CN114509562A - 一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用，涉及免疫检验技术领域。封闭剂包括如下重量百分数计的封闭剂原料：92％‑98.09％的缓冲液、1％‑5％的蛋白质、0.2％‑2％的氨基酸、0.01％‑0.1％的大分子聚合物、0.05％‑0.5％的表面活性剂和0.1％‑0.5％的防腐剂。本发明提供了一种有效封闭的封闭剂和稳定保存的保存剂，来减少免疫反应过程中的非特异性干扰，提升检测技术的灵敏度、重复性、稳定性，可以用于侧向免疫层析和胶乳增强比浊法检测应用。

Description

一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用
技术领域
本发明涉及免疫检验技术领域，具体而言，涉及一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用。
背景技术
抗原与抗体间的亲和力使二者可进行特异性结合，免疫检测技术的基本原理即根据抗原、抗体结合形成免疫复合结构后的现象及性状特点，对样本中的待测物进行定性、定位或定量的检测。近年来由于其特异性高、快速、易标准化操作等优势在生物医学、食品检测及环境监测等领域得以快速发展。在侧向免疫层析、胶乳增强比浊、化学发光等当下主流的免疫诊断技术中，微球均有极广泛的应用场景。对免疫反应中作为标记物或载体的微球进行抗体偶联修饰，在抗原-抗体特异性反应后，按照不同方法学可对待测物进行分析，实现定性定量检测。不同的免疫检测方法中，抗体偶联的微球复合物通常被认为是能影响检测灵敏度、重复性、稳定性等性能的关键因素之一，而抗体偶联微球复合物多余反应位点的封闭和后续保存是提升微球复合物甚至检测结果性能的重要步骤。因此开发出一种有效封闭的封闭剂和稳定保存的保存剂，来减少免疫反应过程中的非特异性干扰，提升检测技术的灵敏度、重复性、稳定性极具现实意义。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用以解决封闭有效性和保存稳定性的技术问题。
本发明是这样实现的：
本发明提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：92％-98.09％的缓冲液、1％-5％的蛋白质、0.2％-2％的氨基酸、0.01％-0.1％的大分子聚合物、0.05％-0.5％的表面活性剂和0.1％-0.5％的防腐剂；
缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液、HEPES、MOPSO和DIPSO缓冲液中的至少一种；蛋白质选自牛血清白蛋白、酪蛋白和凝胶中的至少一种；氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸和N,N,N-三甲基甘氨酸中的至少一种；大分子聚合物选自CE210和CE510中的至少一种。
本发明提供了一种降低非特异性吸附、提高检测灵敏度的封闭剂，该封闭剂不仅能提升检测的灵敏度、稳定性，还能改善试剂的变异系数。
发明人发现，要降低微球的非特异性吸附、减少假阳性信号，需要考虑如何将微球表面未反应的活性位点进行充分封闭。上述封闭剂中的CE210或CE510可以增加信号区分度，可能原因是带有氨基基团的链状聚乙二醇能够改善荧光微球固相表面上的蛋白构象，使抗体的方向倾向于“直立”在微球表面，提高了免疫结合反应效率从而实现灵敏度的改善。
发明人发现，蛋白质和氨基酸的组合封闭方式可改善检测的变异系数。大分子聚合物可以改善低值区分度。
在一种可选的实施方式中，上述氨基酸选自甘氨酸，甘氨酸可以改善高值重复性，减小测试结果的变异系数，但是单一使用甘氨酸作为封闭剂会使低值测试的变异系数增大。结合低、高值精密度测试结果考虑，发明人发现选用蛋白质和甘氨酸的组合封闭方式可改善检测的变异系数。
在本发明应用较佳的实施方式中，上述表面活性剂选自吐温-20、吐温-80、S9和Triton X-100中的至少一种；
防腐剂选自如下至少一种的物质：1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、叠氮化钠、ProClin300和脱氢乙酸钠。
在本发明应用较佳的实施方式中，上述蛋白质选自牛血清白蛋白和酪蛋白，且封闭剂中含质量百分数计的1-1.5％的牛血清白蛋白和0.25％-0.5％的酪蛋白；
发明人发现，相较于单独的BSA封闭，氨基酸等小分子的封闭剂的引入未能明显改善非特异性吸附带来的背景信号。然而BSA、酪蛋白的联合封闭能够在不影响低值区分度和检测灵敏度的前提下实现背景信号的显著降低。因此，BSA、酪蛋白的联合封闭起到了明显降低背景信号，提高检测灵敏度和低值区分度的作用。
酪蛋白的引入可显著降低测试非特异性吸附，在灵敏度和精密度两方面都有较好的表现。
在一种可选的实施方式中，封闭剂包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.09％的缓冲液、1％的牛血清白蛋白、0.25％的酪蛋白、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的表面活性剂和0.1％的防腐剂。
在本发明应用较佳的实施方式中，上述缓冲液的浓度为10-100mM。
本发明还提供了一种抗体偶联微球复合物的保存剂，其包括如下质量百分数计的原料：72％-95％的缓冲液、2％-5％的糖类、1％-5％的醇类、0.5％-2％的蛋白质、1.5％-15％的稳定剂、0.1％-0.5％的防腐剂和0.05％-0.5％的表面活性剂；
糖类为海藻糖、蔗糖、壳聚糖、甘露糖和葡聚糖中的至少一种；醇类为山梨醇、甘露醇和丙三醇中的至少一种；蛋白质为酪蛋白钠、牛血清白蛋白、NBS和凝胶中的至少一种；稳定剂为Biolipidure-802、Surmodics-SC01和SC02中的至少一种。
若要保持抗体偶联微球的复合物甚至检测试剂的稳定性，需要考虑的不仅是如何保护抗体蛋白的活性和构象，还需考虑如何稳定微球复合物在溶液中的单分散状态，通常微球表面带电荷的功能基团有利于使整个微球保存体系趋向于稳定状态，可以避免聚集的发生。
发明人提供了一种保存剂，保存剂中添加的糖类、蛋白质、醇类、稳定剂主要作为保护剂起到保护蛋白活性并稳定其构象的作用，从而减缓信号衰减的趋势。然而随着时间的推移，仅仅添加上述的糖类、蛋白质、醇类、稳定剂无法保证试剂的长期稳定。而用两性离子缓冲液替换原有PBS体系后，可以极大程度上提高试剂的37℃加速稳定性和室温稳定性。猜测由于HEPES结构中的磺酸根基团能够稳定蛋白质的天然结构，从而最大程度的起到了稳定试剂检测性能的作用。
高分子聚合物和醇类的氢键起到提高体系亲水性、稳定单分散微球体系、避免或减少微球沉降团聚的情况出现。将上述保存剂用于抗体偶联微球复合物的保存，可获得良好的热稳定性和室温/冷藏稳定性。
在本发明应用较佳的实施方式中，上述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、S9、Triton X-100中的一种或多种。
在一种可选的实施方式中，保存剂还包括重量百分数为0.25-0.5％的高分子聚合物；高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮10000、聚乙二醇8000、聚乙二醇2000中的至少一种。
引入的含多羟基的高分子聚合物由于与微球表面的电荷作用，使抗体偶联微球复合物能够在保存剂中维持更长时间的单分散状态不产生沉降。
在本发明应用较佳的实施方式中，上述保存剂中缓冲液的浓度为10-50mM。
在一种可选的实施方式中，保存剂包括如下质量百分数计的原料：83.1％的缓冲液、3％的糖类、1.5％的醇类、0.25％的蛋白质、10％的SC02、2％的Biolipidure-802(白油802)、0.1％的防腐剂和0.05％的表面活性剂。
在一种可选的实施方式中，防腐剂选自1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、叠氮化钠、ProClin300、硫柳汞和脱氢乙酸钠中的至少一种。
本发明提供了一种层析试纸条的制备方法，该方法包括抗体偶联微球复合物的封闭和保存，封闭包括将抗体偶联微球后形成的微球复合物与上述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂进行封闭反应，保存包括将封闭后的微球分散于上述的抗体偶联微球复合物的保存剂中。
本发明还提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂或抗体偶联微球复合物的保存剂在制备层析试纸条或胶乳增强比浊法检测试剂盒中的应用中的应用。
本发明提供的保存剂在免疫比浊平台的热稳定性和冷藏条件下的稳定性有了明显的改善。
在一种可选的实施方式中，试纸条为氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)或纤维蛋白(原)降解产物(FDP)的检测试纸条。
本发明还提供了一种试剂或试剂盒，其包括上述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂和抗体偶联微球复合物的保存剂。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种降低非特异性吸附、提高检测灵敏度的封闭剂，该封闭剂不仅能提升检测的灵敏度、稳定性，还能改善试剂的变异系数。还提供了一种保存剂，保存剂中添加的糖类、蛋白质、醇类、稳定剂主要作为保护剂起到保护蛋白活性并稳定其构象的作用，从而减缓信号衰减的趋势。采用两性离子缓冲液可以极大程度上提高试剂的37℃加速稳定性和室温稳定性。高分子聚合物和醇类的氢键起到提高体系亲水性、稳定单分散微球体系、避免或减少微球沉降团聚的情况出现。将上述保存剂用于抗体偶联微球复合物的保存，可获得良好的热稳定性和室温/冷藏稳定性。
综上，本发明提供了一种有效封闭的封闭剂和稳定保存的保存剂，来减少免疫反应过程中的非特异性干扰，提升检测技术的灵敏度、重复性、稳定性，可以用于侧向免疫层析和胶乳增强比浊法检测应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为100pg/mL的抗原溶液在37℃下的稳定性实验；
图2为5000pg/mL的抗原溶液在37℃下的稳定性实验。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
对比例1
本实施例提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂和保存剂。封闭剂其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：99.35％的PB(10mM)、0.5％的甘氨酸、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
保存剂包括：10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
对比例2
本实施例提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂和保存剂。封闭剂其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：99.34％的PB(10mM)、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
保存剂包括：10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
对比例3
本实施例提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂和保存剂。封闭剂其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.85％的PB(10mM)、1％的BSA、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
保存剂包括：10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
对比例4
本实施例提供了抗体偶联微球复合物的保存剂。
其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：84％的PBS(10mM)、3％的海藻糖、0.25％的BSA、10％的SC02、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
对比例5
本实施例提供了抗体偶联微球复合物的保存剂。
其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：80.5％的PBS(10mM)、3％的海藻糖、1.5％的山梨醇、0.25％的BSA、10％的SC02+2％的日油802、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
对比例6
本实施例提供了抗体偶联微球复合物的保存剂。
其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：99.6％的PBS(10mM)、0.25％的BSA、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
实施例1
本实施例提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂和保存剂。封闭剂其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.34％的PB(10mM)、1％的BSA、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
保存剂包括：10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
实施例2
本实施例提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂和保存剂。封闭剂其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.09％的PB(10mM)、1％的BSA+0.25％的酪蛋白、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
保存剂包括：10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
实施例3
本实施例提供了抗体偶联微球复合物的保存剂。
其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：80.5％的HEPES(10mM)、3％的海藻糖、1.5％的山梨醇、0.25％的BSA、10％的SC02+2％的日油802、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
实施例4
本实施例提供了抗体偶联微球复合物的保存剂。
其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：80.25％的HEPES(10mM)、3％的海藻糖、1.5％的山梨醇、0.25％的BSA、0.25％PEG8000、10％的SC02+2％的日油802、0.05％的吐温20和0.1％叠氮钠。
实施例5
本实施例提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂和保存剂。封闭剂其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.09％的MOPSO(10mM)、1％的BSA+0.25％的酪蛋白、0.5％的甘氨酸和丝氨酸、0.01％的CE510、0.05％的吐温20和0.1％ProClin300。
保存剂包括：10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
实施例6
本实施例提供了抗体偶联微球复合物的保存剂。
其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：80.25％的HEPES(10mM)、3％的甘露糖、1.5％的山梨醇、0.25％的BSA、0.25％聚乙烯吡咯烷酮10000、10％的Surmodics-SC01+2％的日油802、0.05％的吐温-80和0.1％脱氢乙酸钠。
实验例1
本实验例制备侧向层析试纸条。
(1)微球标记：取5mg的400nm荧光微球加入10mM MES缓冲溶液中，洗涤后加入过量(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)进行活化。离心去掉多余试剂，加入750μg NT-proBNP标记抗体37℃反应旋转反应2小时进行抗体偶联，结束后离心去掉未反应试剂。
(2)微球封闭：将抗体偶联的荧光微球重新分别悬浮分散于5mL封闭剂(实施例1-2和对比例1-3)中，室温旋转反应90分钟。所用封闭剂如下表所示，按照下列配方配置封闭剂进行微球封闭，考察封闭剂的不同成分对检测试剂灵敏度和精密度的影响：
Figure BDA0003521417970000101
(3)微球保存：封闭结束后，离心去除封闭剂，将微球重新悬浮分散于1mL保存剂中，所用保存剂成分为10mM PBS+0.25％BSA+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
(4)侧向层析试纸条的制备：将抗体偶联微球复合物均匀分散于结合垫处理液中，用于玻璃纤维的浸泡处理，置于真空干燥装置，干燥备用；将NT-proBNP捕获抗体和羊抗鼠多克隆抗体分别固定在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线，37℃干燥备用；用样品垫处理液浸泡玻璃纤维，置于真空干燥装置，干燥备用。在PVC底板上先后粘贴样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫，用装置剪切为3.2mm的试纸条，装入塑料件、压壳得到侧向层析试纸条。
(5)测试：取制备得到的试纸条分别测试0、15、30、100、300、450、1000、1800、3600、5000、6400、12500、25000、35000pg/mL14个浓度，每浓度进行三重复测试取均值，拟合得到标准曲线。灵敏度测试：0pg/mL、15pg/mL各测5重复取均值，计算测试读取荧光信号的差值；精密度测试：100pg/mL、5000pg/mL各测10重复，计算精密度。检测结果如下：
A.灵敏度
各实验组测试的荧光信号读取结果如下表所示：
Figure BDA0003521417970000111
结果表明：CE210可以增加信号区分度，可能原因是带有氨基基团的链状聚乙二醇能够改善荧光微球固相表面上的蛋白构象，使抗体的方向倾向于“直立”在微球表面，提高了免疫结合反应效率从而实现灵敏度的改善。相较于对比例3的BSA封闭相比，对比例1中单纯的甘氨酸小分子封闭剂的引入未能明显改善非特异性吸附带来的背景信号，而实施例2中BSA、Casein的联合封闭能够在不影响低值区分度和检测灵敏度的前提下实现背景信号的显著降低。
B.精密度
(1)100pg/mL测试结果：
Figure BDA0003521417970000112
Figure BDA0003521417970000121
(2)5000pg/mL测试结果：
对比例3 对比例1 对比例2 实施例1 实施例2
测试1 5109 4837 5347 4793 5477
测试2 4817 4901 5036 5039 5123
测试3 4782 5523 5494 4835 5473
测试4 5817 5641 5002 5278 5306
测试5 5021 5521 4867 4714 5029
测试6 5236 4993 5174 4589 4956
测试7 6418 5401 5249 4239 5818
测试8 5752 5311 5557 4677 5092
测试9 6247 4763 4893 4962 4744
测试10 5658 4755 5101 4639 5089
AVE 5486 5165 5172 4776 5211
SD 579 349 238 282 311
CV 10.6％ 6.8％ 4.6％ 5.9％ 6.0％
结果表明：对比例1中单独使用甘氨酸可以改善高值重复性，减小测试结果的变异系数，但是单一使用甘氨酸作为封闭剂会使低值测试的变异系数增大。结合低、高值精密度测试结果考虑，选用BSA和甘氨酸的组合封闭方式(实施例2)可改善检测的变异系数；CE210可以改善低值区分度，Casein的引入可显著降低测试非特异性吸附，故本实施例中封闭剂实施例2可在灵敏度和精密度两方面都有较好的表现。
实验例2
本实验例进行保存剂的稳定性测试。
(1)微球偶联：将抗体偶联后的荧光微球分散于封闭剂中，封闭剂配方为：10mM PB+1％BSA+0.25％Casein+0.5％甘氨酸+0.01％CE210+0.05％吐温20+0.1％叠氮钠。
(2)微球保存：封闭结束后，将微球悬浮分散于保存剂中，本发明所用保存剂如下表所示，按照下列配方配置保存剂进行微球保存，考察保存剂的不同成分对检测试剂稳定性的影响：
Figure BDA0003521417970000131
(3)侧向层析试纸条的制备：按照实验例1的方法制备结合垫、样品垫、NC膜，并组装、压壳得到试纸条。
(4)测试：3浓度测试取均值建立标准曲线。取对比例4-6和实施例3-4的30个试纸条置于37℃恒温箱中，在第在1周、2周、3周、4周、5周的时间点拿出来测试100、5000pg/mL的抗原溶液，三重复测试取均值。取对比例和实施例的42个试纸条置于室温环境中，在第1周、2周、3周、4周、2个月、3个月、6个月的时间点拿出来测试100、5000pg/mL的抗原溶液。检测结果如下：
A.37℃加速稳定性实验：
Figure BDA0003521417970000132
实验结果参照图1和图2所示。
B.室温稳定性实验：
Figure BDA0003521417970000141
结果表明：结合37℃加速稳定性和室温稳定性进行考虑，保存剂中海藻糖、蛋白稳定剂SC02和带羟基基团的醇类均能够对微球表面抗体起到一定保护作用，从而减缓信号衰减的趋势，但随时间推移无法使试剂稳定。实施例3-4两性离子缓冲液替换原有PBS体系后，猜测由于HEPES结构中的磺酸根基团能够稳定蛋白质的天然结构，从而最大程度的起到了稳定试剂检测性能的作用。实施例3-4均能在两种环境中维持长时间稳定，但是实施例4中引入的含多羟基的PEG8000由于与微球表面的电荷作用，使该实验组抗体偶联微球复合物相较于其他实验组，能够在保存剂中维持更长时间的单分散状态不产生沉降。
实验例3
本实验例进行保存剂的37℃加速稳定性实验及胶乳增强比浊应用。
(1)微球偶联：取乳胶微球通过EDC、NHS对表面基团进行活化，加入FDP抗体对微球进行标记，标记结束后分散于封闭剂中进行未反应基团的封闭。结束后分散于保存剂R2中，保存剂配方为对比例6和实施例4。
(2)测试：将分散于这两种保存剂中的抗体欧联乳胶微球分别置于37℃恒温箱和2-8℃。37℃条件下在第1周、2周、3周、4周、5周将试剂取出置于Sysmex仪器上进行测试；2-85℃件下在第1周、2周、3周、4周、2个月、3个月、6个月将试剂取出置于Sysmex仪器上进行测试。
A.37℃加速稳定性实验：
Figure BDA0003521417970000151
B.2-8℃稳定性实验：
Figure BDA0003521417970000152
上述结果表明：保存剂优选组实施例4在免疫比浊平台的热稳定性和冷藏条件下的稳定性相较对比例6都有了明显的改善。
经过上述实施例的验证，将本发明提供封闭剂应用于抗体偶联微球复合物，能降低免疫检测试剂的非特异性吸附，提高检测的灵敏度，改善检测试剂的变异系数；将保存剂用于抗体偶联微球复合物的保存，可获得良好的热稳定性和室温/冷藏稳定性。本发明提供的封闭剂和保存剂能够改善免疫检测的灵敏度、重复性和稳定性，提高检测试剂性能。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：92％-98.09％的缓冲液、1％-5％的蛋白质、0.2％-2％的氨基酸、0.01％-0.1％的大分子聚合物、0.05％-0.5％的表面活性剂和0.1％-0.5％的防腐剂；
所述缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液、HEPES、MOPSO和DIPSO缓冲液中的至少一种；所述蛋白质选自牛血清白蛋白、酪蛋白和凝胶中的至少一种；所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸和N,N,N-三甲基甘氨酸中的至少一种；所述大分子聚合物选自CE210和CE510中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述表面活性剂选自吐温-20、吐温-80、S9和Triton X-100中的至少一种；
所述防腐剂选自如下至少一种的物质：1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、叠氮化钠、ProClin300和脱氢乙酸钠。
3.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述蛋白质选自牛血清白蛋白和酪蛋白，且所述封闭剂中含质量百分数计的1-1.5％的牛血清白蛋白和0.25％-0.5％的酪蛋白；
优选地，所述封闭剂包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.09％的缓冲液、1％的牛血清白蛋白、0.25％的酪蛋白、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的表面活性剂和0.1％的防腐剂。
4.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述缓冲液的浓度为10-100mM。
5.一种抗体偶联微球复合物的保存剂，其特征在于，其包括如下质量百分数计的原料：72％-95％的缓冲液、2％-5％的糖类、1％-5％的醇类、0.5％-2％的蛋白质、1.5％-15％的稳定剂、0.1％-0.5％的防腐剂和0.05％-0.5％的表面活性剂；
所述糖类为海藻糖、蔗糖、壳聚糖、甘露糖和葡聚糖中的至少一种；所述醇类为山梨醇、甘露醇和丙三醇中的至少一种；所述蛋白质为酪蛋白钠、牛血清白蛋白和凝胶中的至少一种；所述稳定剂为Biolipidure-802、Surmodics-SC01和SC02中的至少一种；
缓冲液选自两性离子缓冲液。
6.根据权利要求5所述的抗体偶联微球复合物的保存剂，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、S9、Triton X-100中的一种或多种；
优选地，所述保存剂还包括重量百分数为0.25-0.5％的高分子聚合物；所述高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮10000、聚乙二醇8000、聚乙二醇2000中的至少一种。
7.根据权利要求5所述的抗体偶联微球复合物的保存剂，其特征在于，所述保存剂中所述缓冲液的浓度为10-50mM；
优选地，所述保存剂包括如下质量百分数计的原料：83.1％的缓冲液、3％的糖类、1.5％的醇类、0.25％的蛋白质、10％的SC02、2％的Biolipidure-802、0.1％的防腐剂和0.05％的表面活性剂；
优选地，所述防腐剂选自1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、叠氮化钠、ProClin300和脱氢乙酸钠中的至少一种。
8.一种层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括抗体偶联微球复合物的封闭和保存，所述封闭包括将抗体偶联微球后形成的微球复合物与权利要求1-4任一项所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂进行封闭反应，所述保存包括将封闭后的微球分散于权利要求5-7任一项所述的抗体偶联微球复合物的保存剂中。
9.一种如权利要求1-4任一项所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂或权利要求5-7任一项所述的抗体偶联微球复合物的保存剂在制备层析试纸条或胶乳增强比浊法检测试剂盒中的应用；
优选地，所述试纸条为氨基末端脑利钠肽前体或FDP的检测试纸条。
10.一种试剂或试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-4任一项所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂和权利要求5-7任一项所述的抗体偶联微球复合物的保存剂。
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