CN110806475B - 胶乳微球的保护剂及其应用与产品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物检测领域，具体而言，提供了一种胶乳微球的保护剂及其应用与产品。本发明提供一种胶乳微球的保护剂，该保护剂可以保证胶乳微球冻结不会导致胶乳微球产生沉淀和非特异性聚集，也不会影响胶乳微球自身的活性性能。同时，该保护剂可以用于制备胶乳微球冷冻制剂或冻干制剂，在两种形式的产品中均适用。本发明提供添加上述保护剂制备得到的胶乳微球冷冻制剂或冻干制剂，二者方便胶乳微球的运输和存储。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测领域，具体而言，涉及一种胶乳微球的保护剂及其应用与产品。
背景技术
胶乳微球是一种用于标记免疫试验中的抗原或抗体的检测试剂，以检出目标样本中的待反应物。胶乳微球常用于乳胶凝集法和胶乳免疫比浊法。乳胶凝集法(Latexagglutination test，LAT)是以胶乳微球作为载体的一种间接凝集试验，将可溶性抗原(或抗体)吸附于载体的表面，然后与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的适宜条件下，可产生凝集反应。这种方法具有快速简便、保存方便和比较准确等优点。胶乳免疫比浊法是将抗体与胶乳微球结合，当抗原抗体相结合时便形成了抗原-抗体-胶乳微球复合物，增强了反应吸光度，反应液在一定波长处比浊，与同样处理的标准液比较，计算标本中抗原的含量。利用生化分析仪进行比浊测定，整个分析过程只需几分钟，该方法灵敏度更高，可达ng/ml或pg/ml。
然而，胶乳微球在保存过程中不能冻融，只要一冻融，就会产生沉淀，胶乳微球的性能也被破坏，此外，解决冻融沉淀问题的同时，还需要考虑保留空白胶乳吸附蛋白的活性，这些问题使得空白胶乳微球的冷冻和冻干的难度大，而已偶联蛋白的胶乳微球则不需要考虑胶乳吸附蛋白的能力，问题的解决相对容易。我国幅员辽阔，南北温差很大，北方冰冻期很长，这给胶乳微球的运输带来很大难度。因此，基于部分检测项目R1试剂需采用空白胶乳微球，急需一种可以解决空白胶乳微球不能冻融，运输难度大等问题的技术方案。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种胶乳微球的保护剂，以缓解现有技术中胶乳微球不能冷冻或冻干，运输难度大，存储困难并且有效期短的问题。
本发明的第二目的在于提供上述保护剂在制备胶乳微球冻干制剂或胶乳微球冷冻制剂中的应用。
本发明的第三目的在于提供一种胶乳微球冻干制剂或胶乳微球冷冻制剂。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种胶乳微球的保护剂，所述保护剂包括糖类和多羟基醇。
进一步地，所述糖类包括海藻糖、蔗糖或乳糖中的至少一种。
进一步地，所述多羟基醇包括肌醇、丙三醇、甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇或木糖醇中的至少一种。
进一步地，所述糖类的浓度为1-5w/v％。
进一步地，所述多羟基醇的浓度为0.1-2w/v％。
进一步地，所述多羟基醇的浓度为0.1-1.5w/v％。
进一步地，所述胶乳微球包括聚苯乙烯胶乳微球。
上述保护剂在制备胶乳微球冻干制剂或胶乳微球冷冻制剂中的应用。
一种胶乳微球冻干制剂，利用上述保护剂制备得到。
一种胶乳微球冷冻制剂，利用上述保护剂制备得到。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供一种胶乳微球的保护剂，包括糖类和多羟基醇。胶乳微球具有极强的疏水性，可以吸附蛋白质，并且由于具有很大的比表面积使得胶乳微球吸附溶液中的离子带有电荷，相同电荷相互排斥是胶乳微球保持稳定的重要原因，发明人考虑胶乳微球的上述特性，在胶乳微球冻结过程中加入含有糖类和多羟基醇的保护剂，可以保证冻结不会导致胶乳微球产生沉淀和非特异性聚集，也不会影响胶乳微球自身的活性性能。同时，该保护剂可以用于制备胶乳微球冷冻制剂或冻干制剂，在两种形式的产品中均适用。此外，该保护剂可以实现胶乳微球反复冻融，对自身活性性能影响较小的效果。
本发明提供添加上述保护剂制备得到的胶乳微球冷冻制剂或冻干制剂，二者方便胶乳微球的运输和存储，可以进一步延长胶乳微球的有效期。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明试验例1中原试剂R1和添加保护剂的R1冻融前后溶液状态图，其中，从左至右分别为未冻融的原试剂R1，冻融后的原试剂R1，未冻融的添加保护剂R1和冻融后的添加保护剂R1。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
一种胶乳微球的保护剂，保护剂包括糖类和多羟基醇。
胶乳微球具有极强的疏水性，可以吸附蛋白质，并且由于具有很大的比表面积使得胶乳微球吸附溶液中的离子从而带有电荷，相同电荷相互排斥是胶乳微球保持稳定的重要原因，发明人考虑胶乳微球的上述特性在胶乳微球冻结过程中加入含有糖类和多羟基醇的保护剂，可以保证冻结不会导致胶乳微球产生沉淀和非特异性聚集，也不会影响胶乳微球自身的活性性能。同时，该保护剂可以用于制备胶乳微球冷冻制剂或冻干制剂，在两种形式的产品中均适用。此外，该保护剂可以实现胶乳微球反复冻融，对自身活性性能影响较小的效果。
需要说明的是，多羟基醇亦称多元醇或糖醇，在本发明中可以为山梨醇、麦芽糖醇、肌醇、丙三醇、甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇等等；糖类可以为海藻糖、蔗糖、乳糖等等；冻融是指胶乳微球溶液经历冷冻和融解的过程，本发明提供的保护剂加入胶乳微球溶液中后，胶乳微球溶液冻融1-4次后，该胶乳微球的活性相较于未经历过冻融的胶乳微球的活性，偏差为-10％～10％；冻干是指胶乳微球溶液经过冷冻干燥使物料脱水得到胶乳微球冻干粉末的过程，本发明提供的保护剂加入胶乳微球溶液中后，胶乳微球溶液经历冻干过程后，该胶乳微球的活性相较于未经历过冻干的胶乳微球的活性，偏差为-10％～10％。此外，本发明中的“冻结”包括对胶乳微球进行冷冻或冻干的操作。
在优选地实施方式中，糖类包括海藻糖、蔗糖或乳糖中的至少一种。发明人通过试验证实海藻糖、蔗糖和乳糖均对胶乳微球的冻结后活性保护具有有益效果，糖类例如可以为海藻糖、蔗糖、乳糖、海藻糖和蔗糖、蔗糖和乳糖、蔗糖和乳糖，或者，海藻糖和蔗糖和乳糖。
在优选地实施方式中，多羟基醇包括肌醇、丙三醇、甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇或木糖醇中的至少一种。发明人通过试验证实肌醇、丙三醇、甘露醇、山梨醇、麦芽糖醇和木糖醇均对胶乳微球的冻结后活性保护具有有益效果，多羟基醇例如可以为肌醇、丙三醇(甘油)、山梨醇、肌醇和麦芽糖醇、甘露醇和木糖醇、肌醇和丙三醇和山梨醇，或者，丙三醇和木糖醇和山梨醇等等。
在优选地实施方式中，糖类的浓度为1-5w/v％。每100mL胶乳微球溶液中含有糖类的质量为1-5g。糖类的浓度典型但非限制性的为1w/v％、1.5w/v％、2w/v％、2.5w/v％、3w/v％、3.5w/v％、4w/v％、4.5w/v％或5w/v％。
在优选地实施方式中，多羟基醇的浓度为0.1-2w/v％，优选为0.1-1.5w/v％。每100mL胶乳微球溶液中含有多羟基醇的质量为0.1-2g。多羟基醇的浓度典型但非限制性的为0.1w/v％、0.5w/v％、1w/v％、1.5w/v％或2w/v％。
在优选地实施方式中，胶乳微球包括聚苯乙烯胶乳微球。需要说明的是，本发明提供的保护剂对于本领域常用到的各种胶乳微球均有保护作用，本发明所指的胶乳微球亦包括各种官能团化的胶乳微球，例如羧基化或酰胺化的胶乳微球等等。
上述保护剂在制备胶乳微球冻干制剂或胶乳微球冷冻制剂中的应用。
一种胶乳微球冻干制剂或胶乳微球冷冻制剂，利用本发明提供的保护剂制备得到。冻干制剂或冷冻制剂方便胶乳微球的运输和存储，可以进一步延长胶乳微球的有效期。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇0.1w/v％和海藻糖5w/v％。
实施例2
一种胶乳微球的保护剂，包括甘油1.5w/v％和海藻糖2w/v％。
实施例3
一种胶乳微球的保护剂，包括甘露醇0.1w/v％和蔗糖5w/v％。
实施例4
一种胶乳微球的保护剂，包括山梨醇1w/v％和乳糖3w/v％。
实施例5
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇1.5w/v％和海藻糖1w/v％。
实施例6
一种胶乳微球的保护剂，包括甘露醇1w/v％和海藻糖2w/v％。
实施例7
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇1w/v％和海藻糖2w/v％。
实施例8
一种胶乳微球的保护剂，包括甘油2w/v％和蔗糖1w/v％。
实施例9
一种胶乳微球的保护剂，包括甘油0.1w/v％和乳糖5w/v％。
实施例10
一种胶乳微球的保护剂，包括甘露醇1.5w/v％和乳糖1w/v％。
实施例11
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇1w/v％和蔗糖2w/v％。
实施例12
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇1w/v％、甘油0.5w/v％和乳糖3w/v％。
实施例13
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇1w/v％、蔗糖2w/v％和乳糖3w/v％。
对比例1
一种胶乳微球的保护剂，包括肌醇1w/v％。
对比例2
一种胶乳微球的保护剂，包括甘油1w/v％。
对比例3
一种胶乳微球的保护剂，包括蔗糖2w/v％。
对比例4
一种胶乳微球的保护剂，包括海藻糖2w/v％。
对比例5
一种胶乳微球的保护剂，包括DMSO 1w/v％。
对比例6
一种胶乳微球的保护剂，包括甘露醇1w/v％。
对比例7
一种胶乳微球的保护剂，包括山梨醇1w/v％。
对比例8
一种胶乳微球的保护剂，包括乳糖2w/v％。
试验例1
以糖化血红蛋白凝集法测试本发明保护剂对测试结果是否存在影响。
糖化血红蛋白试剂R1中含有聚苯乙烯胶乳微球，取300μl R1与10μl的S(样本)混合孵育60秒，再加入含有抗体的试剂R2，等待10秒后散射特定蛋白分析仪PA120在波长660nm读取吸光度A1，反应100秒后读取吸光度A2，反应信号△A＝A2-A1。其中，试剂R1中添加1w/v％肌醇和2w/v％海藻糖作为实验组，未添加保护剂的作为对照组。
校准结果：每次测定均利用校准品(靶值4.3、6.5、9.8、15)建立标准曲线，根据标准曲线计算测定值。
对没有进行冻结操作，在4℃保存的2组胶乳微球试剂进行质控品(BL-L1，购于伯乐)测试。结果如下表1所示：
表1
从上述结果可以看出，本发明提供的保护剂并不会对胶乳微球的活性产生影响。
此外，将原试剂R1和添加保护剂(1w/v％肌醇和2w/v％海藻糖)的R1，冻融前后进行比较，观察溶液状态，结果如图1所示，从左开始，第一个样品为未冻融的原试剂R1，第二个样品为冻融后的原试剂R1，第三个样品为加入保护剂但未冻融的R1，第四个样品为加入保护剂冻融后的R1。结果可以看出，没有添加保护剂的原试剂，冻融后发生明显沉淀，微球颗粒沉淀在瓶子底部，上清澄清，已经丧失了试剂的基本功能。加了保护剂的冻融后的R1，与不冻融的试剂在外观上无区别，经过检测，在性能上也无区别。
试验例2冷冻测试
将实施例1-13和对比例1-8提供的保护剂与试验例1中的聚苯乙烯胶乳微球混合冷冻，反复冻融4次，同时以不添加任何保护剂为对照组，参照试验例1中的方法检测聚苯乙烯胶乳微球的活性，每组重复3次取平均值，结果如下表2所示：
表2
此外，以临床样本为待测样本进行检测，验证反复冻融后胶乳微球的活性(保护剂采用的是1w/v％肌醇和2w/v％海藻糖)，冻融条件为-20℃冷冻，冷冻完全后，间隔一段时间后取出融化为冻融1次，结果如下表3所示：
表3
| 样品号 | 4度 | 冻融后 | 冻融情况 | 与4℃偏差 |
| 1 | 6.55 | 6.38 | 冻融1次 | -2.5％ |
| 2 | 11.57 | 11.93 | 冻融1次 | 3.1％ |
| 3 | 12.70 | 12.14 | 冻融1次 | -4.4％ |
| 4 | 13.76 | 13.77 | 冻融1次 | 0.1％ |
| 5 | 6.23 | 6.39 | 冻融1次 | 2.5％ |
| 6 | 8.60 | 8.45 | 冻融1次 | -1.8％ |
| 7 | 11.25 | 11.31 | 冻融1次 | 0.5％ |
| 8 | 6.52 | 6.56 | 冻融2次 | 0.6％ |
| 9 | 12.36 | 12.00 | 冻融2次 | -2.9％ |
| 10 | 12.67 | 12.31 | 冻融2次 | -2.9％ |
| 11 | 14.87 | 13.90 | 冻融2次 | -6.5％ |
| 12 | 6.23 | 6.16 | 冻融2次 | -1.1％ |
| 13 | 8.95 | 8.50 | 冻融2次 | -5.0％ |
| 14 | 10.76 | 10.48 | 冻融2次 | -2.7％ |
| 15 | 5.62 | 5.72 | 冻融4次 | 1.9％ |
| 16 | 10.37 | 10.06 | 冻融4次 | -3.0％ |
| 17 | 14.86 | 14.61 | 冻融4次 | -1.7％ |
| 18 | 5.11 | 5.21 | 冻融4次 | 2.0％ |
| 19 | 4.97 | 5.37 | 冻融4次 | 8.1％ |
| 20 | 5.26 | 5.19 | 冻融4次 | -1.2％ |
| 21 | 5.37 | 5.46 | 冻融4次 | 1.7％ |
| 22 | 4.85 | 5.13 | 冻融4次 | 5.7％ |
| 23 | 4.96 | 5.34 | 冻融4次 | 7.7％ |
从上述结果可以看出，本发明提供的保护剂可以对冷冻胶乳微球起到良好的保护作用，对胶乳微球的活性起到良好的保护作用。
试验例3冻干测试
将实施例3和5，对比例1、3、4、6-8提供的保护剂与试验例1中的聚苯乙烯胶乳微球混合冻干，所用冻干机为东富龙药用冷冻干燥机，同时以不添加任何保护剂为对照组，参照试验例1中的方法检测聚苯乙烯胶乳微球的活性，每组重复3次取平均值，结果如下表3所示：
表3
从上述结果可以看出，本发明提供的保护剂可以对冻干胶乳微球起到良好的保护作用，对胶乳微球的活性起到良好的保护作用。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (5)
1.糖类和多羟基醇组成的保护剂在制备空白胶乳微球冻干制剂或空白胶乳微球冷冻制剂中的应用，所述多羟基醇选自肌醇、丙三醇、山梨醇、麦芽糖醇、甘露醇或木糖醇中的至少一种；所述糖类选自海藻糖、蔗糖或乳糖中的至少一种；
所述糖类的浓度为1 w/v%-5 w/v%；
所述多羟基醇的浓度为0.1w/v%-2w/v%。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胶乳微球包括聚苯乙烯胶乳微球。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多羟基醇的浓度为0.1-1.5w/v%。
4.一种空白胶乳微球冻干制剂，其特征在于，利用权利要求1-3任一项所述的保护剂制备得到。
5.一种空白胶乳微球冷冻制剂，其特征在于，利用权利要求1-3任一项所述的保护剂制备得到。
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