CN110514848B - 一种糖化血红蛋白抗体复合物和糖化血红蛋白检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本申请涉及生化检测技术领域，具体提供一种糖化血红蛋白抗体复合物，其包含高分子载体和至少两个糖化血红蛋白抗体，该至少两个糖化血红蛋白抗体分别与该高分子载体偶联。本发明申请还提供一种糖化血红蛋白检测试剂盒，包含试剂一和试剂二，试剂一包含胶乳微球，试剂二包含该糖化血红蛋白抗体复合物。本发明的糖化血红蛋白抗体复合物在一个高分子载体上负载至少两个糖化血红蛋白抗体，检测时所形成的“胶乳微球‑糖化血红蛋白‑糖化血红蛋白抗体复合物”颗粒迅速增大，能够提高检测的灵敏度，测定结果媲美作为糖化血红蛋白检测“金标准”的HPLC法，并且能避免现有的糖化血红蛋白检测试剂盒试剂不稳定或者操作繁琐的问题。

Description

一种糖化血红蛋白抗体复合物和糖化血红蛋白检测试剂盒

技术领域

本发明涉及生化分析技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白抗体复合物和包含该糖化血红蛋白抗体复合物的糖化血红蛋白检测试剂盒。

背景技术

糖化血红蛋白(HbA1c)是人血红细胞中血红蛋白和葡萄糖结合的复合物，与血液中葡萄糖的浓度成正比，可反映120天前的血糖水平，测定人血中的糖化血红蛋白浓度，对糖尿病的筛查和监控有重要意义。临床上常用的测定糖化血红蛋白的方法有高效液相色谱法（HPLC法）、胶乳免疫比浊法（直接法和竞争法）、酶法、层析法等。HPLC法是糖化血红蛋白检测的“金标准”，但需配套特殊仪器，成本较高；酶法通过测定糖化血红蛋白降解的间接产物进行测量，干扰因素较多，准确度有限；层析法的前处理繁琐，不适合高通量检测。

目前，市场上以直接胶乳免疫比浊法测定糖化血红蛋白占主流，该方法是测定糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分比，干扰因素少，可配套生化分析仪进行高通量检测。具体方法是将胶乳免疫比浊试剂盒的试剂一中的胶乳微球和溶血后的全血混合，使微球充分吸附血液中的血红蛋白和糖化血红蛋白，再用糖化血红蛋白单克隆抗体特异性结合糖化血红蛋白，然后用抗糖化血红蛋白单克隆抗体抗体（二抗）与血红蛋白单克隆抗体结合而产生颗粒聚集，检测颗粒形成的浊度变化。由于二抗只有两个位点与糖化血红蛋白单抗结合，检测中形成的“胶乳微球-糖化血红蛋白-糖化血红蛋白单抗-二抗”颗粒增大程度有限，检测灵敏度不够。而且，因糖化血红蛋白抗体和二抗长时间在同一体系中共存，可能会出现测试不稳定现象，很多厂家将糖化血红蛋白单抗和二抗分别做成两个包装，即试剂二和试剂三，由检验人员现场混合检测。这增加操作误差，导致结果差异较大。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种糖化血红蛋白抗体复合物，采用该糖化血红蛋白抗体复合物的糖化血红蛋白检测试剂盒具有良好的检测灵敏度，检测性能可媲美作为糖化血红蛋白检测“金标准”的HPLC法。

因此，本发明第一方面提供一种糖化血红蛋白抗体复合物，该糖化血红蛋白抗体复合物包含高分子载体和至少两个糖化血红蛋白抗体，该至少两个糖化血红蛋白抗体分别与该高分子载体偶联。

在本发明糖化血红蛋白抗体复合物的一些优选实施方案中，该糖化血红蛋白抗体为2-20个。

在本发明糖化血红蛋白抗体复合物的一些实施方案中，该高分子载体为生物高分子载体。

在本发明糖化血红蛋白抗体复合物的一些优选实施方案中，该生物高分子载体例如为牛血清白蛋白、卵白蛋白、血蓝蛋白、明胶、胶原蛋白、蛋白胨、葡聚糖、氨基葡聚糖、甲壳素或壳聚糖。

在本发明糖化血红蛋白抗体复合物的一些另外优选的实施方案中，该生物高分子载体为亲和素-生物素系统或链霉亲和素-生物素系统，其中该糖化血红蛋白抗体为4个。

在本发明糖化血红蛋白抗体复合物的另一些实施方案中，该高分子载体为合成高分子载体。

在本发明糖化血红蛋白抗体复合物的另一些优选实施方案中，该合成高分子载体例如为含游离羧基、氨基、巯基或羟基的聚苯乙烯类，聚天冬氨酸或聚赖氨酸。

本发明的第二方面提供一种糖化血红蛋白检测试剂盒，该糖化血红蛋白检测试剂盒包含试剂一和试剂二，其中该试剂一包含胶乳微球，该试剂二包含本发明第一方面的糖化血红蛋白抗体复合物。

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该试剂一的pH为6.5-8.5，其配方如下：

组分	含量
		胶乳微球	0.05-0.5% (w/v)
缓冲剂	10-500mM
		表面活性剂	0.005-1% (w/v)
防腐剂	0.05-1% (w/v)

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该试剂二的pH为5.5-8.5，其配方如下：

组分	含量
		糖化血红蛋白抗体复合物	0.01-1g/L
缓冲剂	10-500mM
		无机盐	0.1-5% (w/v)
表面活性剂	0.05-2% (w/v)
		稳定剂	0.5-10g/L
防腐剂	0.05-1% (w/v)

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该胶乳微球为聚苯乙烯微球，其粒径为50-400nm，优选80-150nm。

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该缓冲剂为磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、Tris、Good’s缓冲液或者它们的组合。

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该防腐剂为叠氮钠、ProClin300、苯甲酸盐类、庆大霉素或者它们的组合。

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇对异辛基苯基醚、烷基酚聚氧乙烯醚或者它们的组合。

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该无机盐为硫酸钠、氯化钠、硫酸钾、氯化铵或者它们的组合。

在本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒的一些优选实施方案中，该稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、蔗糖、甘油、EDTA或者它们的组合。

本发明的有益效果：

本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒包含试剂一和试剂二，其中试剂一包含胶乳微球，试剂二包含本发明的糖化血红蛋白抗体复合物。传统的糖化血红蛋白检测试剂盒中二抗只能结合两个分子的糖化血红蛋白抗体，而本发明的糖化血红蛋白抗体复合物在一个高分子载体上结合两个到几十个糖化血红蛋白抗体，增大了该复合物结合待测血样中的糖化血红蛋白的位点，检测时所形成的“胶乳微球-糖化血红蛋白-糖化血红蛋白抗体复合物”颗粒增大更迅速，比传统的糖化血红蛋白检测试剂盒检测时所形成的“胶乳微球-糖化血红蛋白-糖化血红蛋白单抗-二抗”颗粒在检测灵敏度上更有优势。

由于本发明的糖化血红蛋白抗体复合物的上述特征，本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒可以不采用抗糖化血红蛋白单克隆抗体抗体（二抗），只包含试剂一和试剂二液体双试剂，能避免传统的糖化血红蛋白检测试剂盒的试剂二中糖化血红蛋白抗体和二抗共存而引起的测试不稳定的现象，也避免一些现有的糖化血红蛋白检测试剂盒将糖化血红蛋白抗体和二抗分装成试剂二和试剂三所导致的操作繁琐，造成操作误差和结果差异较大的问题。

本发明提供的糖化血红蛋白抗体复合物，原料获取容易，制备工艺成熟，可大规模生产，批次稳定，成本低廉。本发明提供的糖化血红蛋白检测试剂盒性能稳定，适用于直接胶乳免疫比浊法测定糖化血红蛋白。经性能评估，试剂盒日间精密度变异系数在3%以内，与靶值的相对偏差在3%以内，日间精密度、准确度良好；40例样本与HPLC法比对的相关性大于0.98，线性关系良好，测定结果媲美作为糖化血红蛋白检测“金标准”的HPLC法；试剂的37℃加速破坏能稳定7天，相当于在2-8℃下能稳定一年。

附图说明

图1显示根据本发明一些实施方案的包含高分子载体和4个糖化血红蛋白抗体的糖化血红蛋白抗体复合物的结构示意图；

图2显示根据本发明另一些实施方案的包含高分子载体和4个糖化血红蛋白抗体的糖化血红蛋白抗体复合物的结构示意图，其中高分子载体为亲和素-生物素系统或链霉亲和素-生物素系统；

图3显示用本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒以直接胶乳免疫比浊法检测糖化血红蛋白的原理示意图；

图4显示根据本发明实施例5，用HPLC法和用本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒以直接胶乳免疫比浊法检测糖化血红蛋白的方法学对比；

图5显示根据本发明实施例6，用HPLC法和用本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒以直接胶乳免疫比浊法检测糖化血红蛋白的方法学对比。

具体实施方式

下面通过具体实施方式并结合附图对本发明作进一步详细说明。 本发明提供一种糖化血红蛋白抗体复合物，该糖化血红蛋白抗体复合物包含高分子载体和至少两个糖化血红蛋白抗体，该至少两个糖化血红蛋白抗体分别与该高分子载体偶联。

本文所用的术语“糖化血红蛋白抗体”是指能特异性识别并结合糖化血红蛋白的抗体。优选地，“糖化血红蛋白抗体”是指能特异性识别并结合糖化血红蛋白β-链N末端的单克隆抗体。单克隆抗体的来源可以是例如鼠源或兔源。

本文所用的术语“高分子载体”包括生物高分子载体和合成高分子载体。

本文所用的术语“生物高分子载体”是指任何不与血液中的成分发生交叉反应的含有游离羧基、氨基、巯基或羟基的生物高分子材料，属于天然来源的高分子材料。生物高分子载体包括例如惰性蛋白质或寡肽材料、碳水化合物材料等。惰性蛋白质或寡肽材料的例子包括但不限于牛血清白蛋白、卵白蛋白、血蓝蛋白、明胶、胶原蛋白等，碳水化合物材料的例子包括但不限于葡聚糖、氨基葡聚糖、甲壳素、壳聚糖等。在本发明的一些实施方案中，生物高分子载体为亲和素-生物素系统或者链霉亲和素-生物素系统。

本文所用的术语“合成高分子载体”是指任何不与血液中的成分发生交叉反应的含有游离羧基、氨基、巯基或羟基的有机高分子材料，属于人工合成的高分子材料。合成高分子材料的例子包括但不限于含游离羧基、氨基、巯基或羟基的聚苯乙烯类，聚天冬氨酸或聚赖氨酸等。

本文所用的术语“偶联”是指糖化血红蛋白与高分子载体通过羧基、氨基、巯基或羟基发生共价连接。在高分子载体为亲和素-生物素系统或者链霉亲和素-生物素系统的情况中，糖化血红蛋白与生物素发生共价连接，而生物素与亲和素或者链霉亲和素发生特异性结合。

生物高分子和合成高分子的分子量可以在宽泛的范围内选择。例如，生物高分子和合成高分子的分子量可以在5-800kD的范围内。根据生物高分子和合成高分子载体的结构和分子量而定，与该载体偶联的糖化血红蛋白抗体的数目可以从两个到几十个不等，例如2-20个糖化血红蛋白抗体。可根据检测需要设计与该载体偶联的糖化血红蛋白抗体的数目。

图1显示了根据本发明一些实施方案的包含高分子载体和4个糖化血红蛋白抗体的糖化血红蛋白抗体复合物的结构示意图，其中附图标记1表示糖化血红蛋白抗体，2表示高分子载体，该高分子载体可以为生物高分子载体或合成高分子载体。尽管图1所示的糖化血红蛋白抗体复合物的结构示意图显示了4个糖化血红蛋白抗体，但可以理解，糖化血红蛋白抗体的数目可以为两个到几十个不等，例如2-20个。

图1所示的糖化血红蛋白抗体复合物可以通过糖化血红蛋白抗体与生物高分子载体或合成高分子载体以直接或间接方式共价偶联来制备。共价偶联的方法包括但不限于碳二亚胺法、戊二醛法、过碘酸钠法、N-羟基琥珀酰亚胺酯法、马来酰亚胺法等，这是本领域公知的。制备步骤可例如如下进行：取适量的生物高分子载体或合成高分子载体加入适量的缓冲液（例如磷酸盐缓冲液(PBS)、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液(MES)）中，室温磁力搅拌混匀，向其中加入适量的糖化血红蛋白抗体，室温搅拌0.5-1小时，加入适量的活化剂（例如碳二亚胺、戊二醛），室温搅拌2小时，然后用脱盐柱或超滤离心法或透析法将未偶联的物质去除，将偶联好的糖化血红蛋白抗体复合物在合适的缓冲液中-20℃保存。

图2显示了根据本发明另一些实施方案的包含高分子载体和4个糖化血红蛋白抗体的糖化血红蛋白抗体复合物的结构示意图，其中高分子载体为亲和素-生物素系统或链霉亲和素-生物素系统，其中附图标记1表示糖化血红蛋白抗体，3表示亲和素或链霉亲和素，4表示生物素。本领域公知，亲和素是一种糖蛋白，分子量60kD，每个亲和素分子由4个亚基组成，因此可以与4个生物素分子亲密结合；链霉亲和素是与亲和素具有类似生物学特性的一种蛋白质，分子量为65kD，由4条序列相同的肽链构成，每条肽链可以结合1个生物素分子，每个链霉亲和素分子也可以与4个生物素分子紧密结合。

图2所示的糖化血红蛋白抗体复合物可以通过在糖化血红蛋白抗体上标记生物素，然后与链霉亲和素结合来制备，制备步骤可例如如下进行：制备步骤可例如如下进行：将适量的糖化血红蛋白抗体用缓冲液（例如磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液）进行透析，取适量的N-羟基琥珀酰亚胺生物素用有机溶剂（例如DMSO或DMF）溶解，取1体积的N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液加入10体积的糖化血红蛋白抗体溶液中，室温搅拌2小时，用脱盐柱或超滤离心法或透析法去除游离的生物素，制备成生物素糖化血红蛋白抗体溶液，然后取适量生物素糖化血红蛋白抗体溶液加入适量的链霉亲和素溶液中，室温搅拌0.5-1小时，即制备成糖化血红蛋白-链霉亲和素-生物素抗体复合物。

本发明的糖化血红蛋白抗体复合物可作为直接胶乳免疫比浊法糖化血红蛋白检测试剂盒中的试剂二的主要组分，应用于测定全血中的糖化血红蛋白占血红蛋白的比例。图3显示了检测原理示意图，其中附图标记1表示糖化血红蛋白抗体，2表示高分子载体，5表示胶乳微球，6表示血红蛋白或糖化血红蛋白。由图3可见，高分子载体2和糖化血红蛋白抗体1构成糖化血红蛋白抗体复合物，血红蛋白或糖化血红蛋白6吸附在胶乳微球5上。糖化血红蛋白抗体复合物的糖化血红蛋白抗体1特异性地识别并结合血红蛋白或糖化血红蛋白6中的糖化血红蛋白，形成较大体积的颗粒物。在实际检测的样品液相环境中，该较大体积的颗粒物的形成引起液相中的浊度明显变化，通过检测浊度的变化可以检测样品中糖化血红蛋白抗体的含量。

本发明的糖化血红蛋白检测试剂盒可应用于直接胶乳免疫比浊法检测全血样本中的糖化血红蛋白，检测原理可以是透射比浊法或散射比浊法，检验仪器可适用基于可见光或紫外光的的透射或散射原理的仪器，如生化分析仪或特定蛋白分析仪。检测方法简述如下：用适量稀释过的全血样本（红细胞破碎，血红蛋白释放），加入到适量的含有胶乳微球的试剂一中，于37℃下孵育1-5分钟，此时样本中的血红蛋白和糖化血红蛋白吸附到胶乳微球上。然后，加入适量的含有糖化血红蛋白抗体复合物的试剂二，继续于37℃下孵育1-5分钟。在540-800nm的特定波长下检测加入试剂二的瞬间和孵育1-5分钟后的胶乳微球的透射或散射光信号，加入试剂二的瞬间的检测信号记为S₁，孵育1-5分钟后的检测信号记为S₂。计算S₂ - S₁的差值，代入校准曲线中，即可计算出样本中糖化血红蛋白占血红蛋白的比例，其中校准曲线用已知血红蛋白浓度和糖化血红蛋白浓度的血液校准品制作。

以下通过非限制性的示例性实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例中用到的糖化血红蛋白抗体、高分子载体（如牛血清白蛋白、链霉亲和素和生物素）、偶联活化剂（如戊二醛）以及其它试剂（如胶乳微球等）均可以通过市售途径获得。

实施例1：糖化血红蛋白抗体-牛血清白蛋白(BSA)复合物

糖化血红蛋白抗体与牛血清白蛋白(BSA)复合物可按如下步骤制备：

（1）向20mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)中加入5mg糖化血红蛋白抗体，室温磁力搅拌混匀，然后加入10mg BSA，室温搅拌0.5小时；

（2）加入20μL 2.5%(w/v)戊二醛，室温搅拌2小时；

（3）用20mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)于4℃透析过夜，换液3次，然后移入20mM Tris-HCl缓冲液（pH8.0，含0.09% NaN₃, 0.9%NaCl）中，于4℃透析过夜，换液3次；

（4）将制备好的糖化血红蛋白抗体-牛血清白蛋白(BSA)复合物分装，于-20℃保存。

实施例2：糖化血红蛋白抗体-链霉亲和素-生物素复合物

糖化血红蛋白抗体-链霉亲和素-生物素复合物可按如下步骤制备：

（1）用100mM硼酸盐缓冲液(pH 8.6)对糖化血红蛋白抗体4℃透析过夜，换液3次；

（2）取1mg N-羟基琥珀酰亚胺生物素用1mL DMSO溶解；

（3）取1mL糖化血红蛋白抗体溶液(1mg/mL)和100μL N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液混合，室温搅拌2小时；

（4）用20mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)于4℃透析过夜，换液3次；

（5）取1mg制备好的生物素化糖化血红蛋白抗体加入0.1mg链霉亲和素，室温搅拌0.5小时；

（6）用Superdex G200凝胶层析柱（GE公司）过滤，分离糖化血红蛋白-链霉亲和素-生物素抗体结合物，分装，于-20℃保存。

实施例3：糖化血红蛋白检测试剂盒1

本实施例的糖化血红蛋白检测试剂盒采用实施例1制备的糖化血红蛋白抗体-牛血清白蛋白复合物。

试剂一的配方如下：

组分	每升用量
		胶乳微球	2g
硼酸	12.4g
		硼砂	19g
TritonX-100	5μL
		叠氮钠	0.9mL
纯化水	补足1L

试剂二的配方如下：

组分	每升用量
		糖化血红蛋白抗体-牛血清白蛋白复合物	0.05g
十二水合磷酸氢二钠	6.46g
		二水合磷酸二氢钠	0.9g
氯化钠	9g
		甘油	0.5g
叠氮钠	0.9mL
		纯化水	补足1L

实施例4：糖化血红蛋白检测试剂盒2

本实施例的糖化血红蛋白检测试剂盒采用实施例2制备的糖化血红蛋白抗体-链霉亲和素-生物素复合物。

试剂一的配方如下：

组分	每升用量
		胶乳微球	2g
硼酸	12.4g
		硼砂	19g
TritonX-100	5μL
		纯化水	补足1L

试剂二的配方如下：

组分	每升用量
		糖化血红蛋白-链霉亲和素-生物素抗体复合物	0.05g
十二水合磷酸氢二钠	6.46g
		二水合磷酸二氢钠	0.9g
氯化钠	9g
		甘油	0.5g
叠氮钠	0.9mL
		纯化水	补足1L

实施例5：糖化血红蛋白检测试剂盒1的性能评估

本实施例对实施例3制备的糖化血红蛋白检测试剂盒进行日间精密度、准确度、方法学比对（线性回归分析）和加速稳定性（37℃加速破坏）的性能评估。

测试仪器：日立7180生化分析仪；

测试方法：

（1）校准品测试步骤：取5µL校准品加入180µL试剂一中，仪器于37℃下孵育5分钟后，再加入60µL试剂二，在660nm测试波长下读取吸光度A₁，仪器于37℃下孵育5分钟后，在660nm测试波长下读取吸光度A₂。

（2）校准曲线制作：用已溯源的糖化血红蛋白占血红蛋白的百分比浓度校准品定标测试，按以上测试步骤获取吸光度A₁和A₂，以该百分比浓度为横坐标，吸光度差ΔA (ΔA=A₂-A₁)为纵坐标，制作校准曲线。

（3）全血样本测定：用20倍体积的纯化水稀释样本，混匀后取5µL用于测试，按以上测试步骤获取全血样本的吸光度A₁和A₂，将吸光度差ΔA (ΔA=A₂-A₁)代入校准曲线，即得到该全血样本中糖化血红蛋白占血红蛋白的百分比浓度。

试剂盒评估结果如下：

I. 日间精密度与准确度

用糖化血红蛋白检测试剂盒1分别对质控L和质控H进行测试，每天测试10次，连续测试10天，计算所有结果的变异系数。结果如下：

II. 方法学比对

取40例新鲜全血，用HPLC法测试，同时用本发明法糖化血红蛋白检测试剂盒1测试，用线性回归法计算两组测试值的相关系数。

图4显示了HPLC法测试值与本发明法测试值的线性回归分析结果，其中R²=0.9866。

III. 试剂的加速稳定性实验

糖化血红蛋白检测试剂盒1放37℃加速老化，于第0、3、5、7天分别对质控L和质控H进行测试，计算第7天与第0天的相对偏差。

质控L第7天与第0天均值的相对偏差为-0.56%，质控H第7天与第0天均值的相对偏差为-0.38%。

以上评估结果表明，本发明制备的糖化血红蛋白检测试剂盒1的试剂性能良好。具体地，日间精密度变异系数在3%以内，与靶值的相对偏差在3%以内，日间精密度、准确度良好；40例样本与HPLC法比对的相关性大于0.98，表明线性关系良好，测得的糖化血红蛋白测试值与作为糖化血红蛋白检测“金标准”的HPLC法测得的测试值非常接近；试剂的37℃加速破坏能稳定7天，相当于在2-8℃下能稳定一年。

实施例6. 糖化血红蛋白检测试剂盒2的性能评估

本实施例对实施例4制备的糖化血红蛋白检测试剂盒进行日间精密度、准确度、方法学比对（线性回归分析）和加速稳定性（37℃加速破坏）的性能评估。测试仪器和方法参照实施例5，试剂盒评估结果如下：

I. 日间精密度与准确度

用糖化血红蛋白检测试剂盒2分别对质控L和质控H进行测试，每天测试10次，连续测试10天，计算所有结果的变异系数。结果如下：

II. 方法学比对

取40例新鲜全血，用HPLC法测试，同时用本发明法糖化血红蛋白检测试剂盒2测试，用线性回归法计算两组测试值的相关系数。

图5显示了HPLC法测试值与本发明法测试值的线性回归分析结果，其中R²=0.9899。

III. 试剂的加速稳定性实验

糖化血红蛋白检测试剂盒2放37℃加速老化，于第0、3、5、7天分别对质控L和质控H进行测试，计算第7天与第0天的相对偏差。

质控L第7天与第0天均值的相对偏差为2.31%，质控H第7天与第0天均值的相对偏差为0%。

以上评估结果表明，本发明制备的糖化血红蛋白检测试剂盒2的试剂性能良好。具体地，日间精密度变异系数在3%以内，与靶值的相对偏差在3%以内，日间精密度、准确度良好；40例样本与HPLC法比对的相关性大于0.98，表明线性关系良好，测得的糖化血红蛋白测试值与作为糖化血红蛋白检测“金标准”的HPLC法测得的测试值非常接近；试剂的37℃加速破坏能稳定7天，相当于在2-8℃下能稳定一年。

以上应用了具体实例对本发明进行了阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。本发明所属技术领域的技术人员依据本发明的构思，还可以做出若干简单推演、变形或替换。这些推演、变形或替换方案也落入本发明的权利要求范围内。

Claims (7)

1.一种糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述糖化血红蛋白检测试剂盒包含试剂一和试剂二，所述试剂一包含胶乳微球，所述试剂二包含糖化血红蛋白抗体复合物，所述糖化血红蛋白抗体复合物包含高分子载体和至少两个糖化血红蛋白抗体，所述至少两个糖化血红蛋白抗体分别与所述高分子载体偶联，所述高分子载体为生物高分子载体；所述生物高分子载体为牛血清白蛋白或链霉亲和素-生物素系统；

所述试剂一的pH为6.5-8.5，其配方如下：

组分 含量 胶乳微球 0.05-0.5% (w/v) 缓冲剂 10-500mM 表面活性剂 0.005-1% (w/v) 防腐剂 0.05-1% (w/v)

所述试剂一中，所述的表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇对异辛基苯基醚、烷基酚聚氧乙烯醚或者它们的组合；所述的防腐剂为叠氮钠、ProClin300、苯甲酸盐类、庆大霉素或者它们的组合；

所述试剂二的pH为5.5-8.5，其配方如下：

组分 含量 糖化血红蛋白抗体复合物 0.01-1g/L 缓冲剂 10-500mM 无机盐 0.1-5% (w/v) 表面活性剂 0.05-2% (w/v) 稳定剂 0.5-10g/L 防腐剂 0.05-1% (w/v)

所述试剂二中，所述的无机盐为硫酸钠、氯化钠、硫酸钾、氯化铵或者它们的组合；所述的表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇对异辛基苯基醚、烷基酚聚氧乙烯醚或者它们的组合；所述的稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、蔗糖、甘油、EDTA或者它们的组合；所述的防腐剂为叠氮钠、ProClin300、苯甲酸盐类、庆大霉素或者它们的组合。

2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述糖化血红蛋白抗体为2-20个。

3.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述糖化血红蛋白抗体为4个。

4.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的胶乳微球为聚苯乙烯微球，其粒径为50-400nm。

5.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的胶乳微球的粒径为80-150nm。

6.根据权利要求1~5任意一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂一中，所述的缓冲剂为磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、Tris、Good’s缓冲液或者它们的组合。

7.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂二中，所述的缓冲剂为磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、Tris、Good’s缓冲液或者它们的组合。

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