JP2016172749A - インフルエンザを治療するための化合物および方法 - Google Patents

Abstract

【課題】エンドグリコシダーゼ消化に対する抵抗性に先行する段階でウイルスの血球凝集素の成熟をブロックすることによりウイルス感染症を予防又は治療する化合物の提供。
【解決手段】下記式Ｉで表される化合物を有効成分として含有するインフルエンザウィルス感染の予防又は治療のための医薬組成物。

［Ｒ_１〜Ｒ_３の１つはＯＨ又はＯＣ（＝Ｏ）Ｑ；ＱはＲ_７、ＯＲ_７又ＮＨＲ_７；Ｒ_７は置換可低級アルキル、置換可アリール又は置換可ヘテロアリール；Ｒ_４、Ｒ_５並びにＲ_１〜Ｒ_３の残りはＨ；Ｒ_６はＮＯ_２；Ｒ_９はＨ。］
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２００９年６月２６日出願の米国特許仮出願第６１／２２０，８９１号から
優先権を主張し、その全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、チアゾリドを使用して、インフルエンザ感染を治療し予防する方法および生
成物を対象とする。

全年齢群に影響を与える伝染性の高い急性呼吸器疾患であるインフルエンザは、米国だ
けで年間に約３６，０００名の死亡者および２２６，０００名を超える入院患者をもたら
す。インフルエンザウイルスは、核タンパク質およびマトリックスタンパク質の抗原性の
違いによって（Ａ型、Ｂ型、およびＣ型として）分類され、エンベロープを有する、マイ
ナス鎖ＲＮＡウイルスであり；Ａ型が、臨床的に最も重要である。Ａ型インフルエンザウ
イルスの多くのサブタイプは、２つの表面糖タンパク質である血球凝集素（「ＨＡ」）お
よびノイラミニダーゼ（「ＮＡ」）が異なり、これらは防御免疫応答の主な標的であり、
（Ｈ番号で示される）血球凝集素および（Ｎ番号で示される）ノイラミニダーゼのタイプ
に従って表示される。ＨＡおよびＮＡは、抗原連続変異および抗原不連続変異の結果とし
て連続的に変化する。１６種のＨサブタイプ（または「血清型」）および９種のＮサブタ
イプが知られている。

新型Ｈ１Ｎ１ブタインフルエンザなどの、高病原性Ａ型インフルエンザウイルス株の出
現は、世界的なヒトの健康に特に深刻な脅威を示す。監視および早期診断に加えて、新興
インフルエンザ株を制御する努力により、有効なワクチンおよび新規な抗ウイルス薬の開
発が際立っている。

Ａ型インフルエンザウイルス血球凝集素は、株に応じてサブユニット当たり３〜９個の
Ｎ結合型グリコシル化シークオンを含む三量体糖タンパク質である。ＨＡは、小胞体にお
いて、最初に合成され、７５〜７９ｋＤａ前駆体（ＨＡ０）としてコアグリコシル化され
、この前駆体が集合して、非共有結合ホモ三量体となる。この三量体は、速やかにゴルジ
複合体に運搬され、原形質膜に到達し、そこで、ＨＡの挿入が新たに形成されたウイルス
粒子の集合および成熟のプロセスを開始するする。原形質膜への挿入の直前またはそれと
同時に、各三量体サブユニットはタンパク分解により２つの糖タンパク質、ＨＡ１および
ＨＡ２に切断されるが、これらはジスルフィド結合によって連結されたままである。

本発明は、エンドグリコシダーゼ消化に対する抵抗性に先行する段階でウイルスの血球
凝集素の成熟をブロックすることによりウイルス感染症を治療および予防する方法に関す
る。治療および予防は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を、単独でまたは
他の薬剤と組み合わせて投与することにより行われる。式Ｉの化合物は、ウイルス表面タ
ンパク質ＨＡの成熟を選択的にブロックし、それによって、細胞内運搬および宿主細胞原
形質膜への挿入を障害する新規な機序によって、抗ウイルス活性を示す。予備的な結果に
よれば、式Ｉの化合物はＡ型インフルエンザ感染に対して有効な抗ウイルス薬の新規なク
ラスを構成することが示唆されている。本発明はまた、抗ウイルス療法において個別、同
時の、または逐次使用のための組み合わせ製剤としての、式Ｉの化合物または薬学的に許
容されるその塩、および有効量の追加の抗ウイルス薬、または有効量の免疫賦活薬、また
は有効量のワクチンを含む製品を提供する。

本発明は、インフルエンザウイルスのＨＡの成熟を阻害することによってインフルエン
ザ感染を治療および予防するための、式Ｉのチアゾリドを使用する方法、医薬組成物、お
よび組み合わせ製剤を対象とする。本発明による組み合わせ製剤、医薬組成物および治療
方法において、抗ウイルス薬は、１から４種の化合物または調製物を含むことができ、ワ
クチンおよび／または免疫賦活薬を含むこともできる。

一実施形態では、本発明は、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその
塩もしくはエステルおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供または企図す
る。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩および他
の抗ウイルス薬を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わせを提供または
企図する。

より具体的な実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩
およびノイラミニダーゼ阻害薬を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わ
せを提供または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるそ
の塩、および免疫賦活薬を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わせを提
供または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるそ
の塩、およびペグ化インターフェロンを含む、インフルエンザを治療するために有用な組
み合わせを提供または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物，または薬学的に許容される
その塩、および組換えシアリダーゼ融合タンパク質を含む、インフルエンザを治療するた
めに有用な組み合わせを提供または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるそ
の塩、およびワクチンを含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わせを提供
または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるそ
の塩、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、インフルエンザを治療するために
有用な組み合わせを提供または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、２つの薬剤を実質的に同時に投与する式Ｉ
の化合物または薬学的に許容されるその塩および他の抗ウイルス薬を含む、インフルエン
ザを治療するために有用な組み合わせを提供または企図する。

他のより具体的な実施形態では、本発明は、２つの薬剤を順次投与する、式Ｉの化合物
または薬学的に許容されるその塩および他の抗ウイルス薬を含む、インフルエンザを治療
するために有用な組み合わせを提供または企図する。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与す
ることによりウイルス感染症を治療および予防する方法を提供する。

他の実施形態では、本発明は、免疫賦活薬と組み合わせて、式Ｉの化合物または薬学的
に許容されるその塩を投与することによりウイルス感染症を治療および予防する方法を提
供する。

他の実施形態では、本発明は、ノイラミニダーゼ阻害薬と組み合わせて、式Ｉの化合物
または薬学的に許容されるその塩を投与することによりウイルス感染症を治療および予防
する方法を提供する。

他の実施形態では、本発明は、ワクチンと組み合わせて、式Ｉの化合物または薬学的に
許容されるその塩を投与することによりウイルス感染症を治療および予防する方法を提供
する。

他の実施形態では、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと組み合わせて、式Ｉ
の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することにより、ウイルス感染症を治療
および予防する方法を提供する。

他の実施形態では、本発明は、アダマンチン類似体と組み合わせて、式Ｉの化合物また
は薬学的に許容されるその塩を投与することによりウイルス感染症を治療および予防する
方法を提供する。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩およびノ
イラミニダーゼ阻害薬を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わせパック
またはキットを提供する。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩および免
疫賦活薬を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わせパックまたはキット
を提供する。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩およびア
ダマンチン類似体を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わせパックまた
はキットを提供する。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩および組
換えシアリダーゼ融合タンパク質を含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合
わせパックまたはキットを提供する。

他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩およびア
ンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、インフルエンザを治療するために有用な組み合わ
せパックまたはキットを提供する。

本明細書では、以下の用語は、指定された意味を有する。

別段の指示がない限り、「ａ」という用語は、「１つ（種）または複数」を意味する。

別段の指示がない限り、本明細書では、「１つまたは複数の置換基」という用語は、利
用可能な結合部位の数に基づいた１から最大数のあり得る置換基を意味する。

本明細書では、「治療」という用語は、かかる用語を適用する障害もしくは状態、また
はかかる状態もしくは障害の１つまたは複数の症状の進行を逆転する、緩和する、抑制す
る、あるいは、それらを予防することを意味する。本明細書では、「治療」という用語は
、「治療する」が直上に定義される通り、治療する行為を意味する。

「組み合わせ」、「組み合わせ療法」および「併用療法」という用語は、式Ｉの化合物
、およびこれらの治療薬の協調的作用から有益な効果を提供することを目的としたある特
定の治療レジメンの一部としての他の薬剤の投与を包含する。組み合わせの有益な効果に
は、それだけには限らないが、治療薬の組み合わせから生じる薬物動態学的または薬力学
的な相互作用が含まれる。組み合わせでのこれらの治療薬の投与は、通常、規定された期
間（選択された組み合わせに依存して、通常、分、時間、日または週）にわたって実施さ
れる。

「組み合わせ療法」は、一般に、偶発的におよび任意に本発明の組み合わせになる別々
の単独療法レジメンの一部としてこれらの治療薬の２つ以上の投与を包含することは意図
しない。「組み合わせ療法」は、実質的に同時の方式または逐次的な方式で治療薬の投与
が含まれるものとする。実質的に同時の投与は、例えば、治療薬の固定比率を含む単一の
カプセルを投与することによりまたはそれぞれの治療薬のための単一のカプセルを投与す
ることにより達成することができる。治療薬の逐次および実質的に同時の投与は、それだ
けには限らないが、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織による直接吸収
が含まれる任意の適当な経路により実施することができる。治療薬は、同一経路または異
なる経路により投与することができる。例えば、選択される組み合わせの第一の治療薬を
静脈内注射により投与することができ、組み合わせの他の治療薬を経口で投与することが
できる。あるいは、例えば、すべての治療薬を経口で投与してもよく、すべての治療薬を
静脈内注射により投与してもよい。治療薬を投与する順序は、重要なことも重要ではない
こともある。「組み合わせ療法」はまた、生物学的有効成分（それだけには限らないが、
異なる抗ウイルス薬、ワクチン、または免疫賦活薬など）、ならびに栄養補助食品を含め
た非薬物療法とさらに組み合わせた、前述した通り治療薬の投与を包含することもできる
。

「塩」という用語は、最も広義に用いられる。例えば、「塩」という用語には、本化合
物のイオンとの水素塩および水酸化物塩が含まれる。いくつかの実施形態において、「塩
」という用語は、薬理学的活性を有する本化合物の塩であり、生物学的にも他の点でも望
ましくないものではない、薬学的に許容される塩と称されるサブクラスとなり得る。すべ
ての実施形態では、塩は、それだけには限らないが、酸で形成することができ、水素塩、
ハロゲン化物、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、
ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩（camphorate）、樟脳ス
ルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタン
スルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩（glucoheptanoate）、グリセロリン酸
塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩
、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２
−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩（
tosylate）、およびウンデカン酸塩などであり得る。すべての実施形態において、塩は、
それだけには限らないが、水酸化物塩、アンモニウム塩、リチウム、ナトリウムおよびカ
リウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩、マグネシウム塩
、アルミニウム塩、アンモニア、メチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ジ
シクロヘキシルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなどの有機
塩基との塩、ならびにアルギニンおよびリシンなどのアミノ酸との塩など、塩基で形成す
ることができる。塩基性の窒素含有基は、メチル、エチル、プロピルおよびブチル塩化物
、臭化物およびヨウ化物などの低級アルキルハロゲン化物；硫酸ジメチル、硫酸ジエチル
、硫酸ジブチルおよび硫酸ジアミルなどの硫酸ジアルキル；デシル、ラウリル、ミリスチ
ルおよびステアリル塩化物、臭化物およびヨウ化物などの長鎖ハロゲン化物；および臭化
ベンジルおよび臭化フェネチルなどのアラルキルハロゲン化物を含めた薬剤で四級化する
ことができる。

本明細書では、「治療上許容される塩」、および「薬学的に許容される塩」という用語
は、水または油に可溶性または分散性であり；過度の毒性、刺激性、およびアレルギー応
答がなく疾患の治療に適しており；妥当な利益／危険比と釣り合い；これらの所期の使用
のために有効である、本発明の化合物の塩および両性イオンの形態を表す。塩は、化合物
の最終の単離および精製中に調製することもでき、または別々に遊離塩基の形態の適当な
化合物を適当な酸と反応させることにより調製することもできる。代表的な酸付加塩には
、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、Ｌ−アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安
息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、重硫酸塩、酪酸塩、カンホラート、カ
ンファースルホン酸塩、クエン酸塩、二グルコン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、ゲンチジン
酸塩、グルタル酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、
ヘキサン酸塩、馬尿酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタ
ンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、ＤＬ−マンデ
ル酸、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ニコチ
ン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（pectinat
e）、過硫酸塩、３−フェニルプロプリオナート（phenylproprionate）、ホスホン酸塩、
ピクリン酸塩、ピバラート、プロピオン酸塩、ピログルタミン酸塩、コハク酸塩、スルホ
ン酸塩、酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、
グルタミン酸塩、炭酸水素塩、ｐ‐トルエンスルホン酸（ｐ−トシラート）、およびウン
デカン酸塩が含まれる。また、本発明の化合物中の塩基性基は、メチル、エチル、プロピ
ル、およびブチル塩化物、臭化物、およびヨウ化物；硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸
ジブチルおよび硫酸ジアミル；デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル塩化物、
臭化物、およびヨウ化物；ならびに臭化ベンジルおよび臭化フェネチルで四級化すること
ができる。治療上許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例には、塩
酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸、およびシュウ酸、マレイン酸、コハ
ク酸、およびクエン酸などの有機酸が含まれる。塩は、化合物のアルカリ金属イオンまた
はアルカリ土類イオンとの配位により形成することもできる。そのため、本発明は、本発
明の化合物の化合物のナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、およびカルシウム塩
などを考えている。

塩基性付加塩は、カルボキシル、フェノールもしくは類似の基を、金属水酸化物、カル
ボナート、もしくは炭酸水素塩などの適当な塩基と、あるいはアンモニアまたは有機第１
級、第２級、もしくは第３級アミンと反応させることにより、化合物の最終の単離および
精製中に調製することができる。治療上許容される塩の陽イオンには、リチウム、ナトリ
ウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびにアンモニウ
ム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルア
ミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチ
ルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモ
ルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジ
ルフェネチルアミン、１−エフェナミン、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン
などの非毒性の第４級アミン陽イオンが含まれる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的
な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリ
ジン、およびピペラジンが含まれる。

「溶媒和物」という用語は、最も広義に用いられる。例えば、溶媒和物という用語には
、本発明の化合物が１つまたは複数の結合水分子を含むときに形成された水和物が含まれ
る。

本明細書では、「アルキルカルボニル」および「アルカノイル」という用語は、カルボ
ニル基により親分子部分に結合したアルキル基を意味する。かかる基の例には、アセチル
としても知られるメチルカルボニル；プロピオニルとしても知られるエチルカルボニル；
および２−メチル−シクロペンチルカルボニルなどが含まれる。

本明細書では、「アシル」という用語は、アルキル、アルケニル、アリール、ヘテロア
リール、ヘテロシクロアルキルに結合したカルボニル、またはそのカルボニルに結合した
原子が炭素である任意の他の部分を意味する。「アセチル」基は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３基を
意味する。アシル基の例には、ホルミル、アセチル、およびプロピオニルなどのアルカノ
イル基、ベンゾイルなどのアロイル基、およびシンナモイルなどの混合されたアルキル−
アリール基が含まれる。

「アシルアミノ」という用語は、アシル基で置換されたアミノラジカルを意味する。「
アシルアミノ」ラジカルの一例は、アセチルアミノ（ＣＨ３Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）であり；他
は、ベンゾイルアミノである。

本明細書では、「アルケニル」という用語は、直鎖、分枝鎖、もしくは環式不飽和の炭
化水素ラジカル、または１つまたは複数の二重結合を有し、２から２０個の炭素原子を含
む、または環式部分の場合では、３から２０個の環員を有する、直鎖もしくは分枝鎖、お
よび環式部分の任意の組み合わせを含むラジカルを意味する。多くの実施形態では、アル
ケニル基は、２から６個の炭素原子を含む。「アルケニル基」という用語は、最も広義に
用いられる。例えば、「（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル基」という用語は、少なくとも１つの
二重結合を有する２から８個の炭素原子を含む直鎖、分枝、および環式炭化水素ラジカル
を包含する。適当なアルケニルラジカルの例には、ビニルとしても知られるエテニル、プ
ロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ｓｅｃ−ブテニル、ｔｅｒｔ−ブ
テニル、１，３−ブタジエニル、ｎ−ペンテニル、ｎ−ヘキセニル、シクロヘキセニルお
よび１，３−シクロペンタジエニルなどのシクロアルケニルラジカル、シクロヘキセニル
メチルなどのシクロアルケニルアルキルラジカル、メチレンシクロヘキシルなどのアルケ
ニルシクロアルキルラジカルなどが含まれる。

アルケニレンは、エテニレン［（−ＣＨ＝ＣＨ−），（−Ｃ：：Ｃ−）］などの２つ以
上の位置で結合した炭素−炭素二重結合系を意味する。

本明細書では、「アルコキシ」という用語は、アルキルエーテルラジカルを意味し、ア
ルキルという用語は、本明細書で定義する通りである。適当なアルキルエーテルラジカル
の例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソ
ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、シクロメントキシなどが含まれる。

本明細書では、「アルコキシアルコキシ」という用語は、他のアルコキシ基により親分
子部分に結合した１つまたは複数のアルコキシ基を意味する。例には、エトキシエトキシ
、メトキシプロポキシエトキシ、エトキシペントキシエトキシエトキシなどが含まれる。

本明細書では、「アルコキシアルキル」という用語は、アルキル基により親分子部分に
結合したアルコキシ基を意味する。「アルコキシアルキル」という用語は、アルキル基に
結合した、すなわち、モノアルコキシアルキルおよびジアルコキシアルキル基を形成する
ために結合した、１つまたは複数のアルコキシ基を有するアルコキシアルキル基をも包含
する。

本明細書では、「アルコキシカルボニル」という用語は、カルボニル基により親分子部
分に結合したアルコキシ基を意味する。かかる「アルコキシカルボニル」基の例には、メ
トキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、ブトキシカルボニルお
よびヘキシルオキシカルボニルが含まれる。

「アルコキシカルボニルアルキル」という用語は、上記で定義した通り、アルキルラジ
カルに置換された「アルコキシカルボニル」を有するラジカルを意味する。より好ましい
アルコキシカルボニルアルキルラジカルは、上記で定義した通り１から６個の炭素原子に
結合した低級アルコキシカルボニルラジカルを有する「低級アルコキシカルボニルアルキ
ル」である。かかる低級アルコキシカルボニルアルキルラジカルの例には、メトキシカル
ボニルメチルが含まれる。

本明細書では、「アルキル」という用語は、直鎖、分枝、もしくは環式アルキルラジカ
ルまたは直鎖、分枝および／または環式ラジカルの任意の組み合わせからなるラジカルを
意味し、１〜２０個の炭素原子を含む飽和脂肪族炭化水素基である。多くの実施形態では
、アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を含む。多くの他の実施形態では、アルキル基は
、１〜６個の炭素原子を含む。「アルキル基」という用語は、最も広義に用いられる。ア
ルキル基は、本明細書で定義する通り、場合によって置換することができる。アルキルラ
ジカルの例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、シク
ロプロピルメチル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロブチル、
ペンチル、ネオペンチル、イソアミル、ヘキシル、シクロヘキシル、トランス−１，２−
ジ−エチルシクロヘキシル、オクチル、ノニルなどが含まれる。例えば、略語「（Ｃ１〜
Ｃ６）−アルキル基」には、（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキル基ならびに直鎖および分枝
アルキル基が含まれ、「Ｏ（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル基」は、直鎖Ｏ（Ｃ１〜Ｃ８）−ア
ルキル基、分枝Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６”）−アルキル基、および環式Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキ
ル基が含まれる。

本明細書では、「アルキレン」という用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン、お
よび１，３−シクロブチレンなど、２つ以上の位置で結合した直鎖または分枝鎖飽和炭化
水素に由来する飽和脂肪族基を意味する。

本明細書では、「アルキルアミノ」という用語は、アルキル基により親分子部分に結合
したアミノ基を意味する。

本明細書では、「アルキルアミノカルボニル」という用語は、カルボニル基により親分
子部分に結合したアルキルアミノ基を意味する。かかるラジカルの例には、Ｎ−メチルア
ミノカルボニルおよびＮ，Ｎ−ジメチルカルボニルが含まれる。

本明細書では、「アルキリデン」という用語は、炭素−炭素二重結合の１個の炭素原子
がアルケニル基が結合した部分に属するアルケニル基を意味する。

本明細書では、「アルキルスルフィニル」という用語は、スルフィニル基により親分子
部分に結合したアルキル基を意味する。アルキルスルフィニル基の例には、メチルスルフ
ィニル、エチルスルフィニル、ブチルスルフィニルおよびヘキシルスルフィニルが含まれ
る。

本明細書では、「アルキルスルホニル」という用語は、スルホニル基により親分子部分
に結合したアルキル基を意味する。アルキルスルフィニル基の例には、メタンスルホニル
、エタンスルホニル、ｔｅｒｔ−ブタンスルホニルなどが含まれる。

本明細書では、「アルキルチオ」という用語は、アルキルチオエーテル（Ｒ−Ｓ−）ラ
ジカルを意味し、アルキルという用語は、上記で定義される通りである。適当なアルキル
チオエーテルラジカルの例には、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロ
ピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチ
オ、エトキシエチルチオ、メトキシプロポキシエチルチオ、エトキシペントキシエトキシ
エチルチオなどが含まれる。

「アルキルチオアルキル」という用語は、アルキルラジカルに結合したアルキルチオラ
ジカルを包含する。アルキルチオアルキルラジカルには、１から６個の炭素原子のアルキ
ルラジカルおよび前述した通りアルキルチオラジカルを有する「低級アルキルチオアルキ
ル」ラジカルが含まれる。かかるラジカルの例には、メチルチオメチルが含まれる。

本明細書で最も広義に用いられる通り、「アルキニル」という用語は、直鎖、分枝鎖、
または環式不飽和の炭化水素ラジカル、ならびに１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を
有し、２から２０個の炭素原子を含む直鎖、分枝、および／または環式ラジカルの任意の
組み合わせを含むラジカルを意味する。多くの実施形態では、アルキニル基は、２から６
個の炭素原子を含む。多くの他の実施形態では、アルキニル基は、２から４個の炭素原子
を含む。「アルキニレン」は、エチニレン（−Ｃ：：：Ｃ−、−Ｃ≡Ｃ−）などの２つの
位置で結合した炭素−炭素三重結合を意味する。例えば、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル基は
、少なくとも１つの三重結合を有する２から８個の炭素原子を含む直鎖、分枝、および環
式炭化水素鎖を包含し、この用語には、それだけには限らないが、別段の指示がない限り
、エチニル、プロピニル、ヒドロキシプロピニル、ブチン−１−イル、ブチン−２−イル
、ペンチン−１−イル、ペンチン−２−イル、４−メトキシペンチン−２−イル、３−メ
チルブチン−１−イル、ヘキシン−１−イル、ヘキシン−２−イル、ヘキシン−３−イル
、３，３−ジメチルブチン−１−イルなどの置換基が含まれる。

本明細書では、「アミド」という用語は、後述の通りカルボニル基またはスルホニル基
により親分子部分に結合したアミノ基を意味する。本明細書では、「Ｃアミド」という用
語は、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２基を意味し、Ｒは本明細書で定義する通りである。本明細書では
、「Ｎアミド」という用語は、ＲＣ（＝Ｏ）ＮＨ基を意味し、Ｒは本明細書で定義する通
りである。

本明細書では、「アミノ」という用語は、−ＮＲＲ’を意味し、ＲおよびＲ’は、独立
に、水素、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アル
キル、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルケニル、アリールアルキル、シクロ
アルキル、ハロアルキルカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルケニル、ヘテ
ロアリールアルキル、複素環、ヘテロシクロアルケニル、およびヘテロシクロアルキルか
らなる群から選択され、アリール、アリールアルケニルのアリール部位、アリールアルキ
ル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルケニルのヘテロアリール部位およびヘテロアリ
ールアルキル、複素環、ヘテロシクロアルケニルの複素環部位およびヘテロシクロアルキ
ルは、独立に、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、シアノ、ハロ
、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシ−アルキル、ニトロ、および
オキソからなる群から選択される１、２、３、４または５個の置換基で場合によって置換
することができる。

本明細書では、「アミノアルキル」という用語は、アルキル基により親分子部分に結合
したアミノ基を意味する。例には、アミノメチル、アミノエチルおよびアミノブチルが含
まれる。「アルキルアミノ」という用語は、１または２個のアルキルラジカルで置換され
ているアミノ基を意味する。モノ−またはジアルキル化し、それによって、例えば、Ｎ−
メチルアミノ、Ｎ−エチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノな
どの基を形成することができる。

本明細書では、「アミノカルボニル」および「カルバモイル」という用語は、アミノ置
換カルボニル基を意味し、アミノ基は、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキ
ル、シクロアルキルアルキルラジカルなどから選択される置換基を含む第または第２アミ
ノ基となり得る。

本明細書では、「アミノカルボニルアルキル」という用語は、前述した通り、アルキル
ラジカルに結合したアミノカルボニルラジカルを意味する。かかるラジカルの例は、アミ
ノカルボニルメチルである。「アミジノ」という用語は、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ２ラジカルを
意味する。「シアノアミジノ」という用語は、−Ｃ（Ｎ−ＣＮ）ＮＨ２ラジカルを意味す
る。

本明細書では、「アラルケニル」または「アリールアルケニル」という用語は、アルケ
ニル基により親分子部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アラルコキシ」または「アリールアルコキシ」という用語は、アルコ
キシ基により親分子部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アラルキル」または「アリールアルキル」という用語は、アルキル基
により親分子部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アラルキルアミノ」または「アリールアルキルアミノ」という用語は
、窒素原子により親分子部分に結合したアリールアルキル基を意味し、窒素原子は、水素
で置換されている。

本明細書では、「アラルキリデン」または「アリールアルキリデン」という用語は、ア
ルキリデン基により親分子部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アラルキルチオ」または「アリールアルキルチオ」という用語は、硫
黄原子により親分子部分に結合したアリールアルキル基を意味する。

本明細書では、「アラルキニル」または「アリールアルキニル」という用語は、アルキ
ニル基により親分子部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アラルコキシカルボニル」という用語は、式アラルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ
）−のラジカルを意味し、「アラルキル」という用語は、上述した意義を有する。アラル
コキシカルボニルラジカルの例は、ベンジルオキシカルボニル（「Ｚ」または「Ｃｂｚ」
）および４−メトキシフェニルメトキシカルボニル（「ＭＯＳ」）である。

本明細書では、「アラルカノイル」という用語は、ベンゾイル、フェニルアセチル、３
−フェニルプロピオニル（ヒドロシンナモイル）、４−フェニルブチリル、（２−ナフチ
ル）アセチル、４−クロロヒドロシンナモイル、４−アミノヒドロシンナモイル、４−メ
トキシヒドロシンナモイルなどのアリール置換アルカンカルボン酸由来のアシルラジカル
を意味する。「アロイル」という用語は、アリールカルボン酸に由来するアシルラジカル
を意味し、「アリール」は、以下の意味を有する。かかるアロイルラジカルの例には、ベ
ンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−カルボキシベンゾイル、４−（ベンジルオキシカ
ルボニル）ベンゾイル、１−ナフトイル、２−ナフトイル、６−カルボキシ−２−ナフト
イル、６−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ナフトイル、３−ベンジルオキシ−２−
ナフトイル、３−ヒドロキシ−２−ナフトイル、３−（ベンジルオキシホルムアミド）−
２−ナフトイルなどの置換されたおよび非置換のベンゾイルまたはナフトイルが含まれる
。

本明細書では、「アリール」という用語は、１、２または３つの環を含む炭素環式芳香
族系を意味し、かかる環は、ペンダント方式で一緒になって結合してもよく、縮合しても
よい。「アリール」という用語は、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントリ
ル、およびビフェニルなどの芳香族ラジカルを包含する。本発明のアリール基は、本明細
書で定義する通り基から独立に選択される１、２、３、４または５個の置換基で、場合に
よって置換することができる。

本明細書では、「アリールアミノ」という用語は、Ｎ−フェニルアミノなど、アミノ基
により親部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アリールカルボニル」および「アロイル」という用語は、カルボニル
基により親分子部分に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アリールオキシ」という用語は、酸素原子により親分子部分に結合し
たアリール基を意味する。

本明細書では、「アリールスルホニル」という用語は、スルホニル基により親分子部分
に結合したアリール基を意味する。

本明細書では、「アリールチオ」という用語は、硫黄原子により親分子部分に結合した
アリール基を意味する。

「カルボキシ」または「カルボキシル」という用語は、「カルボキシアルキル」など、
単独で用いられても他の用語と共に用いられても−ＣＯ２Ｈを意味する。

本明細書では、「ベンゾ」および「ベンズ」という用語は、ベンゼンに由来する二価ラ
ジカルＣ６Ｈ４＝を意味する。例には、ベンゾチオフェンおよびベンズイミダゾールが含
まれる。

本明細書では、「カルバモイルオキシ」という用語は、酸素原子（例えば、ＲＲ’ＮＣ
（＝Ｏ）Ｏ−）により親分子部分に結合したアミノ置換カルボニル基を意味し、アミノ基
は、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルラジカ
ルなどから選択される置換基を含む１級もしくは２級アミノ基であり得る。

本明細書では、「Ｏ−カルバミル」という用語は、本明細書で定義する通りＲを有する
基−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ基を意味する。

本明細書では、「Ｃ−結合」という用語は、炭素−炭素結合により親分子部分に結合さ
れる任意の置換基を意味する。

本明細書では、「Ｎ−カルバミル」という用語は、ＲＯＣ（Ｏ）ＮＨ基を意味し、Ｒは
本明細書で定義する通りである。

本明細書では、「カルボナート」という用語は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ基を意味し、Ｒ
は本明細書で定義する通りである。

本明細書では、「カルボニル」という用語は、単独のとき、ホルミル［−Ｃ（Ｏ）Ｈ］
を含み、組み合わせたとき、−Ｃ（Ｏ）−基である。

本明細書では、「カルボキシ」という用語は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたはカルボン酸塩誘導
体もしくはエステル誘導体などの対応する「カルボキシラート」を意味する。「Ｏ−カル
ボキシ」基は、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−基を意味し、Ｒは本明細書で定義する通りである。「Ｃ−
カルボキシ」基は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ基を意味し、Ｒは、本明細書で定義する通りである。

本明細書では、「シアノ」という用語は、−ＣＮ基を意味する。

本明細書では、「シクロアルキル」という用語は、飽和したもしくは部分的に飽和した
単環式、二環式または三環式アルキルラジカルを意味し、それぞれの環式部分は、３から
１２個、好ましくは３から７個の炭素原子環員を含み、本明細書で定義する通り、場合に
よって置換されているベンゾ縮合環系に場合によってなり得る。かかるシクロアルキルラ
ジカルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シ
クロヘプチル、オクタヒドロナフチル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデニル、アダマン
チルなどが含まれる。本明細書では、「二環式」および「三環式」は、デカヒドナフタレ
ン、オクタヒドロナフタレンなどの縮合環系、ならびに多環式（多中心性）の飽和もしく
は部分的に不飽和のタイプが含まれるものとする。異性体の後者のタイプは、ビシクロ［
２．２．２］オクタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［１．１．１］ペン
タン、カンフルおよびビシクロ［３．２．１］オクタンによって一般に例示される。

本明細書では、「シクロアルケニル」という用語は、部分的に不飽和の単環式、二環式
もしくは三環式ラジカルを意味し、それぞれの環式部分は、３から１２個、好ましくは５
から８個の、炭素原子環員を含み、本明細書で定義する通り、場合によって置換されてい
るベンゾ縮合環系に場合によってなり得る。かかるシクロアルケニルラジカルの例には、
シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプテニル、シク
ロオクタジエニル、−１Ｈ−インデニルなどが含まれる。

本明細書では、「シクロアルキルアルキル」という用語は、上記で定義した通りシクロ
アルキルラジカルによって置換されている上記で定義したアルキルラジカルを意味する。
かかるシクロアルキルアルキルラジカルの例には、シクロプロピルメチル、シクロブチル
メチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、１−シクロペンチルエチル、１
−シクロヘキシルエチル、２−シクロペンチルエチル、２−シクロヘキシルエチル、シク
ロブチルプロピル、シクロペンチルプロピル、シクロヘキシルブチルなどが含まれる。

本明細書では、「シクロアルケニルアルキル」という用語は、上記で定義した通りシク
ロアルケニルラジカルによって置換されている上記で定義したアルキルラジカルを意味す
る。かかるシクロアルケニルアルキルラジカルの例には、１−メチルシクロヘキシ−１−
エニル−、４−エチルシクロヘキシ−１−エニル−、１−ブチルシクロペント−１−エニ
ル−、３−メチルシクロペント−１−エニル−などが含まれる。

本明細書では、「エステル」という用語は、炭素原子で結合した２つの部分を架橋する
カルボニルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−基を意味する。例には、安息香酸エチル、桂皮酸ｎ−
ブチル、酢酸フェニルなどが含まれる。

本明細書では、「エーテル」という用語は、炭素原子で結合した２つの部分を架橋する
オキシ基を意味する。

本明細書では、「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、また
はヨウ素を意味する。

本明細書では、「ハロアルコキシ」という用語は、酸素原子により親分子部分に結合し
たハロアルキル基を意味する。

本明細書では、「ハロアルキル」という用語は、上記で定義した意味を有するアルキル
ラジカルを意味し、１つまたは複数の水素は、ハロゲンで置き換えられる。具体的に含ま
れるのは、モノハロアルキル、ジハロアルキル、ペルハロアルキル、およびポリハロアル
キルラジカルである。一例としては、モノハロアルキルラジカルは、ラジカルの中でヨー
ド、ブロモ、クロロまたはフルオロ原子を有し得る。ジハロおよびポリハロアルキルラジ
カルは、同一のハロ原子の２つ以上または異なるハロラジカルの組み合わせを有し得る。
ハロアルキルラジカルの例には、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチ
ル、クロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、トリクロロエチル、ペンタフル
オロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ジフルオロクロロメチル、ジクロロフルオロメチ
ル、ジフルオロエチル、ジフルオロプロピル、ジクロロエチルおよびジクロロプロピルが
含まれる。「ハロアルキレン」は、２つ以上の位置で結合したハロヒドロカルビル基を意
味する。例には、フルオロメチレン（−ＣＨＦ−）、ジフルオロメチレン（−ＣＦ２−）
、クロロメチレン（−ＣＨＣｌ−）などが含まれる。かかるハロアルキルラジカルの例に
は、クロロメチル、１−ブロモエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオ
ロメチル、１，１，１−トリフルオロエチル、ペルフルオロデシルなどが含まれる。

本明細書では、「ヘテロアルキル」という用語は、完全飽和のまたは１から３度の不飽
和を含む、定まった数の炭素原子ならびにＯ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１
から３個のヘテロ原子からなる、安定した直鎖もしくは分枝鎖、もしくは環式炭化水素ラ
ジカル、またはそれらの組み合わせを意味し、窒素および硫黄原子は、場合によって酸化
することができ、窒素ヘテロ原子は、場合によって、四級化することができる。１個（ま
たは複数）のヘテロ原子Ｏ、ＮおよびＳは、ヘテロアルキル基の任意の内側の位置に置く
ことができる。２個までのヘテロ原子は、例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３など、連続
的になり得る。

本明細書では、「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１個の原子がＮ、Ｏ、お
よびＳからなる群から選択され、残りの環原子が炭素である場合、芳香族５または６員環
を意味する。５員環は、２つの二重結合を有し、６員環は、３つの二重結合を有する。ヘ
テロアリール基は、環の中の置換可能な炭素または窒素原子により親分子基に連結される
。「ヘテロアリール」という用語はまた、ヘテロアリール環が、本明細書で定義する通り
、アリール基、本明細書で定義する通り複素環基、または追加のヘテロアリール基に縮合
される系が含まれる。ヘテロアリールは、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾ
フラニル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリルベンゾトリアゾリル、シンノリニル、
フリル、イミダゾリル、トリアゾリル［例えば、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、１Ｈ
−１，２，３−トリアゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリルなど］、テトラゾリル［
例えば、１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈ−テトラゾリルなど］、インダゾリル、インドリル、
イソオキサゾリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリ
ル［例えば、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，
５−オキサジアゾリルなど］、オキサゾリル、イソオキサゾリル、プリニル、チアゾリル
、イソチアゾリル、チエノピリジニル、チエニル、チアジアゾリル［例えば、１，２，４
−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリルなど］、
ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピリド
［２，３−ｄ］ピリミジニル、ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、キナゾリニル、キノリ
ニル、チエノ［２，３−ｃ］ピリジニル、テトラゾリル、トリアジニルなどによって例示
される。本発明のヘテロアリール基は、場合によって、本明細書で定義された基から独立
に選択される１、２、３、４または５個の置換基で置換することができる。

ヘテロアリール基の例には、それだけには限らないが、チエニル、ベンゾチエニル、フ
リル、ベンゾフリル、ジベンゾフリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル
、ピラジニル、ピリミジニル、インドリル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニル、
テトラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、およびイソオキサゾリルが含
まれる。

本明細書では、「ヘテロアラルキル」または「ヘテロアリールアルキル」という用語は
、アルキル基により親分子部分に結合したヘテロアリール基を意味する。

本明細書では、「ヘテロアラルケニル」または「ヘテロアリールアルケニル」という用
語は、アルケニル基により親分子部分に結合したヘテロアリール基を意味する。

本明細書では、「ヘテロアラルコキシ」または「ヘテロアリールアルコキシ」という用
語は、アルコキシ基により親分子部分に結合したヘテロアリール基を意味する。

本明細書では、「ヘテロアラルキリデン」または「ヘテロアリールアルキリデン」とい
う用語は、アルキリデン基により親分子部分に結合したヘテロアリール基を意味する。

本明細書では、「ヘテロアリールオキシ」という用語は、酸素原子により親分子部分に
結合したヘテロアリール基を意味する。

本明細書では、「ヘテロアリールスルホニル」という用語は、スルホニル基により親分
子部分に結合したヘテロアリール基を意味する。

本明細書では、「ヘテロシクロアルキル」、同義的に「ヘテロシクリル」という用語は
、環員として１つまたは複数のヘテロ原子を含む、飽和、部分的に不飽和の、または完全
に不飽和の単環式、二環式、もしくは三環式複素環式ラジカルをそれぞれ意味し、それぞ
れの前記ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立に選択することがで
き、それぞれの環に通常３から８個の環員がある。最も一般的な複素環式環は、５から６
個の環員を含む。本発明のいくつかの実施形態において、複素環式環は、１から４個のヘ
テロ原子を含み；他の実施形態では、複素環式環は、１から２個のヘテロ原子を含む。「
ヘテロシクロアルキル」および「複素環」は、スルホン、スルホキシド、三級窒素環員の
Ｎ−オキシド、および炭素環式縮合およびベンゾ縮合環系を含むものとし、さらに、両方
の用語にはまた、複素環が本明細書で定義する通りアリール基または追加の複素環基に縮
合される系が含まれる。本発明の複素環基は、アジリジニル、アゼチジニル、１，３−ベ
ンゾジオキソリル、ジヒドロイソインドリル、ジヒドロイソキノリニル、ジヒドロシンノ
リニル、ジヒドロベンゾジオキシニル、ジヒドロ［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピ
リジニル、ベンゾチアゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロピリジニル、１，３−ジオ
キサニル、１，４−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、イソインドリニル、モルホ
リニル、ピペラジニル、ピロリジニル、テトラヒドロピリジニル、ピペリジニル、チオモ
ルホリニルなどによって例示される。複素環基は、特に禁止されない限り、場合によって
置換してもよい。

本明細書では、「ヘテロシクロアルケニル」という用語は、アルケニル基により親分子
部分に結合した複素環基を意味する。

本明細書では、「ヘテロシクロアルコキシ」という用語は、酸素原子により親分子基に
結合した複素環基を意味する。

本明細書では、「ヘテロシクロアルキルアルキル」という用語は、少なくとも１つの水
素原子が、ピロリジニルメチル、テトラヒドロチエニルメチル、ピリジルメチルなど、上
記で定義した通りヘテロシクロアルキルラジカルによって置き換えられる、上記で定義し
たアルキルラジカルを意味する。

本明細書では、「ヘテロシクロアルキリデン」という用語は、アルキリデン基により親
分子部分に結合した複素環基を意味する。

本明細書では、「ヒドラジニル」という用語は、単結合、すなわち、−Ｎ−Ｎ−によっ
て結合される２個のアミノ基を意味する。

本明細書では、「ヒドロキシ」および「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨ基を意味
する。

本明細書では、「ヒドロキシアルキル」という用語は、１から約１０個の炭素原子を有
する直鎖または分枝アルキル基を意味し、そのいずれか１つは、１つまたは複数のヒドロ
キシルラジカルで置換することができる。かかるラジカルの例には、ヒドロキシメチル、
ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチルおよびヒドロキシヘキシルが
含まれる。

本明細書では、「ヒドロキシアルキル」という用語は、アルキル基により親分子部分に
結合したヒドロキシ基を意味する。

本明細書では、「イミノ」という用語は、＝Ｎ−を意味する。

本明細書では、「イミノヒドロキシ」という用語は、＝Ｎ（ＯＨ）および＝Ｎ−Ｏ−を
意味する。

「主鎖中で」という語句は、基の本発明の化合物への結合点で開始する炭素原子の最も
長い隣接するまたは近接する鎖を意味する。

「イソシアナト」という用語は、−ＮＣＯ基を意味する。

「イソチオシアナト」という用語は、−ＮＣＳ基を意味する。

「原子の直鎖」という語句は、炭素、窒素、酸素および硫黄から独立に選択される原子
の最も長い直鎖を意味する。

「低級アルキル」のようなかかる用語として本明細書において用いられる「低級」とい
う用語は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有するものを意味する。

本明細書では、「メルカプトアルキル」という用語は、Ｒ’ＳＲ−基を意味し、Ｒおよ
びＲ’は本明細書で定義する通りである。

本明細書では、「メルカプトメルカプチル」という用語は、ＲＳＲ’Ｓ−基を意味し、
Ｒは、本明細書で定義する通りである。

本明細書では、「メルカプチル」という用語は、ＲＳ−基を意味し、Ｒは、本明細書で
定義する通りである。

「ヌルの」という用語は、孤立電子対を意味する。

本明細書では、「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２を意味する。

「場合によって置換されている」という用語は、先行する基が置換されても置換されな
くてもよいことを意味する。「置換されている」は、炭素に結合した１個または複数の水
素原子が、「置換基」によって置き換えられていることを意味する。「場合によって置換
されている」という用語の範囲内に含まれるまたはそれらによって考えられる置換基は、
Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１〜
３アルカノイル、Ｃ１〜３アルコキシカルボニル、ハロ、フェニル、ベンジル、フェノキ
シ、ベンゾイル、ピリジル、アミノ、Ｃ１〜３アルキルアミノ、アミド、Ｃ１〜３アルキ
ルアミド、シアノ、Ｃ１〜３ハロアルキル、およびＣ１〜３ペルハロアルキルである。２
つの置換基は、メチレンジオキシ、またはエチレンジオキシなどの０から３個のヘテロ原
子からなる縮合された４−、５−、６−、もしくは７員炭素環式または複素環式環を形成
するために一緒になって結合することができる。場合によって置換されている基は、非置
換（例えば、−ＣＨ２ＣＨ３）、完全に置換されている（例えば、−ＣＦ２ＣＦ３）、一
置換されている（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）または完全に置換されているおよび一置換
されている（例えば、−ＣＨ２ＣＦ３）の間のどこかで、あるレベルで置換されていてよ
い。置換基が置換に関して資格を有さず列挙される場合、置換および非置換の形態は包含
される。置換基が「置換されている」資格がある場合、置換された形態は、特に意図され
る。すべてのペンダントアリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクロ部分は、上に挙
げた基から独立に選択される、１、２、３、４または５個の置換基で場合によってさらに
置換することができる。

本明細書では、「オキシ」または「オキサ」という用語は、−Ｏ−を意味する。

本明細書では、「オキソ」という用語は、二重に結合された酸素＝Ｏを意味する。

「ペルハロアルコキシ」という用語は、水素原子のすべてがハロゲン原子によって置き
換えられるアルコキシ基を意味する。

本明細書では、「ペルハロアルキル」という用語は、すべての水素原子がハロゲン原子
によって置き換えられるアルキル基を意味する。

本明細書では、「ホスホン酸塩」という用語は、ＧおよびＧ１がＨ、アルキル、アルケ
ニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールなどから選択される、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＧ
）（ＯＧ１）基を意味する。

本明細書では、「ホスフィナート」という用語は、ＧおよびＧ１がＨ、アルキル、アル
ケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールなどから選択される、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｇ
）（ＯＧ１）基を意味する。

本明細書では、「スルホン酸塩」、「スルホン酸」および「スルホン基の」という用語
は、−ＳＯ３Ｈ基を意味し、スルホン酸としてのその陰イオンは、塩形成に用いられる。

本明細書では、「スルファニル」という用語は、−Ｓおよび−Ｓ−を意味する。

本明細書では、「スルフィニル」という用語は、−Ｓ（Ｏ）−を意味する。

本明細書では、「スルホニル」という用語は、−ＳＯ２−を意味する。

「Ｎ−スルホンアミド」という用語は、ＲＳ（＝Ｏ）２ＮＨ基を意味し、Ｒは本明細書
で定義する通りである。

「Ｓ−スルホンアミド」という用語は、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ２基を意味し、Ｒは本明細書
で定義する通りである。

本明細書では、「チア」および「チオ」という用語は、−Ｓ−基またはエーテルを意味
し、酸素は、硫黄で置き換えられる。チオ基の酸化型の誘導体、すなわちスルフィニルお
よびスルホニルは、チアおよびチオの定義に含まれる。

本明細書では、「チオエーテル」という用語は、炭素原子で結合した２つの部分を架橋
するチオ基を意味する。

本明細書では、「チオール」という用語は、−ＳＨ基を意味する。

本明細書では、「チオカルボニル」という用語は、単独のとき、チオホルミル−Ｃ（Ｓ
）Ｈを含み、組み合わせたとき、−Ｃ（Ｓ）−基である。

「Ｎ−チオカルバミル」という用語は、ＲＯＣ（Ｓ）ＮＨ−基を意味し、Ｒは本明細書
で定義する通りである。

「Ｏ−チオカルバミル」という用語は、本明細書で定義する通りＲを有する基、−ＯＣ
（Ｓ）ＮＲを意味する。

「チオシアナト」という用語は、−ＣＮＳ基を意味する。

「トリハロメタンスルホンアミド」という用語は、Ｘ３ＣＳ（Ｏ）２ＮＲ−基を意味し
、Ｘは、ハロゲンであり、Ｒは本明細書で定義する通りである。

「トリハロメタンスルホニル」という用語は、Ｘがハロゲンである、Ｘ３ＣＳ（Ｏ）２
−基を意味する。

「トリハロメトキシ」という用語は、Ｘがハロゲンである、Ｘ３ＣＯ−基を意味する。

本明細書では、「三置換シリル」という用語は、置換アミノの定義の下で本明細書に示
された基を有する、その３つの自由原子価で置換されたシリコーン基を意味する。例には
、トリメチシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、トリフェニルシリルなどが含まれ
る。

本明細書では、「尿素」という用語は、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ）を意味し
、Ｒは本明細書で定義する通りである。

「担体」という用語は、最も広義に用いられる。例えば、担体という用語は、任意の担
体、賦形剤、添加剤、湿潤剤、緩衝剤、懸濁化剤、潤滑剤、アジュバント、ビヒクル、送
達系、乳化剤、崩壊剤、吸収剤、保存剤、界面活性剤、着色料、香料、および甘味剤を意
味する。いくつかの実施形態において、担体は、「薬学的に許容される担体」という用語
が、医薬組成物中で使用するために適しているはずである非毒性を意味するため、担体よ
りも狭義の用語である、薬学的に許容される担体となり得る。

本発明はまた、薬学的に許容される担体中で、本発明の少なくとも１つの化合物の有効
量を含む医薬組成物に関する。

有効量という用語は、最も広義に用いられる。例えば、この用語は、所望の効果をもた
らすために必要とされる量を意味する。

一実施形態では、本発明は、ウイルスの血球凝集素の成熟を標的にし、現在利用可能な
抗インフルエンザ薬によって得られるのと異なる段階で、感染性ウイルス粒子の産生を妨
害するための機会を提供する。他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物の有効量を投
与することによってヒトおよび他の哺乳動物におけるウイルス感染症を治療および予防す
る方法を提供または企図する。１つのかかる化合物は、慢性Ｃ型肝炎の治療について米国
および海外で第ＩＩ相臨床試験を現在行っている感染性胃腸炎の治療のための、米国にお
いて承認済みの生成物である、ニタゾキサニド（１）である。薬物は、１年にわたって投
与されるとき、安全かつ有効であることが示されており、第ＩＩ相臨床試験は、将来は任
意の期間でインフルエンザの治療において開始することができる。臨床試験では、ロタウ
イルス性胃腸炎および慢性Ｂ型およびＣ型肝炎を治療することにおけるニタゾキサニドの
市販の医薬製剤の活性が最近実証されている。

チアゾリドが侵入後レベルで作用するＡ型インフルエンザウイルスの複製を阻害することを示す図である。 チゾキサニドがインフルエンザの血球凝集素成を選択的に変更することを示す図である チアゾリドが、ウイルス血球凝集素Ｎグリコシル化に干渉することを示す図である。 チゾキサニドが、ＥｎｄｏＨ−感受性段階でＨＡ成熟をブロックすることを示す図である。 チゾキサニドが、インフルエンザ血球凝集素の細胞表面への運搬を阻害することを示す図である。 Ａ型インフルエンザに対する３つの濃度のザナミビルおよび０．１ｕｇ／ｍＬのニタゾキサニドと組み合わせたザナミビルの抗ウイルス活性を示す図である。 Ａ型インフルエンザに対する３つの濃度のザナミビルおよび１．０ｕｇ／ｍＬのニタゾキサニドと組み合わせたザナミビルの抗ウイルス活性を示す図である。 Ａ型インフルエンザに対する３つの濃度のオセルタミビルおよび０．１ｕｇ／ｍＬのニタゾキサニドと組み合わせたオセルタミビルの抗ウイルス活性を示す図である。 Ａ型インフルエンザに対する３つの濃度のオセルタミビルおよび１．０ｕｇ／ｍＬのニタゾキサニドと組み合わせたオセルタミビルの抗ウイルス活性を示す図である。 Ａ型インフルエンザおよびＢ型ウイルスに対するチゾキサニドの抗ウイルス活性を示す図である。 チゾキサニドが、ヒト低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）原形質膜標的指向化に影響を与えないことを示す図である。 ニタゾキサニドが、インフルエンザ様疾患に伴う症状を解消することができることを示す図である。 ７日の理学的検査データを示す図である。ニタゾキサニドは、その後インフルエンザ様疾患に伴う呼吸器症状を低減する。 試験後の抗生物質の使用を示す図である。 日毎の組織収集物の重量を示す図である。

実験手順
材料および方法
材料
ニタゾキサニド（ＮＴＺ、Ｉ）、チゾキサニド（ＴＩＺ、２）、およびチアゾリド類似
体および参照化合物スウェインソニン（ＳＷ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、ジメ
チルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。ツニカマイシン（ＴＭ）および１−デオキシ
マンノジリマイシン（ＤＭＪ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を水溶液に溶解した。

インフルエンザ試験の方法
細胞培養、治療および形質移入−メイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞、お
よびヒトＡ５４９肺胞ＩＩ型様上皮細胞、ジャーカットＴリンパ芽球様細胞およびＵ３９
７単球性白血病細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、２ｍＭグルタミンおよび抗生物
質を補充したＲＰＭＩ １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中でＣＯ２ ５％の雰囲気で
３７℃で増殖させた。試験化合物を、１時間の吸収期間の直後に加え、別に指定されない
限り、実験の時間全体で培養培地中で保持した。対照には、等量のビヒクルを投与し、こ
れは、細胞生存率またはウイルス複製に影響を与えなかった。細胞生存率を、前述の通り
ＭＴＴホルマザン転換アッセイ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）への３−（４，５−ジメ
チルチアゾル−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）によ
って決定した。擬似感染したもしくはウイルス−感染細胞の顕微鏡検査を、Ｌｅｉｃａ
ＤＭ−ＩＬ顕微鏡を用いて行い、画像を、Ｌｅｉｃａ Ｉｍａｇｅ−Ｍａｎａｇｅｒ５０
０ソフトウェアを用いたＬｅｉｃａ ＤＣ ３００カメラで取り込んだ。

形質移入実験について、ＬａｂＴｅｋＩＩカバーガラスチャンバー（Ｎｕｎｃｈ−Ｔｈ
ｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）に播種したＭＤＣＫ細胞を
、製造業者の指示によりＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
）を用いて、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）タグ付き内部移行欠損ヒト低密度リポタンパ
ク質受容体（ｈＬＤＬＲ）変異体（Ｅ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｂｏｕｌａｎ、Ｃｏｒｎｅ
ｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹによって快く提供されたＬＤＬＲ
−Ａ１８−ＧＦＰプラスミド）で一時的に形質移入した。

ウイルス調製、感染および滴定−４種の異なるＡ型インフルエンザウイルス、哺乳動物
のＨ１Ｎ１ Ａ／ＰＲ／８／３４（ＰＲ８）およびＡ／ＷＳＮ／３３（ＷＳＮ）、および
Ｈ３Ｎ２ Ａ／Ｆｉｒｅｎｚｅ／７／０３（Ａ／ＦＩ）、およびＨ５Ｎ９低病原性トリ株
Ａ／Ｃｋ／Ｉｔ／９０９７／９７（Ａ／Ｃｋ）、ならびにインフルエンザＢ型ウイルス、
Ｂ／Ｐａｒｍａ／３／０４臨床分離株を、本試験のために利用した。Ａ／Ｆｉｒｅｎｚｅ
／７／０３、Ａ／Ｃｋ／Ｉｔ／９０９７／９７およびＢ／Ｐａｒｍａ／３／０４インフル
エンザウイルスは、Ｄｒ．Ｉｓａｂｅｌｌａ Ｄｏｎａｔｅｌｌｉ、Ｉｓｔｉｔｕｔｏ
Ｓｕｐｅｒｉｏｒｅ ｄｉ Ｓａｎｉｔａ’、Ｒｏｍｅ、Ｉｔａｌｙからの親切な寄贈品
であった。トリ株Ａ／Ｃｋ／Ｉｔ／９０９７／９７を、１０日齢特定病原体除去の（ＳＰ
Ｆ）胚発育鶏卵中でニワトリ臓器ホモジネートの初期継代後に単離した。Ａ型インフルエ
ンザウイルスを、８日齢胚発育卵の尿膜腔中で成長させた。３７℃で４８時間後、尿膜腔
液を回収し、５０００ｒｐｍで３０分間遠心して細胞細片を除去し、ウイルス力価を、標
準手順に従って血球凝集素滴定およびプラークアッセイによって決定した。コンフルエン
トな細胞単層を、別に指定されない限り、５ＨＡＵ／１０５細胞の感染多重度（ｍ．ｏ．
ｉ．）で３７℃で１時間インフルエンザウイルスに感染させた。吸着期間後（時間０）、
ウイルス接種物を除去し、細胞単層をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した。細胞
を２％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ １６４０培養培地中で３７℃で維持した。多段階ウ
イルス成長曲線について、感染細胞を、１μｇ／ｍｌトリプシンＩＸ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌ
ｄｒｉｃｈ）を含む同じ培地中でインキュベートした。ウイルス収率を、血球凝集素滴定
により感染後（ｐ．ｉ．）２４もしくは４８時間決定した。ＰＲ８ウイルス感染性アッセ
イについて、９６−穴プレートで成長したＭＤＣＫ細胞を、１μｇ／ｍｌトリプシンの存
在下で４８時間３７℃でウイルス懸濁液の連続希釈で接種し、ＴＣＩＤ５０（５０％組織
培養感染量）を記載の通り決定した。あるいは、ウイルス力価を、ＭＤＣＫ細胞上で感染
後の蛍光細胞数をカウントするおよび抗インフルエンザＡ／ＰＲ／８／３４抗体（抗−Ｐ
Ｒ８、Ｅ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｂｏｕｌａｎ、Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹから親切な寄贈品）で間接免疫蛍光染色することにより決定し
た。力価を、対応するように、ｆｆｕ（蛍光形成単位）／ｍｌとして表した。

代謝性標識、タンパク質合成の分析およびウエスタンブロット
擬似感染した細胞またはインフルエンザウイルス感染細胞を、メチオニン／システイン除
去培地中で３０分の飢餓の後、指示された時間に［３５Ｓ］−メチオニン−システイン（
［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ、Ｒｅｄｉｖｕｅ Ｐｒｏ−Ｍｉｘ ３５Ｓ ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏ ｃｅｌｌ−ｌａｂｅｌｉｎｇ ｍｉｘ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）１０μＣｉ
／ｍｌで標識した。パルス／チェイス実験について、細胞を、メチオニン／システイン除
去培地中で３０分の飢餓の後１５分間［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（１００μＣｉ／ｍｌ
）で標識した。パルスの終了時、細胞を、ＴＩＺの非存在もしくは存在下で異なる時間に
１０ｍＭ冷メチオニンおよび１ｍＭシクロヘキシミドを含む完全培地中で追跡した。パル
ス／チェイスを氷の上で細胞を置くことにより終了させた。１ｍＭフェニルメチルスルホ
ニルフルオリド（ＰＭＳＦ）およびプロテアーゼ阻害薬カクテル（ＰＩＣ；Ｒｏｃｈｅ
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）を含むＲＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１
０ｍＭ トリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５、４ｍＭ ＥＤＴＡ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０
０、６００ｍＭ ＫＣｌ）中で細胞溶解後、同量の放射能を含むサンプルを、ＳＤＳ／Ｐ
ＡＧＥ（３％濃縮ゲル、１０％分離ゲル）によって分離し、記載した通り、オートラジオ
グラフィー用に処理した。オートラジオグラフィーのパターンを視覚化し、Ｔｙｐｈｏｏ
ｎ−８６００ Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ、Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）において定量化し、画像をＩｍａｇｅＱｕａ
ｎｔソフトウェア（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて
得た（ＭＤＰ分析）。

ウイルス粒子に取り込まれたタンパク質の分析について、ウイルス吸着後のＴＩＺ、Ｔ
Ｍまたはビヒクルで処理した、ＰＲ８感染したもしくは擬似感染したＭＤＣＫ細胞を、ｐ
．ｉ．３時間目に薬物の存在下で［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（２５μＣｉ／ｍｌ、２１
ｈ−パルス）で標識した。ｐ．ｉ．２４時間目に、細胞培養上清を回収し、１０分間１３
，０００ｒｐｍで遠心にかけて、細胞細片を除去し、次いで、４５，０００ｒｐｍ（Ｂｅ
ｃｋｍａｎ ＸＬ−１００Ｋ Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ、ｒｏｔｏｒ ７０．１
Ｔｉ；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．）で２時間超遠心をかけた。ウイルス
粒子を含むペレットを、Ｌａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液に再懸濁し、放射能標識したウイ
ルスタンパク質を、１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、Ａｍｐｌｉｆｙ（商標）Ｆｌｕｏ
ｒｏｇｒａｐｈｉｃ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に曝露後、オート
ラジオグラフィーによって調べた。オートラジオグラフィーのパターンを、前述した通り
視覚化した。

ウエスタンブロット分析については、細胞を、２ｍＭ ジチオスレイトール（ＤＴＴ）
、１ｍＭ ＰＭＳＦ、１ｍＭ オルトバナダート、２０ｍＭ β−グリセロリン酸塩、１
ｍＭ ｐ−ニトロフェニルリン酸（ｐＮＰＰ）およびＰＩＣを含む冷高塩抽出（ＨＳＢ）
緩衝液で溶解した、または１ｍＭ ＰＭＳＦおよびＰＩＣを含むＲＩＰＡ緩衝液で溶解し
た。全細胞抽出物（３０μｇ）を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロース
にブロットし、フィルターを、ポリクローナル抗ホスホＳｅｒ５１−ｅＩＦ２α（ｐ−ｅ
ＩＦ２α、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、抗ｅＩＦ２α（ＦＬ−３１５、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕ
ｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、および抗インフルエンザＡ／ＰＲ／８／３４抗体ま
たはモノクローナル抗ＨＡ（ＩＶＣ１０２；Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ Ｉｎｃ．）および抗−
Ｇｒｐ７８／ＢｉＰ（Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎｅ）抗体と共にインキュベートし、その後、ペ
ルオキシダーゼ標識された抗ウサギＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ（Ｓｕｐｅｒ Ｓｉｇｎ
ａｌ検出キット；Ｐｉｅｒｃｅ）で修飾した。タンパク質の定量的評価を、ＢＩＯ−ＲＡ
Ｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより入出可能なＱｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅソフトウェア
プログラムを用いたＶｅｒｓａｄｏｃ−１０００分析により決定した。

ウイルス吸着後１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺまたは対照賦形剤で処理したＨＡ０ ＰＲ８感
染もしくは擬似感染したＭＤＣＫ細胞の免疫沈降を、ｐ．ｉ．５もしくは６時間目にメチ
オニン／システイン除去培地中で３０分の飢餓の後に［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（７０
μＣｉ／ｍｌ、４ｈ−パルス）で標識した。ＰＩＣおよび１ｍＭ ＰＭＳＦの存在下でＲ
ＩＰＡ緩衝液中に溶解後、細胞細片を、１３，０００ｒｐｍで１０分間冷却遠心によって
除去した。放射能標識したライセート（５０μｌ）を、１ｍＭ ＰＭＳＦ、ＰＩＣおよび
タンパク質−Ａ−セファロース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含むＲＩＰＡ緩衝液中
で抗ＨＡモノクローナル抗体（ＩＶＣ１０２；Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ Ｉｎｃ．）で４℃で
１６時間インキュベートした。遠心後、ペレットを、ＲＩＰＡ緩衝液で３回洗浄し、Ｌａ
ｅｍｍｌｉサンプル緩衝液（２０）中で９５℃で５分間溶出させた。免疫沈降したサンプ
ルを、Ｅｎｄｏ−Ｈ消化（後述の通り）にかけ、かつ／またはＡｍｐｌｉｆｙ（商標）Ｆ
ｌｕｏｒｏｇｒａｐｈｉｃ試薬に曝露後、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ（３％濃縮ゲル、１０％分離
ゲル）およびオートラジオグラフィー用に処理した。オートラジオグラフィーのパターン
を、Ｔｙｐｈｏｏｎ−８６００ Ｉｍａｇｅｒにおいて視覚化し、画像を前述した通りに
得た。

血球凝集素グリコシル化、三量体形成およびプロセシングの分析 擬似感染した細胞ま
たはインフルエンザウイルス感染細胞を、［３Ｈ］−マンノースまたは［３Ｈ］−グルコ
サミン塩酸塩（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）２０μＣｉ／ｍｌでｐ．ｉ．６時間目に４
時間標識し、次いで、前述した通りＳＤＳ／ＰＡＧＥ（３％濃縮ゲル、１０％分離ゲル）
およびオートラジオグラフィー用に処理した。エンドグリコシダーゼ消化実験について、
ＭＤＣＫ細胞を、ＰＲ８インフルエンザウイルスに感染させ、洗浄して未結合のウイルス
を除去し、１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺの存在または非存在下でインキュベートした。ｐ．ｉ
．５時間目に、細胞を、メチオニン／システイン除去培地中で３０分の飢餓の後［３５Ｓ
］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（５０μＣｉ／ｍｌ、４ｈ−パルス）で標識した。パルスの終了時、
放射活性培地を除去し、細胞を氷の上に置いた。ＰＩＣおよび１ｍＭ ＰＭＳＦの存在下
でＬ緩衝液（１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５、５ｍＭ
ＥＤＴＡ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．１％ ＳＤＳ）に溶解、および１３，
０００ｒｐｍで１０分間冷遠心後、同量の放射能を含むサンプルを、エンドグリコシダー
ゼＨ（Ｅｎｄｏ−Ｈ）またはペプチドＮ−グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅ−Ｆ）消化用
に処理した。Ｅｎｄｏ−Ｈ消化の場合に、（前述した通り）抗ＨＡモノクローナル抗体で
免疫沈降したサンプルまたは免疫沈降していないサンプルを、１００ｍＭ クエン酸ナト
リウム（ｐＨ５．５）中の０．１％ＳＤＳおよび１４０ｍＭ β−メルカプトエタノール
１００μｌ中でインキュベートし、９５℃で５分間加熱した。１ｍＭ ＰＭＳＦおよびＰ
ＩＣの添加後、サンプルを２等分のアリコートに分け、一方のアリコートを、５ｍＵ Ｅ
ｎｄｏ−Ｈ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）で３７℃で１６時間イン
キュベートした。ペプチドＮ−グリコシダーゼ消化を、製造業者のプロトコール（Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ Ｉｎｃ．）に従ってＰＮＧａｓｅ−Ｆ ５００Ｕで
行った。消化を、Ｌａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液を加えて終了させた。サンプルを、１０
％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に添加する前に９５℃で５分間加熱した。三量体形成の分析
について、ＨＡの架橋を、０．２ｍＭ ＥＧＳ［エチレングリコールビス（スクシンイミ
ジルスクシナート）；Ｐｉｅｒｃｅ］を含むＤＭＳＯの容積１：１０を擬似感染したＭＤ
ＣＫ細胞およびＰＲ８感染したＭＤＣＫ細胞から得られた全細胞抽出物に加えることによ
り行った。２２℃で１５分後に、反応を、最終濃度７５ｍＭでグリシンを加えて急冷し、
サンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥ（６％分離ゲル）にかけた。ＨＡ架橋生成物を、モノクロー
ナル抗ＨＡ抗体またはポリクローナル抗ＰＲ８で探索することにより視覚化した。

免疫蛍光顕微鏡法 カバーガラスで成長したＰＲ８感染したＭＤＣＫおよびＷＳＮ感染
したＡ５４９細胞を、リン酸緩衝食塩水中の４％パラホルムアルデヒドでそれぞれｐ．ｉ
．１６時間目または２４時間目に室温で２０分間固定した。擬似感染細胞を同様に処理し
た。固定された細胞を抗ＨＡモノクローナル抗体（ＩＶＣ１０２；Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ
Ｉｎｃ．）と共に原形質膜染色用に３７℃で１時間インキュベートした、または０．１％
ＴｒｉｔｏｎＸ１００−ＰＢＳで１０分間室温で透過させ、次いで、モノクローナル抗
ＨＡおよび抗ｐ２３０トランス−ゴルジ（ｃｌｏｎｅ １５；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）またはポリクローナル抗α−チューブリン（１１Ｈ１０；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ
ｉｎｇ、Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．）抗体と共に１時間３７℃でインキュベートし
、その後、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８共役（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ−Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）またはローダミン共役（Ｐｉｅｒｃｅ）ヤギ抗−マウスＩｇＧ、お
よびローダミン共役ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ）で修飾した。核を、４’，６−
ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）またはＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。画像を取り込
み、ＳｏｆｔＷｏＲｘ−２．５０ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ−Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）
を用いてＤｅｌｔａＶｉｓｉｏｎ顕微鏡（Ａｐｐｌｉｅｄ−Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）で畳み
込みを解いた。対照インキュベーションは、抗免疫グロブリン複合体間の、または抗免疫
グロブリン複合体と不適切な一次抗体との非交差反応性を実証した。類似の結果を有する
３つのうち代表的な実験を示す。

ヒト低密度リポタンパク質受容体（ｈＬＤＬＲ）の原形質膜標的指向化の検出について
、カバーガラスチャンバーに蒔いたＭＤＣＫ細胞を、ＧＦＰタグ付き内部移行欠損ｈＬＤ
ＬＲ変異体（ＬＤＬＲ−Ａ１８−ＧＦＰプラスミド）で一時的に形質移入し、８時間後、
ＴＩＺ（１０μｇ／ｍｌ）またはビヒクルで次の１６時間処理した。タンパク質合成を１
００μｇ／ｍｌシクロヘキシミド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で１時間遮断した後、
原形質膜を、ＣｅｌｌＭａｓｋ（商標）Ｏｒａｎｇｅ原形質膜染色（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて染色した。染色後、細胞をＵＶ励起フ
ィルターを備えたＬｅｉｃａ ＤＭ−ＩＬ蛍光顕微鏡を用いて試験した。画像をＬｅｉｃ
ａ Ｉｍａｇｅ−Ｍａｎａｇｅｒ５００ソフトウェアを用いたＬｅｉｃａ ＤＣ−３００
カメラで取り込んだ。

血球吸着アッセイ−擬似もしくはＰＲ８感染したＭＤＣＫ細胞単層を、ウイルス吸着後
、ＴＩＺ、ＴＭまたはビヒクルで処理した。ｐ．ｉ．５時間目に、細胞を、ＰＢＳで３回
洗浄し、ＰＢＳ中で２０分間４℃でヒト赤血球（ＲＢＣ）０．１％でインキュベートして
ノイラミニダーゼ活性を阻害した。ＰＢＳで３回洗浄することにより未結合の赤血球を除
去してから、ＭＤＣＫ細胞表面で吸着したＲＢＣを位相差顕微鏡により検出した。画像を
、Ｌｅｉｃａ Ｉｍａｇｅ−Ｍａｎａｇｅｒ５００ソフトウェアを用いたＬｅｉｃａ Ｄ
Ｃ３００カメラを装備したＬｅｉｃａ ＤＭＬＢ顕微鏡で取り込んだ。粘着性の赤血球を
、１５０ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ緩衝液に室温で２時間溶解し、ヘモグロビン吸光度をλ＝５４
０ｎｍで測定することにより定量化した。

統計分析−統計分析を、独立データのためのスチューデントｔ検定を用いて行った。デ
ータを、複製サンプルの平均＋Ｓ．Ｄ．として表す。＜０．０５のｐ値を有意とみなした
。

結果
Ａ型インフルエンザウイルスの異なる株に対するチアゾリドの抗ウイルス活性。チアゾ
リド治療の効果を、ヒトおよびイヌの細胞において、Ａ型インフルエンザウイルスの４種
の異なる株、すなわち、哺乳動物のＨ１Ｎ１ Ａ／ＰＲ／８／３４（ＰＲ８）およびＡ／
ＷＳＮ／３３（ＷＳＮ）、およびＨ３Ｎ２ Ａ／Ｆｉｒｅｎｚｅ／７／０３（Ａ／ＦＩ）
ウイルス、およびＨ５Ｎ９低病原性トリ株Ａ／Ｃｋ／Ｉｔ／９０９７／９７（Ａ／Ｃｋ）
による感染後に観察した。ＰＲ８、ＷＳＮまたはＡ／Ｃｋインフルエンザウイルスに感染
したメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を、ウイルス吸着期間の直後にＮＴ
Ｚ、ＴＩＺまたはビヒクルの異なる濃度で処理し、ウイルス収率を、感染後（ｐ．ｉ．）
２４時間目に決定した。ＮＴＺ治療は、ＰＲ８、ＷＳＮおよびＡ／Ｃｋウイルスについて
ＥＣ５０がそれぞれ１、０．５および１μｇ／ｍｌであるウイルス複製の用量依存阻害を
もたらした（図１Ｂ）。ＴＩＺは、ＥＣ５０が１μｇ／ｍｌ（ＰＲ８）および０．５μｇ
／ｍｌ（ＷＳＮおよびＡ／Ｃｋ）であるすべてのインフルエンザＡ株に対して等しく活性
であった（図１Ｂ）。ＴＩＺは、Ｈ３Ｎ２ Ａ／ＦＩＡ型インフルエンザおよびＢ／Ｐａ
ｒｍａ／３／０４インフルエンザＢ型ウイルスの複製の阻害においてやはり非常に有効で
あった（図１０および図１１）。ＮＴＺもＴＩＺも、非感染性細胞についての有効な抗ウ
イルス薬濃度（ＣＣ５０＞５０μｇ／ｍｌ）で細胞毒性でなかった。インフルエンザウイ
ルス試験のために通常用いられるイヌＭＤＣＫ細胞に加えて、ＴＩＺは、単球性Ｕ９３７
，Ｔ−リンパ球性ジャーカットおよび肺胞ＩＩ型様Ａ５４９細胞を含めたヒト細胞の異な
るタイプで、μＭ以下（ＥＣ５０＝０．３μｇ／ｍｌ）の非毒性濃度でＡ型インフルエン
ザウイルス複製を阻害するのに有効であった（図１Ｃ）。ＴＩＺの抗インフルエンザ活性
は、感染のｍ．ｏ．ｉ．と無関係であり、Ｈ１Ｎ１ ＰＲ８ウイルス複製の劇的な遮断は
、多段階および一段階ウイルス成長の条件下で等しく検出された（図１０Ｃ、Ｄ）。ＰＲ
８Ａ型インフルエンザウイルス対するいくつかのチアゾリドの抗ウイルス活性を、表１に
収集する。試験されたチアゾリドのうち、ＮＴＺ（１）、ＴＩＺ（２）、チゾキサニドナ
トリウム塩（３）、化合物１４〜１６、２７、２８、３６および３７は、強力かつ選択的
であることが判明した。化合物２７および２８は、非常に選択的であり、ＮＴＺおよびＴ
ＩＺよりも１０倍強力であり、それぞれがＥＣ５０＝０．１μｇ／ｍｌおよびＣＣ５０＞
５０μｇ／ｍｌであった。
表１は、チアゾリドについてのＡ型インフルエンザ細胞アッセイから得られたデータを
示す。

チアゾリドは、侵入後レベルで作用する。ウイルス吸着前のチアゾリド処理が宿主細胞
をウイルス感染症から保護できるか否かを観察するために、ＭＤＣＫ細胞を１０μｇ／ｍ
ｌ ＴＩＺで１２時間、６時間または３時間処理した。指示された時間で、薬物を除去し
、ＰＲ８ウイルスに感染前に細胞単層を３回洗浄した。図１Ｄ（前）に示す通り、ウイル
ス感染症前の１２時間までの細胞のチゾキサニド（２）前処理は、インフルエンザウイル
ス複製に対して影響しなかった。さらに、ウイルス接種物（データ未掲載）の処理または
吸着期間中細胞のみの処理は、ウイルス複製を阻害せず（図１Ｄ）、薬物がウイルス感染
性にも、標的細胞へのその結合または侵入へも直接影響を与えないことが示された。ｐ．
ｉ．０から３時間の間で開始したＴＩＺ処理は、ウイルス複製を阻害するのに最も有効で
あった（図１Ｄ、後）。ｐ．ｉ．６時間目に開始した治療は、有効性に欠けるが、やはり
、ウイルス複製を阻害することができ、ｐ．ｉ．１２時間目に投与したとき薬物は無効で
あった。ウイルス吸着後の薬物の単回投与は、感染後少なくとも４８時間ウイルス複製を
阻害するのに有効であった（図１Ｅ）。

チアゾリドは、ウイルスの血球凝集素成熟を選択的に変更させる。チアゾリドの抗イン
フルエンザ活性がタンパク質合成の変更によって引き起こされたか否かを観察するために
、ウイルス吸着後すぐにＴＩＺで処理した、擬似感染細胞またはＰＲ８感染細胞を、［３
５Ｓ］−メチオニン−システイン（［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ）でｐ．ｉ．の異なる時
間で標識し、タンパク質を、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィー、またはウ
エスタンブロット分析によって分析した。図２Ａで示される通り、ＴＩＺは、宿主タンパ
ク質合成を阻害せず（下部）、合成されたポリペプチドの電気泳動パターンにおける検出
可能な変更をもたらさず（上部）；さらに、ＴＩＺは、非感染性細胞またはＰＲ８感染細
胞中で真核生物翻訳開始因子２α（ｅＩＦ２−α）（中央）のリン酸化に影響を与えなか
った。主なインフルエンザウイルスタンパク質を、ｐ．ｉ．４時間目に開始する未処理の
細胞中で大量に合成することが判明し；インフルエンザウイルスタンパク質合成の主な変
化は、およそ７９ｋＤａ分子量のバンドの消失を除いて、処理された細胞中で検出され、
続いて、血球凝集素前駆体の成熟したアイソフォーム、および７４ｋＤａの高速遊走性の
バンドの同時の出現として同定された（図２Ａ）。

ＴＩＺ−治療がＨＡ合成を選択的に変更するか否かを決定するために、ＴＩＺ（１０μ
ｇ／ｍｌ）で処理した擬似感染したもしくはＰＲ８感染したＭＤＣＫ細胞を、ｐ．ｉ．５
時間目に代謝的に標識し（４時間パルス）、放射能標識したタンパク質を、抗血球凝集素
モノクローナル抗体で免疫沈降し、次いで、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフ
ィー用に処理した。図２Ｂに示したデータは、電気泳動の移動度がウイルスＨＡ０前駆体
としてＴＩＺによって変更されるタンパク質を同定する。ＴＩＺ誘導ＨＡ０修正が一時的
であったか否かを決定するために、ＴＩＺ（１０μｇ／ｍｌ）もしくはＮ−グリコシル化
阻害薬ツニカマイシン（ＴＭ、５μｇ／ｍｌ）で処理された、擬似感染したまたはＰＲ８
−感染したＭＤＣＫ細胞を、ｐ．ｉ．３時間目に次の１５時間、代謝的に標識し、タンパ
ク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーにより分析した。あるいは、ＰＲ
８感染細胞をｐ．ｉ．５時間目に標識し、次いで、次のｐ．ｉ．３時間１０ｍＭ冷メチオ
ニンおよび１ｍＭシクロヘキシミドの存在下で追跡した。図２Ｃに示される通り、ＴＩＺ
誘導ＨＡ０翻訳後の修正は、やはりｐ．ｉ．１８時間目に明らかであり、２つのＨＡ０形
態の異なる電気泳動の移動度パターンによって指示される通り、ＴＭ誘導変更と異なると
思われ；さらに、ＴＭは、ＨＡ０蓄積の減少をもたらし、前述のように、長期のＴＩＺ処
理は、感染細胞中の細胞内のＨＡ０レベルを低下させなかった。ＴＭとは異なって、ＴＩ
Ｚは、ＭＤＣＫ細胞中の折り畳まれていないタンパク質応答のマーカーであるグルコース
調節ストレスタンパク質Ｇｒｐ７８／ＢｉＰの発現を誘導しなかった（図２Ｃ）。チェイ
ス実験から得られた結果は、未治療の細胞中でＨＡ０が合成後１０から２０分で成熟した
７９ｋＤａ形態になったものを示し、ＴＩＺの存在下で、緩徐遊走性の７４ｋＤａＨＡ０
形態が開始して合成した後（３０分）に現れ（図２Ｄ）、電気泳動の移動度のさらなる変
化は、次の２．５時間で検出できなかった（データ未掲載）。

ＴＩＺがＨＡ０グリコシル化を阻害しているか否かを決定するために、ＰＲ８感染細胞
を、ウイルス吸着後にＴＩＺまたはツニカマイシンで処理し、ｐ．ｉ．６時間目に、［３
５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ、［３Ｈ］−グルコサミンまたは［３Ｈ］−マンノースで標識し
た。図３Ａに示される通り、ＴＭは、ＨＡ０グリコシル化を完全に防止し、ＴＩＺによる
処理は、グルコサミンを減少させず、未成熟のＨＡ０形態へのマンノース取り込みを実際
に増加させた。しかし、チアゾリドは、２つの阻害薬で処理した細胞中に存在するＨＡ０
形態に比べて、ＴＩＺ誘導未成熟ＨＡ０の異なる電気泳動の移動度によって示される通り
、α−マンノシダーゼＩ、１−デオキシマンノジリマイシン、およびα−マンノシダーゼ
ＩＩ、スウェインソニンの阻害薬と異なって作用すると思われる（図３Ｂ）。

ＨＡ成熟が宿主細胞グリコシル化機構およびウイルス株に影響されることは公知である
。記載されたＨＡ０変更がＰＲ８ウイルスに特異的であったか細胞依存であったかを決定
するために、ヒト肺上皮Ａ５４９細胞をＡ型インフルエンザヒトＷＳＮ株に感染させ、Ｍ
ＤＣＫ細胞をトリＡ／Ｃｋ株に感染させた。両方の場合では、ＰＲ８株について記載され
たものと類似のＨＡ０成熟の変更を検出し（図３、ＣおよびＤ）、ＴＩＺが独立に宿主細
胞およびＡ型インフルエンザ株のタイプのＨＡ０成熟を阻害することができることを示し
た。最後に、図３、ＥおよびＦに示される通り，ニタゾキサニドは、ヒト（Ｅ）およびト
リ（Ｆ）インフルエンザウイルスの血球凝集素の類似の変化をもたらした。

チゾキサニドは、細胞膜へのＨＡ運搬を阻害し、宿主細胞からウイルスが出るのを防ぐ
。他の細胞表面糖タンパク質のようなＨＡのグリコシル化を、「高マンノース」オリゴ糖
を加え、ＥＲにおいて開始する。マンノースに富んだ糖成分は、細胞表面への運搬中ゴル
ジ装置で処理され、末端グリコシル化は、ゴルジ装置のトランス槽で生じる。ＴＩＺがゴ
ルジによるＨＡ０通過に影響を与え得るか否かを観察するため、本発明者らは、放射能標
識したタンパク質のアリコートおよびＨＡ０免疫沈降したサンプルを、末端的にグリコシ
ル化されていないＮ結合型糖鎖を除去する酵素である、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコ
サミニダーゼＨ（Ｅｎｄｏ−Ｈ）で、または全Ｎ−グリカンを除去する酵素である、ペプ
チドＮ−グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅ−Ｆ）で消化させた。予想通り、タンパク質の
両方の形態は、ＰＮＧａｓｅ−Ｆ消化に感受性があるが；対照細胞から得られたＨＡ０を
、最後にグリコシル化（ｇｌｙｓｏｓｙｌａｔｅｄ）しＥｎｄｏ−Ｈ抵抗性になり、ＴＩ
Ｚで処理された細胞から得られたＨＡ０は、合成後４時間までプロテアーゼによる消化に
依然として感受性があった（図４、ＡおよびＢ）。図４Ｃに示される通り、ＴＩＺ誘導変
更は、三量体を形成するＨＡ０能力を防止しなかった。

Ｅｎｄｏ−Ｈ抵抗性の獲得が、シスおよび中間のゴルジコンパートメントへの運搬のた
めのマーカーであるため、これらの結果は、ＴＩＺ誘導変更が、ＥＲとゴルジ複合体との
間のＨＡ０輸送をブロックすることができ、原形質膜へのその運搬を防止するということ
が示される。トランス−ゴルジコンパートメントへの運搬の阻害を、特異的トランス−ゴ
ルジ抗体を用いた免疫蛍光によって実際に検出した（図４Ｄ）。成熟したウイルス粒子を
出さないようにする宿主細胞原形質膜へのＨＡ運搬を阻害したＴＩＺ処理を確認するため
、擬似感染したおよびＰＲ８−感染したＭＤＣＫ細胞を、ウイルス吸着後にＴＩＺ（１０
μｇ／ｍｌ）またはツニカマイシン（５μｇ／ｍｌ）で処理し、細胞質（図５Ａ）および
原形質膜（図５Ｂ）ウイルス血球凝集素のレベルを、ｐ．ｉ．１６時間目に免疫蛍光によ
って検出した。これらの試験は、ＴＩＺ処理細胞におけるＨＡ０細胞質レベルが対照に類
似し（図５Ａ）、ウイルスタンパク質の原形質膜レベルは、ＴＩＺ処理細胞を劇的に減少
させたことが確認された（図５Ｂ、上部）。ＴＩＺ処理後のＨＡ原形質膜レベルの相当な
減少を、受容体−結合（赤血球の血球吸着）アッセイによる原形質膜取り込みＨＡの生物
学的機能を決定することによりさらに確認した（図５Ｂ、下部）。平行試験では、ＭＤＣ
Ｋ細胞の、ＧＦＰタグ付き内部移行欠損ヒト低密度リポタンパク質受容体変異体（ＬＤＬ
Ｒ−Ａ１８−ＧＦＰプラスミド）による一時的な形質移入後、ＴＩＺがＬＤＬＲの原形質
膜標的指向化を阻害しなかったことが判明し、チアゾリドの選択的効果を示唆した（図１
１）。類似の結果を、ＭＤＣＫ細胞およびＨＥＫ−２９３細胞の、異なる原形質膜細胞の
糖タンパク質、ヒトＴｏｌｌ様受容体−４による一時的な形質移入後に得た（データ未掲
載）。

平行サンプルでは、擬似感染細胞およびＰＲ８感染細胞を、次の２１時間ｐ．ｉ．３時
間目に［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓで代謝的に標識し、放射能標識したビリオンを、感染
細胞の上澄みから精製した。ウイルス粒子に取り込まれたタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅおよびオートラジオグラフィーによって分析した。図５Ｃに示される通り、ウイルスタ
ンパク質は、ＴＩＺ−処理した細胞の上澄み中で検出することができなかった。ウイルス
粒子の劇的な低減を、ｐ．ｉ．２４時間目にＴＣＩＤ５０感染力アッセイ（図５Ｄ、上部
）またはＨＡＵアッセイ（図５Ｄ、下部）による平行の、非標識サンプルからのウイルス
収率を決定することにより確認した。

ＰＲ８Ａ型インフルエンザウイルスに対するニタゾキサニドおよびノイラミニダーゼ阻
害薬ザナミビルおよびオセルタミビルによる組み合わせ試験は、相乗的な活性を実証する
。臨床的のインフルエンザ阻害薬と組み合わせたＮＴＺの抗ウイルス活性を決定するため
に、本発明者らは、異なる濃度でＮＴＺのザナミビルとの組み合わせおよびＮＴＺのオセ
ルタミビルとの組み合わせを試験した。ザナミビルおよびオセルタミビルは、感染した宿
主細胞からのウイルスの効率的な放出を障害し、チアゾリドの機序と明確に異なる機序に
より作用するノイラミニダーゼ（ＮＡ）阻害薬である。

ＮＴＺおよびザナミビル組み合わせ治療の効果を、哺乳動物のＨ１Ｎ１ Ａ／ＰＲ／８
／３４（ＰＲ８）ウイルスによる感染後、イヌ細胞中で観察した。ＰＲ８インフルエンザ
ウイルスに感染したメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を、ウイルス吸着期
間直後にＮＴＺ、ザナミビル、またはビヒクルの異なる濃度で処理し、ウイルス収率を、
感染後（ｐ．ｉ．）２４時間目に決定した。

別々の試験において、ＮＴＺ治療は、ＰＲ８ウイルスについて１μｇ／ｍｌ（３．３Ｍ
）のＥＣ５０を有するウイルス複製の用量依存的な阻害をもたらした（図１Ｂ）。以下の
表２は、組み合わせ実験から得られた抗ウイルス薬データをまとめて示す。活性を、未治
療の対照に対してＨＡＵ／ｍｌの低減として表す。ザナミビルによる実験において、ＮＴ
Ｚは、以前の試験においてよりもわずかに強力であると思われ、〜０．６６μｇ／ｍｌ（
〜２．２μＭ）のＥＣ５０を有した。ザナミビル単独では、最高試験濃度１μＭでのみウ
イルス収率が５０％低減（阻害）になり、したがって、本発明者らは、ザナミビルがこれ
らの実験条件下で１μＭのＥＣ５０を有したことを決定した（図６および７、左側）。１
μＭのザナミビルを０．１μｇ／ｍｌ（０．３３μＭ）のＮＴＺと組み合わせると、未処
理の対照に対してウイルスの複製を８３％減少させ、ザナミビル単独による治療に対して
およそ３倍の効力の増加に対応する（図６、右側）。

０．１μＭのザナミビル単独による治療は、ウイルス複製に対して影響を与えなかった
（図７、左側）。しかし、０．１μＭのザナミビルおよび１．０μｇ／ｍｌ（３．３μＭ
）のＮＴＺの組み合わせでは、ＮＴＺ単独による治療に対してウイルス複製の５０％を超
える低減をもたらした（図７、右側）。これらの結果は、ザナミビル単独による治療に対
しておよそ６倍の効力の増加に対応し、ＮＴＺ単独による治療に対して２倍の効力の増加
に対応する。１．０μＭのザナミビルおよび１．０μｇ／ｍｌ（３．３μＭ）のＮＴＺを
組み合わせると、ＮＴＺ単独による治療に対してウイルス複製を９４％低減した（図７、
右側）。これらの結果は、ザナミビル単独による治療に対しておよそ２４倍の効力の増加
に対応し、ＮＴＺ単独による治療に対して１６倍の効力の増加に対応する。まとめると、
これらの結果により、ザナミビルおよびＮＴＺの組み合わせの抗ウイルス活性がＰＲ８Ａ
型インフルエンザウイルスに対して相乗的であることが示唆される。

類似のやり方において、ＮＴＺおよびオセルタミビル組み合わせ治療の効果を、哺乳動
物Ｈ１Ｎ１ Ａ／ＰＲ／８／３４（ＰＲ８）ウイルスによる感染後のイヌ細胞中で観察し
た。ＰＲ８インフルエンザウイルスに感染したメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ
）細胞を、ウイルス吸着期間直後にＮＴＺ、オセルタミビル、またはビヒクルの異なる濃
度で処理し、ウイルス収率を感染後（ｐ．ｉ．）２４時間目に決定した。

これらの実験では、ＮＴＺは、１μｇ／ｍｌ（３．３μＭ）のＥＣ５０を実証した。本
発明者らは、１μＭまでの試験濃度でオセルタミビル単独によるウイルス収率の低減（阻
害）を観察せず、したがって、ＥＣ５０を、オセルタミビルについて決定しなかった（図
８および９、左側）。オセルタミビルまたはＮＴＺ単独による治療に対しておよそ１．５
倍の効力の増加に対応して、１μＭのオセルタミビルを、０．１μｇ／ｍｌ（０．３３μ
Ｍ）のＮＴＺと組み合わせると、ウイルス複製の低減が３３％増加した（図８、右側）。
ＮＴＺ用量がその確立されたＥＣ５０の１０分の１であったことに留意する。

１．０μＭのオセルタミビルおよび１．０μｇ／ｍｌ（３．３μＭ）のＮＴＺを組み合
わせると、オセルタミビル単独による治療に対してウイルス複製の低減を６７％増加させ
、ＮＴＺ単独による治療に対してウイルス複製の低減を３３％増加させた（図９、右側）
。これらの結果は、オセルタミビル単独による治療に対しておよそ３倍の効力の増加に対
応し、ＮＴＺ単独による治療に対して１．５倍の効力の増加に対応する。まとめると、こ
れらの結果は、オセルタミビルおよびＮＴＺ組み合わせの抗ウイルス活性がＰＲ８Ａ型イ
ンフルエンザウイルスに対して相加および相乗の間くらいであることが示唆される。

いくつかの生化学的手法によって得られた結果は、ＴＩＺが、シスおよび中間のゴルジ
コンパートメントに運搬するためのマーカーであるエンドグリコシダーゼ−Ｈ消化の抵抗
性を先行する段階で、ＨＡ末端のグリコシル化をブロックすることが実証されている。感
染細胞により産生されたウイルス粒子の免疫顕微鏡研究および分析では、ＴＩＺ誘導変更
は、ＥＲおよびゴルジ複合体の間のＨＡ０輸送を障害し、宿主細胞原形質膜へのその運搬
および挿入を防ぎ、宿主細胞からの成熟したビリオンの出口を遮断することが確認されて
いる。ＨＡ成熟の変更が、ウイルス糖タンパク質へのＴＩＺの直接結合によって引き起こ
されるのか、または細胞によって媒介された効果によるものなのかは確立されていない。

チアゾリドは、２種の異なるＲＮＡウイルス、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、プラス鎖ＲＮＡウ
イルス、およびロタウイルス、二本鎖ＲＮＡウイルス、およびＤＮＡウイルス、Ｂ型肝炎
（ＨＢＶ）ウイルスに対して抗ウイルス活性を有することが前もって示されている。広ス
ペクトル抗ウイルス活性は、特異的なウイルス標的ではなく細胞媒介効果を示唆している
。ウイルス糖タンパク質の成熟が、ＨＢＶおよびＨＣＶに対する抗ウイルス活性が関与し
得る可能性は、現在試験中である。ロタウイルスの場合においては、構造上のウイルス糖
タンパク質ＶＰ７のＴＩＺ誘導修正は最近示されており（Ｓａｎｔｏｒｏ ＭＧ ａｎｄ
Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ ＪＦ、結果非公表）、最重要なウイルス糖タンパク質の成熟およ
び運搬がこの新規なクラスの薬物の抗ウイルス活性の一般的な機序となり得るという仮説
を裏付けている。チアゾリドが、成熟が細胞膜へのウイルス糖タンパク質輸送を必要とし
ないピコルナウイルスである、ヒトライノウイルスの複製にあまり影響を与えないという
知見は、さらにこの仮説を支持している。

用いられる略語は以下の通りである。ＮＴＺ、ニタゾキサニド；ＴＩＺ、チゾキサニド
；ＥＣ５０、５０％有効濃度；ＣＣ５０、５０％細胞毒性濃度；ＨＡ、血球凝集素；ＴＭ
、ツニカマイシン；Ｅｎｄｏ−Ｈ、エンド−β−ＮアセチルグルコサミニダーゼＨ；ＰＮ
Ｇ−ａｓｅ Ｆ、ペプチドＮ−グリコシダーゼ Ｆ；ＴＣＩＤ５０、５０％組織培養感染
量；ＳＷ、スウェインソニン；ＤＭＪ、１−デオキシマンノジリマイシン；ＨＡＵ／ｍｌ
、血球凝集単位／ｍｌ、ＥＧＳ、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシナー
ト）。

ウイルス感染を治療するためのＮＴＺなどのチアゾリドの低用量投与。ＮＴＺは、イン
フルエンザの治療として３００ｍｇまたは６００ｍｇ１日２回５日間の用量で経口投与す
ることができる。臨床試験では、この用量レジメンはインフルエンザを治療する能力を有
することが示されている。好ましくは、ニタゾキサニドの用量は、３００ｍｇ１日２回５
日間であり、これは、腸管感染症を治療するために必要なＮＴＺの用量を超えず、それに
よって、高用量に伴う副作用を低減することができるようになる。チアゾリドは、調節放
出二重層錠剤として投与することもできる。そのようなものとして、チアゾリドは、ウイ
ルス感染を治療するために１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍ
ｇまたは６００ｍｇ用量で１日２回５日間投与することができる。

ニタゾキサニドなどのチアゾリドは、他の呼吸器ウイルスに対する活性を有することも
見出されている。Ｉｎｖｉｖｏデータを表３に示す。

興味深いことに、ＮＴＺなどのチアゾリドはまた、インフルエンザ様疾患（ＩＬＩ）患
者を治療する能力を有する。インフルエンザ様疾患は、インフルエンザの症状を呈し、別
のウイルスまたは病原体によって引き起こされ得る。

インフルエンザ様疾患を有する小児患者および成人における症状の期間に対する１日２
回ニタゾキサニド５日間の効果の評価を行った。２つの二重盲検プラセボ対照試験を行っ
た。年齢１２ヵ月〜１１歳の小児に、ＮＴＺ懸濁剤を投与し（ｎ＝１００、１群当たり５
０名）、≧１２歳の患者にＮＴＺ５００ｍｇ錠剤を投与した（ｎ＝８６、１群当たり４３
名）。単施設試験を行った。試験は、ＴＡＭＩＦＬＵ（登録商標）試験に基づいた。試験
は、特定の組み入れ／除外基準に従った。組み入れは、（咳、鼻汁、くしゃみ、咽頭痛な
どを含めた）呼吸器症状≧１および／または全身症状（筋肉痛、倦怠感、疲労、頭痛、悪
寒／発汗など）≧１を有する＞１００Ｆの発熱を伴う≧１２歳の患者のうち小児年齢１〜
１１歳を要した。主な除外には、症状期間＞７２時間、妊娠または授乳、併用抗生物質／
抗ウイルス薬剤、または喘息もしくは他の肺疾患の病歴が含まれた。

患者をランダム化してＮＴＺまたはプラセボをｂ．ｉ．ｄ．で５日間投与した。鼻咽頭
のスワブは、７種のウイルス（ＲＳＶ、Ａ型およびＢ型インフルエンザ、パラインフルエ
ンザ１〜３型、およびアデノウイルス）に関する急速直接免疫蛍光アッセイ（Ｓｉｍｕｌ
Ｆｌｕｏｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｃｒｅｅｎ）のベースライン時に収集した。症
状は、０から３の尺度：なし、軽度、中等度、重度で類別した各症状を有する患者（また
は親）によって毎日の日誌に記録した。組織をジッパー付きプラスチック袋に保存し、こ
れは秤量のために試験員によって毎日収集された。フォローアップ身体検査を７日目に行
った。主要エンドポイントは、ベースラインから各症状がなしまたは軽度（＜２）に戻る
までの時間であった。副次的エンドポイントには、抗生物質の使用、７日の呼吸器症状、
毎日の組織／粘液重量が含まれる。

追加の生化学的手法から得られた結果は、ニタゾキサニドが追加の呼吸器ウイルスに対
して効果を有することを実証している。患者構成については表４およびウイルス検出につ
いては表５を参照のこと。表５は、大部分の患者が、アデノウイルス、ＲＳＶ、Ａ型イン
フルエンザ、パラインフルエンザ１型の存在について陽性を試験しなかったことを示す。
しかし、図１２〜１５は、ＮＴＺがインフルエンザ様疾患を有する患者を治療する能力を
有することを示す。これらのデータは、驚くべきことに、インフルエンザの症状を示すが
、アデノウイルス、ＲＳＶ、Ａ型インフルエンザ、パラインフルエンザ１型についての陽
性を試験しない患者が、ＮＴＺなどのチアゾリドで治療することができることを示す。

〔図面の説明〕
図１はチアゾリドが侵入後レベルで作用するＡ型インフルエンザウイルスの複製を阻
害することを示す図である。Ａ、ニタゾキサニド（ＮＴＺ）およびチゾキサニド（ＴＩＺ
）の構造、Ｂ、ＮＴＺ（青色の円）およびＴＩＺ（赤色の円）がＭＤＣＫ細胞中でヒト（
ＰＲ８、ＷＳＮ）およびトリ（Ａ／Ｃｋ）Ａ型インフルエンザウイルス株の複製を阻害す
る。ウイルス収率は、ｐ．ｉ．２４時間目に決定される。Ｃ、ヒト単球性Ｕ９３７（●）
およびＴ−リンパ芽球様ジャーカット（▲）細胞中のＡ型インフルエンザＰＲ８ウイルス
、およびヒト肺上皮Ａ５４９細胞（■）中のＷＳＮウイルスに対するＴＩＺの抗ウイルス
活性。Ｄ、ＭＤＣＫ細胞を感染前（前）、吸着期間直後（後）の指示された時間で１０μ
ｇ／ｍｌＴＩＺ（黒棒）、または吸着期間中のみ（Ａｄ、破線棒）で処理した。白抜き棒
は、未治療の感染した対照を表す（Ｃ）。Ｅ、ウイルス吸着後の１０μｇ／ｍｌＴＩＺ（
黒丸）またはビヒクル（白抜きの円）で処理したＰＲ８感染ＭＤＣＫ細胞中のＴＩＺの長
期抗ウイルス活性。Ｂ〜Ｅ、ＨＡＵ／ｍｌで（ＢおよびＥ）または未治療対照のパーセン
トとして（ＣおよびＤ）表されるウイルス収率は、類似の結果を有する３つのうちの代表
的な実験から得られた複製サンプルの平均値±標準偏差を表す。^＊＝Ｐ＜０．０１；^＊＊
＝Ｐ＜０．０５

図２はチゾキサニドがインフルエンザの血球凝集素成を選択的に変更することを示す
図である。Ａ、ＰＲ８ウイルスタンパク質合成の速度に対するＴＩＺの効果。ウイルス吸
着後の１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺで処理した擬似感染細胞（Ｕ）またはＰＲ８感染細胞から
得られたｐ．ｉ．異なる時間での［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ標識タンパク質（１．５ｈ
−パルス）のオートラジオグラフィー（上部）。ウイルスタンパク質を示す。同じ実験に
おいて、タンパク質合成を、ＴＩＺ（●）またはビヒクル（○）で治療した細胞のタンパ
ク質への［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ取り込みにより決定し（下部）、ホスホ−ｅＩＦ−
２αタンパク質レベルを抗ホスホＳｅｒ−５１−ｅＩＦ２α（ｐ−ｅＩＦ２α）またはｅ
ＩＦ２α汎特異的抗体を用いて免疫ブロット分析により決定した（中央）。Ｂ、ｐ．ｉ．
５時間目に［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ−標識化後に抗−ＨＡ抗体を用いた免疫沈降によ
る血球凝集素同定（４時間−パルス）。免疫沈降したタンパク質（＋αＨＡ、ＩＰ）およ
び抗体付加前の同一サンプルから得られた放射能標識したタンパク質（−αＨＡ）を示す
。ＨＡ非切断前駆体（ＨＡ０）の位置を示す。Ｃ、ウイルス吸着後の１０μｇ／ｍｌ Ｔ
ＩＺ、５μｇ／ｍｌツニカマイシン（ＴＭ）またはビヒクル（Ｃ）で処理した擬似感染細
胞（Ｕ）またはＰＲ８感染細胞から得られた［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ標識されたタン
パク質（１５ｈ−パルス）のオートラジオグラフィー。白色の三角形および黒矢印は、そ
れぞれＴＭ誘導ＧＲＰ７８／ＢｉＰおよび非グリコシル化ＨＡ０を示す［免疫ブロットに
よって同定された（未掲載）］。Ｄ、Ａのように処理したＰＲ８感染細胞から得られた［
３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ標識タンパク質（ｐ．ｉ．５時間目に１５分パルス、その後指
示された時間追跡）のオートラジオグラフィー。Ａ〜Ｄ、未治療のもしくはＴＩＺ治療細
胞中の緩徐遊走性および高速遊走性のＨＡ０形態を、それぞれアステリスクおよび黒色の
三角形により同定する。

図３はチアゾリドが、ウイルス血球凝集素Ｎグリコシル化に干渉することを示す図で
ある。Ａ、擬似感染した（Ｕ）またはＰＲ８感染した（ＰＲ８）ＭＤＣＫ細胞を、ウイル
ス吸着後に１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ、５μｇ／ｍｌ ＴＭまたはビヒクル（Ｃ）で処理し
た。ｐ．ｉ．６時間目に、細胞を［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（上部）、［３Ｈ］−グル
コサミン（中央）または［３Ｈ］−マンノース（下部）で４時間標識した。放射能標識し
たサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィー用に処理した。ＳＤＳ／Ｐ
ＡＧＥゲルから得られた蛍光図のセクションを示す。白色の矢印は、ＴＭ誘導Ｇｒｐ７８
／ＢｉＰを示す。Ｂ、擬似感染した（Ｕ）もしくはＰＲ８感染したＭＤＣＫ細胞を、ウイ
ルス吸着後に１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ、１０μｇ／ｍｌスウェインソニン（ＳＷ）、１５
μｇ／ｍｌ １−デオキシマンノジリマイシン（ＤＭＪ）またはビヒクル（Ｃ）で処理し
た。ｐ．ｉ．６時間目に、細胞を［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（４ｈ−パルス）で標識し
、放射能標識したサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィー用に処理し
た。Ｃ〜Ｄ、擬似感染した（Ｕ）もしくはＷＳＮ感染した（ＷＳＮ）Ａ５４９細胞（Ｃ）
、およびウイルス吸着後に５μｇ／ｍｌ ＴＩＺ、５μｇ／ｍｌツニカマイシン（ＴＭ）
またはビヒクル（Ｃ）で処理した擬似感染したもしくはトリＡ型インフルエンザウイルス
感染した（Ａ／Ｃｋ）ＭＤＣＫ細胞（Ｄ）から得られた放射能標識したタンパク質のオー
トラジオグラフィー。ｐ．ｉ．３時間目（ＷＳＮ）または６時間目（Ａ／Ｃｋ）に、細胞
を、１５時間（ＷＳＮ）または４時間（Ａ／Ｃｋ）［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓで標識し
た。Ｅ〜Ｆ、擬似感染した（Ｕ）ＰＲ８感染した（ＰＲ８）（Ｅ）またはウイルス吸着後
に１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ、１０μｇ／ｍｌニタゾキサニド（ＮＴＺ）またはビヒクル（
Ｃ）で処理したトリのＡ型インフルエンザウイルス感染した（Ａ／Ｃｋ）（Ｆ）ＭＤＣＫ
細胞から得られた放射能標識したタンパク質のオートラジオグラフィー。ｐ．ｉ．６時間
目に、細胞を４時間［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓで標識した。Ａ〜Ｆ、ウイルスタンパク
質ＨＡ０、ＮＰ、Ｍ１およびＮＳ１を示す。未処理のもしくはチアゾリドで処理した細胞
中の緩徐遊走性および高速遊走性のＨＡ０形態を、それぞれアステリスクおよび三角形に
よって同定する。

図４はチゾキサニドが、ＥｎｄｏＨ−感受性段階でＨＡ成熟をブロックすることを示
す図である。Ａ、ウイルス吸着後に１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ（＋）またはビヒクル（−）
で処理した擬似感染した（Ｕ）もしくはＰＲ８感染した（ＰＲ８）ＭＤＣＫ細胞を、ｐ．
ｉ．５時間目に［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ（４時間−パルス）で標識した。放射能標識
したタンパク質をＰＮＧａｓｅ−ＦまたはＥｎｄｏ−Ｈを消化した（＋）または消化せず
（−）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィー用に処理した。切断しないグリ
コシル化された（ＨＡ０）および非グリコシル化の（ＨＡｐ）血球凝集素前駆体形態を示
す。Ｂ、Ａのように処理したＭＤＣＫ細胞を、ｐ．ｉ．６時間目に［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／
Ｃｙｓ（４時間−パルス）で標識した。放射能標識したタンパク質を、抗ＨＡ抗体（α−
ＨＡ）で免疫沈降し、Ｅｎｄｏ−Ｈで消化した（＋）または消化せず（−）、ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ用に処理した。蛍光図のセクションを示す。Ｃ、ＴＩＺ（＋）またはビヒクル（−
）で処理した擬似感染した（Ｕ）およびＰＲ８感染した（ＰＲ８）ＭＤＣＫ細胞から得ら
れた全細胞抽出物を架橋試薬ＥＧＳ（０．２ｍＭ）を用いて（＋）または用いずに（−）
インキュベートし、抗ＨＡ抗体を用いてウエスタンブロット用に処理した。ＨＡ単量体（
１）、二量体（２）および三量体（３）を示す。Ａ〜Ｃ、未処理のもしくはＴＩＺで処理
した細胞中の緩徐遊走性および高速遊走性のＨＡ０形態を、それぞれアステリスクおよび
三角形によって同定する。Ｄ、２４時間ＴＩＺ（５μｇ／ｍｌ）もしくはビヒクルで処理
した擬似感染した（Ｕ）およびＷＳＮ感染したＡ５４９細胞の免疫蛍光は、抗ｐ２３０ト
ランス−ゴルジ（赤色）および抗ＨＡ（緑色）抗体で標識した。核をＤＡＰＩ（青色）で
染色した。３種の蛍光色素のオーバーレイを示す（マージ）。拡大された領域（差し込み
図）は、未処理のおよびＴＩＺ処理した細胞中のＨＡの局在化を強調している。画像を、
ＳｏｆｔＷｏＲｘ−２．５０ソフトウェアを用いたＤｅｌｔａＶｉｓｉｏｎ顕微鏡で取り
込み、畳み込みを解いた。横棒＝５μｍ。

図５はチゾキサニドが、インフルエンザ血球凝集素の細胞表面への運搬を阻害するこ
とを示す図である。Ａ、全血球凝集素（緑色）およびα−チューブリン（赤色）のレベル
を、間接免疫蛍光によりｐ．ｉ．１６時間目に擬似感染した（Ｕ）および未処理のもしく
はＴＩＺ処理した（１０μｇ／ｍｌ）ＰＲ８感染したＭＤＣＫ細胞中で検出した（横棒＝
１０μｍ）。核をＤＡＰＩ（青色）で染色する。３種の蛍光色素のオーバーレイを示す（
マージ）。画像をＳｏｆｔＷｏＲｘ−２．５０ソフトウェアを用いたＤｅｌｔａＶｉｓｉ
ｏｎ顕微鏡で取り込み、畳み込みを解いた。Ｂ、原形質膜血球凝集素（緑色）のレベルを
、１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺまたは５μｇ／ｍｌ ＴＭで処理した擬似感染細胞またはＰＲ
８感染細胞中で間接免疫蛍光（上部）によりｐ．ｉ．１６時間目に検出した。核を、Ｈｏ
ｅｃｈｓｔ ３３３４２（青色）で染色した。画像を、Ａのように処理した（横棒＝１０
μｍ）。２種の蛍光色素のオーバーレイを示す。ｐ．ｉ．５時間目に原形質膜上の赤血球
血球吸着を、平行サンプルにおいて示す（下部）（横棒＝３５μｍ）。結合した赤血球の
ヘモグロビンレベルを、分光光度的に定量した（λ＝５４０ｎｍ）。光学密度（Ｏ．Ｄ．
）で表されるデータは、類似の結果を有する２つのうちの代表的な実験から得られた複製
サンプルの平均値±標準偏差を表す。^＊＝Ｐ＜０．０５対感染した対照。Ｃ、Ｂのように
擬似感染細胞またはＰＲ８感染細胞の上澄みからｐ．ｉ．２４時間目に精製したウイルス
粒子に取り込まれた［３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ標識タンパク質のオートラジオグラフィ
ー。ウイルスタンパク質（ＨＡ、ＮＰ、Ｍ１）を示す。Ｄ、平行して、ウイルス収率を、
感染力アッセイ（上部）および血球凝集アッセイ（下部）によりｐ．ｉ．２４時間目に未
治療の（白抜き棒）またはＴＩＺ処理した（黒棒）ＰＲ８−感染細胞中で決定した。ＴＣ
ＩＤ５０／ｍｌおよびＨＡＵ／ｍｌでそれぞれ表されたデータは、類似の結果を有する２
つのうちの代表的な実験から得られた複製サンプルの平均±標準偏差を表す。

図６はＡ型インフルエンザに対する３つの濃度のザナミビルおよび０．１ｕｇ／ｍＬ
のニタゾキサニドと組み合わせたザナミビルの抗ウイルス活性を示す図である。ザナミビ
ルを０．０１、０．１および１．０μＭの用量でおよび０．１μｇ／ｍｌのＮＴＺの存在
下でＡ型インフルエンザ（ＭＤＣＫ／ＰＲ８）に対して単独で試験した。

図７はＡ型インフルエンザに対する３つの濃度のザナミビルおよび１．０ｕｇ／ｍＬ
のニタゾキサニドと組み合わせたザナミビルの抗ウイルス活性を示す図である。ザナミビ
ルを０．０１、０．１および１．０μＭの用量でおよび１．０μｇ／ｍｌのＮＴＺの存在
下でＡ型インフルエンザ（ＭＤＣＫ／ＰＲ８）に対して単独で試験した。

図８はＡ型インフルエンザに対する３つの濃度のオセルタミビルおよび０．１ｕｇ／
ｍＬのニタゾキサニドと組み合わせたオセルタミビルの抗ウイルス活性を示す図である。
オセルタミビルを０．０１、０．１および１．０μＭの用量でおよび０．１μｇ／ｍｌの
ＮＴＺの存在下でＡ型インフルエンザ（ＭＤＣＫ／ＰＲ８）に対して単独で試験した。

図９はＡ型インフルエンザに対する３つの濃度のオセルタミビルおよび１．０ｕｇ／
ｍＬのニタゾキサニドと組み合わせたオセルタミビルの抗ウイルス活性を示す図である。
オセルタミビルを、０．０１、０．１および１．０Ｍの用量でおよび１．０μｇ／ｍｌの
ＮＴＺの存在下でＡ型インフルエンザ（ＭＤＣＫ／ＰＲ８）に対して単独で試験した。

図１０はＡ型インフルエンザおよびＢ型ウイルスに対するチゾキサニドの抗ウイルス
活性を示す図である。Ａ、ＭＤＣＫ細胞を、１０ＨＡＵ／１０５細胞のｍ．ｏ．ｉ．で、
異なる４種のＡ型インフルエンザウイルス株、哺乳動物のＨ１Ｎ１ ＰＲ８およびＷＳＮ
、およびＨ３Ｎ２ Ａ／ＦＩ、およびＨ５Ｎ９トリ株Ａ／Ｃｋに感染させ、吸着期間直後
に１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ（黒棒）またはビヒクル（白抜き棒）で処理した。ウイルス収
率をｐ．ｉ．２４時間目に決定した。Ｂ、インフルエンザＢ型ウイルス（Ｂ／Ｐａｒｍａ
／３／０４）に感染し、ウイルス吸着後に１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ（●）またはビヒクル
（★）で治療したＭＤＣＫ細胞中のＴＩＺの長期抗ウイルス活性。Ｃ〜Ｄ、単一段階（Ｃ
）および多段階（Ｄ）ＰＲ８ウイルス成長曲線を、Ａのように１０（Ｃ）または０．００
１（Ｄ）ｆｆｕ／細胞のｍ．ｏ．ｉ．で感染し、１０μｇ／ｍｌ ＴＩＺ（●）またはビ
ヒクル（★）で処理したＭＤＣＫ細胞について行った。ウイルス収率を、ｐ．ｉ．の指定
された時間で決定した。（Ａ〜Ｄ）未治療の対照（Ａ）のパーセントとしてまたはＨＡＵ
／ｍｌ（Ｂ〜Ｄ）で表したウイルス収率は、類似の結果を有する３つのうちの代表的な実
験から得られた複製サンプルの平均値±標準偏差を表す。^＊＝Ｐ＜０．０１；^＊＊＝Ｐ＜
０．０５。

図１１はチゾキサニドが、ヒト低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）原形質膜標
的指向化に影響を与えないことを示す図である。ＭＤＣＫ細胞を、緑色蛍光タンパク質（
ＧＦＰ）タグ付き内部移行欠損ヒト低密度リポタンパク質受容体変異体（ＬＤＬＲ−Ａ１
８−ＧＦＰプラスミド）（４０）で一時的に形質移入され、８時間後、次の１６時間ＴＩ
Ｚ（１０μｇ／ｍｌ）またはビヒクルで処理した。シクロヘキシミドで１時間タンパク質
合成をブロックしてから、原形質膜をＣｅｌｌＭａｓｋ（商標）Ｏｒａｎｇｅ原形質膜（
ＰＭ）染色を用いて染色し、ＵＶ励起フィルターを装備したＬｅｉｃａ ＤＭ−ＩＬ蛍光
顕微鏡を用いて撮像した。画像を、Ｌｅｉｃａ Ｉｍａｇｅ−Ｍａｎａｇｅｒ５００ソフ
トウェアを用いたＬｅｉｃａ ＤＣ−３００カメラで取り込んだ。ＬＤＬＲ−ＧＦＰ（緑
色）およびＰＭ（赤色）のレベルを、未治療の（上部パネル）またはＴＩＺ処理された（
下部パネル）形質移入されたＭＤＣＫ細胞中で検出した。２つの蛍光色素のオーバーレイ
を示す（マージ）。代表的な実験の同じ画像のセクション（横棒＝１０μｍ）を示す。

図１２はニタゾキサニドが、インフルエンザ様疾患に伴う症状を解消することができ
ることを示す図である。

図１３は７日の理学的検査データを示す図である。ニタゾキサニドは、その後インフ
ルエンザ様疾患に伴う呼吸器症状を低減する。

図１４は試験後の抗生物質の使用を示す図である。

図１５は日毎の組織収集物の重量を示す図である。

本発明の化合物（Ｉ）は、以下の一般反応式［式中、Ｒ６およびＲ９は、ニトロ（ＮＯ
２）およびＳＯ２Ｒ１２から選択することができる］に従って、本明細書で定義する通り
、適当な反応条件下でアロイル誘導体［式中、Ｇ１は、ヒドロキシ、クロロ、フルオロ、
ブロモ、アルコキシなどである］を、アミノチアゾール誘導体と反応させることにより合
成することができる。いくつかの実施形態において、反応を、以下の通り総称的に表す。

本発明の化合物（Ｉ）は、公開された手順ＵＳ３９５０３５１、ＵＳ６０２０３５３、
ＰＣＴ ＷＯ２００６０４２１９５Ａ１およびＵＳ２００９／００３６４６７Ａに従って
合成することもできる。

本発明の化合物の例は、それだけには限らないが、表６に列挙した以下の化合物を含む
ことができる。例のこのセットは、本発明を限定するものではない。

以上が、特に好ましい実施形態を意味するが、本発明がそれほど限定されないというこ
とが理解される。これは、様々な修正が開示された実施形態になされることができ、かか
る修正が本発明の範囲内であることを意図している当業者に行われる。

本明細書において引用した特許公報、特許出願および特許のすべては、その全体を参照
により本明細書に組み込まれる。

Claims (20)

1. i）治療有効量の式Ｉで表される化合物、または、薬学的に許容されるその塩もしくはエ
   ステル
   
   ［式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３の１つは、ＯＨまたはＯＣ（＝Ｏ）Ｑであり、ここで、Ｑは、
   Ｒ_７、ＯＲ_７、またはＮＨＲ_７であり；Ｒ_７は低級アルキル、アリール、またはヘテロア
   リールであり、場合によって置換されており；Ｒ_４、Ｒ_５、ならびにＲ_１、Ｒ_２、および
   Ｒ_３の残りは、Ｈ、であり；Ｒ_６がＮＯ_２であり、Ｒ_９がＨである］
   および
   ii）薬学的に許容される賦形剤
   を含む、インフルエンザウィルス感染の予防または治療のための医薬組成物。
2. Ｒ_１が、ＯＨまたはＯＣ（＝Ｏ）Ｑであり、ここで、Ｑは、Ｒ_７、ＯＲ_７、またはＮＨ
   Ｒ_７であり；Ｒ_７は、低級アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、場合によ
   って置換されており；Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_２、およびＲ_３が、Ｈである、請求項１に記載の医
   薬組成物。
3. 前記式Ｉの化合物が下記の化学式により表される化合物から選択される、請求項１に記
   載の医薬組成物
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   。
4. 前記式Ｉの化合物を、ノイラミニダーゼ阻害薬、ワクチン、免疫賦活薬、アダマンチン
   類似体、組換えシアリダーゼ融合タンパク質、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは、
   ペグ化インターフェロンと組み合わせて投与する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の
   医薬組成物。
5. 前記式Ｉの化合物がワクチンおよび免疫賦活薬の組み合わせで投与される、請求項１〜
   ３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
6. ノイラミニダーゼ阻害薬が、オセルタミビル、ザナミビル、ペルミビル、ＲＷＪ−２７
   ０２０１、ＤＡＮＡ、およびＣＳ−８９５８からなる群から選択されるか；前記アダマン
   チン類似体が、アマンタジンおよびリマンタジンからなる群から選択されるか；免疫賦活
   薬がポリオキシドニウムであるか；組換えシアリダーゼ融合タンパク質がＦｌｕｄａｓｅ
   （登録商標）であるか；または、アンチセンスオリゴヌクレオチドがＮｅｕｇｅｎｅ（登
   録商標）アンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーを含む、
   請求項４または５に記載の医薬組成物。
7. 組み合わせを、逐次的な方法または実質的に同時の方式で投与する、請求項４〜６のい
   ずれか１項に記載の医薬組成物。
8. 前記予防または治療がインフルエンザウイルスの感染に対するものであり、インフルエ
   ンザウイルス感染症が、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ１Ｎ２
   、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、およびＨ１０Ｎ７から選択されるウイルスによって引
   き起こされる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
9. インフルエンザ治療のための、（ａ）請求項１〜３のいずれか１項に規定される式Ｉの
   化合物または薬学的に許容されるその塩、および（ｂ）ノイラミニダーゼ阻害薬、免疫賦
   活薬、アダマンチン類似体、組換えシアリダーゼ融合タンパク質、または、アンチセンス
   オリゴヌクレオチドを含むキット。
10. 前記ノイラミニダーゼ阻害薬が、オセルタミビル、ザナミビル、ペルミビル、ＲＷＪ−
    ２７０２０１、ＤＡＮＡ、およびＣＳ−８９５８からなる群から選択されるか；前記アダ
    マンチン類似体が、アマンタジンおよびリマンタジンからなる群から選択されるか；免疫
    賦活薬がポリオキシドニウムであり；組換えシアリダーゼ融合タンパク質がＦｌｕｄａｓ
    ｅ（登録商標）であるか；または、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、Ｎｅｕｇｅｎｅ
    （登録商標）アンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、請求項９
    に記載のキット。
11. ウイルス糖タンパク質の成熟をブロックする、インフルエンザウィルス感染の治療のた
    めの、請求項１に記載の式Iの化合物または薬学的に許容されるその塩もしくはエステル
    の化合物を薬学的に許容される治療有効量含む、医薬組成物。
12. エンドグリコシダーゼ−Ｈ消化に対する抵抗性に先行する段階でウイルス血球凝集素の
    成熟をブロックする、インフルエンザウィルス感染の治療のための、請求項１に記載の式
    Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルの化合物を薬学的に許容さ
    れるその塩もしくはエステルの治療有効量で含む、医薬組成物。
13. 前記化合物が、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物または薬学的に許容
    されるその塩もしくはエステルである、請求項１１に記載の医薬組成物。
14. 式Ｉの化合物との相乗効果をもたらすのに十分な量の他の抗ウイルス薬またはワクチン
    をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
15. 前記組成物が、経口的に投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
16. 前記式Ｉで表される化合物が１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５０
    ０ｍｇおよび６００ｍｇからなる群から選択される用量で投与される、請求項１に記載の
    医薬組成物。
17. 前記組成物が１日２回で投与され、前記式Ｉで表される化合物を３００ｍｇおよび６０
    ０ｍｇからなる群から選択される用量を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
18. 前記組成物が５日以上投与されず、前記式Ｉの組成物を３００ｍｇの用量で含む、請求
    項１７に記載の医薬組成物。
19. 前記式Ｉで表される化合物がニタゾキサニドであり、前記ニタゾキサニドが、３００ｍ
    ｇ用量で、１日２回投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
20. 前記ニタゾキサニドが調節放出二重層錠剤として投与される、請求項１９に記載の医薬
    組成物。