CN110763847A - 一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 - Google Patents
一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110763847A CN110763847A CN201911079943.7A CN201911079943A CN110763847A CN 110763847 A CN110763847 A CN 110763847A CN 201911079943 A CN201911079943 A CN 201911079943A CN 110763847 A CN110763847 A CN 110763847A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- complement
- reagent
- buffer solution
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4716—Complement proteins, e.g. anaphylatoxin, C3a, C5a
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
一种补体C3的检测试剂盒,其特征在于:包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括:第一缓冲液A、第一缓冲液B、氯化钠、稳定剂、PEG6000、草酸和防腐剂。试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液。本发明的优点是:本发明采用将生物素结合补体C3抗体比例为1:1‑3:1连接,再与链霉亲和素二者1:1混合反应,并且在R1试剂中加入草酸,可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度,线性范围可做到1‑250mg/L,可广泛应用大、中、小医院。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种补体C3的检测试剂盒及制备方法。
背景技术
C3是血清中含量最高的补体成分,分子量为195000,主要有巨噬细胞和肝脏合成,在C3转化酶的作用下,裂解成C3a和C3b两个片段,在补体经典激活途径和旁路激活途径中均发挥重要作用。
补体动态变化在临床上越来越受到重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均明显下降。大多数全身性红斑狼疮患者血清补体的降低和病情恶化有关。活动性全身性红斑狼疮患者血清中C1、C4、C2和C3降低,病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤和急性炎症时,C2、C3、C4均增加,总补体活性正常或升高。但晚期则降低。肿瘤患者补体量升高,特别是肝癌,C3升高最为明显,具有诊断意义。也有报道胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低,肾移植病人C3的水平不稳定,C3在排异反应开始时升高,然后下降到正常以下。
常规的补体C3的检测试剂盒直接采用补体C3抗体与抗原反应,我司采用该方法发现灵敏度、重复性和线性范围均较差存在着灵敏度和线性范围均较差的缺陷,限制了它的应用。因此,应该提供一种新的技术方案解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是:提供一种稳定性好、灵敏度高、线性范围宽的补体C3的检测试剂盒及其制备方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种补体C3的检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1的各组分及浓度包括:
所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液,所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为:
2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 8-27g/L
所述保存液的各组分及浓度包括:
N,N-二羟乙基甘氨酸 1.3-9.8g/L
稳定剂 0.5-2g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
所述抗体偶联物的各组分及浓度包括:
生物素 5-20g/L
链霉亲和素 5-20g/L
补体C3抗体 0.05-3.0g/L
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.05-0.3g/L。
进一步的技术方案:
所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1、R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。
所述生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤,
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速至200-300rpm,使搅拌保持匀速状态,边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B,搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀,之后投入氯化钠、草酸、稳定剂,待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂,投料完成后,继续搅拌至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速至200-300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌至物料完全溶解,清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值到4.50-6.50之间,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速至200-300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸,搅拌至物料完全溶解,之后投入稳定剂,待物料完全溶解后再投入防腐剂,待清澈透明,配液罐底部无沉淀,调节pH值到6.30-8.50之间,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放备用,进行标识;
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素,透析过夜,使其与生物素按一定比例结合,再加入一定比例的链霉亲和素,混匀,控制生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分钟,加入牛血清白蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合液以14000rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,再加入保存液,将制备好的R2装入成品罐中,并定容至终浓度,进行标识。
由于上述技术方案的应用,本发明与现有技术相比具有如下优点:
本发明采用将生物素结合补体C3抗体比例为1:1-3:1连接,再与链霉亲和素二者1:1混合反应,并且在R1试剂中加入草酸,可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度,线性范围可做到1-250mg/L,可广泛应用大、中、小医院。
附图说明
图1是现有的直接使用补体C3抗体的检测试剂的校准品定标曲线图。
图2是本发明使用亲和素-生物素-抗体偶联物的检测试剂的校准品定标曲线图。
其中:X轴表示校准品浓度,Y轴表示吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述:
实施例1:
一种补体C3的检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括缓冲液、电解质、草酸、稳定剂、促进剂和防腐剂,所述缓冲液是浓度为0.8g/L的二水合磷酸二氢钠以及浓度为8.8g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合溶液,所述氯化钠作为电解质使用,其浓度为5.8g/L,所述草酸的浓度为0.1g/L,所述稳定剂的主要成分是牛血清白蛋白,其浓度为1g/L,所述促进剂为PEG6000,其浓度为40g/L,所述防腐剂为Proclin-950,其浓度为0.8ml/L;所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液,所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为:8g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,所述保存液的各组分包括浓度为1.3g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为0.5g/L的牛血清白蛋白以及浓度为0.8ml/L的Proclin-950,所述抗体偶联物的各组分包括:浓度为5g/L的生物素、浓度为5g/L的链霉亲和素、浓度为0.05g/L的补体C3抗体以及浓度为0.05g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤,
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为200rpm,使搅拌保持匀速状态,边搅拌边投入二水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠,搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀,之后投入氯化钠、草酸、牛血清白蛋白,待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和Proclin-950,投料完成后,继续搅拌至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为200rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌至物料完全溶解,清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值为4.5,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为200rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸,搅拌至物料完全溶解,之后投入稳定剂,待物料完全溶解后再投入Proclin-950,待清澈透明,配液罐底部无沉淀,调节pH值为6.30,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放备用,进行标识;
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到0.05g/L的浓度,边搅拌边加入生物素,透析过夜,使其与生物素按一定比例结合,再加入一定比例的链霉亲和素,混匀,控制生物素结合补体C3抗体比例为2:1,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为1:1,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分钟,加入牛血清白蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合液以14000rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,再加入保存液,将制备好的R2装入成品罐中,并定容至终浓度,进行标识。
实施例2
一种补体C3的检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括缓冲液、电解质、草酸、稳定剂、促进剂和防腐剂,所述缓冲液是浓度为2g/L的三(羟甲基)氨基甲烷以及浓度为16.2g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合溶液,所述氯化钠作为电解质使用,其浓度为12g/L,所述草酸的浓度为4.1g/L,所述稳定剂的主要成分是牛血清白蛋白,其浓度为3g/L,所述促进剂为PEG6000,其浓度为80g/L,所述防腐剂为Proclin-300,其浓度为1.3ml/L;所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液,所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为:18g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,所述保存液的各组分包括浓度为5.6g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为1.2g/L的牛血清白蛋白以及浓度为1.4ml/L的Proclin-300,所述抗体偶联物的各组分包括:浓度为12g/L的生物素、浓度为12g/L的链霉亲和素、浓度为1.5g/L的补体C3抗体以及浓度为0.15g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤,
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为250rpm,使搅拌保持匀速状态,边搅拌边投入三(羟甲基)氨基甲烷和十二水合磷酸氢二钠,搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀,之后投入氯化钠、草酸、牛血清白蛋白,待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和Proclin-300,投料完成后,继续搅拌至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为250rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌至物料完全溶解,清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值为5.5,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为250rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸,搅拌至物料完全溶解,之后投入稳定剂,待物料完全溶解后再投入Proclin-300,待清澈透明,配液罐底部无沉淀,调节pH值为7.40,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放备用,进行标识;
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到1.5g/L的浓度,边搅拌边加入生物素,透析过夜,使其与生物素按一定比例结合,再加入一定比例的链霉亲和素,混匀,控制生物素结合补体C3抗体比例为1:1,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为1:1,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.15g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分钟,加入牛血清白蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合液以14000rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,再加入保存液,将制备好的R2装入成品罐中,并定容至终浓度,进行标识。
实施例3
一种补体C3的检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括缓冲液、电解质、草酸、稳定剂、促进剂和防腐剂,所述缓冲液是浓度为3.2g/L的二水合磷酸二氢钠以及浓度为24g/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合溶液,所述氯化钠作为电解质使用,其浓度为20g/L,所述草酸的浓度为8.0g/L,所述稳定剂的主要成分是牛血清白蛋白,其浓度为5g/L,所述促进剂为PEG6000,其浓度为120g/L,所述防腐剂为叠氮钠,其浓度为2.0ml/L;所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液,所述偶联缓冲液的主要组分是浓度为及浓度为:27g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,所述保存液的各组分包括浓度为9.8g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为2g/L的牛血清白蛋白以及浓度为2.0ml/L的叠氮钠,所述抗体偶联物的各组分包括:浓度为20g/L的生物素、浓度为20g/L的链霉亲和素、浓度为0.13g/L的补体C3抗体以及浓度为0.3g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种补体C3的检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤,
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为300rpm,使搅拌保持匀速状态,边搅拌边投入二水合磷酸二氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸,搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀,之后投入氯化钠、草酸、牛血清白蛋白,待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和叠氮钠,投料完成后,继续搅拌至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌至物料完全溶解,清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值为6.5,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速为300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照上述浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸,搅拌至物料完全溶解,之后投入稳定剂,待物料完全溶解后再投入叠氮钠,待清澈透明,配液罐底部无沉淀,调节pH值为8.5,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放备用,进行标识;
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素,透析过夜,使其与生物素按一定比例结合,再加入一定比例的链霉亲和素,混匀,控制生物素结合补体C3抗体比例为3:1,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为2:1,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.15g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分钟,加入牛血清白蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合液以14000rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,再加入保存液,将制备好的R2装入成品罐中,并定容至终浓度,进行标识。
下面通过具体的实验,结合表格和曲线图,对本发明的补体C3的检测试剂盒的几个重要指标进行说明,具体如下:
1、采用现有的试剂盒(即R2试剂中直接使用补体C3抗体)。
1.1、定标
使用校准品进行定标,结果如表1所示,定标曲线如图1所示。
表1、校准品定标结果
结论:线性范围可做到1-200mg/L,浓度大于200mg/L时出现hook效应
1.2、精密度CV检测:
选取待测样本用生理盐水进行稀释,一般为3个浓度水平,分别为:10.2g/L、99.8g/L、200g/L每个浓度水平样本重复测定10次
结论:精密度CV较大,基本>7%。
1、采用本发明的试剂盒(即R2试剂中采用亲和素-生物素-抗体偶联物、在R1试剂中加入草酸)。
2.1、定标
使用校准品进行定标,结果如表2所示,定标曲线如图2所示。
结论:线性范围可做到1-250mg/L。
2.2精密度CV检测:
选取待测样本用生理盐水进行稀释,一般为3个浓度水平,分别为:10.2g/L、99.8g/L、200g/L每个浓度水平样本重复测定10次
结论:精密度CV明显改善,4%以内。
综上:本发明采用将生物素结合补体C3抗体比例为1:1-3:1连接,再与链霉亲和素二者1:1混合反应,并且在R1试剂中加入草酸,可明显改善检测试剂的重复性和灵敏度,线性范围可做到1-250mg/L,可广泛应用大、中、小医院。
以上所述是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明所述原理的前提下,还可以作出若干改进或替换,这些改进或替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
2.根据权利要求1所述的一种补体C3的检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
3.根据权利要求1或2所述的一种补体C3的检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
4.根据权利要求3所述的一种补体C3的检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1、R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。
5.根据权利要求4所述的一种补体C3的检测试剂盒,其特征在于:所述生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间。
6.如权利要求1-5任一项的补体C3的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:包括如下步骤,
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速至200-300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照权利要求1的浓度要求,边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B,搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀,之后投入氯化钠、草酸、稳定剂,待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂,投料完成后,继续搅拌至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2)、试剂R2制备
(2-1)、偶联缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速至200-300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌至物料完全溶解,清澈透明,配液罐底部无沉淀,调整PH值到4.50-6.50之间,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌器转速至200-300rpm,使搅拌保持匀速状态,按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸,搅拌至物料完全溶解,之后投入稳定剂,待物料完全溶解后再投入防腐剂,待清澈透明,配液罐底部无沉淀,调节pH值到6.30-8.50之间,并定容至最终体积;
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放备用,进行标识;
(2-3)、抗体偶联物的制备
将补体C3抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素,透析过夜,使其与生物素按一定比例结合,再加入一定比例的链霉亲和素,混匀,控制生物素结合补体C3抗体的比例为1:1-3:1之间,链霉亲和素结合生物素-补体C3抗体的比例为0.5:1-4:1之间,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分钟,加入牛血清白蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合液以14000rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,再加入保存液,将制备好的R2装入成品罐中,并定容至终浓度,进行标识。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911079943.7A CN110763847A (zh) | 2019-11-07 | 2019-11-07 | 一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911079943.7A CN110763847A (zh) | 2019-11-07 | 2019-11-07 | 一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110763847A true CN110763847A (zh) | 2020-02-07 |
Family
ID=69336673
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911079943.7A Pending CN110763847A (zh) | 2019-11-07 | 2019-11-07 | 一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110763847A (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102435749A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-05-02 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒 |
WO2016101847A1 (zh) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | 温州医科大学 | 一种慢性肾病诊断试剂盒 |
CN109187994A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-11 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 一种测定血清淀粉样蛋白a的浓度的试剂盒及制备方法 |
CN109187996A (zh) * | 2018-09-20 | 2019-01-11 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 一种测定载脂蛋白c-ⅲ浓度的试剂盒及制备方法 |
-
2019
- 2019-11-07 CN CN201911079943.7A patent/CN110763847A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102435749A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-05-02 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒 |
WO2016101847A1 (zh) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | 温州医科大学 | 一种慢性肾病诊断试剂盒 |
CN109187994A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-11 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 一种测定血清淀粉样蛋白a的浓度的试剂盒及制备方法 |
CN109187996A (zh) * | 2018-09-20 | 2019-01-11 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 一种测定载脂蛋白c-ⅲ浓度的试剂盒及制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Pratt et al. | Effect of angiotensin converting enzyme inhibitors on erythropoietin concentrations in healthy volunteers. | |
US20090294360A1 (en) | Dialysis preparation | |
JP2000512748A (ja) | 検体収集用液体 | |
CN110763846A (zh) | 一种补体C3c的检测试剂盒及制备方法 | |
JP6818187B1 (ja) | 鉄キレート剤を含むプロトロンビン時間試薬 | |
CN111060692A (zh) | 一种免疫球蛋白g1的检测试剂盒及其制备方法 | |
CN110763847A (zh) | 一种补体c3的检测试剂盒及制备方法 | |
Rejman et al. | Correction of anaemia following renal transplantation: serial changes in serum immunoreactive erythropoietin, absolute reticulocyte count and red‐cell creatine levels | |
CN105181978B (zh) | 一种凝血酶时间测定试剂及其制备方法 | |
CN110987553A (zh) | 一种红细胞处理试剂及其应用 | |
US20140155498A1 (en) | Method of Manufacture of Stable Liquid Coagulation Factors | |
Fried | Hematologic complications of chronic renal failure | |
CN112986065B (zh) | 一种用于血细胞分析仪的全血质控品及其制备方法 | |
CN110568181A (zh) | 一种微量白蛋白免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 | |
CN110763840A (zh) | 纤溶酶原激活物抑制剂的检测试剂盒及制备方法 | |
Mateos Antón et al. | Renal tubular acidosis in recurrent renal stone formers | |
US10172884B2 (en) | Dialysis solutions comprising organic esters of phosphoric acid | |
JP2001527530A (ja) | 血液、血漿または関節液生成物の抗凝血 | |
CN112305212A (zh) | 一种触珠蛋白专利免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 | |
Holloway et al. | Plasma-mediated alterations of erythrocyte deformability by perfluorochemical blood substitutes | |
Tsuda et al. | A case of congenital factor V deficiency combined with multiple congenital anomalies: successful management of palatoplasty | |
Kardel et al. | Preoperative liver function tests correlated with encephalopathy after porta-caval anastomosis | |
Semple | Compensatory changes in the rat following removal of electrolytes by intraperitoneal dialysis | |
JP4453999B2 (ja) | 尿中蛋白及びペプチドの安定化方法 | |
KR20140062485A (ko) | 중등도 간 손상 환자의 암 치료에 있어서 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1h-벤즈이미다졸-2-일]-1h-퀴놀린-2-온의 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200207 |