JP2016521696A - 血栓溶解、抗血栓及びフリーラジカル消去の３つの活性を有する新規の化合物、その合成、ナノ構造と応用 - Google Patents

血栓溶解、抗血栓及びフリーラジカル消去の３つの活性を有する新規の化合物、その合成、ナノ構造と応用 Download PDF

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Abstract

本発明は、血栓溶解、抗血栓及びフリーラジカル消去の３つの活性を有する化合物、その調製方法、組成物や応用に関する。一般式Ｉで示された化合物であって、【化１０】ただし、Ｔ、Ｑ、Ｒ１及びＲ２は明細書で定義されたものである化合物。本発明に係る化合物は、血栓溶解、フリーラジカル消去及び血栓標的／抗血栓の３つの機能を兼ね備える。本発明は、更に、前記化合物を含む薬物組成物、その調製方法及びナノ構造に関する。

Description

本発明は、血栓溶解、フリーラジカル消去及び血栓標的/抗血栓の３つの機能を兼ね備えた新規の化合物及びその調製方法や用途に関し、更に、Ｃ１-４アルキル基を２つ有するテトラヒドロイソキノリン類化合物と血栓溶解オリゴペプチドをリンカーアームで結合した新規の二元コンジュゲート（ｂｉｎａｒｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）に関し、また、前記化合物を含む薬物組成物、前記化合物の調製方法及びそのナノ構造に関する。
卒中・脳梗塞のような血栓性疾患は、発病率が各種の疾患の首位を占め、近年、ますます増える勢いであり、ヒトの健康を厳しく脅かしている。血栓性疾患の薬物治療は、血栓治療の重点とホットトピックスである。現在、臨床応用の血栓薬物に数多くの限界性があるので、安全で効果的な血栓新薬を捜すのは薬物研究のホットトピックスの１つになっている。
従来の研究によると、３Ｓ-１,１-ジメチル-６,７-ジヒドロキシ-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-カルボン酸は、抗血小板凝集及び抗血栓活性に加え、更にフリーラジカル消去活性を有することが判明されている。また、２００８年１月３０日付けで提出された中国特許出願公開第ＣＮ１０１４９７６５１Ｂ号には、「３Ｓ-６,７-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-アシル-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ、３Ｓ-６,７-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-アシル-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙ、３Ｓ-６,７-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-アシル-Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ、３Ｓ-６,７-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-アシル-Ｇｌｙ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ、３Ｓ-６,７-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-アシル-Ｇｌｎ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ、３Ｓ-２-[Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ]-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-カルボン酸、３Ｓ-２-[Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ]-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-カルボン酸、３Ｓ-２-[Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ]-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-カルボン酸、３Ｓ-２-[Ｇｌｙ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ]-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-カルボン酸、３Ｓ-２-[Ｇｌｎ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ]-１,２,３,４-テトラヒドロ-６,７-ジヒドロキシイソキノリン-３-カルボン酸」を含む、血栓溶解活性を有する１０種類のテトラヒドロイソキノリン類化合物（以下、「血栓溶解活性を有する６,７-ジヒドロキシイソキノリン」と略称する）が開示されている。しかしながら、これらの６,７-ジヒドロキシイソキノリンの血栓溶解は、有効量が高く、その抗血栓とフリーラジカル消去の作用が開示又は検証されておらず、卒中に対する治療でもその発作中しか効果が見られず、発作から３０分間以上の卒中に対する効果が開示又は検証されていない。
従って、臨床的に血栓性疾患を効果的で安全に治療するために、血栓溶解、抗血栓及びフリーラジカル消去の活性を兼ね備え、また血液脳関門を効果的に通過し、そして低用量で前記効果を達成可能な新規の化合物が相変わらず望まれている。
本発明の第１の目的は、一般式Ｉの化合物であって、
Figure 2016521696
ただし、Ｔは結合用基を少なくとも２つ有するリンカーアームを示し、Ｑは血栓溶解活性を有するペプチドを示し、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なるＣ１-４アルキル基を示す化合物を提供することにある。
本発明の具体的な実施例において、リンカーアームＴの少なくとも１つの結合用基はアミノ基であり、且つ残りの結合用基はカルボキシル基又はアミノ基である。
本発明の好ましい具体的な実施例において、リンカーアームは、例えば、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕのような天然アミノ酸であってもよい。
本発明の更に好ましい具体的な実施例において、リンカーアームは、Ｌ-Ｌｙｓであってもよい。
本発明の好ましい具体的な実施例において、本発明に用いられる血栓溶解活性を有するペプチドは、ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列、ＰＡＫ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）配列、ＡＫＰ（Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ）配列又はＫＡＰ（Ｌｙｓ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）配列を含むオリゴペプチド或いはＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を構造単位とした反復配列を含むペプチドからなる群から選ばれたものであってもよい。
本発明の具体的な実施例において、血栓溶解活性を有するオリゴペプチドは、ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列、ＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を含むトリペプチド〜オクタペプチドであってもよく、ＰＡ配列を含むトリペプチドであることが好ましい。更に好ましい実施例において、ＰＡ配列を含むトリペプチドは、下記一般式Ｑ１又はＱ２を有し、
Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ （Ｑ１）
ＡＡ-Ａｌａ-Ｐｒｏ （Ｑ２）
ただし、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕからなる群から選ばれたものである。
本発明の好ましい具体的な実施例において、Ｒ１及びＲ２の何れもメチル基である。
本発明の好ましい具体的な実施例において、一般式Ｉの化合物におけるＲ１及びＲ２の何れもメチル基であり、リンカーアームはＬ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドはＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドであり、例えば、下記一般式Ｉａ（例えば、図１に示した５Ａａ-ｐ化合物）、Ｉｂ（例えば、図２示した５Ｂａ-ｐ化合物）、Ｉｃ（例えば、図３に示した５Ｃａ-ｐ化合物）、Ｉｄ（例えば、図４に示した５Ｄａ-ｐ化合物）、Ｉｅ（例えば、図５に示した５Ｅａ-ｐ化合物）、Ｉｆ（例えば、図６に示した５Ｆａ-ｐ化合物）、Ｉｇ（例えば、図７に示した５Ｇａ-ｐ化合物）又はＩｈ（例えば、図８に示した５Ｈａ-ｐ化合物）を有してもよい。
Figure 2016521696
ただし、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕからなる群から選ばれたものである。
本発明の第２の目的は、前記本発明に係る化合物、及び薬学的に許容される担体を含む薬物組成物を提供することにある。
本発明の薬物組成物の好ましい具体的な実施例において、前記化合物は、ナノスフェア構造を形成できる。
本発明の好ましい具体的な実施例において、本発明の薬物組成物は、血栓溶解薬物、ＮＯフリーラジカル消去薬物又は血栓標的／抗血栓薬物とされてもよい。
本発明の別の好ましい具体的な実施例において、本発明の薬物組成物は、卒中又は脳梗塞を治療する薬物とされてもよく、発病してから４時間、６時間及び２４時間を超えた卒中又は脳梗塞の治療に用いられることが更に好ましく、且つ薬を連続的に投与するように治療する。
本発明の第三の目的は、
一般式ＩＩの化合物を提供し、
Figure 2016521696
Ｒ１及びＲ２は同一又は異なるＣ１-４アルキル基を示す工程（１）と、
結合用基を少なくとも２つ有するリンカーアームＴ、及び血栓溶解活性を有するペプチドＱを提供し、前記リンカーアームは第１の結合用基と第２の結合用基を有する工程（２）と、
適当な反応条件において、一般式ＩＩの化合物のカルボキシル基と前記リンカーアームＴの第１の結合用基を結合し、一般式ＩＭ-１化合物を形成する工程（３）と、
Figure 2016521696
適当な反応条件において、前記血栓溶解活性を有するペプチドＱの一端が前記リンカーアームＴの第２の結合用基と結合するように、前記血栓溶解活性を有するペプチドＱと一般式ＩＭ-１化合物を結合して、一般式Ｉの化合物を形成する工程（４）と、
を含む一般式Ｉの化合物の調製方法を提供することにある。
本発明の具体的な実施例において、リンカーアームＴは、第１の結合用基が一般式ＩＩの化合物のカルボキシル基と縮合反応するためのアミノ基であり、第２の結合用基が血栓溶解活性を有するペプチドＱのＮ端又はＣ端との結合するためのカルボキシル基又はアミノ基である。本発明の調製方法に用いられるリンカーアームＴ及び血栓溶解活性を有するペプチドＱは、前記本発明の式Ｉ化合物で定義されたものと同じである。
好ましい具体的な実施例において、本発明の調製方法に係るリンカーアームは、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕであってもよく、更にＬ-Ｌｙｓであることが好ましく、血栓溶解活性を有するペプチドは、ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチド、ＰＡＫ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）配列、ＡＫＰ（Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ）配列又はＫＡＰ（Ｌｙｓ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）配列を含むオリゴペプチド、或いはＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を構造単位とした反復配列を含むペプチドであってもよく、下記一般式Ｑ１又はＱ２を有するトリペプチドであることが更に好ましい。
Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ （Ｑ１）
ＡＡ-Ａｌａ-Ｐｒｏ （Ｑ２）
ただし、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕからなる群から選ばれたものである。
また他の好ましい具体的な実施例において、本発明の調製方法に係る一般式ＩＩの化合物のＲ１及びＲ２の何れもメチル基であり、リンカーアームはＬ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドである。更に好ましい具体的な実施例において、本発明の調製方法は、上記一般式Ｉａ-ｈ化合物の形成に用いられることができる。
本発明に係る化合物又は薬物組成物によるラット体内活性試験により、低用量でも優れた血栓溶解及び抗血栓活性を有し、卒中ラットの神経機能を効果的に保護し、臨床的に血栓性疾患を効果的で安全に治療することができることが判明された。
本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉａを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｂを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｃを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｄを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｅを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｆを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｇを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物Ｉｈを合成する合成経路である。 本発明の一実施例により、本発明に係る化合物５Ａａ-ｐのナノ構造を測定する透過型電子顕微鏡写真である。
以下、図面及び実施例を併せて、本発明の技術案を詳しく説明する。しかし、本発明の保護範囲は、下記内容を含むが、それらに限定されない。
本発明では、Ｃ１-４アルキル基を２つ有するテトラヒドロイソキノリン類化合物（即ち、一般式ＩＩの化合物）と血栓溶解オリゴペプチドをリンカーアームで結合して、血栓溶解、フリーラジカル消去及び血栓標的／抗血栓の３つの機能を兼ね備えた新規の二元コンジュゲートを形成し、以下、「本発明の新規の二元コンジュゲート」と略称する。
一般式ＩＩの化合物の１位に２つのＣ１-４アルキル基が導入され、３位にリンカーアームが導入されるため、「本発明の新規の二元コンジュゲート」は、従来既知の「血栓溶解活性を有する６,７-ジヒドロキシイソキノリン」と比べ、以下の４つの優位を有する。１）一般式ＩＩの化合物の１位に導入された２つのＣ１-４アルキル基の立体障害効果により、カルボキシペプチダーゼ及びアミノペプチダーゼの何れも、「本発明の新規の二元コンジュゲート」における血栓溶解オリゴペプチドに容易に片寄らないので、加水分解しにくい。２）一般式ＩＩの化合物の１位に導入された２つのＣ１-４アルキル基の疎水性のおかげで、「本発明の新規の二元コンジュゲート」は、血液脳関門をより好適に通過することができる。３）一般式ＩＩの化合物の１位に導入された２つのＣ１-４アルキル基の電子供与のおかげで、「本発明の新規の二元コンジュゲート」の還元能力は、フリーラジカル消去の要求に応えることができる。４）一般式ＩＩの化合物の３位に導入されたリンカーアームにより、「本発明の新規の二元コンジュゲート」の分子は、効果的に会合して、粒径が２０〜２１０ｎｍ、より好ましくは２０〜１００ｎｍのナノスフェアを形成することができ、このような安定的なナノ構造により、「本発明の新規の二元コンジュゲート」が血液循環でマクロファージに飲み込まれないようになり、血栓形成部位に安全に伝送され、最終的に血液脳関門を通過することができる。要するに、「本発明の新規の二元コンジュゲート」は、ナノ構造を形成し、血液脳関門の通過する効果を達成することができ、溶血栓と抗血栓に加え、ＯＨや、ＮＯ、超酸化物陰イオン等のフリーラジカルを効果的に消去し、且つ低用量で血栓を効果的に溶解でき、臨床応用においてかなり将来性がある。
本文に用いられる場合、「結合用基」とは、例えば、カルボキシル基やアミノ基のような縮合反応を行うことのできる官能基である。
本文に用いられる場合、「リンカーアーム」とは、前記結合用基を有し、一般式ＩＩの化合物と血栓溶解活性を有するペプチドＱとを結合させるための分子である。リンカーアームは、少なくとも１つの結合用基がアミノ基であり、且つ残りの結合用基がカルボキシル基又はアミノ基である。本発明によると、リンカーアームは、例えば、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕのような天然アミノ酸であってもよい。
導入されたリンカーアームにより、「本発明の新規の二元コンジュゲート」は、マクロファージに飲み込まれない安定的なナノスフェア構造となり、血栓形成部位に安全に伝送され、最終的に血液脳関門を通過することができる。特に、Ｌ-Ｌｙｓをリンカーアームとする場合、「本発明の新規の二元コンジュゲート」の分子がより効果的に会合して、粒径が２０〜２１０ｎｍ、より好ましくは２０〜１００ｎｍのナノスフェアを形成する。このような安定的なナノ構造により、「本発明の新規の二元コンジュゲート」は、血液循環中でマクロファージに飲み込まれないようになり、血栓形成部位に安全に伝送され、最終的に血液脳関門を通過することができる。
本文に用いられる場合、「オリゴペプチド」とは、一般的に３〜８のアミノ酸からなる分子量が１０００ダルトン（Ｄ）以下の小分子ペプチドである。
本文に用いられる場合、「血栓溶解活性を有するペプチド」とは、Ｐ６Ａ（ＡＲＰＡＫ）、Ｐ６Ａ代謝物、及び関連の誘導体を含む、血管透過性向上作用及び血栓溶解作用を有するオリゴペプチド血栓溶解剤である。従来の研究には、複数の血栓溶解オリゴペプチド（Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ、Ｇｌｙ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ、Ｇｌｎ-Ａｒｇ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＬｙｓとＰｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓを含む）において、Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓは、活性が優れた最短の配列ばかりでなく、一番安定的な配列である。一般式ＩＩの化合物の３位にリンカーアームによってＰｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ配列トリペプチドを導入することで、より優れた安定性及びより強い血栓溶解活性を「本発明の新規の二元コンジュゲート」に持たせることができる。
例としては、本発明に用いられるＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を含むオリゴペプチドは、ＰＡＫ、ＲＰＡＫ（Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）、ＡＲＰＡＫ（Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）、ＧＲＰＡＫ（Ｇｌｙ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）、ＱＲＰＡＫ（Ｇｌｎ-Ａｒｇ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）、ＡＫＰ、ＫＡＰ、ＫＰＡＫ（Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）、ＰＡＫＰ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ）、ＡＫＰＡＫ（Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）又はＰＡＫＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ａｌａ）であってもよい。
例としては、本発明に用いられるＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を構造単位とした反復配列ペプチドは、中国特許出願公開番号第ＣＮ１０１１９０９４１号出願に開示された、ＰＡＫを構造単位として合成した反復配列ペプチド（ＰＡＫ）２、（ＰＡＫ）３、（ＰＡＫ）４、（ＰＡＫ）５及び（ＰＡＫ）６、ＡＫＰを構造単位として合成した反復配列ペプチド（ＡＫＰ）２、（ＡＫＰ）３、（ＡＫＰ）４、（ＡＫＰ）５及び（ＡＫＰ）６、及びＫＰＡを構造単位として合成した反復配列ペプチド（ＫＰＡ）２、（ＫＰＡ）３、（ＫＰＡ）４、（ＫＰＡ）５及び（ＫＰＡ）６を含む一連の血栓溶解活性を有するペプチドであってもよい。
本文に用いられる場合、「Ｃ１-４アルキル基」とは、例えば、メチル基、エチル基、ｎ-プロピル基、イソプロピル基、ｎ-ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ-ブチル基、ｔｅｒｔ-ブチル基のような炭素数１〜４のアルキル基である。本発明の一般式Ｉの化合物におけるＲ１及びＲ２の何れもメチル基である場合、出発物質である一般式ＩＩの化合物は、トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ；ＴＦＡ）と無水硫酸マグネシウムの存在下で、３,４-ジヒドロキシ-Ｌ-フェニルアラニンとアセトンがＰｉｃｔｅｔ-Ｓｐｅｎｇｌｅｒ縮合して得られたものであり、より調製しやすいメリットがある。
本発明の薬物組成物は、臨床的に許容されるいかなる適宜な製剤であってもよい。注射製剤（粉末注射剤、凍結乾燥粉注射剤、水注射剤、点滴等）が好ましく、薬学的に許容される担体は、マンニトール（ｍａｎｎｉｔｏｌ）、水、リンガー注射液（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、又は生理食塩水注射液（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）等であってもよい。
血液脳関門をより好適に通過できるには、本発明に係る化合物のナノスフェア粒径は、２０〜２１０ｎｍにあり、より好ましくは２０〜１００ｎｍにある。
安定的なナノ構造により、本発明に係る化合物は、血液循環でマクロファージに飲み込まれないようになり、血栓形成部位に安全に伝送され、最終的に血液脳関門を通過することができる。本発明の薬物組成物は、心筋梗塞（Ｍｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、卒中（Ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ）、静脈血栓症（Ｄｅｅｐ ｖｅｉｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、肺塞栓症（Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｍｂｏｌｉｓｍ）、末梢動脈閉塞性疾患（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｒｔｅｒｉａｌ ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、静脈管閉塞（ｏｃｃｌｕｄｅｄ ｃｅｎｔｒａｌ ｖａｓｃｕｌａｒ ａｃｃｅｓｓ ｄｅｖｉｃｅｓ）、動静脈瘻及びシャント閉塞（Ｃｌｏｔｔｅｄ ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ ｆｉｓｔｕｌａ ａｎｄ ｓｈｕｎｔｓ）、及び頸動脈狭窄症（Ｃａｒｏｔｉｄ Ｓｔｅｎｏｓｉｓ）等の疾患を治療するための血栓溶解薬物とされてもよい。本発明の薬物組成物は、神経変性疾患（Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、心血管疾患（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、精神疾患、高山病（Ａｌｔｉｔｕｄｅ ｓｉｃｋｎｅｓｓ ）、糖尿病、関節リウマチ、外傷性脳損傷（Ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ）、癌、脆弱Ｘ症候群（Ｆｒａｇｉｌｅ Ｘ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、鎌状赤血球症（Ｓｉｃｋｌｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）、扁平苔癬（Ｌｉｃｈｅｎ ｐｌａｎｕｓ）、白斑（Ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、又は慢性疲労症候群（Ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｉｇｕｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）等の疾患を治療するためのＮＯフリーラジカル消去薬物とされてもよい。本発明の薬物組成物は、血小板増加症（Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｓｉｓ）、骨髄増殖性疾患（ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、真性多血症（Ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ）、又はバッドキアリ症候群（Ｂｕｄｄ-Ｃｈｉａｒｉ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）等の疾患を治療するための血栓標的／抗血栓薬物とされてもよい。
本発明の薬物組成物／化合物は、ＯＨ、ＮＯ及び超酸化物陰イオン等のフリーラジカルの消去、血栓溶解及び抗血栓／血栓標的の機能を兼ね備えるため、患者が卒中になって４時間の後でも効果を維持し、即ち、ｔＰＡの３時間の治療最適期に制限されず、ｔＰＡのような全身出血の反応にならなく、虚血再潅流の途中で生じた大量のＯＨ、ＮＯ及び超酸化物陰イオン等のフリーラジカルを消去することができ、患者が治療時に脳神経組織が損傷されないようにする。一般式ＩＩの化合物の１位に２つのＣ１-４アルキル基が導入され、３位にリンカーアームが導入されるため、「本発明の新規の二元コンジュゲート」は、従来既知の「血栓溶解活性を有する６,７-ジヒドロキシイソキノリン」と比べ、低用量でもより優れた血栓溶解活性、独特のフリーラジカル消去と抗血栓活性が現われ、やや高い用量で４時間以上の卒中に対して優れた効果がある。
中国特許公開番号第ＣＮ１０１４９７６５１Ｂ号には、「血栓溶解活性を有する６,７-ジヒドロキシイソキノリン」は、１０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で血栓溶解の効果が現われる。しかしながら、本発明に係る化合物は、０．１ｎｍｏｌ／ｋｇで、優れた血栓溶解及び抗血栓の効果が現われ、且つ１μｍｏｌ／ｋｇ、２．５μｍｏｌ／ｋｇ、５μｍｏｌ／ｋｇの用量で、それぞれ卒中になって４、６、２４時間の後で著しい優れた治療作用がある。
本発明に係る化合物調製方法で、まず血栓溶解活性を有するペプチドＱを合成して、そしてリンカーアームＴの第２の結合用基と結合し、或いは血栓溶解活性を有するペプチドＱにおけるアミノ酸を予定配列に従い順次に１つずつ又は複数でリンカーアームＴと結合し、例えば、まず血栓溶解活性を有するペプチドＱにおける一端の第１のアミノ酸をリンカーアームＴの第２の結合用基と結合し、そして、残りのアミノ酸を順次に１つずつ又は複数で接合する。
本発明の調製方法は、以下の更に詳しい説明で更に了解することができる。
一般式ＩＩの化合物は、以下の合成経路で得られる。
Figure 2016521696
Ｒ１及びＲ２は同一又は異なるＣ１-４アルキル基を示す。例としては、まず３,４-ジヒドロキシ-Ｌ-フェニルアラニン（ＳＭ-１）と一般式ＳＭ-２化合物をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）に溶解させ、無水硫酸マグネシウムがある条件で、３,４-ジヒドロキシ-Ｌ-フェニルアラニンとＳＭ-２に対してＰｉｃｔｅｔ-Ｓｐｅｎｇｌｅｒ縮合を発生して一般式ＩＩの化合物が得られる。
好ましい実施例において、本発明の調製方法に係るリンカーアームがＬ-Ｌｙｓであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドであり、例えば、まず一般式ＩＩの化合物のカルボキシル基とＬ-Ｌｙｓの１つのＮ端を接続し、そしてＰＡ配列を含むトリペプチドとＬ-Ｌｙｓリンカーアームにおける残りのＮ端又はＣ端を接合する。一部の実施例において、一般式ＩＩの化合物におけるＲ１及びＲ２の何れもメチル基（即ち、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸）であり、リンカーアームがＬ-Ｌｙｓであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドである場合、本発明の調製方法は、上記の化合物Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、又はＩｄを形成してもよい。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉａを形成する時に、図１に記載された合成経路を参照してもよい。
図１に示すような実施例において、まずＰＡ配列を含むトリペプチドを合成して、またＬ-Ｌｙｓリンカーアームと結合し、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ａａ-ｐ化合物である）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌ、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ氷浴、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）２Ｍ ＮａＯＨ。別の実施例において、まずＰＡ配列を含むトリペプチドにおける１つのアミノ酸（例えばＡＡ）をＬ-Ｌｙｓリンカーアームと結合し、そしてＰＡ配列を含むトリペプチドにおける残りの２つのアミノ酸（例えばＰｒｏ-Ａｌａ）をＡＡと結合する。
例としては、本発明に係る化合物Ｉａの形成に用いられる実施例において、本発明の調製方法は、以下の工程を含んでもよい。
１）トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と無水硫酸マグネシウムがある条件で、３,４-ジヒドロキシ-Ｌ-フェニルアラニンとアセトンがＰｉｃｔｅｔ-Ｓｐｅｎｇｌｅｒ縮合を発生し、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸を生成する。
２）ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）がある条件で、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸が無水Ｎ,Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）でＨＣｌ・Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌと縮合して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌを形成し、縮合反応中に随時にＮ-メチルモルホリン（ＮＭＭ）によってｐＨ＝９を調節する。
３）塩化水素の酢酸エチル溶液で３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌに対してＢｏｃを除去して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌが得られる。
４）ＤＣＣとＨＯＢｔがある条件でＢｏｃ-Ｐｒｏが無水テトラヒドロフランでＴｏｓ・Ａｌａ-ＯＢｚｌと縮合してＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＯＢｚｌを形成する。
５）エタノールでＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＯＢｚｌをＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａに水素化分解させる。
６）ＤＣＣとＨＯＢｔがある条件でＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａが無水テトラヒドロフランでＡＡ-ＯＢｚｌと縮合してＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ-ＯＢｚｌ（ＡＡがＬ-Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｌｙｓ（Ｚ）、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ａｓｎ及びＬ-Ｇｌｎ残基から選ばれる）を形成する。
７）エタノールで工程６のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ-ＯＢｚｌをＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡに水素化分解させる。
８）ＤＣＣとＨＯＢｔがある条件で、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌが無水ＤＭＦで工程６のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡと縮合して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ）-ＯＢｚｌ（ＡＡの定義が工程６と同じである）を形成する。
９）ＤＣＣとＨＯＢｔがある条件で、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌが無水ＤＭＦでＢｏｃ-ＡＡ（ＯＢｚｌ）と縮合して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-ＡＡ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌ（ＡＡはＬ-Ａｓｐ、Ｌ-Ｇｌｕ残基から選ばれる）を形成する。
１０）塩化水素の酢酸エチル溶液で３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-ＡＡ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌに対してＢｏｃを除去して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[ＡＡ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌ（ＡＡの定義が工程９と同じである）が得られる。
１１）ＤＣＣとＨＯＢｔがある条件で、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[ＡＡ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌが無水ＤＭＦでＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと縮合して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌ（ＡＡの定義が工程９と同じである）を形成する。
１２）水素化分解とＢｏｃ除去により３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ）-ＯＢｚｌ（ＡＡの定義が工程６と同じである）と３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌ（ＡＡの定義が工程９と同じである）を脱保護して３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ）が得られる。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｂを形成する場合、図２に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｂａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌ、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｃを形成する場合、図３に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｃａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ｂｏｃ-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌ、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ氷浴、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｄを形成する場合、図４に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｄａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ｂｏｃ-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌ、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、 ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ。
別の好ましい実施例において、本発明の調製方法に係るリンカーアームがＬ-Ａｓｐであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドであり、例えば、まず一般式ＩＩの化合物のカルボキシル基とＬ-ＡｓｐのＮ端を接続させ、そしてＰＡ配列を含むトリペプチドとＬ-Ａｓｐリンカーアームにおける残りの１つのＣ端を接合する。一部の実施例において、一般式ＩＩの化合物におけるＲ１及びＲ２の何れもメチル基（即ち、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸）であり、リンカーアームがＬ-Ａｓｐであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドである場合、本発明の調製方法は、上記の化合物Ｉｅ又はＩｆを形成してもよい。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｅを形成する場合、図５に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｅａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＣＨ３）-ＯＢｚｌ、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、２Ｍ ＮａＯＨ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｆを形成する場合、図６に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｆａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）-Ｏ ＣＨ３、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）２Ｍ ＮａＯＨ、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、２Ｍ ＮａＯＨ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴。
また他の好ましい実施例において、本発明の調製方法に係るリンカーアームがＬ-Ｇｌｕであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドであり、例えば、まず一般式ＩＩの化合物とＬ-ＧｌｕのＮ端を接続させ、そしてＰＡ配列を含むトリペプチドとＬ-Ｇｌｕリンカーアームにおける残りの１つのＣ端を接合する。一部の実施例において、一般式ＩＩの化合物におけるＲ１及びＲ２の何れもメチル基（即ち、３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸）であり、リンカーアームがＬ-Ｇｌｕであり、且つ血栓溶解活性を有するペプチドがＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドである場合、本発明の調製方法は、上記の化合物Ｉｇ又はＩｈを形成してもよい。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｇを形成する場合、図７に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｇａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ｇｌｕ（Ｏ ＣＨ３）-ＯＢｚｌ、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、２Ｍ ＮａＯＨ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴。
本発明の調製方法により本発明に係る化合物Ｉｈを形成する場合、図８に記載された合成経路を参照してもよく、ＡＡはＬ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕ残基（それぞれが５Ｈａ-ｐ化合物）から選ばれ、且つ反応条件が以下の通りであり、ｉ）Ａｃｅｔｏｎｅ、ＴＦＡ、ＭｇＳＯ４、ｉｉ）ＨＣｌ．Ｇｌｕ（Ｏ Ｂｚｌ）-ＯＣＨ３、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｉｉｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｉｖ）ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ｖ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、２Ｍ ＮａＯＨ、氷浴、ｖｉ）エタノール、Ｐｄ／Ｃ、ｖｉｉ）４Ｍ ＨＣｌ／ＥＡ、氷浴。
本発明に係る化合物又は薬物組成物によるラット体内活性試験により、低用量でも優れた血栓溶解及び抗血栓活性を有し、卒中ラットの神経機能を効果的に保護し、臨床的に血栓性疾患を効果的で安全に治療することができることが判明された。
以下、具体的な実施例を併せて更に本発明を説明し、本発明のメリットと特徴は説明に従い更に明らかになる。しかしながら、これらの実施例は、ただ示範であり、本発明の範囲にいかなる制限を与えない。当業者では、本発明の精神と範囲から逸脱せずに、本発明の技術案の細部と形式に対して変更や交換をすることができるが、これらの変更や交換の何れも本発明の保護範囲内にある。
実施例１〜６８は、図１の調製方法により、本発明の５Ａａ-ｐ化合物を製造することを例示する。
実施例１ 液相トランスペプチダーゼ反応通法
Ｎ端に保護されたアミノ酸を無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解させ、得られた溶液に１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を入れ、氷浴を行い、ゆっくり無水ＴＨＦに溶解したＮ,Ｎ-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を入れ、０℃で１５分間攪拌し、反応液（Ｉ）を得た。カルボキシル末端に保護されたアミノ酸も無水ＴＨＦに溶解させ、Ｎ-メチルモルホリン（ＮＭＭ）でｐＨ９に調節し、そして反応液(（Ｉ）と混合し、Ｎ-メチルモルホリンでｐＨ９を維持し、室温で１０時間攪拌し、ＴＬＣで反応プロセスを測定した。原料点が消えてから、反応混合物を濾過し、濾液を減圧下濃縮し、得られた粘稠状物質を酢酸エチル又はジクロロメタンに溶解させ、得られた溶液を順次に５％ ＮａＨＣＯ３水溶液、５％ ＫＨＳＯ４水溶液、飽和ＮａＣＬの水溶液により洗浄し、酢酸エチル又はジクロロメタン相に無水硫酸ナトリウムを入れ、乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下濃縮して、目的化合物を得た。
実施例２ Ｂｏｃ除去通法
Ｂｏｃに保護されたペプチドを少量の無水酢酸エチルに溶解させ、氷浴で攪拌しながら塩化水素の酢酸エチル溶液（４Ｍ）を入れた。ＴＬＣの表示により原料点が消えてから、反応溶液をポンプによって繰り返して抜き取り、塩化水素気体を除去し、残留物を石油エーテル又は無水エーテルにより繰り返して研和し、目的化合物を得た。
実施例３ ベンジルエステル除去通法
ポリペプチドベンジルエステルをＣＨ３ＯＨに溶解させ、氷浴で攪拌しながらゆっくりＮａＯＨの水溶液（２Ｍ）を滴下し、氷浴で反応液温度を０°Ｃに維持し、ＴＬＣの表示により原料が消えた。反応液を１Ｍの塩酸により中性に調節し、減圧してメタノールを除去し、続いて１Ｍの塩酸をｐＨ２に酸化し、溶液を酢酸エチルにより抽出し、合併された酢酸エチル相を飽和ＮａＣＬの水溶液により中性に洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下濃縮して、目的化合物を得た。
実施例４ カルボベンゾキシ又はベンジルエステル基除去通法
カルボベンゾキシ又はベンジルエステルによる保護を有するペプチドを適量のエタノールに溶解させ、パラジウム炭素（反応物量の１０％）を入れ、水素を導入し室温で水素化分解させた。反応終了後に濾過し、減圧下濃縮して、目的化合物を得た。
実施例５ Ｂｏｃ-Ｐｒｏの調製
５．７５ｇ（５０ｍｍｏｌ）のＬ-Ｐｒｏを１ｍＬの水に溶解させ、氷浴で攪拌しながらゆっくり２５ｍＬのＮａＯＨ水溶液（２Ｍ）を滴下し、溶液（Ｉ）を得た。１３．０８ｇ（６０ｍｍｏｌ）の（Ｂｏｃ）２Ｏを２５ｍＬのジオキサンに溶解させ、溶液（ＩＩ）を得た。氷浴で攪拌されている溶液（Ｉ）の中に溶液（ＩＩ）を滴下し、氷浴でゆっくりＮａＯＨ水溶液（２Ｍ）を滴下しｐＨ９に調節し、混合物を氷浴で攪拌した。３０分間後、反応混合物のｐＨ値を検出し、ＮａＯＨ水溶液（２Ｍ）によってｐＨ値を９に保持させ、反応による気体をポンプによって抽出した。４８時間攪拌し、ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール、２０：１）により反応完全を検出した。反応混合物を減圧下濃縮してジオキサンを除去し、残留物を５ｍＬの水に溶解させ、飽和硫酸水素カリウム水溶液でｐＨ２に調節し、水溶液を酢酸エチルにより３回抽出し、合併された酢酸エチル相を５％のＫＨＳＯ４により３回洗浄し、飽和ＮａＣＬの水溶液により中性に洗浄し、分離された酢酸エチル層に無水硫酸ナトリウムを入れ、乾燥させた。濾液を濾過し、減圧下濃縮し、残留物を酢酸エチル-石油エーテルにより再結晶化し、１０．２ｇ（９５％）の無色結晶である目的化合物を得た。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：２１４ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例６ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、４．３ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏと８．４５ｇ（２４．０ｍｍｏｌ）のＴｏｓ・Ａｌａ-ＯＢｚｌから５．１９ｇ（６８％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３７７ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例７ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａの調製
実施例４の方法により、５．１９ｇ（１３．８ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＯＢｚｌから３．５９ｇ（９１％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８５ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例８ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．００ｇ（１０．４９ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．２６ｇ（１２．０３ｍｍｏｌ）のＴｏｓ・Ａｌａ-ＯＢｚから３．０４ｇ（６８％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４４８ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例９ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａの調製
実施例３の方法により、４．４７ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａ-ＯＢｚｌから３．２１ｇ（９０％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３５６ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例１０ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．００ｇ（１０．４９ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．５８ｇ（１２．０１ｍｍｏｌ）のＴｏｓ・Ｖａｌ-ＯＢｚｌから３．２８ｇ（６９％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７６ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例１１ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌの調製
実施例３の方法により、４．７５ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌ-ＯＢｚｌから３．５４ｇ（９２％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３８４ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例１２ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．００ｇ（１０．４９ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．９７ｇ（１２．０１ｍｍｏｌ）のＨＣｌ・Ｔｒｐ-ＯＢｚｌから３．６５ｇ（６５％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５６３ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例１３ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐの調製
実施例３の方法により、５．６２ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐ-ＯＢｚｌから４．２１ｇ（８９％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７１ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例１４ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと４．４３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＴｏｓ・Ｔｙｒ-ＯＢｚｌから３．７３ｇ（６９％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５４０ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例１５ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒの調製
実施例３の方法により、５．３９ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒ-ＯＢｚｌから４．１３ｇ（９２％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４４８ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例１６ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．００ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと２．９２ｇ（１１．０ｍｍｏｌ）のＴｏｓ・Ｐｈｅ-ＯＢｚｌから３．８２ｇ（６６％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５２４ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例１７ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅの調製
実施例３の方法により、５．２３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅ-ＯＢｚｌから３．９４ｇ（９１％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４３２ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例１８ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．３７ｇ（１０ｍｍｏｌ）Ｔｏｓ・Ｇｌｙ-ＯＢｚｌから２．９０ｇ（６７％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４３４ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例１９ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙの調製
実施例３の方法により、４．３３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙ-ＯＢｚｌから２．９８ｇ（８７％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３４２ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例２０ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．６７ｇ（１０ｍｍｏｌ）Ｔｏｓ・Ｓｅｒ-ＯＢｚｌから２．９２ｇ（６３％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６４ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例２１ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒの調製
実施例３の方法により、４．６３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒ-ＯＢｚｌから３．２８ｇ（８８％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３７２ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例２２ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．９３ｇ（１０ｍｍｏｌ）Ｔｏｓ・Ｉｌｅ-ＯＢｚｌから３．３３ｇ（６５％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９０ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例２３ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅの調製
実施例３の方法により、４．８９ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅ-ＯＢｚｌから３．６７ｇ（９１％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３９８ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例２４ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．８１ｇ（１０ｍｍｏｌ）Ｔｏｓ・Ｔｈｒ-ＯＢｚｌから３．３９ｇ（７１％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７８ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例２５ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒの調製
実施例３の方法により、４．７７ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒ-ＯＢｚｌから３．５６ｇ（９１％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３８６ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例２６ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ（Ｚ）-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと４．０６ｇ（１０ｍｍｏｌ）ＨＣｌ・Ｌｙｓ（Ｚ）-ＯＢｚｌから４．１５ｇ（６５％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６３９ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例２７ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ（Ｚ）の調製
実施例３の方法により、６．３９ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ（Ｚ）-ＯＢｚｌから４．７１ｇ（８６％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５４７[Ｍ-Ｈ]-．
実施例２８ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと３．９３ｇ（１０ｍｍｏｌ）Ｔｏｓ・Ｌｅｕ-ＯＢｚｌから３．３７ｇ（６９％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９０ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例２９ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕの調製
実施例３の方法により、４．８９ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕ-ＯＢｚｌから３．６７ｇ（９１％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３９８ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例３０ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと２．７３ｇ（１０ｍｍｏｌ）ＨＣｌ・Ｇｌｎ-ＯＢｚｌから３．２３ｇ（６３％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５０５ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例３１ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎの調製
実施例３の方法により、５．０４ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎ-ＯＢｚｌから３．７３ｇ（９０％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４１３ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例３２ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎ-ＯＢｚｌの調製
実施例１の方法により、３．１５ｇ（１１ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａと２．５９ｇ（１０ｍｍｏｌ）ＨＣｌ・Ａｓｎ-ＯＢｚｌから３．０４ｇ（６１％）の無色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４９１ [Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例３３ Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎの調製
実施例３の方法により、４．９０ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎ-ＯＢｚｌから３．６７ｇ（９２％）の目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３９９ [Ｍ-Ｈ]-．
実施例３４ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸（１）の調製
５．０ｇ（２５ｍｍｏｌ）の３,４-ジヒドロキシ-Ｌ-フェニルアラニンを２５０ｍＬのアセトンに溶解させた。得られた溶液に６．０ｇ（３０ｍｍｏｌ）の無水硫酸マグネシウムを入れた。３０分間後、氷浴で２５ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を入れ、後で、室温で９６ｈ攪拌し、ＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール、１：１）の表示により原料点が消えた。反応液を濾過し、濾液を減圧下濃縮し、残留物をアセトンに溶解させ、続いて減圧下濃縮することを繰り返して３回行った。残留物に２００ｍＬの無水エーテルを入れ、大量の無色固体が析出され、吸引ろ過して５．８ｇ（９５％）の無色固体である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：２３８ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝６．６１（ｓ、１Ｈ）、６．４５（ｓ、１Ｈ）、３．７０（ｄｄ、Ｊ＝３．９、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７６（ｄｄ、Ｊ＝１１．７、１５．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．６２（ｍ、１Ｈ）、１．４１（ｓ、３Ｈ）、１．３２（ｓ、３Ｈ）．
実施例３５ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌ（２）の調製
実施例１の方法により、１．１９ｇ（５．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸を１０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解させた。得られた溶液に６７５ｍｇ（５．００ｍｍｏｌ）の１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を入れた。１０分後、氷浴で１．２０ｇ（５．８３ｍｍｏｌ）のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と５ｍＬの無水ＤＭＦの溶液を入れ、反応液（Ｉ）を得た。２．８３ｇ（５．５３ｍｍｏｌ）のＨＣｌ・Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌを１５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解させ３０分間攪拌し、反応液（ＩＩ）を得た。氷浴で攪拌しながら、反応液（ＩＩ）を反応液（Ｉ）に入れ、そして室温で１２ｈ攪拌し、随時にＮ-メチルモルホリン（ＮＭＭ）によってｐＨ＝９に調節し、ＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール、１０：１）の表示により３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-カルボン酸が消えた。反応混合物を濾過しジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を除去した。濾液を減圧下濃縮して、ＤＭＦを除去した。残留物を１５０ｍＬの酢酸エチルに溶解させた。得られた溶液を順次に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液により３回洗浄し飽和ＮａＣＬの水溶液により３回洗浄した。酢酸エチル溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させ、濾過し、乾燥まで濾液を減圧下濃縮して、残留物をカラムクロマトグラフィにより精製（ジクロロメタン／メタノール、５０：１）し、３２７ｍｇ（５９％）のライトピンク粉末である目的化合物を得た。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５５６ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝８．６４（ｓ、１Ｈ）、８．５２（ｓ、１Ｈ）、８．１４（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６（ｍ、５Ｈ）、６．７４（ｍ、１Ｈ）、６．５７（ｓ、１Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｍ、２Ｈ）、４．３０（ｍ、１Ｈ）、３．５５（ｍ、２Ｈ）、３．３２（ｍ、２Ｈ）、２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．１５（ｓ、１Ｈ）、１．６９（ｍ、４Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）、１．２５（ｓ、３Ｈ）．
実施例３６ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌ（３Ａ）の調製
実施例２の通法により、１．５０ｇ（２．７３ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＯＢｚｌから１．０１ｇ（８２％）のライトピンク固体である目的化合物が得られ、直接次の反応に用いられた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：４５６[Ｍ＋Ｈ]＋．
実施例３７ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａ）-ＯＢｚｌ（４Ａａ）の調製
実施例１の方法により、４８２ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと４２４ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａから３０２ｍｇ（３８％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：７９５ [Ｍ＋Ｈ]＋、 １ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．１５（ｓ、１Ｈ）、８．８９（ｓ、２Ｈ）、８．１１（ｍ、１Ｈ）、７．９４（ｍ,１Ｈ）、７．８５（ｍ、１Ｈ）、７．７６（ｍ,１Ｈ）、７．４４-７．３１（ｍ、５Ｈ）、６．６６（ｓ、１Ｈ）、６．４７（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｍ,２Ｈ）、４．２５（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｍ、３Ｈ）、４．１２（ｍ、１Ｈ）、３．６６（ｍ、１Ｈ）、３．１２（ｍ、２Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）、２．８９-２．９１（ｍ、２Ｈ）、２．１１-２．０８（ｍ、１Ｈ）、１．７７（ｍ,５Ｈ）、１．５９（ｓ、３Ｈ）、１．４７-１．２７（ｍ,１７Ｈ）、１．２７-１．０８（ｍ、７Ｈ）．
実施例３８ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌ）-ＯＢｚｌ（４Ａｂ）の調製
実施例１の方法により、９６４ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと９２４ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌから６０４ｍｇ（３７％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８２３ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．１８（ｓ、１Ｈ）、８．９３（ｍ,２Ｈ）、８．０５（ｍ、２Ｈ）、７．４２（ｍ、５Ｈ）、６．６６（ｓ、１Ｈ）、６．４７（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｓ,１Ｈ）、４．３７-４．２８（ｍ、３Ｈ）、４．１１（ｍ、３Ｈ）、３．０６-２．８９（ｍ、５Ｈ）、２．７５（ｍ、６Ｈ）、２．０４（ｓ、１Ｈ）、１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．７９（ｍ、５Ｈ）、１．６２（ｓ、３Ｈ）、１．４９（ｓ,３Ｈ）、１．３９（ｍ、７Ｈ）、１．３２（ｍ、３Ｈ）、１．２１（ｍ、４Ｈ）、０．８２（ｍ、６Ｈ）．
実施例３９ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐ）-ＯＢｚｌ（４Ａｃ）の調製
実施例１の方法により、４８２ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと５６７ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐから３１８ｍｇ（３５％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：９１０ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．５１（ｓ、１Ｈ）、９．２６（ｍ、２Ｈ）、８．９８（ｍ、２Ｈ）、８．０５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．９４（ｍ、１Ｈ）、７．７８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．５４（ｍ、１Ｈ）、７．３８（ｍ、５Ｈ）、７．３１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．２４（ｍ、１Ｈ）、７．１１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．０５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、６．５２（ｓ、１Ｈ）、５．１５（ｓ、２Ｈ）、４．４４（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｍ、２Ｈ）、４．０７（ｍ、２Ｈ）、３．２３（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｍ、５Ｈ）、２．８６（ｍ、１Ｈ）、１．９７（ｍ、２Ｈ）、１．７６-１．７０（ｍ、８Ｈ）、１．３１（ｓ、３Ｈ）、１．２４（ｓ、３Ｈ）、１．９３-１．７９（ｍ、９Ｈ）、１．１６（ｍ、４Ｈ）．
実施例４０ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒ）-ＯＢｚｌ（４Ａｄ）の調製
実施例１の方法により、９６４ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと１０７７ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒから５４９ｍｇ（３１％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８８７ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．１７（ｍ、１Ｈ）、９．０２（ｍ、１Ｈ）、８．７３（ｍ、１Ｈ）、８．５１（ｍ、１Ｈ）、８．０９（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．７３（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｍ、５Ｈ）、６．９６（ｍ、２Ｈ）、６．６１（ｍ、３Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、４．２３（ｍ、２Ｈ）、４．０７（ｍ、２Ｈ）、３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．０１（ｍ、３Ｈ）、２．７４（ｍ、３Ｈ）、２．０２（ｍ、２Ｈ）、１．７４（ｍ、５Ｈ）、１．４６（ｓ、３Ｈ）、１．３６-１．２４（ｍ、１６Ｈ）、１．１６（ｍ、３Ｈ）、０．８７（ｍ、１Ｈ）．
実施例４１ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）-ＯＢｚｌ（４Ａｅ）の調製
実施例１の方法により、９６４ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと９５７ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｒｏから６０７ｍｇ（３７％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８２１ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．５４（ｍ、１Ｈ）、９．２３（ｓ、１Ｈ）、９．１１（ｍ、１Ｈ）、８．９６（ｓ、１Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．８５（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｍ、５Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｍ、２Ｈ）、４．５４（ｍ、１Ｈ）、４．３８（ｍ、２Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．１０（ｍ、２Ｈ）、３．５５（ｍ、１Ｈ）、 ３．１７（ｍ、３Ｈ）、３．０５（ｍ、３Ｈ）、２．９４（ｍ、１Ｈ）、１．９６（ｍ、２Ｈ）、１．７９（ｍ、７Ｈ）、１．６４（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．３８-１．３２（ｍ、１３Ｈ）、１．２０（ｍ、４Ｈ）．
実施例４２ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅ）-ＯＢｚｌ（４Ａｆ）の調製
実施例１の方法により、９６４ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと１０３９ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅから６２６ｍｇ（３６％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８７１ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．２４（ｓ、１Ｈ）、９．０９（ｍ、２Ｈ）、８．９６（ｓ、１Ｈ）、８．０１-７．９３（ｍ、３Ｈ）、７．３８（ｍ、５Ｈ）、７．２１（ｍ、５Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、４．３８（ｍ、３Ｈ）、４．０９（ｍ、２Ｈ）、３．２８（ｍ、４Ｈ）、２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．７９（ｍ、５Ｈ）、１．９９（ｍ、２Ｈ）、１．７４（ｍ、８Ｈ）、１．５０（ｍ、３Ｈ）、１．３２（ｍ、１４Ｈ）、１．１６（ｍ、４Ｈ）．
実施例４３ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙ）-ＯＢｚｌ（４Ａｇ）の調製
実施例１の方法により、４８２ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと４１２ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙから３０４ｍｇ（３９％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：７８１ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．３９（ｓ、１Ｈ）、８．９７（ｍ、２Ｈ）、８．２４-８．１４（ｍ、２Ｈ）、７．７９（ｍ、１Ｈ）、７．４１（ｍ、５Ｈ）、６．６６（ｓ、１Ｈ）、６．４７（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｓ,２Ｈ）、４．３５（ｍ、２Ｈ）、４．２１（ｍ、２Ｈ）、３．７１-３．６６（ｍ、２Ｈ）、３．０３（ｍ、３Ｈ）、２．８９-２．７６（ｍ、１Ｈ）、２．０７（ｍ、１Ｈ）、１．８１-１．７７（ｍ,６Ｈ）、１．６２（ｓ,３Ｈ）、１．５０（ｓ、３Ｈ）、１．３８（ｍ,７Ｈ）、１．３２（ｍ、８Ｈ）、１．２３（ｍ、４Ｈ）．
実施例４４ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒ）-ＯＢｚｌ（４Ａｈ）の調製
実施例１の方法により、９６５ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと８９６ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒから４５４ｍｇ（２９％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８１１ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．４８（ｍ、１Ｈ）、９．２３（ｓ、２Ｈ）、８．９６（ｍ、１Ｈ）、８．１９（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｍ、５Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｍ、２Ｈ）、４．９２（ｍ、１Ｈ）、４．３１（ｍ、３Ｈ）、４．１３（ｍ、３Ｈ）、３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．１６（ｍ、３Ｈ）、３．０４-２．８１（ｍ、４Ｈ）、２．０８（ｍ、１Ｈ）、１．７８（ｍ、５Ｈ）、１．６３（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．３９-１．３２（ｍ、１４Ｈ）、１．２２（ｍ、３Ｈ）．
実施例４５ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅ）-ＯＢｚｌ（４Ａｉ）の調製
実施例１の方法により、４８２ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと４７９ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅから３１０ｍｇ（３７％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８３７ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝８．８４-８．６８（ｍ、２Ｈ）、８．３７（ｓ、１Ｈ）、７．９９-７．８７（ｍ、３Ｈ）、７．３９（ｍ、４Ｈ）、６．６０（ｓ、１Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｍ、２Ｈ）、４．３２（ｍ、２Ｈ）、４．１７（ｍ、２Ｈ）、３．６５（ｍ、１Ｈ）、３．５４（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｍ、１Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）、２．６８（ｍ、３Ｈ）、２．１１（ｍ、１Ｈ）、１．７４-１．６８（ｍ、７Ｈ）、１．３１-１．２１（ｍ、１１Ｈ）、１．１７（ｍ、５Ｈ）、１．０８（ｍ、１Ｈ）、０．８２（ｍ、８Ｈ）．
実施例４６ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒ）-ＯＢｚｌ（４Ａｊ）の調製
実施例１の方法により、９６４ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと９２９ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒから４９５ｍｇ（３０％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８２５ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．１８（ｓ、１Ｈ）、８．９１（ｓ、２Ｈ）、８．２７（ｍ、１Ｈ）,７．６４（ｍ、１Ｈ）、７．４１（ｍ、６Ｈ）、６．６５（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、４．３５（ｍ、３Ｈ）、４．２３（ｍ、３Ｈ）、３．０７（ｍ、３Ｈ）、２．７２（ｍ、１Ｈ）、１．８３-１．７６（ｍ、５Ｈ）、１．６１（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｓ、３Ｈ）、１．３８-１．３２（ｍ、１４Ｈ）、１．２３（ｍ、３Ｈ）、１．１１（ｍ、３Ｈ）．
実施例４７ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ（Ｚ）]-ＯＢｚｌ（４Ａｋ）の調製
実施例１の方法により、９６４ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと１２０９ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ（Ｚ）から７５０ｍｇ（３０％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：９８７ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝８．６８（ｓ、１Ｈ）、８．５６（ｓ、１Ｈ）、８．１６（ｍ、１Ｈ）、８．０４（ｍ、１Ｈ）、７．７８（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｍ、１Ｈ）、７．３４（ｍ、１０Ｈ）、６．５８（ｓ、１Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｓ、２Ｈ）、４．９８（ｓ、２Ｈ）、４．２９（ｍ、２Ｈ）、４．０９（ｍ、３Ｈ）、３．５６（ｍ、３Ｈ）、３．０１（ｍ、４Ｈ）、２．６２（ｍ、１Ｈ）、２．４０（ｍ、１Ｈ）、２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．１５（ｓ、１Ｈ）、２．０６（ｍ、１Ｈ）、２．０１（ｓ、１Ｈ）、１．７８（ｍ、６Ｈ）、１．３８-１．３１（ｍ、１８Ｈ）、１．１７（ｍ、１０Ｈ）．
実施例４８ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕ）-ＯＢｚｌ（４Ａｌ）の調製
実施例１の方法により、４８２ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと４７９ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕから３０１ｍｇ（３６％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８３７ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝８．６９-８．５７（ｍ、２Ｈ）、８．１８-８．０６（ｍ、２Ｈ）、７．８５（ｍ、１Ｈ）、７．６９（ｍ、５Ｈ）、６．５８（ｓ、１Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｍ、２Ｈ）、４．２５-４．１１（ｍ、５Ｈ）、３．６３-３．５５（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｓ、２Ｈ）、３．０４-２．９８（ｍ、２Ｈ）、２．６４-２．５９（ｍ、１Ｈ）、２．１５-２．０７（ｍ、１Ｈ）、１．７８-１．６７（ｍ、５Ｈ）、１．３６（ｍ、１４Ｈ）、１．２８（ｍ、４Ｈ）、１．１９（ｍ、６Ｈ）．
実施例４９ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎ）-ＯＢｚｌ（４Ａｍ）の調製
実施例１の方法により、９６５ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと９９４ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎから６６５ｍｇ（３９％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８５２ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．３-９．１（ｍ、４Ｈ）、８．１６（ｍ、１Ｈ）、７．９６（ｍ、２Ｈ）、７．８３（ｍ、１Ｈ）、７．４４-７．３８（ｍ、７Ｈ）、６．８９（ｓ、１Ｈ）、６．８６（ｓ、１Ｈ）、６．５６（ｓ、１Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、４．４-４．１（ｍ、６Ｈ）、３．１７（ｍ、４Ｈ）、２．９８-２．８３（ｍ、２Ｈ）、２．０８（ｍ、４Ｈ）、１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．６４（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．３８-１．３１（ｍ、１７Ｈ）、１．２２-１．２０（ｍ、４Ｈ）．
実施例５０ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎ）-ＯＢｚｌ（４Ａｎ）の調製
実施例１の方法により、９６５ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌと９６０ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎから６３６ｍｇ（３８％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：８３８ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．２６（ｓ、１Ｈ）、９．０４（ｍ、２Ｈ）、８．３１（ｍ、１Ｈ）、８．０３（ｍ、１Ｈ）、７．５７（ｍ、１Ｈ）、７．４４（ｍ、６Ｈ）、６．９０（ｍ、１Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、４．４５-４．４０（ｍ、３Ｈ）、４．１４（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｍ、５Ｈ）、３．１７（ｍ、３Ｈ）、２．８９-２．８２（ｍ、１Ｈ）、２．０９（ｍ、１Ｈ）、１．９０（ｍ、１Ｈ）、１．７９-１．７４（ｍ,６Ｈ）、１．６４（ｓ、３Ｈ）、１．５２（ｓ、３Ｈ）、１．３９-１．３２（ｍ、１５Ｈ）、１．２２（ｍ、３Ｈ）．
実施例 ５１ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌ（４Ａｏ）の調製
実施例１の方法により、８７０ｍｇ（１．２４ｍｍｏｌ）の化合物３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌと４２９ｍｇ（２．４８ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａから４０３ｍｇ（３５％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：９２９ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝８．３２（ｍ、１Ｈ）、８．１０（ｍ、１Ｈ）、７．９６（ｍ、１Ｈ）、７．３６（ｍ、１０Ｈ）、６．６０（ｓ、１Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｓ、２Ｈ）、５．０６（ｓ、２Ｈ）、４．５７（ｍ、１Ｈ）、４．３２（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｍ、１Ｈ）、４．１１（ｍ、２Ｈ）、３．７４（ｍ、１Ｈ）、３．５５（ｍ、１Ｈ）、３．３４-３．２８（ｍ、２Ｈ）、３．００（ｍ、２Ｈ）、２．８９（ｓ、１Ｈ）、２．８１（ｍ、１Ｈ）、２．７３（ｍ、２Ｈ）、２．５８（ｍ、１Ｈ）、２．１６-２．０６（ｍ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、２Ｈ）、１．７５（ｍ、５Ｈ）、１．４０-１．３２（ｍ、２２Ｈ）、１．１７（ｍ、３Ｈ）．
実施例５２ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌ（４Ａｐ）の調製
実施例１の方法により、５３０ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）の化合物３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌと２５６ｍｇ（０．９０ｍｍｏｌ）のＢｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａから２６９ｍｇ（３８％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：９４３ [Ｍ＋Ｈ]＋、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ-ｄ６）δ／ｐｐｍ＝９．２６（ｓ、１Ｈ）、９．１０（ｍ、１Ｈ）、８．９７（ｓ、１Ｈ）、８．７９-７．８８（ｍ,３Ｈ）、７．３６（ｍ、１０Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｓ、２Ｈ）、５．０６（ｓ、２Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｍ、２Ｈ）、４．１０（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、１Ｈ）、３．３４（ｍ、５Ｈ）、２．８３（ｍ、１Ｈ）、２．７２（ｍ、１Ｈ）、２．３４（ｍ、２Ｈ）、１．７８（ｍ、１０Ｈ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．３６-１．３１（ｍ、１４Ｈ）、１．２１（ｍ,３Ｈ）．
実施例５３ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａ）（５Ａａ）の調製
まず実施例４の方法により、３００ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｌａ）-ＯＢｚｌに対してベンジルエステル除去をした。更に、実施例２の方法により、Ｂｏｃ除去をし、２６６ｍｇ（７８％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ ２０７．２-２０９．４°Ｃ、
Figure 2016521696
ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６３０ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２１．１、３０５７．２、２９８３．８、２９４３．３、２３６２．８、１６６０．７、１５４６．９、１５３３．４、１４４８．５、１３７９．１、１２４０．２、１０４９．３、８６７．９、６５９．７、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７９（ｓ、１Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、４．３６-４．２９（ｍ、５Ｈ）、３．３２-３．１２（ｍ、６Ｈ）、１．８９（ｍ、４Ｈ）、１．７０（ｓ、３Ｈ）、１．５７（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．３３（ｍ、９Ｈ）．
実施例５４ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌ）（５Ａｂ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｖａｌ）-ＯＢｚｌから１８７ｍｇ（８１％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １９５．８-１９７．９°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６３０ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２１．１、３０６２．９、２９７０．４、１６５８．８、１５４６．９、１５３３．４、１４５０．５、１３８４．９、１２４０．２、１０４７．４、９９１．４１、８６６．０４、６７１．２、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝８．１３（ｍ、１Ｈ）、６．７９（ｓ、１Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、４．３６-４．２９（ｍ、４Ｈ）、３．８９（ｍ、１Ｈ）、３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．２３（ｍ、２Ｈ）、３．０８（ｍ、２Ｈ）、１．８９（ｍ、４Ｈ）、１．７０（ｓ、３Ｈ）、１．５７（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、１Ｈ）、１．３７（ｍ、６Ｈ）、１．３２（ｍ、２Ｈ）、０．８９（ｍ、６Ｈ）．
実施例５５ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐ）（５Ａｃ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｒｐ）-ＯＢｚｌから１８０ｍｇ（７６％）のライトピンク粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ ２０５．１-２０７．９°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：７１８ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２１．２、３０５９．１、２９８１．９、２９４１．４、１６６０．７、１５３３．４、１４４８．５、１３８８．７、１２４０．２,８６７．９、７４８．４、６３０．７、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝７．５０（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．１２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．７４（ｓ、１Ｈ）、６．６２（ｓ、１Ｈ）、４．３８（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、４．２７（ｍ、１Ｈ）、４．１８（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｍ、２Ｈ）、３．１６（ｍ、３Ｈ）、３．０６（ｍ、３Ｈ）,１．８３（ｍ、１Ｈ）、１．６８（ｍ、４Ｈ）、１．４７（ｍ、３Ｈ）、１．３７（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｍ、３Ｈ）、１．２１（ｍ、３Ｈ）．
実施例５６ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒ）（５Ａｄ）の調製
実施例５３の方法により、３０３ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｙｒ）-ＯＢｚｌから１７４ｍｇ（７４％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ ２００．５-２０２．８°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６９５ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２１５．３、３０５５．２、２９８３．８、２９４７．２、１６５８．８、１５４８．８、１５２３．８、１４４８．５、１３８４．９、１２３８．３、１１６３．１、６５７．７、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．９８（ｍ、２Ｈ）、６．９２（ｍ、３Ｈ）、６．６５（ｓ、１Ｈ）、４．３４-４．２６（ｍ、６Ｈ）、３．２７（ｍ、２Ｈ）、３．１５（ｍ、１Ｈ）、３．０８（ｍ、１Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）、２．８５（ｍ、１２Ｈ）、１．８９（ｍ、５Ｈ）、１．７０（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｍ、３Ｈ）、１．３３（ｍ、３Ｈ）、１．２５（ｍ、４Ｈ）．
実施例５７ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）（５Ａｅ）の調製
実施例５３の方法により、３０１ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）-ＯＢｚｌから１７９ｍｇ（７８％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ ２０４．８-２０５．４°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６２９ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２４４．３、３０７０．７、２９８０．１、２９４７．２、１６６２．６、１６３９．５、１５５４．６、１４５０．５、１３７９．１、１２４６．１、１２０１．６、１０４７．３、９９５．３、８７１．８、６５７．７、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７８（ｓ、１Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、４．５７（ｍ、１Ｈ）、４．３９-４．３３（ｍ、５Ｈ）、３．７４（ｍ、１Ｈ）、３．６０（ｍ、１Ｈ）、３．２６（ｍ、２Ｈ）、３．１７（ｍ、１Ｈ）、３．０４（ｍ、２Ｈ）、２．１９（ｍ、３Ｈ）、１．８５（ｍ、５Ｈ）、１．６９（ｍ、４Ｈ）、１．５４（ｍ、６Ｈ）、１．３６（ｍ、６Ｈ）．
実施例５８ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅ）（５Ａｆ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｐｈｅ）-ＯＢｚｌから１８３ｍｇ（７８％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １７５．８-１７８．２°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６７９ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２１５．３、３０４９．５、２９４９．２、１６６２．６、１５３９．２、１４５４．３、１３９４．５、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝７．２６（ｍ、３Ｈ）、７．１４（ｍ、２Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）、６．６５（ｓ、１Ｈ）、４．３９-４．３３（ｍ、３Ｈ）、４．０３（ｍ、３Ｈ）、３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．３７（ｍ、１Ｈ）、３．．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１７（ｍ、１Ｈ）、３．０９（ｍ、４Ｈ）、２．９５（ｍ、３Ｈ）、１．９１（ｍ、５Ｈ）、１．７４（ｓ、３Ｈ）、１．５３（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｍ、６Ｈ）．
実施例５９ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙ）（５Ａｇ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｙ）-ＯＢｚｌから１９３ｍｇ（８５％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １９６．４-１９９．５°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：５８８ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２３．１、３０６２．９、２９８３．８、１６３０．２、１５５２．７、１５３７．３、１４４８．５、１３８２．９、１２４４．１、１０４９．３、１００６．８、８６９．９、６６１．６、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７７（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、４．３４-４．２８（ｍ、４Ｈ）、３．７８（ｓ、２Ｈ）、３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．１５（ｍ、３Ｈ）、１．９２（ｍ、３Ｈ）、１．７０（ｓ、３Ｈ）、１．５５（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｍ、６Ｈ）．
実施例６０ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒ）（５Ａｈ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｓｅｒ）-ＯＢｚｌから１８１ｍｇ（７９％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １９５．６-１９７．４°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６１９ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２８．８、３０６１．０、２９８１．９、２９４３．４、１７３２．１、１６６２．６、１５５０．７ １５３３．３、１４４８．５、１３８４．９、１２４４．１、１１５９．２、１０４９．３、８６９．９、６５７．７、５１８．８、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７８（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、４．４１-４．２６（ｍ、５Ｈ）、３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．２５-３．１３（ｍ、６Ｈ）、１．９１（ｍ、３Ｈ）、１．６９（ｓ、３Ｈ）、１．５５（ｍ、３Ｈ）、１．４６（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｍ、６Ｈ）．
実施例６１ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅ）（５Ａｉ）の調製
実施例５３の方法により、３０２ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｉｌｅ）-ＯＢｚｌから１８１ｍｇ（７８％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １７５．６-１７８．４°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６４５ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２４．９、３０５７．２、２９７０．４、２７５８．２、２４９７．８、２３６０．８７、１６５６．９、１５３５．３、１４５４．３、１３８８．７、１２４４．１、１１５９．１、１０３７．７、８７１．８、６５９．６、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７９（ｓ、１Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、４．４２（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．１８（ｍ、１Ｈ）、３．９２（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．３１（ｍ、２Ｈ）、３．１９（ｍ、２Ｈ）、３．１０（ｍ、３Ｈ）、２．３４（ｍ、１Ｈ）、２．１２（ｍ、１Ｈ）、１．７４（ｍ、４Ｈ）、１．５７（ｍ、３Ｈ）、１．３６（ｍ、６Ｈ）、１．２１（ｍ、２Ｈ）、０．８４（ｍ、９Ｈ）．
実施例６２ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒ）（５Ａｊ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｔｈｒ）-ＯＢｚｌから１７５ｍｇ（７６％）の淡黄色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １９４．８-１９７．５°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６３３ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２３６．５、３０６６．８、２９３３．７、１６６０．７、１５４８．８、１５３３．４、１４５０．８、１３８１．０、１２４０．２、１１５７．３、１０４９．３、８６９．９、６６９．３、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．８１（ｓ、１Ｈ）、６．７１（ｓ、１Ｈ）、４．４３-４．３１（ｍ、４Ｈ）、４．１１（ｍ、２Ｈ）、３．３３（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｍ、１Ｈ）、３．２４（ｍ、２Ｈ）、３．２１（ｍ、１Ｈ）、３．１８（ｍ、１Ｈ）、３．０９（ｍ、１Ｈ）、１．９４（ｍ、３Ｈ）、１．７４（ｓ、３Ｈ）、１．５８（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．２３（ｍ、１Ｈ）、１．１９（ｍ、１Ｈ）、１．１４（ｍ、３Ｈ）．
実施例６３ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）（５Ａｋ）の調製
実施例５３の方法により、３０５ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＬｙｓＩ（Ｚ）]-ＯＢｚｌが得られる１５２ｍｇ（７５％）の濃い黄色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １８５．６-１８８．１°Ｃ、
Figure 2016521696
ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６６０ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３８５３．７、３７３８．１、２９５６．８、２３４９．３、２０１７．５、１６６８．４、１５３７．３、１４００．３、１２５７．６、１０４３．５、８７１．８、６７１．２．、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．８０（ｓ、１Ｈ）、６．６９（ｓ、１Ｈ）、４．４５（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．１８（ｍ、２Ｈ）、３．７３（ｍ、２Ｈ）、３．２２-３．１３（ｍ、８Ｈ）、３．０９（ｍ、４Ｈ）、２．９５（ｍ、１Ｈ）、１．９３（ｍ、６Ｈ）、１．７４（ｍ、９Ｈ）、１．５８（ｍ、６Ｈ）、１．４７（ｍ、２Ｈ）、１．３２-１．２７（ｍ、１６Ｈ）、１．１８（ｍ、２Ｈ）．
実施例６４ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕ）（５Ａｌ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｅｕ）-ＯＢｚｌから１７８ｍｇ（７７％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １８９．７-１９２．７°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６４５ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２４．９、３０６４．９、２９５６．８、１６６０．７、１５４８．８、１５３５．３、１４４８．５、１３８１．０,１２４２．２、１０４９．３、９９７．２、８６９．９、６６９．３、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７８（ｓ、１Ｈ）、６．６８（ｓ,１Ｈ）、４．３８-４．２９（ｍ、３Ｈ）、４．１３（ｍ、２Ｈ）、３．３１（ｍ、３Ｈ）、３．２１（ｍ、１Ｈ）、３．０８（ｍ、２Ｈ）、１．８９（ｍ、４Ｈ）、１．７０（ｓ、３Ｈ）、１．５７（ｍ、４Ｈ）、１．４６（ｍ、５Ｈ）、１．３２（ｍ、６Ｈ）、１．３２（ｍ、１Ｈ）、１．１６（ｍ、６Ｈ）．
実施例６５ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎ）（５Ａｍ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｎ）-ＯＢｚｌから１８４ｍｇ（７９％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １８１．３-１８３．３°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６６０ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２１３．４、３０５９．１、２９８１．９、２９４３．４、２３６２．８、１７３９．８、１６６２．６、１５４８．８、１５３７．３、１４５０．５、１３７５．３、１２４４．１、１０４７．２、８７１．８、６５９．７、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．８０（ｓ、１Ｈ）、６．６９（ｓ、１Ｈ）、４．４０-４．２９（ｍ、５Ｈ）、３．３３（ｍ、３Ｈ）、３．１７（ｍ、３Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．６９（ｓ、３Ｈ）、１．５５（ｓ、３Ｈ）、１．４３（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｍ、８Ｈ）．
実施例６６ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎ）（５Ａｎ）の調製
実施例５３の方法により、３０２ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｎ）-ＯＢｚｌから１７４ｍｇ（７８％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ ２０２．５-２０４．７°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６４６ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３２０７．６、３０５９．１、２９４３．３、１６７４．２、１５３７．３、１４４８．５、１３８１．０、１２４７．９、６４２．３、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７８（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、４．４８（ｍ、１Ｈ）、４．４２-４．２９（ｍ、４Ｈ）、３．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１６（ｍ、４Ｈ）、２．６５（ｍ、２Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．６９（ｓ、３Ｈ）、１．５５（ｓ、３Ｈ）、１．３１（ｍ、６Ｈ）．
実施例６７ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｐ）（５Ａｏ）の調製
実施例５３の方法により、３００ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌから１７４ｍｇ（８３％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ ２０７．１-２０９．７°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６４７ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３３８３．３、３０６１．０、２３６０．９、１６７０．３、１５５０．８、１４４８．５、１４００．３、１２４６．３、８７３．８、６１１．４、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７６（ｓ、１Ｈ）、６．６６（ｓ、１Ｈ）、４．５２（ｍ、１Ｈ）、４．３７-４．２８１（ｍ、４Ｈ）、３．２７（ｍ、４Ｈ）、３．１３（ｍ、１Ｈ）、３．０５（ｍ、１Ｈ）、２．７６（ｍ、２Ｈ）、１．９７（ｍ、１Ｈ）、１．９０（ｍ、１Ｈ）、１．７１（ｓ、３Ｈ）、１．５５（ｓ、３Ｈ）、１．４３（ｍ,２Ｈ）、１．３１（ｍ、６Ｈ）．
実施例６８ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｕ）（５Ａｐ）の調製
実施例５３の方法により、３０１ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ[Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）]-ＯＢｚｌから１７３ｍｇ（８２％）の無色粉末である目的化合物が得られた。Ｍｐ １９４．７-１９６．１°Ｃ、
Figure 2016521696
 ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：６６１ [Ｍ-Ｈ]-、ＩＲ（ＫＢｒ）：３０５３．３、２９４５．３、２３７０．５、２３２０．４、１６５１．１、１５４６．９、１５３３．４、１４４８．５、１３８８．８、１２４０．２、１１６５．０、１０４５．４、６４４．２、１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ／ｐｐｍ＝６．７８（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、４．４２-４．２８（ｍ、５Ｈ）、３．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１３（ｍ、３Ｈ）、２．９９（ｍ、１Ｈ）、２．３８（ｍ、２Ｈ）、２．２９（ｍ、１Ｈ）、１．９０（ｍ、５Ｈ）、１．６９（ｓ、３Ｈ）、１．５５（ｓ、３Ｈ）、１．３１（ｍ、６Ｈ）．
対照例１ ３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ（６）の調製
実施例４の方法により、１．００ｇ（２．０３ｍｍｏｌ）の３Ｓ-６,７-ジヒドロキシ-１,１-ジメチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-イソキノリン-３-ホルミル-Ｌｙｓ-ＯＢｚｌから６２０ｍｇ（８５％）のライトピンク固体である目的化合物が得られた。この化合物６は、対照組として以下の実験例に用いられた。ＥＳＩ-ＭＳ（ｍ／ｅ）：３６３[Ｍ-Ｈ]-．
実験例１ 本発明に係る化合物５Ａａ-ｐの静脈薬投与の血栓溶解活性に対する評価
１）評価方法
２００〜２２０ｇオスＳＤラットに対して２０％ウレタン溶液（６ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）により麻酔をかけた。麻酔ラットを仰臥位に固定し、右総頸動脈を分離させ、近位端で動脈鉗子によりクリッピングし、近位端及び遠位端に対してそれぞれ縫合糸を縫い、遠位端の縫合糸を毛皮用止血鉗子でクリッピングし、遠位端で挿管し、動脈鉗子を緩め、約１ｍＬの動脈血を放出し１ｍＬのＥＰ管に入れた。垂直に固定されたガラス管（長さが１５ｍｍ、内径が２．５ｍｍ、外径が５．０ｍｍであり、管の底部がゴムプラグにより密封された）に０．１ｍＬのラットの動脈血液を注入し、管内に速やかにステンレス材料の血栓固定ボルトを１本挿入した。当該血栓固定螺旋は、直径が０．２ｍｍのステンレス線により巻き付けられ、螺旋部分の長さが１２ｍｍであり、１５の螺旋リングを含み、螺旋リングの直径が１．０ｍｍであり、支持ハンドルと螺旋とが接続され、長さが７．０ｍｍであり、疑問符の形を呈した。血液が凝固し４０ｍｉｎの後で、ガラス管の底部のゴムプラグを開け、ピンセットにより血栓固定螺旋の支持ハンドルを固定し、ガラス管から血栓に包まれた血栓固定螺旋を取り出し、精確に重量を量った。
バイパス挿管は３段からなる。中段は、ポリエチレンホースであり、長さが６０ｍｍ、内径が３．５ｍｍであり、両端は、同じポリエチレン管であり、長さが１００ｍｍ、内径が１ｍｍ、外径が２ｍｍである。当該管の一端は、尖った管（ラットの頸動脈又は静脈への挿入用）に引かれ、外径が１ｍｍであり、他端の外部には、長さが７ｍｍ、外径が３．５ｍｍであるポリエチレン管（太くされ、中段のポリエチレンホース内への挿入用）が覆われた。３段管の何れの内壁もシリル化された。血栓に包まれた血栓固定螺旋を中段のポリエチレンホース内に入れて、ホースの両端がそれぞれ２本のポリエチレンの太端と互いに覆った。注射器により尖った管端を通して管にヘパリン生理食塩水溶液（５０ＩＵ／ｋｇ）を満たして使用に備えた。
ラットの左外頸静脈を分離させ、近位端及び遠位端に対してそれぞれ縫合糸を縫い、遠位端を結紮し、露出された左外頸静脈で慎重に斜切口を切り、上記の調製しておいたバイパスパイプの尖った管を斜切口から左外頸静脈開口の近位端に挿入し、同時にバイパス管中段（精確に重量を量ったの血栓固定螺旋を含む）内の血栓固定螺旋の支持ハンドルから離れた。注射器により他端の尖った管を通して精確量のヘパリン生理食塩水（５０ＩＵ／ｋｇ）を押入れ、この時に注射器からポリエチレン管を取り去らず、止血鉗子により注射器とポリエチレン管にあるソフトチューブをクリッピングした。右総頸動脈の近位端で動脈鉗子により止血し、動脈鉗子に近いところで右総頸動脈に対して慎重に斜切口を切った。ポリエチレン管の尖った部から注射器を抜き取り、ポリエチレン管の尖った部を動脈の斜切口の近位端に挿入した。バイパスパイプの両端の何れも４号縫合糸により動静脈と固定した。
頭皮鍼により生理食塩水、ウロキナーゼの生理食塩水溶液又は濃度が異なった化合物の生理食塩水溶液をバイパス管の中段（精確に重量を量ったの血栓固定螺旋を含む）を通して、血栓固定螺旋から離れた静脈に近いところに挿入し、動脈鉗子を開けて、血がバイパスパイプを通して動脈から静脈に流れ、これは即ちラット動静脈バイパスの血栓溶解モデルである。ゆっくり注射器における液体を血液に（約６ｍｉｎ）注入して、生理食塩水、ウロキナーゼ又は本発明に係る化合物が血液循環により、静脈-心臓-動脈の順に従い血栓に作用した。注射開始時から時間測定をし、１ｈ後でバイパスパイプから血栓固定螺旋を取り出し、精確に重量を量った。各ラットのバイパスパイプにおける血栓固定螺旋の薬投与前後の質量差を計算し、化合物の体内血栓溶解活性を統計し評価した。血栓重量減少は、平均値及び基準差（-Ｘ±ＳＤ）で表示される。
２）薬投与方法と用量
静脈に注射により薬投与した。空白対照が生理食塩水であり、薬投与の用量が３ｍＬ／ｋｇであった。陽性対照がウロキナーゼであり、用量が２００００Ｕ／ｋｇであり、１．６８ｍｇ／ｋｇに相当した。本発明に係る化合物５Ａａ-ｐの用量が０．１ｎｍｏｌ／ｋｇであった。
３）評価結果
血栓溶解活性は、血栓重量減少
（外）
Figure 2016521696
で表示され、結果が表１に示された。データにより、０．１ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で静脈に薬投与して化合物５Ａａ-ｐが血栓（生理食塩水との比較でｐ＜０．０１）を効果的に溶解させることができ、化合物５Ａａ、５Ａｆ、５Ａｇ、５Ａｋ、５Ａｏの血栓溶解活性が用量が２００００Ｕ／ｋｇであるウロキナーゼに相当することが判明された。血栓溶解活性が優れた５Ａａ、５Ａｄ、５Ａｆ、５Ａｇ、５Ａｋにおける５Ａｋの血栓溶解活性が一番強いため、更に用量依頼関係を評価した。
Figure 2016521696
 ｎ＝１０、ａ）生理食塩水との比較でｐ＜０．０１、ｂ）生理食塩水との比較でｐ＜０．０１、化合物６、ＰＡＫ及び６＋ＰＡＫとの比較でｐ＜０．０５、ウロキナーゼとの比較でｐ＞０．０５。
実験例２ 本発明に係る化合物５Ａｋの静脈薬投与の血栓溶解活性の用量効果関係に対する評価
実験例１の方法により静脈注射による薬投与をした。空白対照が生理食塩水であり、薬投与の用量が３ｍＬ／ｋｇであった。陽性対照がウロキナーゼであり、薬投与の用量が２００００Ｕ／ｋｇであり、１．６８ｍｇ／ｋｇに相当した。５Ａｋに対して０．１ｎｍｏｌ／ｋｇ（高）、０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇ（中）と０．００１ｎｍｏｌ／ｋｇ（低）の３つの用量を選び取った。結果が表２に示された。データにより、５Ａｋは著しい用量効果関係が表示されることが判明された。
Figure 2016521696
 ｎ＝１０、ａ）生理食塩水及び０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０１、ｂ）生理食塩水及び０．００１ｎｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０１、ｃ）生理食塩水との比較でｐ＞０．０５。
実験例３ 本発明に係る化合物５Ａａ-ｐの静脈薬投与の抗血栓活性に対する評価
１）評価方法
挿管は３段からなり、中段の長さが８０ｍｍ、内径が３．５ｍｍであり、両端が同じポリエチレン管であり、長さが１００ｍｍ、内径が１ｍｍ、外径が２ｍｍであり、当該管の一端が尖った管（ラットの頸動脈又は静脈への挿入用）に引かれ、３段管の何れの内壁もシリル化された。前もって重量を量た長さ６０ｍｍの糸を中段のポリエチレン太管内に入れ、太管の両端がそれぞれ２本のポリエチレン細管の細くされない端と互いに覆われた（一段が０．５ｍｍの糸を押さえて固定した）。注射器により尖った管端を通して管にヘパリン生理食塩水溶液（５０ＩＵ／ｋｇ）を満たして使用に備えた。
２００〜２２０ｇのオスＳＤラットに対して、２０％ウレタン溶液（６ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって麻酔をかけた。麻酔ラットを仰臥位に固定し、ラットの左外頸静脈を分離させ、近位端及び遠位端に対してそれぞれ縫合糸を縫い、遠位端を結紮し、露出された左外頸静脈で慎重に斜切口を切り、上記の調製しておいたバイパスパイプの糸が押さえられない端の尖った管を斜切口から左外頸静脈開口の近位端に挿入し、注射器により他端の尖った管を通して精確量のヘパリン生理食塩水（５０ＩＵ／ｋｇ）を押入れて、注射器を交換し、同じ方法により精確量の薬物を押入れ、この時に注射器からポリエチレン管を取り去らず、右総頸動脈を分離させ、近位端で動脈鉗子をクリッピングし、近位端及び遠位端に対してそれぞれ縫合糸を縫い、遠位端を結紮し、動脈鉗子に近いところで右総頸動脈に対して慎重に斜切口を切った。ポリエチレン管の尖った部から注射器を抜き取り、ポリエチレン管の尖った部を動脈の斜切口の近位端に挿入した。バイパスパイプの両端の何れも４号縫合糸により動静脈と固定した。動脈鉗子を開けて、血がバイパスパイプを通して動脈から静脈に流れ、これは即ちラット動静脈バイパスの血栓溶解モデルである。注射開始時から時間測定をし、１５ｍｉｎ後でバイパスパイプから血栓がかけられた糸を取り出し、精確に重量を量り、糸の前後の質量差が血栓の湿重量であり、化合物の体内抗血栓活性を統計し評価した。血栓の湿重量は、平均値及び基準差（-Ｘ±ＳＤ）で表示される。
２）薬投与方法と用量
静脈に薬投与した。空白対照が生理食塩水であり、薬投与の用量が１ｍＬ／ｋｇであった。陽性対照がアスピリンであり、薬投与の用量が９ｍｇ／ｋｇであった。本発明に係る化合物５Ａａ-ｐの用量が０．１ｎｍｏｌ／ｋｇであった。
３）結果
抗血栓活性は、血栓湿重量
（外）
Figure 2016521696
で表示され、結果が表３に示された。データにより、０．１ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で化合物５Ａｋを静脈投与すれば、血栓形成（生理食塩水との比較でｐ＜０．００１）を効果的に抑制できことが判明され、活性の優れた５Ａｋについて、更に、用量依存関係を評価した。
Figure 2016521696
 ｎ＝１０、５Ａａ-ｐ（ｉ．ｖ．）：０．１ｎｍｏｌ／ｋｇ、Ａｓｐｉｒｉｎ：９ｍｇ／ｋｇ
ａ）ＮＳとの比較で、ｐ＜０．００１。
実験例４ 本発明に係る化合物５Ａｋの静脈薬投与の抗血栓活性の用量効果関係に対する評価
１）評価方法
実験例３の方法と同じであった。
２）薬投与方法と用量
静脈に薬投与した。空白対照が生理食塩水であり、薬投与の用量が３ｍＬ／ｋｇであった。陽性対照がアスピリンであり、薬投与の用量が９ｍｇ／ｋｇであった。５Ａｋに対して０．１ｎｍｏｌ／ｋｇ（高）、０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇ（中）と０．００１ｎｍｏｌ／ｋｇ（低）の３つの用量を選び取った。
３）結果
結果が表４に示され、５Ａｋが著しい用量効果関係が表示された。
Figure 2016521696
 ｎ＝１０、ａ）生理食塩水及び０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０１、ｂ）生理食塩水及び０．００１ｎｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０１、ｃ）生理食塩水との比較でｐ＞０．０５。
実験例５ 本発明に係る化合物５Ａｋが卒中ラットへの治療作用に対する評価
化合物５Ａａ-ｐが卒中ラットへの治療作用を考察するために、化合物５Ａｋを代表として選び取り、以下の方法により卒中ラットへの治療作用を考察した。
１）評価方法
ＳＤオスラット（２８０-３００ｇ）をランダムにＵＫ陽性対照組に分けられ、用量が２００００ＩＵ／ｋｇであった。生理食塩水の空白対照組において、化合物対照組ＰＡＫの用量が５μｍｏｌ／ｋｇであり、化合物５Ａｋ組の用量が１μｍｏｌ／ｋｇ（高）、０．１μｍｏｌ／ｋｇ（中）と０．０１μｍｏｌ／ｋｇ（低）であった。ラットに対して１０％抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ）で腹腔注射により麻酔をかけ、頸部の真ん中のやや右に寄せた部分で垂直に約２ｃｍの長さの切口を切り、胸鎖乳突筋の内側縁を沿って右総頸動脈（ＣＣＡ）、頸外動脈（ＥＣＡ）と頸内動脈（ＩＣＡ）を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈に対して小さい開口を切り、頸外動脈の遠位端を結紮し、頸総動脈の近位端の動脈鉗子を緩め、１０μＬの血を取り、血を取った後で非侵襲的動脈鉗子により頸総動脈の近位端をクリッピングした。取られた１０μＬの血を１ｍＬのＥＰ管に入れ、常温で３０分間置いて血液を凝固させ、そして-２０°Ｃ冷蔵庫の中に移動し１時間置いて、血液を固結させた。１時間終了後、血塊を取り出し、１ｍＬの生理食塩水を入れスチールショベルにより血塊をサイズが均一で小さな血栓につき砕き、そして小さな血栓の懸濁液を１ｍＬの注射器内に移動して使用に備えた。ラット頸内の動脈鉗子を緩める同時に、上記１ｍＬの注射器内の血栓懸濁液をゆっくりラットの頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通してラットの大脳に注入し、そして頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開けて、血の流れを回復させた。そしてラット総頸静脈を分離させ、注入されたＵＫ用量が２００００ＩＵ／ｋｇであり、生理食塩水又は化合物５Ａｋ組の用量が１μｍｏｌ／ｋｇであった。静脈を結紮し、傷口に３滴のペニシリンを滴下し、傷口を縫合し、動物の蘇生まで待った。
ラットが蘇生してから２４時間の後、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行が無しを示し、５点は、死亡したことを示した。以上、各組の採点結果に対して統計学で比較し、ｔ検証をした。
ラットが蘇生してから２４時間の後Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した後、ウレタンにより麻酔をかけた後で速やかに首を切り大脳を取り、脳組織を-２０°Ｃの冷蔵庫に２時間置いた後で、前頭極から約２ｍｍの冠状連続的なスライスし、共に５枚であり、そして２％ＴＴＣ溶液に入れ３７°Ｃで光避け３０ｍｉｎ孵化させ、脳スライスの色変化を観察し、正常組織がＴＴＣにより赤色に染められ、虚血組織が白色を呈した。そしてデジタルカメラにより写真を撮り、画像計ソフトウェアで処理し、冠状スライスにおける梗塞の体積と正常組織の面積を計算し、各組の梗塞体積百分比の値を統計し、并做ｔ検証をした。
２）評価結果
ラット蘇生後のＺｅａｌｏｎｇａ方法による採点データが表５に示され、ラットの大脳梗塞体積の百分比データが表６に示された。
Figure 2016521696
 ｎ＝９、ａ）生理食塩水及び０．１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０５、ｂ）生理食塩水及び０．０１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０５、ｃ）生理食塩水及び５μｍｏｌ／ｋｇのＰＡＫとの比較でｐ＞０．０５。
Figure 2016521696
 ｎ＝７、ａ）生理食塩水との比較でｐ＜０．０１、０．１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０５、ウロキナーゼとの比較でｐ＞０．０５、ｂ）生理食塩水及び０．１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋとの比較でｐ＜０．０５、ｃ）生理食塩水との比較でｐ＞０．０５。
表５と表６のデータにより、化合物５Ａｋは、脳虚血のラットの運動障害と大脳組織の梗塞を効果的に防止することが判明された。５Ａｋのこのような機能は、用量依存関係を有した。
実験例６ 本発明に係る化合物５Ａａ-ｐフリーラジカル消去の活性に対する評価
１）ヒドロキシフリーラジカル活性の消去
１１．３１６ｍｇのＤＭＰＯ（ジメチルピリジンＮ-酸化物、Ｓｉｇｍａ）を１ｍＬの純水に溶解させて、濃度が０．１ＭのＤＭＰＯ溶液を得て、２．７８ｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏを１ｍＬの純水に溶解させて濃度が１０ｍＭの溶液を得た。３０％医用Ｈ２Ｏ２を０．２％に希釈した。
まず２．５μＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ溶液＋２．５μＬのＤＭＰＯ溶液＋５μＬのＨ２Ｏ２溶液＋５μＬの水のＯＨ信号ピークの第１のピークの高さを測定し、６回を重複して、当該ピークの高さが既知のＯＨ信号ピークの高さであった。更に２．５μＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ溶液＋２．５μＬのＤＭＰＯ溶液＋５μＬのＨ２Ｏ２溶液＋５μＬの化合物５Ａａ-ｐの１つの溶液のＯＨ信号ピークの第１のピークの高さを測定し、６回を重複した。当該ピークの高さは、即ち５Ａａ-ｐが既知のＯＨ信号ピークの高さを消去した残りのことであった。
消去率＝（既知のＯＨ信号ピークの高さ−５Ａａ-ｐを入れたＯＨ信号ピークの高さ）／既知のＯＨ信号ピークの高さ。
２）ＮＯフリーラジカル活性の消去
７．３２５ｍｇのＭＧＤ（Ｎ-メチル-グルコサミンジチオカルバミン、Ｓｉｇｍａ）を１ｍＬの純水に溶解させ濃度が２５ｍＭのＭＧＤ溶液を得て、３．４７５ｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏを１ｍＬの純水に溶解させ濃度が１２．５ｍＭの溶液を得て、２５ｍｇのＳＮＡＰ（Ｓ-ニトロソ-Ｎ-アセチル-ＤＬ-ペニシラミン；Ｓ-ｎｉｔｒｏｓｏ-Ｎ-ａｃｅｔｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ）を１ｍＬの純水に溶解させ濃度が１１０μＭの緑色母液を得て、１００倍に希釈して１μＭのＳＮＡＰ溶液を得た。
まず５μＬＭＧＤ溶液＋５μＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ溶液＋５μＬのＳＮＡＰ＋５μＬの水のＮＯ信号の第１のピークの高さを測定し、６回を重複した。当該ピークの高さが既知のＮＯ信号ピークの高さであった。更に５μＬのＭＧＤ溶液＋５μＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ溶液＋５μＬのＳＮＡＰ＋５μＬの化合物５Ａａ-ｐ溶液の１つのＮＯ信号ピークの第１のピークの高さを測定し、６回を重複した。当該ピークの高さは、即ち５Ａａ-ｐが既知のＮＯ信号ピークの高さを消去した残りのことであった。
消去率＝（既知のＮＯ信号ピークの高さ−５Ａａ-ｐを入れたＮＯ信号ピークの高さ）／既知のＮＯ信号ピークの高さ。
３）超酸化物陰イオンフリーラジカル活性の消去
０．３ｇのヒポキサンチンを１ｍＬの純水に溶解させ濃度が０．５Ｍのヒポキサンチン溶液（乳白色、大量が不溶性である）を得て、市販のヒポキサンチンオキシダーゼ原液を１０倍に希釈してヒポキサンチンオキシダーゼ溶液を得て、飽和ＤＥＴＡＰＡＣ溶液を２０倍に希釈して濃度が０．９ｍＭの溶液を得て、１１．３１６ｍｇのＤＭＰＯを１ｍＬの純水に溶解させ濃度が０．１ＭのＤＭＰＯ溶液を得た。
５μＬのＤＭＰＯ溶液＋５μＬのＤＥＴＡＰＡＣ溶液＋５μＬのヒポキサンチン溶液＋５μＬのヒポキサンチンオキシダーゼ溶液＋５μＬの化合物５Ａａ-ｐ溶液。
まず５μＬのＤＭＰＯ溶液＋５μＬのＤＥＴＡＰＡＣ溶液＋５μＬのヒポキサンチン溶液＋５μＬのヒポキサンチンオキシダーゼ溶液＋５μＬの水の超酸化物陰イオン信号の第１のピークの高さを測定し、６回を重複した。当該ピークの高さは、即ち既知の超酸化物陰イオンの信号ピークの高さであった。更に５μＬのＤＭＰＯ溶液＋５μＬのＤＥＴＡＰＡＣ溶液＋５μＬのヒポキサンチン溶液＋５μＬのヒポキサンチンオキシダーゼ溶液＋５μＬ化合物５Ａａ-ｐ溶液の１つの超酸化物陰イオンの信号ピークの第１のピークの高さを測定し、６回を重複した。当該ピークの高さは、即ち５Ａａ-ｐが既知の超酸化物陰イオンの信号ピークの高さを消去した残りのことであった。
消去率＝（既知の超酸化物陰イオン信号ピークの高さ−５Ａａ-ｐを入れた超酸化物信号ピークの高さ／既知の超酸化物陰イオンの信号ピークの高さ。
結果は表７に示された。データにより、５Ａａ-ｐは、三種のフリーラジカル活性を消去したＥＣ５０が０．４〜０．７ｍＭであり、明確なフリーラジカル消去活性を有することが判明された。
Figure 2016521696
 ｎ＝６、ＥＣ５０＝Ｘ±ＳＤ 化合物濃度がＸ×１０-４Ｍ。
実験例７ 本発明に係る化合物５Ａａ-ｐの透過型電子顕微鏡による測定
サンプルを３回蒸留の水によりそれぞれ１×１０-７Ｍ、１×１０-９Ｍ、１×１０-１１Ｍの溶液に調製し、微量（約１０μＬ）を吸い取って銅網の表面に滴下し、銅網の下に濾過紙を敷き、自然乾燥させ、透過型電子顕微鏡（ＪＥＯＬ、ＪＥＭ-１２３０）によってその形状及び粒径を観察し、写真に記録した。
水溶液で本発明に係る化合物５Ａａ-ｐは、直径が２０〜２１０ｎｍのナノスフェアに自己組織化されることができ、殆どの粒径が２０〜１００ｎｍにあり、これらのナノスフェアがつながた形の異なったナノ網、ナノ鎖等を形成し、現在、１×１０-９Ｍの体内濃度（理論的にな血中濃度）を例として、各化合物の電子顕微鏡図（図９）を挙げた。図９において、本発明に係る化合物５Ａａ-ｐが対応した図番は、それぞれ５ａ、５ｂ、５ｃ、５ｄ、５ｅ、５ｆ、５ｇ、５ｈ、５ｉ、５ｊ、５ｋ、５ｌ、５ｍ、５ｎ、５ｏと５ｐであった。
実験例８ ラットが卒中になって４時間の後で１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる６回の連続的治療を受ける試験
効果は、神経機能の採点で表示され、採点が低ければ低いほど効果が優れた。オスＳＤラットに対して、腹腔に用量が４００ｍｇ／ｋｇの体重である１０％抱水クロラール溶液を注射し、麻酔をかけた。頸部の正中で縦に切口を切り、右側の頸総動脈幹（長さ：約３ｃｍ）を分離させた。舌骨で水平に頸外動脈の各分岐を分離させて結紮し、頸膨大の箇所で頸内動脈を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈の遠位端を結紮した。頸外動脈幹で０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液が入れられた導管を挿入し、頸内動脈鉗子を緩める同時に、導管内の０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液をゆっくり頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通して大脳中央動脈に注入した。後で、頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開け、血の流れを回復させ、傷口を縫合した。感染を防止するように、筋肉注射により２万ＩＵのペニシリンを注射した。４時間後、化合物５ＡＫ（用量：１μｍｏｌ／ｋｇ、ｎ＝１０）の生理食塩水溶液を連続的に６日間点滴注射をし、７日間観察し、毎日自身を対照し、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行無しを示し、５点は、死亡したことを示した。試験結果は、表８に示された。結果により、ラットが卒中になって４時間の後で、毎日１回の用量が１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる治療を受け、連続的に６回の治療を受け、死亡せず、１０匹のラットの中に８匹が持ち直し、いかなる神経機能が欠失した兆候がなく、２匹が軽い神経機能が欠失した兆候があった。これにより、１μｍｏｌ／ｋｇの用量で、５Ａｋは卒中になって４時間の場合に対して確実な治療の効果があることが判明された。
Figure 2016521696
実験例９ ラットが卒中になって６時間の後で１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる６回の連続的治療を受ける試験
効果は、神経機能の採点で表示され、採点が低ければ低いほど効果が優れた。オスＳＤラットに対して、腹腔に用量が４００ｍｇ／ｋｇの体重である１０％抱水クロラール溶液を注射し、麻酔をかけた。頸部の正中で縦に切口を切り、右側の頸総動脈幹（長さ：約３ｃｍ）を分離させた。舌骨で水平に頸外動脈の各分岐を分離させて結紮し、頸膨大の箇所で頸内動脈を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈の遠位端を結紮した。頸外動脈幹で０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液が入れられた導管を挿入し、頸内動脈鉗子を緩める同時に、導管内の０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液をゆっくり頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通して大脳中央動脈に注入した。後で、頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開け、血の流れを回復させ、傷口を縫合した。感染を防止するように、筋肉注射により２万ＩＵのペニシリンを注射した。６時間後、化合物５ＡＫ（用量：１μｍｏｌ／ｋｇ、ｎ＝１０）の生理食塩水溶液を連続的に６日間点滴注射をし、７日間観察し、毎日自身を対照し、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行無しを示し、５点は、死亡したことを示した。試験結果は、表９に示された。結果により、ラットが卒中になって６時間の後で、毎日１回の用量が１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる治療を受け、連続的に６回の治療を受け、１匹が意外に死亡した以外、９匹のラットの中に６匹が持ち直し、いかなる神経機能が欠失した兆候がなく、３匹が軽い神経機能が欠失した兆候があった。これにより、１μｍｏｌ／ｋｇの用量で、５Ａｋは卒中になって６時間の場合に対して確実な治療の効果があることが判明された。
Figure 2016521696
実験例１０ ラットが卒中になって２４時間の後で１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる６回の連続的治療を受ける試験
効果は、神経機能の採点で表示され、採点が低ければ低いほど効果が優れた。オスＳＤラットに対して、腹腔に用量が４００ｍｇ／ｋｇの体重である１０％抱水クロラール溶液を注射し、麻酔をかけた。頸部の正中で縦に切口を切り、右側の頸総動脈幹（長さ：約３ｃｍ）を分離させた。舌骨で水平に頸外動脈の各分岐を分離させて結紮し、頸膨大の箇所で頸内動脈を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈の遠位端を結紮した。頸外動脈幹で０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液が入れられた導管を挿入し、頸内動脈鉗子を緩める同時に、導管内の０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液をゆっくり頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通して大脳中央動脈に注入した。後で、頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開け、血の流れを回復させ、傷口を縫合した。感染を防止するように、筋肉注射により２万ＩＵのペニシリンを注射した。２４時間後、化合物５ＡＫ（用量：１μｍｏｌ／ｋｇ、ｎ＝１０）の生理食塩水溶液を連続的に６日間点滴注射をし、７日間観察し、毎日自身を対照し、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行無しを示し、５点は、死亡したことを示した。試験結果は、表１０に示された。結果により、ラットが卒中になって２４時間の後で、２匹が死亡し、残りの８匹が毎日１回の用量が１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる治療を受け、連続的に６回の治療を受け、８匹のラットの中に３匹が持ち直し、いかなる神経機能が欠失した兆候がなく、４匹が軽い神経機能が欠失した兆候があり、１匹が著しい神経機能が欠失した兆候があった。これにより、１μｍｏｌ／ｋｇの用量で、５Ａｋは卒中になって２４時間の場合に対して依然として確実な治療の効果があることが判明された。
Figure 2016521696
実験例１１ ラットが卒中になって６時間の後で２．５μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる６回の連続的治療を受ける試験
効果は、神経機能の採点で表示され、採点が低ければ低いほど効果が優れた。オスＳＤラットに対して、腹腔に用量が４００ｍｇ／ｋｇの体重である１０％抱水クロラール溶液を注射し、麻酔をかけた。頸部の正中で縦に切口を切り、右側の頸総動脈幹（長さ：約３ｃｍ）を分離させた。舌骨で水平に頸外動脈の各分岐を分離させて結紮し、頸膨大の箇所で頸内動脈を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈の遠位端を結紮した。頸外動脈幹で０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液が入れられた導管を挿入し、頸内動脈鉗子を緩める同時に、導管内の０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液をゆっくり頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通して大脳中央動脈に注入した。後で、頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開け、血の流れを回復させ、傷口を縫合した。感染を防止するように、筋肉注射により２万ＩＵのペニシリンを注射した。６時間後、化合物５ＡＫ（用量：２．５μｍｏｌ／ｋｇ、ｎ＝１０）の生理食塩水溶液を連続的に６日間点滴注射をし、７日間観察し、毎日自身を対照し、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行無しを示し、５点は、死亡したことを示した。試験結果は、表１１に示された。結果により、９匹のラットが卒中になって６時間の後で、毎日１回の用量が１μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる治療を受け、連続的に６回の治療を受け、死亡せず、９匹のラットの中に７匹が持ち直し、いかなる神経機能が欠失した兆候がなく、１匹が軽い神経機能が欠失した兆候があった。これにより、２．５μｍｏｌ／ｋｇの用量で、５Ａｋが卒中になって６時間の場合に対する治療の効果は、１μｍｏｌ／ｋｇの用量での治療よりも著しく優れたことが判明された。
Figure 2016521696
実験例１２ ラットが卒中になって２４時間の後で２．５μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる６回の連続的治療を受ける試験
効果は、神経機能の採点で表示され、採点が低ければ低いほど効果が優れた。オスＳＤラットに対して、腹腔に用量が４００ｍｇ／ｋｇの体重である１０％抱水クロラール溶液を注射し、麻酔をかけた。頸部の正中で縦に切口を切り、右側の頸総動脈幹（長さ：約３ｃｍ）を分離させた。舌骨で水平に頸外動脈の各分岐を分離させて結紮し、頸膨大の箇所で頸内動脈を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈の遠位端を結紮した。頸外動脈幹で０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液が入れられた導管を挿入し、頸内動脈鉗子を緩める同時に、導管内の０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液をゆっくり頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通して大脳中央動脈に注入した。後で、頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開け、血の流れを回復させ、傷口を縫合した。感染を防止するように、筋肉注射により２万ＩＵのペニシリンを注射した。２４時間後、化合物５ＡＫ（用量：２．５μｍｏｌ／ｋｇ、ｎ＝１０）の生理食塩水溶液を連続的に６日間点滴注射をし、７日間観察し、毎日自身を対照し、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行無しを示し、５点は、死亡したことを示した。試験結果は、表１２に示された。結果により、ラットが卒中になって２４時間の後で、３匹が死亡し、残りの６匹が毎日１回の用量が２．５μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる治療を受け、連続的に６回の治療を受け、２匹が死亡し、３匹が持ち直し、いかなる神経機能が欠失した兆候がなく、１匹が軽い神経機能が欠失した兆候があり、１匹が著しい神経機能が欠失した兆候があった。これにより、２．５μｍｏｌ／ｋｇの用量で、５Ａｋが卒中になって２４時間の場合に対して依然としてある程度の治療の効果があることが判明された。
Figure 2016521696
実験例１３ ラットが卒中になって２４時間の後で５μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる６回の連続的治療を受ける試験
効果は、神経機能の採点で表示され、採点が低ければ低いほど効果が優れた。オスＳＤラットに対して、腹腔に用量が４００ｍｇ／ｋｇの体重である１０％抱水クロラール溶液を注射し、麻酔をかけた。頸部の正中で縦に切口を切り、右側の頸総動脈幹（長さ：約３ｃｍ）を分離させた。舌骨で水平に頸外動脈の各分岐を分離させて結紮し、頸膨大の箇所で頸内動脈を分離させた。非侵襲的動脈鉗子によりそれぞれ頸内動脈の開口と頸総動脈の近位端をクリッピングし、頸外動脈の遠位端を結紮した。頸外動脈幹で０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液が入れられた導管を挿入し、頸内動脈鉗子を緩める同時に、導管内の０．５ｍＬの血餅の生理食塩水の懸濁液をゆっくり頸外動脈から近位端へ頸内動脈を通して大脳中央動脈に注入した。後で、頸外動脈の近位端を結紮し、頸内動脈と頸総動脈の動脈鉗子を開け、血の流れを回復させ、傷口を縫合した。感染を防止するように、筋肉注射により２万ＩＵのペニシリンを注射した。２４時間後、化合物５ＡＫ（用量：５μｍｏｌ／ｋｇ、ｎ＝１０）の生理食塩水溶液を連続的に６日間点滴注射をし、７日間観察し、毎日自身を対照し、Ｚｅａｌｏｎｇａ方法により神経機能の欠損程度を評定した。０点は、いかなる神経機能が欠失した兆候がないことを示し、１点は、損傷がない側の前肢が伸びることができないことを示し、２点は、損傷がない側へ歩行したことを示し、３点は、損傷がない側へ回って尾を追うように歩行したことを示し、４点は、意識障害で自主歩行無しを示し、５点は、死亡したことを示した。試験結果は、表１３に示された。結果により、ラットが卒中になって２４時間の後で、１匹が死亡し、残りの１０匹が毎日１回の用量が５μｍｏｌ／ｋｇの５Ａｋによる治療を受け、連続的に６回の治療を受け、死亡せず、７匹が持ち直し、いかなる神経機能が欠失した兆候がなく、３匹が軽い神経機能が欠失した兆候があった。これにより、５μｍｏｌ／ｋｇの用量で、５Ａｋが卒中になって２４時間の場合に対する治療の効果は、２．５μｍｏｌ／ｋｇの用量での治療よりも著しく優れたことが判明された。
Figure 2016521696
実験結果により、本発明に係る化合物は、ナノ構造を形成し、血液脳関門を越える効果を達成することができ、溶血栓と抗血栓に加え、ＯＨ、ＮＯ及び超酸化物陰イオン等のフリーラジカルを効果的に消去し、且つ低用量で血栓を効果的に溶解でき、やや高い用量で４時間以上の卒中に対して優れた効果が現われ、良好な臨床応用前景を有することが判明された。

Claims (18)

  1. 一般式Ｉで示された化合物であって、
    Figure 2016521696
    ただし、Ｔは結合用基を少なくとも２つ有するリンカーアームを示し、Ｑは血栓溶解活性を有するペプチドを示し、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なるＣ１-４アルキル基を示す化合物。
  2. 少なくとも１つの前記結合用基はアミノ基であり、且つ残りの結合用基はカルボキシル基又はアミノ基である請求項１に記載の化合物。
  3. 前記リンカーアームは、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕである請求項２に記載の化合物。
  4. 前記血栓溶解活性を有するペプチドは、ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列、ＰＡＫ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）配列、ＡＫＰ（Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ）配列又はＫＡＰ（Ｌｙｓ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）配列を含むオリゴペプチド、或いはＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を構造単位とした反復配列を含むペプチドからなる群から選ばれたものである請求項１に記載の化合物。
  5. 前記ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むオリゴペプチドは、トリペプチドであり、且つ下記一般式Ｑ１又はＱ２を有し、
    Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ （Ｑ１）
    ＡＡ-Ａｌａ-Ｐｒｏ （Ｑ２）
    ただし、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕからなる群から選ばれたものである請求項４に記載の化合物。
  6. Ｒ１及びＲ２の何れもメチル基である請求項１に記載の化合物。
  7. 前記リンカーアームは、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕであり、且つ前記血栓溶解活性を有するペプチドは、ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むトリペプチドである請求項６に記載の化合物。
  8. 下記一般式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ、Ｉｆ、Ｉｇ、又はＩｈを有し、
    Figure 2016521696
    ただし、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ、及びＬ-Ｇｌｕからなる群から選ばれたものである請求項７に記載の化合物。
  9. 請求項１〜８の何れか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される担体を含む薬物組成物。
  10. 前記化合物は、ナノスフェア構造を形成できる請求項９に記載の薬物組成物。
  11. 血栓溶解薬物、ＮＯフリーラジカル消去の薬物又は抗血栓薬物とされる請求項９に記載の薬物組成物。
  12. 卒中又は脳梗塞を治療する薬物とされる請求項９に記載の薬物組成物。
  13. 一般式ＩＩの化合物を提供し、
    Figure 2016521696
    ただし、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なるＣ１-４アルキル基を示す工程（１）と、
    結合用基を少なくとも２つ有するリンカーアームＴ、及び血栓溶解活性を有するペプチドＱを提供し、前記リンカーアームは第１の結合用基と第２の結合用基を有する工程（２）と、
    適当な反応条件において、一般式ＩＩの化合物のカルボキシル基と前記リンカーアームＴの第１の結合用基を結合し、一般式ＩＭ-１化合物を形成する工程（３）と、
    Figure 2016521696
    適当な反応条件において、前記血栓溶解活性を有するペプチドＱの一端が前記リンカーアームＴの第２の結合用基と結合するように、前記血栓溶解活性を有するペプチドＱと一般式ＩＭ-１化合物を結合して、一般式Ｉの化合物を形成する工程（４）と、
    を含む請求項１に記載の一般式Ｉの化合物の調製方法。
  14. 前記第１の結合用基はアミノ基であり、且つ前記第２の結合用基はカルボキシル基又はアミノ基である請求項１３に記載の調製方法。
  15. 前記リンカーアームは、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ａｓｐ又はＬ-Ｇｌｕである請求項１４に記載の調製方法。
  16. 前記血栓溶解活性を有するペプチドは、ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列、ＰＡＫ（Ｐｒｏ-Ａｌａ-Ｌｙｓ）配列、ＡＫＰ（Ａｌａ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ）配列又はＫＡＰ（Ｌｙｓ-Ａｌａ-Ｐｒｏ）配列を含むオリゴペプチド、或いはＰＡＫ配列、ＡＫＰ配列又はＫＡＰ配列を構造単位とした反復配列を含むペプチドからなる群から選ばれたものである請求項１３に記載の調製方法。
  17. 前記ＰＡ（Ｐｒｏ-Ａｌａ）配列を含むオリゴペプチドは、トリペプチドであり、且つ下記一般式Ｑ１又はＱ２を有し、
    Ｐｒｏ-Ａｌａ-ＡＡ （Ｑ１）
    ＡＡ-Ａｌａ-Ｐｒｏ （Ｑ２）
    ただし、ＡＡは、Ｌ-Ａｌａ、Ｌ-Ｖａｌ、Ｌ-Ｔｒｐ、Ｌ-Ｔｙｒ、Ｌ-Ｐｒｏ、Ｌ-Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｌ-Ｓｅｒ、Ｌ-Ｉｌｅ、Ｌ-Ｔｈｒ、Ｌ-Ｌｙｓ、Ｌ-Ｌｅｕ、Ｌ-Ｇｌｎ、Ｌ-Ａｓｎ、Ｌ-Ａｓｐ及びＬ-Ｇｌｕからなる群から選ばれたものである請求項１６に記載の調製方法。
  18. Ｒ１及びＲ２の何れもメチル基である請求項１３に記載の調製方法。
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