CN110763847A - 一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种补体C3的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括：第一缓冲液A、第一缓冲液B、氯化钠、稳定剂、PEG6000、草酸和防腐剂。试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液。本发明的优点是：本发明采用将生物素结合补体C3抗体比例为1:1‑3:1连接，再与链霉亲和素二者1:1混合反应，并且在R1试剂中加入草酸，可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度，线性范围可做到1‑250mg/L，可广泛应用大、中、小医院。

Description

一种补体C3的检测试剂盒及制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种补体C3的检测试剂盒及制备方法。
背景技术
C3是血清中含量最高的补体成分，分子量为195000，主要有巨噬细胞和肝脏合成，在C3转化酶的作用下，裂解成C3a和C3b两个片段，在补体经典激活途径和旁路激活途径中均发挥重要作用。
补体动态变化在临床上越来越受到重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均明显下降。大多数全身性红斑狼疮患者血清补体的降低和病情恶化有关。活动性全身性红斑狼疮患者血清中C1、C4、C2和C3降低，病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤和急性炎症时，C2、C3、C4均增加，总补体活性正常或升高。但晚期则降低。肿瘤患者补体量升高，特别是肝癌，C3升高最为明显，具有诊断意义。也有报道胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低，肾移植病人C3的水平不稳定，C3在排异反应开始时升高，然后下降到正常以下。
常规的补体C3的检测试剂盒直接采用补体C3抗体与抗原反应，我司采用该方法发现灵敏度、重复性和线性范围均较差存在着灵敏度和线性范围均较差的缺陷，限制了它的应用。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是：提供一种稳定性好、灵敏度高、线性范围宽的补体C3的检测试剂盒及其制备方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种补体C3的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
Figure BDA0002263338440000021
所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：
2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 8-27g/L
所述保存液的各组分及浓度包括：
N,N-二羟乙基甘氨酸 1.3-9.8g/L
稳定剂 0.5-2g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：
生物素 5-20g/L
链霉亲和素 5-20g/L
补体C3抗体 0.05-3.0g/L
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.05-0.3g/L。
进一步的技术方案：
所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1、R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。
所述生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、草酸、稳定剂，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
由于上述技术方案的应用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明采用将生物素结合补体C3抗体比例为1:1-3:1连接，再与链霉亲和素二者1:1混合反应，并且在R1试剂中加入草酸，可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度，线性范围可做到1-250mg/L，可广泛应用大、中、小医院。
附图说明
图1是现有的直接使用补体C3抗体的检测试剂的校准品定标曲线图。
图2是本发明使用亲和素-生物素-抗体偶联物的检测试剂的校准品定标曲线图。
其中：X轴表示校准品浓度，Y轴表示吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：
一种补体C3的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、电解质、草酸、稳定剂、促进剂和防腐剂，所述缓冲液是浓度为0.8g/L的二水合磷酸二氢钠以及浓度为8.8g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合溶液，所述氯化钠作为电解质使用，其浓度为5.8g/L，所述草酸的浓度为0.1g/L，所述稳定剂的主要成分是牛血清白蛋白，其浓度为1g/L，所述促进剂为PEG6000，其浓度为40g/L，所述防腐剂为Proclin-950，其浓度为0.8ml/L；所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为：8g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的各组分包括浓度为1.3g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为0.5g/L的牛血清白蛋白以及浓度为0.8ml/L的Proclin-950，所述抗体偶联物的各组分包括：浓度为5g/L的生物素、浓度为5g/L的链霉亲和素、浓度为0.05g/L的补体C3抗体以及浓度为0.05g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为200rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入二水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、草酸、牛血清白蛋白，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和Proclin-950，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为200rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值为4.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为200rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入Proclin-950，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值为6.30，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到0.05g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3抗体比例为2:1，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为1:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例2
一种补体C3的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、电解质、草酸、稳定剂、促进剂和防腐剂，所述缓冲液是浓度为2g/L的三(羟甲基)氨基甲烷以及浓度为16.2g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合溶液，所述氯化钠作为电解质使用，其浓度为12g/L，所述草酸的浓度为4.1g/L，所述稳定剂的主要成分是牛血清白蛋白，其浓度为3g/L，所述促进剂为PEG6000，其浓度为80g/L，所述防腐剂为Proclin-300，其浓度为1.3ml/L；所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为：18g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的各组分包括浓度为5.6g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为1.2g/L的牛血清白蛋白以及浓度为1.4ml/L的Proclin-300，所述抗体偶联物的各组分包括：浓度为12g/L的生物素、浓度为12g/L的链霉亲和素、浓度为1.5g/L的补体C3抗体以及浓度为0.15g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为250rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入三(羟甲基)氨基甲烷和十二水合磷酸氢二钠，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、草酸、牛血清白蛋白，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和Proclin-300，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为250rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值为5.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为250rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入Proclin-300，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值为7.40，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到1.5g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3抗体比例为1:1，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为1:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.15g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
实施例3
一种补体C3的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、电解质、草酸、稳定剂、促进剂和防腐剂，所述缓冲液是浓度为3.2g/L的二水合磷酸二氢钠以及浓度为24g/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合溶液，所述氯化钠作为电解质使用，其浓度为20g/L，所述草酸的浓度为8.0g/L，所述稳定剂的主要成分是牛血清白蛋白，其浓度为5g/L，所述促进剂为PEG6000，其浓度为120g/L，所述防腐剂为叠氮钠，其浓度为2.0ml/L；所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为：27g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的各组分包括浓度为9.8g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为2g/L的牛血清白蛋白以及浓度为2.0ml/L的叠氮钠，所述抗体偶联物的各组分包括：浓度为20g/L的生物素、浓度为20g/L的链霉亲和素、浓度为0.13g/L的补体C3抗体以及浓度为0.3g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入二水合磷酸二氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、草酸、牛血清白蛋白，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和叠氮钠，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值为6.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速为300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入叠氮钠，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值为8.5，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3抗体比例为3:1，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为2:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.15g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
下面通过具体的实验，结合表格和曲线图，对本发明的补体C3的检测试剂盒的几个重要指标进行说明，具体如下：
1、采用现有的试剂盒(即R2试剂中直接使用补体C3抗体)。
1.1、定标
使用校准品进行定标，结果如表1所示，定标曲线如图1所示。
表1、校准品定标结果
Figure BDA0002263338440000131
结论：线性范围可做到1-200mg/L，浓度大于200mg/L时出现hook效应
1.2、精密度CV检测：
选取待测样本用生理盐水进行稀释，一般为3个浓度水平，分别为：10.2g/L、99.8g/L、200g/L每个浓度水平样本重复测定10次
Figure BDA0002263338440000132
Figure BDA0002263338440000141
结论：精密度CV较大，基本＞7％。
1、采用本发明的试剂盒(即R2试剂中采用亲和素-生物素-抗体偶联物、在R1试剂中加入草酸)。
2.1、定标
使用校准品进行定标，结果如表2所示，定标曲线如图2所示。
Figure BDA0002263338440000142
结论：线性范围可做到1-250mg/L。
2.2精密度CV检测：
选取待测样本用生理盐水进行稀释，一般为3个浓度水平，分别为：10.2g/L、99.8g/L、200g/L每个浓度水平样本重复测定10次
Figure BDA0002263338440000143
Figure BDA0002263338440000151
结论：精密度CV明显改善，4％以内。
综上：本发明采用将生物素结合补体C3抗体比例为1:1-3:1连接，再与链霉亲和素二者1:1混合反应，并且在R1试剂中加入草酸，可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度，线性范围可做到1-250mg/L，可广泛应用大、中、小医院。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进或替换，这些改进或替换也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种补体C3的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
Figure FDA0002263338430000011
所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：
2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 8-27g/L
所述保存液的各组分及浓度包括：
N,N-二羟乙基甘氨酸 1.3-9.8g/L
稳定剂 0.5-2g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：
生物素 5-20g/L
链霉亲和素 5-20g/L
补体C3抗体 0.05-3.0g/L
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.05-0.3g/L。
2.根据权利要求1所述的一种补体C3的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
3.根据权利要求1或2所述的一种补体C3的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
4.根据权利要求3所述的一种补体C3的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。
5.根据权利要求4所述的一种补体C3的检测试剂盒，其特征在于：所述生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间。
6.如权利要求1-5任一项的补体C3的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求，边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、草酸、稳定剂，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。
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