CN108872590A

CN108872590A - 可同时检测血清和尿液样本中β2-微球蛋白的试剂盒

Info

Publication number: CN108872590A
Application number: CN201810713709.4A
Authority: CN
Inventors: 柳建敏; 林威彦; 张丹丹
Original assignee: Ningbo Sea One Biological Technology Co Ltd
Current assignee: Ningbo Sea One Biological Technology Co Ltd
Priority date: 2018-06-29
Filing date: 2018-06-29
Publication date: 2018-11-23

Abstract

本发明公开了一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中β2‑微球蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品、质控品，所述试剂R2由链霉亲和素标记的胶乳‑生物素标记的兔抗人β2‑微球蛋白多克隆抗体和试剂R2缓冲液组成。本发明所述试剂盒不仅提高了试剂灵敏度，还大大提高了测量范围，可以同时检测血液与尿液样本中的视β2‑微球蛋白，同时兼容市场上大多数生化检测设备，可直接进入市场。

Description

可同时检测血清和尿液样本中β2-微球蛋白的试剂盒

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种可同时检测血清和尿液中β2-微球蛋白的试剂盒。

背景技术

β2-微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，由99个氨基酸组成的单链多肽。它是细胞表面人白细胞抗原(HLA)的β链(轻链)部分，分子内含一对二硫键，不含糖，与免疫球蛋白稳定区的结构相似，以低浓度的游离形式广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。

游离β2-微球蛋白通过肾小球滤过、肾小管重吸收排出和降解。正常人β2-微球蛋白的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，不受年龄、性别、机体肌肉组织多少的影响。β2-微球蛋白可以从肾小球自由滤过，99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏，故而正常情况下β2-微球蛋白的排出是很微量的。近端肾小管是体内处理β2-微球蛋白的唯一场所，能够特异性评价近端肾小管功能，反映损伤程度，区别以白蛋白为主的肾小球蛋白尿。在体内β2-微球蛋白生成不增加的情况下，血清β2-微球蛋白水平升高是反映肾小球滤过功能损害的极灵敏指标，而且比血清肌酐对肾小球滤过损害的评价更敏感。

β2-微球蛋白的检测方法目前应用最多的是基于抗原抗体反应的免疫方法，例如免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法、酶联免疫法等，这些方法各有优缺，大多存在操作繁琐，需要特殊装备，样本需要预处理，不能进行批量样本分析，不能直接上全自动生化分析仪检测等缺点。所以从检测范围、检测成本、便利性等方面考虑，临床采用最多的方法是胶乳颗粒增强免疫比浊法(PETIA)，其基本原理是：将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。

CN107942068A公开了一种采用胶乳增强免疫比浊法测定β2-微球蛋白的试剂盒，该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成，试剂R2中所用包被β2-微球蛋白抗体的乳胶颗粒为粒径1.5-2.0μm的聚苯乙烯大颗粒。胶乳大颗粒相对于胶乳小颗粒通常检测灵敏度更高，但精密度和线性相对较差。

CN102590526A公开了一种β2-微球蛋白检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2，试剂R2中的β2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒粒径为0.01～1.5μm，采用定向偶联的方法制备，具体包括：聚苯乙烯胶乳颗粒的激活；β2-微球蛋白抗体的氧化；β2-微球蛋白抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的偶联。该试剂盒适用于检测血清样品。

CN101813700A公开了一种纳米微球免疫比浊法检测β2-微球蛋白的试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和参考校准品，试剂R2中的抗人β2-微球蛋白抗体的纳米微球粒径为50-150nm，纳米微球与抗人β2-微球蛋白抗体的结合采用物理吸附法，该方法稳定性较差，抗体容易从胶乳颗粒上脱落下来，且易受类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，导致检测结果假阳性或假性升高。该试剂盒仅适用于检测血清样品。

目前市售的各种β2-微球蛋白检测试剂盒通常都存在一些不足，不能完美满足使用需求，例如要么检测灵敏度低，线性范围窄，只能检测血清中的β2-微球蛋白，很少能做到血尿同测，或者虽能血尿同测，但是基于双粒径的技术方案生产成本又较高等。

发明内容

为解决上述技术缺陷，本发明提供了一种基于单粒径胶乳颗粒并可同时检测血清和尿液样本中β2-微球蛋白的试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品、质控品，其中：所述试剂R1组分为：50-200mM缓冲液、0.5-2.0mM表面活性剂、50-200mM电解质、4.0-6.0mM反应加速剂、3mM防腐剂、1.5-5.0mM稳定剂，其余为纯化水，pH为6.5-8.5；

所述试剂R2由链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体和试剂R2缓冲液组成，所述试剂R2缓冲液组分为：50-200mM缓冲剂、50-200mM稳定剂、3mM防腐剂，其余为纯化水，pH为6.5-8.5；

所述校准品包含校准品稀释液和β2-微球蛋白，所述校准品稀释液组分为：200mM缓冲液、2mM防腐剂、0.5mM乙二胺四乙酸二钠、5mM牛血清白蛋白、166mM氯化钠，其余为纯化水，pH为7.4；所述校准品由血清校准品和尿液校准品组成，所述血清校准品中β2-微球蛋白的浓度梯度为0、2、6、12、24mg/l，所述尿液校准品中β2-微球蛋白的浓度梯度为0、0.2、0.6、1.2、2.4mg/l；

所述质控品包含质控品稀释液和β2-微球蛋白，所述质控品稀释液组分和pH值与上述校准品稀释液相同，所述质控品中β2-微球蛋白的浓度为3mg/l、8mg/l。

上述试剂R1中的缓冲液可选用本领域常用的缓冲液，例如选自4-羟乙基哌嗪乙磺酸、PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液、氯化铵缓冲液等的一种或多种缓冲液，优选使用4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液。

上述试剂R1中的表面活性剂可选用本领域常用的表面活性剂，例如选自Tween系列表面活性剂、SPAN系列表面活性剂、TRITON系列表面活性剂等的一种或多种表面活性剂，优选使用吐温-20。

上述试剂R1中的电解质可选用本领域常用的电解质，例如选自氯化钠、氯化钾、氯化钙等的一种或多种电解质，本发明优选使用氯化钠。

上述试剂R1中的反应加速剂可选用本领域常用的反应加速剂，优选使用PEG6000。

上述试剂R1中的防腐剂可选用本领域常用的防腐剂，例如选自山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠、Proclin 300等的一种或多种化合物，优选使用Proclin 300。

上述试剂R1中的稳定剂可选用本领域常用的稳定剂，例如选自乙二胺四乙酸二钠、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA等的一种或多种稳定剂，优选使用乙二胺四乙酸二钠。

上述试剂R1的pH值范围为6.5-8.5，优选为7.0。

根据本发明的技术方案，优选所述试剂R1组分为：100mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、1.5mM吐温-20、100mM氯化钠、5.0mM PEG6000、3mM Proclin 300，3.0mM乙二胺四乙酸二钠，其余为纯化水，pH为7.0。

上述试剂R2缓冲液组分中的缓冲剂可选用本领域常用的缓冲剂，优选使用2-吗啉乙磺酸。

上述试剂R2缓冲液组分中的稳定剂可选用本领域常用的稳定剂，例如选自氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、BSA等的一种或多种混合，优选使用氯化钠。

上述试剂R2缓冲液组分中的防腐剂可选用本领域常用的防腐剂，优选使用Proclin300。

上述试剂R2缓冲液的pH值范围为6.5-8.5，优选为7.0。

根据本发明的技术方案，优选所述试剂R2缓冲液组分为：150mM 2-吗啉乙磺酸、100mM氯化钠、3mM Proclin 300，其余为纯化水，pH为7.0。

上述校准品稀释液组分与上述质控品稀释液组分相同，可选用本领域常用的组分，优选为：200mM Hepes缓冲液、2mM Proclin 300、0.5mM乙二胺四乙酸二钠、5mM牛血清白蛋白、166mM氯化钠，其余为纯化水，pH为7.4。

上述试剂R2中的胶乳颗粒采用链霉亲和素标记，在该链霉亲和素标记的胶乳颗粒上包被有用生物素标记的抗人β2-微球蛋白多克隆抗体，所述多克隆抗体可以是羊抗人β2-微球蛋白多克隆抗体、兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体、鸡抗人β2-微球蛋白多克隆抗体或鼠抗人β2-微球蛋白多克隆抗体等，本发明优选使用兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体。

本发明所用胶乳颗粒为聚苯乙烯胶乳颗粒，可市售获得，其平均粒径范围选择在61-220nm之间，优选粒径为145nm。同样质量的胶乳颗粒，粒径越小可吸附的抗体越多，精密度和线性范围相对较好；而粒径越大试剂的检测灵敏度越高，但线性范围则会相应有所损失。粒径过小时，胶乳颗粒聚集产生的光密度变化太小，检测灵敏性下降，并且对试剂制备流程要求高，导致生产成本上升。而粒径过大时，其聚集产生的光密度变化容易超过检测限，且颗粒太大会加速自聚集，导致分散性降低，稳定性下降。

目前，PETIA检测试剂所采用的乳胶颗粒多为惰性微球、羧基化微球及氨基化微球。表面修饰的胶乳粒子与抗体的结合是通过其表面的羧基或氨基与抗体的氨基端共价结合，在微球与抗体之间有一个桥联化学臂，降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，而且还为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效地保护了抗体与抗原结合的活性区域。

本发明的胶乳颗粒采用生物素-链霉亲和素系统技术，生物素与链霉亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，使生物素-链霉亲和素免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。

生物素(biotin，B)广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取。生物素分子有两个环状结构(如下图)，其中I环为咪唑酮环，是与链霉亲和素结合的主要部位；II环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的唯一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联，包括蛋白质、核酸、多糖、脂类等。

链霉亲和素(streptavidin，SA)是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种四聚体蛋白质，分子量为65kDa，等电点6.0。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素，并且不带任何糖基，一个链霉亲和素分子能结合4个生物素分子，二者亲和常数(K)为1015mol/L，是目前已知强度最高的非共价作用，远高于抗原与抗体间的亲和力(K＝10.5～11L/mo1)。链霉亲和素的活性单位以结合1μg生物素所需的量来表示，1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

生物素-链霉亲和素系统具有多级放大作用，可极大地提高检测方法的灵敏度，且其高度专一的结合特性使其在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰，也不会因反应试剂的高度稀释而受影响，在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。

链霉亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性，而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，链霉亲和素-生物素系统在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。

此外，由于生物素与链霉亲和素的结合具高速、高效的特性，因此所需的温育时间不长，实验往往只需数小时即可完成。

根据本发明的优选方案，所述链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的抗人β2-微球蛋白多克隆抗体占试剂R2的质量百分比为0.1％-1.5％，更优选为0.8％。

根据本发明的优选方案，所述生物素标记的抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳的比例为30-120μg：1mg，更优选为60μg：1mg。

常人血清内，β2-MG浓度相当恒定，范围是0.3～3.0mg/L，3.0mg/L以上为异常。β2-MG容易通过肾小球滤膜，但几乎全部由近曲小管以胞饮形式摄取，在局部被代谢降解为氨基酸，正常人每天从肾小球滤过的约为340mg，但尿中每天最大排泄量只有370μg，仅占滤过总量的0.1％，尿中正常健康人β2-MG浓度为0.03～0.37mg/L。因此，测定尿液中的β2-微球蛋白需要试剂灵敏度足够高，但目前市场上使用单粒径的产品很少能满足此要求。

本试剂盒通过链霉亲和素-生物素放大系统，在提高检测灵敏度的同时保持较宽的线性范围，能满足使用单粒径就能达到血尿同测的目的。

综上，本发明提供的基于单粒径胶乳和多克隆抗体开发的β2-微球蛋白检测试剂盒，具有血尿同测、操作简单、灵敏度高、线性范围宽、成本低且利于市场推广的优点，能够达到现有技术中需要双粒径胶乳和至少一种单克隆抗体开发的β2-微球蛋白检测试剂盒的检测效果。同时该检测试剂盒兼容市场上大多数生化检测设备，可直接进入市场。

附图说明

图1不同配比标准曲线比较结果。

图2血清样本线性范围图。

图3尿液样本线性范围图。

图4不同厂家试剂盒血清样本相关性图。

图5不同厂家试剂盒尿液样本相关性图。

具体实施方式

本发明所涉及的化学试剂均为国产试剂。

β2-微球蛋白购自leebio公司(货号P122-1)。

多克隆抗体(兔抗人β2-微球蛋白)购自安捷伦(品牌为Dako，为安捷伦子公司)(货号A0072)。

胶乳购自JSR Life Science。

链霉亲和素购自北京索莱宝科技有限公司(货号S9170)。

生物素标记试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司(货号E-LK-B002)。

其中BMG表示β2-微球蛋白。

实施例1试剂的配置

1.1试剂R1的配置

在试剂配置过程中，按照下表浓度进行配置，配置好后过0.22μm滤膜，置于4℃备用。

组分	配比1	配比2	配比3
				4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液	50mM	100mM	200mM
吐温-20	0.5mM	1.5mM	2.0mM
				氯化钠	50mM	100mM	200mM
PEG-6000	4mM	5mM	6mM
				Proclin 300	3mM	3mM	3mM
乙二胺四乙酸二钠	5mM	3mM	1.5mM
				其余为纯化水	/	/	/
pH	6.5	7.0	8.5

1.2试剂R2缓冲液的配置

1.3校准品的配置

在试剂配置过程中，按照下表浓度进行配置，配置好后过0.22μm滤膜，置于4℃备用。然后按照血清校准品中β2-微球蛋白的浓度梯度(0、2、6、12、24mg/l)和尿液校准品中β2-微球蛋白的浓度梯度(0、0.2、0.6、1.2、2.4mg/1)的比例将β2-微球蛋白进行梯度稀释。

组分	配比
		HEPES	200mM
Proclin 300	2mM
		乙二胺四乙酸二钠	0.5mM
牛血清白蛋白	5mM
		氯化钠	166mM
其余为纯化水	/
		pH	7.4

1.4质控品的配置

在试剂配置过程中，按照下表浓度进行配置，配置好后过0.22μm滤膜，置于4℃备用。然后按照质控品中β2-微球蛋白的浓度梯度为8.00、3.00mg/L的比例将β2-微球蛋白进行梯度稀释。

组分	浓度
		HEPES	200mM
Proclin 300	2mM
		乙二胺四乙酸二钠	0.5mM
牛血清白蛋白	5mM
		氯化钠	166mM
其余为纯化水	/
		pH	7.4

实施例2试剂R2的制备

2.1链霉亲和素标记胶乳

1)分别将粒径为61nm、145nm、220nm的胶乳颗粒(购自JSR Life Science，货号分别为P0001/P0112/P0219)用50mM硼酸缓冲液pH 9.0稀释到终浓度为1％，室温反应5min；

2)分别在1)所得各体系中加入EDC，使EDC/胶乳＝50μg/1mg，室温反应30min；

3)在2)中加入链霉亲和素，使链霉亲和素/胶乳＝50μg/1mg，混合搅拌，室温反应1h；

4)在3)中加入BSA，使BSA终浓度为1％，室温封闭2h；

5)室温15,000rpm离心去除上清；

6)用试剂R2缓冲液溶解5)中沉淀，使其终浓度为6-8mg/ml，超声分散后置于4℃备用。

上述所得样品中，经分析比较，胶乳颗粒的优选粒径为145nm。

2.2生物素标记多克隆抗体

用生物素标记兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体，具体操作按照试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，货号E-LK-B002)说明书操作。

2.3链霉亲和素标记的胶乳与生物素标记的多克隆抗体混合

将生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳分别按照30μg∶1mg、60μg∶1mg、120μg∶1mg的比例进行混合；

然后室温15,000rpm离心去除上清，得到链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体；

最后使用试剂R2缓冲液将上述所得三种比例的链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体分别按照0.1wt.％、0.8wt.％、wt.1.5％重悬。

上述所得样品中，经分析比较，兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳之比优选为60μg∶1mg，链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与试剂R2之比优选为0.8wt.％。

实施例3试剂盒检测过程

3.1试验条件：

主波长	600nm	反应方向	正向
				反应温度	37℃	反应方法	终点法

3.2操作过程：

在AU480全自动生化分析仪读点为11～27。

实施例4不同粒径胶乳的实验评价(以实施例1中配比2进行实验，其他条件均为实施例2中最优选择，并按照实施例3检测)

组别	胶乳粒径(nm)
		1	61
2	145
		3	220

测定空白液和4个不同β2-微球蛋白浓度含量样品，每个样品测10次，计算平均值(M)和标准差(SD)，以样品吸光度-3SD大于空白吸光度+3SD的样品浓度作为β2-微球蛋白检测试剂盒的最低灵敏度。

从上表可见，组别2试剂灵敏度CV较小且稳定，组别1和组别3均处于临界值，因此组别2最佳，但三个组别的检测试剂盒的血清样本灵敏度均能达到0.1mg/l、尿液样本灵敏度能达到0.05mg/l，且三个组别测定样本相关性和线性均符合要求。

实施例5试剂R2中链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体不同占比实验评价(以实施例1中配比2进行实验，其他条件均为实施例2中最优选择，并按照实施例3检测)

组别	占比(wt.％)
		1	0.1
2	0.8
		3	1.5

由上表可见，组别2试剂灵敏度CV较小且稳定，组别1和组别3均处于临界值，因此组别2最佳，但三个组别的检测试剂盒的血清样本灵敏度均能达到0.1mg/l、尿液样本灵敏度能达到0.05mg/l，且三个组别测定样本相关性和线性均符合要求。

实施例6试剂R2制备中生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳的不同比例实验评价(以实施例1中配比2进行实验，其他条件均为实施例2中最优选择，并按照实施例3检测)

组别	比例(μg/1mg)
		1	30
2	60
		3	120

综合上述实施例4～6的结果可知，本发明的胶乳粒径优选为145nm，链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与试剂2之比优选为0.8wt.％，生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳之比优选为60μg/1mg。以下实施例对本发明试剂盒性能的评价均基于此优选条件实施。

实施例7标准曲线的测定

以实施例1中配比1-3(其中试剂R2按照实施例2中最优比例准备)和对比试剂盒分别逐一测定如下表所示的一系列标准浓度的β2-微球蛋白的标准血清样本的ΔA值，而根据一系列β2-微球蛋白的浓度和测得的ΔA值可分别拟合出各试剂盒的标准曲线，标准曲线为LOGIT-LOG 4P函数。

β2-微球蛋白的浓度与测得的ΔA值的对应的散点图如图1所示，由图1可知，实施例1中配比1-3相比于对比例(柏荣诊断产品(上海)有限公司，货号BYA03020)较好，其中配比2的β2-微球蛋白的浓度与ΔA值的线性关系更好，拟合的标准曲线斜率将更大，准确度和灵敏度将有较大的提升。

实施例8标准曲线的检测效果

实施例1中配比1-3和对比例(对比例1为浙江夸克生物科技有限公司，LOT为160523，对比例2为柏荣诊断产品(上海)有限公司，货号BYA03020)的试剂盒分别测定的下表所示一系列含有已知浓度β2-微球蛋白的血清样本的ΔA值，然后在拟合的标准曲线上分别得出对应的测定浓度，该测定浓度和实际浓度会出现偏差，如下表所示。

临床准确度要求偏差不超过10％。由上表可知，对比例1以及对比例2的试剂盒在检测0.4mg/1的样本时偏差就超过了临床要求的10％，其检测限只能是0.8mg/1。而本发明的试剂盒在检测0.1mg/1样本所得结果与实际浓度偏差在10％以内，符合临床准确度要求，因此最低检测限可以达到0.1mg/1。

实施例9灵敏度性能评价(以实施例1中配比2进行实验，其他条件均为实施例2中最优选择，并按照实施例3检测)测定空白液和4个不同β2-微球蛋白浓度含量样品，每个样品测10次，计算平均值(M)和标准差(SD)，以样品吸光度-3SD大于空白吸光度+3SD的样品浓度作为β2-微球蛋白检测试剂盒的最低灵敏度。以配比2中的试剂盒为例，由下表可见，本发明检测试剂盒的血清样本灵敏度为0.1mg/1、尿液样本灵敏度为0.05mg/1。

实施例10线性性能评价(以实施例1中配比2进行实验，其他条件均为实施例2中最优选择，并按照实施例3检测)

10.1血清线性评价

用0.9％NaCl按照1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0的稀释比例对高值BMG血清样本进行倍比稀释，每个浓度重复测定3次，计算其均值，将样品的测量值与稀释比例进行相关对比，求出回归方程，并通过回归方程计算样本的理论值，结果见图2，从图中可知，在样本浓度小于25mg/L的范围内能够保持保持良好的线性，即R2大于0.99。

10.2尿液线性评价

用0.9％NaCl按照1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0的稀释比例对高值UBMG尿液样本进行倍比稀释，每个浓度重复测定3次，计算其均值，将样品的测量值与稀释比例进行相关对比，求出回归方程，并通过回归方程计算样本的理论值，结果见图3，从图中可知，在样本浓度小于2.5mg/L的范围内能够保持良好的线性，即R²大于0.99。

实施例11相关性评价(以实施例1中配比2进行实验，其他条件均为实施例2中最优选择，并按照实施例3检测)

使用本发明的试剂盒和对照试剂盒(柏荣诊断产品(上海)有限公司，货号BYA03020)对40份血清样本进行测定，对测定值进行相关性分析，测定结果见图4，图中X、Y均为测定值，结果显示本发明和对照试剂盒的相关性很高，即R²大于0.99。

使用本发明的试剂盒和对照试剂盒(柏荣诊断产品(上海)有限公司，货号BYA03020)对30份尿液样本进行测定，对测定值进行相关性分析，测定结果见图5，图中X、Y均为测定值，结果显示本发明和对照试剂盒的相关性很高，即R²大于0.99。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，对于本技术领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种检测β 2-微球蛋白的试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品、质控品，其中：

所述试剂R1组分为：50-200mM缓冲液、0.5-2.0mM表面活性剂、50-200mM电解质、4.0-6.0mM反应加速剂、3mM防腐剂、1.5-5.0mM稳定剂，其余为纯化水，pH为6.5-8.5；

所述试剂R2由链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体和试剂R2缓冲液组成，所述试剂R2缓冲液组分为：50-200mM缓冲剂、50-200mM稳定剂、3mM防腐剂，其余为纯化水，pH为6.5-8.5；

所述校准品包含校准品稀释液和β 2-微球蛋白，所述校准品稀释液组分为：200mM缓冲液、2mM防腐剂、0.5mM乙二胺四乙酸二钠、5mM牛血清白蛋白、166mM氯化钠，其余为纯化水，pH为7.4；所述校准品由血清校准品和尿液校准品组成，所述血清校准品中β 2-微球蛋白的浓度梯度为0、2、6、12、24mg/l，所述尿液校准品中β 2-微球蛋白的浓度梯度为0、0.2、0.6、1.2、2.4mg/l；

所述质控品包含质控品稀释液和β 2-微球蛋白，所述质控品稀释液组分和pH值与上述校准品稀释液相同，所述质控品中β 2-微球蛋白的浓度为3mg/l、8mg/l。

2.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试剂R1、试剂R2和校准品、质控品的具体组成如下：

所述试剂R1组分为：50-200mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、0.5-2.0mM吐温-20、50-200mM氯化钠、4.0-6.0mM PEG6000、3mM Proclin 300，1.5-5.0mM乙二胺四乙酸二钠，其余为纯化水，pH为6.5-8.5；

所述试剂R2由链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体和试剂R2缓冲液组成，所述试剂R2缓冲液组分为：50-200mM 2-吗啉乙磺酸、50-200mM氯化钠、3mM Proclin 300，其余为纯化水，pH为6.5-8.5；

所述校准品包含校准品稀释液和β 2-微球蛋白，所述稀释液组分为：200mM Hepes缓冲液、2mM Proclin300、0.5mM乙二胺四乙酸二钠、5mM牛血清白蛋白、166mM氯化钠，其余为纯化水，pH为7.4；所述校准品由血清校准品和尿液校准品组成，所述血清校准品中β 2-微球蛋白的浓度梯度为0、2、6、12、24mg/l，所述尿液校准品中β 2-微球蛋白的浓度梯度为0、0.2、0.6、1.2、2.4mg/l；

所述质控品包含质控品稀释液和β 2-微球蛋白，所述稀释液组分为：200mM Hepes缓冲液、2mM Proclin 300、0.5mM乙二胺四乙酸二钠、5mM牛血清白蛋白、166mM氯化钠，其余为纯化水，pH为7.4；所述质控品中β 2-微球蛋白的浓度为3mg/l、8mg/l。

3.权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述试剂R1组分为：100mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、1.5mM吐温-20、100mM氯化钠、5.0mM PEG6000、3mM Proclin300，3.0mM乙二胺四乙酸二钠，其余为纯化水，pH为7.0。

4.权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂R2缓冲液组分为：150mM 2-吗啉乙磺酸、100mM氯化钠、3mM Proclin 300，其余为纯化水，pH为7.0。

5.权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体或者所述链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β2-微球蛋白多克隆抗体占试剂R2的质量百分比为0.1％-1.5％。

6.权利要求5所述的试剂盒，其特征在于所述链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体或者所述链霉亲和素标记的胶乳-生物素标记的兔抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体占试剂R2的质量百分比为0.8％。

7.权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于所述胶乳颗粒的粒径为61-220nm。

8.权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述胶乳颗粒的粒径为145nm。

9.权利要求1或2所述试剂盒，其特征在于所述生物素标记的抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体或者所述生物素标记的兔抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳的比例为30-120μg∶1mg。

10.权利要求9所述的试剂盒，其特征在于所述生物素标记的抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体或者所述生物素标记的兔抗人β 2-微球蛋白多克隆抗体与链霉亲和素标记的胶乳的比例为60μg∶1mg。