JP2016527309A - 活性成分としてヒト熱ショックタンパク質90aの断片を含む皮膚状態を改善する組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
[00001]本願は、2014年8月9日に大韓民国受理官庁に出願された国際出願である。本PCT出願は、2013年8月9日に出願された大韓民国特許出願10−2013−0094930の優先権の利益を主張するものである。
な送達形態で提供してもよい。
[00018]本発明は、HPfなどのHSP90a断片、ならびにネイティブ配列とは異なる合成ポリペプチド配列、例えばHPfΔC1(101aa)およびHPfΔC2(87aa)が、表皮と真皮両方の皮膚細胞の分化を促進するが、真皮下層での前脂肪細胞(preadipocyte)の分化を阻害するという発見を含む。この活性により、次に、アトピー性湿疹および/またはアトピー性皮膚炎の進行および重症化が阻害される。この特徴は、本発明のさらに別の目的をもたらす。
[00020]別の態様において、本発明は、皮下脂肪の蓄積を低減および/もしくは阻害するならびに/または皮下脂肪細胞分化を抑制する方法であって、熱ショックタンパク質の断片に対応する配列を有するポリペプチドを含むナノリポソーム組成物を局所塗布することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、115aa配列(HPfと呼ばれる)(配列番号1)、101aa配列(HPfΔC1)(配列番号20)、87aa配列(HPfΔC2)(配列番号21)、またはHSP90a aa配列(配列番号2)によって定義され、そのポリペプチドがナノリポソームに封入される。
[00054]リポソームおよびナノリポソームの調製に使用する成分であるリン脂質を両親媒性脂質として使用する。例として、そのような両親媒性脂質としては天然リン脂質(例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、およびスフィンゴミエリン)および合成リン脂質(例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリンまたは水添レシチン)が挙げられ、レシチンが好ましい。さらに好ましくは、前記レシチンは、大豆または卵黄から抽出された天然由来の不飽和または飽和レシチンである。
[00059]いくつかの実施形態によると、本発明のナノリポソームは、下の実施例において詳細に説明するように、リン脂質、塩および水のみで調製する。
実施例1 HSP90aの断片(HPf)の獲得
1−1)HSP90a断片(HPf)cDNAの増幅
[00076]本発明において使用する115アミノ酸ポリペプチド(配列番号1)は、HSP90a(UniProt id:P07900)の断片であり、その配列は前記内因性タンパク質のアミノ酸(aa)番号236からaa番号350にわたる。この断片を断片HPfと呼ぶ。大規模にHPfを生産するために、HPf遺伝子をクローニングし、大腸菌において発現させた。
[00079]2つのプライマー(配列番号4および配列番号5)を用いる増幅によって調製した、上記実施例手順1−1から得たHPf cDNA(配列番号3のcDNA)を、制限酵素NdelおよびKpnIを使用してpNKmutプラスミド(韓国特許10−0985746)にクローニングした(図2−1A)。
1:RZ4500株(陰性対照群)、2:HGH(TEVc)−HPf過発現大腸菌株、3:超音波処理によって均質化されたHGH(TEVc)−HPf過発現大腸菌、4.超音波処理によって均質化された大腸菌の遠心からの上清、5:洗浄溶液によって再懸濁された封入体の遠心によって回収された上清。
[000102]実施例1に記載の発現された組換えタンパク質がHPfであるか、およびHSP90aに由来するかをさらに確認するために、免疫ブロットを行った(図4)。
[000104]上の実施例1に記載のHPf遺伝子を含有するベクター構築物TRX(TEVc)−HPfで形質転換した宿主細胞系RX4500を使用して、この組換えタンパク質の最大発現のための最適条件を決定した。具体的には、上記RZ4500形質転換体を1リットルフラスコ内で最初は7リットル発酵タンク(FMT−07/C−B、Fermentec、Korea)において培養し、それを最終50L発酵タンク(FMT−50、Fermentec、Korea)まで徐々に大きくした。50リットル発酵タンクの培養混合物は、下の表2に記載する組成物を含有する。
[000109]大量発酵から採取した組換え細胞を、ホモジナイザーを使用して均質化し、超遠心機(Hanil、Korea)を使用して0.5%Triton X−100中で洗浄した。上清を除去した後に沈殿物を回収することによって封入体を採取した。次いでそれを25mM NaOHに溶解し、1%酢酸で変性させ、遠心した。上清だけを回収して不純物を除去した。これらの精製ステップを通して、SDS−PAGEおよびクマシーブリリアントブルーによる分析のために溶液の一部を除去した。
[000112]最終精製ステップからのHPfタンパク質がHPS90aに由来することを保証するために、MALDI−TOF分析(Voyager−DE STR、Applied BioSystems、USA)を行った。精製されたHPfの電気泳動(図7b)後、HPfに対応するバンド(bend)を鋭利なカミソリでゲルから切り取った。次いでそのゲルを0.1M(NH4)HCO3溶液に1時間浸漬した。上清を除去した後、ゲルを1時間、0.1M(NH4)HCO3溶液中の50%アセトニトリルに、次いで15分間、100%アセトニトリルに移した。次いで25mM(NH4)HCO3中のタンパク質シークエンシンググレードトリプシン(Promega、USA)とそのゲルを16時間、37℃で混合することにより、ゲル内トリプシン消化を行った。その後、60%アセトニトリルを含有する5%TFA溶液を添加して反応を停止させ、その混合物を遠心した。上清を回収して、MALDI−TOF分析により分子量を決定した。タンパク質質量データベースを使用するその分析によると、精製されたタンパク質HPfはHSP90aの断片である(図8)。
[000113]医薬/化粧料製剤のためのナノリポソーム封入HPfを調製するために、電気泳動光散乱分光光度計、ELS−8000を使用してHPf粒径を測定した。
[000117]透過型電子顕微鏡(EF−TEM;エネルギーフィルタ型透過型電子顕微鏡、KBSI、Korea)を使用することにより、HPfタンパク質粒子のサイズおよび画像を分析した。2.5%グルタルアルデヒドおよび4%パラホルムアルデヒド溶液を使用することによって第一の固定プロセスを完了し、それをリン酸緩衝溶液で洗浄した。次いで、1%四酸化オスミウムと共に使用して第二の固定プロセスを行い、60%エタノールを用いて開始し、昇順で70%、80%、90%、95%および100%エタノールを用いる脱水ステップに付した。エポキシ樹脂での包埋後、サンプル切片を薄いマイクロスライサーによって作製した。切片プラットフォーム用のグリッドを用意し、電子染色ステップ後にサンプルを観察した(図9−2)。
[000118]HPfがヒトへの適用に安全であるかどうかを判定するために、ヒト表皮細胞系(HaCaT)(Schoop、Veronika M.、Journal of Investigative Dermatology.、112(3):343−353、1999)および真皮細胞系(HEF)(CRL−7039、ATCC、USA)をHPfと共にインキュベートした。毒性を試験するために使用したHPfの濃度は、Regeron Inc.によって製造および販売されている化粧品に使用されている表皮増殖因子の濃度(Clairesome−EF製品ラインに使用されている1〜10μg/ml EGF)より10〜100倍高かった。具体的には、96ウェルプレートに各細胞系の2〜10x103細胞をプレーティングし、10%FBS(ウシ胎仔血清アルブミン、Hyclone、USA)を含有するDMEM培地(Hyclone、USA)で培養した。次いでHPfを各細胞に0、0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、1、5、50および100μg/mlの濃度で添加し、そのプレートをCO2インキュベーター内で1週間、37℃でインキュベートした。10μl 培養培地を5mg/ml MTT(3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニルテトラゾリウムブロミド、Sigma−Aldrich、USA)と混合し、CO2インキュベーター内で4時間、37℃でインキュベートすることによって、細胞の増殖率(%)を判定した。不溶性MTT沈殿を10%Triton X−100および0.1N HClに溶解した後、分光光度計、spectra MAX 190(Molecular Device、USA)を使用して595nmでO.D.を測定した。100 g/mlのHPfと混合した細胞は、24時間のインキュベーション後に90%生存率(図10A)、7日インキュベーション後に85%生存率(図10B)を維持していた。これらの結果は、HPfを化粧料成分または医薬成分として安全に使用できることを示した。
[000119]水溶液中でのHPfの物理的/化学的不安定性および生物活性喪失を防止する方法を見つけるために、pH7.2リン酸緩衝溶液に溶解したときのまたはゲル状態で保持したときのHPfの安定性を測定した。この分析に使用したゲルは、下記の化合物を混合することによって調製した。HPfタンパク質の安定性に影響を及ぼす一切の潜在的干渉因子を排除するように注意した。
[000121]IgEによって媒介される肥満細胞の脱顆粒は、アトピー性皮膚炎の典型的な症状の1つである。HPfの抗炎症効果を評価するために、脱顆粒のバイオマーカーであるβヘキソサミニダーゼ(hexosaminase)の分泌を阻害するその活性を、好塩基性細胞系RBL−2H3(CRL−2256、ATCC、USA)を使用して測定した。先ず、2.5x105個のRBL−2H3細胞を48ウェルプレートの各ウェルにプレーティングし、CO2インキュベーター内で3時間、37℃でインキュベートした。IgEを1.0μg/mlまで添加することにより細胞を感作し、24時間インキュベートした。次いで、細胞をHBS(HEPES緩衝食塩水)で4回洗浄することにより未結合IgGを除去した。次いで、800〜1000ng/2,4−ジニトロフェニルハプテン−ヒト血清アルブミン(DNP−HSA、Biosearch Technologies、USA)での処置により細胞を刺激した。次いで、50 lの上清を、1mM p−ニトロフェニルN−アセチル−β−グルコサミンを含有する200 lの0.05Mクエン酸緩衝液(pH4.5)と混合し、1時間放置した。500 lの0.05M炭酸ナトリウム緩衝液(pH10)を添加することにより反応を停止させた。分光光度計を使用して405nmでO.Dを測定した。結果は、100μg/ml HPfが、その阻害効果を(PBSで処置した)対照のものと比較したとき、βヘキソサミニダーゼ(hexosaminase)の分泌を60%阻害することを明示した(図12)。これは、HPfがβヘキソサミニダーゼ(hexosaminase)分泌の阻害によって脱顆粒を抑制することによりアトピー性皮膚炎の症状を有意に改善できることを示す。
10−1)創傷治癒に対する効果
[000122]150μlの0.15%2,4−ジニトロフルオロベンゼン(DNFB)(アセトン:オリーブ油=3:1に溶解したもの)を週1回、4週間にわたって局所投与することにより、NC/Ngaマウスの皮膚にアトピー性皮膚炎を誘導した。HPfの創傷治癒効果を次のように判定した:先ず、マウスを2群に分け、一方の群は100μl HPfの局所投与を週3回、4週間にわたって受け、これに対して対照群はHPfを受けなかった。(処置計画については図13Aを参照されたい)。皮膚損傷(創傷)度は肉眼で判定した(図13B)が、炎症細胞の浸潤およびそれらの回復は、真皮組織染色によって測定した(図14)。局所投与に使用したHPfを含有するまたは含有しない組成物は、塗布領域でのHPf停留を保持するためにゲルとして調製した。
影響された皮膚領域への免疫細胞浸潤抑制に対するHPfの効果
[000124]アトピー性皮膚炎を有するNc/Ngaマウスの創傷を治癒するHPfの能力をさらに評価するために、皮膚組織片(a peace of skin tissue)を処置から4週間後に切り取り、H&E(ヘマトキシリンおよびエオシン)で染色した(図14)。結果は、DNFBのみを受けた群(図14A−2、14B−2)またはHPfで処置していない対照群(図14A−3、14B−3)において角質層の顕著な分離を示したが、HPfで処置した群(図14A−4、14B−4)における皮膚損傷は最小限であった(対照群に対して使用した組成物については表4を参照されたい)。アトピー性皮膚炎が影響された領域周囲に免疫細胞の浸潤を生じさせることは公知であり、それは様々な走化性サイトカインを分泌させる傾向があるからである。H&E染色実験によると、DNFBのみを受けた群およびHPfなしの対照群は免疫細胞の浸潤を示す(図14A−2、14B−2および14A−3、14B−3)が、HPfで処置した群ではそのような浸潤が最小限であった(図14A−4、14B−4)。これらの結果は、HPfが、影響された領域への過剰な免疫細胞の浸潤を抑制できることはもちろん、創傷を治癒することもできることを強く示唆する。
[000125]ケラチノサイトおよび線維芽細胞の細胞分化に対するHPfの効果を、ヒト表皮細胞系HaCaT(Schoop、Veronika M.、Journal of Investigative Dermatology.、112(3):343−353)および線維芽細胞系CCD−986sk(SCRL−1947、ATCC、USA)を使用して評価した。各細胞系をHPf(100μg/ml)で24時間処置した後、RNAを抽出し、qRT−PCR(サイバーグリーン)を行った。
[000131]皮下脂肪細胞(subcutaneous fat cell)は、それらの構造を適切に維持するために必要な様々な因子を分泌し、これから分化される細胞、例えば前脂肪細胞(preadipocyte)および脂肪幹細胞、を含有する。本発明者らは、HPfが脂肪細胞分化を促進するのか、または抑制するのかを調べるための実験を行った。3T3−L1細胞系(CL−173、ATCC、USA)をHPf(100ug/ml)で、または対照についてはPBS(pH7.2)で処置し、細胞をオイルレッドO染料で染色して、脂肪細胞分化に対するHPfの効果を判定した。図16から分かるように、本発明者らは、この研究分野において初めて、HPfで処置した細胞が対照細胞のものと比較して40%脂肪細胞分化低減を提示することを立証できた。
[000132]本発明者らは、ヒトの皮膚に非常に類似した3D構造を有する人工皮膚を使用して皮膚コンディショニングに対するHPfの効果を調査した。3D人工皮膚培養は、Neoderm ED製品(TEGO Cell Science Inc.、Korea)を使用して、その製造者によって提供されたプロトコルに従うことによって行った。Neoderm ED製品は、ヒトに類似した表皮および真皮組織構造を有し、それ故、皮膚用の新規医薬はもちろん化粧品の開発にもよく利用されている。
[000134]HPfがホワイトニングに有効であり得るかどうかを判定するために、メラニン生合成に対するHPfの阻害効果を検査した。B16F10細胞系(CRL−6475、ATCC、USA)をHPf(100μg/ml)またはPBSで48時間処置した後、細胞生存率およびメラニン生合成を図18に示すようにMTTアッセイによって測定した。100μg/ml HPfの培養物への添加は、メラニン生合成を対照と比較して70%低減させた。これは、HPfにはホワイトニングに対する強力な効果があることを示唆している。安全性試験では、100μg/ml HPfは細胞の生存に影響されなかった。これは、この濃度でのHPfに毒性がないことを示す。
[000135]次の材料をリポ−HPfの製造に使用した:リン脂質としての大豆レシチン(Shindongbang Inc.、Korea)、Metarin P(Degussa Texturant Systems Deutschland GmbH & Co.KG)、Nutripur S(Degussa Texturant Systems Deutschland GmbH & Co.KG)またはEmultop(Degussa Texturant Systems Deutschland GmbH & Co.KG)。
(配列表)
Claims (18)
- HSP90a、HPfポリペプチド、HPfΔC1、HPfΔC2またはこれらの組合せを含む、リポソーム封入ポリペプチド組成物。
- HPfポリペプチド断片がHPfΔC1またはHPfΔC2である、請求項1に記載のリポソーム封入ポリペプチド組成物。
- 前記リポソームが、約50〜500nm、約50〜350nm、または約100〜250nmの粒径を有するナノリポソームである、請求項1に記載のリポソーム封入ポリペプチド組成物。
- 前記ポリペプチドがHSP90aである、請求項1に記載のリポソーム封入ポリペプチド組成物。
- HSP90a、HPfポリペプチド、HPfΔC1もしくはHPfΔC2ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸配列と、融合パートナーペプチドをコードする核酸配列とを含む、融合タンパク質をコードするキメラ構築物。
- 前記融合パートナーペプチドが、チオレドキシン(theoredoxin)A、マルトース結合タンパク質(MBP)またはヒト成長ホルモン(hGH)である、請求項5に記載のキメラ構築物。
- 前記HPfペプチドをコードする核酸配列と前記融合パートナーペプチドをコードする核酸配列との間に位置するタンパク質切断酵素認識部位をさらに含む、請求項6に記載のキメラ構築物。
- 前記タンパク質切断酵素認識部位が、タバコエッチウイルス(TEV)プロテアーゼ認識部位またはヒドロキシルアミン認識部位である、請求項7に記載のキメラ構築物。
- 前記HPfポリペプチドが配列番号1の核酸配列を有する、請求項5に記載のキメラ構築物。
- HPfΔC1またはHPfΔC2ポリペプチドを含む、請求項5に記載のキメラ構築物。
- TOP10細胞系、ZR4500細胞系、BL21(DE3)pLyS細胞系またはRosettaBlue(DE3)細胞系を含む、HPf融合パートナーキメラタンパク質を発現するように形質転換された形質転換細胞系。
- 前記HPf融合パートナーキメラタンパク質が、TRX(TEVc)−HPf融合タンパク質、MBP(TEVc)−HPf融合タンパク質、またはTRX(NGc)−HPf融合タンパク質である、請求項11に記載の形質転換細胞系。
- ナノリポソーム封入HSP90a、HPf、HPfΔC1またはHPfΔC2ポリペプチド組成物を調製する方法であって、
(a)リポソームを形成できるリン脂質をHSP90a、HPf、HPfΔC1またはHPfΔC2ポリペプチドと共に塩の緩衝水溶液に溶解し、ここで、前記リン脂質が黄色卵黄レシチンまたは大豆レシチンを含むものである;そして、
(b)前記水溶液を高圧ホモジナイザーに通し、その間、通す回数が増すにつれて前記リン脂質の含有量および前記高圧ホモジナイザーの圧力を徐々に増加させて、HSP90a、HPf、HPfΔC1またはHPfΔC2ポリペプチド含有ナノリポソーム封入HPfポリペプチド組成物を得る
ことを含む前記方法。 - 前記ポリペプチドがHSP90aである、請求項13に記載の方法。
- 皮膚状態を処置するための請求項1に記載の組成物を含有する局所用製剤であって、前記皮膚状態がアトピー性皮膚炎、シワ、シミ、肌のハリまたは肌老化であり、前記組成物が約100ng/ml〜約1mg/mlの濃度のHPfポリペプチドまたはHPfポリペプチド断片を含む、前記局所用製剤。
- 皮下脂肪蓄積を処置するための請求項1に記載の組成物を含有する局所用製剤であって、前記組成物が約100ng/ml〜約1mg/mlの濃度のHPfポリペプチドまたはHPfポリペプチド断片を含む、前記局所用製剤。
- アトピー性皮膚炎、シワ、シミ、肌のハリまたは肌老化である皮膚状態を処置するための調製物の製造における請求項1に記載の組成物の使用。
- 肥満、セルライト、潰瘍を伴う下肢静脈瘤、下体肢浮腫、静脈瘤、皮膚変色、静脈性湿疹、強皮症、炎症性血栓、皮膚潰瘍または慢性疼痛を処置するための調製物の製造における請求項1に記載の組成物の使用。
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Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4944948A (en) * | 1989-02-24 | 1990-07-31 | Liposome Technology, Inc. | EGF/Liposome gel composition and method |
JP2002527485A (ja) * | 1998-10-19 | 2002-08-27 | フォーダム ユニバーシティー | 熱ショックタンパク質を使用する組織修復を促進する組成物及び方法 |
WO2008086358A1 (en) * | 2007-01-08 | 2008-07-17 | University Of Southern California Usc Stevens | Skin wound healing compositions and methods of use thereof |
JP2008546707A (ja) * | 2005-06-17 | 2008-12-25 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 創傷治癒 |
JP2009511574A (ja) * | 2005-10-12 | 2009-03-19 | リゼロン、インク. | ヒト成長ホルモンを有効成分として含む皮膚状態改善用組成物。 |
US20110318400A1 (en) * | 2009-03-10 | 2011-12-29 | Alfa Biogene International B.V. | Skin Care Product |
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Family Cites Families (10)
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---|---|---|---|---|
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4944948A (en) * | 1989-02-24 | 1990-07-31 | Liposome Technology, Inc. | EGF/Liposome gel composition and method |
JP2002527485A (ja) * | 1998-10-19 | 2002-08-27 | フォーダム ユニバーシティー | 熱ショックタンパク質を使用する組織修復を促進する組成物及び方法 |
JP2008546707A (ja) * | 2005-06-17 | 2008-12-25 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 創傷治癒 |
JP2009511574A (ja) * | 2005-10-12 | 2009-03-19 | リゼロン、インク. | ヒト成長ホルモンを有効成分として含む皮膚状態改善用組成物。 |
WO2008086358A1 (en) * | 2007-01-08 | 2008-07-17 | University Of Southern California Usc Stevens | Skin wound healing compositions and methods of use thereof |
US20110318400A1 (en) * | 2009-03-10 | 2011-12-29 | Alfa Biogene International B.V. | Skin Care Product |
WO2012060832A1 (en) * | 2010-11-03 | 2012-05-10 | University Of Southern California | Skin wound healing compositions and methods of use thereof |
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J CLIN INVEST., vol. 121(11), JPN6018016274, 2011, pages 4348 - 4361 * |
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