CN104231046A - 具有溶栓、抗栓和自由基清除三重活性的化合物、其制备方法、组合物和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有溶栓、抗栓和自由基清除三重活性的化合物、其制备方法、组合物和应用。所述化合物为通式I代表：其中，T、Q、R1和R2如说明书中所定义。本发明的化合物同时具有溶血栓、清除自由基和血栓靶向/抗血栓三种功能。本发明还涉及包含所述化合物的药物组合物、所述化合物的制备方法以及其纳米结构。

Description

具有溶栓、抗栓和自由基清除三重活性的化合物、其制备方法、组合物和应用
技术领域
本发明涉及同时具有溶血栓、清除自由基和血栓靶向/抗血栓三种功能的新颖化合物及其制备方法和用途。本发明进一步涉及以连接臂将具有两个C1-4烷基的四氢异喹啉类化合物与溶血栓寡肽连接在一起形成的新颖二元缀合物。本发明还涉及包含所述化合物的药物组合物、所述化合物的制备方法以及其纳米结构。 
背景技术
血栓性疾病，例如中风/脑梗塞，其发病率居各种疾病之首，近年有渐增趋势，严重威胁人类健康。血栓性疾病的药物治疗是血栓治疗的重点和热点。目前临床应用的血栓药物存在许多局限性，寻找安全有效的血栓新药是药物研究的热点之一。 
根据现有的研究表明,3S-1,1-二甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸除了具有抗血小板聚集和抗血栓活性外,也具有清除自由基活性。另外，在2008年1月30日申请的公告号为CN101497651B的中国专利中公开了十种具有溶血栓活性的四氢异喹啉类化合物，包括“3S-6,7-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-酰基-Pro-Ala-Lys；3S-6,7-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-酰基-Arg-Pro-Ala-Ly；3S-6,7-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-酰基-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys；3S-6,7-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-酰基-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys；3S-6,7-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-酰基-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys；3S-2-[Pro-Ala-Lys]-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸；3S-2-[Arg-Pro-Ala-Lys]-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸；3S-2-[Ala-Arg-Pro-Ala-Lys]-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸；3S-2-[Gly-Arg-Pro-Ala-Lys]-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸；3S-2-[Gln-Arg-Pro-Ala-Lys]-1,2,3,4-四氢-6,7-二羟基异喹啉-3-羧酸”，以下简称为“具溶血栓活性的6,7-二羟基异喹啉”。然而这些6,7-二羟基异喹啉溶血栓的有效剂量较高，其抗血拴与清除自由基的作用未经披露或验证，治疗中风的疗效也仅仅显示在中风发作时，对中 风发作30分钟以上的疗效未经披露或验证。 
因此，为了能在临床上有效且安全的治疗血栓性疾病，仍需要一种同时具有溶血栓、抗血栓、与清除自由基的活性，又能有效跨越血脑屏障，以及可以在低剂量下达到前述效果的新颖化合物。 
发明内容
本发明的第一个目的是提供通式I的化合物： 
其中，T代表具有至少两个连接用基团的连接臂；Q代表具溶血栓活性肽；R1和R2代表C1-4烷基，其中R1和R2可为相同或不同。 
在本发明的一个具体实施例中，连接臂T的至少一个连接用基团为氨基，且其余连接用基团为羧基或氨基。 
在本发明的一个优选具体实施例中，连接臂可为天然氨基酸，例如L-Lys、L-Asp或L-Glu。 
在本发明的一个更优选具体实施例中，连接臂可为L-Lys。 
在本发明的优选具体实施例中，可用于本发明的具溶血栓活性肽可为含PA(Pro-Ala)序列、PAK(Pro-Ala-Lys)序列、AKP(Ala-Lys-Pro)序列或KAP(Lys-Ala-Pro)序列的寡肽或包含以PAK序列、AKP序列或KAP序列为结构单元的重复序列肽所构成的群组。 
在本发明的一个具体实施例中，具溶血栓活性寡肽可为含PA(Pro-Ala)序列、PAK序列、AKP序列或KAP序列的三肽至八肽，优选为含PA序列的三肽。在更优选的实施例中，含PA序列的三肽具有以下通式Q1或Q2： 
Pro-Ala-AA   (Q1) 
AA-Ala-Pro   (Q2) 
其中AA选自由L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu所构成的群组。 
在本发明的优选具体实施例中，R1和R2皆为甲基。 
在本发明的一个优选具体实施例中，通式I化合物中的R1和R2皆为甲基、连接臂为L-Lys、L-Asp或L-Glu，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽，例如，其可具有以下通式Ia(例如图1中的5Aa-p化合物)、Ib(例如图2中的5Ba-p化合物)、Ic(例如图3中的5Ca-p化合物)、Id(例如图4中的5Da-p化合物)、Ie(例如图5中的5Ea-p化合物)、If(例如图6中的5Fa-p化合物)、Ig(例如图7中的5Ga-p化合物)或Ih(例如图8中的5Ha-p化合物)： 
其中AA选自由L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu所构成的群组。 
本发明的第二个目的是提供一种药物组合物，其包含前述本发明的化合物，及药学上可接受的载剂。 
在本发明的药物组合物的一个优选具体实施例中，所述化合物可形成纳米球结构。 
在本发明的一个优选具体实施例中，本发明药物组合物可作为溶血栓药物，清除NO自由基药物或血栓靶向/抗血栓药物。 
在本发明的另一个优选具体实施例中，本发明药物组合物也可作为治疗中风或脑梗药物，更优选用于治疗发病超过4小时、6小时和24小时的中风或脑梗，且以连续给药方式来治疗。 
本发明的第三个目的是提供式I化合物的制备方法，包括以下步骤： 
(1)提供通式II化合物： 
其中R1和R2代表C1-4烷基，且R1和R2可为相同或不同； 
(2)提供具有至少两个连接用基团的连接臂T、以及具溶血栓活性肽Q，其中所述连接臂具有第一连接用基团与第二连接用基团； 
(3)在适当反应条件下，连接通式II化合物的羧基与所述连接臂T的第一连接用基团，形成通式IM-1化合物： 
以及 
(4)在适当反应条件下，连接所述具溶血栓活性肽Q与通式IM-1化合物，其中所述具溶血栓活性肽Q的一端与所述连接臂T的第二连接用基团相连接，形成通式I化合物。 
在本发明的一个具体实施例中，连接臂T的第一连接用基团为氨基，用以与通式II化合物的羧基进行缩合反应；且第二连接用基团为羧基或氨基，用以与具溶血栓活性肽Q的N端或C端进行连接。可用于本发明制备方法的连接臂T以及具溶血栓活性肽Q与前述用于本发明式I化合物中的定义相同。 
在优选具体实施例中，本发明制备方法中的连接臂可为L-Lys、L-Asp或L-Glu，更优选为L-Lys；具溶血栓活性肽可为含PA(Pro-Ala)序列的三肽、PAK(Pro-Ala-Lys)序列、AKP(Ala-Lys-Pro)序列或KAP(Lys-Ala-Pro)序列的寡肽,或包含以PAK序列、AKP序列或KAP序列为结构单元的重复序列肽，更优选为具有以下通式Q1或Q2的三肽： 
Pro-Ala-AA   (Q1) 
AA-Ala-Pro   (Q2) 
其中AA选自由L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu所构成的群组。 
在又一优选具体实施例中，本发明制备方法中的通式II化合物的R1和R2皆为甲基，连接臂为L-Lys、L-Asp或L-Glu，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽。在更优选具体实施例中，本发明制备方法可用以形成上述通式Ia-h化合物。 
本发明的化合物或药物组合物在大鼠体内活性试验中表明，在低剂量下即具有优异的溶血栓和抗血栓活性，并可有效地保护中风大鼠的神经功能，能够在临床上有效且安全的治疗血栓性疾病。 
附图说明
图1为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Ia的合成路线； 
图2为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Ib的合成路线； 
图3为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Ic的合成路线； 
图4为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Id的合成路线； 
图5为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Ie的合成路线； 
图6为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物If的合成路线； 
图7为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Ig的合成路线； 
图8为依据本发明的一个实施例，合成本发明化合物Ih的合成路线； 
图9为依据本发明的一个实施例，测定本发明化合物5Aa-p纳米结构的透射电镜照片。 
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果，旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点，不作为对本案可实施范围的限定。 
本发明利用连接臂将具有两个C1-4烷基的四氢异喹啉类化合物(即通式II化合物)与溶血栓寡肽连接在一起形成同时具有溶血栓、清除自由基和血栓靶向/抗血栓三种功能的新颖二元缀合物，以下简称为“本发明的新颖二元缀合物”。 
因为通式II化合物的1位引入了两个C1-4烷基和3位引入了连接臂，“本发明的新颖二元缀合物”与先前已知的“具溶血栓活性的6,7-二羟基异喹啉”相比具有四方面的优势：1)通式II化合物的1位引入的两个C1-4烷基的位阻效应使得羧肽酶和氨肽酶都不容易接近从而不容易水解“本发明的新颖二元缀合物”中的溶血栓寡肽； 2)通式II化合物的1位引入的两个C1-4烷基的疏水性贡献使得“本发明的新颖二元缀合物”能更好地跨越血脑屏障；3)通式II化合物的1位引入的两个C1-4烷基的给电子贡献使得“本发明的新颖二元缀合物”的还原能力能满足清除自由基的需要；4)通式II化合物的3位引入的连接臂使得“本发明的新颖二元缀合物”的分子可有效地缔合从而形成粒径在20-210nm之间的纳米球，更优选在20-100nm之间，这种稳定的纳米结构，有助于“本发明的新颖二元缀合物”在血液循环中不被巨噬细胞吞噬，从而可以安全地向血栓形成部位传输，最终跨越血脑屏障。综上所述，“本发明的新颖二元缀合物”能够形成纳米结构，达成跨越血脑屏障的功效；除了溶血拴与抗血栓以外，还能够有效清除OH、NO和超氧阴离子等自由基；且只需低剂量即能有效溶血栓，具有良好的临床应用前景。 
当用于本文，“连接用基团”意指能够进行缩合反应的官能基，例如羧基或氨基。 
当用于本文，“连接臂”意指具有所述连接用基团，可用以将通式II化合物与具溶血栓活性肽Q连接的分子。连接臂的至少一个连接用基团为氨基，且其余连接用基团为羧基或氨基。根据本发明，连接臂可为天然氨基酸，例如L-Lys、L-Asp或L-Glu。 
引入的连接臂使得“本发明的新颖二元缀合物”可形成不被巨噬细胞吞噬的稳定纳米球结构，其可安全地向血栓形成部位传输，最终跨越血脑屏障。尤其是以L-Lys作为连接臂，使得“本发明的新颖二元缀合物”的分子可更有效地缔合从而形成粒径在20-210nm之间的纳米球，更优选在20-100nm之间，这种稳定的纳米结构，有助于“本发明的新颖二元缀合物”在血液循环中不被巨噬细胞吞噬，从而可以安全地向血栓形成部位传输，最终跨越血脑屏障。 
当用于本文，“寡肽”是指分子量在1000道尔顿(D)以下的小分子肽，一般由3至8个氨基酸组成。 
当用于本文，“具溶血栓活性肽”意指具有增加血管通透性和溶栓作用的寡肽溶栓剂，包括P6A(ARPAK)、P6A代谢产物、及相关的衍生物。先前的研究曾经披露，在数种溶血栓寡肽(包括Ala-Arg-Pro-Ala-Lys,Gly-Arg-Pro-Ala-Lys,Gln-Arg-Arg-Pro-Ala-Lys和Pro-Ala-Lys)中，Pro-Ala-Lys既是活性好的最短的序列，也是最稳定的序列。在通式II化合物的3位通过连接臂引入Pro-Ala-AA序列三肽，可使“本发明的新颖二元缀合物”获得更好的稳定性和更强的溶血栓活性。 
举例来说，可用于本发明的含PAK序列、AKP序列或KAP序列的寡肽可为PAK、 RPAK(Arg-Pro-Ala-Lys)、ARPAK(Ala-Arg-Pro-Ala-Lys)、GRPAK(Gly-Arg-Pro-Ala-Lys)、QRPAK(Gln-Arg-Pro-Ala-Lys)、AKP、KAP、KPAK(Lys-Pro-Ala-Lys)、PAKP(Pro-Ala-Lys-Pro)、AKPAK(Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)或PAKPA(Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)。 
举例来说，可用于本发明的以PAK序列、AKP序列或KAP序列为结构单元的重复序列肽可为在中国专利申请公布号CN101190941的申请案中公布的一系列具有溶血栓活性的肽，包含以PAK为结构单元合成的重复序列肽(PAK)2、(PAK)3、(PAK)4、(PAK)5和(PAK)6；以AKP为结构单元合成的重复序列肽(AKP)2、(AKP)3、(AKP)4、(AKP)5和(AKP)6；及以KPA为结构单元合成的重复序列肽(KPA)2、(KPA)3、(KPA)4、(KPA)5和(KPA)6。 
当用于本文，“C1-4烷基”意指含有碳数为1-4的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。当本发明通式I化合物中的R1和R2皆为甲基时，做为起始物的通式II化合物是在三氟醋酸(TFA)和无水硫酸镁存在下，由3,4-二羟基-L-苯丙氨酸与丙酮发生Pictet-Spengler缩合得到的，其优点是更容易制备。 
本发明药物组合物可为任何一种临床可接受的适宜制剂。优选为注射制剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)；其中，药学上可接受的载剂可为甘露醇(mannitol)、水、林格氏注射液(Ringer’s solution)、或生理食盐水注射液(isotonic sodium chloride solution)等。 
本发明化合物的纳米球粒径在20-210nm之间，更优选是在20-100nm之间，使其能更好地跨越血脑屏障。 
稳定的纳米结构，有助于使本发明的化合物在血液循环中不被巨噬细胞吞噬，从而可以安全地向血栓形成部位传输，最终跨越血脑屏障。本发明药物组合物可作为溶血栓药物，用于治疗心肌梗塞(Mmyocardial infarction)、中风(Ischemic stroke)、静脉栓塞(Deep vein thrombosis)、肺栓塞(Pulmonary embolism)、周边动脉阻塞性疾病(Peripheral arterial occlusive disease)、静脉导管阻塞(occluded central vascular access devices)、动静脉廔管及分流管阻塞(Clotted arteriovenous fistula and shunts)、和颈动脉狭窄(Carotid Stenosis)等疾病。本发明药物组合物亦可作为清除NO自由基药物，用于治疗神经退化疾病(Neurodegenerative diseases)、心血管疾病(Cardiovascular  disease)、精神疾病、及用于治疗高地综合症(Altitude sickness)、糖尿病、类风湿性关节炎、创伤性脑损伤(Traumatic brain injury)、癌症、X染色体易裂症(Fragile X syndrome)、镰刀型红血球疾病(Sickle Cell Disease)、扁平苔藓(Lichen planus)、白斑病(Vitiligo)、或慢性疲劳症候群(Chronic fatigue syndrome)等疾病。本发明药物组合物还可作为血栓靶向/抗血栓药物，用于治疗血小板增多症(Thrombocytosis)、骨髓增生性疾病(myeloproliferative disease)、真性红细胞增多症(Polycythemia vera)、或布卡综合征(Budd-Chiari syndrome)等疾病。 
本发明药物组合物/化合物同时具有清除OH、NO和超氧阴离子等自由基、溶血栓、和抗血栓/血栓靶向的功能，因此能够在患者中风4小时之后仍然保持疗效，即不受使用tPA的3小时治疗黄金期的限制；不会造成tPA样的全身出血反应；和能够清除缺血再灌注过程中产生的大量OH、NO和超氧阴离子等自由基，使患者在治疗时脑神经组织免受损伤。因为在通式II化合物的1位引入了两个C1-4烷基和3位引入了连接臂，使“本发明的新颖二元缀合物”与先前已知的“具溶血栓活性的6,7-二羟基异喹啉”相比，在低剂量下即可显示更好的溶血栓活性，与独特的清除自由基与抗血栓活性，在稍高的剂量下则可以对4小时以上的中风显示优秀的疗效。 
在公告号为CN101497651B的中国专利中，“具溶血栓活性的6,7-二羟基异喹啉”在10nmol/kg剂量下显示有溶血栓的疗效。然而，本发明化合物在0.1nmol/kg下即显现良好的溶血栓与抗血栓效果；且在1μmol/kg、2.5μmol/kg、5μmol/kg剂量下，分别对中风4、6、24小时后有明显好的治疗作用。 
在本发明的化合物制备方法中，可先将具溶血栓活性肽Q合成好，然后再与连接臂T的第二连接用基团相连接；或者是可将具溶血栓活性肽Q中的胺基酸依预定序列逐次单个或多个与连接臂T相连接，例如，可先将具溶血栓活性肽Q中一端的第一个胺基酸与连接臂T的第二连接用基团相连接，然后将剩下的胺基酸依序逐次单个或多个接上。 
本发明制备方法可由以下更详细的说明来进一步了解。 
通式II化合物可参照以下合成路线取得： 
其中R1和R2代表C1-4烷基，且R1和R2可为相同或不同。举例来说，可先将3,4-二羟基-L-苯丙氨酸(SM-1)与通式SM-2化合物溶解在三氟醋酸(TFA)中，在无水硫酸镁存在下，将3,4-二羟基-L-苯丙氨酸与丙酮进行Pictet-Spengler缩合而得到通式II化合物。 
在一优选实施例中，本发明制备方法中的连接臂为L-Lys，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽，例如，先将通式II化合物的羧基与L-Lys的其中一个N端相接合，然后将含PA序列的三肽与L-Lys连接臂上剩下的N端或C端接合。在部分实施例中，当通式II化合物中的R1和R2皆为甲基(即3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸)，连接臂为L-Lys，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽，本发明制备方法可形成上述的化合物Ia,Ib,Ic,或Id。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Ia时，可以参照图1中公开的合成路径。 
在如图1所示的实施例中，是先将含PA序列的三肽合成好后再与L-Lys连接臂相连接，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Aa-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Lys(Boc)-OBzl，DCC，HOBt，NMM；iii)4M HCl/EA冰浴；iv)DCC，HOBt，NMM，v)乙醇，Pd/C；4MHCl/EA，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)2M NaOH。在另一个实施例中，可先将含PA序列三肽中的一个胺基酸(例如AA)与L-Lys连接臂相连接，然后再将含PA序列三肽中剩下的两个胺基酸(例如Pro-Ala)与AA连接。 
举例来说，在一个用以形成本发明化合物Ia的实施例中，本发明制备方法可包括以下步骤： 
1)在三氟醋酸(TFA)和无水硫酸镁存在下3,4-二羟基-L-苯丙氨酸与丙酮发生Pictet-Spengler缩合，生成3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基- 羧酸； 
2)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三氮唑(HOBt)存在下3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中与HCl·Lys(Boc)-OBzl缩合为3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys(Boc)-OBzl，缩合反应中随时用N-甲基吗啉(NMM)调节pH＝9； 
3)在氯化氢的乙酸乙酯溶液中将3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys(Boc)-OBzl脱除Boc得到3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys-OBzl； 
4)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro在无水四氢呋喃中与Tos·Ala-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-OBzl； 
5)在乙醇中将Boc-Pro-Ala-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala； 
6)DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala在无水四氢呋喃中与AA-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-AA-OBzl(AA选自L-Ala,Gly,L-Phe,L-Val,L-Leu,L-Ile,L-Trp,L-Ser,L-Thr,L-Tyr,L-Lys(Z),L-Pro,L-Asn和L-Gln残基)； 
7)在乙醇中将步骤6的Boc-Pro-Ala-AA-OBzl氢解为Boc-Pro-Ala-AA； 
8)在DCC和HOBt存在下3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys-OBzl在无水DMF中与步骤6的Boc-Pro-Ala-AA缩合为3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys(Boc-Pro-Ala-AA)-OBzl(AA的定义与步骤6相同)； 
9)在DCC和HOBt存在下3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys-OBzl在无水DMF中与Boc-AA(OBzl)缩合为3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys[Boc-AA(OBzl)]-OBzl(AA选自L-Asp,L-Glu残基)； 
10)在氯化氢的乙酸乙酯溶液中将3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys[Boc-AA(OBzl)]-OBzl脱除Boc得到3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys[AA(OBzl)]-OBzl(AA的定义与步骤9相同)； 
11)在DCC和HOBt存在下3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys[AA(OBzl)]-OBzl在无水DMF中与Boc-Pro-Ala缩合为3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys[Boc-Pro-Ala-AA(OBzl)]-OBzl(AA的定义与步骤9相同)； 
12)通过氢解和脱Boc将3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰 -Lys(Boc-Pro-Ala-AA)-OBzl(AA的定义与步骤6相同)和3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys[Boc-Pro-Ala-AA(OBzl)]-OBzl(AA的定义与步骤9相同)脱保护得到3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰-Lys(Pro-Ala-AA)。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Ib时，可以参照图2中公开的合成路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp,和L-Glu残基(分别为5Ba-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Lys(Boc)-OBzl，DCC，HOBt，NMM；iii)乙醇，Pd/C；iv)DCC，HOBt，NMM，v)乙醇，Pd/C；4M HCl/EA，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)4M HCl/EA，冰浴。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Ic时，可以参照图3中公开的合成路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Ca-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Boc-Lys-OBzl，DCC，HOBt，NMM；iii)4M HCl/EA冰浴；iv)DCC，HOBt，NMM，v)乙醇，Pd/C；4MHCl/EA，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)乙醇，Pd/C。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Id时，可以参照图4中公开的合成路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Da-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Boc-Lys-OBzl，DCC，HOBt，NMM；iii)乙醇，Pd/C；iv)DCC，HOBt，NMM，v)乙醇，Pd/C；4M HCl/EA，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)乙醇，Pd/C。 
在另一优选实施例中，本发明制备方法中的连接臂为L-Asp，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽，例如，先将通式II化合物的羧基与L-Asp的N端相接合，然后将含PA序列的三肽与L-Asp连接臂上剩下的其中一个C端接合。在部分实施例中，当通式II化合物中的R1和R2皆为甲基(即3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸)，连接臂为L-Asp，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽时，本发明制备方法可形成上述的化合物Ie或If。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Ie时，可以参照图5中公开的合成 路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Ea-p化合物),且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Asp(OCH3)-OBzl，DCC，HOBt，NMM；iii)乙醇，Pd/C；iv)DCC，HOBt，NMM，v)乙醇，Pd/C；2M NaOH，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)4M HCl/EA，冰浴。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物If时，可以参照图6中公开的合成路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Fa-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Asp(OBzl)-O CH3，DCC，HOBt，NMM；iii)2M NaOH，iv)DCC，HOBt，NMM，v)乙醇，Pd/C；2M NaOH，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)4M HCl/EA，冰浴。 
在又一优选实施例中，本发明制备方法中的连接臂为L-Glu，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽，例如，先将通式II化合物与L-Glu的N端相接合，然后将含PA序列的三肽与L-Glu连接臂上剩下的其中一个C端接合。在部分实施例中，当通式II化合物中的R1和R2皆为甲基(即3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸)，连接臂为L-Glu，且具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽时，本发明制备方法可形成上述的化合物Ig或Ih。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Ig时，可以参照图7中公开的合成路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Ga-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Glu(O CH3)-OBzl，DCC，HOBt，NMM；iii)乙醇，Pd/C；iv)DCC，HOBt，NMM；v)乙醇，Pd/C；2M NaOH，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)4M HCl/EA，冰浴。 
当依据本发明制备方法来形成本发明化合物Ih时，可以参照图8中公开的合成路径，其中AA选自L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu残基(分别为5Ha-p化合物)，且反应条件如下：i)Acetone，TFA，MgSO4；ii)HCl﹒Glu(O Bzl)-OCH3，DCC，HOBt，NMM；iii)乙醇，Pd/C；iv)DCC，HOBt，NMM；v)乙醇，Pd/C；2M NaOH，冰浴；vi)乙醇，Pd/C；vii)4M HCl/EA，冰浴。 
本发明的化合物或药物组合物在大鼠体内活性试验中表明，在低剂量下即具有优异的溶血栓和抗血栓活性，并可有效地保护中风大鼠的神经功能，能够在临床上有效且安全的治疗血栓性疾病。 
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。 
实施例1-68例示依据图1的制备方法，制造本发明的5Aa-p化合物。 
实施例1液相接肽反应通法 
将N端保护的氨基酸用无水四氢呋喃(THF)溶解，得到的溶液加入N-羟基苯并三氮唑(HOBt)，冰浴，缓慢加入用无水THF溶解的N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)，0℃搅拌15分钟得到反应液(I)。羧端保护的氨基酸也用无水THF溶解，用N-甲基吗啉(NMM)调pH9，然后与反应液(I)混合，用N-甲基吗啉维持pH9，室温搅拌10小时，TLC监测反应进程。原料点消失后，反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到粘稠状物质用乙酸乙酯或二氯甲烷溶解，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液洗，5％KHSO4水溶液洗，饱和NaCl水溶液洗，乙酸乙酯或二氯甲烷相加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得目标化合物。 
实施例2脱Boc通法 
将Boc保护的肽用少量的无水乙酸乙酯溶解，冰浴搅拌下加入氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)。TLC显示原料点消失后，反应溶液用水泵反复抽干，除净氯化氢气体，残留物用石油醚或无水乙醚反复研磨，得到目标化合物。 
实施例3脱苄酯基通法 
将多肽苄酯用CH3OH溶解，冰浴搅拌下缓慢滴加NaOH的水溶液(2M)，冰浴维持反应液温度在0℃，TLC显示原料消失。反应液用1M的盐酸调至中性，减压除去甲醇，继续用1M的盐酸酸化至pH2，溶液用乙酸乙酯萃取，合并的乙酸乙酯相用饱和NaCl水溶液洗涤至中性，用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物。 
实施例4脱苄氧羰基或苄酯基通法 
将具有苄氧羰基或苄酯保护的肽用适量的乙醇溶解，加入钯碳(反应物量的 10％)，通入氢气室温氢解。反应结束后过滤，减压浓缩，得到目标化合物。 
实施例5制备Boc-Pro 
将5.75g(50mmol)L-Pro用1mL水溶解，在冰浴搅拌下缓慢滴加25mL NaOH水溶液(2M)，得到溶液(I)。将13.08g(60mmol)(Boc)2O用25mL二氧六环溶解，得到溶液(II)。将溶液(II)滴加至冰浴搅拌下的溶液(I)中，冰浴下缓慢滴加NaOH水溶液(2M)调节pH9，混合物冰浴下搅拌。30分钟后，检测反应混合物的pH值，并用NaOH水溶液(2M)使pH值保持9，并用水泵抽出反应生成的气体。搅拌48小时，TLC(二氯甲烷:甲醇，20:1)监测反应完全。反应混合物减压浓缩除去二氧六环，残留物用5mL水溶解，以饱和硫酸氢钾水溶液调节pH2，将水溶液用乙酸乙酯萃取三次，合并的乙酸乙酯相用5％KHSO4洗涤3次，并以饱和NaCl水溶液洗涤至中性，分出的乙酸乙酯层加入无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物用乙酸乙酯-石油醚重结晶，得10.2g(95％)标题化合物，为无色晶体。ESI-MS(m/e):214[M-H]-. 
实施例6制备Boc-Pro-Ala-OBzl 
按照实施例1的方法，由4.3g(20.0mmol)Boc-Pro和8.45g(24.0mmol)Tos·Ala-OBzl得到5.19g(68％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):377[M+H]+. 
实施例7制备Boc-Pro-Ala 
按照实施例4的方法，由5.19g(13.8mmol)Boc-Pro-Ala-OBzl制得3.59g(91％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):285[M-H]-. 
实施例8制备Boc-Pro-Ala-Ala-OBzl 
按照实施例1的方法，由3.00g(10.49mmol)Boc-Pro-Ala和3.26g(12.03mmol)Tos·Ala-OBz得到3.04g(68％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):448[M+H]+. 
实施例9制备Boc-Pro-Ala-Ala 
按照实施例3的方法，由4.47g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Ala-OBzl得到3.21g(90％)标题化合物。ESI-MS(m/e):356[M-H]-. 
实施例10制备Boc-Pro-Ala-Val-OBzl 
按照实施例1的方法由3.00g(10.49mmol)Boc-Pro-Ala和3.58g(12.01mmol)Tos·Val-OBzl得到3.28g(69％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):476[M+H]+. 
实施例11制备Boc-Pro-Ala-Val 
按照实施例3的方法，由4.75g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Val-OBzl得到3.54g(92％) 标题化合物。ESI-MS(m/e):384[M-H]-. 
实施例12制备Boc-Pro-Ala-Trp-OBzl 
按照实施例1的方法由3.00g(10.49mmol)Boc-Pro-Ala和3.97g(12.01mmol)HCl·Trp-OBzl得到3.65g(65％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):563[M+H]+. 
实施例13制备Boc-Pro-Ala-Trp 
按照实施例3的方法，由5.62g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Trp-OBzl得到4.21g(89％)标题化合物。ESI-MS(m/e):471[M-H]-. 
实施例14制备Boc-Pro-Ala-Tyr-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和4.43g(10mmol)Tos·Tyr-OBzl得到3.73g(69％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):540[M+H]+. 
实施例15制备Boc-Pro-Ala-Tyr 
按照实施例3的方法，由5.39g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Tyr-OBzl得到4.13g(92％)标题化合物。ESI-MS(m/e):448[M-H]-. 
实施例16制备Boc-Pro-Ala-Phe-OBzl 
按照实施例1的方法由3.00g(10.0mmol)Boc-Pro-Ala和2.92g(11.0mmol)Tos·Phe-OBzl得到3.82g(66％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):524[M+H]+. 
实施例17制备Boc-Pro-Ala-Phe 
按照实施例3的方法，由5.23g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Phe-OBzl得到3.94g(91％)标题化合物。ESI-MS(m/e):432[M-H]-. 
实施例18制备Boc-Pro-Ala-Gly-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和3.37g(10mmol)Tos·Gly-OBzl得到2.90g(67％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):434[M+H]+. 
实施例19制备Boc-Pro-Ala-Gly 
按照实施例3的方法，由4.33g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Gly-OBzl得到2.98g(87％)标题化合物。ESI-MS(m/e):342[M-H]-. 
实施例20制备Boc-Pro-Ala-Ser-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和3.67g(10mmol)Tos·Ser-OBzl得到2.92g(63％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):464[M+H]+. 
实施例21制备Boc-Pro-Ala-Ser 
按照实施例3的方法，由4.63g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Ser-OBzl得到3.28g(88％)标题化合物。ESI-MS(m/e):372[M-H]-. 
实施例22制备Boc-Pro-Ala-Ile-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和3.93g(10mmol)Tos·Ile-OBzl得到3.33g(65％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):490[M+H]+. 
实施例23制备Boc-Pro-Ala-Ile 
按照实施例3的方法，由4.89g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Ile-OBzl得到3.67g(91％)标题化合物。ESI-MS(m/e):398[M-H]-. 
实施例24制备Boc-Pro-Ala-Thr-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和3.81g(10mmol)Tos·Thr-OBzl得到3.39g(71％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):478[M+H]+. 
实施例25制备Boc-Pro-Ala-Thr 
按照实施例3的方法，由4.77g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Thr-OBzl得到3.56g(91％)标题化合物。ESI-MS(m/e):386[M-H]-. 
实施例26制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和4.06g(10mmol)HCl·Lys(Z)-OBzl得到4.15g(65％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):639[M+H]+. 
实施例27制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z) 
按照实施例3的方法，由6.39g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl得到4.71g(86％)标题化合物。ESI-MS(m/e):547[M-H]-. 
实施例28制备Boc-Pro-Ala-Leu-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和3.93g(10mmol)Tos·Leu-OBzl得到3.37g(69％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):490[M+H]+. 
实施例29制备Boc-Pro-Ala-Leu 
按照实施例3的方法，由4.89g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Leu-OBzl得到3.67g(91％)标题化合物。ESI-MS(m/e):398[M-H]-. 
实施例30制备Boc-Pro-Ala-Gln-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和2.73g(10mmol)HCl·Gln-OBzl得到3.23g(63％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):505[M+H]+. 
实施例31制备Boc-Pro-Ala-Gln 
按照实施例3的方法，由5.04g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Gln-OBzl得到3.73g(90％)标题化合物。ESI-MS(m/e):413[M-H]-. 
实施例32制备Boc-Pro-Ala-Asn-OBzl 
按照实施例1的方法由3.15g(11mmol)Boc-Pro-Ala和2.59g(10mmol)HCl·Asn-OBzl得到3.04g(61％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):491[M+H]+. 
实施例33制备Boc-Pro-Ala-Asn 
按照实施例3的方法，由4.90g(10mmol)Boc-Pro-Ala-Asn-OBzl得到3.67g(92％)标题化合物。ESI-MS(m/e):399[M-H]-. 
实施例34制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸(1) 
将5.0g(25mmol)3,4-二羟基-L-苯丙氨酸用250mL丙酮溶解。向得到的溶液中加入6.0g(30mmol)无水硫酸镁。30分钟后，冰浴下加入25mL三氟醋酸(TFA)，之后室温搅拌96h，TLC(二氯甲烷/甲醇，1:1)显示原料点消失。反应液过滤，滤液减压浓缩，残留物用丙酮溶解继续减压浓缩，反复3次。残留物加200mL无水乙醚，大量无色固体析出，抽滤得到5.8g(95％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):238[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝6.61(s,1H),6.45(s,1H),3.70(dd,J＝3.9,11.4Hz,1H),2.76(dd,J＝11.7,15.3Hz,1H),2.62(m,1H),1.41(s,3H),1.32(s,3H). 
实施例35制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc)-OBzl(2) 
按照实施例1的方法，将1.19g(5.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸用10mL无水DMF溶解。向得到的溶液中加入675mg(5.00mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)。10分钟后，冰浴下加入1.20g(5.83mmol)二环 己基羰二亚胺(DCC)与5mL无水DMF的溶液，得到反应液(I)。把2.83g(5.53mmol)HCl·Lys(Boc)-OBzl溶于15mL无水DMF并搅拌30分钟，得到反应液(II)。冰浴搅拌下，将反应液(II)加入反应液(I)中，然后室温搅拌12h，并随时用N-甲基吗啉(NMM)调节pH＝9，TLC(二氯甲烷/甲醇，10:1)显示3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-羧酸消失。反应混合物过滤除二环己基脲(DCU)。滤液减压浓缩除去DMF。残留物用150mL乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用饱和NaHCO3水溶液洗三次和饱和NaCl水溶液洗三次。乙酸乙酯溶液用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残留物经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇，50:1)，得到327mg(59％)标题化合物，为浅粉色粉末。ESI-MS(m/e):556[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝8.64(s,1H),8.52(s,1H),8.14(d,J＝7.5Hz,1H),7.36(m,5H),6.74(m,1H),6.57(s,1H),6.37(s,1H),5.14(m,2H),4.30(m,1H),3.55(m,2H),3.32(m,2H),2.88(m,2H),2.57(d,J＝3.9Hz,1H),2.27(m,1H),2.15(s,1H),1.69(m,4H),1.36(s,9H),1.33(s,3H),1.25(s,3H). 
实施例36制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl(3A) 
按照实施例2通法，从1.50g(2.73mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc)-OBzl得到1.01g(82％)标题化合物，为浅粉色固体，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/e)：456[M+H]+. 
实施例37制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Ala)-OBzl(4Aa) 
按照实施例1的方法，从482mg(1.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和424mg(1.20mmol)Boc-Pro-Ala-Ala得到302mg(38％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):795[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.15(s,1H),8.89(s,2H),8.11(m,1H),7.94(m,1H),7.85(m,1H),7.76(m,1H),7.44-7.31(m,5H),6.66(s,1H),6.47(s,1H),5.14(m,2H),4.25(m,1H),4.23(m,3H),4.12(m,1H),3.66(m,1H),3.12(m,2H),2.96(m,2H),2.89-2.91(m,2H),2.11-2.08(m,1H),1.77(m,5H),1.59(s,3H),1.47-1.27(m,17H),1.27-1.08(m,7H). 
实施例38制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Val)-OBzl(4Ab) 
按照实施例1的方法，从964mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和924mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Val得到604mg(37％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):823[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.18(s,1H),8.93(m,2H),8.05(m,2H),7.42(m,5H),6.66(s,1H),6.47(s，1H),5.16(s,1H),4.37-4.28(m,3H),4.11(m,3H),3.06-2.89(m,5H),2.75(m,6H),2.04(s,1H),1.91(m,1H),1.79(m,5H),1.62(s,3H),1.49(s,3H),1.39(m,7H),1.32(m,3H),1.21(m,4H),0.82(m,6H). 
实施例39制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Trp)-OBzl(4Ac) 
按照实施例1的方法，从482mg(1.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和567mg(1.20mmol)Boc-Pro-Ala-Trp得到318mg(35％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):910[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.51(s,1H),9.26(m,2H),8.98(m,2H),8.05(d,1H,J＝7.2Hz),7.94(m,1H),7.78(d,1H,J＝7.2Hz),7.54(m,1H),7.38(m,5H),7.31(d,1H,J＝4.5Hz),7.24(m,1H),7.11(t,1H,J＝4.5Hz),7.05(t,1H,J＝4.5Hz),6.67(s,1H),6.52(s,1H),5.15(s,2H),4.44(m,1H),4.35(m,2H),4.07(m,2H),3.23(m,1H),3.17(m,5H),2.86(m,1H),1.97(m,2H),1.76-1.70(m,8H),1.31(s,3H),1.24(s,3H),1.93-1.79(m,9H),1.16(m,4H). 
实施例40制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Tyr)-OBzl(4Ad) 
按照实施例1的方法，从964mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和1077mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Tyr得到549mg(31％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):887[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.17(m,1H),9.02(m,1H),8.73(m,1H),8.51(m,1H),8.09(m,1H),7.97(m,1H),7.73(m,1H),7.40(m,5H),6.96(m,2H),6.61(m,3H),6.48(s,1H),5.16(s,2H),4.23(m,2H),4.07(m,2H),3.88(m,1H),3.01(m,3H),2.74(m,3H),2.02(m,2H),1.74(m,5H),1.46(s,3H),1.36-1.24(m,16H),1.16(m,3H),0.87(m,1H). 
实施例41制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Pro)-OBzl(4Ae) 
按照实施例1的方法，从964mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和957mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Pro得到607mg(37％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):821[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.54(m,1H),9.23(s,1H),9.11(m,1H),8.96(s,1H),8.05(m,1H),7.85(m,1H),7.40(m,5H),6.67(s,1H),6.48(s,1H),5.16(m,2H),4.54(m,1H),4.38(m,2H),4.24(m,1H),4.10(m,2H),3.55(m,1H),3.17(m,3H),3.05(m,3H),2.94(m,1H),1.96(m,2H),1.79(m,7H),1.64(s,3H),1.51(s,3H),1.38-1.32(m,13H),1.20(m,4H). 
实施例42制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Phe)-OBzl(4Af) 
按照实施例1的方法，从964mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和1039mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Phe得到626mg(36％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):871[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.24(s,1H),9.09(m,2H),8.96(s,1H),8.01-7.93(m,3H),7.38(m,5H),7.21(m,5H),6.67(s,1H),6.49(s,1H),5.17(s,2H),4.38(m,3H),4.09(m,2H),3.28(m,4H),2.88(m,2H),2.79(m,5H),1.99(m,2H),1.74(m,8H),1.50(m,3H),1.32(m,14H),1.16(m,4H). 
实施例43制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Gly)-OBzl(4Ag) 
按照实施例1的方法，从482mg(1.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和412mg(1.20mmol)Boc-Pro-Ala-Gly得到304mg(39％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):781[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.39(s,1H),8.97(m,2H),8.24-8.14(m,2H),7.79(m,1H),7.41(m,5H),6.66(s,1H),6.47(s,1H),5.16(s,2H),4.35(m,2H),4.21(m,2H),3.71-3.66(m,2H),3.03(m,3H),2.89-2.76(m,1H),2.07(m,1H),1.81-1.77(m,6H),1.62(s,3H),1.50(s,3H),1.38(m,7H),1.32(m,8H),1.23(m,4H). 
实施例44制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Ser)-OBzl(4Ah) 
按照实施例1的方法，从965mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和896mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Ser得到454mg (29％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):811[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.48(m,1H),9.23(s,2H),8.96(m,1H),8.19(m,1H),7.40(m,5H),6.67(s,1H),6.48(s,1H),5.16(m,2H),4.92(m,1H),4.31(m,3H),4.13(m,3H),3.53(m,2H),3.16(m,3H),3.04-2.81(m,4H),2.08(m,1H),1.78(m,5H),1.63(s,3H),1.51(s,3H),1.39-1.32(m,14H),1.22(m,3H). 
实施例45制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Ile)-OBzl(4Ai) 
按照实施例1的方法，从482mg(1.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和479mg(1.20mmol)Boc-Pro-Ala-Ile得到310mg(37％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):837[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝8.84-8.68(m,2H),8.37(s,1H),7.99-7.87(m,3H),7.39(m,4H),6.60(s,1H),6.39(s,1H),5.14(m,2H),4.32(m,2H),4.17(m,2H),3.65(m,1H),3.54(m,1H),3.17(m,1H),2.96(m,2H),2.68(m,3H),2.11(m,1H),1.74-1.68(m,7H),1.31-1.21(m,11H),1.17(m,5H),1.08(m,1H),0.82(m,8H). 
实施例46制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Thr)-OBzl(4Aj) 
按照实施例1的方法，从964mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和929mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Thr得到495mg(30％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):825[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.18(s,1H),8.91(s,2H),8.27(m,1H),7.64(m,1H),7.41(m,6H),6.65(s,1H),6.48(s,1H),5.16(s,2H),4.35(m,3H),4.23(m,3H),3.07(m,3H),2.72(m,1H),1.83-1.76(m,5H),1.61(s,3H),1.48(s,3H),1.38-1.32(m,14H),1.23(m,3H),1.11(m,3H). 
实施例47制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Boc-Pro-Ala-Lys(Z)]-OBzl(4Ak) 
按照实施例1的方法，从964mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和1209mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)得到750mg(30％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):987[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝8.68(s,1H),8.56(s,1H),8.16(m,1H),8.04(m,1H),7.78(m,1H), 7.68(m,1H),7.34(m,10H),6.58(s,1H),6.37(s,1H),5.14(s,2H),4.98(s,2H),4.29(m,2H),4.09(m,3H),3.56(m,3H),3.01(m,4H),2.62(m,1H),2.40(m,1H),2.27(m,1H),2.15(s,1H),2.06(m,1H),2.01(s,1H),1.78(m,6H),1.38-1.31(m,18H),1.17(m,10H). 
实施例48制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Leu)-OBzl(4Al) 
按照实施例1的方法，从482mg(1.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和479mg(1.20mmol)Boc-Pro-Ala-Leu得到301mg(36％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):837[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝8.69-8.57(m,2H),8.18-8.06(m,2H),7.85(m,1H),7.69(m,5H),6.58(s,1H),6.37(s,1H),5.14(m,2H),4.25-4.11(m,5H),3.63-3.55(m,1H),3.17(s,2H),3.04-2.98(m,2H),2.64-2.59(m,1H),2.15-2.07(m,1H),1.78-1.67(m,5H),1.36(m,14H),1.28(m,4H),1.19(m,6H). 
实施例49制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Gln)-OBzl(4Am) 
按照实施例1的方法，从965mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和994mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Gln得到665mg(39％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):852[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.3-9.1(m,4H),8.16(m,1H),7.96(m,2H),7.83(m,1H),7.44-7.38(m,7H),6.89(s,1H),6.86(s,1H),6.56(s,1H),5.17(s,2H),4.4-4.1(m,6H),3.17(m,4H),2.98-2.83(m,2H),2.08(m,4H),1.91(m,1H),1.64(s,3H),1.51(s,3H),1.38-1.31(m,17H),1.22-1.20(m,4H). 
实施例50制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Asn)-OBzl(4An) 
按照实施例1的方法，从965mg(2.01mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl和960mg(2.40mmol)Boc-Pro-Ala-Asn得到636mg(38％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):838[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.26(s,1H),9.04(m,2H),8.31(m,1H),8.03(m,1H),7.57(m,1H),7.44(m,6H),6.90(m,1H),6.68(s,1H),6.49(s,1H),5.16(s,2H),4.45-4.40(m,3H),4.14(m,2H),3.42(m,5H),3.17(m,3H),2.89-2.82(m,1H),2.09(m,1H),1.90(m,1H), 1.79-1.74(m,6H),1.64(s,3H),1.52(s,3H),1.39-1.32(m,15H),1.22(m,3H). 
实施例51制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Boc-Pro-Ala-Asp(OBzl)]-OBzl(4Ao) 
按照实施例1的方法，从870mg(1.24mmol)化合物3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Asp(OBzl)]-OBzl和429mg(2.48mmol)Boc-Pro-Ala得到403mg(35％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):929[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝8.32(m,1H),8.10(m,1H),7.96(m,1H),7.36(m,10H),6.60(s,1H),6.39(s,1H),5.14(s,2H),5.06(s,2H),4.57(m,1H),4.32(m,1H),4.23(m,1H),4.11(m,2H),3.74(m,1H),3.55(m,1H),3.34-3.28(m,2H),3.00(m,2H),2.89(s,1H),2.81(m,1H),2.73(m,2H),2.58(m,1H),2.16-2.06(m,1H),1.91(s,2H),1.75(m,5H),1.40-1.32(m,22H),1.17(m,3H). 
实施例52制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Boc-Pro-Ala-Glu(OBzl)]-OBzl(4Ap) 
按照实施例1的方法，从530mg(0.75mmol)化合物3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Glu(OBzl)]-OBzl和256mg(0.90mmol)Boc-Pro-Ala得到269mg(38％)标题化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e):943[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝9.26(s,1H),9.10(m,1H),8.97(s,1H),8.79-7.88(m,3H),7.36(m,10H),6.67(s,1H),6.48(s,1H),5.14(s,2H),5.06(s,2H),4.35(m,1H),4.23(m,2H),4.10(m,1H),3.83(s,1H),3.34(m,5H),2.83(m,1H),2.72(m,1H),2.34(m,2H),1.78(m,10H),1.51(s,3H),1.36-1.31(m,14H),1.21(m,3H). 
实施例53制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Ala)(5Aa) 
先按照实施例4的方法，从300mg(0.38mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Ala)-OBzl脱苄酯。再按照实施例2的方法，脱Boc，得到266mg(78％)标题化合物，为无色粉末。Mp207.2-209.4℃； (c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):630[M-H]—；IR(KBr):3221.1,3057.2,2983.8,2943.3,2362.8,1660.7,1546.9,1533.4,1448.5,1379.1,1240.2,1049.3,867.9,659.7； 1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.79(s,1H),6.68(s,1H),4.36-4.29(m,5H),3.32-3.12(m,6H),1.89(m,4H),1.70(s,3H),1.57(s,3H),1.48(m,2H),1.33(m,9H). 
实施例54制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Val)(5Ab) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.36mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Val)-OBzl得到187mg(81％)标题化合物，为无色粉末。Mp195.8-197.9℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):630[M-H]-；IR(KBr):3221.1,3062.9,2970.4,1658.8,1546.9,1533.4,1450.5,1384.9,1240.2,1047.4,991.41,866.04,671.2；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝8.13(m,1H),6.79(s,1H),6.68(s,1H),4.36-4.29(m,4H),3.89(m,1H),3.36(m,2H),3.23(m,2H),3.08(m,2H),1.89(m,4H),1.70(s,3H),1.57(s,3H),1.48(m,1H),1.37(m,6H),1.32(m,2H),0.89(m,6H). 
实施例55制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Trp)(5Ac) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.33mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Trp)-OBzl得到180mg(76％)标题化合物，为浅粉色粉末。Mp205.1-207.9℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):718[M-H]-；IR(KBr):3221.2,3059.1,2981.9,2941.4,1660.7,1533.4,1448.5,1388.7,1240.2,867.9,748.4,630.7；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝7.50(d,J＝7.8Hz,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(t,J＝7.2Hz,1H),7.05(t,J＝7.2Hz,1H),6.74(s,1H),6.62(s,1H),4.38(m,1H),4.35(m,1H),4.27(m,1H),4.18(m,2H),3.24(m,2H),3.16(m,3H),3.06(m,3H),1.83(m,1H),1.68(m,4H),1.47(m,3H),1.37(m,2H),1.25(m,3H),1.21(m,3H). 
实施例56制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Tyr)(5Ad) 
按照实施例53的方法，从303mg(0.34mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Tyr)-OBzl得到174mg(74％)标题化合物，为浅黄色粉末。Mp200.5-202.8℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):695[M-H]-；IR(KBr):3215.3,3055.2,2983.8,2947.2,1658.8,1548.8,1523.8,1448.5,1384.9,1238.3,1163.1,657.7；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.98(m,2H),6.92(m,3H),6.65(s,1H),4.34-4.26(m,6H),3.27(m,2H),3.15(m,1H),3.08(m,1H),2.96(m,2H), 2.85(m,12H),1.89(m,5H),1.70(s,3H),1.51(m,3H),1.33(m,3H),1.25(m,4H). 
实施例57制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Pro)(5Ae) 
按照实施例53的方法，从301mg(0.36mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Pro)-OBzl得到179mg(78％)标题化合物，为浅黄色粉末。Mp204.8-205.4℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):629[M-H]-；IR(KBr):3244.3,3070.7,2980.1,2947.2,1662.6,1639.5,1554.6,1450.5,1379.1,1246.1,1201.6,1047.3,995.3,871.8,657.7；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.78(s,1H),6.68(s,1H),4.57(m,1H),4.39-4.33(m,5H),3.74(m,1H),3.60(m,1H),3.26(m,2H),3.17(m,1H),3.04(m,2H),2.19(m,3H),1.85(m,5H),1.69(m,4H),1.54(m,6H),1.36(m,6H). 
实施例58制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Phe)(5Af) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.34mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Phe)-OBzl得到183mg(78％)标题化合物，为浅黄色粉末。Mp175.8-178.2℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):679[M-H]-；IR(KBr):3215.3,3049.5,2949.2,1662.6,1539.2,1454.3,1394.5；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝7.26(m,3H),7.14(m,2H),6.77(s,1H),6.65(s,1H),4.39-4.33(m,3H),4.03(m,3H),3.42(m,1H),3.37(m,1H),3..29(m,2H),3.17(m,1H),3.09(m,4H),2.95(m,3H),1.91(m,5H),1.74(s,3H),1.53(s,3H),1.33(m,6H). 
实施例59制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Gly)(5Ag) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.38mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Gly)-OBzl得到193mg(85％)标题化合物，为无色粉末。Mp196.4-199.5℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):588[M-H]-；IR(KBr):3223.1,3062.9,2983.8,1630.2,1552.7,1537.3,1448.5,1382.9,1244.1,1049.3,1006.8,869.9,661.6；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.77(s,1H),6.67(s,1H),4.34-4.28(m,4H),3.78(s,2H),3.30(m,2H),3.15(m,3H),1.92(m,3H),1.70(s,3H),1.55(s,3H),1.33(m,6H). 
实施例60制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Ser)(5Ah) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.37mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Ser)-OBzl得到181mg(79％)标题化合物，为浅黄色粉末。Mp195.6-197.4℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):619[M-H]-；IR(KBr):3228.8,3061.0,2981.9,2943.4,1732.1,1662.6,1550.71533.3,1448.5,1384.9,1244.1,1159.2,1049.3,869.9,657.7,518.8；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.78(s,1H),6.67(s,1H),4.41-4.26(m,5H),3.74(m,2H),3.25-3.13(m,6H),1.91(m,3H),1.69(s,3H),1.55(m,3H),1.46(m,2H),1.37(m,6H). 
实施例61制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Ile)(5Ai) 
按照实施例53的方法，从302mg(0.36mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Ile)-OBzl得到181mg(78％)标题化合物，为无色粉末。Mp175.6-178.4℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):645[M-H]-；IR(KBr):3224.9,3057.2,2970.4,2758.2,2497.8,2360.87,1656.9,1535.3,1454.3,1388.7,1244.1,1159.1,1037.7,871.8,659.6；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.79(s,1H),6.68(s,1H),4.42(m,1H),4.35(m,1H),4.29(m,1H),4.18(m,1H),3.92(d,J＝1.2Hz,1H),3.31(m,2H),3.19(m,2H),3.10(m,3H),2.34(m,1H),2.12(m,1H),1.74(m,4H),1.57(m,3H),1.36(m,6H),1.21(m,2H),0.84(m,9H). 
实施例62制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Thr)(5Aj) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.36mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Thr)-OBzl得到175mg(76％)标题化合物，为浅黄色粉末。Mp194.8-197.5℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):633[M-H]-；IR(KBr):3236.5,3066.8,2933.7,1660.7,1548.8,1533.4,1450.8,1381.0,1240.2,1157.3,1049.3,869.9,669.3；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.81(s,1H),6.71(s,1H),4.43-4.31(m,4H),4.11(m,2H),3.33(m,2H),3.24(m,1H),3.24(m,2H),3.21(m,1H),3.18(m,1H),3.09(m,1H),1.94(m,3H),1.74(s,3H),1.58(s,3H),1.51(m,2H),1.23(m,1H),1.19(m,1H),1.14(m,3H). 
实施例63制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Lys)(5Ak) 
按照实施例53的方法，从305mg(0.31mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Boc-Pro-Ala-LysI(Z)]-OBzl得到152mg(75％)标题化合物，为深黄色粉末。Mp185.6-188.1℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):660[M-H]-；IR(KBr):3853.7,3738.1,2956.8,2349.3,2017.5,1668.4,1537.3,1400.3,1257.6,1043.5,871.8,671.2.；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.80(s,1H),6.69(s,1H),4.45(m,1H),4.35(m,1H),4.29(m,1H),4.18(m,2H),3.73(m,2H),3.22-3.13(m,8H),3.09(m,4H),2.95(m,1H),1.93(m,6H),1.74(m,9H),1.58(m,6H),1.47(m,2H),1.32-1.27(m,16H),1.18(m,2H). 
实施例64制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Leu)(5Al) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.36mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Leu)-OBzl得到178mg(77％)标题化合物，为无色粉末。Mp189.7-192.7℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):645[M-H]-；IR(KBr):3224.9,3064.9,2956.8,1660.7,1548.8,1535.3,1448.5,1381.0,1242.2,1049.3,997.2,869.9,669.3；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.78(s,1H),6.68(s,1H),4.38-4.29(m,3H),4.13(m,2H),3.31(m,3H),3.21(m,1H),3.08(m,2H),1.89(m,4H),1.70(s,3H),1.57(m,4H),1.46(m,5H),1.32(m,6H),1.32(m,1H),1.16(m,6H). 
实施例65制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Gln)(5Am) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.35mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Gln)-OBzl得到184mg(79％)标题化合物，为无色粉末。Mp181.3-183.3℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):660[M-H]-；IR(KBr):3213.4,3059.1,2981.9,2943.4,2362.8,1739.8,1662.6,1548.8,1537.3,1450.5,1375.3,1244.1,1047.2,871.8,659.7；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.80(s,1H),6.69(s,1H),4.40-4.29(m,5H),3.33(m,3H),3.17(m,3H),1.90(m,2H),1.69(s,3H),1.55(s,3H),1.43(m,2H),1.31(m,8H). 
实施例66制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基- Lys(Pro-Ala-Asn)(5An) 
按照实施例53的方法，从302mg(0.36mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Boc-Pro-Ala-Asn)-OBzl得到174mg(78％)标题化合物，为无色粉末。Mp202.5-204.7℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):646[M-H]-；IR(KBr):3207.6,3059.1,2943.3,1674.2,1537.3,1448.5,1381.0,1247.9,642.3； 1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.78(s,1H),6.67(s,1H),4.48(m,1H),4.42-4.29(m,4H),3.29(m,2H),3.16(m,4H),2.65(m,2H),1.90(m,2H),1.69(s,3H),1.55(s,3H),1.31(m,6H). 
实施例67制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Asp)(5Ao) 
按照实施例53的方法，从300mg(0.32mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-[Boc-Pro-Ala-Asp(OBzl)]-OBzl得到174mg(83％)标题化合物，为无色粉末。Mp207.1-209.7℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):647[M-H]-；IR(KBr):3383.3,3061.0,2360.9,1670.3,1550.8,1448.5,1400.3,1246.3,873.8,611.4；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.76(s,1H),6.66(s,1H),4.52(m,1H),4.37-4.281(m,4H),3.27(m,4H),3.13(m,1H),3.05(m,1H),2.76(m,2H),1.97(m,1H),1.90(m,1H),1.71(s,3H),1.55(s,3H),1.43(m,2H),1.31(m,6H). 
实施例68制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(Pro-Ala-Glu)(5Ap) 
按照实施例53的方法，从301mg(0.32mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys[Boc-Pro-Ala-Glu(OBzl)]-OBzl得到173mg(82％)标题化合物，为无色粉末。Mp194.7-196.1℃；(c＝0.25,CH3OH)；ESI-MS(m/e):661[M-H]-；IR(KBr):3053.3,2945.3,2370.5,2320.4,1651.1,1546.9,1533.4,1448.5,1388.8,1240.2,1165.0,1045.4,644.2；1HNMR(300MHz,D2O)δ/ppm＝6.78(s,1H),6.67(s,1H),4.42-4.28(m,5H),3.29(m,2H),3.13(m,3H),2.99(m,1H),2.38(m,2H),2.29(m,1H),1.90(m,5H),1.69(s,3H),1.55(s,3H),1.31(m,6H). 
对照例1制备3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys(6) 
按照实施例4的方法，从1.00g(2.03mmol)3S-6,7-二羟基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酰基-Lys-OBzl得到620mg(85％)标题化合物，为浅粉色固体。此化 合物6做为对照组用于以下实验例中。ESI-MS(m/e)：363[M-H]-. 
实验例1评价本发明化合物5Aa-p静脉给药的溶栓活性 
1)评价方法 
将200–220g雄性SD大鼠用20％乌拉坦溶液(6mL/kg,i.p.)进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，在远心端插管，松开动脉夹，放出约1mL动脉血并装在1mL的EP管中。往垂直固定的玻璃管(长15mm，内径2.5mm，外径5.0mm，管底用胶塞密封)中注入0.1mL大鼠动脉血液，往管内迅速插入一支不锈钢质料的血栓固定螺栓。该血栓固定螺旋用直径为0.2mm的不锈钢丝绕成，螺旋部分长12mm，含15个螺圈，螺圈的直径为1.0mm，托柄与螺旋相连，长7.0mm，呈问号型。血液凝固40min后，打开玻璃管底部的胶塞，用镊子固定血栓固定螺旋的托柄，从玻璃管中取出被血栓包裹的血栓固定螺旋，精确称重。 
旁路插管由3段构成，中段为聚乙烯胶管，长60mm，内径3.5mm，两端为相同的聚乙烯管，长100mm，内径1mm，外径2mm，该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径1mm，另一端的外部套一段长7mm，外径3.5mm的聚乙烯管(加粗,用于插入中段的聚乙烯胶管内)。3段管的内壁均硅烷化。将血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯胶管内，胶管的两端分别与两根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU/kg)备用。 
分离大鼠的左颈外静脉，近心端和远心端分别穿入手术线，结扎远心端，在暴露的左颈外静脉上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的尖管由斜口插入左颈外静脉开口的近心端，同时远离旁路管中段(含精确称重的血栓固定螺旋)内血栓固定螺旋的托柄。用注射器通过另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水(50IU/kg)，此时注射器不撤离聚乙烯管，用止血钳夹住注射器与聚乙烯管之间的软管。在右颈总动脉的近心端用动脉夹止血，在离动脉夹不远处将右颈总动脉小心地剪一斜口。从聚乙烯管的尖部拔出注射器，将聚乙烯管的尖部插入动脉斜口的近心端。旁路管道的两端都用4号手术缝线与动静脉固定。 
用头皮针将生理盐水，尿激酶的生理盐水溶液或不同浓度化合物的生理盐水溶液通过旁路管的中段(含精确称重的血栓固定螺旋)，刺入远离血栓固定螺旋的近静脉处，打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠动静脉旁路溶栓模 型，缓慢将注射器中的液体注入到血液中(约6min)，使生理盐水，尿激酶或本发明的化合物通过血液循环，按静脉—心脏—动脉的顺序作用到血栓上。从开始注射时计时，1h后从旁路管道中取出血栓固定螺旋，精确称重。计算每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋给药前后的质量差，统计并评价化合物的体内溶栓活性。血栓减重用均值和标准差()表示。 
2)给药方法和剂量 
静脉注射给药。空白对照为生理盐水，给药剂量为3mL/kg。阳性对照为尿激酶，剂量为20000U/kg，相当于1.68mg/kg。本发明化合物5Aa-p的剂量为0.1nmol/kg。 
3)评价结果 
溶栓活性用血栓减重()表示，结果列入表1。数据表明，在0.1nmol/kg剂量下静脉给药化合物5Aa-p能够有效地溶解血栓(与生理盐水比p<0.01)，其中化合物5Aa、5Af、5Ag、5Ak、5Ao的溶栓活性与剂量为20000U/kg的尿激酶相当。在溶栓活性较好的5Aa、5Ad、5Af、5Ag、5Ak中5Ak的溶栓活性最强，因而进一步评价剂量依赖关系。 
表1本发明化合物5Aa-p静脉给药的溶栓活性 
n＝10；a)与生理盐水比p<0.01；b)与生理盐水比p<0.01,与化合物6、PAK及6+PAK比p<0.05，与尿激酶比p>0.05。 
实验例2评价本发明化合物5Ak静脉给药溶血栓活性的量效关系 
按照实验例1的方法静脉注射给药。空白对照为生理盐水，给药剂量为3mL/kg。阳性对照为尿激酶，给药剂量为20000U/kg，相当于1.68mg/kg。5Ak选取0.1nmol/kg(高)，0.01nmol/kg(中)和0.001nmol/kg(低)三个剂量。结果列入表2。数据表明5Ak表现出明显的量效关系。 
表2本发明化合物5Ak溶栓的量效关系 
n＝10；a)与生理盐水及0.01nmol/kg5Ak比p<0.01；b)与生理盐水及0.001nmol/kg5Ak比p<0.01；c)与生理盐水比p>0.05。 
实验例3评价本发明化合物5Aa-p静脉给药的抗栓活性 
1)评价方法 
插管由3段构成，中段长80mm，内径3.5mm，两端为相同的聚乙烯管，长100mm，内径1mm，外径2mm，该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，3段管的内壁均硅烷化。将提前称重的长60mm的丝线放入中段聚乙烯粗管内，粗管的两端分别与两根聚乙烯细管的未拉细端相套(其中一段将丝线压住0.5mm固定)。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU/kg)备用。 
将200-220g雄性SD大鼠用20％乌拉坦溶液(6mL/kg，i.p.)进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离出大鼠的左颈外静脉，近心端和远心端分别穿入手术线，结扎远心端，在暴露的左颈外静脉上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的未压线端尖管由斜口插入左颈外静脉开口的近心端，用注射器通过另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水(50IU/kg)，然后换注射器，由同样方法推入准确量的药物，此时注射器不撤离聚乙烯管，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，结扎远心端，在离动脉夹不远处将右颈总动脉小心地剪一斜口。从聚乙烯管的尖部拔出注射器，将聚乙烯管的尖部插入动脉斜口的近心端。旁路管道的两端都用4号手术缝线与动静脉固定。打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠动静脉旁路抗栓模型。从开始循环时计时，15min后从旁路管道中取出挂有血栓的丝线，精确称重，丝线前后的质量差即为血栓湿重，统计并评价化合物的体内抗栓活性。血栓湿重用均值和标准差()表示。 
2)给药方法和剂量 
静脉给药。空白对照为生理盐水，给药剂量为1mL/kg。阳性对照为阿司匹林，给药剂量为9mg/kg。本发明化合物5Aa-p的剂量为0.1nmol/kg。 
3)结果 
抗栓活性用血栓湿重()表示，结果列入表3。数据表明，在0.1nmol/kg剂量下静脉给药化合物5Ak能够有效地抑制血栓形成(与生理盐水比p<0.001)，其中活性好的5Ak进一步评价剂量依赖关系。 
表3本发明化合物5Aa-p静脉给药体内抗栓实验 
n＝10；5Aa-p(i.v.)：0.1nmol/kg；Aspirin：9mg/kg 
a)与NS比，p<0.001。 
实验例4评价本发明化合物5Ak静脉给药抗血栓活性的量效关系 
1)评价方法 
同实验例3的方法。 
2)给药方法和剂量 
静脉给药。空白对照为生理盐水，给药剂量为3mL/kg。阳性对照为阿司匹林，给药剂量为9mg/kg。5Ak选取0.1nmol/kg(高)，0.01nmol/kg(中)和0.001nmol/kg(低)三个剂量。 
3)结果 
结果列入表4，5Ak表现出明显的量效关系。 
表4本发明化合物5Ak体内抗栓实验量效关系 
n＝10；a)与生理盐水及0.01nmol/kg5Ak比p<0.01；b)与生理盐水及0.001nmol/kg5Ak比p<0.01；c)与生理盐水比p>0.05。 
实验例5评价本发明化合物5Ak对中风大鼠的治疗作用 
为了考察化合物5Aa-p对中风大鼠的治疗作用，选择化合物5Ak为代表，按照以下方法考察对中风大鼠的治疗作用。 
1)评价方法 
SD雄性大鼠(280-300g)随机分为UK阳性对照组，剂量为20000IU/kg。生理盐水空白对照组，化合物对照组PAK剂量为5μmol/kg和化合物5Ak组，剂量为1μmol/kg(高)，0.1μmol/kg(中)和0.01μmol/kg(低)。大鼠用10％水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉，从颈部正中略偏右部竖直开约2cm长切口，沿胸锁乳突肌内侧缘分离出右颈总动脉(CCA)，颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，在颈外动脉剪一小口，结扎颈外动脉远心端，松开颈总动脉近心端的动脉夹，取10μL血，取血之后再用无创动脉夹夹闭颈总动脉近心端。将取得的10μL血装入1mL EP管中，在常温下放置30分钟使血液凝固，然后转移至-20℃冰箱中放置1小时，使血液凝块结实。1小时结束后取出血液凝块，加入1mL生理盐水用钢铲把血液凝块捣成大小均一的细小血栓，然后把细小血栓混悬液转移至1mL注射器内备用。松开大鼠颈内动脉夹的同时，将上述1mL注射器内的血栓混悬液缓慢从大鼠颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大鼠的大脑，然后结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处得动脉夹，恢复血流。然后分离大鼠颈总静脉，注入UK剂量为20000IU/kg，生理盐水或化合物5Ak组，剂量为1μmol/kg。结扎静脉，伤口处滴加3滴青霉素，缝合伤口，等待动物苏醒。 
大鼠苏醒24小时后按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征、1分表示未损伤侧前肢不能伸展、2分表示向未损伤侧行走、3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走、4分表示意识障碍无自主行走、5分表示死亡。将以上各组评分结果进行统计学比较，并作t检验。 
大鼠苏醒24小时Zealonga方法评定神经功能缺损程度后，用乌拉坦麻醉后迅速断头取脑，将脑组织置于-20℃冰箱2小时后，从前额极开始行约2mm冠状连续切片，共5片，然后置于2％TTC溶液中37℃避光孵育30min，并观察脑切片的颜色变化，正常组织被TTC染成红色，而缺血组织呈白色。然后用数码相机照相，经图像计软件处理，计算冠状切片中梗死体积和正常组织的面积，统计各组的梗死体积百分比值，并做t检验。 
2)评价结果 
大鼠苏醒后Zealonga方法评分数据见表5，大鼠大脑梗死体积百分比数据见表6。 
表5大鼠苏醒后24h Zealonga方法评分 
n＝9；a)与生理盐水及0.1μmol/kg5Ak比p<0.05；b)与生理盐水及0.01μmol/kg5Ak比p<0.05；c)与生理盐水及5μmol/kg PAK比p>0.05。 
表6大鼠大脑梗死体积百分比(％) 
n＝7；a)与生理盐水比较p<0.01，与0.1μmol/kg5Ak比p<0.05，与尿激酶比p>0.05；b)与生理盐水及0.1μmol/kg5Ak比p<0.05；c)与生理盐水比p>0.05。 
表5和表6的数据说明，化合物5Ak能够有效地防止脑缺血的大鼠出现运动障碍和大脑组织梗死。5Ak的这种功能具有剂量依赖关系。 
实验例6评价本发明化合物5Aa-p清除自由基的活性 
1)清除羟自由基活性 
11.316mg DMPO(二甲基吡啶N-氧化物，Sigma)溶解于1mL纯净水中得到浓度为0.1M的DMPO溶液，2.78g FeSO4·7H2O溶解于1mL的纯净水制浓度为10mM的溶液。30％医用H2O2稀释到0.2％。 
先测2.5μL FeSO4·7H2O溶液+2.5μL DMPO溶液+5μL H2O2溶液+5μL水的OH信号峰的第一个峰的高度，重复6次，该峰的高度就是已知的OH信号峰的高度。再测2.5μL FeSO4·7H2O溶液+2.5μL DMPO溶液+5μL H2O2溶液+5μL化合物5Aa-p之一溶液的OH信号峰的第一个峰的高度，重复6次。该峰的高度就是5Aa-p清除已知的OH信号峰的高度的残留。 
清除率＝(已知的OH信号峰的高度-加5Aa-p之后的OH信号峰高度)/已知的 OH信号峰的高度 
2)清除NO自由基活性 
7.325mg MGD(N-甲基-葡萄糖胺二硫代甲酸，Sigma)溶解于1mL纯净水得到浓度为25mM的MGD溶液，3.475g FeSO4·7H2O溶解于1mL的纯净水制浓度为12.5mM的溶液，25mg SNAP(亚硝基乙酰青霉胺)溶解在1mL纯净水得到的浓度为110μM的绿色母液稀释100倍得到1μM的SNAP溶液。 
先测5μLMGD溶液+5μL FeSO4·7H2O溶液+5μLSNAP+5μL水的NO信号第一个峰高度，重复6次。该峰的高度就是已知的NO信号峰的高度。再测5μLMGD溶液+5μL FeSO4·7H2O溶液+5μLSNAP+5μL化合物5Aa-p溶液之一的NO信号峰的第一个峰的高度，重复6次。该峰的高度就是5Aa-p清除已知的NO信号峰的高度的残留。 
清除率＝(已知的NO信号峰的高度–加5Aa-p之后的NO信号峰高度)/已知的NO信号峰的高度。 
3)清除超氧阴离子自由基活性 
0.3g黄嘌呤溶解于1mL纯净水得到浓度为0.5M的黄嘌呤溶液(乳白色，大量不溶)，市售黄嘌呤氧化酶原液稀释10倍得到黄嘌呤氧化酶溶液，饱和DETAPAC溶液稀释20倍得到浓度为0.9mM的溶液，11.316mg DMPO溶解于1mL纯净水得到浓度为0.1M的DMPO溶液。 
5μL DMPO溶液+5μL DETAPAC溶液+5μL黄嘌呤溶液+5μL黄嘌呤氧化酶溶液+5μL化合物5Aa-p溶液 
先测5μL DMPO溶液+5μL DETAPAC溶液+5μL黄嘌呤溶液+5μL黄嘌呤氧化酶溶液+5μL水的超氧阴离子信号第一个峰高度，重复6次。该峰的高度就是已知的超氧阴离子信号峰的高度。再测5μL DMPO溶液+5μL DETAPAC溶液+5μL黄嘌呤溶液+5μL黄嘌呤氧化酶溶液+5μL化合物5Aa-p溶液之一的超氧阴离子信号峰的第一个峰的高度，重复6次。该峰的高度就是5Aa-p清除已知的超氧阴离子信号峰的高度的残留。 
清除率＝(已知的超氧阴离子信号峰的高度–加5Aa-p之后的超氧信号峰高度/已知的超氧阴离子信号峰的高度。 
结果如表7。数据表明，5Aa-p清除三种自由基活性的EC50为0.4–0.7mM，有 明确的自由基清除活性。 
表7本发明化合物5Aa-p清除自由基的EC50
n＝6，EC50＝X±SD化合物浓度为X×10-4M。 
实验例7测定本发明化合物5Aa-p的透射电镜 
将样品用三蒸水分别配成1×10-7M，1×10-9M，1×10-11M的溶液，吸取微量(约10μL)滴于铜网表面，铜网下面衬滤纸，自然晾干，在透射电子显微镜(JEOL,JEM-1230)下观察其形态及粒径，并用照片记录。 
在水溶液中本发明化合物5Aa-p可自组装成直径在20-210nm之间的纳米球，其中绝大多数粒径在20-100nm之间，这些纳米球串连形成的不同形状的纳米网，纳米项链等，现以体内浓度1×10-9M(理论血药浓度)为例，列举各化合物的电镜图(图9)。在图9中，本发明化合物5Aa-p对应的图号分别为5a、5b、5c、5d、5e、5f、5g、5h、5i、5j、5k、5l、5m、5n、5o和5p。 
实验例8大鼠中风4小时后接受1μmol/kg5Ak连续治疗6次的试验 
疗效用神经功能评分表示，评分越低疗效越好。雄性SD大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液，剂量为400mg/kg体重，使麻醉。于颈部正中纵行切口，分离出右侧颈总动脉主干(约3cm长)。于舌骨水平分离结扎颈外动脉各分支，于颈膨大处分离出颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，并结扎颈外动脉远端。于颈外动脉主干处插入装有0.5mL血栓块生理盐水悬浮液的导管，在松开颈 内动脉夹的同时，将导管内的0.5mL血栓块生理盐水悬浮液缓慢从颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大脑中动脉。之后，结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹，恢复血流，缝合伤口。并肌肉注射2万IU的青霉素，预防感染。4小时之后把化合物5Ak(剂量为1μmol/kg,n＝10)的生理盐水溶液，连续输6天，观察7天，每天自身对照，按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征，1分表示未损伤侧前肢不能伸展，2分表示向未损伤侧行走，3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走，4分表示意识障碍无自主行走，5分表示死亡。试验结果见表8。结果说明，大鼠中风4小时之后每天接受1次剂量为1μmol/kg5Ak治疗，连续治疗6次，无死亡，10只大鼠有8只好转为无任何神经功能缺失体征，有2只残留轻微的神经功能缺失体征。可见，在1μmol/kg剂量下，5Ak对中风4小时有确切治疗作用。 
表8大鼠中风4小时后接受1μmol/kg5Ak治疗的疗效 
实验例9大鼠中风6小时后接受1μmol/kg5Ak连续治疗6次的试验 
疗效用神经功能评分表示，评分越低疗效越好。雄性SD大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液，剂量为400mg/kg体重，使麻醉。于颈部正中纵行切口，分离出右侧颈总动脉主干(约3cm长)。于舌骨水平分离结扎颈外动脉各分支，于颈膨大处分离出颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，并结扎颈外动脉远端。于颈外动脉主干处插入装有0.5mL血栓块生理盐水悬浮液的导管，在松开颈内动脉夹的同时，将导管内的0.5mL血栓块生理盐水悬浮液缓慢从颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大脑中动脉。之后，结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹，恢复血流，缝合伤口。并肌肉注射2万IU的青霉素，预防感染。6小时之后把化合物5Ak(剂量为1μmol/kg,n＝10)的生理盐水溶液，连续输6天，观察7天，每天自身对照，按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何 神经功能缺失体征，1分表示未损伤侧前肢不能伸展，2分表示向未损伤侧行走，3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走，4分表示意识障碍无自主行走，5分表示死亡。试验结果见表9。结果说明，大鼠中风6小时之后每天接受1次剂量为1μmol/kg5Ak治疗，连续治疗6次，除1只意外死亡，9只大鼠有6只好转为无任何神经功能缺失体征，有3只残留轻微的神经功能缺失体征。可见，在1μmol/kg剂量下，5Ak对中风6小时有确切治疗作用。 
表9大鼠中风6小时后接受1μmol/kg5Ak治疗的疗效 
实验例10大鼠中风24小时后接受1μmol/kg5Ak连续治疗6次的试验 
疗效用神经功能评分表示，评分越低疗效越好。雄性SD大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液，剂量为400mg/kg体重，使麻醉。于颈部正中纵行切口，分离出右侧颈总动脉主干(约3cm长)。于舌骨水平分离结扎颈外动脉各分支，于颈膨大处分离出颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，并结扎颈外动脉远端。于颈外动脉主干处插入装有0.5mL血栓块生理盐水悬浮液的导管，在松开颈内动脉夹的同时，将导管内的0.5mL血栓块生理盐水悬浮液缓慢从颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大脑中动脉。之后，结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹，恢复血流，缝合伤口。并肌肉注射2万IU的青霉素，预防感染。24小时之后把化合物5Ak(剂量为1μmol/kg，n＝10)的生理盐水溶液，连续输6天，观察7天，每天自身对照，按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征，1分表示未损伤侧前肢不能伸展，2分表示向未损伤侧行走，3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走，4分表示意识障碍无自主行走，5分表示死亡。试验结果见表10。结果说明，大鼠中风24小时之后，2只死亡，剩余8只每天接受1次剂量为1μmol/kg5Ak治疗，连续治疗6次，无死亡，8只大鼠有3只好转为无任何神经功能缺失体征，有4只残留轻微的神经功能缺失体征，有1只残留明显的神 经功能缺失体征。可见，在1μmol/kg剂量下，5Ak对中风24小时仍然有确切治疗作用。 
表10大鼠中风24小时后接受1μmol/kg5Ak治疗的疗效 
实验例11大鼠中风6小时后接受2.5μmol/kg5Ak连续治疗6次的试验 
疗效用神经功能评分表示，评分越低疗效越好。雄性SD大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液，剂量为400mg/kg体重，使麻醉。于颈部正中纵行切口，分离出右侧颈总动脉主干(约3cm长)。于舌骨水平分离结扎颈外动脉各分支，于颈膨大处分离出颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，并结扎颈外动脉远端。于颈外动脉主干处插入装有0.5mL血栓块生理盐水悬浮液的导管，在松开颈内动脉夹的同时，将导管内的0.5mL血栓块生理盐水悬浮液缓慢从颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大脑中动脉。之后，结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹，恢复血流，缝合伤口。并肌肉注射2万IU的青霉素，预防感染。6小时之后把化合物5Ak(剂量为2.5μmol/kg,n＝10)的生理盐水溶液，连续输6天，观察7天，每天自身对照，按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征，1分表示未损伤侧前肢不能伸展，2分表示向未损伤侧行走，3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走，4分表示意识障碍无自主行走，5分表示死亡。试验结果见表11。结果说明，9只大鼠中风6小时之后，每天接受1次剂量为2.5μmol/kg5Ak治疗，连续治疗6次，无死亡，9只大鼠有7只好转为无任何神经功能缺失体征，有1只残留轻微的神经功能缺失体征。可见，在2.5μmol/kg剂量下，5Ak对中风6小时的治疗作用明显比1μmol/kg剂量好。 
表11大鼠中风6小时后接受2.5μmol/kg5Ak治疗的疗效 
实验例12大鼠中风24小时后接受2.5μmol/kg5Ak连续治疗6次的试验 
疗效用神经功能评分表示，评分越低疗效越好。雄性SD大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液，剂量为400mg/kg体重，使麻醉。于颈部正中纵行切口，分离出右侧颈总动脉主干(约3cm长)。于舌骨水平分离结扎颈外动脉各分支，于颈膨大处分离出颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，并结扎颈外动脉远端。于颈外动脉主干处插入装有0.5mL血栓块生理盐水悬浮液的导管，在松开颈内动脉夹的同时，将导管内的0.5mL血栓块生理盐水悬浮液缓慢从颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大脑中动脉。之后，结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹，恢复血流，缝合伤口。并肌肉注射2万IU的青霉素，预防感染。24小时之后把化合物5Ak(剂量为2.5μmol/kg,n＝10)的生理盐水溶液，连续输6天，观察7天，每天自身对照，按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征，1分表示未损伤侧前肢不能伸展，2分表示向未损伤侧行走，3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走，4分表示意识障碍无自主行走，5分表示死亡。试验结果见表12。结果说明，大鼠中风24小时之后，3只死亡，剩余7只每天接受1次剂量为2.5μmol/kg5Ak治疗，连续治疗6次，2只死亡，3只好转为无任何神经功能缺失体征，有1只残留轻微的神经功能缺失体征，有1只残留明显的神经功能缺失体征。可见，在2.5μmol/kg剂量下，5Ak对中风24小时仍然有一定治疗作用。 
表12大鼠中风24小时后接受2.5μmol/kg5Ak治疗的疗效 
实验例13大鼠中风24小时后接受5μmol/kg5Ak连续治疗6次的试验 
疗效用神经功能评分表示，评分越低疗效越好。雄性SD大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液，剂量为400mg/kg体重，使麻醉。于颈部正中纵行切口，分离出右侧颈总 动脉主干(约3cm长)。于舌骨水平分离结扎颈外动脉各分支，于颈膨大处分离出颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端，并结扎颈外动脉远端。于颈外动脉主干处插入装有0.5mL血栓块生理盐水悬浮液的导管，在松开颈内动脉夹的同时，将导管内的0.5mL血栓块生理盐水悬浮液缓慢从颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大脑中动脉。之后，结扎颈外动脉近心端，打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹，恢复血流，缝合伤口。并肌肉注射2万IU的青霉素，预防感染。24小时之后把化合物5Ak(剂量为5μmol/kg,n＝10)的生理盐水溶液，连续输6天，观察7天，每天自身对照，按Zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征，1分表示未损伤侧前肢不能伸展，2分表示向未损伤侧行走，3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走，4分表示意识障碍无自主行走，5分表示死亡。试验结果见表13。结果说明，大鼠中风24小时之后，1只死亡，剩余10只每天接受1次剂量为5μmol/kg5Ak治疗，连续治疗6次，无死亡，7只好转为无任何神经功能缺失体征，有3只残留轻微的神经功能缺失体征。可见，在5μmol/kg剂量下，5Ak对中风24小时有确切治疗作用，比2.5μmol/kg剂量下的疗效明显好。 
表13大鼠中风24小时后接受5μmol/kg5Ak治疗的疗效 
根据实验结果表明，本发明的化合物能够形成纳米结构，达成跨越血脑屏障的功效；除了溶血拴与抗血栓以外，还能够有效清除OH、NO和超氧阴离子等自由基；且只需低剂量即能有效溶血栓，在稍高的剂量下则可以对4小时以上的中风显示优秀的疗效，具有良好的临床应用前景。 

Claims (18)

1.一种通式I代表的化合物：
其中，T代表具有至少两个连接用基团的连接臂；Q代表具溶血栓活性肽；R1和R2代表C1-4烷基，其中R1和R2可为相同或不同。
2.如权利要求1所述的化合物，其中至少一个所述连接用基团为氨基，且其余连接用基团为羧基或氨基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中所述连接臂为L-Lys、L-Asp或L-Glu。
4.如权利要求1所述的化合物，其中所述具溶血栓活性肽选自由含PA(Pro-Ala)序列、PAK(Pro-Ala-Lys)序列、AKP(Ala-Lys-Pro)序列或KAP(Lys-Ala-Pro)序列的寡肽，或包含以PAK序列、AKP序列或KAP序列为结构单元的重复序列肽所构成的群组。
5.如权利要求4所述的化合物，其中所述含PA(Pro-Ala)序列的寡肽为三肽，且具有以下通式Q1或Q2：
Pro-Ala-AA   (Q1)
AA-Ala-Pro    (Q2)
其中AA选自由L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu所构成的群组。
6.如权利要求1所述的化合物，其中R1和R2皆为甲基。
7.如权利要求6所述的化合物，其中所述连接臂为L-Lys、L-Asp或L-Glu，且所述具溶血栓活性肽为含PA(Pro-Ala)序列的三肽。
8.如权利要求7所述的化合物，具有以下通式Ia、Ib、Ic、Id、Ie、If、Ig、或Ih：
其中AA选自由L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp,和L-Glu所构成的群组。
9.一种药物组合物，其包含如权利要求1至8任一项所述的化合物，及药学上可接受的载剂。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述化合物可形成纳米球结构。
11.权利要求9所述的药物组合物在制备溶血栓药物、清除NO自由基药物或抗血栓药物中的应用。
12.权利要求9所述的药物组合物在制备治疗中风或脑梗药物中的应用。
13.一种如权利要求1所述通式I化合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)提供通式II化合物：
其中R1和R2代表C1-4烷基，且R1和R2可为相同或不同；
(2)提供具有至少两个连接用基团的连接臂T、以及具溶血栓活性肽Q，其中所述连接臂具有第一连接用基团与第二连接用基团；
(3)在适当反应条件下，连接通式II化合物的羧基与所述连接臂T的第一连接用基团，形成通式IM-1化合物：
以及
(4)在适当反应条件下，连接所述具溶血栓活性肽Q与通式IM-1化合物，其中所述具溶血栓活性肽Q的一端与所述连接臂T的第二连接用基团相连接，形成通式I化合物。
14.如权利要求13所述的制备方法，其中所述第一连接用基团为氨基，且所述第二连接用基团为羧基或氨基。
15.如权利要求14所述的制备方法，其中所述连接臂为L-Lys、L-Asp或L-Glu。
16.如权利要求13所述的制备方法，其中所述具溶血栓活性肽选自由含PA(Pro-Ala)序列、PAK(Pro-Ala-Lys)序列、AKP(Ala-Lys-Pro)序列或KAP(Lys-Ala-Pro)序列的寡肽,或包含以PAK序列、AKP序列或KAP序列为结构单元的重复序列肽所构成的群组。
17.如权利要求16所述的制备方法，其中所述含PA(Pro-Ala)序列的寡肽为三肽，且具有以下通式Q1或Q2：
Pro-Ala-AA   (Q1)
AA-Ala-Pro   (Q2)
其中AA选自由L-Ala、L-Val、L-Trp、L-Tyr、L-Pro、L-Phe、Gly、L-Ser、L-Ile、L-Thr、L-Lys、L-Leu、L-Gln、L-Asn、L-Asp、和L-Glu所构成的群组。
18.如权利要求13所述的制备方法，其中R1和R2皆为甲基。
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