JP2017519497A5

JP2017519497A5 -

Info

Publication number: JP2017519497A5
Application number: JP2016571015A
Authority: JP
Filing date: 2015-06-04
Publication date: 2019-11-28
Anticipated expiration: 2035-06-04

Description

一実施形態では、所定のパラメータは、時間、生存細胞密度、圧縮細胞容量または力価から選択される。

所定のパラメータは、細胞培養物のいくつかの望ましい特徴、特性、または性能のマイルストーン；例えば、生存細胞密度、圧縮細胞容量または力価または時点を達成することにより到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、生存細胞密度が、１×１０^６生存細胞／ｍｌ以上であるときに到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、生存細胞密度が、少なくとも２０×１０^６生存細胞／ｍｌ〜３０×１０^６生存細胞／ｍｌであるときに到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、圧縮細胞容量が、３５％以下であるときに到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、圧縮細胞容量が、３０％以下であるときに到達されてよい。

所定のパラメータは、時点に基づいてよい。時点は、引き金となる事象または作用後の時間、日数、週数、または月数において測定されてよい。引き金となる事象または作用は、培養における時間または日数、生存細胞密度、圧縮細胞容量、力価の到達、バイオリアクターの接種または回収透過物の収集などの事象後の時間または日数であってよい。一実施形態では、所定のパラメータは、引き金となる事象または作用後、１２時間〜２５時間以内に到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、引き金となる事象または作用後、２４〜７２時間以内に到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、引き金となる事象または作用の４日以内に到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、引き金となる事象または作用の、５日以上後で到達されてよい。一実施形態では、所定のパラメータは、引き金となる事象または作用の、少なくとも２５日後に到達されてよい。一実施形態では、第一の所定のパラメータは、バイオリアクターの接種後、５〜２５日以内に到達されてよい。一実施形態では、第一の所定のパラメータは、バイオリアクターの接種後、１０〜１２日以内に到達されてよい。一実施形態では、第二の所定のパラメータは、回収透過物の収集後、１２〜７２時間以内に到達されてよい。一実施形態では、第二の所定のパラメータは、回収透過物の収集後、２４〜７２時間以内に到達されてよい。一実施形態では、第二の所定のパラメータは、回収透過物の収集後、２４〜４８時間以内に到達されてよい。

「細胞密度」という用語は、培養培地の所与の容積中の細胞の数を指す。「生存細胞密度」は、標準の生存率アッセイ（トリパンブルー色素排除法など）によって決定される、培養培地の所与の容積中の生細胞の数を指す。「圧縮細胞容量率（％）」（ＰＣＶ率（％））とも称される「圧縮細胞容量」（ＰＣＶ）という用語は、細胞培養物の全容積に対する細胞が占める容積の比率であり、百分率で表される（Ｓｔｅｔｔｌｅｒら、（２００６）ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ．Ｄｅｃ２０：９５（６）：１２２８−３３を参照されたい）。圧縮細胞容量は、細胞密度及び細胞直径の関数であり、圧縮細胞容量の増加は、細胞密度もしくは細胞直径またはその両方の増加に起因し得る。圧縮細胞容量は、細胞培養物中の固形分の尺度である。宿主細胞の大きさが変動し、細胞培養物が死細胞及び死にかけている細胞ならびに他の細胞残屑も含有するため、圧縮細胞容量は、細胞培養物中の固形分をより正確に説明することができる。例えば、５０×１０^６細胞／ｍＬの細胞密度を有する２０００Ｌの培養物は、細胞の大きさに応じて非常に異なる圧縮細胞容量を有する。加えて、いくつかの細胞は、増殖停止状態にあるときに、大きさを増加させ、増殖停止前及び増殖停止後の圧縮細胞容量は、細胞の大きさの増加の結果としてのバイオマスの増加のために、異なる可能性が高いだろう。産生期中のより少ない圧縮細胞容量は、より高い細胞密度の灌流培養物を妨害し得る溶存酸素散布問題を軽減するのに役立つ。より少ない圧縮細胞容量は、より小さい培地保存容器の使用を可能にするより小さい培地容積も可能にし、より遅い流速と組み合わせることができる。より少ない圧縮細胞容量は、より高い細胞バイオマス培養物と比較して、回収及び下流処理への影響も低い。これらは全て、組換えタンパク質治療薬の製造に関連する費用を削減する。

一実施形態では、本方法は、産生期中の圧縮細胞容量は３５％以下であることを含む。関連する実施形態では、圧縮細胞容量は３０％以下である。

一実施形態では、３５％以下の圧縮細胞容量での哺乳類細胞培養物の生存細胞密度は、１０×１０^６生存細胞／ｍｌ〜８０×１０^６生存細胞／ｍｌである。関連する実施形態では、哺乳類細胞培養物の生存細胞密度は、２０×１０^６生存細胞／ｍｌ〜３０×１０^６生存細胞／ｍｌである。

１１日目の前に、ヌル透過物、または非生成物含有透過物を、蠕動ポンプ（ＷａｔｓｏｎＭａｒｌｏｗ１２０Ｕ／ＤＶイギリス、コーンウォール、ファルマス）を使用して３０ｋＤａ精密ろ過膜から透過物を取り出すことにより連続的に収集し、廃棄した。フィルタサイズのために、細胞培養物のタンパク質生成物は、細胞培養バイオリアクター内の被保持物中に保持された。

回収透過物、または生成物含有透過物は、表１に提供するスケジュールに従って細胞培養実行中に５つの分離された所定の時間で収集された。回収透過物は、蠕動ポンプ（ＷａｔｓｏｎＭａｒｌｏｗ１２０Ｕ／ＤＶイギリス、コーンウォール、ファルマス）を使用して７５０ｋＤａ限外ろ過膜から透過物を取り出すことにより収集した。細胞培養物のタンパク質生成物は、透過物中に運ばれ、回収透過物の一部として収集された。回収透過物は、上述のように力価及び生成物品質について評価された。回収透過物は、透過物バッグ（ＲＣＢＢ−３００、ＲＩＭＢｉｏＩｎｃ．、ワシントン州、シアトル）中に保管した。

それぞれの回収透過物の収集の完了の直後、ヌル透過物を３０ｋＤａ精密ろ過膜フィルタから再度連続して収集し、廃棄した。培養は２４日目の回収透過物の収集の後に終了した。

Claims

組換えタンパク質の長期周期的回収のための方法であって
バイオリアクターに組換えタンパク質を発現する哺乳類細胞を接種することによって細胞培養を確立すること、
新鮮な細胞培養培地を前記バイオリアクター内に灌流し、細胞培養物をフィルタに通し、及び透過物を収集することによって前記細胞培養を維持すること
を含み、
ヌル透過物が、第一の所定のパラメータに到達するまで最初に収集され、その後、回収透過物は所定の時間にわたって収集され、
この後、第二の所定のパラメータに到達するまでヌル透過物を収集し、回収透過物を所定の時間にわたって収集することを交互に行い、
ヌル透過物及び回収透過物を交互に収集することが、前記細胞培養が終了するまで継続される、方法。
前記所定のパラメータが、時間、生存細胞密度、圧縮細胞容量（ＰＣＶ）又は力価から選択される、請求項１に記載の方法。
前記第一の所定のパラメータが、前記細胞培養の前記確立の少なくとも１２時間〜２５日後である、請求項１に記載の方法。
前記第二の所定のパラメータが、前記回収透過物の前記収集の少なくとも１２〜７２時間後である、請求項１に記載の方法。
前記所定の時間が、少なくとも１２〜７２時間である、請求項１に記載の方法。
前記ヌル透過物が収集されるとき、前記フィルタが、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持する孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタである、請求項１に記載の方法。
前記回収透過物が収集されるとき、前記フィルタが、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタである、請求項１に記載の方法。
前記フィルタが、単一ユニットフィルタシステムである、請求項１に記載の方法。
前記透過物が、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタであるフィルタから収集されるとき、前記新鮮な細胞培養培地が、少なくとも５ｇ／Ｌの非イオン性ブロック共重合体を達成するように配合又は補充される、請求項１に記載の方法。
方法における任意の工程で試料を採取すること、前記組換えタンパク質及び／又は前記方法の特徴を定量的に及び／又は定性的にモニターするために前記試料を評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記灌流が、連続灌流である、請求項１に記載の方法。
前記灌流が、１日当たり１．０作業量以下の速度で行われる、請求項１に記載の方法。
前記灌流が、蠕動ポンプ、ダブルダイヤフラムポンプ、低剪断力ポンプ又は交互接線流により達成される、請求項１に記載の方法。
前記方法が、前記細胞培養物を温度変化に供することをさらに含み、前記細胞は、ａ）第一の期間にわたって第一の温度で、及びｂ）第二の期間にわたって第二の温度で培養される、請求項１に記載の方法。
所定のパラメータに応答して、前記温度変化が供され、前記所定のパラメータを達成することが静電容量に基づくバイオマスプローブを使用して決定される、請求項１４に記載の方法。
前記細胞培養が、前記バイオリアクターに少なくとも０．１×１０ ^６生存細胞／ｍＬを接種することにより確立される、請求項１に記載の方法。
前記哺乳類細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項１に記載の方法。
前記組換えタンパク質が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え融合タンパク質、又はサイトカインからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
前記組換えタンパク質が、凝結、沈殿、遠心分離、深層ろ過、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ミックスモード陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー又はハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーの１つ又は複数によって前記回収透過物から精製される、請求項１に記載の方法。
前記精製中に試料を採取すること、前記組換えタンパク質及び前記精製の特徴を定量的に及び／又は定性的にモニターするために、前記試料を評価することをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
前記試料が、プロセス分析技術を使用して定量的に及び／又は定性的にモニターされる、請求項２０に記載の方法。
前記組換えタンパク質が、医薬的に許容され得る製剤に製剤化される、請求項１９に記載の方法。