CN112285341A - 一种α2-巨球蛋白检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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陶晟
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Abstract

本发明涉及生物技术领域，涉及一种α2‑巨球蛋白检测试剂盒，尤其涉及一种α2‑巨球蛋白检测试剂盒的制备方法，公开了包括试剂R1和试剂R2的组分和浓度，所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α2‑巨球蛋白单克隆抗体以及1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐构成。本发明的优点是：采用胶乳微球连接链霉亲和素1:1，α2‑巨球蛋白抗体连接生物素1:2，二者1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到0.28‑5.35mg/mL。

Description

一种α2-巨球蛋白检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，涉及一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，尤其涉及一种α2-巨球蛋白检测试剂盒的制备方法。
背景技术
α2巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2MG或AMG)是血浆中分子量最大的蛋白质。分子量约为65.2万-80万，含糖量约8％，由4个亚单位组成，它与淋巴网状系统细胞的发育和功能有密切联系，α2MG最突出的特性是能与多种分子和离子结合。特别是它能与不少蛋白水解酶结合而影响这些酶的活性。如与许多肽链内切酶(包括丝氨酸、巯基、羧基蛋白水解酶和一些金属蛋白水解酶)的结合。这些蛋白水解酶有纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及组织蛋白酶D等。研究表明，α2MG与蛋白水解酶相互作用可使α2MG的分子构象发生变化，当酶处于复合物状态时，酶的活性部位没有失活，但不容易作用于大分子底物，若底物为分子量小的蛋白质，即使有其它抗蛋白酶的存在，也能被α2MG-蛋白酶复合物所催化而水解。这样，α2MG起到有选择地保护某些蛋白酶活性的作用，这在免疫反应中可能具有重要意义。
α2MG是由肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，半寿期约5天，但当与蛋白水解酶结合成为复合物后其清除率加速。
在低白蛋白血症时，α2MG含量可增高，可能系一种代偿机制以保持血浆胶体渗透压，妊娠期及口服避孕药时血浓度增高。机制不明，常规可采用酶联免疫分析法，此检测方法的缺陷在于不能够用于全自动分析，耗时长行，需要专门的技术人员和仪器。
发明内容
本发明的目的是：针对上述不足，提供一种改善重复性和灵敏度的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒及其制备方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
Figure BDA0002143704020000021
所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α2-巨球蛋白单克隆抗体以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，各组分的浓度为：
Figure BDA0002143704020000031
所述试剂R1中的第一缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
所述试剂R1中的第一稳定剂包括酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。
所述试剂R1中的表面活性剂包括吐温20、曲拉通X-100、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。
所述试剂R1中的第一防腐剂包括叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
所述试剂R2中的第二缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
所述试剂R2中的第二稳定剂包括牛血清白蛋白、酪蛋白、甘露醇中的一种或几种。
所述试剂R2中的第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
所述试剂R2中的胶乳微球的粒径为60-280nm，其表面修饰集团为羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第一缓冲液、氯化钠、第一稳定剂、表面活性剂、聚乙二醇6000和第一防腐剂，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，调整PH值5.90-8.90之间并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备：
B1反应液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第二缓冲液，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到5.50-6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入甘氨酸、第二稳定剂和第二防腐剂，搅拌20-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.00-8.00之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
B3胶乳微球抗体偶联物的制备：将胶乳微球用反应液稀释到0.01-2.0％的浓度，与链霉亲和素按1:1的比例结合，将α2-巨球蛋白单克隆抗体用反应液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,与生物素按1:1-1:3结合透析过夜后，加入到含有链霉亲和素的乳胶微球中，以1:1的比例混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用反应液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入第二稳定剂封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
与现有技术相比，本发明所达到的技术效果是：经多次研发实验后，采用胶乳微球连接链霉亲和素1:1，α2-巨球蛋白抗体连接生物素1:2，二者1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到0.28-5.35mg/mL。
附图说明
图1是本发明实施例4未采用级联放大反应R2试剂的定标曲线图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：
实施例一：
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的三羟甲基氨基甲烷，浓度为6.0g/L，作为第一稳定剂的牛血清白蛋白，浓度为0.5g/L，氯化钠，浓度为5.0g/L，作为表面活性剂的曲拉通X-100，浓度为1ml/L，聚乙二醇6000，浓度为60g/L，作为第一防腐剂的Proclin-300，浓度为0.8ml/L，
所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，浓度为8.05g/L，其保存液由甘氨酸、作为第二稳定剂的牛血清白蛋白、作为第二防腐剂的Proclin-300构成，浓度分别为：1.26g/L、0.5g/L、0.8ml/L，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α2-巨球蛋白单克隆抗体以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，浓度分别为：0.01％、5g/L、0.05g/L0.05g/L、0.005g/L。
所述试剂R2中的胶乳微球的粒径为60nm，其表面修饰集团为羧基。
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为6.0g/L标准的三羟甲基氨基甲烷、浓度为5.0g/L标准的氯化钠、浓度为0.5g/L的牛血清白蛋白，浓度为1ml/L的曲拉通X-100、浓度为60g/L标准的聚乙二醇6000和浓度为0.8ml/L标准的Proclin-300，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，调整PH值5.90之间并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备：
B1反应液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为8.05g/L标准的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到5.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
其保存液由甘氨酸、作为第二稳定剂的牛血清白蛋白、作为第二防腐剂的Proclin-300构成，浓度分别为：1.26g/L、0.5g/L、0.8ml/L
B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为1.26g/L标准的甘氨酸、浓度为0.5g/L标准的牛血清白蛋白和浓度为0.8ml/L标准的Proclin-300，搅拌20分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.00之间，继续搅拌5分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
B3胶乳微球抗体偶联物的制备：将胶乳微球用反应液稀释到0.01％的浓度，与浓度为5g/L的链霉亲和素按1:1的比例结合，将α2-巨球蛋白单克隆抗体用反应液稀释到0.05g/L的浓度,与浓度为5g/L的生物素按1:2结合透析过夜后，加入到含有链霉亲和素的乳胶微球中，以1:1的比例混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用反应液溶解到0.005g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入第二稳定剂封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例二：
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的三羟甲基氨基甲烷，浓度为9g/L，作为第一稳定剂的酪蛋白，浓度为1g/L，氯化钠，浓度为16.0g/L，作为表面活性剂的聚乙烯吡咯烷酮，浓度为3ml/L，聚乙二醇6000，浓度为90g/L，作为第一防腐剂的Proclin-950，浓度为1.4ml/L，
所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，浓度为18g/L，其保存液由甘氨酸、作为第二稳定剂的酪蛋白、作为第二防腐剂的Proclin-950构成，浓度分别为：5g/L、1g/L、1.4ml/L，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α2-巨球蛋白单克隆抗体以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，浓度分别为：1％、12g/L、12g/L、2g/L、0.2g/L。
所述试剂R2中的胶乳微球的粒径为170nm，其表面修饰集团为醛基。
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至250rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为9g/L的三羟甲基氨基甲烷、浓度为16.0g/L的氯化钠、浓度为1g/L的酪蛋白、浓度为3ml/L的聚乙烯吡咯烷酮、浓度为90g/L的聚乙二醇6000和浓度为1.4ml/L的Proclin-950，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，调整PH值7并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备：
B1反应液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至250rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为18g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到6，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至250rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为5g/L的甘氨酸、浓度为5g/L的酪蛋白和浓度为1.4ml/L的Proclin-950，搅拌25分钟至物料完全溶解，调节pH值到7之间，继续搅拌8分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
B3胶乳微球抗体偶联物的制备：将胶乳微球用反应液稀释到1％的浓度，与浓度为12g/L的链霉亲和素按1:1的比例结合，将α2-巨球蛋白单克隆抗体用反应液稀释到2g/L的浓度,与浓度为12g/L的生物素按1:2结合透析过夜后，加入到含有链霉亲和素的乳胶微球中，以1:1的比例混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用反应液溶解到0.2g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入第二稳定剂封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例三：
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的三羟甲基氨基甲烷，浓度为12.2g/L，作为第一稳定剂的甘露醇，浓度为2g/L，氯化钠，浓度为27.0g/L，作为表面活性剂的辛基苯基聚氧乙烯醚，浓度为5ml/L，聚乙二醇6000，浓度为120g/L，作为第一防腐剂的叠氮钠，浓度为2.0ml/L，
所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，浓度为27.30g/L，其保存液由甘氨酸、作为第二稳定剂的甘露醇、作为第二防腐剂的叠氮钠构成，浓度分别为：9.83g/L、2.0g/L、2.0ml/L，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α2-巨球蛋白单克隆抗体以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，浓度分别为：2.0％、20g/L、20g/L、3.0g/L、0.3g/L。
所述试剂R2中的胶乳微球的粒径为280nm，其表面修饰集团为氨基。
一种α2-巨球蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为12.2g/L的三羟甲基氨基甲烷、浓度为27.0g/L的氯化钠、浓度为2g/L的甘露醇、浓度为5ml/L的辛基苯基聚氧乙烯醚、浓度为120g/L的聚乙二醇6000和浓度为2.0ml/L的叠氮钠，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，调整PH值8.90之间并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备：
B1反应液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为27.30g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入浓度为9.83g/L的甘氨酸、浓度为2.0g/L的甘露醇和浓度为2.0ml/L的叠氮钠，搅拌30分钟至物料完全溶解，调节pH值到8.00之间，继续搅拌8分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
B3胶乳微球抗体偶联物的制备：将胶乳微球用反应液稀释到2.0％的浓度，与浓度为20g/L的链霉亲和素按1:1的比例结合，将α2-巨球蛋白单克隆抗体用反应液稀释到3.0g/L的浓度,与浓度20g/L的生物素按1:2结合透析过夜后，加入到含有链霉亲和素的乳胶微球中，以1:1的比例混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用反应液溶解到0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入第二稳定剂封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例四：
胶乳微球间接偶联α2-巨球蛋白抗体，使用标准品进行定标，结果如表1和图1所示。
表1：胶乳微球间接偶联α2-巨球蛋白抗体定标结果
Figure BDA0002143704020000141
线性范围限定：
选取待测样本用生理盐水进行稀释，产生接近于方法线性范围低限浓度水平的样本，一般为4个浓度水平，分别为：0.37mg/mL、0.28mg/mL、0.22mg/mL和0.17mg/mL，每个浓度水平样本重复测定10次，以CV≤8％为可接受界值，由数据中选取CV值等于或小于可接受界值的最低浓度水平做为检测范围低限，结果如表2所示。
表2：
Figure BDA0002143704020000151
Figure BDA0002143704020000161
当样本浓度低于0.22mg/mL时，CV＞8％；当样本浓度高于0.28mg/mL时，CV＜8％，故线性范围低限定为0.28mg/mL。
选取待测样本添加α2-巨球蛋白标准品，产生接近于方法线性范围高限浓度水平的样本，一般为4个浓度水平，分别为：5.08mg/mL、5.35mg/mL、5.62mg/mL、5.90mg/mL，每个浓度水平样本重复测定10次，以CV≤8％为可接受界值，由数据中选取CV值等于或小于可接受界值的最高浓度水平做为检测范围高限，结果如表3所示。
表3：
Figure BDA0002143704020000162
Figure BDA0002143704020000171
当样本浓度高于5.62mg/mL时，CV＞8％，当样本浓度低于5.35mg/mL时，CV＜8％，故线性范围高限定为5.35mg/mL。
综上所述，该发明的线性范围可做到0.28-5.35mg/mL。
实施例五：
精密度CV检测：
胶乳微球间接偶联α2-巨球蛋白抗体，对样本重复检测10次，检测结果如表4所示
Figure BDA0002143704020000172
Figure BDA0002143704020000181
精密度CV较小，5％以内。
综上所述：经多次研发实验后，采用胶乳微球连接链霉亲和素1:1，α2-巨球蛋白抗体连接生物素1:2，二者1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到0.28-5.35mg/mL。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
Figure FDA0002143704010000011
所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α2-巨球蛋白单克隆抗体以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，各组分的浓度为：
Figure FDA0002143704010000012
Figure FDA0002143704010000021
2.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一稳定剂包括酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。
4.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的表面活性剂包括吐温20、曲拉通X-100、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。
5.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一防腐剂包括叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
6.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二稳定剂包括牛血清白蛋白、酪蛋白、甘露醇中的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
9.根据权利要求1所述的一种α2-巨球蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的胶乳微球的粒径为60-280nm，其表面修饰集团为羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。
10.如权利要求1-9中任一一种α2-巨球蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A)、试剂R1制备：
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第一缓冲液、氯化钠、第一稳定剂、表面活性剂、聚乙二醇6000和第一防腐剂，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，调整PH值5.90-8.90之间并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备：
B1反应液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第二缓冲液，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到5.50-6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入甘氨酸、第二稳定剂和第二防腐剂，搅拌20-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.00-8.00之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
B3胶乳微球抗体偶联物的制备：将胶乳微球用反应液稀释到0.01-2.0％的浓度，与链霉亲和素按1:1的比例结合，将α2-巨球蛋白单克隆抗体用反应液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,与生物素按1:1-1:3结合透析过夜后，加入到含有链霉亲和素的乳胶微球中，以1:1的比例混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用反应液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入第二稳定剂封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
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