CN105122062B - 未致敏胶乳试剂的劣化防止方法 - Google Patents
未致敏胶乳试剂的劣化防止方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105122062B CN105122062B CN201480011899.5A CN201480011899A CN105122062B CN 105122062 B CN105122062 B CN 105122062B CN 201480011899 A CN201480011899 A CN 201480011899A CN 105122062 B CN105122062 B CN 105122062B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- hba1c
- immunoassay
- latex
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 133
- 229920000126 latex Polymers 0.000 title claims abstract description 78
- 239000004816 latex Substances 0.000 title claims abstract description 77
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 title claims description 20
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 title claims description 11
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 48
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 46
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims abstract description 12
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 17
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 17
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 abstract description 32
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 abstract description 15
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 abstract description 15
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 12
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 abstract description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 8
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 12
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 11
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 9
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-Valine Natural products CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- -1 hydrochlorate Chemical compound 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700000434 Cannabis sativa edestin Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018473 Glycosuria Diseases 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KVRLNEILGGVBJX-IHRRRGAJSA-N Val-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)CC1=CN=CN1 KVRLNEILGGVBJX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002542 deteriorative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004247 hand Anatomy 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
公开了良好地维持免疫测定试剂盒中的胶乳试剂的分散状态，防止由于温度变化所导致的凝集沉淀的产生而保护试剂不会形成测定性能的劣化的，即使对于少量分注胶乳试剂的方式的免疫凝集测定试剂盒也可以适用的新型手段。本发明的免疫测定试剂，其在溶剂中含有未致敏的胶乳颗粒和三甲基甘氨酸。试剂中的三甲基甘氨酸浓度优选为5～10w/v%。该试剂例如可以优选用作血红蛋白A1c的免疫测定试剂。
Description
技术领域
本发明涉及防止使用了未致敏胶乳的免疫测定试剂的性能的劣化的方法。
背景技术
免疫测定试剂盒中的所谓胶乳试剂中，通常预先使与测定目标物质特异性反应的抗体或者与测定目标抗体反应的抗原物质固相化、担载于胶乳表面。为了提高这种胶乳试剂的保存稳定性，添加糖类和/或表面活性剂，尝试冷冻干燥(专利文献1、2)。根据这种手法，能够实现胶乳试剂的稳定保存。但是，利用进行这种冷冻干燥的手法时，在使用前需要胶乳液的复原处理，对于用户而言，方便性不好。
若考虑到用户的方便性则理想的是可以直接使用的液态的胶乳试剂。作为不需要使用前的复原处理的液态的胶乳试剂，为了冷冻劣化保护，通常添加有糖类、表面活性剂等。但是，经固相化的抗原、抗体蛋白自胶乳表面剥离的问题没有得到完全解决，仍然不存在即使冷冻也没有问题的胶乳试剂。
使用了未致敏胶乳的血红蛋白A1c的免疫测定试剂的情况下，胶乳液的冷冻保护对策主要通过全面实施保管运输时的温度管理来进行，胶乳试剂量也有20mL以上的容量，因此过去冷冻所导致的试剂的劣化实质上没有成为问题。
但是近年在一般医院利用诊断等待的时间，在诊断之前实施采血、检查，使该结果反映到诊断的尝试得到广泛进行。这种现场使用的是用小型的专用仪器测定的试剂，试剂也将一试验份提前小份分注到盒(cartridge)内。该试剂量为0.1mL左右。利用标准品得到的标准曲线预先作为数据存储，因此若试剂的反应性变化则测定值变化，比以往更严格要求试剂的性能稳定性。如此若试剂量减少则容易受到运输时的温度变化，有可能损害试剂的性能。例如若在将产品冷藏运输时由于向低温侧变动而变得过冷，则少量分注的试剂在短时间内冷冻的可能性升高。实际上对于使用了未致敏胶乳的血红蛋白A1c的免疫凝集测定试剂盒而言实质上产生下述事例：小份分注的胶乳试剂在冷藏运输中被过度冷却，胶乳液冷冻，作为其结果，产生胶乳的凝集沉淀，不能作为试剂使用。因此近年胶乳试剂的冷冻劣化保护成为紧急问题。
专利文献2中记载了将未致敏胶乳冷冻干燥时添加的防冻剂，列举了分子量大的多糖类、PVP、Tween20等表面活性剂的名称。
专利文献3提供，通过使用某种胺化合物，在不产生载体颗粒的自然凝集的情形下促进基于特异反应的凝集的凝集测定用试剂和测定方法，该胺化合物包含甜菜碱盐酸盐。但是，若观察其实施例示出的数据则可知，将甜菜碱盐酸盐加入到150mM致敏胶乳的情况与未添加的对照进行比较，对于4℃、3天静置后的上清液而言，添加甜菜碱时成绩良好的在3个项目中仅为2个项目，搅拌后在3个项目中仅为1个项目，并不能说明通过添加甜菜碱而维持了致敏胶乳的分散状态，防止了自然凝集等所导致的沉降。也并未说明通过添加甜菜碱而防止了冷冻所导致的凝集。
虽然技术领域与免疫测定试剂盒不同，但是已知通过向喷墨油墨的组合物中加入甜菜碱来防止冷冻･解冻所导致的油墨的凝集沉淀(专利文献4)。但是，对于胶乳试剂而言，尚未知晓为了实现冷冻劣化保护而将甜菜碱添加到胶乳液来使用的例子。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开平11-258241号公报
专利文献2：日本特开昭61-222531号公报
专利文献3：国际公开公报WO2007/074860
专利文献4：日本特开2001-271013号公报。
发明内容
发明要解决的问题
本发明的目的在于，提供良好地维持免疫测定试剂盒中的胶乳试剂的分散状态，防止温度变化所导致的凝集沉淀的产生而保护试剂不会发生测定性能的劣化的，即使对于少量分注胶乳试剂的方式的免疫凝集测定试剂盒也可以适用的新方法。
用于解决问题的方法
作为向胶乳试剂加入作为冷冻保护剂的物质，如上所述已知糖类、表面活性剂。但是，使用未致敏胶乳的血红蛋白A1c的免疫测定试剂中，将试样中的血红蛋白稀释而成的样品加入到胶乳试剂，由此使血红蛋白A1c物理吸附于胶乳表面。这种免疫测定试剂的情况下，作为冷冻保护剂，不能使用阻碍物理吸附的表面活性剂。进而，极其少量封入到盒中的胶乳试剂，虽然取决于其结构，但是需要在微小结构内自由流动。即存在下述问题：若由于添加物而使胶乳试剂的粘性升高、流动性变差，则对试剂的性能造成影响。因此，也难以使用分子量大的物质。
本申请发明人等基于以上进行深入研究，结果发现，通过向胶乳试剂添加适当量的甜菜碱(三甲基甘氨酸)，即使经过冷冻･解冻之后，也可以防止胶乳颗粒的凝集沉淀而维持作为免疫测定试剂的性能，从而完成了本申请发明。
即，本发明提供一种免疫测定试剂，其在溶剂中含有未致敏的胶乳颗粒和三甲基甘氨酸。另外，本发明提供一种免疫测定试剂的劣化防止方法，其包括使三甲基甘氨酸共存于含有未致敏胶乳颗粒的免疫测定试剂中。
发明的效果
通过本发明，提供防止胶乳试剂的冷冻･解冻所导致的性能劣化的新方法。根据本发明，即使胶乳试剂冷冻也不会产生凝集，可以维持作为免疫测定试剂的性能，因此即使在运输时的温度管理差的地区，也能够性能不劣化地进行运输。甜菜碱为低分子的物质，即使以数%的浓度使用，也不会如糖类那样提高试剂的粘性，因此即使适用于试剂量少的盒式的免疫测定试剂盒，也不会造成由于流动性降低所导致的不良影响。另外，不会如表面活性剂那样阻碍测定对象蛋白质在未致敏胶乳颗粒上的吸附。
附图说明
图1为表示对添加有甜菜碱6w/v%的胶乳试剂R1实施0次～6次的冷冻解冻处理时的信号的数值的变化的图。
图2为使用添加有甜菜碱6w/v%的胶乳试剂R1(冷冻解冻0次～3次)、测定HbA1c标准品的信号而制成的标准曲线。也同时示出使用添加作为表面活性剂的Tween 20来替代甜菜碱的R1试剂(冷冻解冻1次)同样地制成的标准曲线。
具体实施方式
本发明的免疫测定试剂，为胶乳颗粒漂浮于溶剂中的形态的试剂(胶乳试剂)，其特征在于，使用未致敏的颗粒作为胶乳颗粒，以及含有甜菜碱。
“未致敏”指的是抗原或抗体等蛋白质没有实质上担载于胶乳颗粒表面的状态。作为利用胶乳凝集法的免疫测定方法之一，已知胶乳试剂使用未致敏的胶乳颗粒的手法(日本专利第2677753号)。该手法中，通过使未致敏胶乳颗粒与检样试样接触，使测定对象蛋白质吸附于颗粒表面，使其与对象蛋白质的抗体反应，产生颗粒的凝集，通过反应液的浊度测定对象蛋白质的量。本发明可以优选适用于利用这种手法的免疫测定法。需要说明的是，本发明中，“测定”这一用语包含定性的检测、定量、半定量。
胶乳颗粒自身可以使用与公知的免疫凝集测定试剂盒中使用的胶乳颗粒相同的胶乳颗粒。具体而言，胶乳颗粒的平均粒径可以为0.04～0.8μm左右、例如0.08～0.2μm左右。对胶乳的材质没有特别限定，但是优选使用聚苯乙烯胶乳等苯乙烯系胶乳、丙烯酸系胶乳等。使用表面的疏水性强的胶乳(例如聚苯乙烯胶乳)在使检样试样中的测定对象蛋白质的吸附顺利进行方面优选。进而，可以根据需要使用各种改性胶乳(例如羧酸改性胶乳)、磁性胶乳(内包有磁性颗粒的胶乳)等。
溶剂可以是在利用胶乳凝集法的免疫测定试剂盒的胶乳试剂中通常用作使胶乳漂浮的液体的缓冲液。例如可以使用甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、Good缓冲液等，但是不限于此。试剂中的胶乳浓度通常为0.05～0.5w/v%左右。
本发明中使用的甜菜碱指的是三甲基甘氨酸(N,N,N-trimethylglycine)。为了在含有未致敏胶乳的溶剂中含有三甲基甘氨酸，可以将三甲基甘氨酸的酸酐、水合物或盐添加到溶剂中。作为三甲基甘氨酸的盐的具体例，可列举出盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐等，但是不限于此。
免疫测定试剂中的甜菜碱的含量优选为5～30w/v%，例如可以为5～25w/v%、5～20w/v%、5～10w/v%、5.5～8.5w/v%、或5.5～7.5w/v%。通过在胶乳试剂中含有甜菜碱，抑制由于试剂的运输中、储藏中的温度变化(例如由于过度冷所导致的冷冻以及此后的融解)而产生的胶乳颗粒的凝集沉淀的产生，可以防止作为免疫测定试剂的性能的劣化。若甜菜碱浓度处于5～30w/v%的范围，则对于冷冻･解冻0次和1次而言，信号检出值没有差异，得到冷冻劣化防止效果。甜菜碱浓度不足5w/v%时，若重复冷冻･解冻则存在信号检出值升高的倾向，难以得到正确的测定值。另一方面，若甜菜碱浓度超过8.5w/v%则存在由于重复冷冻･解冻而信号检出值稍微降低的倾向，但是冷冻･解冻0次的信号检出值也降低，若按照比率评价由于冷冻･解冻的次数所导致的降低则确认任意一浓度都大致相同。也就是说，对于超过8.5w/v%的浓度而言，仅测定信号的绝对值进一步降低，得不到防止性能劣化的效果自身，劣化防止的效果不会进一步升高。因此，虽然没有特别限定，但是甜菜碱的使用浓度为8.5w/v%以下例如7.5w/v%以下为宜。但是胶乳试剂中含有的甜菜碱的最合适浓度可以根据胶乳的种类或浓度、缓冲液的种类而变化，因此可以适当研究最合适的甜菜碱浓度。例如若试剂中的胶乳浓度升高则信号检出值升高，因此在以升高的浓度使用甜菜碱的情况下，以升高胶乳浓度为宜。
作为利用未致敏的胶乳试剂的免疫测定法的具体例，可列举出血红蛋白A1c(HbA1c)的免疫测定方法。HbA1c为在具有由2根α链和2根β链组成的异源四聚体结构的血红蛋白(Hb)中，β链的N末端缬氨酸的α氨基非酶学糖基化而成的糖化血红蛋白，近年作为糖尿病的判定基准，使用HbA1c。区别没有糖化的Hb和HbA1c进行免疫测定的情况下，使用作为HbA1c特异性区域的β链N末端区域的抗体。该β链N末端区域埋没、存在于HbA1c分子的高级结构中，若在胶乳表面吸附HbA1c则HbA1c的β链N末端区域露出，因此即使没有特别的变性处理，也能够进行利用抗HbA1c抗体的免疫测定。使用未致敏胶乳试剂的市售的HbA1c免疫测定试剂盒是利用这种原理的试剂盒。本发明的试剂例如可以优选适用于这种HbA1c免疫测定试剂盒。
使用了本发明的免疫测定试剂的利用凝集法的HbA1c的免疫测定，除了未致敏胶乳试剂含有甜菜碱之外，可以如通常那样使用上述市售的HbA1c免疫测定试剂盒进行。以下具体说明测定的步骤，首先通过使本发明的试剂与血液等检样试样接触，在胶乳颗粒表面吸附血红蛋白(包含通常的血红蛋白和作为糖化血红蛋白的HbA1c)。检样无需变性处理，但是可以根据需要实施稀释溶血处理、离心处理等前处理。接着使吸附于胶乳颗粒上的HbA1c与抗HbA1c抗体接触。通过抗HbA1c抗体介由HbA1c而使胶乳颗粒结合、凝集，因此反应液的浊度增加。通过肉眼确认反应液的浊度，可以检测HbA1c的存在(定性地检测)。或者通过自动分析仪等光学测定浊度，也可以定量HbA1c量。后者的情况下，可以预先准备HbA1c浓度已知的标准试样进行测定，光学测定各标准试样的浊度，绘制浊度测定值与HbA1c浓度的关系制成标准曲线。通过将检样的测定值适用于该标准曲线，可以求出检样中的HbA1c量。
不过吸附于胶乳颗粒上的HbA1c也可以与胶乳颗粒一起用作免疫测定的样品，因此也可以通过凝集法以外的免疫测定法来测定胶乳颗粒上的HbA1c。免疫测定的方法自身在该领域中周知，若基于反应形式分类则有三明治法、竞争法、凝集法、免疫层析法、蛋白印迹法等，若以标记进行分类则有放射免疫测定、荧光免疫测定、酶免疫测定(EIA)、生物素免疫测定等，它们都包含于本发明中所称的“免疫测定”。
例如通过三明治法测定HbA1c的情况下，可以预先将抗Hb抗体(与包含HbA1c的全部血红蛋白结合)固定化于固相，使得本发明的免疫测定试剂与检样接触了的反应液与固相化抗体反应，洗涤后，与标记了的抗HbA1c抗体反应，洗涤后，基于源自标记的信号测定与固相结合的标记抗体。也可以使用抗HbA1c抗体作为固相化抗体、使用抗Hb抗体作为标记抗体。测定HbA1c浓度已知的标准试样，绘制信号强度与HbA1c浓度的关系制成标准曲线，若将检样的测定值适用于该标准曲线，则可以将检样中的HbA1c量定量。
作为三明治法的一例，例如在用侧向流动方式的免疫层析测定HbA1c的情况下，免疫层析仪器可以使用以下构成的仪器。
由硝基纤维素膜等多孔性原材料形成的基质通常形成为带状。在该基质上设置固相化了抗HbA1c单克隆抗体的检测区，在其上游侧(后述的展开液流动方向的上游侧)设置点样标记了的抗Hb单克隆抗体的标记试剂区。标记试剂区通常通过点样了标记抗体的多孔性的垫(pad)构成。在基质的上游端设置储藏展开液的展开液槽。使用酶作为标记的情况下，可以将点样了标记酶的底物的底物区设置于标记试剂区的上游。
测定时，可以将HbA1c吸附于胶乳颗粒表面之后的反应液与颗粒一起添加到标记试剂区。添加后若弄破展开液槽则展开液利用基质的毛细管现象而向下游流动。展开液依次通过底物区和标记试剂区，底物、标记抗体和吸附了血红蛋白的胶乳颗粒与展开液一起流到下游。此时胶乳颗粒表面的血红蛋白与标记抗Hb抗体通过抗原抗体反应而结合。若该免疫复合体到达检测区则通过胶乳颗粒表面的血红蛋白中的HbA1c，标记抗体被检测区的抗HbA1c抗体捕获。由于底物也同时流过，因此捕获了标记抗体的检测区显色。可以通过肉眼判定该显色。基于显色的有无能够进行HbA1c的定性检测，除此之外基于检测区的显色的强度也能够进行大致定量。
需要说明的是，免疫层析仪器中，也可以使固相化于检测区的抗体为抗Hb抗体、使点样于标记试剂带的标记抗体为抗HbA1c抗体。另外，也可以将标记物质的抗体点样于上述检测区的邻接处、设置对照区，从而可以确认是否适当产生标记抗体的展开。
抗HbA1c抗体是公知的，使用了抗HbA1c抗体的HbA1c免疫测定试剂盒也有各种市售品。本发明中，可以使用这种公知的抗HbA1c抗体。另外，抗体的制作方法也是周知的常规方法，因此可以与没有糖化的通常的血红蛋白进行区别而制作能够特异性识别HbA1c的抗体来使用。如上所述，HbA1c特异性部位为β链N末端区域，因此若使用该HbA1c的β链N末端区域作为免疫原，将动物(人除外)免疫，在该动物体内诱发针对HbA1c的抗体，则可以由该动物的血清得到针对HbA1c的多克隆抗体。另外，由所免疫的动物回收脾细胞，通过常规方法的杂交瘤法，可以制备HbA1c特异性结合的抗HbA1c单克隆抗体。从免疫测定中的再现性等观点考虑，优选使用抗HbA1c单克隆抗体。
作为上述免疫原使用的HbA1c的β链N末端区域的制备方法、以及针对该区域的单克隆抗体的制作方法的具体例例如在日本专利第2677753号等中详细说明，若为本领域技术人员则可以适当制备。以下对其工艺进行具体说明。
作为免疫原使用的HbA1c的β链N末端区域可以通过合成相当于血红蛋白β链的N末端区域的肽，并使作为N末端氨基酸残基的缬氨酸的α氨基与葡萄糖非酶学结合来制备。实施糖化处理的肽的合成可以使用市售的肽合成机通过常规方法实施。所合成的血红蛋白β链N末端区域可以为数个残基左右。序列编号1示出了人血红蛋白β链N末端的5残基的序列。将制备后的N末端肽溶解于乙酸，在吡啶存在下添加摩尔比2倍量的葡萄糖，室温下搅拌约10天，由此可以将N末端肽糖化。若肽被糖化则HPLC中的保留时间缩短，因此糖化反应的进行可以通过HPLC检查。利用HPLC的分析条件如以下所述。
色谱柱：TSKgel、ODS-120A(4.6×250mm、东ソー社制)
仪器：岛津HPLC系统
流动相：由10%乙腈/0.1%三氟乙酸到60%乙腈/0.1%三氟乙酸的线性梯度
流速：0.8mL/分钟
时间：25分钟
检测器：吸光度280nm。
所得到的糖化肽(HbA1c的β链N末端区域)例如可以在以下的分离条件下进行HPLC纯化。
色谱柱：TSKgel、ODS-120A(21.5×300mm、东ソー社制)
流动相：由10%乙腈/0.1%三氟乙酸到60%乙腈/0.1%三氟乙酸的线性梯度
流速：5mL/分钟
检测器：吸光度280nm。
由纯化后的肽通过常规方法脱离在肽化学合成步骤中附加的半胱氨酸保护基团后，在上述分离条件(但是检测的吸光度以215nm为宜)下再次进行HPLC纯化，所得到的纯化物可以用作免疫原。
如上所述制造的HbA1c的β链N末端区域为数个残基的尺寸，因此用作免疫原的情况下，可以与适当的载体蛋白(例如甲状腺球蛋白、麻仁球蛋白等)结合，与适当的佐剂(例如完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂等)混合而免疫于动物(人除外)。由此如上所述可以在该动物体内诱发针对免疫原的抗体，可以由该动物回收脾细胞，通过杂交瘤法制备单克隆抗体。
具有相对于HbA1c的优选特异性的抗HbA1c抗体的筛选可以如下实施：准备固相化了通常的血红蛋白的板和固相化了HbA1c的板，确认所得到的多列抗体对两者的反应性，由此实施上述筛选。对通常的血红蛋白的结合性为背景程度以下、并且对HbA1c的反应性高的抗体可以优选用作HbA1c特异性抗体。
以上作为测定对象物，以HbA1c作为例子说明了本发明的免疫测定试剂的使用方法，但是只要是能够使用未致敏胶乳颗粒进行免疫测定的物质，则本发明的免疫测定试剂可以用于任意物质的测定。
实施例
以下基于实施例对本发明进行更具体的说明。但是本发明不被下述实施例限定。
＜研究1＞
将公知的HbA1c免疫测定试剂盒中含有的未致敏胶乳试剂(以下R1试剂)和抗HbA1c抗体液(以下R2试剂)分别约5mL分注到10mL管。将管在-20℃的冷库保存一夜，使得R1试剂和R2试剂冷冻。将它们在室温下放置、解冻，肉眼确认试剂的状态。
对于R1试剂而言，胶乳产生白色的凝集沉淀，沉淀后的液体变为透明。作为免疫测定试剂，明显是不能使用的状态。另一方面，R2试剂没有外观上的变化。因此，将冷冻･解冻0次的R2试剂和冷冻･解冻1次的R2试剂与冷冻･解冻0次的R1试剂一起安装于日立7170自动分析仪，测定HbA1c标准品描绘标准曲线，结果标准曲线一致。由此确认抗体液即使经过冷冻解冻，也不会对测定性能造成影响。因此，对于胶乳试剂，进行保护不会形成冷冻所导致的劣化的研究。
<研究2>
向R1试剂在3w/v%～10w/v%的范围每1%加入甜菜碱(三甲基甘氨酸)，调查冷冻･解冻的影响。将加入有各浓度甜菜碱的R1试剂3等分，一根在4℃下保存。另两根与研究1同样地保存于-20℃的冷库一夜，次日通过室温放置进行解冻。没有胶乳凝集沉淀的情况，但是在管的底部，白色的胶乳浓度升高，因此轻轻颠倒混合。两根中一根在4℃下保存，剩余的一根在-20℃下保存一夜。次日室温下解冻，轻轻颠倒混合。
将冷冻･解冻0次、1次、2次的R1试剂并排安装于日立7170自动分析仪，对于HbA1c标准品在副波长800nm/主波长660nm下进行测定，描绘标准曲线。各标准品的两点终点法(2point end)的信号如表1所示。
[表1]
确认到甜菜碱浓度为6w/v%左右时，即使重复冷冻解冻、信号的数值也稳定。若甜菜碱浓度降低则存在由于冷冻解冻的重复而信号升高的倾向，另外若甜菜碱浓度升高则观察到由于冷冻解冻的重复而信号降低的倾向。
<研究3>
通过研究2的结果，认为加入到R1试剂的甜菜碱的浓度为6w/v%左右是合适的。因此，制备添加有甜菜碱6w/v%或7w/v%的R1试剂，分割为各7根，1根在4℃下保存。剩余6根在-20℃下保存一夜，次日取出全部根数，在室温下解冻，轻轻颠倒混合，将1根转移到4℃，剩下的在-20℃下保存一夜。重复此操作，准备冷冻･解冻次数为0次～6次的R1试剂。将这些R1试剂和R2试剂安装于日立7170自动分析仪，描绘标准曲线。
图1表示在胶乳试剂R1加入6w/v%甜菜碱时直至冷冻･解冻次数6次为止的标准曲线的信号的变化。直至冷冻･解冻3次为止，没有观察到特别大的变化，但是冷冻･解冻第4次以后观察到信号的降低。7w/v%甜菜碱的情况也为同样的结果。
图2重叠示出添加有6w/v%甜菜碱的R1试剂的直至冷冻･解冻3次为止的标准曲线。由于信号几乎没有变化，判明即使胶乳试剂万一冷冻，只要解冻来使用，则与没有经过冷冻･解冻的R1试剂同样地进行反应。即，满足严格要求的试剂的稳定性。添加有7w/v%甜菜碱的R1试剂也得到同样的结果。
<研究4>
在公知的HbA1c免疫测定试剂盒中含有的未致敏胶乳试剂同等品(R1试剂)中以达到5%～25%的方式添加甜菜碱。由于胶乳浓度因添加甜菜碱而降低，因此加入胶乳原液进行调整。将该添加有甜菜碱的未致敏胶乳试剂的一部分在-20℃下放置2夜后，室温下放置解冻。该解冻后，将颠倒混合的R1试剂和冷藏保存的R1试剂并排安装于日立7170自动分析仪，描绘标准曲线。需要说明的是，抗HbA1c抗体液(R2试剂)使用敏化剂的量稍微增加的抗体液。
表2示出副波长800nm/主波长660nm下的各标准品的两点终点法的信号。没有观察到R1试剂的冷冻的有无时的差异。另外，描绘标准曲线进行对照的测定，结果测定值也恒定。
[表2]
表3制备R1试剂的胶乳浓度增量50%的样品来使用，除此之外与表2的研究同样地进行。通过提高胶乳浓度，标准品的两点终点法的信号大幅升高，也没有观察到由于冷冻的有无所导致的差异。添加5%甜菜碱时，由于超过了所设定的ABS，因而没有绘制标准曲线，但是绘制标准曲线时，对照的测定值也是恒定的。
[表3]
<比较例>
制备在胶乳试剂R1添加0.1v/v%作为表面活性剂的Tween 20来替代甜菜碱的样品。将加入有表面活性剂的R1试剂采集于管，将其在-20℃下保存一夜，次日室温下解冻。若肉眼观察则没有发现胶乳的凝集沉淀。因此，使用加入有表面活性剂的R1试剂利用日立7170描绘标准曲线。其结果与研究3的结果汇总示于图2。由于完全没有反应性，因此可知由于表面活性剂而阻碍HbA1c在胶乳表面的物理吸附。
序列表
<110> TFB, INC.
<120> 未致敏胶乳试剂的劣化防止方法
<130> PF505-PCT
<160> 1
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Val His Leu Thr Pro
1 5
Claims (7)
1.免疫测定试剂，其在溶剂中含有未致敏的胶乳颗粒和三甲基甘氨酸，试剂中的三甲基甘氨酸浓度为5～30w/v%。
2.根据权利要求1所述的试剂，其中，试剂中的三甲基甘氨酸浓度为5～10w/v%。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其为利用凝集法的免疫测定试剂。
4.根据权利要求1或2所述的试剂，其为血红蛋白A1c的免疫测定试剂。
5.免疫测定试剂的冷冻劣化防止方法，其包括使三甲基甘氨酸共存于含有未致敏胶乳颗粒的免疫测定试剂中，试剂中的三甲基甘氨酸浓度为5～30w/v%。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，试剂中的三甲基甘氨酸浓度为5～10w/v%。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中，所述免疫测定试剂为利用凝集法的免疫测定试剂。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013-040337 | 2013-03-01 | ||
| JP2013040337 | 2013-03-01 | ||
| PCT/JP2014/053686 WO2014132833A1 (ja) | 2013-03-01 | 2014-02-18 | 未感作ラテックス試薬の劣化防止方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105122062A CN105122062A (zh) | 2015-12-02 |
| CN105122062B true CN105122062B (zh) | 2017-03-08 |
Family
ID=51428105
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201480011899.5A Expired - Fee Related CN105122062B (zh) | 2013-03-01 | 2014-02-18 | 未致敏胶乳试剂的劣化防止方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20150369826A1 (zh) |
| EP (1) | EP2963419A4 (zh) |
| JP (1) | JP6304231B2 (zh) |
| KR (1) | KR20150125920A (zh) |
| CN (1) | CN105122062B (zh) |
| CA (1) | CA2900740A1 (zh) |
| WO (1) | WO2014132833A1 (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6224217B1 (ja) * | 2016-12-27 | 2017-11-01 | Jsr株式会社 | ラテックス粒子分散液の保管方法 |
| JP7308148B2 (ja) * | 2017-01-30 | 2023-07-13 | ゾエティス サービシズ リミテッド ライアビリティ カンパニー | 溶液ベースのプラズモン特異的結合パートナーアッセイおよび金属ナノ構造体 |
| WO2019026569A1 (ja) | 2017-08-01 | 2019-02-07 | 藤倉化成株式会社 | 不溶性担体粒子を含有する免疫測定試薬の劣化防止手段 |
| JP7096482B2 (ja) * | 2017-12-05 | 2022-07-06 | 藤倉化成株式会社 | 感作された不溶性担体粒子を含有する免疫測定試薬の劣化防止手段 |
| CN112034186A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-12-04 | 南京立顶医疗科技有限公司 | 一种基于生物素-链霉亲和素放大的糖化血红蛋白试剂盒及其制备方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4693912A (en) | 1985-02-28 | 1987-09-15 | Technicon Instruments Corporation | Lyophilization of reagent-coated particles |
| JPH0672888B2 (ja) * | 1986-03-24 | 1994-09-14 | 日立化成工業株式会社 | リウマチ因子定量用試薬 |
| DE3622993A1 (de) * | 1986-07-09 | 1988-01-21 | Behringwerke Ag | Dispersionspolymere, biologisch aktive dispersionspolymere, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung als diagnostisches mittel |
| US5470759A (en) * | 1992-06-10 | 1995-11-28 | Fujirebio, Inc. | Anti-glycated hemoglobin monoclonal antibody and method for measuring glycated hemoglobin |
| JP2596321B2 (ja) * | 1992-06-16 | 1997-04-02 | 富士レビオ株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| JP2677753B2 (ja) | 1993-07-22 | 1997-11-17 | 株式会社エスアールエル | 凝集イムノアッセイ法 |
| JPH11258241A (ja) | 1998-03-09 | 1999-09-24 | Mitsubishi Chemical Corp | ラテックス試薬 |
| US6372029B1 (en) | 2000-01-31 | 2002-04-16 | Hewlett-Packard Company | Ink jet ink compositions having good freeze-thaw stability |
| CA2435535A1 (en) * | 2001-05-18 | 2002-11-28 | Srl, Inc. | Immunoassay |
| WO2007074860A1 (ja) * | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | 凝集測定用試薬及び凝集測定方法 |
| CN101915849B (zh) * | 2010-06-30 | 2013-06-05 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 一种方便加样的用于测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂 |
-
2014
- 2014-02-18 CN CN201480011899.5A patent/CN105122062B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2014-02-18 CA CA2900740A patent/CA2900740A1/en not_active Abandoned
- 2014-02-18 US US14/766,329 patent/US20150369826A1/en not_active Abandoned
- 2014-02-18 WO PCT/JP2014/053686 patent/WO2014132833A1/ja active Application Filing
- 2014-02-18 KR KR1020157015159A patent/KR20150125920A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-02-18 EP EP14756675.6A patent/EP2963419A4/en not_active Withdrawn
- 2014-02-18 JP JP2015502870A patent/JP6304231B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105122062A (zh) | 2015-12-02 |
| US20150369826A1 (en) | 2015-12-24 |
| EP2963419A1 (en) | 2016-01-06 |
| KR20150125920A (ko) | 2015-11-10 |
| JP6304231B2 (ja) | 2018-04-04 |
| EP2963419A4 (en) | 2016-11-02 |
| CA2900740A1 (en) | 2014-09-04 |
| JPWO2014132833A1 (ja) | 2017-02-02 |
| WO2014132833A1 (ja) | 2014-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105122062B (zh) | 未致敏胶乳试剂的劣化防止方法 | |
| AU2016203292B2 (en) | Monoclonal antibody, and immunoassay using same | |
| CN100401068C (zh) | 肝细胞癌的诊断 | |
| CN101988924B (zh) | 检测血液抗环瓜氨酸多肽抗体的试纸条及制备方法 | |
| DK2225274T3 (en) | COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR EARLY DIAGNOSTICATION OF PREGNANCY | |
| WO2014112318A1 (ja) | 検体中のヘモグロビンA1cの免疫測定方法 | |
| KR101433974B1 (ko) | 응집 저해 측정법 및 응집 저해 측정용 시약 | |
| CN108152512A (zh) | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
| JP7508494B2 (ja) | ヘモグロビンの測定試薬、測定キット及び測定方法 | |
| JP2004537036A (ja) | 動物において早期腎疾患を検出する方法 | |
| CN109188000A (zh) | 一种便携式检测人甲状旁腺激素的试纸条及其制备方法 | |
| EP3564673B1 (en) | L-fabp immunoassay method and assay reagent used in said method | |
| JPH0735752A (ja) | 凝集イムノアッセイ法 | |
| EP3422004B1 (en) | Method for detecting carcinoembryonic fibronectin using immunochromatography | |
| CN102341707B (zh) | 检测试剂以及使用该检测试剂测定检测样品中的被测定物的方法 | |
| JP5723484B2 (ja) | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 | |
| CN113063935A (zh) | 一体化自放大的间接竞争免疫层析试纸及检测方法 | |
| JPH06167495A (ja) | 凝集イムノアッセイ法 | |
| JP2019053068A (ja) | 可溶型線維芽細胞増殖因子受容体の高感度多重イムノアッセイ | |
| ES2334972T3 (es) | Inmunoensayo para medulasina humana y metodo de diagnostico de la esclerosis multiple. | |
| JP7096482B2 (ja) | 感作された不溶性担体粒子を含有する免疫測定試薬の劣化防止手段 | |
| JP2004189665A (ja) | 抗ｃ反応性タンパク質抗体、この抗体を用いたバイオセンサ、この抗体の作製方法、及びこの抗体を用いた免疫測定方法 | |
| JPH1010127A (ja) | 凝集イムノアッセイ法 | |
| CROSIGNANI et al. | PROBLEM OF IMMUNOLOGIGAL ASSAY OF HOG |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170308 Termination date: 20190218 |