JP2018087238A - 置換ベンゼン化合物 - Google Patents
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Abstract
【課題】本発明は置換ベンゼン化合物を提供すること。【解決手段】本発明はまた、これらの化合物を含有する医薬組成物、ならびにこれらの化合物および医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することによるガンの治療方法にも関する。本発明はまた、研究または他の非治療目的のためのそのような化合物の使用にも関する。本発明は、新規置換ベンゼン化合物、この化合物を作製するための合成方法、それらを含む医薬組成物、およびこの化合物の様々な使用を提供する。【選択図】なし
Description
関連出願
本願は、２０１２年１０月１５日に出願された米国特許仮出願第６１／７１４，１４０
号、２０１２年１０月１５日に出願された同第６１／７１４，１４５号、２０１３年３月
１３日に出願された同第６１／７８０，７０３日、および２０１３年３月１４日に出願さ
れた同第６１／７８６，２７７号の優先権および利益を請求する。これらの仮出願のそれ
ぞれの全内容は、参照により全体として本明細書中に組み込まれる。
本願は、２０１２年１０月１５日に出願された米国特許仮出願第６１／７１４，１４０
号、２０１２年１０月１５日に出願された同第６１／７１４，１４５号、２０１３年３月
１３日に出願された同第６１／７８０，７０３日、および２０１３年３月１４日に出願さ
れた同第６１／７８６，２７７号の優先権および利益を請求する。これらの仮出願のそれ
ぞれの全内容は、参照により全体として本明細書中に組み込まれる。
ＥＺＨ２介在性障害（たとえばガン）を治療するために使用できる、ＥＺＨ２活性の阻
害剤としての新規薬剤が継続的に必要とされる。
害剤としての新規薬剤が継続的に必要とされる。
１つの態様において、本発明は、
から選択される置換ベンゼン化合物およびその薬剤的に許容される塩を特徴とする。
例えば、化合物は
またはその薬剤的に許容される塩である。
例えば、化合物は
である。
例えば、化合物は
またはその薬剤的に許容される塩である。
例えば、化合物は
である。
例えば、化合物は
またはその薬剤的に許容される塩である。
例えば、化合物は
である。
本発明はまた、１以上の薬剤的に許容される担体と本明細書中で開示される１以上の化
合物とを含む医薬組成物も提供する。
合物とを含む医薬組成物も提供する。
本発明の別の態様は、ＥＺＨ２介在性障害を治療または予防する方法である。方法は、
それを必要とする対象に治療有効量の本明細書中で開示される１以上の化合物を投与する
ことを含む。ＥＺＨ２介在性障害は、少なくとも一つにはＥＺＨ２の活性が関与する疾患
、障害、または状態である。１つの実施形態において、ＥＺＨ２介在性障害は、増加した
ＥＺＨ２活性と関連する。１つの実施形態において、ＥＺＨ２介在性障害はガンである。
ＥＺＨ２介在ガンは、リンパ腫、白血病または黒色腫、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞
リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性骨髄性
白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、混合系統白血病、または骨
髄異形成症候群（ＭＤＳ）であり得る。１つの実施形態において、ＥＺＨ２介在ガンは、
悪性ラブドイド腫瘍またはＩＮＩ１欠損腫瘍である。悪性ラブドイド腫瘍の組織学的診断
は、特有のラブドイド細胞（偏在する核と豊富な好酸性細胞質とを有する大細胞）の同定
およびビメンチン、ケラチンおよび上皮膜抗原に対する抗体に関する免疫組織化学に左右
される。ほとんどの悪性ラブドイド腫瘍において、染色体バンド２２ｑ１１．２に位置す
るＳＭＡＲＣＢ１／ＩＮＩ１遺伝子は、欠失および／または突然変異によって不活性化さ
れる。１つの実施形態において、悪性ラブドイド腫瘍はＩＮＩ１欠損腫瘍であり得る。
それを必要とする対象に治療有効量の本明細書中で開示される１以上の化合物を投与する
ことを含む。ＥＺＨ２介在性障害は、少なくとも一つにはＥＺＨ２の活性が関与する疾患
、障害、または状態である。１つの実施形態において、ＥＺＨ２介在性障害は、増加した
ＥＺＨ２活性と関連する。１つの実施形態において、ＥＺＨ２介在性障害はガンである。
ＥＺＨ２介在ガンは、リンパ腫、白血病または黒色腫、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞
リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性骨髄性
白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、混合系統白血病、または骨
髄異形成症候群（ＭＤＳ）であり得る。１つの実施形態において、ＥＺＨ２介在ガンは、
悪性ラブドイド腫瘍またはＩＮＩ１欠損腫瘍である。悪性ラブドイド腫瘍の組織学的診断
は、特有のラブドイド細胞（偏在する核と豊富な好酸性細胞質とを有する大細胞）の同定
およびビメンチン、ケラチンおよび上皮膜抗原に対する抗体に関する免疫組織化学に左右
される。ほとんどの悪性ラブドイド腫瘍において、染色体バンド２２ｑ１１．２に位置す
るＳＭＡＲＣＢ１／ＩＮＩ１遺伝子は、欠失および／または突然変異によって不活性化さ
れる。１つの実施形態において、悪性ラブドイド腫瘍はＩＮＩ１欠損腫瘍であり得る。
特に指定のない限り、治療方法の任意の記載は、本明細書中で記載されるような治療ま
たは予防を提供するための化合物の使用、ならびにそのような状態を治療または予防する
ための薬剤を調製するための化合物の使用を包含する。治療は、ヒトまたはヒト以外の動
物、例えばげっ歯類および他の疾患モデルの治療を包含する。
たは予防を提供するための化合物の使用、ならびにそのような状態を治療または予防する
ための薬剤を調製するための化合物の使用を包含する。治療は、ヒトまたはヒト以外の動
物、例えばげっ歯類および他の疾患モデルの治療を包含する。
さらに、本明細書中で記載する化合物または方法を研究（例えばエピジェネティック酵
素の研究）および他の非治療目的のために使用することができる。
素の研究）および他の非治療目的のために使用することができる。
ある実施形態において、本明細書中で開示される好ましい化合物は、望ましい薬理学的および／または薬物速度論的特性、例えば、低クリアランス率および／または例えばシトクロムＰ−４５０酵素の時間に依存し、かつ可逆的な阻害によって評価される併用療法における有害な薬物相互作用の限定的なリスクを有する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
およびその医薬として許容される塩から選択される化合物。
（項目２）
またはその医薬として許容される塩である、項目１記載の化合物。
（項目３）
である、項目１記載の化合物。
（項目４）
またはその医薬として許容される塩である、項目１記載の化合物。
（項目５）
である、項目１記載の化合物。
（項目６）
またはその医薬として許容される塩である、項目１記載の化合物。
（項目７）
である、項目１記載の化合物。
（項目８）
項目１〜７のいずれかに記載の化合物および医薬として許容される担体を含む医薬組
成物。
（項目９）
治療を必要とする対象に治療有効量の項目１〜７のいずれかに記載の化合物を投与す
ることを含む、ＥＺＨ２介在性障害を治療する方法。
（項目１０）
前記ＥＺＨ２介在性障害がガンである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ガンがリンパ腫、白血病または黒色腫である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記ガンが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、混合系統白血病、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、項目１０に
記載の方法。
（項目１３）
前記ガンが悪性ラブドイド腫瘍またはＩＮＩ１欠損腫瘍である、項目１０に記載の方
法。
（項目１４）
ＥＺＨ２介在性障害を治療するための方法で使用するための項目１〜７のいずれかに
記載の化合物。
（項目１５）
ＥＺＨ２介在性障害の前記治療における薬剤の製造のための項目１〜７のいずれかに
記載の化合物の使用。
（項目１６）
ＥＺＨ２介在性障害を治療するための医薬組成物であって、項目１〜７のいずれかに
記載の化合物を主成分として含む、医薬組成物。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
およびその医薬として許容される塩から選択される化合物。
（項目２）
またはその医薬として許容される塩である、項目１記載の化合物。
（項目３）
である、項目１記載の化合物。
（項目４）
またはその医薬として許容される塩である、項目１記載の化合物。
（項目５）
である、項目１記載の化合物。
（項目６）
またはその医薬として許容される塩である、項目１記載の化合物。
（項目７）
である、項目１記載の化合物。
（項目８）
項目１〜７のいずれかに記載の化合物および医薬として許容される担体を含む医薬組
成物。
（項目９）
治療を必要とする対象に治療有効量の項目１〜７のいずれかに記載の化合物を投与す
ることを含む、ＥＺＨ２介在性障害を治療する方法。
（項目１０）
前記ＥＺＨ２介在性障害がガンである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ガンがリンパ腫、白血病または黒色腫である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記ガンが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、混合系統白血病、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、項目１０に
記載の方法。
（項目１３）
前記ガンが悪性ラブドイド腫瘍またはＩＮＩ１欠損腫瘍である、項目１０に記載の方
法。
（項目１４）
ＥＺＨ２介在性障害を治療するための方法で使用するための項目１〜７のいずれかに
記載の化合物。
（項目１５）
ＥＺＨ２介在性障害の前記治療における薬剤の製造のための項目１〜７のいずれかに
記載の化合物の使用。
（項目１６）
ＥＺＨ２介在性障害を治療するための医薬組成物であって、項目１〜７のいずれかに
記載の化合物を主成分として含む、医薬組成物。
別段の定めがない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本
発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。明細書中で、
単数形は、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り．複数形も包含する。本明細書
中で記載するものと類似または等しい方法および材料を本発明の実施または試験で使用で
きるが、好適な方法および材料を後述する。本明細書中で引用される全ての刊行物、特許
出願、特許および他の参考文献は、参照により組み込まれる。本明細書中で引用される参
考文献は、請求される発明の先行技術であると認められるものではない。矛盾する場合、
定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は単に例示的であり、
限定を意図するものではない。本明細書中で開示される化合物の化学構造と名称との間に
矛盾がある場合は、化学構造が優先する。
発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。明細書中で、
単数形は、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り．複数形も包含する。本明細書
中で記載するものと類似または等しい方法および材料を本発明の実施または試験で使用で
きるが、好適な方法および材料を後述する。本明細書中で引用される全ての刊行物、特許
出願、特許および他の参考文献は、参照により組み込まれる。本明細書中で引用される参
考文献は、請求される発明の先行技術であると認められるものではない。矛盾する場合、
定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は単に例示的であり、
限定を意図するものではない。本明細書中で開示される化合物の化学構造と名称との間に
矛盾がある場合は、化学構造が優先する。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかに
なるであろう。
なるであろう。
本発明は、新規置換ベンゼン化合物、この化合物を作製するための合成方法、それらを
含む医薬組成物、およびこの化合物の様々な使用を提供する。
含む医薬組成物、およびこの化合物の様々な使用を提供する。
本発明の代表的な化合物は、表１で列挙した化合物を包含する。
本明細書において、化合物の構造式は、場合によっては簡便のためにある１つの異性体
を表すが、本発明は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性
体、エナンチオマー、回転異性体、ジアステレオマー、ラセミ化合物などのあらゆる異性
体を包含し得、すべての異性体が同じレベルの活性を有し得るとは限らないと理解される
。加えて、結晶多形が式によって表される化合物について存在し得る。任意の結晶形態、
結晶形態混合物、またはその無水物もしくは水和物が本発明の範囲内に含まれることに留
意する。
を表すが、本発明は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性
体、エナンチオマー、回転異性体、ジアステレオマー、ラセミ化合物などのあらゆる異性
体を包含し得、すべての異性体が同じレベルの活性を有し得るとは限らないと理解される
。加えて、結晶多形が式によって表される化合物について存在し得る。任意の結晶形態、
結晶形態混合物、またはその無水物もしくは水和物が本発明の範囲内に含まれることに留
意する。
「異性」とは、同じ分子式を有するが、それらの原子の結合の配列または空間における
それらの原子の配置が異なる化合物を意味する。空間におけるそれらの原子の配置が異な
る異性体を「立体異性体」と称する。互いに鏡像でない立体異性体を「ジアステレオマー
」と称し、たがに重ねあわすことができない鏡像である立体異性体を「エナンチオマー」
または場合によっては光学異性体と称する。反対のキラリティーを有する個々のエナンチ
オマー形態の等量の混合物を「ラセミ混合物」と称する。
それらの原子の配置が異なる化合物を意味する。空間におけるそれらの原子の配置が異な
る異性体を「立体異性体」と称する。互いに鏡像でない立体異性体を「ジアステレオマー
」と称し、たがに重ねあわすことができない鏡像である立体異性体を「エナンチオマー」
または場合によっては光学異性体と称する。反対のキラリティーを有する個々のエナンチ
オマー形態の等量の混合物を「ラセミ混合物」と称する。
「幾何異性体」は、それらの存在が二重結合またはシクロアルキルリンカー（例えば、
１，３−シクロブチル）の周りの束縛回転に負うジアステレオマーを意味する。これらの
立体配置は、カーン・インゴルド・プレローグ順位則にしたがって、その基が分子中の二
重結合の同じ側または反対側にあることを示す、接頭語シスおよびトランス、またはＺお
よびＥによってその名前で区別される。
１，３−シクロブチル）の周りの束縛回転に負うジアステレオマーを意味する。これらの
立体配置は、カーン・インゴルド・プレローグ順位則にしたがって、その基が分子中の二
重結合の同じ側または反対側にあることを示す、接頭語シスおよびトランス、またはＺお
よびＥによってその名前で区別される。
本発明の化合物は立体異性体として示すことができると理解すべきである。化合物が立
体異性体を有する場合、全ての立体異性体が本発明の範囲内に含まれるわけではないとい
うことも理解されるべきであり、全ての立体異性体が同じレベルの活性を有し得るとは限
らないと理解すべきである。
体異性体を有する場合、全ての立体異性体が本発明の範囲内に含まれるわけではないとい
うことも理解されるべきであり、全ての立体異性体が同じレベルの活性を有し得るとは限
らないと理解すべきである。
さらに、本明細書中で検討する構造および他の化合物はそのすべてのアトロピック（at
ropic）異性体を包含し、全てのアトロピック異性体が同じレベルの活性を有し得るとは
限らないと理解される。「アトロピック異性体」は、２つの異性体の原子が空間において
異なって配置されている立体異性体の一種である。アトロピック異性体は、中心の結合の
周りの大きな基の回転の妨害に起因する束縛回転にそれらの存在を負う。そのようなアト
ロピック異性体は特徴的には混合物として存在するが、クロマトグラフィー技術の近年の
進歩の結果、限定された場合で２つのアトロピック異性体の混合物を分離することが可能
になった。
ropic）異性体を包含し、全てのアトロピック異性体が同じレベルの活性を有し得るとは
限らないと理解される。「アトロピック異性体」は、２つの異性体の原子が空間において
異なって配置されている立体異性体の一種である。アトロピック異性体は、中心の結合の
周りの大きな基の回転の妨害に起因する束縛回転にそれらの存在を負う。そのようなアト
ロピック異性体は特徴的には混合物として存在するが、クロマトグラフィー技術の近年の
進歩の結果、限定された場合で２つのアトロピック異性体の混合物を分離することが可能
になった。
「互変異性体」は、平衡状態で存在し、１つの異性体から別の異性体へ容易に変換され
る２以上の構造異性体の１つである。この変換の結果、隣接する共役二重結合のスイッチ
に付随する水素原子のホルマール移動が起こる。互変異性体は、溶液中互変異性体のセッ
トの混合物として存在する。互変異性化が可能な溶液中で、互変異性体の化学平衡が達成
される。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒およびｐＨをはじめとするいくつかの要因
に左右される。互変異性化によって相互転換可能である互変異性体の概念は互変異性と呼
ばれる。
る２以上の構造異性体の１つである。この変換の結果、隣接する共役二重結合のスイッチ
に付随する水素原子のホルマール移動が起こる。互変異性体は、溶液中互変異性体のセッ
トの混合物として存在する。互変異性化が可能な溶液中で、互変異性体の化学平衡が達成
される。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒およびｐＨをはじめとするいくつかの要因
に左右される。互変異性化によって相互転換可能である互変異性体の概念は互変異性と呼
ばれる。
可能な互変異性の様々な種類のうち、２つが通常観察される。ケト−エノール互変異性
では、電子と水素原子の同時シフトが起こる。環−鎖互変異性は、糖鎖分子中のアルデヒ
ド基（−ＣＨＯ）が同じ分子中のヒドロキシ基（−ＯＨ）の１つと反応する結果として起
こり、それをグルコースによって示されるような環状（環の形状）形態にする。
では、電子と水素原子の同時シフトが起こる。環−鎖互変異性は、糖鎖分子中のアルデヒ
ド基（−ＣＨＯ）が同じ分子中のヒドロキシ基（−ＯＨ）の１つと反応する結果として起
こり、それをグルコースによって示されるような環状（環の形状）形態にする。
本明細書中で用いられる場合、
のいずれの場合も
と解釈されるべきである。
一般的な互変異性体対は：ケトン−エノール、アミド−ニトリル、ラクタム−ラクチム
、ヘテロ環中のアミド−イミド酸互変異性（例えば、グアニン、チミンおよびシトシンな
どの核酸塩基中）、イミン−エナミンおよびエナミン−エナミンである。ケト−エノール
平衡の一例は、以下で示すようなピリジン−２（１Ｈ）−オンと対応するピリジン−２−
オール間である。
、ヘテロ環中のアミド−イミド酸互変異性（例えば、グアニン、チミンおよびシトシンな
どの核酸塩基中）、イミン−エナミンおよびエナミン−エナミンである。ケト−エノール
平衡の一例は、以下で示すようなピリジン−２（１Ｈ）−オンと対応するピリジン−２−
オール間である。
本発明の化合物は異なる互変異性体として示すことができると理解されるべきである。
化合物が互変異性体を有する場合、全ての互変異性体は本発明の範囲内に含まれることが
意図されることも理解すべきであり、化合物の命名は互変異性体を排除しない。ある互変
異性体は他よりも高いレベルの活性を有し得ると理解される。
化合物が互変異性体を有する場合、全ての互変異性体は本発明の範囲内に含まれることが
意図されることも理解すべきであり、化合物の命名は互変異性体を排除しない。ある互変
異性体は他よりも高いレベルの活性を有し得ると理解される。
「結晶多形」、「多形体」または「結晶形態」という語は、化合物（またはその塩もし
くは溶媒和物）が異なる結晶充填配置（packing arrangement）で結晶化することができ
、そのすべてが同じ元素組成を有する結晶構造を意味する。異なる結晶形態は、通常、異
なるＸ線回折パターン、赤外スペクトル、融点、密度硬度（density hardness）、結晶
形、光学および電気特性、安定性および溶解性を有する。再結晶溶媒、晶析速度、貯蔵温
度および他の因子は、１つの結晶形態が優勢になる原因となり得る。化合物の結晶多形は
、異なる条件下での結晶化によって調製できる。
くは溶媒和物）が異なる結晶充填配置（packing arrangement）で結晶化することができ
、そのすべてが同じ元素組成を有する結晶構造を意味する。異なる結晶形態は、通常、異
なるＸ線回折パターン、赤外スペクトル、融点、密度硬度（density hardness）、結晶
形、光学および電気特性、安定性および溶解性を有する。再結晶溶媒、晶析速度、貯蔵温
度および他の因子は、１つの結晶形態が優勢になる原因となり得る。化合物の結晶多形は
、異なる条件下での結晶化によって調製できる。
本発明の化合物は、例えば本明細書中で開示される式のいずれかなどの化合物自体を包
含する。本発明の化合物は、妥当な場合、それらの塩、およびそれらの溶媒和物も包含す
る。塩は、例えば、アニオンと置換ベンゼン化合物上の正電荷を持つ基（例えばアミノ）
との間に形成され得る。好適なアニオンとしては、クロリド、ブロミド、ヨージド、スル
フェート、ビスルフェート、スルファメート、ニトレート、ホスフェート、シトレート、
メタンスルホネート、トリフルオロアセテート、グルタメート、グルクロネート、グルタ
レート、マレート、マレエート、スクシネート、フマレート、タータレート（tartrate）
、トシレート、サリチレート、ラクテート、ナフタレンスルホネート、およびアセテート
（たとえば、トリフルオロアセテート）が挙げられる。「薬剤的に許容されるアニオン」
という語は、薬剤的に許容される塩を形成するために好適なアニオンを指す。同様に、塩
は、カチオンと置換ベンゼン化合物上の負電荷を有する基（例えば、カルボキシレート）
との間にも形成され得る。好適なカチオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオン
、マグネシウムイオン、およびアンモニウムカチオン、例えばテトラメチルアンモニウム
イオンが挙げられる。置換ベンゼン化合物はまた、第４窒素原子を含む塩も包含する。
含する。本発明の化合物は、妥当な場合、それらの塩、およびそれらの溶媒和物も包含す
る。塩は、例えば、アニオンと置換ベンゼン化合物上の正電荷を持つ基（例えばアミノ）
との間に形成され得る。好適なアニオンとしては、クロリド、ブロミド、ヨージド、スル
フェート、ビスルフェート、スルファメート、ニトレート、ホスフェート、シトレート、
メタンスルホネート、トリフルオロアセテート、グルタメート、グルクロネート、グルタ
レート、マレート、マレエート、スクシネート、フマレート、タータレート（tartrate）
、トシレート、サリチレート、ラクテート、ナフタレンスルホネート、およびアセテート
（たとえば、トリフルオロアセテート）が挙げられる。「薬剤的に許容されるアニオン」
という語は、薬剤的に許容される塩を形成するために好適なアニオンを指す。同様に、塩
は、カチオンと置換ベンゼン化合物上の負電荷を有する基（例えば、カルボキシレート）
との間にも形成され得る。好適なカチオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオン
、マグネシウムイオン、およびアンモニウムカチオン、例えばテトラメチルアンモニウム
イオンが挙げられる。置換ベンゼン化合物はまた、第４窒素原子を含む塩も包含する。
さらに、本発明の化合物、たとえば化合物の塩は、水和もしくは非水和（無水）形態で
、または他の溶媒分子との溶媒和物として存在し得る。水和物の非限定的例としては、一
水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非限定的例としては、エタノール溶媒和
物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。
、または他の溶媒分子との溶媒和物として存在し得る。水和物の非限定的例としては、一
水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非限定的例としては、エタノール溶媒和
物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。
「溶媒和物」とは、化学量論量または非化学量論量のいずれかの溶媒を含む溶媒付加形
態を意味する。一部の化合物は結晶性固体状態で一定のモル比の溶媒分子をトラップする
傾向があり、かくして溶媒和物を形成する。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は
水和物であり；溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである
。水和物は、１以上の水分子と、水がＨ２Ｏとしてその分子状態を保持する物質１分子と
の組み合わせによって形成される。
態を意味する。一部の化合物は結晶性固体状態で一定のモル比の溶媒分子をトラップする
傾向があり、かくして溶媒和物を形成する。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は
水和物であり；溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである
。水和物は、１以上の水分子と、水がＨ２Ｏとしてその分子状態を保持する物質１分子と
の組み合わせによって形成される。
本明細書中で用いられる場合、「アナログ」という語は、構造的に互いに類似している
が、組成が若干異なる（１つの原子が異なる元素の原子によってもしくは特定の官能基の
存在下で置換されているか、または１つの官能基が別の官能基によって置換されているよ
うな）化合物を指す。しがたって、アナログは、参考化合物に対して、機能および外観が
類似または匹敵しているが、構造または起源が異なる化合物である。
が、組成が若干異なる（１つの原子が異なる元素の原子によってもしくは特定の官能基の
存在下で置換されているか、または１つの官能基が別の官能基によって置換されているよ
うな）化合物を指す。しがたって、アナログは、参考化合物に対して、機能および外観が
類似または匹敵しているが、構造または起源が異なる化合物である。
本明細書中で定義されるように、「誘導体」という語は、共通のコア構造を有し、本明
細書中で記載される様々な基で置換されている化合物を指す。たとえば、表１中の化合物
はすべて置換ベンゼン化合物であり、共通のコアを有する。
細書中で記載される様々な基で置換されている化合物を指す。たとえば、表１中の化合物
はすべて置換ベンゼン化合物であり、共通のコアを有する。
「生物学的等価体（bioisostere）」という語は、ある原子または原子団と、別の大ま
かに類似している原子または原子団との交換から得られる化合物を指す。生物学的等価体
置換の目的は、親化合物に類似した特性を有する新規化合物を作製することである。生物
学的等価体置換は、物理化学的またはトポロジー的ベースであり得る。カルボン酸生物学
的等価体の例としては、限定されるものではないが、アシルスルホンイミド、テトラゾー
ル、スルホネートおよびホスホネートが挙げられる。例えば、Patani and LaVoie, Ch
em. Rev. 96, 3147-3176, 1996を参照のこと。
かに類似している原子または原子団との交換から得られる化合物を指す。生物学的等価体
置換の目的は、親化合物に類似した特性を有する新規化合物を作製することである。生物
学的等価体置換は、物理化学的またはトポロジー的ベースであり得る。カルボン酸生物学
的等価体の例としては、限定されるものではないが、アシルスルホンイミド、テトラゾー
ル、スルホネートおよびホスホネートが挙げられる。例えば、Patani and LaVoie, Ch
em. Rev. 96, 3147-3176, 1996を参照のこと。
本発明は、本発明の化合物中に存在する原子のすべての同位体を包含することが意図さ
れる。同位体は、同じ原子番号を有するが、異なる質量数を有する原子を包含する。一般
的な例として、限定されるものではないが、水素の同位体は、三重水素および重水素を包
含し、炭素の同位体はＣ−１３およびＣ−１４を包含する。
れる。同位体は、同じ原子番号を有するが、異なる質量数を有する原子を包含する。一般
的な例として、限定されるものではないが、水素の同位体は、三重水素および重水素を包
含し、炭素の同位体はＣ−１３およびＣ−１４を包含する。
本発明は、本明細書中で開示する化合物を合成するための方法を提供する。本発明はま
た、実施例で示すようなスキームにしたがって本発明の様々な開示された化合物を合成す
るための詳細な説明も提供する。
た、実施例で示すようなスキームにしたがって本発明の様々な開示された化合物を合成す
るための詳細な説明も提供する。
記載全体にわたって、組成物が特定の成分を有する、包含する、または含むと記載され
ている場合、組成物はまた、記載された成分から本質的になる、または記載された成分か
らなることが想定される。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセスステップを有す
る、包含する、または含むと記載されている場合、そのプロセスはまた、記載された加工
ステップから本質的になるか、または記載された加工ステップからなる。さらに、本発明
が操作可能なままである限り、ステップの順序またはある動作を実施する順序は重要では
ない。さらに、２以上のステップまたは動作を同時に実施することができる。
ている場合、組成物はまた、記載された成分から本質的になる、または記載された成分か
らなることが想定される。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセスステップを有す
る、包含する、または含むと記載されている場合、そのプロセスはまた、記載された加工
ステップから本質的になるか、または記載された加工ステップからなる。さらに、本発明
が操作可能なままである限り、ステップの順序またはある動作を実施する順序は重要では
ない。さらに、２以上のステップまたは動作を同時に実施することができる。
本発明の合成法は、様々な官能基を許容でき、したがって、様々な置換された出発物質
を使用できる。プロセスは、概してプロセス全体の最後または最後付近で望ましい最終化
合物を提供するが、場合によっては、化合物をその薬剤的に許容される塩にさらに変換す
ることが望ましい可能性がある。
を使用できる。プロセスは、概してプロセス全体の最後または最後付近で望ましい最終化
合物を提供するが、場合によっては、化合物をその薬剤的に許容される塩にさらに変換す
ることが望ましい可能性がある。
本発明の化合物は、市販の出発物質、文献で公知の化合物を使用して、または容易に調
製される中間体から、当業者に公知であるか、または本明細書中の教示を照らして当業者
には明らかである標準的合成法および手順を使用することにより、様々な方法で調製する
ことができる。有機分子および官能基変換および操作のための標準的合成法および手順は
、関連する科学文献または当該技術分野の標準的な教科書から得ることができる。いずれ
か１つまたはいくつかの出典に限定されないが、古典的教科書、例えば、Smith, M. B.
, March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms,
and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Gree
ne, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd
edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive
Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser and M. Fieser
, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and
Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Orga
nic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)（参照により本明細書中に組み込ま
れる）は、当業者に公知の有機合成の有用で認識された参考教科書である。合成法の以下
の説明は、説明のために設計され、本発明の化合物の調製のための一般的手順を限定する
ものではない。
製される中間体から、当業者に公知であるか、または本明細書中の教示を照らして当業者
には明らかである標準的合成法および手順を使用することにより、様々な方法で調製する
ことができる。有機分子および官能基変換および操作のための標準的合成法および手順は
、関連する科学文献または当該技術分野の標準的な教科書から得ることができる。いずれ
か１つまたはいくつかの出典に限定されないが、古典的教科書、例えば、Smith, M. B.
, March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms,
and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Gree
ne, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd
edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive
Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser and M. Fieser
, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and
Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Orga
nic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)（参照により本明細書中に組み込ま
れる）は、当業者に公知の有機合成の有用で認識された参考教科書である。合成法の以下
の説明は、説明のために設計され、本発明の化合物の調製のための一般的手順を限定する
ものではない。
当業者は、ある基が保護基の使用により反応条件からの保護を必要とする場合があるこ
とを認めるであろう。保護基は、分子中の類似した官能基を区別するために使用すること
もできる。保護基のリストおよびこれらの基を導入し、除去する方法は、Greene, T.W.,
Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition,
John Wiley & Sons: New York, 1999で見いだすことができる。
とを認めるであろう。保護基は、分子中の類似した官能基を区別するために使用すること
もできる。保護基のリストおよびこれらの基を導入し、除去する方法は、Greene, T.W.,
Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition,
John Wiley & Sons: New York, 1999で見いだすことができる。
好ましい保護基としては、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：
ヒドロキシル部分については：ＴＢＳ、ベンジル、ＴＨＰ、Ａｃ
カルボン酸については：ベンジルエステル、メチルエステル、エチルエステル、アリル
エステル
エステル
アミンについては：Ｃｂｚ、ＢＯＣ、ＤＭＢ
ジオールについては：Ａｃ（×２）ＴＢＳ（×２）、または一緒になった場合アセトニ
ド
ド
チオールについては：Ａｃ
ベンゾイミダゾールについては：ＳＥＭ、ベンジル、ＰＭＢ、ＤＭＢ
アルデヒドについては：ジメトキシアセタールまたはジエチルアセチルなどのジ−アル
キルアセタール
キルアセタール
明細書中で記載する反応スキームで、複数の立体異性体が生じる可能性がある。特定の
立体異性体が表示されていない場合、反応から生じ得るすべての可能な立体異性体を意味
すると理解される。当業者は、１つの異性体が優先的に得られるように最適化することが
できる、または単一の異性体を製造するための新規スキームを考案できることを当業者は
認めるであろう。混合物が生じる場合、分取薄層クロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣ、分
取キラルＨＰＬＣ、または分取ＳＦＣなどの技術を使用して異性体を分離することができ
る。
立体異性体が表示されていない場合、反応から生じ得るすべての可能な立体異性体を意味
すると理解される。当業者は、１つの異性体が優先的に得られるように最適化することが
できる、または単一の異性体を製造するための新規スキームを考案できることを当業者は
認めるであろう。混合物が生じる場合、分取薄層クロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣ、分
取キラルＨＰＬＣ、または分取ＳＦＣなどの技術を使用して異性体を分離することができ
る。
以下の略語を明細書全体にわたって使用し、以下のように定義される：
Ａｃ アセチル
ＡｃＯＨ 酢酸
ａｑ． 水性
ＢＩＤまたはｂ．ｉ．ｄ． ｂｉｓ ｉｎ ｄｉｅ（１日２回）
ＢＯＣ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｃｂｚ ベンジルオキシカルボニル
ＣＤＣｌ３ 重クロロホルム
ＣＨ２Ｃｌ２ ジクロロメタン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＢ ２，４ ジメトキシベンジル
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＡまたはＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥＤＣまたはＥＤＣＩ Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジ
イミド
イミド
ＥＳＩ− エレクトロスプレー 陰イオンモード
ＥＳＩ＋ エレクトロスプレー 陽イオンモード
ＥｔＯＨ エタノール
ｈ 時間
Ｈ２Ｏ 水
ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＣｌ 塩化水素または塩酸
ＨＰＬＣ 高性能液体クロマトグラフィー
Ｋ２ＣＯ３ 炭酸カリウム
ＬＣ／ＭＳまたはＬＣ−ＭＳ 液体クロマトグラフィー質量スペクトル
Ｍ モル濃度
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ｍｉｎ 分
Ｎａ２ＣＯ３ 炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４ 硫酸ナトリウム
ＮａＨＣＯ３ 重炭酸ナトリウム
ＮａＨＭＤｓ ナトリウムヘキサメチルジシラジド
ＮａＯＨ 水酸化ナトリウム
ＮａＨＣＯ３ 重炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４ 硫酸ナトリウム
ＮＭＲ 核磁気共鳴
Ｐｄ（ＯＨ）２ 二水酸化パラジウム
ＰＭＢ パラメトキシベンジル
ｐ．ｏ． ｐｅｒ ｏｓ （経口投与）
ｐｐｍ １００万分の１部
ｐｒｅｐ ＨＰＬＣ 分取高性能液体クロマトグラフィー
ＰＹＢＯＰ （ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘ
キサフルオロホスフェート
キサフルオロホスフェート
ＲｔまたはＲＴ 室温
ＴＢＭＥ ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＨＰ テトラヒドロピラン
本発明の化合物は、当業者に周知の様々な方法によって都合よく調製することができる
。本明細書中で開示される任意の式を有する本発明の化合物は、市販の出発物質または文
献の手順を用いて調製できる出発物質から、下記実施例に示した手順にしたがって調製で
きる。
。本明細書中で開示される任意の式を有する本発明の化合物は、市販の出発物質または文
献の手順を用いて調製できる出発物質から、下記実施例に示した手順にしたがって調製で
きる。
本明細書中で記載される反応シーケンスおよび合成スキームの間、あるステップの順序
、例えば保護基の導入および除去は変更できることに当業者は気づくであろう。
、例えば保護基の導入および除去は変更できることに当業者は気づくであろう。
本発明の化合物は、ＥＺＨ２またはその突然変異体のヒストンメチルトランスフェラー
ゼ活性を阻害し、したがって、本発明の１つの態様では、本明細書中で開示されるある化
合物は、ＥＺＨ２が関与するある状態および疾患を治療または予防する候補である。本発
明は、その過程がヒストンまたは他のタンパク質のメチル化状態を調節することによって
影響を受ける可能性がある状態および疾患を治療するための方法を提供する。ヒストンの
メチル化状態の調節は、今度はメチル化によって活性化される標的遺伝子、および／また
はメチル化によって抑制される標的遺伝子の発現レベルに影響を及ぼす可能性がある。そ
のような治療を必要とする対象に、治療有効量の本発明の化合物、またはその薬剤的に許
容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは立体異性体を投与することを含む。
ゼ活性を阻害し、したがって、本発明の１つの態様では、本明細書中で開示されるある化
合物は、ＥＺＨ２が関与するある状態および疾患を治療または予防する候補である。本発
明は、その過程がヒストンまたは他のタンパク質のメチル化状態を調節することによって
影響を受ける可能性がある状態および疾患を治療するための方法を提供する。ヒストンの
メチル化状態の調節は、今度はメチル化によって活性化される標的遺伝子、および／また
はメチル化によって抑制される標的遺伝子の発現レベルに影響を及ぼす可能性がある。そ
のような治療を必要とする対象に、治療有効量の本発明の化合物、またはその薬剤的に許
容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは立体異性体を投与することを含む。
特に指定のない限り、治療方法の任意の記載は、本明細書中で記載されるような治療ま
たは予防を提供するための化合物の使用、ならびにそのような状態を治療または予防する
ための薬剤を調製するための化合物の使用を包含する。治療は、ヒトまたはヒト以外の動
物、例えばげっ歯類および他の疾患モデルの治療を包含する。
たは予防を提供するための化合物の使用、ならびにそのような状態を治療または予防する
ための薬剤を調製するための化合物の使用を包含する。治療は、ヒトまたはヒト以外の動
物、例えばげっ歯類および他の疾患モデルの治療を包含する。
さらに別の態様では、本発明は、それを必要とする対象において、ヒストンＨ３上のリ
ジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のモノメチル化〜トリメチル化を触媒するＰＲＣ２複合体の触
媒サブユニットであるＥＺＨ２の活性を調節する方法に関する。例えば、方法は、変異Ｅ
ＺＨ２を発現するガンと有する対象に治療有効量の本明細書中で記載される化合物を投与
するステップを含み、ここで、化合物（複数可）は、ＥＺＨ２のヒストンメチルトランス
フェラーゼ活性を阻害し、それによってガンを治療する。
ジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のモノメチル化〜トリメチル化を触媒するＰＲＣ２複合体の触
媒サブユニットであるＥＺＨ２の活性を調節する方法に関する。例えば、方法は、変異Ｅ
ＺＨ２を発現するガンと有する対象に治療有効量の本明細書中で記載される化合物を投与
するステップを含み、ここで、化合物（複数可）は、ＥＺＨ２のヒストンメチルトランス
フェラーゼ活性を阻害し、それによってガンを治療する。
例えば、ＥＺＨ２介在性ガンは、濾胞性リンパ腫および胚芽中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）サ
ブタイプのびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群から選択される。
例えば、ガンはリンパ腫、白血病または黒色腫である。好ましくは、リンパ種は非ホジキ
ンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
あるいは、白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白
血病または混合系統白血病である。
ブタイプのびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群から選択される。
例えば、ガンはリンパ腫、白血病または黒色腫である。好ましくは、リンパ種は非ホジキ
ンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
あるいは、白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白
血病または混合系統白血病である。
例えば、ＥＺＨ２介在性前ガン状態は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は前白血病と呼
ばれていた）である。
ばれていた）である。
例えば、ＥＺＨ２介在性ガンは血液がんである。
本発明の化合物は、ＥＺＨ２またはその突然変異体のヒストンメチルトランスフェラー
ゼ活性を阻害し、したがって、本発明はまた、その過程がヒストンまたは他のタンパク質
のメチル化状態を調節することによって影響を受ける可能性がある状態および疾患を治療
するための方法も提供し、ここで、前記メチル化状態は少なくとも１つにはＥＺＨ２の活
性が介在する。本発明の１つの態様では、本明細書中で開示されるある化合物は、ある状
態および疾患を治療、または予防するための候補である。ヒストンのメチル化状態の調節
は、今度はメチル化によって活性化される標的遺伝子、および／またはメチル化によって
抑制される標的遺伝子の発現レベルに影響を及ぼす可能性がある。方法は、そのような治
療を必要とする対象に、治療有効量の本発明の化合物を投与することを含む。
ゼ活性を阻害し、したがって、本発明はまた、その過程がヒストンまたは他のタンパク質
のメチル化状態を調節することによって影響を受ける可能性がある状態および疾患を治療
するための方法も提供し、ここで、前記メチル化状態は少なくとも１つにはＥＺＨ２の活
性が介在する。本発明の１つの態様では、本明細書中で開示されるある化合物は、ある状
態および疾患を治療、または予防するための候補である。ヒストンのメチル化状態の調節
は、今度はメチル化によって活性化される標的遺伝子、および／またはメチル化によって
抑制される標的遺伝子の発現レベルに影響を及ぼす可能性がある。方法は、そのような治
療を必要とする対象に、治療有効量の本発明の化合物を投与することを含む。
本明細書中で用いられる場合、「対象」は「それを必要とする対象」と交換可能であり
、どちらもＥＺＨ２が介在するタンパク質メチル化が関与する障害にかかっている対象、
または集団全体に対してそのような障害を発症するリスクが増大している対象を指す。「
対象」は哺乳類を包含する。哺乳類は、例えばヒトまたは適切なヒト以外の哺乳類、例え
ば霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジまたはブタ
であり得る。対象は、鳥または家禽でもあり得る。１つの実施形態において、哺乳類はヒ
トである。それを必要とする対象は、ガンまたは前ガン状態を有すると依然に診断または
特定された対象であり得る。それを必要とする対象はまた、ガンまたは前ガン状態を有す
る（例えばかかっている）対象でもあり得る。別法として、それを必要とする対象は、集
団全体に対してそのような障害を発症するリスクが増大した対象（すなわち、集団全体に
対してそのような障害を発症する経口がある対象）であり得る。それを必要とする対象は
前ガン状態を有し得る。それを必要とする対象は、難治性または耐性ガン（すなわち、治
療に反応しない、またはまだ治療に反応していないガン）を有し得る。対象は、治療開始
時に耐性であり得るか、または治療中に耐性になり得る。いくつかの実施形態では、それ
を必要とする対象は、ほとんどの最近の治療で寛解後にガンを再発している。いくつかの
実施形態では、それを必要とする対象は、がん治療のあらゆる公知の有効な治療を受け、
失敗した。いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は少なくとも１つの前治療を
受けた。好ましい実施形態では、対象はガンまたはガン性状態を有する。例えば、ガンは
、リンパ腫、白血病、黒色腫、または横紋筋肉腫である。好ましくは、リンパ腫は、非ホ
ジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。あるい
は、白血病は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。前ガン状態は、骨髄異形成症候群（Ｍ
ＤＳ、以前は前白血病と呼ばれていた）である。
、どちらもＥＺＨ２が介在するタンパク質メチル化が関与する障害にかかっている対象、
または集団全体に対してそのような障害を発症するリスクが増大している対象を指す。「
対象」は哺乳類を包含する。哺乳類は、例えばヒトまたは適切なヒト以外の哺乳類、例え
ば霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジまたはブタ
であり得る。対象は、鳥または家禽でもあり得る。１つの実施形態において、哺乳類はヒ
トである。それを必要とする対象は、ガンまたは前ガン状態を有すると依然に診断または
特定された対象であり得る。それを必要とする対象はまた、ガンまたは前ガン状態を有す
る（例えばかかっている）対象でもあり得る。別法として、それを必要とする対象は、集
団全体に対してそのような障害を発症するリスクが増大した対象（すなわち、集団全体に
対してそのような障害を発症する経口がある対象）であり得る。それを必要とする対象は
前ガン状態を有し得る。それを必要とする対象は、難治性または耐性ガン（すなわち、治
療に反応しない、またはまだ治療に反応していないガン）を有し得る。対象は、治療開始
時に耐性であり得るか、または治療中に耐性になり得る。いくつかの実施形態では、それ
を必要とする対象は、ほとんどの最近の治療で寛解後にガンを再発している。いくつかの
実施形態では、それを必要とする対象は、がん治療のあらゆる公知の有効な治療を受け、
失敗した。いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は少なくとも１つの前治療を
受けた。好ましい実施形態では、対象はガンまたはガン性状態を有する。例えば、ガンは
、リンパ腫、白血病、黒色腫、または横紋筋肉腫である。好ましくは、リンパ腫は、非ホ
ジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。あるい
は、白血病は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。前ガン状態は、骨髄異形成症候群（Ｍ
ＤＳ、以前は前白血病と呼ばれていた）である。
本明細書中で用いられる場合、「治療する（treatingまたはtreat）」は、疾患、状態
、または障害と闘うための患者の管理および看護を表し、本発明の化合物、またはその薬
剤的に許容される塩、多形体もしくは溶媒和物を投与して、疾患、状態または障害の症状
または合併症を軽減する、あるいは疾患、状態または障害を除去することを含む。「治療
する」という語はまた、インビトロの細胞または動物モデルの処置も包含し得る。
、または障害と闘うための患者の管理および看護を表し、本発明の化合物、またはその薬
剤的に許容される塩、多形体もしくは溶媒和物を投与して、疾患、状態または障害の症状
または合併症を軽減する、あるいは疾患、状態または障害を除去することを含む。「治療
する」という語はまた、インビトロの細胞または動物モデルの処置も包含し得る。
本発明の化合物、またはその薬剤的に許容される塩、多形体もしくは溶媒和物は、関連
する疾患、状態または障害を予防するため、あるいはそのような目的のための好適な候補
を特定するために使用することもできる。本明細書中で用いられる場合、「予防する（pr
eventing、prevent）」または「〜から保護する」は、そのような疾患、状態または障害
の症状または合併症の開始を減少または除去することを記載する。
する疾患、状態または障害を予防するため、あるいはそのような目的のための好適な候補
を特定するために使用することもできる。本明細書中で用いられる場合、「予防する（pr
eventing、prevent）」または「〜から保護する」は、そのような疾患、状態または障害
の症状または合併症の開始を減少または除去することを記載する。
ＥＺＨ２の単一アミノ酸残基（たとえば、Ｙ６４１、Ａ６７７、およびＡ６８７）での
ＥＺＨ２遺伝子の点突然変異はリンパ腫と関連づけられることが報告されている。ＥＺＨ
２突然変異体および突然変異の検出方法および突然変異関連障害の治療方法のさらなる例
は、例えば、その全体が参照により全体として本明細書中に組み込まれる米国特許出願公
開第ＵＳ２０１３００４０９０６号で記載されている。
ＥＺＨ２遺伝子の点突然変異はリンパ腫と関連づけられることが報告されている。ＥＺＨ
２突然変異体および突然変異の検出方法および突然変異関連障害の治療方法のさらなる例
は、例えば、その全体が参照により全体として本明細書中に組み込まれる米国特許出願公
開第ＵＳ２０１３００４０９０６号で記載されている。
当業者は、本明細書中で開示される公知技術または同等の技術の詳細な説明に関して一
般的な参考書を参照できる。これらの教科書には、Ausubel et al., Current Protoc
ols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook
et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spr
ing Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al.
, Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et
al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl
et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's
Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition
(1990)が含まれる。これらの文書も、もちろん本発明の態様の作製または使用において
参照することができる。
般的な参考書を参照できる。これらの教科書には、Ausubel et al., Current Protoc
ols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook
et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spr
ing Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al.
, Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et
al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl
et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's
Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition
(1990)が含まれる。これらの文書も、もちろん本発明の態様の作製または使用において
参照することができる。
本明細書中で用いられる場合、「併用療法」または「同地治療」は、本発明の化合物、
またはその薬剤的に許容される塩、多形体もしくは溶媒和物、ならびにこれらの治療薬の
相互作用から有益な効果を提供することを意図される特定の治療計画の一部として少なく
とも第２の薬剤の投与を含む。組み合わせの有益な効果としては、限定されるものではな
いが、治療薬の組み合わせに起因する薬物動態または薬力学的相互作用があげられる。
またはその薬剤的に許容される塩、多形体もしくは溶媒和物、ならびにこれらの治療薬の
相互作用から有益な効果を提供することを意図される特定の治療計画の一部として少なく
とも第２の薬剤の投与を含む。組み合わせの有益な効果としては、限定されるものではな
いが、治療薬の組み合わせに起因する薬物動態または薬力学的相互作用があげられる。
本発明はまた、少なくとも１つの薬剤的に許容される賦形剤または担体と組み合わされ
た本明細書中で開示される化合物を含む医薬組成物も提供する。
「医薬組成物」は、対象への投与に適した形態の本発明の化合物を含む配合物である。１
つの実施形態において、医薬組成物はバルクで、または単位投与形態である。単位投与形
態は、例えば、カプセル、ＩＶバッグ、錠剤、エアゾル吸入具上の単一ポンプ（single
pump）またはバイアルをはじめとする様々な形態のいずれかである。単位用量の組成物中
の活性成分（たとえば、開示された化合物またはその塩、水和物、溶媒和物もしくは異性
体の処方）の量は有効量であり、関連する特定の治療によって変わる。患者の年齢および
状態に応じて投薬量に所定の変動を加える必要がある場合があることを当業者は理解する
であろう。投薬量はまた、投与経路にも依存する。経口、肺、直腸、非経口、経皮、皮下
、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、口腔、舌下、胸膜内、くも膜下腔内、鼻腔内などをは
じめとする様々な経路が想定される。本発明の化合物の局所または経皮投与用の投与形態
としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、貼付
剤および吸入剤が挙げられる。１つの実施形態では、活性化合物を無菌条件下で薬剤的に
許容される担体、必要とされる任意の防腐剤、緩衝液、またはプロペラントと混合する。
た本明細書中で開示される化合物を含む医薬組成物も提供する。
「医薬組成物」は、対象への投与に適した形態の本発明の化合物を含む配合物である。１
つの実施形態において、医薬組成物はバルクで、または単位投与形態である。単位投与形
態は、例えば、カプセル、ＩＶバッグ、錠剤、エアゾル吸入具上の単一ポンプ（single
pump）またはバイアルをはじめとする様々な形態のいずれかである。単位用量の組成物中
の活性成分（たとえば、開示された化合物またはその塩、水和物、溶媒和物もしくは異性
体の処方）の量は有効量であり、関連する特定の治療によって変わる。患者の年齢および
状態に応じて投薬量に所定の変動を加える必要がある場合があることを当業者は理解する
であろう。投薬量はまた、投与経路にも依存する。経口、肺、直腸、非経口、経皮、皮下
、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、口腔、舌下、胸膜内、くも膜下腔内、鼻腔内などをは
じめとする様々な経路が想定される。本発明の化合物の局所または経皮投与用の投与形態
としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、貼付
剤および吸入剤が挙げられる。１つの実施形態では、活性化合物を無菌条件下で薬剤的に
許容される担体、必要とされる任意の防腐剤、緩衝液、またはプロペラントと混合する。
本明細書中で用いられる場合、「薬剤的に許容される」という表現は、健全な医学的判
断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症
がなくヒトよび動物の組織と接触した使用に好適であり、妥当な損益比で釣り合う化合物
、アニオン、カチオン、材料、組成物、担体、および／または投与形態を指す。
断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症
がなくヒトよび動物の組織と接触した使用に好適であり、妥当な損益比で釣り合う化合物
、アニオン、カチオン、材料、組成物、担体、および／または投与形態を指す。
「薬剤的に許容される賦形剤」とは、一般的に安全、非毒性で、生物学的にも、またそ
の他でも望ましくないものではない賦形剤を意味し、獣医学的用途ならびにヒト製薬学的
用途について許容される賦形剤を包含する。明細書および特許請求のっ範囲で使用される
「薬剤的に許容される賦形剤」は、１以上のそのような賦形剤を包含する。
の他でも望ましくないものではない賦形剤を意味し、獣医学的用途ならびにヒト製薬学的
用途について許容される賦形剤を包含する。明細書および特許請求のっ範囲で使用される
「薬剤的に許容される賦形剤」は、１以上のそのような賦形剤を包含する。
本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように処方される。投与経
路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（局所
）、および経粘膜投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下用に使用される溶液また
は懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、固定油
、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗
菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン
酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸；緩衝
液、例えばアセテート、市トレートまたはホスフェート、ならびに塩化ナトリウムまたは
デキストロースなどの等張性調節剤。ｐＨは酸または塩基、例えば塩酸または水酸化ナト
リウムで調節することができる。非経口製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル
、使い捨て注射器または複数回投与用バイアル中に封入することができる。
路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（局所
）、および経粘膜投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下用に使用される溶液また
は懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、固定油
、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗
菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン
酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸；緩衝
液、例えばアセテート、市トレートまたはホスフェート、ならびに塩化ナトリウムまたは
デキストロースなどの等張性調節剤。ｐＨは酸または塩基、例えば塩酸または水酸化ナト
リウムで調節することができる。非経口製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル
、使い捨て注射器または複数回投与用バイアル中に封入することができる。
本発明の化合物または医薬組成物を、化学療法のために現在使用される周知の方法の多
くで対象に投与することができる。例えば、ガンの治療に関しては、本発明の化合物を腫
瘍に直接注入、血流もしくは体腔中に注入または経口接種または貼付剤で皮膚を通して適
用することができる。選択される用量は、有効な治療をもたらすために充分でなければな
らないが、許容されない副作用を引き起こすほど高くてはならない。疾患状態（例えば、
ガン、前ガン状態、およびその他）ならびに患者の健康は、治療中または治療後妥当な期
間、注意深くモニタリングしなければならない。
くで対象に投与することができる。例えば、ガンの治療に関しては、本発明の化合物を腫
瘍に直接注入、血流もしくは体腔中に注入または経口接種または貼付剤で皮膚を通して適
用することができる。選択される用量は、有効な治療をもたらすために充分でなければな
らないが、許容されない副作用を引き起こすほど高くてはならない。疾患状態（例えば、
ガン、前ガン状態、およびその他）ならびに患者の健康は、治療中または治療後妥当な期
間、注意深くモニタリングしなければならない。
「治療有効量」という語は、本明細書中で用いられる場合、特定された疾患もしくは状
態を治療、改善、または予防する、あるいは検出可能な治療効果または阻害効果を示す医
薬品の量を指す。効果は、当該技術分野で公知の任意のアッセイ法によって検出できる。
対象に関する正確な有効量は、対象の体重、サイズ、および健康；状態の性質および程度
；ならびに投与のために選択された治療または治療の組み合わせに左右される。所与の状
況に関する治療有効量は、臨床医の技術および判断の範囲内である日常的な実験によって
決定することができる。好ましい態様において、治療される疾患または状態はガンである
。別の態様では、治療される疾患または状態は細胞増殖性障害である。
態を治療、改善、または予防する、あるいは検出可能な治療効果または阻害効果を示す医
薬品の量を指す。効果は、当該技術分野で公知の任意のアッセイ法によって検出できる。
対象に関する正確な有効量は、対象の体重、サイズ、および健康；状態の性質および程度
；ならびに投与のために選択された治療または治療の組み合わせに左右される。所与の状
況に関する治療有効量は、臨床医の技術および判断の範囲内である日常的な実験によって
決定することができる。好ましい態様において、治療される疾患または状態はガンである
。別の態様では、治療される疾患または状態は細胞増殖性障害である。
任意の化合物について、治療有効量は、例えば新生細胞の細胞培養において、または動
物モデル、通常はラット、ウサギ、イヌ、もしくはブタにおいてのいずれかでまず推定す
ることができる。動物モデルは、適切な濃度範囲および投与経路を決定するためにも使用
できる。そのような情報は次いでヒトにおける投与のために有用な用量および経路を決定
するために使用できる。治療／予防効果および毒性、例えばＥＤ５０（集団の５０％で治
療上有効な用量）およびＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）は、細胞培養ま
たは実験動物における標準的な調剤手順によって決定することができる。毒性効果と治療
効果との用量比は治療指数であり、これは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる
。大きな治療指数を示す医薬組成物が好ましい。投薬量は、用いられる投与形態、患者の
感受性、および投与経路に応じて個の範囲内で変動し得る。
物モデル、通常はラット、ウサギ、イヌ、もしくはブタにおいてのいずれかでまず推定す
ることができる。動物モデルは、適切な濃度範囲および投与経路を決定するためにも使用
できる。そのような情報は次いでヒトにおける投与のために有用な用量および経路を決定
するために使用できる。治療／予防効果および毒性、例えばＥＤ５０（集団の５０％で治
療上有効な用量）およびＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）は、細胞培養ま
たは実験動物における標準的な調剤手順によって決定することができる。毒性効果と治療
効果との用量比は治療指数であり、これは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる
。大きな治療指数を示す医薬組成物が好ましい。投薬量は、用いられる投与形態、患者の
感受性、および投与経路に応じて個の範囲内で変動し得る。
充分なレベルの活性剤（複数可）を提供するため、または所望の効果を維持するために
、投薬量および投与を調節する。考慮され得る因子としては、疾患状態の重篤度、対照の
全体的健康状態、対照の年齢、体重、および性別、食事、投与時間および頻度、薬物の組
み合わせ、反応感受性、ならびに治療に対する寛容性／応答が挙げられる。長時間作用型
医薬組成物は、特定の処方の半減期およびクリアランス率に応じて、３〜４日ごと、毎週
、または２週間ごとに１回投与することができる。
、投薬量および投与を調節する。考慮され得る因子としては、疾患状態の重篤度、対照の
全体的健康状態、対照の年齢、体重、および性別、食事、投与時間および頻度、薬物の組
み合わせ、反応感受性、ならびに治療に対する寛容性／応答が挙げられる。長時間作用型
医薬組成物は、特定の処方の半減期およびクリアランス率に応じて、３〜４日ごと、毎週
、または２週間ごとに１回投与することができる。
本発明の活性化合物を含む医薬組成物は、一般的に公知の方法で、例えば通常の混合、
溶解、造粒、糖衣錠作製、ゲル化（levigating）、乳化、カプセル化、捕捉、または凍結
乾燥法によって製造することができる。医薬組成物は、活性化合物を薬剤敵意使用できる
製剤に加工するのを促進する賦形剤および／または補助薬を含む１以上の薬剤的に許容さ
れる担体を使用する通常の方法で処方することができる。もちろん、適切な処方は、選択
された投与経路に左右される。
溶解、造粒、糖衣錠作製、ゲル化（levigating）、乳化、カプセル化、捕捉、または凍結
乾燥法によって製造することができる。医薬組成物は、活性化合物を薬剤敵意使用できる
製剤に加工するのを促進する賦形剤および／または補助薬を含む１以上の薬剤的に許容さ
れる担体を使用する通常の方法で処方することができる。もちろん、適切な処方は、選択
された投与経路に左右される。
注射用途に好適な医薬組成物は、無菌注射溶液もしくは分散液の即時調製のための無菌
水溶液（水溶性の場合）または分散液および無菌粉末を含む。静脈内投与に関して、好適
な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、
ニュージャージー州パーシッパニー）またはリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる
。全ての場合において、組成物は無菌でなければならず、容易に注射針に通過する程度ま
で流動性でなければならない。それは、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、
細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例
えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、お
よび液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの好適な混合物を含む溶媒また
は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分
散液の場合は必要とされる粒子サイズの維持、そして界面活性剤の使用により維持するこ
とができる。微生物の作用の予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、
アスコルビン酸、チメロサールなどの様々な抗菌剤および抗真菌剤によって達成できる。
多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、マンニトールおよびソルビトールなどのポリ
アルコール、ならびに塩化ナトリウムを含むのが好ましい。注射可能な組成物の持続的吸
収は、組成物中に、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼ
ラチンを含めることによってもたらすことができる。
水溶液（水溶性の場合）または分散液および無菌粉末を含む。静脈内投与に関して、好適
な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、
ニュージャージー州パーシッパニー）またはリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる
。全ての場合において、組成物は無菌でなければならず、容易に注射針に通過する程度ま
で流動性でなければならない。それは、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、
細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例
えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、お
よび液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの好適な混合物を含む溶媒また
は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分
散液の場合は必要とされる粒子サイズの維持、そして界面活性剤の使用により維持するこ
とができる。微生物の作用の予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、
アスコルビン酸、チメロサールなどの様々な抗菌剤および抗真菌剤によって達成できる。
多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、マンニトールおよびソルビトールなどのポリ
アルコール、ならびに塩化ナトリウムを含むのが好ましい。注射可能な組成物の持続的吸
収は、組成物中に、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼ
ラチンを含めることによってもたらすことができる。
無菌注射溶液は、活性化合物を必要とされる柳雄で適切な溶媒中、上述の成分の１つま
たはっ組み合わせとともに組み入れ、続いて濾過滅菌することによって調製できる。概し
て、分散液は、塩基性分散媒および上述のものからの必要とされる他の成分を含む無菌ビ
ヒクル中に活性化合物を組み入れることによって調製される。無菌注射溶液の調製のため
の無菌粉末の場合、調製法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これによって活性成分の
粉末と、あらかじめ滅菌濾過されたその溶液からの任意のさらなる所望の成分が得られる
。
たはっ組み合わせとともに組み入れ、続いて濾過滅菌することによって調製できる。概し
て、分散液は、塩基性分散媒および上述のものからの必要とされる他の成分を含む無菌ビ
ヒクル中に活性化合物を組み入れることによって調製される。無菌注射溶液の調製のため
の無菌粉末の場合、調製法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これによって活性成分の
粉末と、あらかじめ滅菌濾過されたその溶液からの任意のさらなる所望の成分が得られる
。
経口組成物は概して不活性希釈剤または可食性の薬剤的に許容される担体を含む。それ
らはゼラチンカプセル中に封入することができるか、または圧縮して錠剤にすることがで
きる。経口治療投与のために、活性化合物を賦形剤とともに組み入れることができ、錠剤
、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口剤とし
て使用される流体担体を使用して調製することもでき、この場合、流体担体中の化合物を
経口適用し、くちゅくちゅし、吐き出すかまたは飲み込む。薬剤的に適合性の結合剤、お
よび／またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、ピル、
カプセル、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または類似の性質の化合物を含み得
る：バインダー、例えば微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチン；賦形剤
、例えばデンプンもしくはラクトース、崩壊剤、例えばアルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、
もしくはコーンスターチ；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔ
ｅｓ；流動促進剤、例えばコロイド状二酸化珪素；甘味剤、例えばスクロースもしくはサ
ッカリン；または香味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジフ
レーバー。
らはゼラチンカプセル中に封入することができるか、または圧縮して錠剤にすることがで
きる。経口治療投与のために、活性化合物を賦形剤とともに組み入れることができ、錠剤
、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口剤とし
て使用される流体担体を使用して調製することもでき、この場合、流体担体中の化合物を
経口適用し、くちゅくちゅし、吐き出すかまたは飲み込む。薬剤的に適合性の結合剤、お
よび／またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、ピル、
カプセル、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または類似の性質の化合物を含み得
る：バインダー、例えば微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチン；賦形剤
、例えばデンプンもしくはラクトース、崩壊剤、例えばアルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、
もしくはコーンスターチ；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔ
ｅｓ；流動促進剤、例えばコロイド状二酸化珪素；甘味剤、例えばスクロースもしくはサ
ッカリン；または香味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジフ
レーバー。
吸入による投与のために、化合物は、好適なプロペラント、例えば二酸化炭素などのガ
スを含む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからのエアゾルスプレー
の形態で送達される。
スを含む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからのエアゾルスプレー
の形態で送達される。
全身投与は、経粘膜または経皮手段によるものでもあり得る。経粘膜または経皮投与に
関しては、透過されるバリヤに適切な浸透剤を処方で使用する。そのような浸透剤は、概
して当該技術分野で公知であり、例えば経粘膜投与については、洗剤、胆汁塩、およびフ
シジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用により達成す
ることができる。経皮投与のために、活性化合物は、当該技術分野で一般的に公知の軟膏
、軟膏（salve）、ゲル、またはクリームに処方される。
関しては、透過されるバリヤに適切な浸透剤を処方で使用する。そのような浸透剤は、概
して当該技術分野で公知であり、例えば経粘膜投与については、洗剤、胆汁塩、およびフ
シジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用により達成す
ることができる。経皮投与のために、活性化合物は、当該技術分野で一般的に公知の軟膏
、軟膏（salve）、ゲル、またはクリームに処方される。
活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムをはじめとする制
御放出処方などの、身体からの迅速排除から化合物を保護する薬剤的に許容される担体を
用いて、活性化合物を調製できる。生分解性、生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸
ビニル、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およ
びポリ乳酸を使用できる。そのような処方の調製のための方法は、当業者には明らかであ
る。材料は、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイル
ス抗原に対するモノクローナル抗体で感染した細胞を標的とするリポソームを含む）は、
薬剤的に許容される担体として使用することもできる。これらは、当業者に公知の方法、
例えば、米国特許第４，５２２，８１１号で記載されているようにして調製することがで
いる。
御放出処方などの、身体からの迅速排除から化合物を保護する薬剤的に許容される担体を
用いて、活性化合物を調製できる。生分解性、生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸
ビニル、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およ
びポリ乳酸を使用できる。そのような処方の調製のための方法は、当業者には明らかであ
る。材料は、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイル
ス抗原に対するモノクローナル抗体で感染した細胞を標的とするリポソームを含む）は、
薬剤的に許容される担体として使用することもできる。これらは、当業者に公知の方法、
例えば、米国特許第４，５２２，８１１号で記載されているようにして調製することがで
いる。
投与の容易性および投薬量の均一性のために、単位投与形態の経口または非経口組成物
に処方することが特に有利である。本明細書中で用いられる場合、単位投与形態は、治療
される対象に単位投薬量として適した物理的に独立した単位を指す；各単位は、必要とさ
れｒ鵜医薬担体と組み合わせて所望の治療効果をもたらすように計算されたあらかじめ決
められた量の活性化合物を含む。本発明の単位投与形態についての明細は、活性化合物の
独自の特性および達成される特定の治療効果によるか、または直接依存して決定される。
に処方することが特に有利である。本明細書中で用いられる場合、単位投与形態は、治療
される対象に単位投薬量として適した物理的に独立した単位を指す；各単位は、必要とさ
れｒ鵜医薬担体と組み合わせて所望の治療効果をもたらすように計算されたあらかじめ決
められた量の活性化合物を含む。本発明の単位投与形態についての明細は、活性化合物の
独自の特性および達成される特定の治療効果によるか、または直接依存して決定される。
治療への応用で、本発明にしたがって使用される医薬組成物の投薬量は、選択された投
薬量に影響を及ぼす他の因子の中でも、薬剤、受容患者の年齢、体重、および臨床症状、
ならびに治療を施す臨床医または開業医の経験および判断によって変わる。概して、用量
は、腫瘍成長の遅延、およびこのましくは退行をもたらし、そしてまた好ましくはガンの
完全縮小を引き起こすのに充分でなければならない。投薬量は、１日あたり約０．０１ｍ
ｇ／ｋｇから１日あたり約５０００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。好ましい態様において
、投薬量は１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから１日あたり約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であり
得る。１つの態様では、用量は、単回、分割、または持続投与量で、約０．１ｍｇ／日〜
約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１０ｇ／日；約
０．１ｍｇ〜約３ｇ／日；または約０．１ｍｇ〜約１ｇ／日の範囲内である（この用量は
、患者の体重（ｋｇ）、体表面積（ｍ２）、および年齢（歳）について調節することがで
きる）。医薬品の有効量は、臨床医または他の資格のある観察者によって指摘される客観
的に確認可能な改善を提供するものである。例えば、患者における腫瘍の退縮は、腫瘍の
直径に関連して測定することができる。腫瘍の直径の減少は退縮を意味する。退縮は、治
療をやめた後に腫瘍が再発しないことによっても示される。本明細書中で用いられる場合
、「効果的な投薬量（dosage effective manner）」とは、対象または細胞において所
望の生物学的効果をもたらす活性化合物の量を指す。
薬量に影響を及ぼす他の因子の中でも、薬剤、受容患者の年齢、体重、および臨床症状、
ならびに治療を施す臨床医または開業医の経験および判断によって変わる。概して、用量
は、腫瘍成長の遅延、およびこのましくは退行をもたらし、そしてまた好ましくはガンの
完全縮小を引き起こすのに充分でなければならない。投薬量は、１日あたり約０．０１ｍ
ｇ／ｋｇから１日あたり約５０００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。好ましい態様において
、投薬量は１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから１日あたり約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であり
得る。１つの態様では、用量は、単回、分割、または持続投与量で、約０．１ｍｇ／日〜
約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１０ｇ／日；約
０．１ｍｇ〜約３ｇ／日；または約０．１ｍｇ〜約１ｇ／日の範囲内である（この用量は
、患者の体重（ｋｇ）、体表面積（ｍ２）、および年齢（歳）について調節することがで
きる）。医薬品の有効量は、臨床医または他の資格のある観察者によって指摘される客観
的に確認可能な改善を提供するものである。例えば、患者における腫瘍の退縮は、腫瘍の
直径に関連して測定することができる。腫瘍の直径の減少は退縮を意味する。退縮は、治
療をやめた後に腫瘍が再発しないことによっても示される。本明細書中で用いられる場合
、「効果的な投薬量（dosage effective manner）」とは、対象または細胞において所
望の生物学的効果をもたらす活性化合物の量を指す。
医薬組成物を容器、パック、またはディスペンサー中に投与のための使用説明書ととも
に含めることができる。
に含めることができる。
本発明の化合物はさらに塩を形成する可能性がある。これらの形態のいずれも請求され
る発明の範囲内に含まれることが想定される。
る発明の範囲内に含まれることが想定される。
本明細書中で用いられる場合、「薬剤的に許容される塩」は、親化合物がその酸または
塩基塩を作製することによって修飾される本発明の化合物の誘導体を指す。薬剤的に許容
される塩の例としては、限定されるものではないが、アミン、アルカリなどの塩基性残基
の鉱酸もしくは有機酸塩またはカルボン酸などの酸性残基の有機塩などが挙げられる。薬
剤的に許容される塩としては、例えば非毒性無機または有機酸から形成される親化合物の
通常の非毒性塩または第４アンモニウム塩が挙げられる。例えば、そのような通常の非毒
性塩としては、限定されるものではないが、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエ
タンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸
、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、１，２−エタンスルホン酸、フマル酸、グ
ルコへプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコール酸、グリコリル
アルサニル酸（glycollyarsanilic）、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバミン酸、臭化水
素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イソチオン
酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、
メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸
、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル（salicyclic）酸、ステアリン
酸、スバセチン酸、コハク酸、スルファミン酸、スルファニリン酸、硫酸、タンニン酸、
酒石酸、トルエンスルホン酸、および一般的に存在するアミン酸、例えばグリシン、アラ
ニン、フェニルアラニン、アルギニンなどから選択される無機および有機酸由来のものが
挙げられる。
塩基塩を作製することによって修飾される本発明の化合物の誘導体を指す。薬剤的に許容
される塩の例としては、限定されるものではないが、アミン、アルカリなどの塩基性残基
の鉱酸もしくは有機酸塩またはカルボン酸などの酸性残基の有機塩などが挙げられる。薬
剤的に許容される塩としては、例えば非毒性無機または有機酸から形成される親化合物の
通常の非毒性塩または第４アンモニウム塩が挙げられる。例えば、そのような通常の非毒
性塩としては、限定されるものではないが、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエ
タンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸
、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、１，２−エタンスルホン酸、フマル酸、グ
ルコへプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコール酸、グリコリル
アルサニル酸（glycollyarsanilic）、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバミン酸、臭化水
素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イソチオン
酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、
メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸
、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル（salicyclic）酸、ステアリン
酸、スバセチン酸、コハク酸、スルファミン酸、スルファニリン酸、硫酸、タンニン酸、
酒石酸、トルエンスルホン酸、および一般的に存在するアミン酸、例えばグリシン、アラ
ニン、フェニルアラニン、アルギニンなどから選択される無機および有機酸由来のものが
挙げられる。
薬剤的に許容される他の例としては、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ピル
ビン酸、マロン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、４−クロロベ
ンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファース
ルホン酸、４−メチルビシクロ−［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、
３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３ブチル酢酸、ムコ酸などが挙げられる
。本発明はまた、親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えばアルカリ金
属イオン、アルカリ土類金属、またはアルミニウムイオンによって置換されている場合に
形成される塩；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、
トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基との配位体を包含する。塩形態にお
いて、化合物と塩のカチオンまたはアニオンとの比は、１：１、または１：１以外の任意
の他の比、例えば３：１、２：１、１：２、または１：３であり得ると理解される。
ビン酸、マロン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、４−クロロベ
ンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファース
ルホン酸、４−メチルビシクロ−［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、
３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３ブチル酢酸、ムコ酸などが挙げられる
。本発明はまた、親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えばアルカリ金
属イオン、アルカリ土類金属、またはアルミニウムイオンによって置換されている場合に
形成される塩；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、
トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基との配位体を包含する。塩形態にお
いて、化合物と塩のカチオンまたはアニオンとの比は、１：１、または１：１以外の任意
の他の比、例えば３：１、２：１、１：２、または１：３であり得ると理解される。
薬剤的に許容される塩に関するすべての言及は、同じ塩の本明細書中で定義されるよう
な溶媒付加形態（溶媒和物）または結晶形態（多形体）を包含すると理解されるべきであ
る。
な溶媒付加形態（溶媒和物）または結晶形態（多形体）を包含すると理解されるべきであ
る。
化合物、またはその薬的に許容される塩は、経口、経鼻、経皮、肺、吸入、口腔、舌下
、腹腔内（intraperintoneally）、皮下、筋肉内、静脈内、直腸、胸膜内、くも膜下腔内
および非経口投与される。１つの実施形態では、化合物を経口投与する。当業者はある投
与経路の利点を認めるであろう。
、腹腔内（intraperintoneally）、皮下、筋肉内、静脈内、直腸、胸膜内、くも膜下腔内
および非経口投与される。１つの実施形態では、化合物を経口投与する。当業者はある投
与経路の利点を認めるであろう。
化合物を利用する投薬計画は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および医学的状態
；治療される状態の重篤度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；および用いられる特
定の化合物またはその塩をはじめとする様々な因子にしたがって選択される。通常の技術
を有する医師または獣医師は状態を予防、対抗または進行を阻止するために必要な薬物の
有効量を容易に決定し、処方することができる。
；治療される状態の重篤度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；および用いられる特
定の化合物またはその塩をはじめとする様々な因子にしたがって選択される。通常の技術
を有する医師または獣医師は状態を予防、対抗または進行を阻止するために必要な薬物の
有効量を容易に決定し、処方することができる。
開示された本発明の化合物の処方および投与のための技術は、Remington: the Scien
ce and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton
, PA (1995)で見出すことができる。１つの実施形態において、本明細書中で記載され
る化合物、およびその薬剤的に許容される塩を、薬剤的に許容される担体または希釈剤と
組み合わせた製剤で使用する。好適な薬剤的に許容される担体には、不活性固体フィラー
または希釈剤および水溶液または有機溶液が含まれる。化合物は、そのような組成物中、
本明細書中で記載される範囲内の所望の投与量を提供するために充分な量で存在する。
ce and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton
, PA (1995)で見出すことができる。１つの実施形態において、本明細書中で記載され
る化合物、およびその薬剤的に許容される塩を、薬剤的に許容される担体または希釈剤と
組み合わせた製剤で使用する。好適な薬剤的に許容される担体には、不活性固体フィラー
または希釈剤および水溶液または有機溶液が含まれる。化合物は、そのような組成物中、
本明細書中で記載される範囲内の所望の投与量を提供するために充分な量で存在する。
本明細書中で用いられるすべてのパーセンテージおよび比は、別段の指示がない限り、
重量基準である。本発明の他の特徴および利点は、様々な実施例から明らかである。提供
した実施例は、本発明の実施に有用な様々な成分および方法を示す。実施例は請求される
発明を限定しない。本開示に基づいて、当業者は、本発明の実施に有用な他の成分および
方法を特定でき、利用できる。
重量基準である。本発明の他の特徴および利点は、様々な実施例から明らかである。提供
した実施例は、本発明の実施に有用な様々な成分および方法を示す。実施例は請求される
発明を限定しない。本開示に基づいて、当業者は、本発明の実施に有用な他の成分および
方法を特定でき、利用できる。
本明細書中で記載される合成スキームおよび化学構造において、化合物は、簡単にする
ために１つの特定の立体配置（例えば１つの特定の立体異性体を表示または非表示）で描
くことができる。そのような特定の立体配置は、本発明を１つまたは別の異性体、互変異
性体、位置異性体または立体異性体に限定すると解釈されるべきではなく、また異性体、
互変異性体、位置異性体または立体異性体を排除するものでもない；しかしながら、所与
の異性体、互変異性体、位置異性体または立体異性体は、別の異性体、互変異性体、位置
異性体、または立体異性体よりも高い活性レベルを有し得ると理解される。
ために１つの特定の立体配置（例えば１つの特定の立体異性体を表示または非表示）で描
くことができる。そのような特定の立体配置は、本発明を１つまたは別の異性体、互変異
性体、位置異性体または立体異性体に限定すると解釈されるべきではなく、また異性体、
互変異性体、位置異性体または立体異性体を排除するものでもない；しかしながら、所与
の異性体、互変異性体、位置異性体または立体異性体は、別の異性体、互変異性体、位置
異性体、または立体異性体よりも高い活性レベルを有し得ると理解される。
上述の方法によって設計、選択および／または最適化された化合物は、一旦製造される
と、化合物が生物学的活性を有するかどうかを判定する当業者に公知の様々なアッセイを
使用して特徴づけることができる。例えば、分子は、限定されるものではないが、それら
が予想される活性、結合活性、および／または結合特異性を有するかどうかを判定するた
めの後述するアッセイをはじめとする通常のアッセイによって特徴づけることができる。
と、化合物が生物学的活性を有するかどうかを判定する当業者に公知の様々なアッセイを
使用して特徴づけることができる。例えば、分子は、限定されるものではないが、それら
が予想される活性、結合活性、および／または結合特異性を有するかどうかを判定するた
めの後述するアッセイをはじめとする通常のアッセイによって特徴づけることができる。
さらに、ハイスループットスクリーニングを使用して、そのようなアッセイを用いる分
析を迅速化することができる。 その結果、本明細書中に記載される分子を活性について
、当該技術分野で公知の技術を用いて迅速にスクリーニングすることが可能であり得る。
ハイスループットスクリーニングを実施するための一般的方法は、例えば、Devlin (1
998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; and U.S. Patent No. 5,7
63,263；および米国特許第５，７６３，２６３号で記載されている。 ハイスループット
アッセイは、限定されるものではないが、後述するものをはじめとする１以上の異なるア
ッセイ技術を使用できる。
析を迅速化することができる。 その結果、本明細書中に記載される分子を活性について
、当該技術分野で公知の技術を用いて迅速にスクリーニングすることが可能であり得る。
ハイスループットスクリーニングを実施するための一般的方法は、例えば、Devlin (1
998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; and U.S. Patent No. 5,7
63,263；および米国特許第５，７６３，２６３号で記載されている。 ハイスループット
アッセイは、限定されるものではないが、後述するものをはじめとする１以上の異なるア
ッセイ技術を使用できる。
本明細書中で言及されるすべての刊行物および特許文書は、そのような刊行物または文
書のそれぞれが、参照により本明細書中に組み込まれることが具体的かつ個別に示される
かのように、参照により本明細書中に組み込まれる。 刊行物および特許文書の言及は、
いずれも関連のある先行技術であることを認めることを意図せず、またその内容または日
付に関する承認を構成するものでもない。 本発明を明細書によって説明してきたが、当
業者は、本発明を様々な実施形態で実施することができ、前述の記載事項および後述の実
施例は説明のためであり、以下の特許請求の範囲を限定するものではないことを理解する
であろう。
実施例
実施例１ 本発明の化合物の合成
一般的実験
ＮＭＲ
書のそれぞれが、参照により本明細書中に組み込まれることが具体的かつ個別に示される
かのように、参照により本明細書中に組み込まれる。 刊行物および特許文書の言及は、
いずれも関連のある先行技術であることを認めることを意図せず、またその内容または日
付に関する承認を構成するものでもない。 本発明を明細書によって説明してきたが、当
業者は、本発明を様々な実施形態で実施することができ、前述の記載事項および後述の実
施例は説明のためであり、以下の特許請求の範囲を限定するものではないことを理解する
であろう。
実施例
実施例１ 本発明の化合物の合成
一般的実験
ＮＭＲ
特に指定のない限り、ＣＤＣｌ３を使用して１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得し、そして
ＶａｒｉａｎまたはＯｘｆｏｒｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ｍａｇｎｅｔ（５００ＭＨ
ｚ）装置を使用して４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで記録した。表示された多重度は、
ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｑｕｉｎｔ＝五重項、ｓｘｔ＝六重
項、ｍ＝多重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｄｔ＝三重項の二重項である；ｂｒはブロード
なシグナルを示す。
ＶａｒｉａｎまたはＯｘｆｏｒｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ｍａｇｎｅｔ（５００ＭＨ
ｚ）装置を使用して４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで記録した。表示された多重度は、
ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｑｕｉｎｔ＝五重項、ｓｘｔ＝六重
項、ｍ＝多重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｄｔ＝三重項の二重項である；ｂｒはブロード
なシグナルを示す。
ＬＣＭＳおよびＨＰＬＣ
質量： Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＬＣ
。ＨＰＬＣ：生成物を、１５０×４．５ｍｍのＹＭＣ ＯＤＳ−Ｍ８０カラムまたは１５
０×４．６ｍｍのＹＭＣ−パック Ｐｒｏ Ｃ１８カラムを有するＳｈｉｍａｄｚｕ Ｓ
ＰＤ−２０Ａで１．０ｍｌ／分にて分析した。移動相は、ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＝３：２（０
．３％のＳＤＳおよび０．０５％のＨ３ＰＯ４を含む）。生成物を、３１００ Ｍａｓｓ
Ｄｅｔｅｃｔｏｒを有するＷａｔｅｒｓ Ａｕｔｏ精製 Ｓｙｓｔｅｍを使用するＨＰ
ＬＣ／ＭＳ（０．１％水酸化アンモニウムを含むＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ）によって精製した。
質量： Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＬＣ
。ＨＰＬＣ：生成物を、１５０×４．５ｍｍのＹＭＣ ＯＤＳ−Ｍ８０カラムまたは１５
０×４．６ｍｍのＹＭＣ−パック Ｐｒｏ Ｃ１８カラムを有するＳｈｉｍａｄｚｕ Ｓ
ＰＤ−２０Ａで１．０ｍｌ／分にて分析した。移動相は、ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＝３：２（０
．３％のＳＤＳおよび０．０５％のＨ３ＰＯ４を含む）。生成物を、３１００ Ｍａｓｓ
Ｄｅｔｅｃｔｏｒを有するＷａｔｅｒｓ Ａｕｔｏ精製 Ｓｙｓｔｅｍを使用するＨＰ
ＬＣ／ＭＳ（０．１％水酸化アンモニウムを含むＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ）によって精製した。
３−（アミノメチル）−４，６−ジメチル−１，２−ジヒドロピリジン−２−オンＨＣ
ｌ塩
ｌ塩
２−シアノアセトアミド（８．４０ｇ、１００ミリモル）およびアセチルアセトン（１
０．０ｇ、１００ミリモル）のＨ２Ｏ（２００ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４．００ｇ
、２８．９ミリモル）を添加した。混合物を室温で２２時間撹拌した。次いで沈殿した固
体をブフナー漏斗でろ過し、氷冷Ｈ２Ｏで洗浄し、そして真空下で乾燥して、４，６−ジ
メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボニトリル（１３．５ｇ、９
１％収率）を得た。
４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボニトリル（１
０．０ｇ、６７．５ミリモル）のＭｅＯＨ（１．５０Ｌ）および濃ＨＣｌ（３０ｍＬ）中
溶液１０％Ｐｄ（ＯＨ）２（１９ｇ）をＮ２雰囲気下で添加した。Ｎ２ガスをＨ２ガスで
置換し、混合物を２６時間室温にて水素雰囲気下で撹拌した。Ｈ２ガスをＮ２ガスで置換
した。混合部宇と、セライトを通して濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、濃縮した。残留物をＥ
ｔＯＨで摩砕し、ブフナー漏斗で集め、そして真空下で乾燥して、表題化合物を白色固体
として得た（１１．５ｇ、９０％）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 11.86
(brs, 1H), 5.98 (s, 1H), 3.78 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H)
.
０．０ｇ、６７．５ミリモル）のＭｅＯＨ（１．５０Ｌ）および濃ＨＣｌ（３０ｍＬ）中
溶液１０％Ｐｄ（ＯＨ）２（１９ｇ）をＮ２雰囲気下で添加した。Ｎ２ガスをＨ２ガスで
置換し、混合物を２６時間室温にて水素雰囲気下で撹拌した。Ｈ２ガスをＮ２ガスで置換
した。混合部宇と、セライトを通して濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、濃縮した。残留物をＥ
ｔＯＨで摩砕し、ブフナー漏斗で集め、そして真空下で乾燥して、表題化合物を白色固体
として得た（１１．５ｇ、９０％）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 11.86
(brs, 1H), 5.98 (s, 1H), 3.78 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H)
.
５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロ安息香酸
２−メチル−３−ニトロ安息香酸（５．００ｇ、２７．６ミリモル）のＨ２ＳＯ４（２
０ｍＬ）中撹拌溶液に、１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（４．３４ｇ
、１５．２０ミリモル）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で５時間撹拌した。反応混
合物を氷冷水上に注ぎ、結果としての析出した固体を集め、水で洗浄し、真空中で乾燥さ
せて、表題化合物を白色固体として得た（７．２８ｇ、定量的収率）。1H-NMR (400 MH
z, DMSO-d6) δ ppm; 8.31 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 2.43 (s, 3H).
５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロ安息香酸メチル
５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロ安息香酸（７．２８ｇ、２８．０ミリモル）のＤ
ＭＦ（１００ｍＬ）中撹拌溶液に、炭酸ナトリウム（１１．９ｇ、１１２ミリモル）およ
びヨウ化メチル（１５．９ｇ、１１２ミリモル）を添加した。反応混合物を６０℃で８時
間撹拌した。反応完了後、反応混合物をろ過し、酢酸エチルで洗浄した。合した濾液を水
で洗浄し、水相を酢酸エチルで再抽出した。合した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥
し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を固体として得た。（７．７４ｇ、定量的収
率）。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm); 8.17 (s, 1H), 7.91 (s, 1H),
3.96 (s, 3H), 2.59 (s, 3H).
３−アミノ−５−ブロモ−２−メチル安息香酸メチル
５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロ安息香酸メチル（７．６０ｇ、２７．７ミリモル
）のＥｔＯＨ水溶液（１００ｍＬのＥｔＯＨおよび２０ｍＬのＨ２Ｏ）中撹拌溶液に、塩
化アンモニウム（４．４５ｇ、８３．１ミリモル）および鉄（４．６４ｇ、８３．１ミリ
モル）を添加した。反応混合物を８０℃で５時間撹拌した。次いでセライトを通して混合
物をろ過し、セライト床を酢酸エチルで洗浄した。合した濾液を真空中で濃縮した。結果
としての残留物を酢酸エチルおよび水中に溶解させた。水層を酢酸エチルで抽出した（２
回）。合した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で濃縮し
て、表題化合物を褐色油として得た（６．６７ｇ、９９％）。1H-NMR (400 MHz, CDCl
3) δ ppm; 7.37 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.80 (brs, 2H
), 2.31 (s, 3H).
化合物１：
ステップ１：５−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−４’−ヒドロキシ−４−メチル−［１，１’−
ビフェニル］−３−カルボン酸メチルの合成
５−ブロモ−３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（１０ｇ、２１．３
ミリモル、例えば、ＷＯ２０１２１４２５０４（代理人整理番号４１４７８−５０７００
１ＷＯ）を参照のこと）および（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（３．５ｇ、２５．
３ミリモル）のジオキサン（２２５ｍＬ）および水（７５ｍＬ）の混合物中撹拌溶液に、
Ｎａ２ＣＯ３（８．０１ｇ、７５．５ミリモル）を添加し、そして溶液にアルゴンを３０
分間パージした。次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（２．４ｇ、２．０７ミリモル）を添加し、
そしてアルゴンを再度さらに１５分間パージした。反応生成物を１００℃で４時間加熱し
た。完了したら、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合した有機層を硫酸
ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、続いてカラムクロマトグラフィー精
製をおこなって、表題化合物を得た（８．９ｇ、８７％収率）。
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（１０ｇ、２１．３
ミリモル、例えば、ＷＯ２０１２１４２５０４（代理人整理番号４１４７８−５０７００
１ＷＯ）を参照のこと）および（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（３．５ｇ、２５．
３ミリモル）のジオキサン（２２５ｍＬ）および水（７５ｍＬ）の混合物中撹拌溶液に、
Ｎａ２ＣＯ３（８．０１ｇ、７５．５ミリモル）を添加し、そして溶液にアルゴンを３０
分間パージした。次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（２．４ｇ、２．０７ミリモル）を添加し、
そしてアルゴンを再度さらに１５分間パージした。反応生成物を１００℃で４時間加熱し
た。完了したら、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合した有機層を硫酸
ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、続いてカラムクロマトグラフィー精
製をおこなって、表題化合物を得た（８．９ｇ、８７％収率）。
ステップ２：５−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−４’−（２−メトキシエトキシ）−４−メチル
−［１，１’−ビフェニル］−３−カルボン酸メチルの合成
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−４’−（２−メトキシエトキシ）−４−メチル
−［１，１’−ビフェニル］−３−カルボン酸メチルの合成
５−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキ
シル）（エチル）アミノ）−４’−ヒドロキシ−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］
−３−カルボン酸メチル（０．６ｇ、１．２４ミリモル）および１−ブロモ−２−メトキ
シエタン（０．５１９ｇ、３．７３ミリモル）のアセトニトリル（６ｍＬ）中撹拌溶液に
、Ｃｓ２ＣＯ３（０．４８５ｇ、１．４９ミリモル）を添加し、そして反応を８０℃で１
２時間撹拌した。完了したら、水をそれに添加し、酢酸エチルで抽出した。合した有機層
を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗化合物をカラムクロマトグラ
フィーによって精製して、表題化合物を得た（０．６ｇ、７６．５％収率）。
シル）（エチル）アミノ）−４’−ヒドロキシ−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］
−３−カルボン酸メチル（０．６ｇ、１．２４ミリモル）および１−ブロモ−２−メトキ
シエタン（０．５１９ｇ、３．７３ミリモル）のアセトニトリル（６ｍＬ）中撹拌溶液に
、Ｃｓ２ＣＯ３（０．４８５ｇ、１．４９ミリモル）を添加し、そして反応を８０℃で１
２時間撹拌した。完了したら、水をそれに添加し、酢酸エチルで抽出した。合した有機層
を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗化合物をカラムクロマトグラ
フィーによって精製して、表題化合物を得た（０．６ｇ、７６．５％収率）。
ステップ３：（（トランス）−４−（（５−（（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１
，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−４’−（２−メトキシエ
トキシ）−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］−３−イル（エチル）−アミノ）−シ
クロヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−４’−（２−メトキシエ
トキシ）−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］−３−イル（エチル）−アミノ）−シ
クロヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＮａＯＨ水溶液（０．０６６ｇ、５ｍＬのＨ２Ｏ中１．６６ミリモル）を５−（（（ト
ランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル
）アミノ）−４’−（２−メトキシエトキシ）−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］
−３−カルボン酸メチル（０．６ｇ、１．１１ミリモル）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中溶液
に添加し、そして６０℃で１時間撹拌した。反応完了後、エタノールを減圧下で除去し、
クエン酸を用いて残留物をｐＨ４に酸性化した。１０％ＤＣＭ中メタノールを使用して抽
出を実施した。合した有機層を乾燥させ、濃縮して、各酸を得た（０．５ｇ、８５．６％
収率）。
ランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル
）アミノ）−４’−（２−メトキシエトキシ）−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］
−３−カルボン酸メチル（０．６ｇ、１．１１ミリモル）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中溶液
に添加し、そして６０℃で１時間撹拌した。反応完了後、エタノールを減圧下で除去し、
クエン酸を用いて残留物をｐＨ４に酸性化した。１０％ＤＣＭ中メタノールを使用して抽
出を実施した。合した有機層を乾燥させ、濃縮して、各酸を得た（０．５ｇ、８５．６％
収率）。
上記酸（０．５ｇ、０．９５ミリモル）を次いでＤＭＳＯ（５ｍＬ）中に溶解させ、３
−（アミノメチル）−４，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（０．２８８ｇ、１
．９０ミリモル）およびトリエチルアミン（０．０９６ｇ、０．９５０ミリモル）をそれ
に添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、ＰｙＢｏｐ（０．７４１ｇ、１．４
２ミリモル）をそれに添加し、撹拌を一晩室温で続けた。反応完了後、反応生成物を氷中
に注ぎ、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用して抽出を実施した。合した有機層を硫酸ナトリ
ウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質を得、これを次いでカラムクロマトグラフ
ィーによって精製して、表題化合物を得た（０．４５ｇ、７１．８％収率）。
−（アミノメチル）−４，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（０．２８８ｇ、１
．９０ミリモル）およびトリエチルアミン（０．０９６ｇ、０．９５０ミリモル）をそれ
に添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、ＰｙＢｏｐ（０．７４１ｇ、１．４
２ミリモル）をそれに添加し、撹拌を一晩室温で続けた。反応完了後、反応生成物を氷中
に注ぎ、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用して抽出を実施した。合した有機層を硫酸ナトリ
ウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質を得、これを次いでカラムクロマトグラフ
ィーによって精製して、表題化合物を得た（０．４５ｇ、７１．８％収率）。
ステップ４：Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３
−イル）メチル）−５−（（（トランス）−４−（ジメチルアミノ）−シクロヘキシル）
（エチル）−アミノ）−４’−（２−メトキシエトキシ）−４−メチル−［１，１’−ビ
フェニル］−３−カルボキサミドの合成
−イル）メチル）−５−（（（トランス）−４−（ジメチルアミノ）−シクロヘキシル）
（エチル）−アミノ）−４’−（２−メトキシエトキシ）−４−メチル−［１，１’−ビ
フェニル］−３−カルボキサミドの合成
０℃で（（トランス）−４−（（５−（（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−
ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−４’−（２−メトキシエトキシ
）−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）（エチル）アミノ）シクロヘキ
シル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．４５ｇ、０．６８１ミリモル）のＤＣＭ（５
ｍＬ）中撹拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を添加し、反応を２時間室温で撹拌した。完了後
、反応を濃縮乾固した。残留物を次いでＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ８に塩基性化し、
水層をＤＣＭ中２０％メタノールで抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、
溶媒を減圧下で除去して、Ｂｏｃ脱保護された化合物を得た（０．３ｇ、７８．７％収率
）。
ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−４’−（２−メトキシエトキシ
）−４−メチル−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）（エチル）アミノ）シクロヘキ
シル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．４５ｇ、０．６８１ミリモル）のＤＣＭ（５
ｍＬ）中撹拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を添加し、反応を２時間室温で撹拌した。完了後
、反応を濃縮乾固した。残留物を次いでＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ８に塩基性化し、
水層をＤＣＭ中２０％メタノールで抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、
溶媒を減圧下で除去して、Ｂｏｃ脱保護された化合物を得た（０．３ｇ、７８．７％収率
）。
Ｂｏｃ脱保護された化合物（０．３ｇ、０．５３５ミリモル）のジクロロメタン（３ｍ
Ｌ）中撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液（３５〜４１％水溶液）（０．０５６ｇ、１．
８７ミリモル）を０℃で添加し、２０分間撹拌した。次いで、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（０
．２８ｇ、１．３３ミリモル）を添加し、そして２時間０℃で撹拌した。反応が完了した
ら、水を添加し、ＤＣＭ中２０％メタノールで抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上
で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。粗化合物を分収ＨＰＬＣによって精製して、表題化
合物を得た（０．１ｇ、３１．７％収率）。
Ｌ）中撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液（３５〜４１％水溶液）（０．０５６ｇ、１．
８７ミリモル）を０℃で添加し、２０分間撹拌した。次いで、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（０
．２８ｇ、１．３３ミリモル）を添加し、そして２時間０℃で撹拌した。反応が完了した
ら、水を添加し、ＤＣＭ中２０％メタノールで抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上
で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。粗化合物を分収ＨＰＬＣによって精製して、表題化
合物を得た（０．１ｇ、３１．７％収率）。
LCMS: 589.75(M+1)+;TFA-塩:1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (brs, 1H
), 9.48 (brs, 1H), 8.21 (brs, 1H), 7.57 (d, 2H, J=8.0 Hz), 7.40 (s,
1H), 7.23 (s, 1H), 7.03 (d, 2H, J=8.8 Hz), 5.87 (s, 1H), 4.29 (d,
2H, J=4.4 Hz), 4.14-4.12 (m, 2H), 3.69-3.66 (m, 2H), 3.32 (s, 3H),
3.13 (m, 4H), 2.69-2.68 (m, 6H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11
(s, 3H), 1.96 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.85 (t, 3H, J=6.8 Hz).
), 9.48 (brs, 1H), 8.21 (brs, 1H), 7.57 (d, 2H, J=8.0 Hz), 7.40 (s,
1H), 7.23 (s, 1H), 7.03 (d, 2H, J=8.8 Hz), 5.87 (s, 1H), 4.29 (d,
2H, J=4.4 Hz), 4.14-4.12 (m, 2H), 3.69-3.66 (m, 2H), 3.32 (s, 3H),
3.13 (m, 4H), 2.69-2.68 (m, 6H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11
(s, 3H), 1.96 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.85 (t, 3H, J=6.8 Hz).
化合物２：
ステップ１：５−ブロモ−３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボ
ニル）−（メチル）−アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香
酸メチルの合成
ニル）−（メチル）−アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香
酸メチルの合成
５−ブロモ−３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（３ｇ、６．４１ミ
リモル、例えば、ＷＯ２０１２１４２５０４を参照のこと）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中撹拌
溶液に、ＮａＨ（０．１８４ｇ、７．６９ミリモル）を０℃で添加し、それを同じ温度で
２０分間撹拌した。次いで、ヨウ化メチル（９．１０ｇ、６４．１０ミリモル）を０℃で
添加し、反応を一晩室温で撹拌した。完了したら、反応を氷水でクエンチし、ジクロロメ
タンで抽出した。合した有機層を水で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮した。粗化合物をカ
ラムクロマトグラフィーによって精製して、粗表題化合物を得、これをさらに精製するこ
となく使用した（３ｇ、９７．４％収率）。
）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（３ｇ、６．４１ミ
リモル、例えば、ＷＯ２０１２１４２５０４を参照のこと）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中撹拌
溶液に、ＮａＨ（０．１８４ｇ、７．６９ミリモル）を０℃で添加し、それを同じ温度で
２０分間撹拌した。次いで、ヨウ化メチル（９．１０ｇ、６４．１０ミリモル）を０℃で
添加し、反応を一晩室温で撹拌した。完了したら、反応を氷水でクエンチし、ジクロロメ
タンで抽出した。合した有機層を水で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮した。粗化合物をカ
ラムクロマトグラフィーによって精製して、粗表題化合物を得、これをさらに精製するこ
となく使用した（３ｇ、９７．４％収率）。
ステップ２：３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（メ
チル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−５−（３−ヒドロキシプロプ−１
−イン−１−イル）−２−メチル安息香酸メチルの合成
チル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−５−（３−ヒドロキシプロプ−１
−イン−１−イル）−２−メチル安息香酸メチルの合成
５−ブロモ−３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチ
ル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（２ｇ、
４．１４ミリモル）の乾燥トルエン中撹拌溶液に、ＣｕＩ（０．０１５ｇ、０．０７９ミ
リモル）、ＰＰｈ３（０．０４３ｇ、０．１６５ミリモル）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２
（０．０５８ｇ、０．０８２ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．０８ｇ、
１０．７８ミリモル）を添加し、反応をアルゴンで１５分間パージした。プロプ−２−イ
ン−１−オール（０．４６ｇ、８．２９ミリモル）をそれに添加し、反応を８０℃にて密
封状態で５時間加熱した。完了したら、それを水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。
有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。粗化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製
して、表題化合物を得た（１．２ｇ、６３．２％収率）。
ル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（２ｇ、
４．１４ミリモル）の乾燥トルエン中撹拌溶液に、ＣｕＩ（０．０１５ｇ、０．０７９ミ
リモル）、ＰＰｈ３（０．０４３ｇ、０．１６５ミリモル）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２
（０．０５８ｇ、０．０８２ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．０８ｇ、
１０．７８ミリモル）を添加し、反応をアルゴンで１５分間パージした。プロプ−２−イ
ン−１−オール（０．４６ｇ、８．２９ミリモル）をそれに添加し、反応を８０℃にて密
封状態で５時間加熱した。完了したら、それを水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。
有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。粗化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製
して、表題化合物を得た（１．２ｇ、６３．２％収率）。
ステップ３：５−（３−ブロモプロプ−１−イン−１−イル）−３−（（（トランス）
−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチ
ル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチルの合成：
−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチ
ル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチルの合成：
３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）
シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−５−（３−ヒドロキシプロプ−１−イン−１−イ
ル）−２−メチル安息香酸メチル（１．２ｇ、２．６２ミリモル）のＤＣＭ（１５ｍＬ）
中撹拌溶液に、ＰＰｈ３（１．３７ｇ、５．２２ミリモル）およびＣＢｒ４（１．７ｇ、
５．１０ミリモル）を０℃で添加し、反応を４時間室温で撹拌した。完了したら、反応を
氷水でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。合した有機層を水で洗浄し、乾燥し、減
圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得
た（０．５ｇ、３８．５％収率）。
シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−５−（３−ヒドロキシプロプ−１−イン−１−イ
ル）−２−メチル安息香酸メチル（１．２ｇ、２．６２ミリモル）のＤＣＭ（１５ｍＬ）
中撹拌溶液に、ＰＰｈ３（１．３７ｇ、５．２２ミリモル）およびＣＢｒ４（１．７ｇ、
５．１０ミリモル）を０℃で添加し、反応を４時間室温で撹拌した。完了したら、反応を
氷水でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。合した有機層を水で洗浄し、乾燥し、減
圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得
た（０．５ｇ、３８．５％収率）。
ステップ４：３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチ
ル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノ
プロプ−１−イン−１−イル）安息香酸メチルの合成
ル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノ
プロプ−１−イン−１−イル）安息香酸メチルの合成
５−（３−ブロモプロプ−１−イン−１−イル）−３−（（（トランス）−４−（（ｔ
ｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ
）−２−メチル安息香酸メチル（１当量）のＤＭＦ中撹拌溶液に、モルホリン（５当量）
を添加し、そして反応を１２時間室温で撹拌した。完了したら、反応を氷水でクエンチし
、ジクロロメタンで抽出した。合した有機層を水で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮して、
粗表題化合物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した（９８．７％
収率）。
ｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ
）−２−メチル安息香酸メチル（１当量）のＤＭＦ中撹拌溶液に、モルホリン（５当量）
を添加し、そして反応を１２時間室温で撹拌した。完了したら、反応を氷水でクエンチし
、ジクロロメタンで抽出した。合した有機層を水で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮して、
粗表題化合物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した（９８．７％
収率）。
ステップ５：（（トランス）−４−（（３−（（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１
，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−２−メチル−５−（３−
モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）（エチル）アミノ）シクロヘキシル
）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−２−メチル−５−（３−
モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）（エチル）アミノ）シクロヘキシル
）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＮａＯＨ（１．５当量）を３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボ
ニル）（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル−５−（３
−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）安息香酸メチル（１当量）のＥｔＯＨ：Ｈ２
Ｏ（９：１）中溶液に添加し、そして６０℃で１時間撹拌した。反応完了後、エタノール
を減圧下で除去し、希ＨＣｌを使用してｐＨ６まで酸性化し、そしてクエン酸を使用して
ｐＨ４を調節した。１０％ＤＣＭ中メタノールを使用して抽出を実施した。合した有機層
を乾燥し、濃縮して、各酸を得た。
ニル）（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル−５−（３
−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）安息香酸メチル（１当量）のＥｔＯＨ：Ｈ２
Ｏ（９：１）中溶液に添加し、そして６０℃で１時間撹拌した。反応完了後、エタノール
を減圧下で除去し、希ＨＣｌを使用してｐＨ６まで酸性化し、そしてクエン酸を使用して
ｐＨ４を調節した。１０％ＤＣＭ中メタノールを使用して抽出を実施した。合した有機層
を乾燥し、濃縮して、各酸を得た。
上記酸（１当量）を次いでＤＭＳＯ中に溶解させ、３−（アミノメチル）−４，６−ジ
メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（２当量）およびトリエチルアミン（１当量）をそれ
に添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、ＰｙＢｏｐ（１．５当量）をそれに
添加し、撹拌を一晩室温で続けた。反応完了後、反応生成物を氷中に注ぎ、１０％ＭｅＯ
Ｈ／ＤＣＭを使用して抽出を実施した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を
減圧下で除去し、減圧下で濃縮して、粗物質を得、これを次いでまず水で、続いてアセト
ニトリル洗浄で精製して、所望の表題化合物を得た（６９．４％収率）。
メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（２当量）およびトリエチルアミン（１当量）をそれ
に添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、ＰｙＢｏｐ（１．５当量）をそれに
添加し、撹拌を一晩室温で続けた。反応完了後、反応生成物を氷中に注ぎ、１０％ＭｅＯ
Ｈ／ＤＣＭを使用して抽出を実施した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を
減圧下で除去し、減圧下で濃縮して、粗物質を得、これを次いでまず水で、続いてアセト
ニトリル洗浄で精製して、所望の表題化合物を得た（６９．４％収率）。
ステップ６：Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３
−イル）メチル）−３−（エチル（（トランス）−４−（メチルアミノ）シクロヘキシル
）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）ベンズア
ミドの合成
−イル）メチル）−３−（エチル（（トランス）−４−（メチルアミノ）シクロヘキシル
）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）ベンズア
ミドの合成
０℃で（（トランス）−４−（（３−（（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−
ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−２−メチル−５−（３−モルホ
リノプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）（エチル）アミノ）シクロヘキシル）（メ
チル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１当量）のＤＣＭ中撹拌溶液に、ＴＦＡ（３当量
）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。完了後、反応を濃縮乾固した。残留物を次い
でＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ８に塩基性化し、水層を２０％ＤＣＭ中メタノールで抽
出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して、表題化合
物を得（９９％収率）、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）カルバモイル）−２−メチル−５−（３−モルホ
リノプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）（エチル）アミノ）シクロヘキシル）（メ
チル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１当量）のＤＣＭ中撹拌溶液に、ＴＦＡ（３当量
）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。完了後、反応を濃縮乾固した。残留物を次い
でＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ８に塩基性化し、水層を２０％ＤＣＭ中メタノールで抽
出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して、表題化合
物を得（９９％収率）、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
ステップ７：Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３
−イル）メチル）−３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチ
ル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１
−イン−１−イル）ベンズアミドの合成
−イル）メチル）−３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチ
ル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１
−イン−１−イル）ベンズアミドの合成
Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチ
ル）−３−（エチル（（トランス）−４−（メチルアミノ）シクロヘキシル）アミノ）−
２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）ベンズアミド（１当量
）のジクロロエタン中撹拌溶液に、２−メトキシアセトアルデヒド（１０当量）および酢
酸（６当量）を０℃で添加し、２０分間撹拌した。次いでＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量
）を添加し、そして２時間０℃で撹拌した。反応が完了したら、水を添加し、ＤＣＭ中２
０％メタノールで抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして溶媒を減
圧下で除去した。粗化合物を分収ＨＰＬＣによって精製して、標的分子を得た（０．１ｇ
、３３．６％収率）。
ル）−３−（エチル（（トランス）−４−（メチルアミノ）シクロヘキシル）アミノ）−
２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）ベンズアミド（１当量
）のジクロロエタン中撹拌溶液に、２−メトキシアセトアルデヒド（１０当量）および酢
酸（６当量）を０℃で添加し、２０分間撹拌した。次いでＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量
）を添加し、そして２時間０℃で撹拌した。反応が完了したら、水を添加し、ＤＣＭ中２
０％メタノールで抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして溶媒を減
圧下で除去した。粗化合物を分収ＨＰＬＣによって精製して、標的分子を得た（０．１ｇ
、３３．６％収率）。
LCMS: 606.65(M+1)+;TFA塩:1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.50 (brs, 1H)
, 9.22 (brs, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.86 (
s, 1H), 4.26-4.25 (m, 4H), 3.66-3.59 (m, 4H), 3.48-3.36 (m, 3H), 3.29
-3.17 (m, 7H), 3.04-3.01 (m, 3H), 2.69-2.68 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 2
.19 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.92 (m, 2H), 1.82-1.73 (m, 3H), 1.4
6 (m, 4H), 0.78 (t, 3H, J=6.4 Hz).
, 9.22 (brs, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.86 (
s, 1H), 4.26-4.25 (m, 4H), 3.66-3.59 (m, 4H), 3.48-3.36 (m, 3H), 3.29
-3.17 (m, 7H), 3.04-3.01 (m, 3H), 2.69-2.68 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 2
.19 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.92 (m, 2H), 1.82-1.73 (m, 3H), 1.4
6 (m, 4H), 0.78 (t, 3H, J=6.4 Hz).
化合物２の別の合成スキーム：
ステップＡ：４−（プロプ−２−イン−１−イル）モルホリンの合成：
プロパルギルブロミド（５０ｇ、４２０ミリモル）のアセトン（３００ｍＬ）中撹拌溶
液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１３６．５ｇ、４２０ミリモル）を０℃で添加した。次いで、アセ
トン（２００ｍＬ）中モルホリン（３６．６０ｇ、４２０ミリモル）を滴加し、反応を室
温で１６時間撹拌した。完了したら、反応生成物を濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して、表
題化合物を得た（５０ｇ、粗）。単離された化合物をさらに精製することなくその後のカ
ップリングで直接使用した。
液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１３６．５ｇ、４２０ミリモル）を０℃で添加した。次いで、アセ
トン（２００ｍＬ）中モルホリン（３６．６０ｇ、４２０ミリモル）を滴加し、反応を室
温で１６時間撹拌した。完了したら、反応生成物を濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して、表
題化合物を得た（５０ｇ、粗）。単離された化合物をさらに精製することなくその後のカ
ップリングで直接使用した。
ステップ１：５−ブロモ−３−（エチル（（トランス）−４−（メチルアミノ）シクロ
ヘキシル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチルの合成：
ヘキシル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチルの合成：
０℃で５−ブロモ−３−（（（トランス）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）
（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（
３０ｇ、６２．２４ミリモル）のメタノール（１００ｍＬ）中撹拌溶液に、メタノール性
ＨＣｌ（５００ｍＬ）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。完了後、反応を濃縮乾固
した。残留物をＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ８に塩基性化し、水層をＤＣＭ中１０％メ
タノール（２００ｍＬ×３）で抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒
を減圧下で除去して、表題化合物を無色油として得た（２５ｇ、粗）。単離された化合物
をさらに精製することなく次のステップで使用した。
（メチル）アミノ）シクロヘキシル）（エチル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（
３０ｇ、６２．２４ミリモル）のメタノール（１００ｍＬ）中撹拌溶液に、メタノール性
ＨＣｌ（５００ｍＬ）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。完了後、反応を濃縮乾固
した。残留物をＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ８に塩基性化し、水層をＤＣＭ中１０％メ
タノール（２００ｍＬ×３）で抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒
を減圧下で除去して、表題化合物を無色油として得た（２５ｇ、粗）。単離された化合物
をさらに精製することなく次のステップで使用した。
ステップ２：５−ブロモ−３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル
）（メチル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチルの合成：
）（メチル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチルの合成：
粗５−ブロモ−３−（エチル（（トランス）−４−（メチルアミノ）シクロヘキシル）
アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（２５ｇ、６５．４４ミリモル）、１−ブロモ−２
−メトキシエタン（１８．１９ｇ、１３０．８ミリモル）のアセトニトリル（２５０ｍＬ
）中撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１８．０６ｇ、１３０．８ミリモル）およびＫＩ（６．５
１ｇ、３９．２１ミリモル）を添加した。結果として得られた反応生成物を６５℃で１６
時間撹拌した。完了したら、反応混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（５００ｍ
Ｌ×３）で抽出した。合した有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃
縮した。粗化合物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た
（２０ｇ、６９．３％収率）。
アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（２５ｇ、６５．４４ミリモル）、１−ブロモ−２
−メトキシエタン（１８．１９ｇ、１３０．８ミリモル）のアセトニトリル（２５０ｍＬ
）中撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１８．０６ｇ、１３０．８ミリモル）およびＫＩ（６．５
１ｇ、３９．２１ミリモル）を添加した。結果として得られた反応生成物を６５℃で１６
時間撹拌した。完了したら、反応混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（５００ｍ
Ｌ×３）で抽出した。合した有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃
縮した。粗化合物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た
（２０ｇ、６９．３％収率）。
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.55 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 3.82 (s,
3H), 3.32 (m, 4H), 3.20 (s, 3H), 3.05 (q, 2H), 2.61 (m, 1H), 2.32
(s, 3H), 2.30 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.77-1.67 (m, 4H), 1.37-1.31(m
, 2H), 1.24-1.18 (m, 2H), 0.78 (t, 3H, J=6.8 Hz).
3H), 3.32 (m, 4H), 3.20 (s, 3H), 3.05 (q, 2H), 2.61 (m, 1H), 2.32
(s, 3H), 2.30 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.77-1.67 (m, 4H), 1.37-1.31(m
, 2H), 1.24-1.18 (m, 2H), 0.78 (t, 3H, J=6.8 Hz).
ステップ３：３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチル）
アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イ
ン−１−イル）安息香酸メチルの合成：
アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イ
ン−１−イル）安息香酸メチルの合成：
５−ブロモ−３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチル）
アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（３０ｇ、６８．０２ミ
リモル）、４−（プロプ−２−イン−１−イル）モルホリン（２５．５１ｇ、２０４ミリ
モル）およびトリエチルアミン（２０．６１ｇ、２０４ミリモル）のＤＭＦ（３００ｍＬ
）中溶液に、アルゴンを２０分間吹き込んだ。Ｔｈｅｎ ＣｕＩ（３．８７ｇ、２０．３
６ミリモル）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（７．８５ｇ、６．７９ミリモル）を添加し、ア
ルゴンをさらに２０分間吹き込んだ。反応混合物を１０５℃で４時間加熱し、次いで室温
まで冷却した。反応を水（１００ｍＬ）でクエンチし、水相を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（
４００ｍＬ×３）で抽出した。合した有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃
縮した。ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製
して、表題化合物を得た（２１ｇ、６３．７％収率）。
アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル安息香酸メチル（３０ｇ、６８．０２ミ
リモル）、４−（プロプ−２−イン−１−イル）モルホリン（２５．５１ｇ、２０４ミリ
モル）およびトリエチルアミン（２０．６１ｇ、２０４ミリモル）のＤＭＦ（３００ｍＬ
）中溶液に、アルゴンを２０分間吹き込んだ。Ｔｈｅｎ ＣｕＩ（３．８７ｇ、２０．３
６ミリモル）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（７．８５ｇ、６．７９ミリモル）を添加し、ア
ルゴンをさらに２０分間吹き込んだ。反応混合物を１０５℃で４時間加熱し、次いで室温
まで冷却した。反応を水（１００ｍＬ）でクエンチし、水相を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（
４００ｍＬ×３）で抽出した。合した有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃
縮した。ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製
して、表題化合物を得た（２１ｇ、６３．７％収率）。
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.46 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.82 (s,
3H), 3.62-3.57 (m, 6H), 3.50 (s, 2H), 3.35-3.32 (m, 2H), 3.21 (s,
3H), 3.17 (m, 1H), 3.05 (q, 2H), 2.61-2.58 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2
.33 (m, 1H), 2.18 (m, 2H), 1.77-1.70 (m, 4H), 1.36-1.20 (m, 4H), 0
.77 (t, 3H, J=6.8 Hz), ３Ｈは溶媒ピークに統合した。
3H), 3.62-3.57 (m, 6H), 3.50 (s, 2H), 3.35-3.32 (m, 2H), 3.21 (s,
3H), 3.17 (m, 1H), 3.05 (q, 2H), 2.61-2.58 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2
.33 (m, 1H), 2.18 (m, 2H), 1.77-1.70 (m, 4H), 1.36-1.20 (m, 4H), 0
.77 (t, 3H, J=6.8 Hz), ３Ｈは溶媒ピークに統合した。
ステップ４：Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３
−イル）メチル）−３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチ
ル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１
−イン−１−イル）ベンズアミドの合成：
−イル）メチル）−３−（エチル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチ
ル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１
−イン−１−イル）ベンズアミドの合成：
ＮａＯＨ水溶液（２．５９ｇ、６４．９１ミリモル、１０ｍＬのＨ２Ｏ中）を３−（エ
チル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチル）アミノ）シクロヘキシル
）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）安息香酸
メチル（２１ｇ、４３．２９ミリモル）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に添加し、そし
て６０℃で１時間撹拌した。反応完了後、エタノールを減圧下で除去し、希ＨＣｌを使用
して残留物を酸性化し、クエン酸を使用してｐＨまでにした。１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（
２００ｍＬ×３）を使用して抽出を実施した。合した有機層を乾燥し、濃縮して、各酸を
得た（１５．５ｇ、７６％収率）。
チル（（トランス）−４−（（２−メトキシエチル）（メチル）アミノ）シクロヘキシル
）アミノ）−２−メチル−５−（３−モルホリノプロプ−１−イン−１−イル）安息香酸
メチル（２１ｇ、４３．２９ミリモル）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に添加し、そし
て６０℃で１時間撹拌した。反応完了後、エタノールを減圧下で除去し、希ＨＣｌを使用
して残留物を酸性化し、クエン酸を使用してｐＨまでにした。１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（
２００ｍＬ×３）を使用して抽出を実施した。合した有機層を乾燥し、濃縮して、各酸を
得た（１５．５ｇ、７６％収率）。
上記酸（１５．５ｇ、３２．９０ミリモル）のＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中溶液に、３−（
アミノメチル）−４，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（１０ｇ、６５．８０ミ
リモル）およびトリエチルアミン（２３ｍＬ、１６４．５ミリモル）を添加した。反応混
合物を室温で１５分間撹拌した後、ＰｙＢｏｐ（２５．６６ｇ、４９．３４ミリモル）を
それに０℃で添加し、一晩室温でさらに撹拌した。完了後、反応生成物を氷水（１００ｍ
Ｌ）中に注ぎ、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２００ｍＬ×３）を使用して抽出を実施した。
合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗化合物を塩基性アルミ
ナ上カラムクロマトグラフィーにより精製し、ＭｅＯＨ：ＤＣＭで溶出させて、表題化合
物（１１ｇ、５５．３％収率）を得た。
アミノメチル）−４，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（１０ｇ、６５．８０ミ
リモル）およびトリエチルアミン（２３ｍＬ、１６４．５ミリモル）を添加した。反応混
合物を室温で１５分間撹拌した後、ＰｙＢｏｐ（２５．６６ｇ、４９．３４ミリモル）を
それに０℃で添加し、一晩室温でさらに撹拌した。完了後、反応生成物を氷水（１００ｍ
Ｌ）中に注ぎ、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２００ｍＬ×３）を使用して抽出を実施した。
合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗化合物を塩基性アルミ
ナ上カラムクロマトグラフィーにより精製し、ＭｅＯＨ：ＤＣＭで溶出させて、表題化合
物（１１ｇ、５５．３％収率）を得た。
LCMS: 606.50(M+1)+; 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.23 (s, 1H), 7.09 (
s, 1H), 6.11 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.74-3.72 (m, 4H), 3.51 (s, 2H)
, 3.47 (t, 2H, J=5.6 Hz,), 3.32 (s, 3H), 3.07 (q, 2H, J=7.2 Hz), 2
.64-2.63 (m, 7H), 2.38 (m,1H), 2.37 (s, 3H), 2.27(s, 3H), 2.26 (s, 3
H), 2.25 (s, 3H), 1.89-1.86 (m, 4H), 1.50-1.30 (m, 4H), 0.83 (t, 3H,
J=7.2 Hz).
s, 1H), 6.11 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.74-3.72 (m, 4H), 3.51 (s, 2H)
, 3.47 (t, 2H, J=5.6 Hz,), 3.32 (s, 3H), 3.07 (q, 2H, J=7.2 Hz), 2
.64-2.63 (m, 7H), 2.38 (m,1H), 2.37 (s, 3H), 2.27(s, 3H), 2.26 (s, 3
H), 2.25 (s, 3H), 1.89-1.86 (m, 4H), 1.50-1.30 (m, 4H), 0.83 (t, 3H,
J=7.2 Hz).
化合物１０５：
５−ブロモ−２−メチル−３−［（オキサン−４−イル）アミノ］安息香酸メチル
５−ブロモ−２−メチル−３−［（オキサン−４−イル）アミノ］安息香酸メチル
３−アミノ−５−ブロモ−２−メチル安息香酸メチル（４０．２ｇ、１６５ミリモル）
のＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）およびＡｃＯＨ（６０ｍＬ）中撹拌溶液に、ジヒドロ−２
Ｈ−ピラン−４−オン（１７．３ｇ、１７３ミリモル）およびナトリウムトリアセトキシ
ボロヒドリド（７３．６ｇ、３３０ミリモル）を添加した。反応混合物をＲＴで２０時間
撹拌した。次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を分離した。水層をＣＨ２Ｃ
ｌ２で抽出し、合した有機層を真空中で濃縮した。残留物をエチルエーテルで摩砕し、結
果としての析出物を集めて表題化合物を白色固体として得た（３９．１ｇ、７２％）。1H
-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm; 7.01 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 5.00 (d
, J=7.6 Hz, 1H), 3.84-3.87 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.54-3.56 (m, 1H),
3.43 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.81-1.84 (m, 2H), 1.47-1.55 (m, 2H).
のＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）およびＡｃＯＨ（６０ｍＬ）中撹拌溶液に、ジヒドロ−２
Ｈ−ピラン−４−オン（１７．３ｇ、１７３ミリモル）およびナトリウムトリアセトキシ
ボロヒドリド（７３．６ｇ、３３０ミリモル）を添加した。反応混合物をＲＴで２０時間
撹拌した。次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を分離した。水層をＣＨ２Ｃ
ｌ２で抽出し、合した有機層を真空中で濃縮した。残留物をエチルエーテルで摩砕し、結
果としての析出物を集めて表題化合物を白色固体として得た（３９．１ｇ、７２％）。1H
-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm; 7.01 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 5.00 (d
, J=7.6 Hz, 1H), 3.84-3.87 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.54-3.56 (m, 1H),
3.43 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.81-1.84 (m, 2H), 1.47-1.55 (m, 2H).
５−ブロモ−３−［エチル（オキサン−４−イル）アミノ］−２−メチル安息香酸メチ
ル
ル
５−ブロモ−２−メチル−３−［（オキサン−４−イル）アミノ］安息香酸メチル（３
９．１ｇ、１１９ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）およびＡｃＯＨ（４０ｍＬ）
中撹拌溶液に、アセトアルデヒド（２４．７ｇ、４７６ミリモル）およびナトリウムトリ
アセトキシボロヒドリド（７９．６ｇ、３５７ミリモル）を添加した。反応混合物をＲＴ
で２４時間撹拌した。次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を分離した。水層
をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、合した有機層を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（ＳｉＯ２ヘプタン／ＥｔＯＡｃ＝３／１）により精製して、表題化
合物を粘稠性油として得た（４４．１ｇ、定量的収率）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δ ppm; 7.62 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 3.80 (m, 5H), 3.31 (m, 2H),
2.97-3.05 (m, 2H), 2.87-2.96 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.52-1.61 (m, 2H)
, 1.37-1.50 (m, 2H), 0.87 (t, J=6.8 Hz, 3H).
９．１ｇ、１１９ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）およびＡｃＯＨ（４０ｍＬ）
中撹拌溶液に、アセトアルデヒド（２４．７ｇ、４７６ミリモル）およびナトリウムトリ
アセトキシボロヒドリド（７９．６ｇ、３５７ミリモル）を添加した。反応混合物をＲＴ
で２４時間撹拌した。次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を分離した。水層
をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、合した有機層を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（ＳｉＯ２ヘプタン／ＥｔＯＡｃ＝３／１）により精製して、表題化
合物を粘稠性油として得た（４４．１ｇ、定量的収率）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δ ppm; 7.62 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 3.80 (m, 5H), 3.31 (m, 2H),
2.97-3.05 (m, 2H), 2.87-2.96 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.52-1.61 (m, 2H)
, 1.37-1.50 (m, 2H), 0.87 (t, J=6.8 Hz, 3H).
４−（（３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−５−（メ
トキシカルボニル）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチル
トキシカルボニル）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチル
５−ブロモ−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−
メチル安息香酸メチル（１．８０ｇ、５．０５ミリモル）および４−エチニルピペリジン
−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．８０ｇ、８．５９ミリモル）のＤＭＦ（４０ｍ
Ｌ）中撹拌溶液に、トリエチルアミン（２．８２ｍＬ、２０．２ミリモル）およびヨウ化
銅（Ｉ）（０．０９６ｇ、０．５０５ミリモル）を添加した。窒素を１５分間吹き込むこ
とによって反応混合物を脱気した。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウム（０）（０．２９２ｇ、０．２５３ミリモル）を導入し、窒素を吹き込むことによ
ってさらに１０分間脱気した。反応混合物を８０℃で６時間加熱した。反応を飽和ＮａＨ
ＣＯ３でクエンチし、ＴＢＭＥ（３×４０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ
過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（０％から４０％ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）
によって精製して、表題化合物を得た（２．４０ｇ、９８％収率）。1H-NMR (500 MHz)
δ ppm; 7.65 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 3.97 (brd, J=11.3 Hz, 2H), 3.
90 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.34 (dt, J=2.0, 11.7 Hz, 2H), 3.24 (ddd,
J=3.4, 8.8, 12.2 Hz, 2H), 3.08 (brs, 2H), 2.98 (brs, 1H), 2.80 (dd
dd, J=3.9, 3.9, 3.9, 3.9 Hz, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.60-
1.74 (m, 6H), 1.48 (s, 9H), 0.89 (t, J=6.8 Hz, 3H) ); MS (ESI) [M+
H]+ 485.4.
メチル安息香酸メチル（１．８０ｇ、５．０５ミリモル）および４−エチニルピペリジン
−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．８０ｇ、８．５９ミリモル）のＤＭＦ（４０ｍ
Ｌ）中撹拌溶液に、トリエチルアミン（２．８２ｍＬ、２０．２ミリモル）およびヨウ化
銅（Ｉ）（０．０９６ｇ、０．５０５ミリモル）を添加した。窒素を１５分間吹き込むこ
とによって反応混合物を脱気した。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウム（０）（０．２９２ｇ、０．２５３ミリモル）を導入し、窒素を吹き込むことによ
ってさらに１０分間脱気した。反応混合物を８０℃で６時間加熱した。反応を飽和ＮａＨ
ＣＯ３でクエンチし、ＴＢＭＥ（３×４０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ
過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（０％から４０％ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）
によって精製して、表題化合物を得た（２．４０ｇ、９８％収率）。1H-NMR (500 MHz)
δ ppm; 7.65 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 3.97 (brd, J=11.3 Hz, 2H), 3.
90 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.34 (dt, J=2.0, 11.7 Hz, 2H), 3.24 (ddd,
J=3.4, 8.8, 12.2 Hz, 2H), 3.08 (brs, 2H), 2.98 (brs, 1H), 2.80 (dd
dd, J=3.9, 3.9, 3.9, 3.9 Hz, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.60-
1.74 (m, 6H), 1.48 (s, 9H), 0.89 (t, J=6.8 Hz, 3H) ); MS (ESI) [M+
H]+ 485.4.
５−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）エチニル）−
３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル安息香酸
３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル安息香酸
４−（（３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−５−（メ
トキシカルボニル）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチル（２．４ｇ、４．９５ミリモル）のエタノール（２０．０ｍＬ）中溶液に、
水酸化ナトリウム（０．５６５ｇ、１４．１ミリモル）の水（３．０ｍＬ）中溶液を室温
で添加した。反応混合物を６０℃で６時間加熱した。反応を１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、次
いで過剰のクエン酸溶液でクエンチして、ｐＨを５に調節した。混合物を濃縮してＥｔＯ
Ｈを除去し、残存する水相をＡｃＯＥｔ（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を合し、Ｎ
ａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（１０％〜１０
０％のＡｃＯＥｔ／ヘプタン）によって精製して、表題化合物を得た（２．３０ｇ、９９
％収率）。1H-NMR (500 MHz) δ ppm; 7.82 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 3.98
(brd, J=11.3Hz, 2H), 3.77 (m, 2H), 3.35 (dt, J=1.5, 11.3Hz, 2H), 3.25
(ddd, J=3.4, 8.3, 12.2 Hz, 2H), 3.11 (brs, 2H), 3.00 (brs, 1H), 2.
81 (dddd, J=3.9, 3.9, 3.9, 3.9 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H), 1.88 (m, 2H),
1.60-1.78 (m, 6H), 1.48 (s, 9H), 0.90 (t, J=6.8Hz, 3H); MS (ESI) [
M+H]+ 471.4.
トキシカルボニル）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチル（２．４ｇ、４．９５ミリモル）のエタノール（２０．０ｍＬ）中溶液に、
水酸化ナトリウム（０．５６５ｇ、１４．１ミリモル）の水（３．０ｍＬ）中溶液を室温
で添加した。反応混合物を６０℃で６時間加熱した。反応を１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、次
いで過剰のクエン酸溶液でクエンチして、ｐＨを５に調節した。混合物を濃縮してＥｔＯ
Ｈを除去し、残存する水相をＡｃＯＥｔ（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を合し、Ｎ
ａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（１０％〜１０
０％のＡｃＯＥｔ／ヘプタン）によって精製して、表題化合物を得た（２．３０ｇ、９９
％収率）。1H-NMR (500 MHz) δ ppm; 7.82 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 3.98
(brd, J=11.3Hz, 2H), 3.77 (m, 2H), 3.35 (dt, J=1.5, 11.3Hz, 2H), 3.25
(ddd, J=3.4, 8.3, 12.2 Hz, 2H), 3.11 (brs, 2H), 3.00 (brs, 1H), 2.
81 (dddd, J=3.9, 3.9, 3.9, 3.9 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H), 1.88 (m, 2H),
1.60-1.78 (m, 6H), 1.48 (s, 9H), 0.90 (t, J=6.8Hz, 3H); MS (ESI) [
M+H]+ 471.4.
４−（（３−（（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−
イル）メチル）カルバモイル）−５−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル
）アミノ）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブ
チル
イル）メチル）カルバモイル）−５−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル
）アミノ）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブ
チル
室温で５−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）エチニ
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル安
息香酸（１．０６ｇ、２．２５ミリモル）のＤＭＳＯ（５．８ｍＬ）中溶液に、トリエチ
ルアミン（０．９０ｍＬ、６．４４ミリモル）および（４，６−ジメチル−２−オキソ−
１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メタンアミニウムクロリド（０．４０５ｇ、２．
１５ミリモル）を添加した。透明溶液は不均一になる。ＨＯＢＴ（０．４９３ｇ、３．２
２ミリモル）およびＥＤＣ（０．６１７ｇ、３．２２ミリモル）を添加し、結果として得
られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応を水（８０ｍＬ）でクエンチし、スラリー
を１時間室温で撹拌した。スラリーを濾過し、ケーキを水で洗浄した（２×２０ｍＬ）。
集めた固体を真空下で乾燥して、表題化合物を得た（１．２７ｇ、９８％収率）。1H-NMR
(500 MHz, CD3OD) δ ppm; 7.22 (s, 1H), 7.08 (d, J=1.0 Hz 1H), 6.1
1 (s, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.92 (brd, J=10.8 Hz, 2H), 3.78 (dd, J =4
.4, 5.4 Hz, 1H), 3.75 (dd, J =4.4, 5.4 Hz, 1H), 3.36 (t, J=11.7 Hz
, 2H), 3.21 (br t, J=8.3 Hz, 2H), 3.07 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.01 (dd
dd, J=3.9, 3.9, 11.3, 11.3 Hz, 1H), 2.84 (dddd, J=3.4, 3.4. 3.9, 3.9
Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.88 (m, 2H),
1.70 ((brd, J=12.2 Hz, 2H), 1.60 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 0.87 (t,
J=7.3 Hz, 3H); MS (ESI) [M+H]+ 605.6.
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル安
息香酸（１．０６ｇ、２．２５ミリモル）のＤＭＳＯ（５．８ｍＬ）中溶液に、トリエチ
ルアミン（０．９０ｍＬ、６．４４ミリモル）および（４，６−ジメチル−２−オキソ−
１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メタンアミニウムクロリド（０．４０５ｇ、２．
１５ミリモル）を添加した。透明溶液は不均一になる。ＨＯＢＴ（０．４９３ｇ、３．２
２ミリモル）およびＥＤＣ（０．６１７ｇ、３．２２ミリモル）を添加し、結果として得
られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応を水（８０ｍＬ）でクエンチし、スラリー
を１時間室温で撹拌した。スラリーを濾過し、ケーキを水で洗浄した（２×２０ｍＬ）。
集めた固体を真空下で乾燥して、表題化合物を得た（１．２７ｇ、９８％収率）。1H-NMR
(500 MHz, CD3OD) δ ppm; 7.22 (s, 1H), 7.08 (d, J=1.0 Hz 1H), 6.1
1 (s, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.92 (brd, J=10.8 Hz, 2H), 3.78 (dd, J =4
.4, 5.4 Hz, 1H), 3.75 (dd, J =4.4, 5.4 Hz, 1H), 3.36 (t, J=11.7 Hz
, 2H), 3.21 (br t, J=8.3 Hz, 2H), 3.07 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.01 (dd
dd, J=3.9, 3.9, 11.3, 11.3 Hz, 1H), 2.84 (dddd, J=3.4, 3.4. 3.9, 3.9
Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.88 (m, 2H),
1.70 ((brd, J=12.2 Hz, 2H), 1.60 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 0.87 (t,
J=7.3 Hz, 3H); MS (ESI) [M+H]+ 605.6.
Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチ
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル−
５−（ピペリジン−４−イルエチニル）ベンズアミド
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル−
５−（ピペリジン−４−イルエチニル）ベンズアミド
４−（（３−（（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−
イル）メチル）カルバモイル）−５−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル
）アミノ）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブ
チル（２５０ｍｇ、０．４１３ミリモル）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、２０℃で１，４
−ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ（３ｍＬ、１２．０ミリモル）を添加した。混合物を２０℃
で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。反応混合物を直接濃縮し、
残留物をＤＣＭ中に溶解させ、次いで飽和ＮａＨＣＯ３／塩水で中和した。有機層を乾燥
（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過した。そしてろ液を濃縮した。残留物をさらに精製することな
くアルキル化のために使用した（２０９ｍｇ、１００％）。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)
δ ppm 7.21 (brs, 1H), 7.07 (brs, 1H), 6.11 (s, 1H), 4.46 (s, 2H)
, 3.95-3.89 (m, 2H), 3.39-3.34 (m, 2H), 3.08 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.06
-2.98 (m, 3H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.72-2.65 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2
.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.94-1.88 (m, 2H), 1.73-1.68 (m, 2H), 1.6
8-1.56 (m, 4H), 0.85 (t, J=7.0 Hz, 3H); MS (ESI) [M+H]+ 505.5.
イル）メチル）カルバモイル）−５−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル
）アミノ）−４−メチルフェニル）エチニル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブ
チル（２５０ｍｇ、０．４１３ミリモル）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、２０℃で１，４
−ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ（３ｍＬ、１２．０ミリモル）を添加した。混合物を２０℃
で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。反応混合物を直接濃縮し、
残留物をＤＣＭ中に溶解させ、次いで飽和ＮａＨＣＯ３／塩水で中和した。有機層を乾燥
（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過した。そしてろ液を濃縮した。残留物をさらに精製することな
くアルキル化のために使用した（２０９ｍｇ、１００％）。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)
δ ppm 7.21 (brs, 1H), 7.07 (brs, 1H), 6.11 (s, 1H), 4.46 (s, 2H)
, 3.95-3.89 (m, 2H), 3.39-3.34 (m, 2H), 3.08 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.06
-2.98 (m, 3H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.72-2.65 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2
.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.94-1.88 (m, 2H), 1.73-1.68 (m, 2H), 1.6
8-1.56 (m, 4H), 0.85 (t, J=7.0 Hz, 3H); MS (ESI) [M+H]+ 505.5.
Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチ
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル−
５−（（１−メチルピペリジン−４−イル）エチニル）ベンズアミド
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル−
５−（（１−メチルピペリジン−４−イル）エチニル）ベンズアミド
Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチ
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル−
５−（ピペリジン−４−イルエチニル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．１９８ミリモル
）のメタノール（５ｍＬ）中溶液に、Ｈ２Ｏ中３５％ホルムアルデヒド（０．１５５ｍＬ
、１．９８ミリモル）を０℃で添加した。０℃で１０分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ
素ナトリウム（２４．９ｍｇ、０．３９６ミリモル）を添加した。結果として得られた混
合物を０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。反応を飽和Ｎａ
ＨＣＯ３／塩水でクエンチし、ＥｔＡＯｃ／ヘプタンで抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ
２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（１０ｇカラム、ＭｅＯＨ
／ＤＣＭ＝１：９、次いでＭｅＯＨ／ＭｅＯＨ中７Ｍ ＮＨ３／ＤＣＭ＝１：１：８）に
よって精製して、表題化合物を得た（９６．０ｍｇ、９３％）。1H-NMR (500 MHz, CD
3OD) δ ppm 7.22 (brs, 1H), 7.08 (brs, 1H), 6.10 (s, 1H), 4.46 (s,
2H), 3.94-3.87 (m, 2H), 3.35-3.30 (m, 2H), 3.07 (q, J=7.0 Hz, 2H),
3.04-2.97 (m, 1H), 2.79-2.71 (m, 2H), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.38 (s, 3
H), 2.28 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.28-2.21 (m, 2H), 1.
97-1.91 (m, 2H), 1.78-1.67 (m, 4H), 1.64-1.54 (m, 2H), 0.85 (t, J=7.0
Hz, 3H); MS (ESI) [M+H]+ 519.4.
ル）−３−（エチル（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−２−メチル−
５−（ピペリジン−４−イルエチニル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．１９８ミリモル
）のメタノール（５ｍＬ）中溶液に、Ｈ２Ｏ中３５％ホルムアルデヒド（０．１５５ｍＬ
、１．９８ミリモル）を０℃で添加した。０℃で１０分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ
素ナトリウム（２４．９ｍｇ、０．３９６ミリモル）を添加した。結果として得られた混
合物を０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。反応を飽和Ｎａ
ＨＣＯ３／塩水でクエンチし、ＥｔＡＯｃ／ヘプタンで抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ
２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（１０ｇカラム、ＭｅＯＨ
／ＤＣＭ＝１：９、次いでＭｅＯＨ／ＭｅＯＨ中７Ｍ ＮＨ３／ＤＣＭ＝１：１：８）に
よって精製して、表題化合物を得た（９６．０ｍｇ、９３％）。1H-NMR (500 MHz, CD
3OD) δ ppm 7.22 (brs, 1H), 7.08 (brs, 1H), 6.10 (s, 1H), 4.46 (s,
2H), 3.94-3.87 (m, 2H), 3.35-3.30 (m, 2H), 3.07 (q, J=7.0 Hz, 2H),
3.04-2.97 (m, 1H), 2.79-2.71 (m, 2H), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.38 (s, 3
H), 2.28 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.28-2.21 (m, 2H), 1.
97-1.91 (m, 2H), 1.78-1.67 (m, 4H), 1.64-1.54 (m, 2H), 0.85 (t, J=7.0
Hz, 3H); MS (ESI) [M+H]+ 519.4.
実施例２：バイオアッセイプロトコルおよび一般的方法
野生型および突然変異体ＰＲＣ２酵素アッセイのためのプロトコル
一般的材料。Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）、Ｓ−アデノシルホモシステイン（
ＳＡＨ）、ビシン、ＫＣｌ、Ｔｗｅｅｎ２０、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および
牛皮ゼラチン（ＢＳＧ）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから可能な最高レベルの純度で購
入した。ジチオトレイトール（ＤＴＴ）をＥＭＤから購入した。３Ｈ−ＳＡＭを８０Ｃｉ
／ｍｍｏｌの比活性でＡｍｅｒｉｃａｎ 放射性標識ｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入
した。３８４ウェルストレプトアビジンＦｌａｓｈプレートをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒか
ら購入した。
野生型および突然変異体ＰＲＣ２酵素アッセイのためのプロトコル
一般的材料。Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）、Ｓ−アデノシルホモシステイン（
ＳＡＨ）、ビシン、ＫＣｌ、Ｔｗｅｅｎ２０、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および
牛皮ゼラチン（ＢＳＧ）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから可能な最高レベルの純度で購
入した。ジチオトレイトール（ＤＴＴ）をＥＭＤから購入した。３Ｈ−ＳＡＭを８０Ｃｉ
／ｍｍｏｌの比活性でＡｍｅｒｉｃａｎ 放射性標識ｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入
した。３８４ウェルストレプトアビジンＦｌａｓｈプレートをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒか
ら購入した。
基質。非修飾リジン２７（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ０）またはジメチル化リジン２７（Ｈ３Ｋ２
７ｍｅ２）のいずれかを含むヒトヒストンＨ３残基２１〜４４に代表的なペプチドを２１
ｓｔ Ｃｅｎｔｕｒｙ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ製のＣ末端Ｇ（Ｋ−ビオチン）リンカ
ー−親和性標識モチーフおよびＣ末端アミドキャップで合成した。ペプチドを高性能液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製して９５％を超える純度にし、液体クロマトグラフ
ィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって確認した。配列を以下に記載する。
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ０：ＡＴＫＡＡＲＫＳＡＰＡＴＧＧＶＫＫＰＨＲＹＲＰＧＧＫ（ビオチン
）−アミド（配列番号１）
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２：ＡＴＫＡＡＲＫ（ｍｅ２）ＳＡＰＡＴＧＧＶＫＫＰＨＲＹＲＰＧＧＫ
（ビオチン）−アミド（配列番号２）
７ｍｅ２）のいずれかを含むヒトヒストンＨ３残基２１〜４４に代表的なペプチドを２１
ｓｔ Ｃｅｎｔｕｒｙ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ製のＣ末端Ｇ（Ｋ−ビオチン）リンカ
ー−親和性標識モチーフおよびＣ末端アミドキャップで合成した。ペプチドを高性能液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製して９５％を超える純度にし、液体クロマトグラフ
ィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって確認した。配列を以下に記載する。
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ０：ＡＴＫＡＡＲＫＳＡＰＡＴＧＧＶＫＫＰＨＲＹＲＰＧＧＫ（ビオチン
）−アミド（配列番号１）
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２：ＡＴＫＡＡＲＫ（ｍｅ２）ＳＡＰＡＴＧＧＶＫＫＰＨＲＹＲＰＧＧＫ
（ビオチン）−アミド（配列番号２）
ニワトリ赤血球オリゴヌクレオソームをニワトリ血液から確立された手順にしたがって
精製した。
精製した。
組換えＰＲＣ２複合体。ヒトＰＲＣ２複合体を、バキュロウイルス発現系を使用してＳ
ｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（ｓｆ９）細胞において同時発現された４−
成分酵素複合体として精製した。発現されたサブユニットは、野生型ＥＺＨ２構築物、Ｅ
ＥＤ（ＮＭ＿００３７９７）、Ｓｕｚ１２（ＮＭ＿０１５３５５）およびＲｂＡｐ４８（
ＮＭ＿００５６１０）から生成された野生型ＥＺＨ２（ＮＭ＿００４４５６）またはＥＺ
Ｈ２ Ｙ６４１Ｆ、Ｎ、Ｈ、ＳまたはＣ突然変異体であった。ＥＥＤサブユニットはＮ末
端ＦＬＡＧタグを含み、これを使用して全４−成分複合体をｓｆ９細胞溶解物から精製し
た。複合体の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ
分析によって測定して９５％を満たすかまたは超過した。酵素ストック濃度の濃度（概し
て０．３〜１．０ｍｇ／ｍＬ）を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイをウシ血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）標準に対して使用して測定した。
ｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（ｓｆ９）細胞において同時発現された４−
成分酵素複合体として精製した。発現されたサブユニットは、野生型ＥＺＨ２構築物、Ｅ
ＥＤ（ＮＭ＿００３７９７）、Ｓｕｚ１２（ＮＭ＿０１５３５５）およびＲｂＡｐ４８（
ＮＭ＿００５６１０）から生成された野生型ＥＺＨ２（ＮＭ＿００４４５６）またはＥＺ
Ｈ２ Ｙ６４１Ｆ、Ｎ、Ｈ、ＳまたはＣ突然変異体であった。ＥＥＤサブユニットはＮ末
端ＦＬＡＧタグを含み、これを使用して全４−成分複合体をｓｆ９細胞溶解物から精製し
た。複合体の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ
分析によって測定して９５％を満たすかまたは超過した。酵素ストック濃度の濃度（概し
て０．３〜１．０ｍｇ／ｍＬ）を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイをウシ血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）標準に対して使用して測定した。
ペプチド基質に関するＰＲＣ２酵素アッセイの一般的手順。アッセイはすべて、２０ｍ
Ｍビシン（ｐＨ＝７．６）、０．５ｍＭのＤＴＴ、０．００５％ＢＳＧおよび０．００２
％のＴｗｅｅｎ２０からなり、使用当日に調製された緩衝液中で実施した。１００％ＤＭ
ＳＯ（１μＬ）中化合物をポリプロピレン製３８４ウェルＶ底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ
）中に、３８４チャンネルピペットヘッド（Ｔｈｅｒｍｏ）を装備したプレートｍａｔｅ
２Ｘ３を使用してスポットした。ＤＭＳＯ（１μＬ）を最大シグナル制御について、１１
、１２、２３、２４行、Ａ〜Ｈ列に添加し、公知製品であり、ＰＣＲ２の阻害剤であるＳ
ＡＨ（１μＬ）を最小シグナル制御について、１１、１２、２３、２４列、Ｉ〜Ｐ行に添
加した。野生型ＰＲＣ２酵素およびＨ３Ｋ２７ｍｅ０ペプチドまたはＹ６４１突然変異体
酵素およびＨ３Ｋ２７ｍｅ２ペプチドのいずれかを含むカクテル（４０μＬ）を、Ｍｕｌ
ｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（Ｔｈｅｒｍｏ）によって添加した。化合物をＰＲＣ２と３０
分間２５℃でインキュベートし、次いで非放射性および３Ｈ−ＳＡＭの混合物を含むカク
テル（１０μＬ）を添加して、反応を開始した（最終体積＝５１μＬ）。全ての場合にお
いて、最終濃度は次のとおりであった：野生型または突然変異体ＰＲＣ２酵素は４ｎＭで
あり、最小シグナル制御ウェル中のＳＡＨは１ｍＭであり、ＤＭＳＯ濃度は１％であった
。残りの成分の最終濃度は以下の表２に示す。非放射性ＳＡＭ（１０μＬ）を６００μＭ
の最終濃度まで添加し、それにより３Ｈ−ＳＡＭを、ペプチド基質中へのその取り込みが
もはや検出可能でなくなるレベルまで希釈することによって、アッセイを停止した。３８
４ウェルポリプロピレンプレート中の５０μＬの反応を次いで３８４ウェルＦｌａｓｈプ
レートに移し、ビオチニル化ペプチドをストレプトアビジン表面に少なくとも１時間結合
させた後、Ｂｉｏｔｅｋ ＥＬｘ４０５プレートウォッシャー中０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
で３回洗浄した。プレートを次いでＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＴｏｐＣｏｕｎｔプレート
リーダーで読み取って、１分あたりの崩壊（ｄｐｍ）で測定されるか、あるいは１分あた
りのカウント（ｃｐｍ）と称される、Ｆｌａｓｈプレート表面に結合した３Ｈ標識ペプチ
ドの量を測定した。
Ｍビシン（ｐＨ＝７．６）、０．５ｍＭのＤＴＴ、０．００５％ＢＳＧおよび０．００２
％のＴｗｅｅｎ２０からなり、使用当日に調製された緩衝液中で実施した。１００％ＤＭ
ＳＯ（１μＬ）中化合物をポリプロピレン製３８４ウェルＶ底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ
）中に、３８４チャンネルピペットヘッド（Ｔｈｅｒｍｏ）を装備したプレートｍａｔｅ
２Ｘ３を使用してスポットした。ＤＭＳＯ（１μＬ）を最大シグナル制御について、１１
、１２、２３、２４行、Ａ〜Ｈ列に添加し、公知製品であり、ＰＣＲ２の阻害剤であるＳ
ＡＨ（１μＬ）を最小シグナル制御について、１１、１２、２３、２４列、Ｉ〜Ｐ行に添
加した。野生型ＰＲＣ２酵素およびＨ３Ｋ２７ｍｅ０ペプチドまたはＹ６４１突然変異体
酵素およびＨ３Ｋ２７ｍｅ２ペプチドのいずれかを含むカクテル（４０μＬ）を、Ｍｕｌ
ｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（Ｔｈｅｒｍｏ）によって添加した。化合物をＰＲＣ２と３０
分間２５℃でインキュベートし、次いで非放射性および３Ｈ−ＳＡＭの混合物を含むカク
テル（１０μＬ）を添加して、反応を開始した（最終体積＝５１μＬ）。全ての場合にお
いて、最終濃度は次のとおりであった：野生型または突然変異体ＰＲＣ２酵素は４ｎＭで
あり、最小シグナル制御ウェル中のＳＡＨは１ｍＭであり、ＤＭＳＯ濃度は１％であった
。残りの成分の最終濃度は以下の表２に示す。非放射性ＳＡＭ（１０μＬ）を６００μＭ
の最終濃度まで添加し、それにより３Ｈ−ＳＡＭを、ペプチド基質中へのその取り込みが
もはや検出可能でなくなるレベルまで希釈することによって、アッセイを停止した。３８
４ウェルポリプロピレンプレート中の５０μＬの反応を次いで３８４ウェルＦｌａｓｈプ
レートに移し、ビオチニル化ペプチドをストレプトアビジン表面に少なくとも１時間結合
させた後、Ｂｉｏｔｅｋ ＥＬｘ４０５プレートウォッシャー中０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
で３回洗浄した。プレートを次いでＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＴｏｐＣｏｕｎｔプレート
リーダーで読み取って、１分あたりの崩壊（ｄｐｍ）で測定されるか、あるいは１分あた
りのカウント（ｃｐｍ）と称される、Ｆｌａｓｈプレート表面に結合した３Ｈ標識ペプチ
ドの量を測定した。
オリゴヌクレオソーム基質に対する野生型ＰＲＣ２酵素アッセイの一般的手順。２０ｍ
Ｍのビシン（ｐＨ＝７．６）、０．５ｍＭのＤＴＴ、０．００５％ＢＳＧ、１００ｍＭの
ＫＣｌおよび０．００２％のＴｗｅｅｎ２０からなり、使用当日に調製された緩衝液中で
アッセイを実施した。１００％ＤＭＳＯ（１μＬ）中化合物をポリプロピレン製３８４ウ
ェルＶ底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）中に、３８４チャンネルピペットヘッド（Ｔｈｅｒ
ｍｏ）を装備したプレートｍａｔｅ２Ｘ３を使用してスポットした。ＤＭＳＯ（１μＬ）
を最大シグナル制御について、１１、１２、２３、２４行、Ａ〜Ｈ列に添加し、公知製品
であり、ＰＣＲ２の阻害剤であるＳＡＨ（１μＬ）を最小シグナル制御について、１１、
１２、２３、２４列、Ｉ〜Ｐ行に添加した。野生型ＰＲＣ２酵素およびニワトリ赤血球オ
リゴヌクレオソームを含むカクテル（４０μＬ）をＭｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（Ｔ
ｈｅｒｍｏ）で添加した。化合物をＰＲＣ２と３０分間２５℃でインキュベートし、次い
で非放射性および３Ｈ−ＳＡＭの混合物を含むカクテル（１０μＬ）を添加して、反応を
開始した（最終体積＝５１μＬ）。最終濃度は次のとおりであった：野生型ＰＲＣ２酵素
は４ｎＭであり、非放射性ＳＡＭは４３０ｎＭであり、３Ｈ−ＳＡＭは１２０ｎＭであり
、ニワトリ赤血球オリグノヌクレオソーム（ｏｌｉｇｎｏｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ）は１２
０ｎＭであり、最小シグナル制御ウェル中のＳＡＨは１ｍＭであり、そしてＤＭＳＯ濃度
は１％であった。非放射性ＳＡＭ（１０μＬ）を６００μＭの最終濃度まで添加し、これ
によって３Ｈ−ＳＡＭを、ニワトリ赤血球オリグノヌクレオソーム（olignonucleosome）
基質中へのその取り込みがもはや検出可能でないレベルまで希釈することによって、アッ
セイを停止した。３８４ウェルポリプロピレンプレート中の５０μＬの反応を３８４ウェ
ルＦｌａｓｈプレートに移し、ニワトリ赤血球ヌクレオソームをプレートの表面に固定し
、これをＢｉｏｔｅｋ ＥＬｘ４０５プレートウォッシャー中０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で
３回洗浄した。プレートを次いでＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリ
ーダーで読み取って、Ｆｌａｓｈプレート表面に結合した３Ｈ標識ニワトリ赤血球オリゴ
ヌクレオソームの量を測定し、１分あたりの崩壊（ｄｐｍ）として測定するか、または１
分あたりのカウントと称する。
Ｍのビシン（ｐＨ＝７．６）、０．５ｍＭのＤＴＴ、０．００５％ＢＳＧ、１００ｍＭの
ＫＣｌおよび０．００２％のＴｗｅｅｎ２０からなり、使用当日に調製された緩衝液中で
アッセイを実施した。１００％ＤＭＳＯ（１μＬ）中化合物をポリプロピレン製３８４ウ
ェルＶ底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）中に、３８４チャンネルピペットヘッド（Ｔｈｅｒ
ｍｏ）を装備したプレートｍａｔｅ２Ｘ３を使用してスポットした。ＤＭＳＯ（１μＬ）
を最大シグナル制御について、１１、１２、２３、２４行、Ａ〜Ｈ列に添加し、公知製品
であり、ＰＣＲ２の阻害剤であるＳＡＨ（１μＬ）を最小シグナル制御について、１１、
１２、２３、２４列、Ｉ〜Ｐ行に添加した。野生型ＰＲＣ２酵素およびニワトリ赤血球オ
リゴヌクレオソームを含むカクテル（４０μＬ）をＭｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（Ｔ
ｈｅｒｍｏ）で添加した。化合物をＰＲＣ２と３０分間２５℃でインキュベートし、次い
で非放射性および３Ｈ−ＳＡＭの混合物を含むカクテル（１０μＬ）を添加して、反応を
開始した（最終体積＝５１μＬ）。最終濃度は次のとおりであった：野生型ＰＲＣ２酵素
は４ｎＭであり、非放射性ＳＡＭは４３０ｎＭであり、３Ｈ−ＳＡＭは１２０ｎＭであり
、ニワトリ赤血球オリグノヌクレオソーム（ｏｌｉｇｎｏｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ）は１２
０ｎＭであり、最小シグナル制御ウェル中のＳＡＨは１ｍＭであり、そしてＤＭＳＯ濃度
は１％であった。非放射性ＳＡＭ（１０μＬ）を６００μＭの最終濃度まで添加し、これ
によって３Ｈ−ＳＡＭを、ニワトリ赤血球オリグノヌクレオソーム（olignonucleosome）
基質中へのその取り込みがもはや検出可能でないレベルまで希釈することによって、アッ
セイを停止した。３８４ウェルポリプロピレンプレート中の５０μＬの反応を３８４ウェ
ルＦｌａｓｈプレートに移し、ニワトリ赤血球ヌクレオソームをプレートの表面に固定し
、これをＢｉｏｔｅｋ ＥＬｘ４０５プレートウォッシャー中０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で
３回洗浄した。プレートを次いでＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリ
ーダーで読み取って、Ｆｌａｓｈプレート表面に結合した３Ｈ標識ニワトリ赤血球オリゴ
ヌクレオソームの量を測定し、１分あたりの崩壊（ｄｐｍ）として測定するか、または１
分あたりのカウントと称する。
％阻害計算
式中、ｄｐｍ＝１分あたりの崩壊、ｃｍｐｄ＝アッセイウェル中のシグナル、ｍｉｎお
よびｍａｘはそれぞれ最小および最大シグナル制御である。
よびｍａｘはそれぞれ最小および最大シグナル制御である。
４パラメータＩＣ５０適合
式中、ｔｏｐおよびｂｏｔｔｏｍは通常変動してもよいが、３パラメータ適合ではそれ
ぞれ１００または０に固定される可能性がある。ヒル係数は通常変動してもよいが、これ
もまた３パラメータ適合では１に適合され得る。Ｙは％阻害であり、Ｘは化合物濃度であ
る。
ぞれ１００または０に固定される可能性がある。ヒル係数は通常変動してもよいが、これ
もまた３パラメータ適合では１に適合され得る。Ｙは％阻害であり、Ｘは化合物濃度であ
る。
ペプチド基質（たとえば、ＥＺＨ２野生型およびＹ６４１Ｆ）に関するＰＲＣ２酵素ア
ッセイのＩＣ５０値を以下の表３に提示する。
ッセイのＩＣ５０値を以下の表３に提示する。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２メチル化アッセイ
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２懸濁細胞をＤＳＭＺ（Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（独国ブランシ
ュヴァイク））から購入した。ＲＰＭＩ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、ペニシリン−ストレプ
トマイシン、熱不活性化ウシ胎仔血清、およびＤ−ＰＢＳはＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ（米国ニューヨーク州グランドアイランド）から購入した。抽出緩衝液および中
和緩衝液（５Ｘ）はＡｃｔｉｖｅモチーフ（米国カリフォルニア州カールスバッド）から
購入した。ウサギ抗ヒストンＨ３抗体はＡｂｃａｍ（米国マサチューセッツ州ケンブリッ
ジ）から購入した。ウサギ抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３およびＨＲＰ結合型抗ウサギＩｇＧは、Ｃ
ｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（米国マサチューセッツ州ダンバー
ス）から購入した。ＴＭＢ「超感受性の」基質はＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（米国メリーランド州オウイングズミルズ）から調達した。ＩｇＧを含まないウシ血清ア
ルブミンはＪａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ研究（米国ペンシルベニア州ウェストグローブ
）から購入した。Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ（１０ＸＰＢＳＴ）はＫＰＬ（米国メリーラン
ド州ゲイサーズバーグ）から購入した。硫酸をＲｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（米国テキ
サス州アーリントン）から購入した。Ｉｍｍｕｌｏｎ ＥＬＩＳＡプレートはＴｈｅｒｍ
ｏ（米国ニューヨーク州ロチェスター）から購入した。Ｖ底細胞培養プレートは、Ｃｏｒ
ｎｉｎｇ Ｉｎｃ．（米国ニューヨーク州コーニング）から購入した。Ｖ底ポリプロピレ
ンプレートは、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−オン（米国ノースカロライナ州モンロー）から
購入した。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２懸濁細胞をＤＳＭＺ（Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（独国ブランシ
ュヴァイク））から購入した。ＲＰＭＩ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、ペニシリン−ストレプ
トマイシン、熱不活性化ウシ胎仔血清、およびＤ−ＰＢＳはＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ（米国ニューヨーク州グランドアイランド）から購入した。抽出緩衝液および中
和緩衝液（５Ｘ）はＡｃｔｉｖｅモチーフ（米国カリフォルニア州カールスバッド）から
購入した。ウサギ抗ヒストンＨ３抗体はＡｂｃａｍ（米国マサチューセッツ州ケンブリッ
ジ）から購入した。ウサギ抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３およびＨＲＰ結合型抗ウサギＩｇＧは、Ｃ
ｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（米国マサチューセッツ州ダンバー
ス）から購入した。ＴＭＢ「超感受性の」基質はＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（米国メリーランド州オウイングズミルズ）から調達した。ＩｇＧを含まないウシ血清ア
ルブミンはＪａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ研究（米国ペンシルベニア州ウェストグローブ
）から購入した。Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ（１０ＸＰＢＳＴ）はＫＰＬ（米国メリーラン
ド州ゲイサーズバーグ）から購入した。硫酸をＲｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（米国テキ
サス州アーリントン）から購入した。Ｉｍｍｕｌｏｎ ＥＬＩＳＡプレートはＴｈｅｒｍ
ｏ（米国ニューヨーク州ロチェスター）から購入した。Ｖ底細胞培養プレートは、Ｃｏｒ
ｎｉｎｇ Ｉｎｃ．（米国ニューヨーク州コーニング）から購入した。Ｖ底ポリプロピレ
ンプレートは、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−オン（米国ノースカロライナ州モンロー）から
購入した。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２懸濁細胞を成長培地（１０％ｖ／ｖ熱不活性化ウシ胎仔血清および
１００単位／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）中で
維持し、そして３７℃にて５％ＣＯ２下で培養した。アッセイ条件下で、細胞をアッセイ
培地（２０％熱不活性化ウシ胎仔血清および１００単位／ｍＬペニシリン−ストレプトマ
イシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）中、３７℃にて５％ＣＯ２下、プレートシェーカー
上でインキュベートした。
１００単位／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）中で
維持し、そして３７℃にて５％ＣＯ２下で培養した。アッセイ条件下で、細胞をアッセイ
培地（２０％熱不活性化ウシ胎仔血清および１００単位／ｍＬペニシリン−ストレプトマ
イシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）中、３７℃にて５％ＣＯ２下、プレートシェーカー
上でインキュベートした。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を、１ウェルあたり２００μＬの９６ウェルＶ底細胞培養プレ
ートに５０，０００細胞／ｍＬの濃度でアッセイ培地中に蒔いた。９６ウェルソースプレ
ートからの化合物（１μＬ）をＶ底細胞プレートに直接添加した。プレートをタイタープ
レートシェーカーで３７℃、５％ＣＯ２にて９６時間インキュベートした。４日のインキ
ュベーション後、プレートを２４１×ｇで５分間スピンさせ、細胞ペレットを乱すことな
く細胞プレートの各ウェルから培地を穏やかに吸引した。ペレットを２００μＬのＤＰＢ
Ｓ中に再懸濁させ、プレートを２４１×ｇで５分間再度スピンさせた。上清を吸引し、冷
（４℃）抽出緩衝液（１００μＬ）をウェルごとに添加した。プレートを４℃にてオービ
タルシェーカーで２時間インキュベートした。プレートを３４２７×ｇ×１０分間でスピ
ンさせた。上清（８０μＬ／ウェル）を９６ウェルＶ底ポリプロピレンプレート中のそれ
ぞれのウェルに移した。中和緩衝液５Ｘ（２０μＬ／ウェル）を、上清を含むＶ底ポリプ
ロピレンプレートに添加した。粗ヒストン調製物（ＣＨＰ）を含むＶ底ポリプロピレンプ
レートをオービタルシェーカーで５分間インキュベートした。粗ビストン調製物を、１０
０μＬのＣｏａｔｉｎｇ緩衝液（１ＸＰＢＳ＋ＢＳＡ０．０５％ｗ／ｖ）を含む２連の９
６ウェルＥＬＩＳＡプレート中の各ウェルに添加した（２μＬ／ウェル）。ウェルを密封
し、一晩４℃でインキュベートした。翌日、プレートを３００μＬ／ウェルの１Ｘ ＰＢ
ＳＴで３回洗浄した。ウェルを２時間、３００μＬ／ウェルのＥＬＩＳＡ希釈剤（（ＰＢ
Ｓ（１Ｘ）ＢＳＡ（２％ｗ／ｖ）およびＴｗｅｅｎ２０（０．０５％ｖ／ｖ））でブロッ
クした。プレートを１Ｘ ＰＢＳＴで３回洗浄した。ヒストンＨ３検出プレートについて
、ＥＬＩＳＡ希釈剤中で１：１０，０００に希釈した抗ヒストン−Ｈ３抗体（Ａｂｃａｍ
、ａｂ１７９１）を１ウェルあたり１００μＬ添加した。Ｈ３Ｋ２７トリメチル化検出プ
レートについて、ＥＬＩＳＡ希釈剤中で１：２０００に希釈した抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３を１
ウェルあたり１００μＬ添加した。プレートを室温で９０分間インキュベートした。プレ
ートを１ウェルあたり３００μＬの１ＸＰＢＳＴで３回洗浄した。ヒストンＨ３検出に関
して、ヒストンＨ３検出に関して、ＥＬＩＳＡ希釈剤中１：６０００に希釈したＨＲＰ結
合型抗ウサギＩｇＧ抗体を１ウェルあたり１００μＬ添加した。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３検出に
関して、ＥＬＩＳＡ希釈剤中で１：４０００に希釈されたＨＲＰ結合型抗ウサギＩｇＧ抗
体を１ウェルあたり１００μＬ添加した。プレートを室温で９０分間インキュベートした
。プレートを１ウェルあたり１ＸＰＢＳＴ３００μＬで４回洗浄した。１ウェルあたりＴ
ＭＢ基質１００μＬを添加した。ヒストンＨ３プレートを５分間室温でインキュベートし
た。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３プレートを室温で１０分間インキュベートした。硫酸１Ｎ（１００
μＬ／ウェル）で反応を停止させた。各ウェルの吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
ートに５０，０００細胞／ｍＬの濃度でアッセイ培地中に蒔いた。９６ウェルソースプレ
ートからの化合物（１μＬ）をＶ底細胞プレートに直接添加した。プレートをタイタープ
レートシェーカーで３７℃、５％ＣＯ２にて９６時間インキュベートした。４日のインキ
ュベーション後、プレートを２４１×ｇで５分間スピンさせ、細胞ペレットを乱すことな
く細胞プレートの各ウェルから培地を穏やかに吸引した。ペレットを２００μＬのＤＰＢ
Ｓ中に再懸濁させ、プレートを２４１×ｇで５分間再度スピンさせた。上清を吸引し、冷
（４℃）抽出緩衝液（１００μＬ）をウェルごとに添加した。プレートを４℃にてオービ
タルシェーカーで２時間インキュベートした。プレートを３４２７×ｇ×１０分間でスピ
ンさせた。上清（８０μＬ／ウェル）を９６ウェルＶ底ポリプロピレンプレート中のそれ
ぞれのウェルに移した。中和緩衝液５Ｘ（２０μＬ／ウェル）を、上清を含むＶ底ポリプ
ロピレンプレートに添加した。粗ヒストン調製物（ＣＨＰ）を含むＶ底ポリプロピレンプ
レートをオービタルシェーカーで５分間インキュベートした。粗ビストン調製物を、１０
０μＬのＣｏａｔｉｎｇ緩衝液（１ＸＰＢＳ＋ＢＳＡ０．０５％ｗ／ｖ）を含む２連の９
６ウェルＥＬＩＳＡプレート中の各ウェルに添加した（２μＬ／ウェル）。ウェルを密封
し、一晩４℃でインキュベートした。翌日、プレートを３００μＬ／ウェルの１Ｘ ＰＢ
ＳＴで３回洗浄した。ウェルを２時間、３００μＬ／ウェルのＥＬＩＳＡ希釈剤（（ＰＢ
Ｓ（１Ｘ）ＢＳＡ（２％ｗ／ｖ）およびＴｗｅｅｎ２０（０．０５％ｖ／ｖ））でブロッ
クした。プレートを１Ｘ ＰＢＳＴで３回洗浄した。ヒストンＨ３検出プレートについて
、ＥＬＩＳＡ希釈剤中で１：１０，０００に希釈した抗ヒストン−Ｈ３抗体（Ａｂｃａｍ
、ａｂ１７９１）を１ウェルあたり１００μＬ添加した。Ｈ３Ｋ２７トリメチル化検出プ
レートについて、ＥＬＩＳＡ希釈剤中で１：２０００に希釈した抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３を１
ウェルあたり１００μＬ添加した。プレートを室温で９０分間インキュベートした。プレ
ートを１ウェルあたり３００μＬの１ＸＰＢＳＴで３回洗浄した。ヒストンＨ３検出に関
して、ヒストンＨ３検出に関して、ＥＬＩＳＡ希釈剤中１：６０００に希釈したＨＲＰ結
合型抗ウサギＩｇＧ抗体を１ウェルあたり１００μＬ添加した。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３検出に
関して、ＥＬＩＳＡ希釈剤中で１：４０００に希釈されたＨＲＰ結合型抗ウサギＩｇＧ抗
体を１ウェルあたり１００μＬ添加した。プレートを室温で９０分間インキュベートした
。プレートを１ウェルあたり１ＸＰＢＳＴ３００μＬで４回洗浄した。１ウェルあたりＴ
ＭＢ基質１００μＬを添加した。ヒストンＨ３プレートを５分間室温でインキュベートし
た。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３プレートを室温で１０分間インキュベートした。硫酸１Ｎ（１００
μＬ／ウェル）で反応を停止させた。各ウェルの吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
まず、各ウェルの比を：
によって決定した。
各プレートは、ＤＭＳＯのみの治療（最小阻害）の８つの対照ウェルならびに最大阻害
（バックグラウンドウェル）の８つの対照ウェルを含んでいた。
（バックグラウンドウェル）の８つの対照ウェルを含んでいた。
各対照タイプの比の値の平均を算出し、使用して、プレート中の各試験ウェルについて
の阻害パーセントを決定した。試験化合物を、２５μＭから始めて、合計１０の試験濃度
についてＤＭＳＯ中で連続して３倍希釈した。化合物の濃度ごとに２連のウェルを使用し
て、パーセント阻害を決定し、ＩＣ５０曲線を作製した。このアッセイのＩＣ５０値を以
下の表３に提示する。
の阻害パーセントを決定した。試験化合物を、２５μＭから始めて、合計１０の試験濃度
についてＤＭＳＯ中で連続して３倍希釈した。化合物の濃度ごとに２連のウェルを使用し
て、パーセント阻害を決定し、ＩＣ５０曲線を作製した。このアッセイのＩＣ５０値を以
下の表３に提示する。
細胞増殖分析
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２懸濁細胞をＤＳＭＺ（Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（独国ブランシ
ュヴァイク））から購入した。ＲＰＭＩ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、ペニシリン−ストレプ
トマイシン、熱不活化ウシ胎仔血清はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国ニュー
ヨーク州グランドアイランド）から購入した。Ｖ底ポリプロピレン３８４ウェルプレート
はＧｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−オン（米国ノースカロライナ州モンロー）から購入した。細
胞培養３８４ウェル乳白色プレートは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（米国マサチューセッ
ツ州ウォルサム）から購入した。Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）は、Ｐｒｏ
ｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国ウィスコンシン州マディソン）から購入した。
ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ
ＬＬＣ（米国カリフォルニア州サニーベール）から購入した。
Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（独国ブランシ
ュヴァイク））から購入した。ＲＰＭＩ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、ペニシリン−ストレプ
トマイシン、熱不活化ウシ胎仔血清はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国ニュー
ヨーク州グランドアイランド）から購入した。Ｖ底ポリプロピレン３８４ウェルプレート
はＧｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−オン（米国ノースカロライナ州モンロー）から購入した。細
胞培養３８４ウェル乳白色プレートは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（米国マサチューセッ
ツ州ウォルサム）から購入した。Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）は、Ｐｒｏ
ｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国ウィスコンシン州マディソン）から購入した。
ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ
ＬＬＣ（米国カリフォルニア州サニーベール）から購入した。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２懸濁細胞を成長培地（１０％ｖ／ｖ熱不活性化ウシ胎仔血清を添加
したＲＰＭＩ１６４０中で維持し、そして３７℃にて５％ＣＯ２下で培養した。アッセイ
条件下で、細胞をアッセイ培地（２０％熱不活性化ウシ胎仔血清および１００単位／ｍＬ
ペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）中、３７℃にて５％ＣＯ
２下でインキュベートした。
したＲＰＭＩ１６４０中で維持し、そして３７℃にて５％ＣＯ２下で培養した。アッセイ
条件下で、細胞をアッセイ培地（２０％熱不活性化ウシ胎仔血清および１００単位／ｍＬ
ペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）中、３７℃にて５％ＣＯ
２下でインキュベートした。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞系の増殖に関する化合物の効果の評価のために、対数増殖期細
胞を５０μｌのアッセイ培地の最終体積中１２５０細胞／ｍｌの密度で３８４ウェル乳白
色プレート中に蒔いた。１０ｍＭから開始して、ＤＭＳＯ中で３連の９点３倍連続希釈を
実施することによって化合物ソースプレートを調製した（アッセイ中の化合物の最終最高
濃度は２０μＭであり、ＤＭＳＯは０．２％であった）。細胞プレート中の各ウェルに化
合物ストックプレートからの１００ｎＬアリコートを添加した。１００％阻害対照は、２
００ｎＭの最終濃度のスタウロスポリンで処理された細胞から構成され、０％阻害対照は
ＤＭＳＯ処理された細胞から構成されていた。化合物の添加後、アッセイプレートを６日
間３７℃、５％ＣＯ２、相対湿度９０％未満でインキュベートした。細胞培養中に存在す
るＡＴＰの定量化、３５μｌのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）試薬を細胞プ
レートに添加することによって、細胞の生存を測定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５で
発光を読み取った。正規化用量応答曲線の４パラメータ適合を用いて細胞の生存を５０％
阻害する濃度を決定した。このアッセイのＩＣ５０値も以下の表３に提示する。これらの
化合物の質量スペクトルデータも以下の表３に提示する。
胞を５０μｌのアッセイ培地の最終体積中１２５０細胞／ｍｌの密度で３８４ウェル乳白
色プレート中に蒔いた。１０ｍＭから開始して、ＤＭＳＯ中で３連の９点３倍連続希釈を
実施することによって化合物ソースプレートを調製した（アッセイ中の化合物の最終最高
濃度は２０μＭであり、ＤＭＳＯは０．２％であった）。細胞プレート中の各ウェルに化
合物ストックプレートからの１００ｎＬアリコートを添加した。１００％阻害対照は、２
００ｎＭの最終濃度のスタウロスポリンで処理された細胞から構成され、０％阻害対照は
ＤＭＳＯ処理された細胞から構成されていた。化合物の添加後、アッセイプレートを６日
間３７℃、５％ＣＯ２、相対湿度９０％未満でインキュベートした。細胞培養中に存在す
るＡＴＰの定量化、３５μｌのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）試薬を細胞プ
レートに添加することによって、細胞の生存を測定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５で
発光を読み取った。正規化用量応答曲線の４パラメータ適合を用いて細胞の生存を５０％
阻害する濃度を決定した。このアッセイのＩＣ５０値も以下の表３に提示する。これらの
化合物の質量スペクトルデータも以下の表３に提示する。
実施例３：最低中毒濃度（ＬＣＣ）の誘導
細胞増殖は、細胞分裂によって進行し、この結果、分裂前の細胞数に対して、分裂後の
細胞数が倍増することは充分に確立されている。一定の環境条件（例えば、ｐＨ、イオン
強度、温度、細胞密度、タンパク質の培地含有量および成長因子など）下で、細胞は、次
式にしたがった連続的倍加（すなわち分裂）によって増殖するが、ただし、充分な栄養お
よび他の必要とされる因子が入手可能であるものとする。
細胞増殖は、細胞分裂によって進行し、この結果、分裂前の細胞数に対して、分裂後の
細胞数が倍増することは充分に確立されている。一定の環境条件（例えば、ｐＨ、イオン
強度、温度、細胞密度、タンパク質の培地含有量および成長因子など）下で、細胞は、次
式にしたがった連続的倍加（すなわち分裂）によって増殖するが、ただし、充分な栄養お
よび他の必要とされる因子が入手可能であるものとする。
式中、Ｎｔは、観察期間開始後のある時点（ｔ）での細胞数であり、Ｎ０は、観察期間開
始時の細胞数であり、ｔは観察期間開始後の時間であり、そしてｔＤは、細胞倍増に必要
な期間であり、倍増期間とも称される式Ａ．１は、式０．６９３＝ｌｎ（２）を利用して
、底ｅの指数式のより看板な形態に変換することができる。
細胞増殖（ｋｐ）の速度定数は、次のように倍増時間に反比例する。
式Ａ．２とＡ．３とを組み合わせると、
となる。
したがって、式Ａ．４によると、細胞数は対数期成長と称される細胞成長の初期の間で
時間とともに指数関数的に増加することが予想される。式Ａ．４のような指数方程式は、
両側の自然対数をとることによって線形化することができる。
時間とともに指数関数的に増加することが予想される。式Ａ．４のような指数方程式は、
両側の自然対数をとることによって線形化することができる。
したがって、時間の関数としてのｌｎ（Ｎｔ）のプロットによって、ｋｐに等しい勾配
と（Ｎ０）に等しいｙ切片とを有する上昇する直線が得られることが予想される。
と（Ｎ０）に等しいｙ切片とを有する上昇する直線が得られることが予想される。
環境条件の変化は、増殖速度定数ｋｐにおける変化として定量化可能な細胞増殖率の変
化をもたらし得る。増殖率の変化をもたらし得る条件には、観察期間の最初（すなわちｔ
＝０）での抗増殖性化合物の系への導入が含まれる。抗増殖性化合物が細胞増殖に対して
直接的影響を及ぼす場合、時間の関数としてのｌｎ（Ｎｔ）のプロットは、全ての化合物
濃度で引き続き線形であり、化合物の濃度の増加でｋｐの値が減少することが予想される
。
化をもたらし得る。増殖率の変化をもたらし得る条件には、観察期間の最初（すなわちｔ
＝０）での抗増殖性化合物の系への導入が含まれる。抗増殖性化合物が細胞増殖に対して
直接的影響を及ぼす場合、時間の関数としてのｌｎ（Ｎｔ）のプロットは、全ての化合物
濃度で引き続き線形であり、化合物の濃度の増加でｋｐの値が減少することが予想される
。
抗増殖性作用の基本メカニズムに応じて、一部の化合物は増殖速度の変化に即効性がな
い可能性がある。その代わり、化合物の影響が認識される前に潜伏期間があり得る。その
ような場合、時間の関数としてのｌｎ（Ｎｔ）のプロットは二相のようであり、化合物の
影響が始まる時点が相間の分断点として特定され得る。増殖に対する化合物の影響が即効
性であるか、または潜伏期後に始まるかに関わらず、各化合物濃度での増殖の速度定数は
、化合物の影響が始まる時点から実験の観察期間の最後までのｌｎ（Ｎｔ）対時間曲線の
勾配によって最もよく定義される。
い可能性がある。その代わり、化合物の影響が認識される前に潜伏期間があり得る。その
ような場合、時間の関数としてのｌｎ（Ｎｔ）のプロットは二相のようであり、化合物の
影響が始まる時点が相間の分断点として特定され得る。増殖に対する化合物の影響が即効
性であるか、または潜伏期後に始まるかに関わらず、各化合物濃度での増殖の速度定数は
、化合物の影響が始まる時点から実験の観察期間の最後までのｌｎ（Ｎｔ）対時間曲線の
勾配によって最もよく定義される。
増殖細胞に適用された化合物は２つの一般的な方法にうちの１つ、すなわち、さらなる
細胞分裂の阻害（細胞分裂停止）によるか、または細胞死滅（細胞毒性）によって、観察
される増殖に対して影響を及ぼす可能性がある。化合物が細胞分裂停止性である場合、化
合物の濃度を増加させることによって、さらなる細胞分裂がなくなるまでｋｐの値が減少
する。この時点で、細胞成長速度、したがってｋｐの値は０になる。一方、化合物が細胞
毒性である場合、ｋｐの値は、２つの速度定数、すなわち化合物（ｋｇ）の存在下での継
続した細胞成長の速度定数および化合物（ｋｄ）による細胞死滅の速度定数から構成され
る。化合物の一定濃度での増殖の全体的な速度定数は、したがってこれらの相対する速度
定数の絶対値の差になる。
細胞分裂の阻害（細胞分裂停止）によるか、または細胞死滅（細胞毒性）によって、観察
される増殖に対して影響を及ぼす可能性がある。化合物が細胞分裂停止性である場合、化
合物の濃度を増加させることによって、さらなる細胞分裂がなくなるまでｋｐの値が減少
する。この時点で、細胞成長速度、したがってｋｐの値は０になる。一方、化合物が細胞
毒性である場合、ｋｐの値は、２つの速度定数、すなわち化合物（ｋｇ）の存在下での継
続した細胞成長の速度定数および化合物（ｋｄ）による細胞死滅の速度定数から構成され
る。化合物の一定濃度での増殖の全体的な速度定数は、したがってこれらの相対する速度
定数の絶対値の差になる。
細胞成長速度が細胞死滅速度を上回る化合物濃度で、ｋｐの値は正値を有する（すなわ
ち、ｋｐ＞０）。細胞成長速度が細胞死滅速度よりも低い化合物濃度で、ｋｐの値は負の
値を有し（すなわち、ｋｐ＜０）、細胞数は時間とともに減少し、このことは強力な細胞
毒性を示す。ｋｇがｋｄとちょうど一致する場合、全体的な増殖速度定数ｋｐは０の値を
有するであろう。したがって、これよりも高い濃度は明らかに観察できる細胞毒性をもた
らすので、最低中毒濃度（ＬＣＣ）は、ｋｐの値が０に等しくなるような化合物の濃度と
定義できる。注：ＬＣＣより低い濃度で細胞死滅が起こる可能性があるが、残存細胞増殖
よりも低い速度である。ここでの治療は、化合物の作用の生物学的詳細を規定することを
意図しない。むしろ、ここでの目標は、細胞死滅速度が新しい細胞成長を上回る化合物の
濃度を客観的に定量する実際的なパラメータを単に規定することである。実際、ＬＣＣは
、細胞毒性濃度自体ではなく、それを上回ると真の細胞毒性が観察される分断または臨界
濃度を表す。これに関して、ＬＣＣは、それよりも高いとすべての分子がミセル構造に組
み入れられる、脂質、洗剤または他の界面活性剤種の濃度を規定するために使用される臨
界ミセル濃度（ＣＭＣ）などの他の物理的分断点法（physical breakpoint metrics）
と同様にみなすことができる。
ち、ｋｐ＞０）。細胞成長速度が細胞死滅速度よりも低い化合物濃度で、ｋｐの値は負の
値を有し（すなわち、ｋｐ＜０）、細胞数は時間とともに減少し、このことは強力な細胞
毒性を示す。ｋｇがｋｄとちょうど一致する場合、全体的な増殖速度定数ｋｐは０の値を
有するであろう。したがって、これよりも高い濃度は明らかに観察できる細胞毒性をもた
らすので、最低中毒濃度（ＬＣＣ）は、ｋｐの値が０に等しくなるような化合物の濃度と
定義できる。注：ＬＣＣより低い濃度で細胞死滅が起こる可能性があるが、残存細胞増殖
よりも低い速度である。ここでの治療は、化合物の作用の生物学的詳細を規定することを
意図しない。むしろ、ここでの目標は、細胞死滅速度が新しい細胞成長を上回る化合物の
濃度を客観的に定量する実際的なパラメータを単に規定することである。実際、ＬＣＣは
、細胞毒性濃度自体ではなく、それを上回ると真の細胞毒性が観察される分断または臨界
濃度を表す。これに関して、ＬＣＣは、それよりも高いとすべての分子がミセル構造に組
み入れられる、脂質、洗剤または他の界面活性剤種の濃度を規定するために使用される臨
界ミセル濃度（ＣＭＣ）などの他の物理的分断点法（physical breakpoint metrics）
と同様にみなすことができる。
伝統的には、細胞成長に対する抗増殖性化合物の影響は、細胞増殖速度が化合物の非存
在下（すなわち、ビヒクルまたは溶媒対照サンプルについて）で観察される速度の半分に
減少する化合物の濃度と定義される、ＩＣ５０値によって最も一般的に定量される。しか
しながら、ＩＣ５０は細胞分裂停止性と細胞毒性化合物とを調査員に区別させない。対照
的に、ＬＣＣはそのような区別すること、および強力な細胞毒性挙動への遷移が起こる濃
度をさらに定量することを容易に可能にする。
在下（すなわち、ビヒクルまたは溶媒対照サンプルについて）で観察される速度の半分に
減少する化合物の濃度と定義される、ＩＣ５０値によって最も一般的に定量される。しか
しながら、ＩＣ５０は細胞分裂停止性と細胞毒性化合物とを調査員に区別させない。対照
的に、ＬＣＣはそのような区別すること、および強力な細胞毒性挙動への遷移が起こる濃
度をさらに定量することを容易に可能にする。
観察期間を影響の開始から実験の終わりに限定する場合、データは時間の関数としての
ｌｎ（Ｎｔ）としてプロットすると線形式に概して充分適合する（上記参照）。この種類
の適合から、ｋｐの値を試験した化合物の各濃度で決定することができる。化合物濃度（
［Ｉ］）の関数としてのｋｐの値の再プロットは、下降する等温線の形態を有し、［Ｉ］
＝０でｋｍａｘの最大値（ビヒクルまたは溶媒対照サンプルによって定義される）および
無限化合物濃度でｋｍｉｎの最小値を有する。
ｌｎ（Ｎｔ）としてプロットすると線形式に概して充分適合する（上記参照）。この種類
の適合から、ｋｐの値を試験した化合物の各濃度で決定することができる。化合物濃度（
［Ｉ］）の関数としてのｋｐの値の再プロットは、下降する等温線の形態を有し、［Ｉ］
＝０でｋｍａｘの最大値（ビヒクルまたは溶媒対照サンプルによって定義される）および
無限化合物濃度でｋｍｉｎの最小値を有する。
式中、Ｉｍｉｄはｋｍａｘおよびｋｍｉｎの値の中間であるｋｐ値をもたらす化合物濃度
である（完全かつ純粋に細胞分裂停止性化合物の場合を除いて、Ｉｍｉｄの値はＩＣ５０
と同じではないことに注意する）。しがたって、再プロットデータを式Ａ．７に適合させ
ることによって、ｋｍａｘ、ｋｍｉｎおよびＩｍｉｄの推定値が得られる。化合物が細胞
分裂停止性（本明細書中で定義のとおり）である場合、ｋｍｉｎの値は０未満であり得な
い。細胞毒性化合物について、ｋｍｉｎは０未満であり、ｋｍｉｎの絶対値は死滅細胞に
おける化合物の有効性に直接関係がある。
式Ａ．７から誘導される近似値は、ＬＣＣの値を決定するためにも使用できる。定義に
より、［Ｉ］＝ＬＣＣである場合、ｋｐ＝０である。しがたって、これらの条件下で、式
Ａ．７は
より、［Ｉ］＝ＬＣＣである場合、ｋｐ＝０である。しがたって、これらの条件下で、式
Ａ．７は
になる。
式Ａ．８を代数的に並べ替えてＬＣＣについての式を得る。
この分析は、非線形曲線適合ソフトウェアで実施するのが簡単であり、薬物発見および
開発過程全体にわたる化合物活性の細胞アッセイの間に適用することができる。このよう
にして、ＬＣＣは化合物ＳＡＲ（構造活性相関）の評価のための有益な方法を提供し得る
。
開発過程全体にわたる化合物活性の細胞アッセイの間に適用することができる。このよう
にして、ＬＣＣは化合物ＳＡＲ（構造活性相関）の評価のための有益な方法を提供し得る
。
実施例４：インビボアッセイ
マウス
Ｆｅｍａｌｅ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）マウス（ＣＢ１７／Ｉｃｒ
−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ）または無胸腺ヌードマウス（Ｃｒｌ：ＮＵ（Ｎｃｒ）−Ｆｏｘｎ１ｎｕ
， Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は８週令であり、実験の
第１日で１６．０〜２１．１ｇの範囲の体重（ＢＷ）を有していた。動物に水を自由に与
え（逆浸透１ｐｐｍ Ｃｌ）、ＮＩＨ３１Ｍｏｄｉｆｉｅｄ およびＩｒｒａｄｉａｔｅ
ｄ Ｌａｂ Ｄｉｅｔ（登録商標）は、１８．０％の粗タンパク質、５．０％の粗脂肪、
および５．０％の粗繊維から構成されていた。マウスを、２０〜２２℃（６８〜７２°Ｆ
）および湿度４０〜６０％で１２時間光サイクルで静的マイクロアイソレーター中、照射
されたＥｎｒｉｃｈ−ｏ’ｃｏｂｓ（商標）寝床上で飼育した。すべての手順は、拘束、
畜産、外科手術、餌および水分規制、および獣医医療に関するthe Guide for Care a
nd Use of Laboratory Animals の勧告にしたがった。
マウス
Ｆｅｍａｌｅ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）マウス（ＣＢ１７／Ｉｃｒ
−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ）または無胸腺ヌードマウス（Ｃｒｌ：ＮＵ（Ｎｃｒ）−Ｆｏｘｎ１ｎｕ
， Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は８週令であり、実験の
第１日で１６．０〜２１．１ｇの範囲の体重（ＢＷ）を有していた。動物に水を自由に与
え（逆浸透１ｐｐｍ Ｃｌ）、ＮＩＨ３１Ｍｏｄｉｆｉｅｄ およびＩｒｒａｄｉａｔｅ
ｄ Ｌａｂ Ｄｉｅｔ（登録商標）は、１８．０％の粗タンパク質、５．０％の粗脂肪、
および５．０％の粗繊維から構成されていた。マウスを、２０〜２２℃（６８〜７２°Ｆ
）および湿度４０〜６０％で１２時間光サイクルで静的マイクロアイソレーター中、照射
されたＥｎｒｉｃｈ−ｏ’ｃｏｂｓ（商標）寝床上で飼育した。すべての手順は、拘束、
畜産、外科手術、餌および水分規制、および獣医医療に関するthe Guide for Care a
nd Use of Laboratory Animals の勧告にしたがった。
腫瘍細胞培養
ヒトリンパ腫細胞系を異なる供給源（ＡＴＣＣ、ＤＳＭＺ）から入手し、例えば、Ｋａ
ｒｐａｓ−４２２はＤＳＭＺから入手した。細胞系を、１００単位／ｍＬのペニシリンＧ
ナトリウム塩、１００ｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１％のＨＥＰＥＳ、および１％の
Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地中懸濁培養として維持した。培地に２０％
ウシ胎仔血清を添加した。細胞を、５％ＣＯ２および９５％空気の雰囲気中、３７℃の加
湿インキュベーター中の組織フラスコ中で培養した。
ヒトリンパ腫細胞系を異なる供給源（ＡＴＣＣ、ＤＳＭＺ）から入手し、例えば、Ｋａ
ｒｐａｓ−４２２はＤＳＭＺから入手した。細胞系を、１００単位／ｍＬのペニシリンＧ
ナトリウム塩、１００ｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１％のＨＥＰＥＳ、および１％の
Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地中懸濁培養として維持した。培地に２０％
ウシ胎仔血清を添加した。細胞を、５％ＣＯ２および９５％空気の雰囲気中、３７℃の加
湿インキュベーター中の組織フラスコ中で培養した。
インビボ腫瘍移植
ヒトリンパ腫細胞系、例えば、Ｋａｒｐａｓ−４２２細胞を対数中期（mid-log phase
）成長中に収集し、そしてＲＰＭＩ−１６４０基礎培地（base media）および５０％Ｍ
ａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（ＲＰＭＩ：Ｍａｔｒｉｇｅ
ｌ＝１：１）中に再懸濁させた。各マウスに１×１０７細胞（０．２ｍＬ細胞懸濁液）を
右脇腹で皮下投与した。腫瘍を二次元でカリパスにて測定して、所望の８０〜１２０ｍｍ
３の範囲に到達した平均体積として成長をモニタリングした。腫瘍サイズ（ｍｍ３）を：
ヒトリンパ腫細胞系、例えば、Ｋａｒｐａｓ−４２２細胞を対数中期（mid-log phase
）成長中に収集し、そしてＲＰＭＩ−１６４０基礎培地（base media）および５０％Ｍ
ａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（ＲＰＭＩ：Ｍａｔｒｉｇｅ
ｌ＝１：１）中に再懸濁させた。各マウスに１×１０７細胞（０．２ｍＬ細胞懸濁液）を
右脇腹で皮下投与した。腫瘍を二次元でカリパスにて測定して、所望の８０〜１２０ｍｍ
３の範囲に到達した平均体積として成長をモニタリングした。腫瘍サイズ（ｍｍ３）を：
（式中、ｗ＝腫瘍の幅（ｍｍ）およびｌ＝腫瘍の長さ（ｍｍ））から算出した。腫瘍重量
は、１ｍｇが１ｍｍ３の腫瘍体積に等しいと仮定して推定することができる。１〜３０日
後、１４５〜１５０ｍｍ３の腫瘍を有するマウスを、１４７ｍｍ３の平均腫瘍体積を有す
る治療群に分類した。
被験物質
試験化合物を室温で保存し、光から保護した。各治療日に、０．５％カルボキシメチル
セルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）中に懸濁させ、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８
０を脱イオン水中に懸濁させることによって、新鮮な化合物配合物を調製した。脱イオン
水中ビヒクル、０．５％ＮａＣＭＣおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０を使用し
て、対照群を同じスケジュールで処理した。配合物を投与まで光から遠ざけて４℃にて保
存した。特別の定めのない限り、この実験で参照され、試験される化合物は、この段落で
ふれた、それらの特定の塩形態であった。
試験化合物を室温で保存し、光から保護した。各治療日に、０．５％カルボキシメチル
セルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）中に懸濁させ、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８
０を脱イオン水中に懸濁させることによって、新鮮な化合物配合物を調製した。脱イオン
水中ビヒクル、０．５％ＮａＣＭＣおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０を使用し
て、対照群を同じスケジュールで処理した。配合物を投与まで光から遠ざけて４℃にて保
存した。特別の定めのない限り、この実験で参照され、試験される化合物は、この段落で
ふれた、それらの特定の塩形態であった。
治療プラン
６２．５〜５００ｍｇ／ｋｇの範囲の化合物用量にてＢＩＤ（１日２回、１２時間ごと
）スケジュールで様々な日数、経口栄養投与（oral gavage）によりマウスを治療した。
各用量を０．２ｍＬ／２０ｇマウス（１０ｍＬ／ｋｇ）の体積で送達し、個々の動物の最
後に記録された重量について調節した。最長治療期間は２８日であった。
６２．５〜５００ｍｇ／ｋｇの範囲の化合物用量にてＢＩＤ（１日２回、１２時間ごと
）スケジュールで様々な日数、経口栄養投与（oral gavage）によりマウスを治療した。
各用量を０．２ｍＬ／２０ｇマウス（１０ｍＬ／ｋｇ）の体積で送達し、個々の動物の最
後に記録された重量について調節した。最長治療期間は２８日であった。
中央腫瘍体積（ＭＴＶ）および腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）分析
治療効果を最終治療日に測定した。最終日に評価可能な、動物ｎ匹についての中央腫瘍
体積ＭＴＶ（ｎ）を各群について測定した。パーセント腫瘍成長阻害（％ＴＧＩ）はいく
つかの方法で定義することができる。まず、指定の対照群のＭＴＶ（ｎ）と薬物治療群の
ＭＴＶ（ｎ）との差を、対照群のＭＴＶ（ｎ）のパーセンテージとして表す：
治療効果を最終治療日に測定した。最終日に評価可能な、動物ｎ匹についての中央腫瘍
体積ＭＴＶ（ｎ）を各群について測定した。パーセント腫瘍成長阻害（％ＴＧＩ）はいく
つかの方法で定義することができる。まず、指定の対照群のＭＴＶ（ｎ）と薬物治療群の
ＭＴＶ（ｎ）との差を、対照群のＭＴＶ（ｎ）のパーセンテージとして表す：
％ＴＧＩを算出する別の方法は、第１日から第ｎ日までの腫瘍サイズの変化を考慮し、
ｎは最終治療日である。
ｎは最終治療日である。
毒性
動物を第１日〜第５日で毎日計量し、その後、実験完了まで１週間に２回計量した。マ
ウスを、文書化された、治療に関連する有害な副作用の明白な徴候について頻繁に調査し
た。最大耐量（ＭＴＤ）についての許容される毒性は、試験中の２０％未満の群平均ＢＷ
損失、および１０％以下のＴＲ死による死亡率と定義された。死は、臨床的兆候および／
もしくは解剖によって証明される治療副作用に起因するか、または投薬期間中原因不明の
場合、ＴＲとして分類される。死が治療の副作用と無関係であるという証拠がある場合、
死はＮＴＲと分類される。投薬期間中のＮＴＲ死は、典型的にはＮＴＲａ（事故または人
的ミスによる）またはＮＴＲｍ（解剖で確認される浸潤および／または転移による腫瘍伝
播）として分類される。投薬期間中に原因不明で死ぬ経口治療された動物は、グループ性
能がＴＲ分類を支持せず、投薬過誤を排除するためにＴＲ分類が実行可能でない場合はＮ
ＴＲｕと分類することができる。
動物を第１日〜第５日で毎日計量し、その後、実験完了まで１週間に２回計量した。マ
ウスを、文書化された、治療に関連する有害な副作用の明白な徴候について頻繁に調査し
た。最大耐量（ＭＴＤ）についての許容される毒性は、試験中の２０％未満の群平均ＢＷ
損失、および１０％以下のＴＲ死による死亡率と定義された。死は、臨床的兆候および／
もしくは解剖によって証明される治療副作用に起因するか、または投薬期間中原因不明の
場合、ＴＲとして分類される。死が治療の副作用と無関係であるという証拠がある場合、
死はＮＴＲと分類される。投薬期間中のＮＴＲ死は、典型的にはＮＴＲａ（事故または人
的ミスによる）またはＮＴＲｍ（解剖で確認される浸潤および／または転移による腫瘍伝
播）として分類される。投薬期間中に原因不明で死ぬ経口治療された動物は、グループ性
能がＴＲ分類を支持せず、投薬過誤を排除するためにＴＲ分類が実行可能でない場合はＮ
ＴＲｕと分類することができる。
サンプリング
実験中の第７日または第２８日に、マウスをあらかじめ特定された方法でサンプリング
して、腫瘍における標的阻害を評価する。腫瘍を特定のマウスからＲＮＡｓｅのない条件
下で収集し、２等分する。各動物からの凍結腫瘍組織を液体Ｎ２中で急速冷凍し、乳鉢お
よび乳棒で微粉化する。
実験中の第７日または第２８日に、マウスをあらかじめ特定された方法でサンプリング
して、腫瘍における標的阻害を評価する。腫瘍を特定のマウスからＲＮＡｓｅのない条件
下で収集し、２等分する。各動物からの凍結腫瘍組織を液体Ｎ２中で急速冷凍し、乳鉢お
よび乳棒で微粉化する。
統計およびグラフ分析
全ての統計およびグラフ分析をＷｉｎｄｏｗｓ用Ｐｒｉｓｍ ３．０３（ＧｒａｐｈＰ
ａｄ）で実施する。治療期間全体にわたって対照と治療群との統計的有意性を試験するた
めに、反復測定ＡＮＯＶＡ試験とそれに続く試験後のＤｕｎｎｅｔｓ多重比較後試験また
は２ウェイＡＮＯＶＡ試験を用いた。Ｐｒｉｓｍは結果を、Ｐ＞０．０５で非有意（ｎｓ
）、０．０１＜Ｐ＜０．０５で有意（「＊」で記号化）、０．００１＜Ｐ＜０．０１で非
常に有意（「＊＊」）、およびＰ＜０．００１で極度に有意（「＊＊＊」）として報告す
る。
全ての統計およびグラフ分析をＷｉｎｄｏｗｓ用Ｐｒｉｓｍ ３．０３（ＧｒａｐｈＰ
ａｄ）で実施する。治療期間全体にわたって対照と治療群との統計的有意性を試験するた
めに、反復測定ＡＮＯＶＡ試験とそれに続く試験後のＤｕｎｎｅｔｓ多重比較後試験また
は２ウェイＡＮＯＶＡ試験を用いた。Ｐｒｉｓｍは結果を、Ｐ＞０．０５で非有意（ｎｓ
）、０．０１＜Ｐ＜０．０５で有意（「＊」で記号化）、０．００１＜Ｐ＜０．０１で非
常に有意（「＊＊」）、およびＰ＜０．００１で極度に有意（「＊＊＊」）として報告す
る。
ヒストン抽出
ヒストンの単離のために、６０〜９０ｍｇの腫瘍組織を１．５ｍｌの核抽出緩衝液（１
０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＫＣｌ、１％のＴｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００、８．６％のスクロース、＋Ｒｏｃｈｅプロテアーゼ阻害剤錠剤１８３６
１４５）中で均質化し、５分間氷上でインキュベートする。核を、６００ｇで５分間４℃
にて遠心分離することによって集め、ＰＢＳ中で１回洗浄した。上清を除去し、１５分ご
とにボルテックスしながら、０，４Ｎの冷硫酸で１時間抽出した。抽出物を１０，０００
ｒｐｍで１０分間４℃にて遠心分離することによって清澄化し、１０×体積の氷冷アセト
ンを含む新しいミクロ遠心管に移す。ヒストンを−２０℃で２時間〜一晩析出させ、１０
，０００ｇで１０分間遠心分離によってペレット化し、そして水中に再懸濁させた。
ヒストンの単離のために、６０〜９０ｍｇの腫瘍組織を１．５ｍｌの核抽出緩衝液（１
０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＫＣｌ、１％のＴｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００、８．６％のスクロース、＋Ｒｏｃｈｅプロテアーゼ阻害剤錠剤１８３６
１４５）中で均質化し、５分間氷上でインキュベートする。核を、６００ｇで５分間４℃
にて遠心分離することによって集め、ＰＢＳ中で１回洗浄した。上清を除去し、１５分ご
とにボルテックスしながら、０，４Ｎの冷硫酸で１時間抽出した。抽出物を１０，０００
ｒｐｍで１０分間４℃にて遠心分離することによって清澄化し、１０×体積の氷冷アセト
ンを含む新しいミクロ遠心管に移す。ヒストンを−２０℃で２時間〜一晩析出させ、１０
，０００ｇで１０分間遠心分離によってペレット化し、そして水中に再懸濁させた。
ＥＬＩＳＡ
ヒストンをコーティング緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％ＢＳＡ）中糖濃度で調製して、０
．５ｎｇ／ｕＬのサンプルを得、そして１００ｕＬのサンプルまたは標準を２連で２ ９
６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｍｍｕｌｏｎ
４ＨＢＸ ＃３８８５）に添加した。プレートを密封し、一晩４℃でインキュベートし
た。翌日、プレートをＢｉｏ Ｔｅｋプレートウォッシャーにより３００ｕＬ／ウェルの
ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０； １０ＸＰＢＳＴ、ＫＰＬ ＃５１−
１４−０２）で３回洗浄した。プレートを３００ｕＬ／ウェルの希釈剤（ＰＢＳ＋２％Ｂ
ＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）でブロックし、室温で２時間インキュベートし、そし
てＰＢＳＴで３回洗浄した。すべての抗体を希釈剤中で希釈した。１００ｕＬ／ウェルの
抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（ＣＳＴ ＃９７３３、５０％グリセロールストック１：１，０００
）または抗全Ｈ３（Ａｂｃａｍ ａｂ１７９１、５０％グリセロール１：１０，０００）
を各プレートに添加した。プレートを９０分間室温にてインキュベートし、そしてＰＢＳ
Ｔで３回洗浄した。１００ｕＬ／ウェルの抗Ｒｂ−ＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎ
ａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ７０７４）を１：２，０００でＨ３Ｋ２７Ｍｅ３
プレートに添加し、１：６，０００でＨ３プレートに添加し、そして９０分間室温でイン
キュベートした。プレートを４回ＰＢＳＴで洗浄した。検出のために、１００ｕＬ／ウェ
ルのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＃ＴＭＢＳ）を添加し、そ
してプレートを暗所で室温にて５分間インキュベートした。反応を１００ｕＬ／ウェルの
１Ｎ Ｈ２ＳＯ４で停止させた。４５０ｎｍでの吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５
Ｍｉｃｒｏプレートリーダーで読み取った。
ヒストンをコーティング緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％ＢＳＡ）中糖濃度で調製して、０
．５ｎｇ／ｕＬのサンプルを得、そして１００ｕＬのサンプルまたは標準を２連で２ ９
６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｍｍｕｌｏｎ
４ＨＢＸ ＃３８８５）に添加した。プレートを密封し、一晩４℃でインキュベートし
た。翌日、プレートをＢｉｏ Ｔｅｋプレートウォッシャーにより３００ｕＬ／ウェルの
ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０； １０ＸＰＢＳＴ、ＫＰＬ ＃５１−
１４−０２）で３回洗浄した。プレートを３００ｕＬ／ウェルの希釈剤（ＰＢＳ＋２％Ｂ
ＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）でブロックし、室温で２時間インキュベートし、そし
てＰＢＳＴで３回洗浄した。すべての抗体を希釈剤中で希釈した。１００ｕＬ／ウェルの
抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（ＣＳＴ ＃９７３３、５０％グリセロールストック１：１，０００
）または抗全Ｈ３（Ａｂｃａｍ ａｂ１７９１、５０％グリセロール１：１０，０００）
を各プレートに添加した。プレートを９０分間室温にてインキュベートし、そしてＰＢＳ
Ｔで３回洗浄した。１００ｕＬ／ウェルの抗Ｒｂ−ＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎ
ａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ７０７４）を１：２，０００でＨ３Ｋ２７Ｍｅ３
プレートに添加し、１：６，０００でＨ３プレートに添加し、そして９０分間室温でイン
キュベートした。プレートを４回ＰＢＳＴで洗浄した。検出のために、１００ｕＬ／ウェ
ルのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＃ＴＭＢＳ）を添加し、そ
してプレートを暗所で室温にて５分間インキュベートした。反応を１００ｕＬ／ウェルの
１Ｎ Ｈ２ＳＯ４で停止させた。４５０ｎｍでの吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５
Ｍｉｃｒｏプレートリーダーで読み取った。
７日ＰＤ研究
化合物がインビボで腫瘍におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３ヒストンマークを調節できるかどう
かを試験するために、異種移植腫瘍を有するマウスを６２．５、８３．３、１２５、１６
６．７、２５０、３３３．３、または５００ｍｇ／ｋｇＢＩＤまたはビヒクル（ＢＩＤス
ケジュール）の化合物で７日間治療した。１群あたり５匹の動物であった。動物を最終投
与の３時間後に安楽死させ、腫瘍を上述のように凍結状態で保存した。ヒストン抽出後、
ヒストンＨ３Ｋ２７（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）または全ヒストンＨ３のトリメチル化状態に対
する抗体を使用したＥＬＩＳＡアッセイにサンプルを適用した。これらのデータに基づい
て、全Ｈ３Ｋ２７に対する全体的メチル化の比を算出した。ＥＬＩＳＡによって測定され
る全群についての平均全体的メチル化比は、ビヒクルと比較した標的阻害範囲を示す。こ
の実験のデザインを表４Ａに示す。
化合物がインビボで腫瘍におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３ヒストンマークを調節できるかどう
かを試験するために、異種移植腫瘍を有するマウスを６２．５、８３．３、１２５、１６
６．７、２５０、３３３．３、または５００ｍｇ／ｋｇＢＩＤまたはビヒクル（ＢＩＤス
ケジュール）の化合物で７日間治療した。１群あたり５匹の動物であった。動物を最終投
与の３時間後に安楽死させ、腫瘍を上述のように凍結状態で保存した。ヒストン抽出後、
ヒストンＨ３Ｋ２７（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）または全ヒストンＨ３のトリメチル化状態に対
する抗体を使用したＥＬＩＳＡアッセイにサンプルを適用した。これらのデータに基づい
て、全Ｈ３Ｋ２７に対する全体的メチル化の比を算出した。ＥＬＩＳＡによって測定され
る全群についての平均全体的メチル化比は、ビヒクルと比較した標的阻害範囲を示す。こ
の実験のデザインを表４Ａに示す。
実施例５：Ｋａｒｐａｓ−４２２異種移植片モデルにおいて用量を増加させる有効性研
究
化合物がインビボで抗腫瘍効果を誘導できるかどうかを試験するために、異種移植腫瘍
を有するマウスを、例えば、６２．５、１２５、２５０、または５００ｍｇ／ｋｇＢＩＤ
の化合物で２８日間治療した。実験の有効性群については１群あたり１０匹のマウスであ
った。ビヒクルおよび試験化合物治療群について２８日の治療期間にわたる腫瘍成長を測
定した。
究
化合物がインビボで抗腫瘍効果を誘導できるかどうかを試験するために、異種移植腫瘍
を有するマウスを、例えば、６２．５、１２５、２５０、または５００ｍｇ／ｋｇＢＩＤ
の化合物で２８日間治療した。実験の有効性群については１群あたり１０匹のマウスであ
った。ビヒクルおよび試験化合物治療群について２８日の治療期間にわたる腫瘍成長を測
定した。
有効性コホートについては第２８日の実験の最後で集めた腫瘍からヒストンを抽出した
（両コホートについて最終投薬の３時間後）。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチルマークを用量に依
存した方法で治療での調節について評価した。
（両コホートについて最終投薬の３時間後）。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチルマークを用量に依
存した方法で治療での調節について評価した。
この実験のデザインを表４Ｂに示す。
ＴＶを、楕円体の体積についての式（ＬｘＷ２）／２（式中、ＬおよびＷはそれぞれ直
交するながらおよび幅の測定値（ｍｍ）である）によりキャリパー測定から算出した。
交するながらおよび幅の測定値（ｍｍ）である）によりキャリパー測定から算出した。
データを平均±標準偏差（ＳＤ）として表した。ビヒクル処置群と化合物治療群とのＴ
Ｖにおける差を反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）とそれに続くダネット型多重比較検定に
よって分析した。０．０５未満のＰ値（両側）は統計的に有意と見なされる。Ｐｒｉｓｍ
５ソフトウェアパッケージバージョン５．０４（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ
， Ｉｎｃ．， ＣＡ， ＵＳＡ）を用いて統計分析を実施した。
Ｖにおける差を反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）とそれに続くダネット型多重比較検定に
よって分析した。０．０５未満のＰ値（両側）は統計的に有意と見なされる。Ｐｒｉｓｍ
５ソフトウェアパッケージバージョン５．０４（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ
， Ｉｎｃ．， ＣＡ， ＵＳＡ）を用いて統計分析を実施した。
上記研究は、化合物１および化合物ＡがどちらもＫａｒｐａｓ−４２２異種移植片モデ
ルにおいて腫瘍停止および退縮を示し、充分に耐容性であることを示した。例えば、図１
および２を参照のこと。さらに、上記研究からの化合物１または化合物Ａの薬物動態学的
および薬力学的特性を図３〜８に示す。図３は、治療後７日もしくは２８日での腫瘍にお
ける化合物１の濃度または治療後７日での腫瘍における化合物Ａの濃度を示す図である。
この図中、「Ａ」〜「Ｇ」は、それぞれ６２．５、８３．３、１２５、１６６．７、２５
０、３３３．３、および５００ｍｇ／ｋｇの投与量で化合物１投与後７日を示す「Ｈ」お
よび「Ｉ」は、それぞれ１２５および２５０ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物Ａの投与後７日
を示す；そして「Ｊ」〜「Ｌ」は、それぞれ６２．５、１２５および２５０ｍｇ／ｋｇの
投薬量の化合物１の投与後２８日を示す。注：第２８日のサンプルについて、２５０ｍｇ
／ｋｇの化合物Ａおよび５００ｍｇ／ｋｇの化合物１で治療した群からの腫瘍は、分析に
は小さすぎた；それぞれ２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１および１２５ｍｇ／ｋｇ化合物１で
治療された群から１０のうち１つだけ、１０のうちの５だけが分析に充分な大きさであっ
た。図４は、治療後７日または２８日の結晶中の化合物１または化合物Ａの濃度を示す図
である。上の破線は化合物Ａの血漿タンパク質結合（ＰＰＢ）補正ＬＣＣを示し、下の破
線は化合物１のＰＰＢ補正ＬＣＣを示す。図５は、化合物１または化合物Ａで７日間治療
されたマウス由来のＫＡＲＰＡＳ−４２２腫瘍における全体的Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化
を示す図である。この図中、「Ａ」はビヒクル治療を示す；「Ｂ」〜「Ｈ」は、それぞれ
６２．５、８３．３、１２５、１６６．７、２５０、３３３．３、および５００ｍｇ／ｋ
ｇの投薬量の化合物１での治療を示す；そして「Ｉ」および「Ｊ」は、それぞれ１２５お
よび２５０ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物Ａでの治療を示す。図６は、化合物１で２８日間
治療したマウス由来のＫＡＲＰＡＳ−４２２腫瘍における全体的なＨ３Ｋ２７ｍｅ３メチ
ル化を示す図である。図７は、化合物１または化合物Ａで７日間治療した異種移植腫瘍を
有するマウス由来の骨髄における全体的Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化を示す図である。この
図中、「Ａ」はビヒクル治療を示す；「Ｂ」〜「Ｈ」は、それぞれ６２．５、８３．３、
１２５、１６６．７、２５０、３３３．３、および５００ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物１
での治療を示す；そして「Ｉ」および「Ｊ」は、それぞれ１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ
の投薬量の化合物Ａでの治療を示す。図８は、化合物１で２８日間治療した異種移植腫瘍
を有するマウス由来の骨髄における全体的Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化を示す図である。こ
の図中、「Ａ」はビヒクル治療を示す；「Ｂ」〜「Ｅ」は、それぞれ６２．５、１２５、
２５０、および５００ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物１での治療を示す；そして「Ｆ」は２
５０ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物Ａでの治療を示す。
ルにおいて腫瘍停止および退縮を示し、充分に耐容性であることを示した。例えば、図１
および２を参照のこと。さらに、上記研究からの化合物１または化合物Ａの薬物動態学的
および薬力学的特性を図３〜８に示す。図３は、治療後７日もしくは２８日での腫瘍にお
ける化合物１の濃度または治療後７日での腫瘍における化合物Ａの濃度を示す図である。
この図中、「Ａ」〜「Ｇ」は、それぞれ６２．５、８３．３、１２５、１６６．７、２５
０、３３３．３、および５００ｍｇ／ｋｇの投与量で化合物１投与後７日を示す「Ｈ」お
よび「Ｉ」は、それぞれ１２５および２５０ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物Ａの投与後７日
を示す；そして「Ｊ」〜「Ｌ」は、それぞれ６２．５、１２５および２５０ｍｇ／ｋｇの
投薬量の化合物１の投与後２８日を示す。注：第２８日のサンプルについて、２５０ｍｇ
／ｋｇの化合物Ａおよび５００ｍｇ／ｋｇの化合物１で治療した群からの腫瘍は、分析に
は小さすぎた；それぞれ２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１および１２５ｍｇ／ｋｇ化合物１で
治療された群から１０のうち１つだけ、１０のうちの５だけが分析に充分な大きさであっ
た。図４は、治療後７日または２８日の結晶中の化合物１または化合物Ａの濃度を示す図
である。上の破線は化合物Ａの血漿タンパク質結合（ＰＰＢ）補正ＬＣＣを示し、下の破
線は化合物１のＰＰＢ補正ＬＣＣを示す。図５は、化合物１または化合物Ａで７日間治療
されたマウス由来のＫＡＲＰＡＳ−４２２腫瘍における全体的Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化
を示す図である。この図中、「Ａ」はビヒクル治療を示す；「Ｂ」〜「Ｈ」は、それぞれ
６２．５、８３．３、１２５、１６６．７、２５０、３３３．３、および５００ｍｇ／ｋ
ｇの投薬量の化合物１での治療を示す；そして「Ｉ」および「Ｊ」は、それぞれ１２５お
よび２５０ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物Ａでの治療を示す。図６は、化合物１で２８日間
治療したマウス由来のＫＡＲＰＡＳ−４２２腫瘍における全体的なＨ３Ｋ２７ｍｅ３メチ
ル化を示す図である。図７は、化合物１または化合物Ａで７日間治療した異種移植腫瘍を
有するマウス由来の骨髄における全体的Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化を示す図である。この
図中、「Ａ」はビヒクル治療を示す；「Ｂ」〜「Ｈ」は、それぞれ６２．５、８３．３、
１２５、１６６．７、２５０、３３３．３、および５００ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物１
での治療を示す；そして「Ｉ」および「Ｊ」は、それぞれ１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ
の投薬量の化合物Ａでの治療を示す。図８は、化合物１で２８日間治療した異種移植腫瘍
を有するマウス由来の骨髄における全体的Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化を示す図である。こ
の図中、「Ａ」はビヒクル治療を示す；「Ｂ」〜「Ｅ」は、それぞれ６２．５、１２５、
２５０、および５００ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物１での治療を示す；そして「Ｆ」は２
５０ｍｇ／ｋｇの投薬量の化合物Ａでの治療を示す。
以下の実施例６〜８では、実験および分析は、例えば、J. Lin, Pharmaceutical Re
search, 2006, 23(6):1089-1116; L. Di et al., Comb Chem High Throughput
Screen. 2008, 11(6):469-76; M. Fonsi et al., Journal of Biomolecular
Screening, 2008, 13:862; E. Sjogren et al., Drug Metab. Dispos. 2012
, 40:2273-2279; T.D. Bjornsson, et al., Drug Metab Dispos, 2003, 31(7)
:815-832; J.B. Houston and K.E. Kenworthy, Drug Metab Dispos, 2000, 28
(3):246-254; and S.W. Grimm et al., Drug Metab Dispos, 2009, 37(7):135
5-1370（それぞれの内容は全体として参照により本明細書中に組み込まれる）で記載され
ているものと類似の方法および技術で実施した。
search, 2006, 23(6):1089-1116; L. Di et al., Comb Chem High Throughput
Screen. 2008, 11(6):469-76; M. Fonsi et al., Journal of Biomolecular
Screening, 2008, 13:862; E. Sjogren et al., Drug Metab. Dispos. 2012
, 40:2273-2279; T.D. Bjornsson, et al., Drug Metab Dispos, 2003, 31(7)
:815-832; J.B. Houston and K.E. Kenworthy, Drug Metab Dispos, 2000, 28
(3):246-254; and S.W. Grimm et al., Drug Metab Dispos, 2009, 37(7):135
5-1370（それぞれの内容は全体として参照により本明細書中に組み込まれる）で記載され
ているものと類似の方法および技術で実施した。
実施例６：肝臓ミクロソームにおける代謝的安定性の評価
化合物１、２、および１０５の代謝的安定性を、マウス、ラット、イヌ、サル、および
ヒトを含む５種からの肝臓ミクロソームにおいて評価した。
ヒトを含む５種からの肝臓ミクロソームにおいて評価した。
方法：インキュベーションを、１００ミリモル／Ｌのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．
４）、１ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソーム、８濃度の試験化合物（すなわち、化合物１、２
、または１０５）、および２ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨから構成される合計２５０μＬを含
む９６ウェルプレートで実施した。インキュベーションに使用した化合物の濃度は、４５
．７ｎＭ〜１００μＭの範囲であった。ＮＡＤＰＨの添加を使用して反応を開始し、イン
キュベーションを３７℃で振盪水浴中で最高６０分間実施した。内部標準（ＩＳ）を含む
等体積の停止溶液を添加することによって、反応を停止させた。サンプルを次いで分析前
に３０００ＲＰＭにて最低５分間冷蔵遠心分離機でスピンさせた。ＬＣ／ＴＯＦＭＳを使
用することによって測定される、試験化合物のインキュベーションミックス中の喪失量を
使用して、肝臓ミクロソームでの固有クリアランス値を推定した。ＬＣ／ＴＯＦＭＳシス
テムは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＩＬ−ＨＴＣオートサンプラー（日本国京都府）、２つの
ポンプＬＣ−２０ＡＤ； Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｃｏｒｐ．）、および飛行時間型質量分析
計（ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｑｓｔａｒ Ｅｌｉｔｅ， ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア
州フォスター・シティー））を有するカラムオーブン（ＣＴＯ−２０ＡＣ； Ｓｈｉｍａ
ｄｚｕ Ｃｏｒｐ．）から構成されていた。試験化合物およびアッセイ用のＩＳのピーク
面積をＡｎａｌｙｓｔ ＱＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州フォスター・シティー））によって積分した。窒素での衝
突活性化解離（ＣＡＤ）を使用して生成物イオンを発生させた。最適化された計器状態は
、陽イオン化モード下であった。
４）、１ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソーム、８濃度の試験化合物（すなわち、化合物１、２
、または１０５）、および２ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨから構成される合計２５０μＬを含
む９６ウェルプレートで実施した。インキュベーションに使用した化合物の濃度は、４５
．７ｎＭ〜１００μＭの範囲であった。ＮＡＤＰＨの添加を使用して反応を開始し、イン
キュベーションを３７℃で振盪水浴中で最高６０分間実施した。内部標準（ＩＳ）を含む
等体積の停止溶液を添加することによって、反応を停止させた。サンプルを次いで分析前
に３０００ＲＰＭにて最低５分間冷蔵遠心分離機でスピンさせた。ＬＣ／ＴＯＦＭＳを使
用することによって測定される、試験化合物のインキュベーションミックス中の喪失量を
使用して、肝臓ミクロソームでの固有クリアランス値を推定した。ＬＣ／ＴＯＦＭＳシス
テムは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＩＬ−ＨＴＣオートサンプラー（日本国京都府）、２つの
ポンプＬＣ−２０ＡＤ； Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｃｏｒｐ．）、および飛行時間型質量分析
計（ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｑｓｔａｒ Ｅｌｉｔｅ， ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア
州フォスター・シティー））を有するカラムオーブン（ＣＴＯ−２０ＡＣ； Ｓｈｉｍａ
ｄｚｕ Ｃｏｒｐ．）から構成されていた。試験化合物およびアッセイ用のＩＳのピーク
面積をＡｎａｌｙｓｔ ＱＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州フォスター・シティー））によって積分した。窒素での衝
突活性化解離（ＣＡＤ）を使用して生成物イオンを発生させた。最適化された計器状態は
、陽イオン化モード下であった。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ定量化は、試験化合物のピーク面積とＩＳのピーク面積との比に基づ
いた。化合物１、２、または１０５およびＩＳのピーク面積計算および積分はＡｎａｌｙ
ｓｔ ＱＳ ２．０（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア州フォスター・シティー））を
使用した。計算は、Ｅｘｃｅｌ（Ｏｆｆｉｃｅ ２０１０， Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏ
ｒｐ．， Ｒｅｄｍｏｎｄ， ＷＡ）およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ． ５．
０２（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， ＣＡ）
を使用して実施した。データを分析し、Ｊ． Ｌｉｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
研究， ２００６， ２３（６）：１０８９−１１１６； ａｎｄ Ｄｉ Ｌ ｅｔ
ａｌ．， Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ． ２
００８ １１（６）：４６９−７６で記載されているものなどな適切なＳＯＰに基づいて
分析し、報告した。
いた。化合物１、２、または１０５およびＩＳのピーク面積計算および積分はＡｎａｌｙ
ｓｔ ＱＳ ２．０（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア州フォスター・シティー））を
使用した。計算は、Ｅｘｃｅｌ（Ｏｆｆｉｃｅ ２０１０， Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏ
ｒｐ．， Ｒｅｄｍｏｎｄ， ＷＡ）およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ． ５．
０２（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， ＣＡ）
を使用して実施した。データを分析し、Ｊ． Ｌｉｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
研究， ２００６， ２３（６）：１０８９−１１１６； ａｎｄ Ｄｉ Ｌ ｅｔ
ａｌ．， Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ． ２
００８ １１（６）：４６９−７６で記載されているものなどな適切なＳＯＰに基づいて
分析し、報告した。
ＫｍおよびＶｍａｘ値について使用した試験化合物の肝臓ミクロソームで枯渇は、時間
に対してプロットすることによって算出して、枯渇速度を決定した。枯渇速度を次いで、
適切な動力学モデルを使用してプロットした。データを次式に基づいて算出した：
に対してプロットすることによって算出して、枯渇速度を決定した。枯渇速度を次いで、
適切な動力学モデルを使用してプロットした。データを次式に基づいて算出した：
ミカエリス・メンテン：Ｃｌｉｎｔ（μＬ／ｍｉｎ／ｍｇ肝臓ミクロソーム）＝Ｖｍａ
ｘ／Ｋｍ
ｘ／Ｋｍ
ヒル：Ｃｌｉｎｔ（μＬ／ｍｉｎ／ｍｇ肝臓ミクロソームｓ）＝Ｃｌｍａｘ＝Ｖｍａｘ
／Ｋｓ・（ｎ−１）／（ｎ（ｎ−１）１／ｎ）
／Ｋｓ・（ｎ−１）／（ｎ（ｎ−１）１／ｎ）
Ｃｌｉｎｔ（μＬ／ｍｉｎ／ｇ肝臓）＝Ｃｌｉｎｔ（μＬ／ｍｉｎ／ｍｇミクロソーム
）・倍率またはＣｌｉｎｔ（μＬ／ｍｉｎ／１０６細胞）・倍率
）・倍率またはＣｌｉｎｔ（μＬ／ｍｉｎ／１０６細胞）・倍率
結果を以下の表５で提示する
３つの試験した化合物、すなわち化合物１、２、および１０５はすべてヒト肝臓ミクロ
ソーム（ＨＬＭ）において低い代謝的クリアランスを示した。代謝的クリアランスにおけ
る種差も観察された。カニクイザルは概して他の種よりも高いクリアランスを示した。
ソーム（ＨＬＭ）において低い代謝的クリアランスを示した。代謝的クリアランスにおけ
る種差も観察された。カニクイザルは概して他の種よりも高いクリアランスを示した。
実施例７：ＣＹＰ誘導の評価
化合物１、２、および１０５のそれぞれの誘導を単一ドナー由来の凍結保存ヒト肝細胞
で評価した。
で評価した。
方法：肝細胞をＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｗｏｂｕｒｎ， ＭＡ）から入手し
、適切な培地およびＤＡＰＩ核染色をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｄｕｒｈａ
ｍ， ＮＣ）から購入した。ダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ダルベッコリン
酸塩緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）、１００ｘＭＥＭ非必須アミノ酸、１００ｘペニシリン／ス
トレプトマイシン／グルタミン溶液、２ｘトリパンブルーをＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｍａｎ
ａｓｓａｓ， ＶＡ）から購入した。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を組織培養生物学的ｓ（Ｔ
ｕｌａｒｅ， ＣＡ）から取得した。ｍＲＮＡ分析用の２４ウェルコラーゲンでコーティ
ングしたプレートをＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ）から
取得した。あらかじめ指定されたプローブおよびプライマーを２つのｔｒｉｐｌｅｘ ア
ッセイで使用して、ｍＲＮＡにおける変化を評価した。正の対照は、ＣＹＰ１Ａについて
はβ−ナフトフラボン（１および１０μｍｏｌ／Ｌ）、ＣＹＰ２Ｂ６についてはフェノバ
ルビタール（１００μｍｏｌ／Ｌおよび１ミリモル／Ｌ）、そしてＣＹＰ２Ｃ９およびＣ
ＹＰ３Ａについてはリファンピシン（１および１０μｍｏｌ／Ｌ）であった。ＤＭＳＯを
ビヒクル（負）対照として使用した。ＣＹＰ形態特異的アッセイを治療期間後に実施し、
そして細胞を計数して、生存率を測定した。
、適切な培地およびＤＡＰＩ核染色をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｄｕｒｈａ
ｍ， ＮＣ）から購入した。ダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ダルベッコリン
酸塩緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）、１００ｘＭＥＭ非必須アミノ酸、１００ｘペニシリン／ス
トレプトマイシン／グルタミン溶液、２ｘトリパンブルーをＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｍａｎ
ａｓｓａｓ， ＶＡ）から購入した。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を組織培養生物学的ｓ（Ｔ
ｕｌａｒｅ， ＣＡ）から取得した。ｍＲＮＡ分析用の２４ウェルコラーゲンでコーティ
ングしたプレートをＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ）から
取得した。あらかじめ指定されたプローブおよびプライマーを２つのｔｒｉｐｌｅｘ ア
ッセイで使用して、ｍＲＮＡにおける変化を評価した。正の対照は、ＣＹＰ１Ａについて
はβ−ナフトフラボン（１および１０μｍｏｌ／Ｌ）、ＣＹＰ２Ｂ６についてはフェノバ
ルビタール（１００μｍｏｌ／Ｌおよび１ミリモル／Ｌ）、そしてＣＹＰ２Ｃ９およびＣ
ＹＰ３Ａについてはリファンピシン（１および１０μｍｏｌ／Ｌ）であった。ＤＭＳＯを
ビヒクル（負）対照として使用した。ＣＹＰ形態特異的アッセイを治療期間後に実施し、
そして細胞を計数して、生存率を測定した。
凍結保存肝細胞を３７℃水浴中で解凍し、メーカーの使用説明書にしたがって播種した
。チューブ１本分の肝細胞を、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ凍結保存肝細胞回復
培地（ＣＨＲＭ）を含む５０ｍＬの円錐管に添加した。細胞を、ＧＨ ３．８ローターを
有するＢｅｃｋｍａｎ遠心機中８００ＲＰＭにて１０分間スピンさせた。上清を除去し、
計数のために細胞を平板培地中に再懸濁させた。計数後、細胞を７５００００生存細胞／
ｍＬで再懸濁させた。懸濁液（０．５ｍＬ／ウェル）を２４ウェルコラーゲンでコーティ
ングされたプレート中に添加するか、または１０％ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイ
シン／グルタミン、およびＭＥＭ非必須アミノ酸を含む６０μＬのＤＭＥＭの添加後、８
０μＬの懸濁液を９６ウェルのコラーゲンでコーティングされたプレートの各ウェルに添
加した。より良好なプレート被覆を提供するために旋回および揺動した後、細胞を５％Ｃ
Ｏ２および３７℃の組織培養インキュベーター中に入れ、一晩付着させた。細胞を次いで
、ＣｅｌｌｚＤｉｒｅｃｔ肝細胞維持培地を用いて処理した。細胞を化合物１、２、また
は１０５（１もしくは１０μｍｏｌ／Ｌ）あるいはビヒクルに４８時間暴露した。処理中
、維持培地および試験化合物を２４時間ごとに補充した。
。チューブ１本分の肝細胞を、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ凍結保存肝細胞回復
培地（ＣＨＲＭ）を含む５０ｍＬの円錐管に添加した。細胞を、ＧＨ ３．８ローターを
有するＢｅｃｋｍａｎ遠心機中８００ＲＰＭにて１０分間スピンさせた。上清を除去し、
計数のために細胞を平板培地中に再懸濁させた。計数後、細胞を７５００００生存細胞／
ｍＬで再懸濁させた。懸濁液（０．５ｍＬ／ウェル）を２４ウェルコラーゲンでコーティ
ングされたプレート中に添加するか、または１０％ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイ
シン／グルタミン、およびＭＥＭ非必須アミノ酸を含む６０μＬのＤＭＥＭの添加後、８
０μＬの懸濁液を９６ウェルのコラーゲンでコーティングされたプレートの各ウェルに添
加した。より良好なプレート被覆を提供するために旋回および揺動した後、細胞を５％Ｃ
Ｏ２および３７℃の組織培養インキュベーター中に入れ、一晩付着させた。細胞を次いで
、ＣｅｌｌｚＤｉｒｅｃｔ肝細胞維持培地を用いて処理した。細胞を化合物１、２、また
は１０５（１もしくは１０μｍｏｌ／Ｌ）あるいはビヒクルに４８時間暴露した。処理中
、維持培地および試験化合物を２４時間ごとに補充した。
インキュベーション完了後、細胞をＤＰＢＳで洗浄した。ＤＰＢＳで洗浄した後、ＤＰ
ＢＳ中３．７％ｐ−ホルムアルデヒドを使用して細胞を１時間固定した。ホルムアルデヒ
ドを除去し、ＤＰＢＳ中０．６μｍｏｌ／ＬのＤＡＰＩを添加した。細胞をＤＡＰＩで２
０分間染色し、次いでＤＰＢＳで３回洗浄した。５Ｘ対物レンズを有するＡｒｒａｙＳｃ
ａｎ ＩＩ（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ， Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ， ＰＡ）を用いて細胞を計
数した。処理条件で見られる細胞の数をビヒクル対照で見いだされた細胞でわったものを
用いて残存する肝細胞の分率を算出した。
ＢＳ中３．７％ｐ−ホルムアルデヒドを使用して細胞を１時間固定した。ホルムアルデヒ
ドを除去し、ＤＰＢＳ中０．６μｍｏｌ／ＬのＤＡＰＩを添加した。細胞をＤＡＰＩで２
０分間染色し、次いでＤＰＢＳで３回洗浄した。５Ｘ対物レンズを有するＡｒｒａｙＳｃ
ａｎ ＩＩ（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ， Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ， ＰＡ）を用いて細胞を計
数した。処理条件で見られる細胞の数をビヒクル対照で見いだされた細胞でわったものを
用いて残存する肝細胞の分率を算出した。
処理後、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙキットからの緩衝液ＲＬＴを使用して細胞を溶解さ
せた。製造業者のプロトコルを使用し、ＤＮａｓｅ処理を含むＲＮｅａｓｙキットを用い
てｍＲＮＡを単離した。ｍＲＮＡ濃度をＮａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ−１０００（Ｗｉｌｍｉ
ｎｇｔｏｎ， ＤＥ）によって測定した。ｍＲＮＡ濃度をドナー内のすべてのサンプルに
ついて正規化した。製造業者の指示に従って、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから
のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ合成キットで逆転写を実施した。ＣＤＮ
Ａ合成後、定量的リアルタイムＰＣＲを、Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＡｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓの株式移転完全子会社からの７５００ Ｆａｓｔ Ｒｅａ
ｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲを使用して実施した。リアルタイムＰＣＲの反応成分は次のものか
ら構成されていた：１０μＬのＴａｑｍａｎ Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅ
ｒ Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２μＬのｃＤＮＡ、５μＬの無ヌ
クレアーゼ水（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、β−２ミクログロブリンについ
て１μＬのプライマー限定ＦＡＭ標識アッセイＨＳ００９８４２３０＿ｍ１、ＣＹＰ１Ａ
２について１μＬのプライマー限定ＶＩＣ標識アッセイＨＳ００１６７９２７＿ｍ１また
はＣＹＰ２Ｂ６についてＨＳ０４１８３４８３＿ｇ１、およびＣＹＰ２Ｃ９について１μ
Ｌのプライマー限定ＮＥＤ標識アッセイＨＳ０４２６０３７６＿ｍ１またはＣＹＰ３Ａ４
についてＨＳ００６０４５０６＿ｍ１。ビヒクル対照と比較した倍数の差の計算を、ΔΔ
Ｃｔ法を用いた７５００ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０．５（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって実施した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用し
てＥｍａｘおよびＥＣ５０の計算をおこなった。
せた。製造業者のプロトコルを使用し、ＤＮａｓｅ処理を含むＲＮｅａｓｙキットを用い
てｍＲＮＡを単離した。ｍＲＮＡ濃度をＮａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ−１０００（Ｗｉｌｍｉ
ｎｇｔｏｎ， ＤＥ）によって測定した。ｍＲＮＡ濃度をドナー内のすべてのサンプルに
ついて正規化した。製造業者の指示に従って、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから
のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ合成キットで逆転写を実施した。ＣＤＮ
Ａ合成後、定量的リアルタイムＰＣＲを、Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＡｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓの株式移転完全子会社からの７５００ Ｆａｓｔ Ｒｅａ
ｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲを使用して実施した。リアルタイムＰＣＲの反応成分は次のものか
ら構成されていた：１０μＬのＴａｑｍａｎ Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅ
ｒ Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２μＬのｃＤＮＡ、５μＬの無ヌ
クレアーゼ水（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、β−２ミクログロブリンについ
て１μＬのプライマー限定ＦＡＭ標識アッセイＨＳ００９８４２３０＿ｍ１、ＣＹＰ１Ａ
２について１μＬのプライマー限定ＶＩＣ標識アッセイＨＳ００１６７９２７＿ｍ１また
はＣＹＰ２Ｂ６についてＨＳ０４１８３４８３＿ｇ１、およびＣＹＰ２Ｃ９について１μ
Ｌのプライマー限定ＮＥＤ標識アッセイＨＳ０４２６０３７６＿ｍ１またはＣＹＰ３Ａ４
についてＨＳ００６０４５０６＿ｍ１。ビヒクル対照と比較した倍数の差の計算を、ΔΔ
Ｃｔ法を用いた７５００ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０．５（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって実施した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用し
てＥｍａｘおよびＥＣ５０の計算をおこなった。
上記表６で示されるように、化合物１は顕著な誘導を示さない（潜在的にＣＹＰ２Ｃ９
を除く）；化合物２は誘導を示さない（活性は若干低い）；そして化合物１０５はＣＹＰ
２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ９、およびＣＹＰ３Ａの誘導を示した。細胞生存性の顕著な喪失は観
察されなかった。
を除く）；化合物２は誘導を示さない（活性は若干低い）；そして化合物１０５はＣＹＰ
２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ９、およびＣＹＰ３Ａの誘導を示した。細胞生存性の顕著な喪失は観
察されなかった。
実施例８：ＣＹＰ阻害の評価
プールしたヒト肝臓ミクロソームを使用して、化合物１、２、または１０５のヒトシト
クロムＰ４５０（ＣＹＰ）の酵素活性の潜在的阻害を評価した。
プールしたヒト肝臓ミクロソームを使用して、化合物１、２、または１０５のヒトシト
クロムＰ４５０（ＣＹＰ）の酵素活性の潜在的阻害を評価した。
方法：複数の濃度でそれぞれのＫｍ値付近でのプローブＣＹＰ反応に対して評価するこ
とによって化合物１、２、および１０５の競合的阻害能を測定して、ヒト肝臓ミクロソー
ム（ＨＬＭ）においてＩＣ５０曲線を作製した。適切な場合、ＫＩおよびｋｉｎａｃｔ値
を評価することによって、時間依存性不活性化（ＴＤＩ）可能性もＣＹＰ３Ａ４／５につ
いて評価した。
とによって化合物１、２、および１０５の競合的阻害能を測定して、ヒト肝臓ミクロソー
ム（ＨＬＭ）においてＩＣ５０曲線を作製した。適切な場合、ＫＩおよびｋｉｎａｃｔ値
を評価することによって、時間依存性不活性化（ＴＤＩ）可能性もＣＹＰ３Ａ４／５につ
いて評価した。
ＰＢ、ＨＬＭ、ＣＹＰ選択的プローブ基質、および試験される阻害剤を含む懸濁液を９
６ウェルプレートに添加した。プレート３を３７℃の水浴中で約２分間プレインキュベー
トした。ＮＡＤＰＨを９６ウェルプレートの各ウェルに添加することによって反応を開始
した。ＰＢ、ＨＬＭ、およびＮＡＤＰＨの最終濃度はそれぞれ１００ミリモル／Ｌ（ｐＨ
７．４）、０．１ｍｇ／ｍＬ、および２．３ミリモル／Ｌであった。使用したＣＹＰプロ
ーブ基質およびＣＹＰ阻害剤ならびにそれぞれの濃度を以下に記載する。各インキュベー
ションで使用した最終ＭｅＯＨ濃度は０．８％を越えなかった。
６ウェルプレートに添加した。プレート３を３７℃の水浴中で約２分間プレインキュベー
トした。ＮＡＤＰＨを９６ウェルプレートの各ウェルに添加することによって反応を開始
した。ＰＢ、ＨＬＭ、およびＮＡＤＰＨの最終濃度はそれぞれ１００ミリモル／Ｌ（ｐＨ
７．４）、０．１ｍｇ／ｍＬ、および２．３ミリモル／Ｌであった。使用したＣＹＰプロ
ーブ基質およびＣＹＰ阻害剤ならびにそれぞれの濃度を以下に記載する。各インキュベー
ションで使用した最終ＭｅＯＨ濃度は０．８％を越えなかった。
適切なインキュベーション時間後、ＩＳを含有する等体積のクエンチ溶液を適切なウェ
ルに添加した。試験サンプルと同様の成分を用いて標準サンプルおよび品質管理（ＱＳ）
サンプルを調製した。ＩＳを含まないこと以外は他のサンプルと同様のクエンチ溶液でブ
ランクを調製した。プレートを５分間卓上遠心分離機で３０００ｒｐｍにてスピンさせた
。サンプルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した。インキュベーション条件および正の対
照を以下の表７に記載する。
ルに添加した。試験サンプルと同様の成分を用いて標準サンプルおよび品質管理（ＱＳ）
サンプルを調製した。ＩＳを含まないこと以外は他のサンプルと同様のクエンチ溶液でブ
ランクを調製した。プレートを５分間卓上遠心分離機で３０００ｒｐｍにてスピンさせた
。サンプルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した。インキュベーション条件および正の対
照を以下の表７に記載する。
ＴＤＩを評価するために、第１インキュベーション、ＰＢ、ＨＬＭ、および阻害剤スト
ックを含む懸濁液を９６ウェルプレートに添加した。プレート３を３７℃の水浴中で約２
分間プレインキュベートした。ＮＡＤＰＨを９６ウェルプレートの各ウェルに添加するこ
とによって反応を開始し、０、５、１０、１５、２０、および３０分間実施した。ＮＡＤ
ＰＨなしの対照について、ＰＢ溶液をＮＡＤＰＨストック溶液と置換した。ＰＢ、ＨＬＭ
、およびＮＡＤＰＨの最終濃度は、それぞれ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．４）、０．
２ｍｇ／ｍＬ、および２．３ｍｍｏｌ／Ｌであった。各時点で、１２．５μＬの第１イン
キュベーション懸濁液を、残存活性を評価するために、あらかじめインキュベートしたＣ
ＹＰ選択的プローブ基質を含む第２インキュベーション混合物中で２０倍に希釈した。使
用したプローブ基質はテストステロン（２５０μｍｏｌ／Ｌ）であり、正の対照はトロレ
アンドマイシンであった。
ックを含む懸濁液を９６ウェルプレートに添加した。プレート３を３７℃の水浴中で約２
分間プレインキュベートした。ＮＡＤＰＨを９６ウェルプレートの各ウェルに添加するこ
とによって反応を開始し、０、５、１０、１５、２０、および３０分間実施した。ＮＡＤ
ＰＨなしの対照について、ＰＢ溶液をＮＡＤＰＨストック溶液と置換した。ＰＢ、ＨＬＭ
、およびＮＡＤＰＨの最終濃度は、それぞれ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．４）、０．
２ｍｇ／ｍＬ、および２．３ｍｍｏｌ／Ｌであった。各時点で、１２．５μＬの第１イン
キュベーション懸濁液を、残存活性を評価するために、あらかじめインキュベートしたＣ
ＹＰ選択的プローブ基質を含む第２インキュベーション混合物中で２０倍に希釈した。使
用したプローブ基質はテストステロン（２５０μｍｏｌ／Ｌ）であり、正の対照はトロレ
アンドマイシンであった。
使用したＨＰＬＣシステムは、ＳＩＬ−ＨＴＣオートサンプラー、ＤＧＵ−１４Ａ脱気
装置、３つのＬＣ−１０ＡＤｖｐポンプ、およびＣＴＯ−１０ＡＣｖｐカラムオーブンか
らなるＳｈｉｍａｄｚｕ ＨＰＬＣシステム（日本国京都）であった。サンプルを、ＡＰ
Ｉ４０００ＱＴｒａｐ（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア州フォスター・シティー））
三連四重極質量分析計で陽イオンモードでターボスプレーイオン化を使用して分析した。
装置、３つのＬＣ−１０ＡＤｖｐポンプ、およびＣＴＯ−１０ＡＣｖｐカラムオーブンか
らなるＳｈｉｍａｄｚｕ ＨＰＬＣシステム（日本国京都）であった。サンプルを、ＡＰ
Ｉ４０００ＱＴｒａｐ（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア州フォスター・シティー））
三連四重極質量分析計で陽イオンモードでターボスプレーイオン化を使用して分析した。
全てのモニタリングされた代謝産物およびＩＳのピーク面積計算および積分を、Ａｎａ
ｌｙｓｔ １．６（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア州フォスター・シティー））によ
って処理した。定量化は、較正標準の濃度に対して代謝産物対ＩＳのピーク面積比をプロ
ットすることによって作成された較正曲線を使用して達成され、１／ｘ２重みづけでの二
次回帰によって得た（ｙ＝ａｘ２＋ｂｘ＋ｃ）パーセント阻害計算はＥｘｃｅｌ（Ｏｆｆ
ｉｃｅ ２０１０， Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐ．， Ｒｅｄｍｏｎｄ， ＷＡ）を
利用し、１つの結合部位の仮定に基づきＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
５．０２， ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．（カリフォルニア州ラ
ホヤ））を使用してプロットした。試験化合物および正の対照の名目濃度ＧｒａｐｈＰａ
ｄ Ｐｒｉｓｍでｌｏｇ変換した。残存ＣＹＰ３Ａ４／５活性対プレインキュベーション
時間のプロットを使用して、ＣＹＰ活性損失率（λ）を非線形回帰によって推定した。パ
ラメータｋｉｎａｃｔおよびＫＩを次に、次式：
ｌｙｓｔ １．６（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ（カリフォルニア州フォスター・シティー））によ
って処理した。定量化は、較正標準の濃度に対して代謝産物対ＩＳのピーク面積比をプロ
ットすることによって作成された較正曲線を使用して達成され、１／ｘ２重みづけでの二
次回帰によって得た（ｙ＝ａｘ２＋ｂｘ＋ｃ）パーセント阻害計算はＥｘｃｅｌ（Ｏｆｆ
ｉｃｅ ２０１０， Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐ．， Ｒｅｄｍｏｎｄ， ＷＡ）を
利用し、１つの結合部位の仮定に基づきＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
５．０２， ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．（カリフォルニア州ラ
ホヤ））を使用してプロットした。試験化合物および正の対照の名目濃度ＧｒａｐｈＰａ
ｄ Ｐｒｉｓｍでｌｏｇ変換した。残存ＣＹＰ３Ａ４／５活性対プレインキュベーション
時間のプロットを使用して、ＣＹＰ活性損失率（λ）を非線形回帰によって推定した。パ
ラメータｋｉｎａｃｔおよびＫＩを次に、次式：
（式中、［Ｉ］は化合物１、２、または１０５の初期濃度である）に適合させることによ
って推定した。
上記表８で示されるように、化合物１および２は顕著な可逆阻害を示さず、そして化合
物１０５はＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４（ミダゾラム）の潜在的に顕著な阻害を示し
た。また、上記表９で示されるように、化合物１、２、および１０５のすべてはＣＹＰ３
Ａ４／５の時間、濃度、およびＮＡＤＰＨに依存した不活性化を示した（プローブとして
ミダゾラムを使用）。
物１０５はＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４（ミダゾラム）の潜在的に顕著な阻害を示し
た。また、上記表９で示されるように、化合物１、２、および１０５のすべてはＣＹＰ３
Ａ４／５の時間、濃度、およびＮＡＤＰＨに依存した不活性化を示した（プローブとして
ミダゾラムを使用）。
本明細書中で言及される特許文書および科学論文のそれぞれの全開示はあらゆる目的の
ために参照により本明細書中に組み込まれる。
ために参照により本明細書中に組み込まれる。
本発明は、その主旨または本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形態で具体
化することができる。前記実施形態は、したがって、本明細書中で記載する本発明に関し
て限定的であるよりもむしろあらゆる点で例示的であると見なされるべきである。したが
って、本発明の範囲は、前記事項によってではなく、むしろ添付の特許請求の範囲によっ
て示され、特許請求の範囲の等価物の意味および範囲内にあるすべての変更はその中に含
まれることが意図される。
化することができる。前記実施形態は、したがって、本明細書中で記載する本発明に関し
て限定的であるよりもむしろあらゆる点で例示的であると見なされるべきである。したが
って、本発明の範囲は、前記事項によってではなく、むしろ添付の特許請求の範囲によっ
て示され、特許請求の範囲の等価物の意味および範囲内にあるすべての変更はその中に含
まれることが意図される。
Claims (1)
- 本明細書に記載の発明。
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| US61/714,145 | 2012-10-15 | ||
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| DK3057962T3 (da) | 2013-10-16 | 2023-11-06 | Epizyme Inc | Hydrochloridsaltform til ezh2-hæmning |
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Family Cites Families (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4522811A (en) | 1982-07-08 | 1985-06-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides |
| JPH0733729A (ja) | 1993-07-26 | 1995-02-03 | Kirin Brewery Co Ltd | Ｎ−シアノ−ｎ′−置換−アリールカルボキシイミダミド化合物の製造法 |
| RU2128644C1 (ru) | 1993-12-27 | 1999-04-10 | Эйсай Ко., Лтд. | Производные антраниловой кислоты или их фармакологически приемлемые соли, промежуточные продукты для их получения и лекарственный препарат на их основе |
| DE19516776A1 (de) | 1995-05-10 | 1996-11-14 | Boehringer Ingelheim Int | Chromatin-Regulatorgene |
| US5741819A (en) | 1995-06-07 | 1998-04-21 | 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. | Arylsulfonylaminobenzene derivatives and the use thereof as factor Xa inhibitors |
| US5763263A (en) | 1995-11-27 | 1998-06-09 | Dehlinger; Peter J. | Method and apparatus for producing position addressable combinatorial libraries |
| JP3906935B2 (ja) | 1995-12-18 | 2007-04-18 | 杏林製薬株式会社 | Ｎ−置換ジオキソチアゾリジルベンズアミド誘導体及びその製造法 |
| CN1332722A (zh) | 1998-09-30 | 2002-01-23 | 宝洁公司 | 2－取代的酮酰胺 |
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| US6710058B2 (en) | 2000-11-06 | 2004-03-23 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Monocyclic or bicyclic carbocycles and heterocycles as factor Xa inhibitors |
| ES2330719T3 (es) | 2000-12-28 | 2009-12-15 | SHIONOGI & CO., LTD. | Derivados de 2-piridona con afinidad para el receptor cannabinoide de tipo 2. |
| CA2436487A1 (en) | 2001-01-30 | 2002-08-08 | Cytopia Pty Ltd. | Methods of inhibiting kinases |
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| EP1477186B1 (en) | 2002-02-19 | 2009-11-11 | Shionogi & Co., Ltd. | Antipruritics |
| TW200306155A (en) | 2002-03-19 | 2003-11-16 | Du Pont | Benzamides and advantageous compositions thereof for use as fungicides |
| CA2510051C (en) | 2002-12-27 | 2016-07-05 | Sucampo Ag | Derivatives of prostaglandins for treating abdominal discomfort |
| WO2005014599A1 (en) | 2003-06-04 | 2005-02-17 | Cellular Genomics, Inc. | Imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and method of inhibition of bruton’s tyrosine kinase by such compounds |
| US7442685B2 (en) | 2003-06-13 | 2008-10-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | DOT1 histone methyltransferases as a target for identifying therapeutic agents for leukemia |
| EP1633740B1 (en) | 2003-06-19 | 2011-11-09 | GlaxoSmithKline LLC | 5-(acylamino)indazole derivatives as kinase inhibitors |
| CL2004001834A1 (es) | 2003-07-23 | 2005-06-03 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Compuesto 4-{4-[3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-ureido]-3-fluorofenoxi}-piridin-2-metilamida, inhibidor de la raf, vegfr, p38 y pdgfr quinasas, sus sales; composiicon farmaceutica; combinacion farmaceutica; y su uso para tratar trastornos hiperprol |
| JP4338734B2 (ja) | 2003-08-26 | 2009-10-07 | メルク エイチディーエーシー リサーチ エルエルシー | Ｈｄａｃ阻害剤による癌処置法 |
| US20050059682A1 (en) | 2003-09-12 | 2005-03-17 | Supergen, Inc., A Delaware Corporation | Compositions and methods for treatment of cancer |
| ES2345662T3 (es) * | 2004-03-11 | 2010-09-29 | Actelion Pharmaceuticals Ltd. | Derivados de acido indol-1-il-acetico. |
| CN1286973C (zh) | 2004-04-12 | 2006-11-29 | 上海第二医科大学附属瑞金医院 | 一种组蛋白甲基转移酶及其制备方法 |
| US7563589B2 (en) | 2004-06-01 | 2009-07-21 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Reconstituted histone methyltransferase complex and methods of identifying modulators thereof |
| JO2787B1 (en) | 2005-04-27 | 2014-03-15 | امجين إنك, | Alternative amide derivatives and methods of use |
| US7923219B2 (en) | 2005-06-02 | 2011-04-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Ubiquitin E3 ligase |
| FR2889526B1 (fr) | 2005-08-04 | 2012-02-17 | Aventis Pharma Sa | 7-aza-indazoles substitues, compositions les contenant, procede de fabrication et utilisation |
| AR056875A1 (es) | 2005-10-19 | 2007-10-31 | Gruenenthal Gmbh | Ligandos del receptor vaniloide y su aplicacion para la fabricacion de medicamentos |
| AU2006306541B2 (en) | 2005-10-21 | 2011-07-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Potassium channel inhibitors |
| CA2622615A1 (en) | 2005-10-28 | 2007-05-10 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Protein demethylases comprising a jmjc domain |
| EP1960551A2 (en) | 2005-12-01 | 2008-08-27 | Medical Prognosis Institute | Methods and devices for identifying biomarkers of treatment response and use thereof to predict treatment efficacy |
| EP1966141A1 (en) | 2005-12-14 | 2008-09-10 | Brystol-Myers Squibb Company | Six-membered heterocycles useful as serine protease inhibitors |
| WO2007087015A1 (en) | 2006-01-20 | 2007-08-02 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Diagnostic and therapeutic targets for leukemia |
| UA93548C2 (uk) * | 2006-05-05 | 2011-02-25 | Айерем Елелсі | Сполуки та композиції як модулятори хеджхогівського сигнального шляху |
| RU2008149246A (ru) | 2006-05-15 | 2010-06-20 | Айрм Ллк (Bm) | Соединение на основе терефталата, композиции и их применение в качестве ингибиторов интегразы вич |
| EP2040711A2 (en) | 2006-05-18 | 2009-04-01 | Amphora Discovery Corporation | 2-oxo-1,2-dihydroquinoline derivatives, compositions, and uses thereof as antiproliferative agents |
| US8022246B2 (en) | 2006-10-10 | 2011-09-20 | The Burnham Institute For Medical Research | Neuroprotective compositions and methods |
| AU2008219166B2 (en) | 2007-02-16 | 2013-05-16 | Amgen Inc. | Nitrogen-containing heterocyclyl ketones and their use as c-Met inhibitors |
| EP2137158A4 (en) | 2007-02-28 | 2012-04-18 | Methylgene Inc | LOW-MOLECULAR INHIBITORS OF PROTEINARGININE METHYLTRANSFERASES (PRMTS) |
| WO2008109534A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting ezh2 gene expression and uses thereof |
| WO2008113006A1 (en) | 2007-03-14 | 2008-09-18 | Xenon Pharmaceuticals Inc. | Methods of using quinolinone compounds in treating sodium channel-mediated diseases or conditions |
| DE102007017884A1 (de) | 2007-04-13 | 2008-10-16 | Grünethal GmbH | Neue Vanilloid-Rezeptor Liganden und ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln |
| US20090012031A1 (en) | 2007-07-03 | 2009-01-08 | The Regents Of The University Of Michigan | EZH2 Cancer Markers |
| ES2457418T3 (es) | 2007-07-16 | 2014-04-25 | Abbvie Inc. | Indazoles, bencisoxazoles y bencisotiazoles como inhibidores de proteína cinasas |
| CA2703909A1 (en) | 2007-10-31 | 2009-05-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | P2x3, receptor antagonists for treatment of pain |
| CA2709257C (en) | 2007-12-19 | 2016-12-13 | Cancer Research Technology Limited | Pyrido[2,3-b]pyrazine-8-substituted compounds and their use |
| KR101608096B1 (ko) | 2008-01-23 | 2016-03-31 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | ４-피리디논 화합물 및 암을 위한 그의 용도 |
| WO2009124137A2 (en) | 2008-04-01 | 2009-10-08 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University | Method of suppressing gene transcription through histone lysine methylation |
| US20100113415A1 (en) | 2008-05-29 | 2010-05-06 | Rajapakse Hemaka A | Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer |
| UY31982A (es) | 2008-07-16 | 2010-02-26 | Boehringer Ingelheim Int | Derivados de 1,2-dihidropiridin-3-carboxamidas n-sustituidas |
| JP5548197B2 (ja) | 2008-08-08 | 2014-07-16 | ニューヨーク ブラッド センター， インコーポレイテッド | レトロウイルスの集合及び成熟の小分子阻害剤 |
| FR2934995B1 (fr) | 2008-08-14 | 2010-08-27 | Sanofi Aventis | Composes d'azetidines polysubstitues, leur preparation et leur application en therapeutique |
| EP2411389A2 (fr) | 2009-03-24 | 2012-02-01 | Sanofi | DERIVES D'AZACARBOLINES 9H-PYRROLO[2,3-b:5,4-c']DIPYRIDINE, LEUR PREPARATION ET LEUR UTILISATION THERAPEUTIQUE |
| US20120065247A1 (en) | 2009-03-27 | 2012-03-15 | Discoverybiomed, Inc. | Modulating ires-mediated translation |
| WO2011011366A2 (en) | 2009-07-20 | 2011-01-27 | Constellation Pharmaceuticals | Agents for stimulating activity of methyl modifying enzymes and methods of use thereof |
| US8329149B2 (en) | 2009-12-30 | 2012-12-11 | Avon Products, Inc. | Topical lightening composition and uses thereof |
| PT2566327T (pt) | 2010-05-07 | 2017-05-26 | Glaxosmithkline Llc | Indoles |
| EP2566479B1 (en) | 2010-05-07 | 2014-12-24 | GlaxoSmithKline LLC | Azaindazoles |
| US8846935B2 (en) | 2010-05-07 | 2014-09-30 | Glaxosmithkline Llc | Indazoles |
| WO2011160206A1 (en) | 2010-06-23 | 2011-12-29 | Morin Ryan D | Biomarkers for non-hodgkin lymphomas and uses thereof |
| US9175331B2 (en) | 2010-09-10 | 2015-11-03 | Epizyme, Inc. | Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof |
| HUE028977T2 (en) | 2010-09-10 | 2017-02-28 | Epizyme Inc | A method for determining the suitability of human EZH2 inhibitors during treatment |
| US20130310379A1 (en) | 2010-11-19 | 2013-11-21 | Constellation Pharmaceuticals | Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof |
| US8765792B2 (en) | 2010-12-01 | 2014-07-01 | Glaxosmithkline Llc | Indoles |
| BR112013013668A2 (pt) | 2010-12-03 | 2016-09-06 | Epizyme Inc | moduladores 7-deazapurina de histona metiltransferase, e métodos de uso dos mesmos |
| US8791782B2 (en) * | 2011-01-28 | 2014-07-29 | Uses, Inc. | AC power conditioning circuit |
| WO2012118812A2 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | Epizyme, Inc. | Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds |
| TWI598336B (zh) * | 2011-04-13 | 2017-09-11 | 雅酶股份有限公司 | 經取代之苯化合物 |
| JO3438B1 (ar) * | 2011-04-13 | 2019-10-20 | Epizyme Inc | مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس |
| BR112014007603A2 (pt) | 2011-09-30 | 2017-06-13 | Glaxosmithkline Llc | métodos de tratamento do câncer |
| ES2718900T3 (es) * | 2012-03-12 | 2019-07-05 | Epizyme Inc | Inhibidores de EZH2 humana y métodos de uso de los mismos |
| US10301290B2 (en) | 2012-04-13 | 2019-05-28 | Epizyme, Inc. | Combination therapy for treating cancer |
| EP2836491B1 (en) | 2012-04-13 | 2016-12-07 | Epizyme, Inc. | Salt form of a human histone methyltransferase ezh2 inhibitor |
| US9562041B2 (en) | 2012-05-16 | 2017-02-07 | Glaxosmithkline Llc | Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors |
| NZ746054A (en) * | 2012-10-15 | 2020-07-31 | Epizyme Inc | Methods of treating cancer |
| US9006242B2 (en) | 2012-10-15 | 2015-04-14 | Epizyme, Inc. | Substituted benzene compounds |
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