CN110763846A - 一种补体C3c的检测试剂盒及制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括：第一缓冲液A、第一缓冲液B、氯化钠、PEG6000、螯合剂和防腐剂。试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液。本发明的优点是：本发明采用将生物素结合补体C3c抗体比例为1:1‑3:1连接，再与链霉亲和素二者1:1混合反应，并且在R1试剂中加入螯合剂，可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度，线性范围可做到1‑250mg/L，可广泛应用大、中、小医院。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种补体C3c的检测试剂盒及制备方法。
背景技术
C3是血清中含量最高的补体成分，分子量为195000，主要有巨噬细胞和肝脏合成，在C3转化酶的作用下,C3分子裂解成C3a和C3b，C3b受血清中I因子、H因子和蛋白酶的作用,又可逐级水解为C3b,C3f,C3c,C3dg。补体C3c的动态变化在临床上越来越受到重视，其升高或降低与很多疾病如胃炎、红斑狼疮病情恶化以及传染病及组织损伤和急性炎症等都有着密切的联系。因此，补体C3c的检测越来越受到重视。
常规的补体C3c的检测试剂盒的直接采用补体C3c抗体与抗原反应，我司采用该方法发现灵敏度、重复性和线性范围均较差存在着灵敏度和线性范围均较差的缺陷，限制了它的应用。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是：提供一种稳定性好、灵敏度高、线性范围宽的补体C3c的检测试剂盒及其制备方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种补体C3c的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：
2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 8-27g/L
所述保存液的各组分及浓度包括：
N,N-二羟乙基甘氨酸 1.3-9.8g/L
稳定剂 0.5-2g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：
生物素 5-20g/L
链霉亲和素 5-20g/L
补体C3c抗体 0.05-3.0g/L
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.05-0.3g/L。
进一步的技术方案：
所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1中的螯合剂为EDTA-2Na、焦磷酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖酸钠中的中的一种或两种以上混合物。
所述生物素结合补体C3c抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为0.5:1-4:1之间。
一种补体C3c的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求，边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、EDTA-2Na，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3c抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3c抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为0.5:1-4:1之间，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
由于上述技术方案的应用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明采用将生物素结合补体C3c抗体比例为1:2连接，再与链霉亲和素二者1:1混合反应，并且在R1试剂中加入EDTA-2Na，可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度，线性范围可做到1-250mg/L，可广泛应用大、中、小医院。
附图说明
图1是现有的直接使用补体C3c抗体的检测试剂的校准品定标曲线图。
图2是本发明使用亲和素-生物素-抗体偶联物的检测试剂的校准品定标曲线图。
其中：X轴表示校准品浓度，Y轴表示吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：
一种补体C3c的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、电解质、螯合剂、促进剂和防腐剂，所述缓冲液是浓度为0.8g/L的二水合磷酸二氢钠以及浓度为8.8g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合溶液，所述氯化钠作为电解质使用，其浓度为5.8g/L，所述螯合剂是EDTA-2Na，其浓度为0.1g/L，所述促进剂为PEG6000，其浓度为40g/L，所述防腐剂为Proclin-950，其浓度为0.8ml/L；所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为：8g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的各组分包括浓度为1.3g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为0.5g/L的牛血清白蛋白以及浓度为0.8ml/L的Proclin-950，所述抗体偶联物的各组分包括：浓度为5g/L的生物素、浓度为5g/L的链霉亲和素、浓度为0.05g/L的补体C3c抗体以及浓度为0.05g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3c的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为200rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入二水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、EDTA-2Na，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和Proclin-950，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为200rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值为4.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为200rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入Proclin-950，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值为6.30，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3c抗体以偶联缓冲液稀释到0.05g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3c抗体比例为2:1，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为1:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例2
一种补体C3c的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、电解质、螯合剂、促进剂和防腐剂，所述缓冲液是浓度为2g/L的三(羟甲基)氨基甲烷以及浓度为16.2g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合溶液，所述氯化钠作为电解质使用，其浓度为12g/L，所述螯合剂是柠檬酸钠，其浓度为5g/L，所述促进剂为PEG6000，其浓度为80g/L，所述防腐剂为Proclin-300，其浓度为1.3ml/L；所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为：18g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的各组分包括浓度为5.6g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为1.2g/L的牛血清白蛋白以及浓度为1.4ml/L的Proclin-300，所述抗体偶联物的各组分包括：浓度为12g/L的生物素、浓度为12g/L的链霉亲和素、浓度为1.5g/L的补体C3c抗体以及浓度为0.15g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。一种补体C3c的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为250rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入三(羟甲基)氨基甲烷和十二水合磷酸氢二钠，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、柠檬酸钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和Proclin-300，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为250rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值为5.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为250rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入Proclin-300，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值为7.40，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3c抗体以偶联缓冲液稀释到1.5g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3c抗体比例为1:1，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为1:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.15g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例3
一种补体C3c的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、电解质、螯合剂、促进剂和防腐剂，所述缓冲液是浓度为3.2g/L的二水合磷酸二氢钠以及浓度为24g/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合溶液，所述氯化钠作为电解质使用，其浓度为20g/L，所述螯合剂是酒石酸钾钠，其浓度为8.0g/L，所述促进剂为PEG6000，其浓度为120g/L，所述防腐剂为叠氮钠，其浓度为2.0ml/L；所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为：27g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的各组分包括浓度为9.8g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为2g/L的牛血清白蛋白以及浓度为2.0ml/L的叠氮钠，所述抗体偶联物的各组分包括：浓度为20g/L的生物素、浓度为20g/L的链霉亲和素、浓度为0.13g/L的补体C3c抗体以及浓度为0.3g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3c的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入二水合磷酸二氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、酒石酸钾钠、牛血清白蛋白，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和叠氮钠，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值为6.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入叠氮钠，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值为8.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3c抗体以偶联缓冲液稀释到3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3c抗体比例为3:1，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为2:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.15g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
下面通过具体的实验，结合表格和曲线图，对本发明的补体C3c的检测试剂盒的几个重要指标进行说明，具体如下：
1、采用现有的试剂盒(即R2试剂中直接使用补体C3c抗体)。
1.1、定标
使用校准品进行定标，结果如表1所示，定标曲线如图1所示。
表1、校准品定标结果
结论：线性范围可做到1-150mg/L，浓度大于150mg/L时出现hook效应。
1.2、精密度CV检测：
选取待测样本用生理盐水进行稀释，一般为3个浓度水平，分别为：22g/L、95g/L、160g/L每个浓度水平样本重复测定10次
| 1 | 23.31 | 102.25 | 160.37 |
| 2 | 21.31 | 95.30 | 177.69 |
| 3 | 24.15 | 115.13 | 182.34 |
| 4 | 25.20 | 99.08 | 181.70 |
| 5 | 25.06 | 91.72 | 179.94 |
| 6 | 23.87 | 98.47 | 168.07 |
| 7 | 20.07 | 99.28 | 168.39 |
| 8 | 25.62 | 91.31 | 154.28 |
| 9 | 24.36 | 104.70 | 167.59 |
| 10 | 25.92 | 88.65 | 143.85 |
| 均值 | 23.89 | 98.59 | 168.42 |
| SD | 1.89 | 7.71 | 12.73 |
| CV | 7.90％ | 7.82％ | 7.56％ |
结论：精密度CV较大，基本＞5％。
1、采用本发明的试剂盒(即R2试剂中采用亲和素-生物素-抗体偶联物、在R1试剂中加入螯合剂)。
2.1、定标
使用校准品进行定标，结果如表2所示，定标曲线如图2所示。
结论：线性范围可做到1-200mg/L。
2.2精密度CV检测：
选取待测样本用生理盐水进行稀释，一般为3个浓度水平，分别为：22g/L、95g/L、160g/L每个浓度水平样本重复测定10次
结论：精密度CV明显改善，4％以内。
综上：本发明采用将生物素结合补体C3c抗体比例为1:1-3:1连接，再与链霉亲和素二者1:1混合反应，并且在R1试剂中加入EDTA-2Na，可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度，线性范围可做到1-250mg/L，可广泛应用大、中、小医院。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进或替换，这些改进或替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：
2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 8-27g/L
所述保存液的各组分及浓度包括：
N,N-二羟乙基甘氨酸 1.3-9.8g/L
稳定剂 0.5-2g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：
生物素 5-20g/L
链霉亲和素 5-20g/L
补体C3c抗体 0.05-3g/L
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.005-0.3g/L。
2.根据权利要求1所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
3.根据权利要求1或2所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
4.根据权利要求3所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。
5.根据权利要求3所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的螯合剂为EDTA-2Na、焦磷酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖酸钠中的中的一种或两种以上混合物。
6.根据权利要求4所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述生物素结合补体C3c抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为0.5:1-4:1之间。
7.如权利要求1-6任一项的补体C3c的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求，边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、EDTA-2Na，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3c抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3c抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为0.5:1-4:1之间，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
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