／ｇが特に好ましい。特に、表面荷電量を０．１５ｍｍｏｌ／ｇ以上又は０．２ｍｍｏｌ／ｇ以上とすることにより、本発明の所望の効果を飛躍的に高めることができ、高温条件下で長期間保管した場合でも凝集体が発生しにくくなる。
本明細書において表面荷電量は、電位差滴定装置で測定した際、得られた電導度曲線の接線を利用して滴定した硫酸量を求め、算出した値である。Ｔｉｔｒｉｎｏシリーズ（メトローム社製）、ＴＩＴＲＡ−Ａ１６（平沼産業(株)社製）、ＡＴ−７１０Ｍ（京都電子工業(株)社製）等の電位差滴定装置を用いて測定できる。

ラテックス粒子は、標的物質と結合可能な物質が担持されたものでも、標的物質と結合可能な物質が担持されていないものでもよい。すなわち、本発明において、ラテックス粒子は、標的物質と結合可能な物質を物理吸着で担持できる未担持のラテックス粒子、標的物質と結合可能な物質を物理吸着で担持したラテックス粒子、標的物質と結合可能な物質を化学結合で担持できる未担持のラテックス粒子、標的物質と結合可能な物質を化学結合で担持したラテックス粒子のいずれをも包含するものである。中でも、本発明の所望の効果を高める観点からは、未担持のラテックス粒子が好ましい。なお、標的物質と結合可能な物質を物理吸着で担持できる未担持のラテックス粒子、標的物質と結合可能な物質を物理吸着で担持したラテックス粒子は、一般に分散液中で凝集体を発生させやすいが、本発明の保管方法によれば、このようなラテックス粒子を用いた場合であっても凝集体の経時的な発生を抑制できる。

標的物質と結合可能な物質としては、標的物質に対する抗原又は抗体が好ましい。例えば、レセプター、酵素、血中タンパク、感染症関連抗原、微生物、ウイルス、ホルモン、環境関係物質（例えば、環境ホルモン等）等の抗原や、これら抗原に対する抗体等が挙げられる。当該抗体は、特定の抗原に対する結合性を有すればよく、抗体のフラグメントも含まれる。

具体的には、抗アンチプラスミン抗体、抗Ｄダイマー抗体、抗ＦＤＰ抗体、抗ｔＰＡ抗体、抗トロンビン・アンチトロンビン複合体抗体、抗ＦＰＡ抗体等の凝固線溶関連検査用抗体又はこれに対する抗原；抗ＢＦＰ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＡＦＰ抗体、抗ＴＳＨ抗体、抗フェリチン抗体、抗ＣＡ１９−９抗体等の腫瘍関連検査用抗体又はこれに対する抗原；抗アポリポタンパク抗体、抗β２−ミクロブロブリン抗体、抗α１―ミクログロブリン抗体、抗免疫グロブリン抗体、抗ＣＲＰ抗体等の血清蛋白関連検査用抗体又はこれに対する抗原；抗ＨＣＧ抗体等の内分泌機能検査用抗体又はこれに対する抗原；抗ジゴキシン抗体、抗リドカイン抗体等の薬物分析用抗体又はこれに対する抗原；ＨＢｓ抗原、ＨＣＶ抗原、ＨＩＶ−１抗原、ＨＩＶ−２抗原、ＨＴＬＶ−１抗原、マイコプラズマ抗原、トキソプラズマ抗原、ストレプトリジンＯ抗原等の感染症関連検査用抗原又はこれに対する抗体；ＤＮＡ抗原、熱変成ヒトＩｇＧ等の自己免疫関連検査用抗原又はこれに対する抗体等が挙げられる。なお、抗体は、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよい。
なお、標的物質と結合可能な物質の担体粒子（未担持粒子）への担持は、疎水−疎水相互作用による物理吸着法、水溶性カルボジイミド系縮合剤等を用いた化学結合法等の常法に従って行えばよい。

また、ラテックス粒子は、ブロッキング剤がコーティングされたものでもよい。ブロッキング剤は、非特異反応をブロッキングできるものであれば特に限定されないが、牛血清アルブミン等の生体由来の水溶性ポリマーや化学合成した水溶性ポリマー等が挙げられる。
なお、ブロッキング剤のコーティングは、ブロッキング剤を含む溶液中にラテックス粒子を分散させた後、遠心分離を行い、上澄み液を除去し再度ラテックス粒子を水又は緩衝液により再分散させる等の常法に従って行えばよい。

ラテックス粒子の含有量（固形分換算）は、粒子分散液全量に対して、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．００５質量％以上、更に好ましくは０．０１質量％以上、更に好ましくは０．０５質量％以上、特に好ましくは０．１質量％以上であり、また、好ましくは５０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下、更に好ましくは３０質量％以下、更に好ましくは２０質量％以下、更に好ましくは１５質量％以下、特に好ましくは１０質量％以下である。

（分散媒）
本発明で用いる粒子分散液における分散媒は、体外診断薬用ラテックス粒子を分散できるものであればよい。例えば、水性媒体が挙げられる。
水性媒体としては、水を含むものが好ましい。水の含有量は、水性媒体全量に対して、好ましくは４０〜１００質量％、より好ましくは６０〜１００質量％、更に好ましくは８０〜１００質量％、特に好ましくは９０〜１００質量％である。
また、水性媒体は、グッド緩衝液、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、アンモニア緩衝液等の緩衝液であってもよい。
なお、水性媒体は、水や緩衝液の他に、メタノール、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコールを含んでいてもよい。
分散媒の含有量としては、粒子分散液全量に対して、５０〜９９．９質量％が好ましく、７０〜９９．９質量％がより好ましく、８０〜９９．９質量％が更に好ましく、８５〜９９．９質量％が特に好ましい。

（界面活性剤）
また、本発明で用いる粒子分散液としては、上記各成分の他に、本発明の所望の効果を高める点で、界面活性剤を含有するものが好ましい。界面活性剤は、１種を単独で使用しても２種以上を組み合わせて使用してもよい。界面活性剤としては、アニオン界面活性剤、非イオン性界面活性剤が挙げられる。これらの中でも、本発明の所望の効果を高める点で、アニオン界面活性剤が好ましく、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸リチウム等の硫酸エステル型アニオン界面活性剤；Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム等のカルボン酸型アニオン界面活性剤がより好ましく、硫酸エステル型アニオン界面活性剤が更に好ましく、ドデシル硫酸ナトリウムが特に好ましい。このような界面活性剤を用いることにより、本発明の所望の効果を飛躍的に高めることができ、高温条件下で長期間保管した場合でも凝集体が発生しにくくなる。
界面活性剤の含有量は、本発明の所望の効果を高める点で、粒子分散液全量に対して、好ましくは０〜１０質量％、より好ましくは０．０１〜１質量％である。

（ｐＨ）
本発明で用いる粒子分散液の２５℃におけるｐＨは、本発明の所望の効果を高める点で、好ましくは３〜１２の範囲であり、より好ましくは５〜１１の範囲であり、更に好ましくは７〜１０の範囲であり、更に好ましくは７超９以下の範囲であり、特に好ましくは８〜９の範囲である。

（容器）
本発明で用いる容器の形状は、本発明で用いる粒子分散液を収容できるものであれば特に限定されるものではなく、例えば、ボトル、パウチ、チューブ、キャニスター、カップ等の形状が挙げられる。なお、これらの容器はいずれも公知の方法で製造可能であり、また、市販品を用いてもよい。
また、容器の材質は特に限定されないが、本発明で用いる粒子分散液が直接接触する部位が、ガラス、樹脂などの金属溶出の少ない材質で構成されているものが好ましい。このような材質の容器は、特開昭５９−０３５０４３号公報等の公知の方法により製造できる。上記樹脂は特に限定されず、単一種のモノマーの重合体であっても、２種以上のモノマーの共重合体であってもよいが、ポリオレフィン系樹脂が好ましい。具体的には、ポリエチレン（低密度ポリエチレン等）、ポリプロピレン、環状ポリオレフィン、ポリテトラフルオロエチレン、エチレン・プロピレン共重合体、エチレン・α−オレフィン共重合体等が挙げられ、１種を単独で使用しても２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、これら樹脂の単層で構成されるものでもこれら樹脂が多層積層されたものでもよい。

本発明で用いる容器としては、所望の空隙率に調整しやすい点で、粒子分散液が収容されるとともに粒子分散液の減少に伴いしぼみ変形する可撓性に富む収容部を備える容器（以下、容器Ａともいう）が好ましく、搬送性の点で、上記収容部（内容器）と当該内容器が内装された外容器を備えるものがより好ましい。また、収容部の開口部を開閉する蓋体を備えるものが好ましい。
容器Ａとしては、以下の容器（１）及び（２）が挙げられ、容器（２）が好ましい。

（容器（１））
（１） 粒子分散液が収容されるとともに粒子分散液の減少に伴いしぼみ変形する可撓性に富む内容器と、当該内容器の外周を取り囲む外容器と、上記内容器の開口部の蓋体及び上記外容器の開口部の蓋体を兼ねる外蓋体とを備える容器。
容器（１）としては、上記内容器が、上記外容器から離脱自在に収納されているものが好ましい。また、上記内容器としては、可撓性ライナー又は袋が挙げられ、上記樹脂で形成されたものが好ましい。また、容器（１）としては、蓋又はカバーなどの保持構造によって、外容器内の所定の位置に上記内容器が固定されているものが好ましい。
また、上記外容器は、剛性又は半剛性を備えるものが好ましく、キャニスタータイプであるのがより好ましい。例えば、上記樹脂や金属で形成されたものが挙げられる。
このような容器（１）としては、東邦シートフレーム株式会社製ＮＯＷＰＡＫ（登録商標）等が挙げられる。

（容器（２））
（２） 空隙部の体積の割合を一定に保つ機能を有する容器。
このような容器としては、例えば、空気弁や逆止弁等により収容部内部への気体の流入を防止するなどして、空隙部の体積の割合を一定に保つように構成されたものが挙げられる。また、容器（２）の好ましい形状は、ボトル、パウチである。
容器（２）としては、所望の空隙率に調整しやすく、搬送性も優れる点で、以下の容器（２−１）が好ましい。
（２−１）粒子分散液が収容されるとともに粒子分散液の減少に伴いしぼみ変形する可撓性に富む内容器と、当該内容器が内装されるとともに内容器との間に外気を吸入する吸気孔が形成された外容器とを有する容器本体を備える容器。
容器（２−１）としては、具体的には、粒子分散液が収容されるとともに粒子分散液の減少に伴いしぼみ変形する可撓性に富む内容器、及び当該内容器が内装されるとともに内容器との間に外気を吸入する吸気孔が形成された外容器を有する容器本体と、当該容器本体の口部に装着され、粒子分散液を吐出する吐出口が形成された吐出キャップと、外部と前記吸気孔とを連通する外気導入孔と、当該外気導入孔と前記吸気孔との連通及びその遮断を切り替える空気弁部とを備える吐出容器が挙げられる。

このような容器（２）としては、特開２０１０−１７９９６１号公報、特開２０１１−２１９１１５号公報、特開２０１３−１４７２９５号公報、特開２０１５−１５５３３３号公報、国際公開第２００９／０７８１９６号パンフレット等に記載の容器が挙げられる。

なお、ラテックス粒子分散液を容器に収容する手段は特に限定されず、容器の形状等に応じて、常法により収容すればよい。

そして、本発明の保管方法によれば、分散液中における凝集体の経時的な発生を抑制でき、保管後のラテックス粒子を用いても、標的物質を高感度で検出できる。
保管後の分散液としては、分散液に含まれる粒子を０．８〜１００μｍの粒径範囲で測定したときの円相当径（個数基準）のモード径（最頻径）が、０〜１．３μｍであるものが好ましく、０〜１．２μｍであるものがより好ましく、０〜１．０μｍであるものが更に好ましく、０〜０．８μｍであるものが更に好ましく、０（不検出）であるものが特に好ましい。
本明細書においてモード径（最頻径）は、フロー式画像解析法で測定したモード径（最頻径）を意味し、具体的には、ＦＰＩＡ−３０００（シメックス社製）等の粒子径・形状分析装置を使用して実施例と同様にして測定した値を云うものとする。
また、保管後の分散液としては、分散液に含まれる粒子を０．８〜１００μｍの粒径範囲で測定したときの上記円相当径（個数基準）のＣＶ値（変動係数）が、５０％以下であるものが好ましく、３０％以下であるものがより好ましい。なお、下限値は、例えば１％である。
なお、ＣＶ値（変動係数）は、上記粒子径・形状分析装置を使用して実施例と同様にして測定すればよい。

〔容器詰分散液〕
本発明の容器詰分散液は、アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液が、容器に収容されてなる容器詰分散液であって、前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合が、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）であることを特徴とするものである。
本発明の容器詰分散液におけるラテックス粒子分散液、容器、空隙率の他、分散液に含まれる粒子を０．８〜１００μｍの粒径範囲で測定したときの円相当径（個数基準）のモード径（最頻径）、ＣＶ値（変動係数）は、上記の保管方法と同様であるのが好ましい。

〔キット〕
本発明のキットは、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、本発明の容器詰分散液を備えるものである。当該キットに具備される場合、ラテックス粒子分散液としては、標的物質と結合可能な物質が担持されたラテックス粒子が分散したものが好ましい。

本発明のキットは、上記容器詰分散液（第２試薬ともいう）に加えて、ブロッキング剤及び免疫凝集促進剤から選ばれる１種以上を含有する試薬（第１試薬ともいう）を備えていてもよい。ブロッキング剤、免疫凝集促進剤としては、牛血清アルブミン等の生体由来の水溶性ポリマーや化学合成した水溶性ポリマー等が挙げられる。また、第１試薬は、上記と同様の水性媒体を含んでいてもよい。
また、本発明のキットは、上記第１試薬及び第２試薬の他に、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体は、標的物質が含まれていない血清、生理食塩水の他、溶剤でもよい。当該溶剤としては上記水性媒体が挙げられる。

本発明のキットは、通常のラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットと同様にして、標的物質の検出方法に使用できる。また、常法に従い標的物質の濃度も測定できる。本発明のキットは、ラテックス免疫凝集比濁法用キットとして有用である。

以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

［調製例１Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
スチレン２５質量部、水４００質量部、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．０６質量部、炭酸水素ナトリウム０．０３５質量部、及び過硫酸カリウム０．７質量部を、容量２リットルの攪拌機付ガラスフラスコに仕込み、窒素雰囲気下、８０℃で２時間重合反応を行った。次いで、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを０．２質量部加え、スチレン７５質量部を２時間かけて滴下した後、さらに８０℃で４時間重合反応を行うことにより、体積平均粒子径が３５５ｎｍである粒子（以下、「粒子１」という。）を得た。なお、体積平均粒子径は、ナノトラック粒度分布測定装置ＵＰＡ−ＥＸ１５０（日機装（株）社製）で測定した（調製例において、以下同じ）。得られた粒子１を透析により精製し、粒子１の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％）を調製した。

［調製例２Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
過硫酸カリウムの使用量を０．５質量部に変更した以外は、調製例１Ａと同様の操作を行い、体積平均粒子径が３５０ｎｍである粒子（以下、「粒子２」という。）を得た。得られた粒子２を透析により精製し、粒子２の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％）を調製した。

［調製例３Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
調製例２Ａで得た粒子２を透析により精製した後、ドデシル硫酸ナトリウム２質量％水溶液を加え、粒子２の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％、ドデシル硫酸ナトリウム濃度０．５質量％）を調製した。

［調製例４Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
過硫酸カリウムの使用量を０．３質量部に変更した以外は、調製例１Ａと同様の操作を行い、体積平均粒子径が３５０ｎｍである粒子（以下、「粒子３」という。）を得た。得られた粒子３を透析により精製した後、ドデシル硫酸ナトリウム２質量％水溶液を加え、粒子３の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％、ドデシル硫酸ナトリウム濃度０．５質量％）を調製した。

［調製例５Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
スチレン２５質量部、水４００質量部、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．０６質量部、炭酸水素ナトリウム０．０３５質量部、及び過硫酸カリウム０．５質量部を、容量２リットルの攪拌機付ガラスフラスコに仕込み、窒素雰囲気下、８０℃で２時間重合反応を行った。次いで、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを０．２質量部加え、スチレン６８質量部、メタクリル酸７質量部を２時間かけて滴下した後、さらに８０℃で４時間重合反応を行うことにより、体積平均粒子径が３５５ｎｍ、表面荷電量が０．２ｍｍｏｌ／ｇである粒子（以下、「粒子４」という。）を得た。なお、表面荷電量は、電位差滴定装置（メトローム社製７９４ Ｂａｓｉｃ Ｔｉｔｒｉｎｏ）で測定した（調製例において、以下同じ）。得られた粒子４を透析により精製し、粒子４の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％）を調製した。

［調製例６Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
メタクリル酸の使用量を３．５質量部に変更した以外は、調製例５Ａと同様の操作を行い、体積平均粒子径が３５０ｎｍ、表面荷電量が０．１ｍｍｏｌ／ｇである粒子（以下、「粒子５」という。）を得た。得られた粒子５を透析により精製し、粒子５の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％）を調製した。

［調製例７Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
メタクリル酸の使用量を１．８質量部に変更した以外は、調製例５Ａと同様の操作を行い、体積平均粒子径が３５０ｎｍ、表面荷電量が０．０５ｍｍｏｌ／ｇである粒子（以下、「粒子６」という。）を得た。得られた粒子６を透析により精製し、粒子６の水分散液（２５℃におけるｐＨ９、固形分濃度１０質量％）を調製した。

［調製例８Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
調製例６Ａで得られた粒子５を透析により精製した後、塩酸によりｐＨを調整し、２５℃におけるｐＨ５、固形分濃度１０質量％の粒子５の水分散液を調製した。

［調製例９Ａ（ラテックス粒子分散液の調製）］
調製例６Ａで得られた粒子５を透析により精製した後、塩酸によりｐＨを調整し、２５℃におけるｐＨ３、固形分濃度１０質量％の粒子５の水分散液を調製した。

［実施例１〜８及び比較例１〜４（ラテックス粒子分散液の保管）］
調製例１Ａ〜９Ａで得たラテックス粒子分散液を、それぞれ下記表１に示す空隙率になるように容器に収容し、表１に示す保管条件で保管した。なお、空隙率は、収容したラテックス粒子分散液の体積と容器の内容積から算出した。

表１中の各記号は、以下に示すとおりである。
Ｓｔ：スチレン由来のモノマー単位の含有量
ＭＡ：メタクリル酸由来のモノマー単位の含有量
ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウム
ＰＥボトル：ポリエチレンボトル（角型、内容量５００ｍＬ）
ボトルＫ：キッコーマン（株）社製「いつでも新鮮 しぼりたて生醤油」のボトルであり、醤油を抜き出し、充分に洗浄してから粒子分散液を充填した。
パウチＹ：ヤマサ醤油（株）社製「鮮度の一滴」のパウチであり、醤油を抜き出し、充分に洗浄してから粒子分散液を充填した。

［試験例１ 顕微鏡観察］
各実施例及び比較例の保管終了後、容器を振ることで粒子分散液を十分に攪拌した後、粒子分散液１０μＬをスライドガラスに滴下し、光学顕微鏡（カートン光学社製ＣＳシリーズ、倍率：４００倍）で観察を行い、以下の基準で評価した。結果を表２に示す。
（評価基準）
◎： 凝集体が確認できなかった
○： 凝集体がわずかに確認されるのみであった
△： 凝集体がはっきりと確認された
×： 大きな凝集体が多く確認された

［試験例２ 粒子径測定］
各実施例及び比較例の保管終了後、容器を振ることで粒子分散液を十分に攪拌した後、粒子分散液５００μＬを秤り取り、この分散液に含まれる粒子について、粒子径・形状分析装置ＦＰＩＡ−３０００（シスメックス社製）を使用しフロー式画像解析法で、０．８〜１００μｍの粒径範囲における円相当径（個数基準）のモード径（最頻径）を測定した。結果を表２に示す。モード径の値が小さいほど、一次粒子の凝集体（二次粒子）の経時的な発生が抑制されているといえる。

［試験例３ ＣＶ値測定］
実施例８と比較例３で保管した粒子分散液について、試験例２で粒子分散液をＦＰＩＡ−３０００（シスメックス社製）で評価した際、円相当径（個数基準）のＣＶ値を測定した。結果を表２に示す。ＣＶ値が小さいほど、一次粒子の凝集体（二次粒子）の経時的な発生が抑制されているといえる。

表２の結果から、空隙率が０〜２５％（ｖ／ｖ）となるように容器中に保管した場合（実施例１〜８）は、分散液中における凝集体の経時的な発生が抑制されることが明らかとなった。

［調製例１−１Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例１の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。具体的手順は以下のとおりである。
実施例１の保管方法で保管した後の粒子分散液（固形分濃度１０質量％）を、５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）で１０倍に希釈した。他方、抗ヒトＣＲＰ抗体の水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を、５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）で２倍に希釈した。
次いで、上記粒子分散液の希釈液６容量部と、上記抗ヒトＣＲＰ抗体の希釈液１容量部とを混合し、３７℃で１時間攪拌した後、遠心により上清を除去した。次いで、ＢＳＡを２％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）を７．５容量部添加して、２５℃で１時間攪拌を行った。さらに、ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）を添加して希釈することにより、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例１−２Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例２の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。具体的手順は以下のとおりである。
実施例２の保管方法で保管した後の粒子分散液（固形分濃度１０質量％）を、５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）で１０倍に希釈した。他方、抗ヒトＣＲＰ抗体の水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を、５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）で２倍に希釈した。
次いで、上記粒子分散液の希釈液６容量部と、上記抗ヒトＣＲＰ抗体の希釈液１容量部とを混合し、３７℃で１時間攪拌した後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の１質量％水溶液を０．０２５容量部加え、さらに３７℃で１時間攪拌した後、遠心により上清を除去した。次いで、ＢＳＡを２％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）を７．５容量部添加して、２５℃で１時間攪拌を行った。さらに、ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）を添加して希釈することにより、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例１−３Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例３の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例１の保管方法で保管した後の粒子分散液を、実施例３の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更した以外は、調製例１−１Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例１−４Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例４の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例２の保管方法で保管した後の粒子分散液を、実施例４の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の１質量％水溶液の使用量を０．０５容量部に変更した以外は、調製例１−２Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例１−５Ｂ及び調製例１−６Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例５、６の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例１の保管方法で保管した後の粒子分散液を、実施例５の保管方法で保管した後の粒子分散液、又は実施例６の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更した以外は、調製例１−１Ｂとそれぞれ同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例１−７Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例７の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例２の保管方法で保管した後の粒子分散液を、実施例７の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の１質量％水溶液の使用量を０．１容量部に変更した以外は、調製例１−２Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例１−８Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
実施例８の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例１の保管方法で保管した後の粒子分散液を、実施例８の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更した以外は、調製例１−１Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例２−１Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
比較例１の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例１の保管方法で保管した後の粒子分散液を、比較例１の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更した以外は、調製例１−１Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例２−２Ｂ及び調製例２−３Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
比較例２、３の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例２の保管方法で保管した後の粒子分散液を、比較例２の保管方法で保管した後の粒子分散液、又は比較例３の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の１質量％水溶液の使用量を０．０５容量部に変更した以外は、調製例１−２Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［調製例２−４Ｂ（感作ラテックス粒子分散液の調製）］
比較例４の保管方法で保管した後のラテックス粒子に、抗ヒトＣＲＰ抗体を感作させ、感作ラテックス粒子分散液を調製した。
すなわち、実施例１の保管方法で保管した後の粒子分散液を、比較例４の保管方法で保管した後の粒子分散液に変更した以外は、調製例１−１Ｂと同様の操作を行い、感作ラテックス粒子分散液（固形分濃度０．１質量％）を調製した。

［試験例３ 免疫ラテックス凝集測定］
上記で調製した各感作ラテックス粒子分散液を用いて、下記に示す測定条件で免疫ラテックス凝集測定を行った。
すなわち、検体３μＬ及び検体希釈液１００μＬを測定セルに加え、これに検体希釈液１００μＬを加えて攪拌した後、５分間保持した。その後、表３に示す感作ラテックス粒子分散液１００μＬを加えて攪拌し、当該攪拌開始から８秒経過時の吸光度と３００秒経過時の吸光度との差（以下、「Δ吸光度」という。）を計測した。結果を表３に示す。

＜測定条件＞
・測定装置 ：日立７１８０型自動分析装置
・測定波長 ：５７０ｎｍ
・測定温度 ：３７℃
・検体 ：６０ｍｇ／ｄＬのＣＲＰ標準液
・検体希釈液 ：ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）

表３の結果から、空隙率が０〜２５％（ｖ／ｖ）となるように容器中に保管した場合（実施例１〜８）は、保管後のラテックス粒子を用いても、標的物質を高感度で検出できることが明らかとなった。
また、感作前に保管しないこと以外は上記と同様にして各感作ラテックス粒子分散液を調製し、感作後に、実施例１〜８、比較例１〜４と同様にして保管した後、吸光度測定を行ったところ、表３の結果と同様の傾向を示した。

Claims (11)

1. アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液を容器中に保管する方法であって、
   前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合を、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）として容器中に保管することを特徴とする、
   保管方法。
2. １〜４５℃の範囲で保管するものである、請求項１に記載の保管方法。
3. 前記粒子分散液の２５℃におけるｐＨが３〜１２である、請求項１又は２に記載の保管方法。
4. 前記空隙部の体積の割合が、前記容器の内容積に対して０〜７．５％（ｖ／ｖ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の保管方法。
5. 前記粒子分散液が、アニオン界面活性剤を更に含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の保管方法。
6. 前記ラテックス粒子の表面荷電量が、０．１５ｍｍｏｌ／ｇ以上である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の保管方法。
7. 前記容器が、前記粒子分散液が収容されるとともに前記粒子分散液の減少に伴いしぼみ変形する可撓性に富む収容部を備える容器である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の保管方法。
8. 前記容器が、前記空隙部の体積の割合を一定に保つ機能を有する容器である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の保管方法。
9. アリール基を有するモノマーに由来するモノマー単位を全モノマー単位に対して７０〜１００質量％含む重合体を含有し、かつ体積平均粒子径が１０〜１０００ｎｍである体外診断薬用ラテックス粒子が分散してなるラテックス粒子分散液が、容器に収容されてなる容器詰分散液であって、
   前記容器の内容積から前記粒子分散液の占める体積を除いた空隙部の体積の割合が、前記容器の内容積に対して０〜２５％（ｖ／ｖ）である、
   容器詰分散液。
10. 前記粒子分散液に含まれる粒子を０．８〜１００μｍの粒径範囲で測定したときの円相当径（個数基準）のＣＶ値が５０％以下である、請求項９に記載の容器詰分散液。
11. ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、請求項９又は１０に記載の容器詰分散液を備える、キット。