CN112904011A - 一种血清C1q补体的检测试剂盒及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种血清C1q补体的检测试剂盒及制备方法。其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括：作为第一缓冲液的三羟甲基氨基甲烷、作为表面活性剂的十二烷基硫酸钠、作为稳定剂的牛血清白蛋白、同样作为表面活性剂的曲拉通、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠以及作为防腐剂的Proclin‑950。试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物。本发明的优点是：可有效提高试剂的灵敏度、延长试剂的保存效期并增宽线性范围，保证检测结果的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种血清C1q补体的检测试剂盒及制备方法。
背景技术
C1q是构成补体C1的一个重要成分，分子量为390000，由6个相同的亚单位组成对称的六聚体，当两个以上的C1q与免疫复合物中的IgM或IgG的Fc段结合后，C1q构型发生改变，导致C1r和C1s的相继活化，启动补体经典激活途径。近年来大量的研究证明，血清C1q补体作为一种新型标志物，在体液中的含量变化与许多疾病的病理过程及预后评估密切相关。提示血清C1q补体增高，见于骨髓炎、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、血管炎、硬皮病、痛风、活动性过敏性紫癜。提示血清C1q补体降低见于活动性混合性结缔组织病。常规方法中采用胶乳微球直接偶联血清C1q补体抗体或采用免疫比浊法测定血清C1q补体含量，这两种方法存在灵敏度和线性范围差的缺陷，限制了它的应用。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题
发明内容
本发明的目的是：提供一种稳定性好、灵敏度高、线性范围宽的血清C1q补体的检测试剂盒及制备方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种血清C1q补体的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物，其中缓冲液的主要成分及浓度包括：
第二缓冲液A 30-100mmol/L
保存液的主要成分及浓度包括：
第二缓冲液B 1.2-9.8g/L
稳定剂 1.0-4.0g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
胶乳微球抗体偶联物的主要成分及浓度
具体的：
所述试剂R1中的第一缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、GOOD’S缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R2中的第二缓冲液A、第二缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
所述试剂R1中的表面活性剂A、B分别为曲拉通、吐温20、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基三甲基甜菜碱、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或两种以上的混合物。
所述试剂R2中胶乳微球的粒径为90-270nm，其表面修饰集团为羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。
所述试剂R2中生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1。
所述试剂R1中的表面活性剂A为十二烷基硫酸钠，表面活性剂B为曲拉通。
所述试剂R1中的第一缓冲液为三羟甲基氨基甲烷，所述试剂R2中的第二缓冲液A为2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，第二缓冲液B为甘氨酸。
一种血清C1q补体的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入第一缓冲液、表面活性剂A、稳定剂、表面活性剂B、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠和防腐剂，搅拌5-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-9.50之间，最后定容至最终体积，配制好的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入第二缓冲液A，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到4.30-6.00之间，继续搅拌5-10分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，定容后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入第二缓冲液B、稳定剂、防腐剂，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.30-8.50之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，定容后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、胶乳微球抗体偶联物的制备
将胶乳微球用缓冲液稀释到0.5-2.0％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将血清C1q补体抗体用缓冲液稀释到0.02-1.0g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，控制生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应30分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。
由于上述技术方案的应用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
1、本发明血清C1q补体的检测试剂盒通过在R1试剂中添加十二烷基硫酸钠、曲拉通、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾和亚硝酸钠等抗干扰物质，使得试剂盒具有更强的抗干扰能力，提高了试剂盒的使用性能，十分具有推广意义。
2、本发明血清C1q补体的检测试剂盒采用胶乳微球连接链霉亲和素1:1，血清C1q补体抗体连接生物素1:2，二者1:1混合反应，可明显改善线性范围、重复性和灵敏度。
3、本发明血清C1q补体的检测试剂盒在试剂R1中加入牛血清白蛋白和十二烷基硫酸钠，在试剂R2中加入链霉亲和素和生物素，在不影响原有性能的基础上，能够有效提高试剂盒的热稳定性，37℃条件下可稳定保存7天。
附图说明
图1是校准品定标曲线图。
其中：X轴表示校准品浓度，Y轴表示吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：
一种血清C1q补体的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的三羟甲基氨基甲烷，其浓度为20mmol/L，作为表面活性剂的十二烷基硫酸钠，其浓度为0.5g/L，作为稳定剂的牛血清白蛋白，其浓度为13g/L，同样作为表面活性剂的曲拉通，其浓度为1ml/L，浓度为5KU/L的抗坏血酸氧化酶、浓度为1g/L的亚铁氰化钾，浓度为7mmol/L的亚硝酸钠，以及作为防腐剂的Proclin-950，其浓度为2ml/L。
所述试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物，其中缓冲液是浓度为30mmol/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液包括浓度为1.2g/L的甘氨酸、浓度为2g/L的牛血清白蛋白，以及浓度为0.8ml/L的Proclin-950，胶乳微球抗体偶联物包括浓度为0.5％的胶乳微球，其粒径为150nm，其表面修饰集团为羧基，还包括浓度为5g/L的生物素、浓度为5g/L的链霉亲和素，浓度为0.02g/L的血清C1q补体抗体，以及浓度为0.005g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种血清C1q补体的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述的浓度要求边搅拌边投入三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、牛血清白蛋白、曲拉通、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠和防腐剂，搅拌15分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00，最后定容至最终体积，配制好的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌20分钟至物料完全溶解，调节pH值到5，继续搅拌5分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，定容后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入甘氨酸、牛血清白蛋白、Proclin-950，搅拌15分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.3，继续搅拌5分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，定容后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、胶乳微球抗体偶联物的制备
将胶乳微球用缓冲液稀释到0.5％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将血清C1q补体抗体用缓冲液稀释到0.05g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，控制生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用缓冲液溶解到0.005g/L的浓度度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应30分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。
实施例2
一种血清C1q补体的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为60mmol/L，作为表面活性剂的聚乙烯吡咯烷酮，其浓度为5g/L，作为稳定剂的牛血清白蛋白，其浓度为5g/L，同样作为表面活性剂的十二烷基磺酸钠，其浓度为5ml/L，浓度为1KU/L的抗坏血酸氧化酶、浓度为3g/L的亚铁氰化钾，浓度为2mmol/L的亚硝酸钠，以及作为防腐剂的Proclin-300，其浓度为0.8ml/L。
所述试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物，其中缓冲液是浓度为65mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，所述保存液包括浓度为5g/L的甘氨酸、浓度为1.0g/L的牛血清白蛋白，以及浓度为2ml/L的Proclin-300，胶乳微球抗体偶联物包括浓度为1.2％的胶乳微球，其粒径为90nm，其表面修饰集团为氨基，还包括浓度为10g/L的生物素、浓度为10g/L的链霉亲和素，浓度为0.05g/L的血清C1q补体抗体，以及浓度为0.15g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种血清C1q补体的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述的浓度要求边搅拌边投入十二水合磷酸氢二钠、聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白、十二烷基磺酸钠、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠和防腐剂，搅拌5分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到8.00，最后定容至最终体积，配制好的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入4-羟乙基哌嗪乙磺酸，搅拌30分钟至物料完全溶解，调节pH值到4.3，继续搅拌10分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，定容后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入甘氨酸、牛血清白蛋白、Proclin-300，搅拌5分钟至物料完全溶解，调节pH值到7.4，继续搅拌7分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，定容后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、胶乳微球抗体偶联物的制备
将胶乳微球用缓冲液稀释到1.2％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将血清C1q补体抗体用缓冲液稀释到0.05g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，控制生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1，将将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用缓冲液溶解到0.15g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应30分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。
实施例3
一种血清C1q补体的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的2-(N-吗啡啉)乙磺酸，其浓度为100mmol/L，作为表面活性剂的吐温20，其浓度为10g/L，作为稳定剂的牛血清白蛋白，其浓度为20g/L，同样作为表面活性剂的曲拉通，其浓度为10ml/L，浓度为10KU/L的抗坏血酸氧化酶、浓度为5g/L的亚铁氰化钾，浓度为15mmol/L的亚硝酸钠，以及作为防腐剂的叠氮钠，其浓度为1.4ml/L。
所述试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物，其中缓冲液是浓度为100mmol/L的十二水合磷酸氢二钠，所述保存液包括浓度为9.8g/L的三羟甲基氨基甲烷、浓度为4g/L的牛血清白蛋白，以及浓度为1.4ml/L的叠氮钠，胶乳微球抗体偶联物包括浓度为2.0％的胶乳微球，其粒径为270nm，其表面修饰集团为羧基，还包括浓度为20g/L的生物素、浓度为20g/L的链霉亲和素，浓度为1g/L的血清C1q补体抗体，以及浓度为0.3g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
一种血清C1q补体的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述的浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啡啉)乙磺酸、吐温20、牛血清白蛋白、曲拉通、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠和防腐剂，搅拌30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到9.5，最后定容至最终体积，配制好的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照上述浓度要求边搅拌边投入十二水合磷酸氢二钠，搅拌5分钟至物料完全溶解，调节pH值到6，继续搅拌8分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，定容后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入三羟甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、叠氮钠，搅拌30分钟至物料完全溶解，调节pH值到8.5，继续搅拌10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，定容后的溶液存放备用，进行标识；(2-3)、胶乳微球抗体偶联物的制备
将胶乳微球用缓冲液稀释到2.0％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将血清C1q补体抗体用缓冲液稀释到1g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，控制生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用缓冲液溶解到0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应30分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。
下面通过具体的实验，结合表格和曲线图，对本发明的一种血清C1q补体的检测试剂盒的几个重要指标进行说明，具体如下：
1、定标：
使用校准品进行定标，结果如表1所示，定标曲线如图1所示。
表1、校准品定标结果：
2、线性范围检测：
选取测试临床血清样本20例，检测结果如下表：
结论：校准品最高点浓度为600mg/L，定标成功，高端未出现hook效应。测试临床血清样本，30-600mg/L不同浓度的样本均能正确检测。说明本发明试剂盒线性范围可达到30-600mg/L。
3、重复性CV检测：
随机抽取临床血清5例，每例测试10次，计算重复性。
结论：线性范围低端的重复性在8％以内，其余浓度段的血清样本重复性均在5％以内。
4、抗干扰能力检测：
添加不同浓度的抗坏血酸、甘油三酯、胆红素、血红蛋白等干扰物质，
结论：添加(干扰物质的)测试值与未添加(干扰物质)前的测试值相对偏差均在5％以内。
5、热稳定性检测：
将该发明试剂盒放入电热恒温培养箱中，37℃加速7天，分别于第0天、1天、3天、5天、6天、7天进行检测，观察试剂盒的热稳定性变化。
结论：上述数据表明，分别于第0天、1天、3天、5天、6天、7天进行检测时，其相对偏差均在5％以内，说明试剂盒热稳定性较好，37℃条件下可稳定保存7天。
综上：本发明的血清C1q补体的检测试剂盒具有较强的抗干扰能力，线性范围宽、重复性和灵敏度度好，稳定性好，值得推广使用。以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进或替换，这些改进或替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物，其中缓冲液的主要成分及浓度包括：
第二缓冲液A 30-100mmol/L
保存液的主要成分及浓度包括：
第二缓冲液B 1.2-9.8g/L
稳定剂 1.0-4.0g/L
防腐剂 0.8-2.0ml/L
胶乳微球抗体偶联物的主要成分及浓度
2.根据权利要求1所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、GOOD’S缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
3.根据权利要求1所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二缓冲液A、第二缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。
4.根据权利要求1或2所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：
所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。
5.根据权利要求3所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：试剂R1中的表面活性剂A、B分别为曲拉通、吐温20、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基三甲基甜菜碱、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或两种以上的混合物。
6.根据权利要求5所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中胶乳微球的粒径为90-270nm，其表面修饰集团为羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。
7.根据权利要求5或6所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1。
8.根据权利要求5所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的表面活性剂A为十二烷基硫酸钠，表面活性剂B为曲拉通。
9.根据权利要求2所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液为三羟甲基氨基甲烷，所述试剂R2中的第二缓冲液A为2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，第二缓冲液B为甘氨酸。
10.如权利要求1-9任一项的血清C1q补体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，
(1)、试剂R1制备
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入第一缓冲液、表面活性剂A、稳定剂、表面活性剂B、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠和防腐剂，搅拌5-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-9.50之间，最后定容至最终体积，配制好的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2)、试剂R2制备
(2-1)、缓冲液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入第二缓冲液A，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到4.30-6.00之间，继续搅拌5-10分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，定容后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
(2-2)、保存液配制
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入第二缓冲液B、稳定剂、防腐剂，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.30-8.50之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，定容后的溶液存放备用，进行标识；
(2-3)、胶乳微球抗体偶联物的制备
将胶乳微球用缓冲液稀释到0.5-2.0％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将血清C1q补体抗体用缓冲液稀释到0.02-1.0g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，控制生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应30分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。
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