CN102477068B - 用于制备溶血栓药物的氨基酸衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

用于制备溶血栓药物的氨基酸衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于制备溶血栓药物的氨基酸衍生物及其制备方法和应用。本发明的N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰)色氨酰氨基酸结构如通式7a-n所示，本发明通过动物实验评价了通式7a-n化合物的抗血栓和自由基清除活性，证明了本发明的N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰)色氨酰氨基酸具有抗血栓及自由基清除双重活性，可用于制备抗血栓药物和用作自由基清除剂。

Description

用于制备溶血栓药物的氨基酸衍生物及其制备方法和应用
发明领域
本发明涉及具有抗血栓和自由基清除双重活性的用于制备溶血栓药物的氨基酸衍生物及其制备方法和应用、涉及它们的抗血栓活性及自由基清除活性，以及涉及它们作为抗血栓和自由基清除剂的应用，属于生物医药领域。
背景技术
血栓性疾病的发病率高居各种疾病之首，近年来还有渐增趋势，严重威胁人类健康。血栓性疾病的药物治疗是当代医学研究的重点和热点之一。血小板在血栓形成中起关键性作用，抗血小板异常是血栓性疾病药物治疗的重要途径之一，寻找安全有效的抗血小板药物是药物研究的热点之一。
已有文献公开，将L-氨基酸引入1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸的3位，增强了四氢异喹啉抗血小板聚集活性。去甲乌药碱是从番荔枝分离到的四氢异喹类似物。去甲乌药碱及类似物可以抑制肾上腺素和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集。去甲乌药碱及类似物的共有结构均是6位和7位含有酚羟基的四氢异喹。此外，在1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸的6位和7位引入酚羟基，3位引入色氨酰氨基酸二肽不仅会增强抗血小板聚集活性，而且会获得自由基清除活性。基于以上理论，本发明建立了新的具有抗血栓和自由基清除双重活性的N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰)色氨酰氨基酸的合成工艺、制备了N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰)色氨酰氨基酸，并评价了它们的抗血栓和自由基清除活性。
发明内容
本发明依据血栓形成是血管栓塞性疾病发病的最重要的病因、依据将氨基酸引入1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸的3位可增强了四氢异喹啉抗血小板活性、依据在1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸6，7位上引入酚羟基有利于增强抗血小板聚集活性、依据在1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸的6位和7位引入酚羟基，3位引入色氨酰氨基酸二肽不仅会增强抗血小板聚集活性，而且会获得自由基清除活性，本发明建立了制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰)色氨酰氨基酸的合成工艺、制备了N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰)色氨酰氨基酸、用体外抗血小板聚集活性实验和动脉静脉循环旁路丝线大鼠模型评价了它们的抗血栓活性、以及用体外自由基清除实验评价了它们的自由基清除活性。本发明是通过以下技术方案实现这些发明内容的：
本发明的目的之一是提供通式7a-n的化合物，
Figure BSA00000373680400021
通式7a-n
其中，AA表示以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys、Asp、Glu、Arg。
本发明的目的之二是提供制备通式7a-n化合物的中间体：
Figure BSA00000373680400022
通式5a-n，
其中AA表示以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys(Boc)、Asp(OBzl)、Glu(OBzl)、Arg(NO2)；
Figure BSA00000373680400023
通式6a-n，
其中AA表示以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys(Boc)、Asp、Glu、Arg。
本发明的目的之三是提供制备所述通式7a-n化合物及其中间体的方法，具体包括如下步骤：
(1)L-多巴在稀盐酸存在下与甲醛缩合，制备S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸；
(2)S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸在碱性条件下与(Boc)2O反应，制备N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸；
(3)N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸在二环己基碳二亚胺、N-羟基苯并三氮唑和N-甲基吗啉的存在下与H3PO4·Trp-OBzl反应，制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸苄酯；
(4)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸苄酯在Pd/C和氢气作用下脱去苄酯保护基，制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸；
(5)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸在二环己基碳二亚胺、N-羟基苯并三氮唑和N-甲基吗啉的存在下与氨基酸苄酯或Boc或NO2保护的氨基酸苄酯反应，得到通式5a-n化合物。
(6)将通式5a-n化合物在Pd/C和氢气作用下脱去苄酯和NO2保护基，得到通式6a-n化合物。
(7)将通式6a-n化合物脱去Boc保护基，得到通式7a-n化合物。
本发明的目的之四是提供一种药物组合物，该药物组合物含有治疗上有效剂量的通式7a-n化合物，并含有一种或多种药学上可接受的赋型剂或者辅加剂。
本发明的目的之五是提供一种药物制剂，该药物制剂是将通式7a-n化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂的混合物制成片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂或口服液。
本发明的通式7a-n化合物可用于制备抗血栓药物以及用作自由基清除剂。
本发明所述药物组合物可用于制备抗血栓药物以及用作自由基清除剂。
本发明通过动物实验评价了通式7a-n化合物的抗血栓以及自由基清除活性，证明了本发明的通式7a-n化合物具有抗血栓和自由基清楚双重活性，可用于制备抗血栓药物和用作自由基清除剂。
附图说明
图1为本发明通式7a-n化合物的合成路线图。
其中，i)甲醛和稀盐酸；ii)(Boc)2O，1N氢氧化钠，四氢呋喃；iii)L-Trp-OBzl、二环己基碳二亚胺(DCC)，N-羟基苯并三氮唑(HoBt)和N-甲基吗啉(NMM)；iv)Pd/C、乙醇、氢气；v)L-AA-OBzl、DCC，HOBt和NMM；vi)Pd/C、乙醇、氢气；vii)4N HCl/EtOAC.在通式5a-n中AA代表以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys(Boc)、Asp(OBzl)、Glu(OBzl)、Arg(NO2)；在通式6a-n中AA代表以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys(Boc)、Asp、Glu、Arg；在通式7a-n中AA代表以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys、Asp、Glu、Arg。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸(1)
将0.988g(0.005mol)L-多巴在冰浴下置于100ml圆底烧瓶中加入5.9mlH2O2和0.7ml 32％的盐酸，搅拌均匀使完全溶解。然后加入1.2ml 40％的甲醛溶液，室温反应6小时，TLC(氯仿/甲醇，2/1)显示L-多巴消失。冰浴下往反应混合物中滴加饱和碳酸氢钠，当pH为5时有大量白色沉淀析出。滤得0.992g(95％)标题化合物。Mp 282-284℃；ESI-MS(m/z)210[M+H]+；
Figure BSA00000373680400041
(c＝0.55，甲醇)。
实施例2制备N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸(2)
将0.236g(1.129mol)S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基-异喹啉-3-羧酸(1)置于50ml圆底烧瓶中用20ml THF溶解，冰浴下滴加2N Na2HCO3水溶液使反应液pH为8。反应混合物室温搅拌8小时，TLC(氯仿/甲醇，10/1)显示1消失。冰浴下往反应混合物中滴加饱和硫酸氢钾至反应液pH为7。减压浓缩除去THF之后水层用30ml乙酸乙酯萃取3次。合并的乙酸乙酯层用饱和NaCl水溶液洗2次、Na2SO4干燥、过滤、减压浓缩。残留物用硅胶柱纯化(氯仿/甲醇，10/1)，得0.169g(55％)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp 189-190℃；ESI-MS(m/z)310[M+H]+；
Figure BSA00000373680400051
(c＝0.55，甲醇)。
实施例3制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸苄酯(3)
将0.309g(1.0mmol)N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸(2)溶于7ml无水THF中，冰浴下加入0.158g(1.1mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)并使完全溶解，10分钟后加入0.248g(1.2mmol)DCC，得到反应液(错误！未找到引用源。)。把0.47g(1.2mmol)H3PO4·Trp-OBzl悬浮于7ml无水THF中，然后用1ml N-甲基吗啉(NMM)调pH值8并搅拌反应20分钟，得到反应液(错误！未找到引用源。)。把反应液(错误！未找到引用源。)加入反应液(错误！未找到引用源。)中，室温搅拌过夜，TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.23)显示2消失。滤除二环己基脲，滤液减压浓缩，残留物溶于35ml乙酸乙酯后依次用5％NaHCO3、饱和NaCl、5％KHSO4、饱和NaCl、饱和NaHCO3及饱和NaCl的水溶液洗至中性。乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥、过滤、减压浓缩、残留物用硅胶柱纯化，得0.47g(80％)标题化合物，为无色固体。Mp194-195℃；ESI-MS(m/z)586[M+H]+；(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.82(s，1H)，8.73(s，2H)，8.21(d，J＝7.2Hz，1H)，7.52(d，J＝7.8Hz，1H)，7.30(m，4H)，7.17(m，5H)，6.56(s，1H)，6.52(s，1H)，5.01(s，2H)，4.41(m，4H)，3.18(m，2H)，2.84(m，1H)，2.66(m，1H)，1.18(s，9H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝172.1，154.7，144.3，144.0，136.1，128.9，128.8，128.7，128.5，128.4，128.2，127.4，127.1，124.2，124.0，121.5，118.3，113.6，111.9，109.5，66.4，55.5，53.4，33.8，27.7，25.8，24.9。
实施例4制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)
将0.50g(0.86mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸苄酯(3)溶于20ml乙醇，加入54mg Pd/C(15％)反应瓶中的空气用氢气置换5次后，通氢气并室温搅拌24小时，TLC(氯仿/甲醇，5/1)显示3消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩，得0.409g(97％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)496[M+H]+
实施例5制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丙氨酸苄酯(5a)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.421g(1.2mmol)Tos·Ala-OBzl得到标题化合物0.544g(83％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇＝20/1，Rf＝0.28)；Mp 117-118℃；ESI-MS(m/z)679[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400061
(c＝0.50，甲醇)。
实施例6制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丙氨酸(6a)
按照实施例4的方法从500mg(0.76mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丙氨酸苄酯(5a)得0.392g(91％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)589[M+Na]+。
实施例7制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丙氨酸(7a)
先将0.35g(0.76mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丙氨酸(6a)溶于2ml乙酸乙酯中，再往得到的溶液中加5ml氯化氢浓度为4N的氯化氢-乙酸乙酯溶液。室温搅拌6小时以后TLC(氯仿/甲醇，1/1，Rf＝0.13)显示6a消失。反应液减压浓缩除去乙酸乙酯。残留物用10ml乙酸乙酯溶解，液减压浓缩除去乙酸乙酯。该操作反复三次。残留物加入10ml乙醚研磨，过滤，得0.282g(91％)标题化合物，为无色固体。Mp 149-150℃；ESI-MS(m/z)467[M+H]+；(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.95(s，1H)，9.60(s，1H)，9.25(s，1H)，8.84(d，J＝7.8Hz，1H)，8.50(d，J＝7.2Hz，1H)，7.71(d，J＝7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.06(t，J＝7.5Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.56(s，1H)，4.77(m，1H)，4.67(m，1H)，4.27(m，1H)，4.02(m，3H)，3.19(m，2H)，3.00(m，1H)，2.77(t，J＝15.6Hz，1H)，1.32(d，J＝7.2Hz，1H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝174.4，171.4，145.4，145.0，136.5，127.6，124.6，121.7，119.0，118.8，115.5，113.6，111.7，110.0，65.4，54.7，54.1，48.3，29.4，28.1，17.66；
实施例8制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰甘氨酸苄酯(5b)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.404g(1.2mmol)Tos·Gly-OBzl得到0.577g(90％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇＝20/1，Rf＝0.22)；Mp 121-122℃；ESI-MS(m/z)665[M+Na]+；(c＝0.50，甲醇)。
实施例9制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰甘氨酸(6b)
按照实施例4的方法从500mg(0.78mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰甘氨酸苄酯(5b)得0.394g(92％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)575[M+Na]+。
实施例10制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰甘氨酸(7b)
按照实施例7的方法3)从0.35g(0.63mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰甘氨酸(6b)得0.284g(92％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，1/1，Rf＝0.15)；Mp 133-134℃；ESI-MS(m/z)453[M+H]+；
Figure BSA00000373680400072
(c＝0.50，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.95(s，1H)，9.65(s，1H)，9.29(s，1H)，8.88(d，J＝7.8Hz，1H)，8.52(t，J＝5.4Hz，1H)，7.68(d，J＝7.8Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.24(m，1H)，7.06(t，J＝7.5Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.56(s，1H)，4.67(m，1H)，4.07(m，5H)，3.11(m，3H)，4.02(m，3H)，2.80(t，J＝12.9Hz，1H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝172.0，171.5，145.5，145.0，136.5，128.7，127.9，124.6，121.7，121.3，118.8，118.8，115.5，113.6，65.4，54.8，54.2，43.9，29.3，28.2。
实施例11制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苯丙氨酸苄酯(5c)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.512g(1.2mmol)Tos·Phe-OBzl得到0.60g(82％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇＝25/1，Rf＝0.23)；Mp 102-103℃；ESI-MS(m/z)755[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400073
(c＝0.50，甲醇)。
实施例12制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苯丙氨酸(6c)
按照实施例4的方法从600mg(0.82mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苯丙氨酸苄酯(5c)得0.489g(93％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)665[M+Na]+。
实施例13制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苯丙氨酸(7c)
按照实施例7的方法3)从0.40g(0.62mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苯丙氨酸(6c)得0.327g(91％)标题化合物，为淡黄色固体。(氯仿/甲醇，1/1，Rf＝0.09)；Mp 141-142℃；ESI-MS(m/z)543[M+H]+；
Figure BSA00000373680400081
Figure BSA00000373680400082
(c＝0.50，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝9.32(s，1H)，8.92(s，1H)，8.56(s，1H)，7.66(d，J＝7.5Hz，1H)，7.27(m，10H)，6.58(s，1H)，6.56(s，1H)，4.69(m，2H)，4.01(m，3H)，3.08(m，5H)，2.70(t，J＝12.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝174.2，171.8，145.5，145.0，139.5，136.5，130.2，128.7，128.2，127.8，127.5，122.9，122.2，129.1，119.0，114.6，111.1，110.9，66.7.，54.7，47.3，36.8，31.4，29.8。
实施例14制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰缬氨酸苄酯(5d)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.454g(1.2mmol)Tos·Val-OBzl得到0.41g(80％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.21)；Mp 131-132℃；ESI-MS(m/z)707[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400083
(c＝0.50，甲醇)。
实施例15制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰缬氨酸(6d)
按照实施例4的方法从400mg(0.60mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰缬氨酸苄酯(5d)得0.315g(91％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)617[M+Na]+。
实施例16制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰缬氨酸(7d)
按照实施例7的方法3)从0.30g(0.51mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰缬氨酸(6d)得0.246g(93％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.23)；Mp 163-164℃；ESI-MS(m/z)495[M+H]+；
Figure BSA00000373680400084
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.96(s，1H)，9.69(s，1H)，9.33(s，2H)，8.94(d，J＝7.5Hz，1H)，8.28(d，J＝8.1Hz，1H)，7.70(d，J＝7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.06(t，J＝7.5Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，6.56(s，1H)，6.54(s，1H)，4.77(m，1H)，4.07(m，4H)，3.19(m，3H)，2.74(t，J＝13.5Hz，1H)，2.12(m，1H)，0.92(t，3H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝173.2，171.9，145.4，144.9，136.5，127.6，124.5，121.5，121.3，119.0，118.8，118.6，115.4，113.5，111.7，110.0，57.6，54.6，43.8，33.8，30.4，29.4，19.5。
实施例17制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰亮氨酸苄酯(5e)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.471g(1.2mmol)Tos·Leu-OBzl得到0.618g(89％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.22)；Mp 151-153℃；ESI-MS(m/z)721[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400091
(c＝0.50，甲醇)。
实施例18制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰亮氨酸(6e)
按照实施例4的方法从600mg(0.86mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰亮氨酸苄酯(5e)得0.485g(93％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)628[M+Na]+。
实施例19制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰亮氨酸(7e)
按照实施例7的方法3)从0.45g(0.74mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰亮氨酸(6e)得0.368g(91％)标题化合物，为淡黄色固体。(氯仿/甲醇，1/1，Rf＝0.16)；Mp 191-193℃；ESI-MS(m/z)509[M+H]+；(c＝0.50，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.96(s，1H)，9.57(s，1H)，9.26(s，1H)，8.90(d，J＝8.1Hz，1H)，8.46(d，J＝10.2Hz，1H)，7.21(d，J＝7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，6.56(s，1H)，6.54(s，1H)，4.69(m，1H)，4.29(q，J＝9.0Hz，J＝13.5Hz，1H)，4.02(m，3H)，3.32(m，2H)，3.01(m，1H)，2.74(t，J＝13.5Hz，1H)，1.56(m，3H)，0.92(d，J＝6.3Hz，3H)，0.87(d，J＝6.0Hz，3H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝174.4，171.6，145.4，136.5，127.6，124.5，121.6，121.3，119.0，118.8，115.4，113.5，111.7，110.0，54.7，54.0，50.8，43.9，33.8，29.4，28.0，24.7，23.3，21.8。
实施例20制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰异亮氨酸苄酯(5f)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.471g(1.2mmol)Tos·Ile-OBzl得到0.632g(91％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.22)；Mp 114-115℃；ESI-MS(m/z)721[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400101
(c＝0.50，甲醇)。
实施例21制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰异亮氨酸(6f)
按照实施例4的方法从600mg(0.86mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰异亮氨酸苄酯(5f)得0.475g(91％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)628[M+Na]+。
实施例22制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰异亮氨酸(7f)
按照实施例7的方法3)从0.45g(0.74mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰异亮氨酸(6f)得0.376g(93％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，1/1，Rf＝0.18)；Mp 181-184℃；ESI-MS(m/z)509[M+H]+；
Figure BSA00000373680400102
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝9.32(s，2H)，8.84(d，J＝7.8Hz，1H)，8.32(d，J＝8.1Hz，1H)，7.71(d，J＝7.8Hz，2H)，7.33(d，J＝7.8Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，1H)，6.99(t，J＝7.2Hz，1H)，6.56(s，1H)，6.54(s，1H)，4.77(m，1H)，4.24(t，J＝6.6Hz，1H)，4.02(m，3H)，3.16(m，3H)，2.98(m，1H)，2.73(t，J＝14.4Hz，1H)，1.82(s，1H)，1.45(s，1H)，1.23(m，1H)，0.88(m，6H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝173.1，171.7，168.4，145.3，144.8，136.4，127.6，124.3，121.5，119.0，118.8，118.6，115.3，113.5，111.7，110.0，56.7，54.6，53.9，43.8，36.8，29.3，28.0，25.2，15.9，11.8。
实施例23制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰色氨酸苄酯(5g)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.47g(1.2mmol)H3PO4.·Trp-OBzl得到0.709g(92％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.27)；Mp 214-215℃；ESI-MS(m/z)794[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400111
(c＝0.50，甲醇)。
实施例24制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰色氨酸(6g)
按照实施例4的方法从700mg(0.91mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰色氨酸苄酯(5g)得0.574g(93％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)704[M+Na]+。
实施例25制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰色氨酸(7g)
按照实施例7的方法3)从0.50g(0.74mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰色氨酸(6g)得0.416g(93％)标题化合物，为紫色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 231-234℃；ESI-MS(m/z)582[M+H]+；
Figure BSA00000373680400112
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.94(s，2H)，9.54(s，1H)，9.29(s，1H)，9.04(s，1H)，8.84(d，J＝7.8Hz，1H)，8.47(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68(d，J＝7.5Hz，1H)，7.55(m，1H)，7.34(m，2H)，7.22(m，2H)，7.01(m，4H)，6.58(s，1H)，6.56(s，1H)，4.70(m，1H)，4.51(m，1H)，4.04(m，3H)，3.21(m，5H)，2.68(t，J＝9.9Hz，1H)；13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝171.7，170.8，145.5，136.5，128.9，127.6，124.4，121.7，121.3，119.0，118.8，115.5，113.5，111.8，110.0，60.2，54.8，53.5，43.9，29.3，28.1，27.5。
实施例26制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丝氨酸苄酯(5h)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.44g(1.2mmol)Tos·Ser-OBzl得到0.571g(85％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，15/1，Rf＝0.22)；Mp 96-98℃；ESI-MS(m/z)695[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400113
(c＝0.50，甲醇)。
实施例27制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丝氨酸(6h)
按照实施例4的方法从500mg(0.74mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丝氨酸苄酯(5h)得0.395g(91％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)605[M+Na]+。
实施例28制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丝氨酸(7h)
按照实施例7的方法3)从0.35g(0.60mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰丝氨酸(6h)得0.283g(91％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 112-113℃；ESI-MS(m/z)483[M+H]+；
Figure BSA00000373680400121
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.95(s，1H)，9.54(s，1H)，9.29(s，1H)，8.84(d，J＝7.8Hz，1H)，8.50(d，J＝7.5Hz，1H)，7.74(d，J＝7.8Hz，1H)，7.33(d，J＝7.8Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，6.98(t，J＝7.5Hz，1H)，6.58(s，1H)，6.56(s，1H)，4.74(m，1H)，4.31(m，1H)，3.71(m，5H)，3.22(m，2H)，3.02(m，1H)，2.77(t，J＝13.5Hz，1H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝172.2，171.7，145.3，144.9，136.5，127.6，124.6，121.6，119.1，118.8，115.4，113.5，111.7，110.0，65.4，61.6，55.2，54.6，43.9，29.3，28.1。
实施例29制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苏氨酸苄酯(5i)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.457g(1.2mmol)Tos·Thr-OBzl得到0.574g(84％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，25/1，Rf＝0.20)；Mp 107-109℃；ESI-MS(m/z)709[M+Na]+；(c＝0.50，甲醇)。
实施例30制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苏氨酸(6i)
按照实施例4的方法从500mg(0.728mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苏氨酸苄酯(5i)得0.407g(94％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)619[M+Na]+。
实施例31制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苏氨酸(7i)
按照实施例7的方法3)从0.40g(0.67mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰苏氨酸(6i)得0.332g(100％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 130-137℃；ESI-MS(m/z)497[M+H]+；
Figure BSA00000373680400123
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.95(s，1H)，9.57(s，1H)，9.28(s，1H)，8.93(d，J＝8.1Hz，1H)，8.17(d，J＝8.4Hz，1H)，7.72(d，J＝7.5Hz，1H)，7.31(d，J＝7.2Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.04(t，J＝7.5Hz，1H)，6.98(t，J＝7.5Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.56(s，1H)，4.78(m，1H)，4.11(m，5H)，3.71(m，5H)，3.24(m，2H)，3.05(m，1H)，2.77(t，J＝8.4Hz，1H)，1.06(m，3H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝172.4，171.9，145.4，145.0，136.6，127.7，124.6，121.6，121.3，119.0，118.9，118.7，115.4，113.5，111.7，110.0，67.0，58.2，54.7，43.9，29.4，20.8。
实施例32制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰酪氨酸苄酯(5j)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.531g(1.2mmol)Tos·Tyr-OBzl得到0.635g(85％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，25/1，Rf＝0.28)；Mp 131-134℃；ESI-MS(m/z)771[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400131
(c＝0.50，甲醇)。
实施例33制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰酪氨酸(6j)
按照实施例4的方法从600mg(0.80mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰酪氨酸苄酯(5j)得0.479g(94％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)681[M+Na]+。
实施例34制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰酪氨酸(7j)
按照实施例7的方法3)从0.35g(0.53mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰酪氨酸(6j)得0.287g(93％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 146-147℃；ESI-MS(m/z)559[M+H]+；
Figure BSA00000373680400132
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.94(s，1H)，9.58(s，1H)，9.23(s，1H)，8.86(d，J＝7.8Hz，1H)，8.45(d，J＝7.5Hz，1H)，7.68(d，J＝7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.06(m，3H)，6.70(t，J＝8.1Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.56(s，1H)，4.68(m，1H)，4.40(m，1H)，4.01(m，3H)，3.16(m，2H)，2.85(m，4H)；13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝171.8，168.4，156.4，145.3，144.9，136.5，136.4，130.6，127.9，124.4，121.6，118.9，115.4，113.5，111.7，110.0，65.4，54.7，54.1，43.9，36.3，29.3，28.1。
实施例35制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰赖氨酸苄酯(5k)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.609g(1.2mmol)Tos·Lys(Boc)-OBzl得到0.674g(83％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.29)；TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.29)；Mp 132-133℃；ESI-MS(m/z)836[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400141
(c＝0.55，甲醇)。
实施例36制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰赖氨酸(6k)
按照实施例4的方法从700mg(0.86mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰赖氨酸苄酯(5k)得0.566g(91％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)746[M+Na]+。
实施例37制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰赖氨酸(7k)
按照实施例7的方法3)从0.40g(0.55mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰赖氨酸(6k)得0.287g(93％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 143-144℃；ESI-MS(m/z)524[M+H]+；
Figure BSA00000373680400142
(c＝0.51，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝11.00(s，1H)，9.60(s，1H)，9.38(s，1H)，8.94(d，J＝6.9Hz，1H)，8.51(d，J＝6.9Hz，1H)，8.16(s，2H)，7.72(d，J＝7.2Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.00(m，2H)，6.60(s，1H)，6.56(s，1H)，4.67(m，1H)，4.21(m，1H)，4.02(m，3H)，3.20(m，2H)，3.02(t，J＝7.5Hz，1H)，2.75(s，3H)，1.60(m，4H)，1.38(m，2H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝173.8，171.7，145.3，144.9，136.5，127.6，124.6，121.6，119.0，118.8，115.4，113.5，111.8，110.0，65.4，54.6，54.2，52.3，43.8，30.7，29.3，27.9，26.7，22.7。
实施例38制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰天冬氨酸苄酯(5l)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.582g(1.2mmol)Tos·Asp(OBzl)-OBzl得到0.647g(82％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.29)；Mp 131-133℃；ESI-MS(m/z)813[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400143
(c＝0.55，甲醇)。
实施例39制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰天冬氨酸(6l)
按照实施例4的方法从600mg(0.76mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰天冬氨酸苄酯(5l)得0.414g(89％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)633[M+Na]+。
实施例40制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰赖氨酸(7l)
按照实施例7的方法3)从0.40g(0.66mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰天冬氨酸(6l)得0.347g(97％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 156-158℃；ESI-MS(m/z)511[M+H]+；
Figure BSA00000373680400151
(c＝0.50，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.97(s，1H)，9.59(m，1H)，9.34(m，1H)，8.89(d，J＝4.5Hz，1H)，8.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.70(d，J＝7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝8.1Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.06(t，J＝7.5Hz，1H)，6.98(t，J＝7.5Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.55(s，1H)，4.67(m，2H)，4.02(m，3H)，3.17(m，2H)，2.99(m，1H)，2.68(m，3H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝172.7，171.5，168.5，145.3，144.9，136.5，127.6，124.6，121.6，119.0，118.8，115.4，113.5，111.8，110.0，65.4，54.6，54.1，49.2，43.8，36.3，29.3，28.0；
实施例41制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰谷氨酸苄酯(5m)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.585g(1.2mmol)Tos·Glu(OBzl)-OBzl得到0.651g(81％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，20/1，Rf＝0.28)；Mp 156-157℃；ESI-MS(m/z)827[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400152
(c＝0.50，甲醇)。
实施例42制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰谷氨酸(6m)
按照实施例4的方法从600mg(0.75mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰谷氨酸苄酯(5m)得0.432g(93％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)647[M+Na]+。
实施例43制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰谷氨酸(7m)
按照实施例7的方法3)从0.40g(0.64mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰谷氨酸(6m)得0.344g(96％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 141-143℃；ESI-MS(m/z)525[M+H]+；
Figure BSA00000373680400153
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.96(s，1H)，9.56(s，1H)，9.28(s，1H)，8.88(d，J＝7.5Hz，1H)，8.50(d，J＝7.8Hz，1H)，7.71(d，J＝7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.55(s，1H)，4.68(m，1H)，4.28(m，1H)，4.02(m，4H)，3.01(m，1H)，2.77(t，J＝13.5Hz，1H)，2.33(m，2H)，1.86(m，4H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝174.2，173.5，171.8，145.4，136.5，127.6，124.6，121.6，121.3，119.0，118.8，115.5，113.5，111.8，110.0，65.4，54.8，54.1，51.7，43.9，33.8，30.5，29.3，26.8。
实施例44制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰精氨酸苄酯(5n)
按照实施例3的方法从0.495g(1.0mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸(4)和0.468g(1.2mmol)Tos·Arg(NO2)-OBzl得到0.706g(80％)标题化合物，为无色固体。TLC(氯仿/甲醇，5/1，Rf＝0.23)；Mp 120-122℃；ESI-MS(m/z)808[M+Na]+；
Figure BSA00000373680400161
(c＝0.55，甲醇)。
实施例45制备N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰精氨酸(6n)
按照实施例4的方法从600mg(0.76mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰精氨酸苄酯(5n)得0.447g(90％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/z)647[M+Na]+。
实施例46制备N-(S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰精氨酸(7n)
按照实施例7的方法3)从0.40g(0.61mmol)N-(N-Boc-S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酰精氨酸(6m)得0.325g(96％)标题化合物，为无色固体。(氯仿/甲醇，3/1，Rf＝0.31)；Mp 163-165℃；ESI-MS(m/z)552[M+H]+；
Figure BSA00000373680400162
(c＝0.55，甲醇)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝10.97(s，1H)，9.58(s，1H)，9.36(s，1H)，8.88(d，J＝8.1Hz，1H)，8.55(d，J＝6.6Hz，1H)，7.72(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，1H)，6.98(t，J＝7.2Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.55(s，1H)，4.67(m，1H)，4.23(m，1H)，4.01(m，3H)，3.17(m，4H)，3.01(m，1H)，2.75(m，1H)，1.98(s，1H)，1.91(s，1H)，1.67(m，4H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝173.6，172.4，145.3，144.9，136.5，127.6，124.6，121.6，119.0，118.6，115.4，113.5，111.7，110.0，60.2，54.6，54.1，43.8，29.3，28.4，27.9，25.7，21.5。
实验例1测定7a-n的体外抗血小板聚集活性
猪颈动脉取血用3.8％枸橼酸钠(枸橼酸钠/猪血，1/9)抗凝。1000r/min离心10分钟得富血小板血浆，再以3000r/min离心10分钟，得贫血小板血浆。往富血小板血浆中加贫血小板血浆，把富血小板血浆中的血小板数调节为2×109/mL。以二磷酸腺苷(ADP，终浓度为10-5M，sigma)、血小板活化因子(PAF，终浓度为10-7M，sigma)和花生四烯酸(AA，终浓度为0.15mg/mL，sigma)为诱导剂诱导血小板聚集。在血小板聚集仪上测定这些诱导剂导致的血小板聚集率。1和7a-n用生理盐水溶解，终浓度为300、150、80、40、20和1μM。在血小板聚集仪(CHRONO-LOG，USA，490-2D)上测定加入各种浓度的1或者7a-n之后这些诱导剂导致的血小板聚集率。每个样品都重复测定6次。无和有1或7a-n时这些诱导剂导致的血小板聚集率的差值就是1或7a-n对这些诱导剂导致的血小板聚集的抑制率。通过1或7a-n在300、150、80、40、20和1μM时的抑制率求出IC50值。测定结果如表1所示。
表1
Figure BSA00000373680400171
由表1可以看出S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸(1)对PAF、ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制的IC50分别为46.1μM、90.1μM和216.3μM。7a-n对PAF、ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制的IC50分别在18μM至78μM、34μM至114μM和165μM至236μM。1的3位引入氨基酸使体外抗PAF、ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集活性分别提高了0.6至2.6倍、0.8至2.6倍和0.9至1.2倍。此外，7a-n抗PAF诱导的血小板聚集活性分别是抗ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集活性的1.5至1.9倍和3.0至9.2倍。而1抗PAF诱导的血小板聚集活性分别是抗ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集活性的1.5倍和2.6倍。1的3位引入氨基酸也使体外抗PAF诱导的血小板聚集的选择性明显提高。
实验例2测定7a-n的体内抗血栓活性
将雄性SD大鼠(体重200-220g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司)灌胃给予生理盐水(3mL/kg，空白对照)、阿司匹林(30mg/kg＝167μmol/kg，阳性对照)、1(10nmol/kg，母体)或7a-n(1nmol/kg)，30分钟后，腹腔注射20％乌拉坦溶液进行麻醉，分离大鼠的右颈动脉和左颈静脉。聚乙烯管的中段(外径1.3mm)放入事先称重的6cm长的丝线并与两端的聚乙烯管(外径1.6mm)连接，以肝素生理盐水(50IU/kg)充满聚乙烯管，将一端插入左颈静脉，用注射器从另一端加入定量肝素钠抗凝(50IU/mL，1mL/kg)，然后插入右颈动脉。血流从右颈动脉流经聚乙烯管流入左颈静脉，15min后中断血流，取出丝线称重，总重量减去丝线重量即为血栓湿重，表示活性。统计各组的血栓湿重并作t检验，结果列入表2。
表2
Figure BSA00000373680400181
Figure BSA00000373680400191
表2为口服1nmol/kg 7a-n对大鼠血栓形成的影响a，其中，a表示样本数，即所用大鼠的个数，a)n＝12，血栓湿重用
Figure BSA00000373680400192
表示；b)与生理盐水及1比较比较P＜0.01；c)与生理盐水及1比较P＜0.01，与1比较P＜0.05.
由表2可以看出1nmol/kg的7a-n即显示优秀的抗血栓活性。因为这里使用的7a-n的剂量只是阿司匹林的1/167000，所以7a-n有非常强的药效。此外，1nmol/kg的7a-n的抗血栓活性比10nmol/kg的1也强很多。可见，1的3位引入氨基酸明显提高了抗血栓活性。
实验例37d的剂量依赖实验
按照实验例2的方法，选择活性较强的7d测定1nmol/kg、0.1nmol/kg和0.01nmol/kg三种剂量下的抗血栓活性，结果见表3。
表3
Figure BSA00000373680400193
口服1nmol/kg、0.1nmol/kg和0.01nmol/kg 7d的抗血栓活性a，其中，a表示样本数，即所用大鼠的个数，a)n＝12，血栓湿重用
Figure BSA00000373680400194
表示；b)与生理盐水及0.1nmol/kg的1比较P＜0.01；c)与生理盐水及0.01nmol/kg的1比较P＜0.01；d)与生理盐水比较P＞0.05.
表3的数据表明，在1nmol/kg、0.1nmol/kg剂量下7d都具有明显的抗血栓活性。在0.01nmol/kg的剂量下7d不再显示抗血栓活性。三种剂量下的活性显示明显差异，呈现剂量依赖关系。
实验例4测定7a-n的自由基清除活性
带有未成对电子的自由基，例如·NO和·OH，在顺磁共振仪上可以测得特征性信号。因为信号的强度与自由基的量成正比，所以这种测定被广泛用于自由基定量分析。当药物具有自由基清除活性时，药物加到测定体系之后自由基的信号就会减弱。当足够浓度的药物加到测定体系之后自由基的信号就会消失。即自由基的信号强度与清除剂的浓度成反比。这样一来，这种测定被广泛用于评价自由基清除剂的活性。利用这种技术，本发明测定了100、10和1μM 7a-n清除DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，Sigma)即·NO自由基的活性。测定了100、10和1μM 7a-n清除由2.5μLFeSO4·7H2O水溶液、5μL DMPO(5，5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物，1.1316mg/100mL，Sigma)和2.5μLH2O2(1％)组成的体系中的·OH自由基的活性。每个样品都重复测定5次。按照清除率＝(空白对照组峰高-给药组峰高)/空白对照峰高计算化合物在各个浓度下的清除率。由各个浓度下的清除率求IC50值。7a-n清除DPPH和·OH的活性检测结果如表4所示。
表4
Figure BSA00000373680400201
由表4可以看出，7a-n可有效地清除DPPH和·OH自由基。清除DPPH自由基的IC50值为30.2至50.2μM，清除·OH自由基的IC50值为36.2至80.3μM。7a-n的这些值落在了它们对PAF、ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制的IC50的范围之内。可见，7a-n抑制PAF、ADP和花生四烯酸诱导的血小板聚集时还可以有效地清除DPPH和·OH自由基。因而7a-n具有抗血栓和自由基清除双重作用。
由表4还可以看出，S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-羧酸(1)清除DPPH和·OH自由基的IC50值分别为58.8μM和96.0μM。前一个值是7a-n对应的IC50值的1.2至2.0倍，后一个值是7a-n对应的IC50值的1.2至2.7倍。可见，在1的3位引入氨基酸也明显提高了清除DPPH和·OH自由基的活性。

Claims (6)

1.一种通式7a-n的化合物，
Figure FDA00002998629700011
其中，AA表示以下氨基酸残基：Ala、Gly、Phe、Val、Leu、Ile、Trp、Ser、Thr、Tyr、Lys、Asp、Glu、Arg。
2.一种制备权利要求1所述通式7a-n化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）L-多巴在稀盐酸存在下与甲醛缩合，制备S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸；
（2）S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸在碱性条件下与(Boc)2O反应，制备N-Boc-S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸；
（3）N-Boc-S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸在二环己基碳二亚胺、N-羟基苯并三氮唑和N-甲基吗啉的存在下与H3PO4·Trp-OBzl反应，制备N-(N-Boc-S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸苄酯；
（4）N-(N-Boc-S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸苄酯在Pd/C和氢气作用下脱去苄酯保护基，制备N-(N-Boc-S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸；
（5）N-(N-Boc-S-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-甲酰基)色氨酸在二环己基碳二亚胺、N-羟基苯并三氮唑和N-甲基吗啉的存在下与氨基酸苄酯或Boc或NO2保护的氨基酸苄酯反应，得到通式5a-n化合物；
（6）将步骤（5）得到的通式5a-n化合物在Pd/C和氢气作用下脱去苄酯和NO2保护基，得到通式6a-n化合物；
（7）将步骤（6）得到的通式6a-n化合物脱去Boc保护基，得到通式7a-n化合物；
其中，通式5a-n化合物的结构为：
Figure FDA00002998629700021
通式6a-n化合物的结构：
Figure FDA00002998629700022
3.一种药物组合物，其特征在于，含有治疗上有效剂量的权利要求1所述的通式7a-n化合物，并含有一种或多种药学上可接受的赋型剂或者辅加剂。
4.一种药物制剂，其特征在于，是将权利要求1所述通式7a-n化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂的混合物制成片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂或口服液。
5.权利要求1所述的通式7a-n化合物在制备抗血栓药物的应用。
6.权利要求3所述的药物组合物在制备抗血栓药物的应用。
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CN112239446A (zh) * 2019-07-16 2021-01-19 首都医科大学 二羟基二甲基异色满-3-甲酰极性氨基酸,其制备,溶栓活性和应用
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CN112239449A (zh) * 2019-07-16 2021-01-19 首都医科大学 二羟基二甲基异色满-3-甲酰非极性氨基酸,其制备,溶栓活性和应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
以血栓和骨质疏松为靶的伪肽研究进展;魏欣等;《首都医科大学学报》;20050228;第26卷(第1期);33-36 *
徐艳霞等.药物设计中的伪肽先导结构的发现.《首都医科大学学报》.2010,第31卷(第5期),614-622.
药物设计中的伪肽先导结构的发现;徐艳霞等;《首都医科大学学报》;20101031;第31卷(第5期);614-622 *
魏欣等.以血栓和骨质疏松为靶的伪肽研究进展.《首都医科大学学报》.2005,第26卷(第1期),33-36.

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