BR112021005955A2

BR112021005955A2 - agentes e métodos para modular atividade de patógeno

Info

Publication number: BR112021005955A2
Application number: BR112021005955-5A
Authority: BR
Inventors: Michael P. Jennings; Jennifer L. Edwards; Christopher J. DAY; Johnson MAK
Original assignee: Griffith University; Research Institute At Nationwide Children's Hospital
Priority date: 2018-09-28
Filing date: 2019-09-30
Publication date: 2021-07-27
Also published as: SG11202103183PA; EP4295864A3; WO2020061649A1; CA3115048A1; EP3856196B1; US20210338685A1; CN113164494A; EP3856196A1; CA3115048C; EP3856196A4; AU2019348194A1; CA3224977A1; DK3856196T3; KR20210069086A; CN113164494B; MX2021003730A; EP4295864A2

Abstract

AGENTES E MÉTODOS PARA MODULAR ATIVIDADE DE PATÓGENO. A presente revelação se refere ao uso de ligantes de receptor complementar 3, os quais incluem ligantes do domínio I da subunidade alfa desse receptor, em métodos, composições e artigos/dispositivos para inibir a interação de patógenos em uma célula que expressa receptor complementar 3 e para tratar ou inibir o desenvolvimento de infecções causadas por tais patógenos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “AGENTES E MÉTODOS PARA MODULAR ATIVIDADE DE PATÓGENO”

REFERÊNCIA CRUZADA PARA APLICAÇÕES RELACIONADAS

[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório dos Estados Unidos nº 62/739.025 intitulado "Agents and methods for modulating pathogen activity" depositado em 28 de setembro de 2019, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência em sua totalidade.

FINANCIAMENTO DO GOVERNO

[002] Esta invenção foi feita com o apoio do governo sob o Grant nº NIH AI134848 concedido pelo National Institutes of Health. O Governo tem certos direitos sobre a invenção.

CAMPO DA INVENÇÃO

[003] Esta invenção se refere geralmente ao uso de ligantes do receptor complementar 3, incluindo ligantes do domínio I da subunidade alfa deste receptor, em métodos, composições e artigos/dispositivos para inibir a interação de patógenos com uma célula que expressa o receptor complementar 3 e para tratar ou inibir o desenvolvimento de infecções causadas por tais patógenos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[004] Integrinas são receptores de superfície celular presentes em muitos organismos do reino Animalia, incluindo a esponja simples e cnidária (Burke RD, 1999. Int Rev Cytol 191: 257-284; Hughes AL, 2001. J Mol Evol 52 (1): 63-72), e estão frequentemente envolvidos na adesão celular às proteínas da matriz extracelular, adesão célula-célula e ligação a ligantes derivados do complemento (Giancotti FG & Ruoslahti E, 1999. Science 285 (5430): 1028-1032; Hynes RO,

2002. Cell 110 (6): 673-687). Esses receptores são compostos por duas subunidades de glicoproteína transmembrana, alfa (α) e beta (β), com diferentes combinações αβ, resultando em diferentes especificidades de ligante (Agramonte-Hevia J, et al., 2002. FEMS Immunol Med Microbiol 34 (4): 255-266).

[005] O receptor complementar 3 (CR3, também conhecido como Mac-1, CD11b/CD18, integrina αmβ2) é um membro da família β2 integrina que também contém LFA-1 (CD11a/CD18, αLβ2), p150/95 (CD11c/CD18, αXβ2) e CD11d/CD18 (αDβ2) (Todd RF, 1996. J Clin Invest 98 (1): 1-2; Yakubenko VP, et al.,

2008. Exp Cell Res 314 (14): 2569-2578). CR3 é expresso principalmente em leucócitos, mas também é conhecido por ser expresso em células cervicais (Edwards JL, et al., 2001, Cell Microbiol. 2001 3 (9): 611-22) e células epiteliais retais (Hussain LA, et al., 1995. Clin Exp Immunol 102 (2): 384-388). Embora o ligante primário de CR3 seja iC3b, CR3 é um receptor promíscuo com uma ampla variedade de ligantes relatados (Yakubenko VP, et al., 2002. J Biol Chem 277 (50): 48635-48642). Além disso, CR3 é usado para promover doenças infecciosas por vários patógenos, incluindo estafilococos (DuMont AL, et al., 2013. Proc Natl Acad Sci USA 110 (26): 10794-10799; Antal JM, et al., 1992. Infect Immun 60 (3): 1114-1121), estreptococos (Orrskog S, et al., 2013. Mbio 4 (1)), Mycobacterium tuberculosis (Cywes C, et al., 1996.

Infect Immun 64 (12): 5373-5383), Candida albicans (Forsyth CB & Mathews HL, 1996. Cell Immunol 170 (1): 91-100), Bordetella pertussis (Relman D, et al., 1990. Cell 61 (7): 1375-1382), e Neisseria gonorrhoeae (Edwards JL, et al., 2001, supra; Jennings MP, et al., 2011. Cell Microbiol 13 (6): 885-896).

[006] A subunidade alfa (CD11b) de CR3 contém um domínio de inserção de ~200 aminoácidos, ou domínio I, que é responsável pela ligação da proteína complementar iC3b (Diamond MS, et al., 1993. J Cell Biol 120 (4) : 1031-1043), bem como fibrinogênio (Wright SD, et al., 1988. Proc Natl Acad Sci USA 85 (20): 7734-7738), molécula de adesão intercelular 1 (Diamond MS, et al., 1990 J Cell Biol 111 (6 Pt 2): 3129-3139), fator inibidor de neutrófilos (Moyle M, et al., 1994. J Biol Chem 269 (13): 10008-10015), heparina (Diamond MS, et al., 1995. J Cell Biol 130 (6): 1473-1482), e um dissacarídeo de pili de Neisseria gonorrhoeae (Jennings MP, et al., 2011, supra). Uma estrutura cristalina do domínio I de CD11b mostrou que o domínio I é uma proteína de dobra de Rossmann com sete hélices α circundando seis folhas β

(McCleverty CJ & Liddington RC, 2003. Biochem J 372 (Pt 1): 121-127) Estudos anteriores indicaram que o domínio I de CD11b tem função de lectina que reconhece estruturas de galactose terminais (Jennings MP, et al., 2011, supra).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[007] A presente invenção é baseada em parte na descoberta inesperada de que certos ligantes de moléculas pequenas não carboidratos do domínio da subunidade I alfa de CR3 são capazes de inibir a ligação de patógenos com células que expressam CR3 e/ou a entrada de patógenos nessas células.

Esta descoberta foi reduzida à prática em métodos, composições e artigos para inibir interações de patógenos com células que expressam CR3 e para inibir ou tratar infecções patogênicas, conforme descrito a seguir.

[008] Consequentemente, em um aspecto, a presente invenção fornece métodos para inibir uma interação de um patógeno com uma célula que expressa o polipeptídeo CR3.

Estes métodos geralmente compreendem, consistem ou consistem essencialmente em contatar a célula com um ligante de molécula pequena do domínio I de subunidade alfa de CR3, inibindo assim a interação do patógeno com a célula. A interação pode incluir uma ou ambas as ligações do patógeno à célula e a entrada do patógeno na célula. A célula pode ser uma célula imune, exemplos ilustrativos das quais incluem células mieloides, como monócitos (por exemplo, macrófagos incluindo macrófagos circulantes e macrófagos residentes em tecidos, como células de Kupffer), neutrófilos, mastócitos e células dendríticas, bem como células linfóides, incluindo leucócitos, como células assassinas naturais e células T citotóxicas. Alternativamente, a célula pode ser uma célula epitelial, exemplo representativo da qual inclui células epiteliais cervicais, células epiteliais retais e células epiteliais faríngeas. O patógeno pode ser qualquer patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo CR3, incluindo, por exemplo, bactérias (por exemplo, Neisseria, Streptococcus, Mycobacterium, Staphylococcus, Bordetella, Escherichia e Pseudomonas), fungos (por exemplo, Candida e Cryptococcus), protozoários (por exemplo, Toxoplasma) e vírus (por exemplo, flavivírus, ortomixovírus, paramixovírus, retrovírus, coronavírus, filovírus, arenavírus, rabdovírus e herpesvírus).

[009] Outro aspecto da presente invenção fornece métodos para inibir ou tratar uma infecção de um sujeito com um patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo do receptor complementar 3 (CR3). Estes métodos geralmente compreendem, consistem ou consistem essencialmente na administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio I de subunidade alfa de CR3, para assim inibir ou tratar a infecção do sujeito com o patógeno.

[0010] Ainda outro aspecto da presente invenção fornece métodos para inibir ou tratar a infecção de um sujeito com um vírus que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo do receptor complementar 3 (CR3). Estes métodos geralmente compreendem, consistem ou consistem essencialmente na administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um ligante do domínio alfa da subunidade I de CR3, para assim inibir ou tratar a infecção do sujeito com o vírus. Em modalidades específicas, o vírus é um vírus com envelope, exemplos representativos dos quais incluem flavivírus, ortomixovírus, paramixovírus, retrovírus, coronavírus, filovírus, arenavírus, rabdovírus e herpesvírus. Em modalidades específicas, o vírus é um retrovírus, como o vírus da imunodeficiência humana (HIV).

Em modalidades específicas, a quantidade eficaz é aquela que inibe a transmissão do vírus ao sujeito e/ou a propagação do vírus dentro do sujeito.

[0011] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, o ligante pode ser formulado para entrega oral, para entrega sistêmica ou entrega tópica. Em algumas modalidades, o ligante é formulado para entrega intrauterina.

[0012] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, o ligante pode ser administrado simultaneamente com um agente antimicrobiano.

[0013] Em aspectos relacionados, a presente invenção fornece composições tópicas, adequadamente para inibir ou tratar uma infecção com um patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo do receptor complementar 3 (CR3). Estas composições geralmente compreendem, consistem ou consistem essencialmente em um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio da subunidade alfa I de CR3 e, opcionalmente, um transportador farmaceuticamente aceitável. Adequadamente, o ligante de molécula pequena é formulado para aplicação tópica na pele ou cavidade corporal.

Em exemplos não limitativos deste tipo, o ligando é formulado como uma espuma, creme, lavagem, gel, spray, supositório, pessário, loção, pomada, óvulo, tampão ou aerossol. Em algumas modalidades, o ligante é compreendido em um artigo (por exemplo, revestido em uma superfície do artigo), como um dispositivo anticoncepcional. Em modalidades específicas, o dispositivo anticoncepcional é um dispositivo intrauterino, barreira intravaginal, esponja intravaginal, preservativo masculino ou preservativo feminino.

[0014] Em aspectos relacionados, a presente invenção fornece composições para terapia intrauterina ou profilaxia de uma infecção com um patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo do receptor complementar 3 (CR3).

Estas composições geralmente compreendem, consistem ou consistem essencialmente em um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio da subunidade alfa I de CR3 e, opcionalmente, um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0015] Um outro aspecto da presente invenção fornece artigos, adequadamente para inibir ou tratar uma infecção com um patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo do receptor do complemento 3 (CR3). Estes artigos geralmente compreendem um ligante de pequena molécula não carboidrato do domínio alfa da subunidade I de CR3 em uma quantidade suficiente para inibir ou tratar a infecção em um indivíduo que usa o artigo e, opcionalmente, um transportador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o artigo é selecionado a partir de uma luva, dispositivo intrauterino, distribuidor vaginal, anel vaginal, dispositivo do tipo barreira intravaginal, esponja intravaginal, preservativo masculino e preservativo feminino. Em modalidades específicas, o artigo é um dispositivo anticoncepcional, exemplos representativos dos quais incluem dispositivos intrauterinos, barreiras intravaginais, esponjas intravaginais, preservativos masculinos e femininos. O patógeno pode ser qualquer patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo CR3, incluindo, por exemplo, bactérias, leveduras, parasitas e vírus. Em algumas modalidades, o patógeno é um vírus, por exemplo, um vírus com envelope, exemplos representativos dos quais incluem ortomixovírus, paramixovírus, retrovírus, coronavírus, filovírus, arenavírus, rabdovírus e herpesvírus. Em modalidades específicas, o vírus é um retrovírus, como o vírus da imunodeficiência humana (HIV).

[0016] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, as composições podem compreender ainda um agente antimicrobiano.

[0017] O ligante de pequena molécula sem carboidrato é tipicamente um composto orgânico. Em algumas modalidades, o ligante é um composto de dibenzoazepina de Fórmula (I): em que: R é hidrogênio, hidroxila, alquila NHC1-4, alquila OCOC1-4 ou oxo; X e Y são independentemente hidrogênio ou halogênio; Z é alquila C1-4, CONR1R2, alquileno C1-4NR1R2, alquileno C1-4 (NO) R1R2 ou quinuclidinila; R1 e R2 são independentemente hidrogênio ou alquil C1-6 opcionalmente substituído;

ou R1 e R2 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual os mesmos são fixados, formam um anel de heterocicloalquila de 3 a 8 membros que pode ser opcionalmente substituído; e A ligação C10-C11 é uma ligação simples ou dupla; em que quando R é oxo, a ligação C10-C11 é uma ligação única; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0018] Em algumas modalidades, o composto de dibenzoazepina é selecionado de carbamazepina, oxcarbazepina, acetato de eslicarbazepina, clomipramina, desipramina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, metapramina, opipramol, quinupramina e trimipramina. Em modalidades específicas, o composto de dibenzoazepina é carbamazepina.

[0019] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares aqui, o composto de dibenzoazepina é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para o tratamento da epilepsia.

[0020] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, o composto de dibenzoazepina é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para o tratamento da dor neuropática.

[0021] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, o composto de dibenzoazepina é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para o tratamento de um transtorno bipolar.

[0022] Em outras modalidades, o ligante de molécula pequena não carboidrato é um composto derivado de ácido antranílico de Fórmula (II): em que: R3 é alquila C1-6, halogênio ou trifluorometila; e R4 e R5 são independentemente hidrogênio, halogênio, trifluorometila ou alquila C1-6; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0023] Adequadamente, o composto derivado de ácido antranílico é selecionado a partir de ácido flufenâmico, ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico e ácido tolfenâmico.

Em modalidades específicas, o composto derivado do ácido antranílico é o ácido flufenâmico.

[0024] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, em algumas modalidades, o patógeno cuja infecção é inibida ou tratada com o composto derivado de ácido antranílico é diferente de uma bactéria Gram-positiva.

[0025] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares aqui, o composto derivado de ácido antranílico é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para fornecer analgesia.

[0026] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares neste documento, o composto derivado de ácido antranílico é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para o tratamento da inflamação.

[0027] Em outras modalidades, o não carboidrato, ligante de molécula pequena é um composto derivado de ácido fenilpropiônico de Fórmula (III): em que: R6 é hidrogênio, CH3 ou CHF2; R7 é hidrogênio ou NH2;

R8 é hidrogênio ou OH; R9 é hidrogênio ou alquila C1-4; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0028] O composto derivado de ácido fenilpropiônico é adequadamente selecionado a partir de metildopa, carbidopa, éster metílico de metildopa, éster etílico de metildopa, levodopa, etilevodopa (éster etílico de levodopa), metirosina, (α-metiltirosina) e α-difluorometildopa. Em modalidades específicas, o composto derivado do ácido fenilpropiônico é metildopa.

[0029] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares aqui, o composto derivado de ácido fenilpropiônico é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para o tratamento da hipertensão.

[0030] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares aqui, o composto derivado de ácido fenilpropiônico é administrado, em algumas modalidades, em uma dosagem que não é eficaz para o tratamento de acidente vascular cerebral.

[0031] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares aqui, o sujeito a quem o não carboidrato, ligante de pequena molécula do domínio da subunidade alfa I de CR3, em algumas modalidades, é administrado é uma mulher.

[0032] Em qualquer um dos aspectos amplamente descritos acima e em outros lugares aqui, o sujeito a quem o não carboidrato, ligante de pequena molécula do domínio alfa da subunidade I de CR3, em algumas modalidades, é administrado é um homem.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0033] A Figura 1 é uma representação gráfica que mostra a identificação da carbamazepina em uma tela de ressonância de plasmão de superfície. O ponto destacado é a carbamazepina (amostra CA #: SN00838842, peso molecular 236g/mol). Os pontos verdes representam 384 fármacos testadas na tela.

Pontos vermelhos representam controles. Os pontos azuis são pontos de dados de correção de solvente para permitir mudanças na refração causadas pela presença de 1% de dimetilsulfóxido (DMSO) em solução salina tamponada com fosfato (PBS).

[0034] A Figura 2 é uma representação gráfica que mostra a identificação do ácido flufenâmico em uma tela de ressonância de plasmão de superfície. O ponto destacado é o ácido flufenâmico (amostra CA#: SN01004628, peso molecular 281g/mol). Os pontos verdes representam 384 fármacos testadas na tela. Pontos vermelhos representam controles. Os pontos azuis são pontos de dados de correção de solvente para permitir mudanças na refração causadas pela presença de 1% de DMSO no PBS.

[0035] A Figura 3 é uma representação gráfica que mostra a identificação de metildopa em uma tela de ressonância de plasmão de superfície. O ponto destacado é a metildopa (amostra CA#: SN01004410, peso molecular 211g/mol). Os pontos verdes representam 384 fármacos testadas na tela.

Pontos vermelhos representam controles. Os pontos azuis são pontos de dados de correção de solvente para permitir mudanças na refração causadas pela presença de 1% de DMSO no PBS.

[0036] A Figura 4 é uma representação gráfica que mostra uma curva cinética de ciclo único de carbamazepina contra o domínio I humano recombinante (domínio rI) do ensaio de ressonância de plasmão de superfície CD11b. A concentração máxima foi de 10 nM com uma diluição de 1: 2 até 0,625 nM.

[0037] A Figura 5 é uma representação gráfica que mostra uma curva cinética de ciclo único de ácido flufenâmico contra o domínio-rI humano do ensaio de ressonância de plasmão de superfície CD11b. A concentração máxima foi de 20 nM com uma diluição de 1: 2 até 1,25 nM.

[0038] A Figura 6 é uma representação gráfica que mostra uma curva cinética de ciclo único de metildopa contra o domínio-rI humano do ensaio de ressonância de plasmão de superfície CD11b. A concentração máxima foi de 5 nM com uma diluição de 1:2 até 0,3125 nM.

[0039] A Figura 7 é uma representação gráfica que mostra o efeito da carbamazepina na aderência das células CHO gonocócicas. Um ensaio de adesão fluorométrica foi usado para determinar o efeito da carbamazepina na adesão gonocócica ao CR3. As unidades de fluorescência arbitrária (FU; eixo y), indicativas de aderência bacteriana, foram registradas 1 h após o desafio de CHO-neo (células de controle, não expressando CR3) e células CHO-CR3 (expressando CR3) com a proteína fluorescente verde (GFP) - expressando a cepa de N. gonorrhoeae, MS11gfp. Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da aderência bacteriana dependente de CR3. Uma diminuição dependente da dose na adesão gonocócica às células CHO-CR3, mas não às células CHO-neo, foi observada na presença de concentrações crescentes de carbamazepina. A presença de 1 µM de carbamazepina diminuiu a aderência gonocócica às células CHO-CR3 a um nível que não foi significativamente diferente do registrado para CHO-neo (p ≥ 0,057) ou células não infectadas (p ≥ 0,067).

[0040] A Figura 8 é uma representação gráfica que mostra o efeito da metildopa na aderência das células CHO gonocócicas. Um ensaio de aderência fluorométrico foi usado para determinar o efeito da metildopa na aderência gonocócica ao CR3. Unidades de fluorescência arbitrária (FU; eixo y), indicativas de aderência bacteriana, foram registradas 1 h após o desafio de células CHO-neo e CHO-CR3 com a proteína fluorescente verde (GFP) que expressa a cepa de N.

gonorrhoeae, MS11gfp. Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da aderência bacteriana dependente de CR3. Uma diminuição dependente da dose na aderência gonocócica às células CHO-CR3, mas não às células CHO-neo, foi observada na presença de concentrações crescentes de metildopa. A presença de metildopa 100 µM diminuiu a aderência gonocócica às células CHO-CR3 para um nível que não foi significativamente diferente do registrado para CHO-neo (p ≥ 0,23) ou células não infectadas (p ≥ 0,25).

[0041] A Figura 10 é uma representação gráfica que mostra o efeito da carbamazepina na aderência de N.

gonorrhoeae às células PEX. Um ensaio de adesão fluorométrica foi usado para determinar o efeito da carbamazepina na adesão gonocócica ao CR3. Unidades de fluorescência arbitrária (eixo y), indicativas de aderência bacteriana, foram registradas 1 h após o desafio de células epiteliais cervicais humanas primárias (isto é, PEX) com cepas de N.

gonorrhoeae que expressaram proteína fluorescente verde (GFP). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da aderência bacteriana dependente de CR3. Uma redução significativa (p ³ 0,0001) dependente da dose na aderência gonocócica às células PEX foi observada para todas as cepas testadas na presença de concentrações crescentes de carbamazepina quando comparadas às infecções tratadas com DMSO (controle de veículo). A este respeito, ocorreu uma inibição de aderência superior a 95% na presença de 1 µM de carbamazepina para todas as cepas testadas.

[0042] A Figura 10 é uma representação gráfica que mostra o efeito da carbamazepina na aderência de N.

gonorrhoeae que expressaram proteína fluorescente verde (GFP). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da aderência bacteriana dependente de CR3. Uma redução significativa (p³ 0,0001) dependente da dose na aderência gonocócica às células PEX foi observada para todas as cepas testadas na presença de concentrações crescentes de carbamazepina quando comparadas às infecções tratadas com DMSO (controle de veículo). A este respeito, ocorreu uma inibição de aderência superior a 95% na presença de 1 µM de carbamazepina para todas as cepas testadas.

[0043] A Figura 11 é uma representação gráfica que mostra o efeito da metildopa e do ácido flufenâmico na aderência da cepa MS11 de N. gonorrhoeae às células PEX. Um ensaio de aderência fluorométrico foi usado para determinar o efeito da metildopa e do ácido flufenâmico na aderência gonocócica ao CR3. Unidades de fluorescência arbitrária (FU, eixo y), indicativas de aderência bacteriana, foram registradas 1 h após o desafio de células PEX com a proteína fluorescente verde (GFP) expressando a cepa de N.

gonorrhoeae, MS11gfp. Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da aderência bacteriana dependente de CR3. Uma diminuição significativa (p ≤ 0,0001) dependente da dose na aderência gonocócica às células PEX foi observada na presença de concentrações crescentes de metildopa e ácido flufenâmico. É de notar que a presença de metildopa 100 µM diminuiu a aderência gonocócica às células PEX para um nível que não era significativamente (p ≥ 0,234) diferente do registado para células não infectadas.

[0044] A Figura 12 é uma representação gráfica que mostra o efeito da dose de carbamazepina no tratamento de células PEX infectadas com cepa MS11 de N. gonorrhoeae. Para estabelecer a infecção, as células PEX foram desafiadas com cepa MS11 de N. gonorrhoeae por 90 min. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 horas ou 48 horas na presença ou ausência de DMSO (controle de veículo a 1%), carbamazepina (CZ) ou ceftriaxona (controle positivo), conforme observado. A porcentagem de N. gonorrhoeae que sobreviveu ao tratamento com carbamazepina ou ceftriaxona (eixo y) foi determinada como uma função das bactérias que sobreviveram ao tratamento com DMSO no mesmo ponto de tempo (definido como 100%). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana. Em todas as concentrações testadas, o tratamento com carbamazepina resultou em uma diminuição significativa (p 0,0001) em N. gonorrhoeae viável. Mais de 98% de morte gonocócica ocorreu com concentrações de carbamazepina maiores ou iguais a 10 nM.

[0045] A Figura 13 é uma representação gráfica que mostra o efeito de um tratamento com duas doses de carbamazepina de células PEX infectadas com cepa MS11 de N.

gonorrhoeae. As células PEX foram desafiadas com cepa MS11 de N. gonorrhoeae por 90 min para estabelecer a infecção. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 h ou 48 h (48h - 1 dose) na presença ou ausência de DMSO (controle de veículo a 1%), carbamazepina (CZ) ou ceftriaxona (controle positivo), conforme observado. Quando indicado, uma segunda dose de carbamazepina (na concentração observada) foi adicionada 24h após a infecção, e as infecções puderam prosseguir por mais 24h (48h - 2 doses). A porcentagem de N. gonorrhoeae que sobreviveu ao tratamento com carbamazepina ou ceftriaxona (eixo y) foi determinada como uma função das bactérias que sobreviveram ao tratamento com DMSO no mesmo ponto de tempo (definido como 100%). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana. Em cada ponto de tempo, e para todas as concentrações testadas, o tratamento com carbamazepina resultou em uma diminuição significativa (p  0,0001) em N. gonorrhoeae viável. Mais de 99% de morte gonocócica ocorreu em 24h com uma única dose de 100 nM de carbamazepina; mais de 99,95% de morte de gonococos ocorreu 48h após a infecção com 2 - 100 nM de doses de carbamazepina, aplicadas com 24h de intervalo.

[0046] A Figura 14 é uma representação gráfica que mostra o efeito de um tratamento de dose única com carbamazepina de células PEX infectadas com isolados de N.

gonorrhoeae de passagem baixa. Para estabelecer a infecção, as células PEX foram desafiadas com N. gonorrhoeae por 90 min usando os isolados de passagem baixa observados. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 h ou 48 h na presença ou ausência de DMSO (1%, controle de veículo), carbamazepina (10 µM, CZ) ou ceftriaxona (0,5 µg/mL, controle positivo). A porcentagem de N. gonorrhoeae que sobreviveu à carbamazepina, ceftriaxona ou nenhum tratamento (eixo y) foi determinada como uma função das bactérias que sobreviveram ao tratamento com DMSO no mesmo ponto de tempo (definido como 100%, não mostrado). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana. O tratamento com carbamazepina resultou em uma diminuição significativa (p  0,0001) na capacidade de sobrevivência de cada cepa testada.

Mais de 99% de morte gonocócica ocorreu com um tratamento de 24h com carbamazepina 10 µM.

[0047] A Figura 15 é uma representação gráfica que mostra o efeito de um tratamento de dose única com carbamazepina de células PEX infectadas com N. gonorrhoeae multirresistente. As células PEX foram desafiadas com as cepas de N. gonorrhoeae multirresistentes durante 90 min para estabelecer a infecção. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 h ou 48 h na presença ou ausência de DMSO (1%, controle de veículo), carbamazepina (10 µM, CZ) ou ceftriaxona (0,5 µg/mL, controle positivo).

A porcentagem de N. gonorrhoeae que sobreviveu à carbamazepina, ceftriaxona ou nenhum tratamento (eixo y) foi determinada como uma função das bactérias que sobreviveram ao tratamento com DMSO no mesmo ponto de tempo (definido como 100%, não mostrado). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado.

Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana. O tratamento com carbamazepina resultou em uma diminuição significativa (p 0,0001) na capacidade de sobrevivência de cada cepa multirresistente testada. Mais de 99% de morte gonocócica ocorreu com um tratamento de 24h com carbamazepina 10 µM.

[0048] A Figura 16 é uma representação gráfica que mostra uma cepa MS11 de N. gonorrhoeae, ensaio de cura de infecção sequencial com carbamazepina. Para determinar se a pequena porcentagem observada de N. gonorrhoeae que sobreviveu a um tratamento de 24 horas desenvolveu resistência ao tratamento de células PEX com carbamazepina,

foram realizados ensaios de infecção sequenciais. As células PEX foram desafiadas com uma cepa MS11 de N. gonorrhoeae por 90 min para estabelecer a infecção e então tratadas com 1% de DMSO (controle de veículo) ou 10 µM de carbamazepina (Cz).

As infecções puderam prosseguir por 24 horas, após as quais as células PEX foram lisadas e os gonococos viáveis foram enumerados por diluições em placas em série do lisado de células PEX (infecção 1; I-1). Essas colônias gonocócicas de “ruptura” foram colhidas e então usadas como inóculo para novos testes de infecção de 24 horas (infecção 2; I-2). O eixo y mostra a porcentagem de unidades formadoras de colônias viáveis, conforme determinado em função de cada inóculo de infecção respectivo. Para ambas as infecções (infecção 1 e infecção 2), uma diminuição significativa (p ≤ 0,0001) na sobrevivência gonocócica ocorreu na presença de carbamazepina quando comparada com infecções tratadas com DMSO, e 100% de morte gonocócica foi observada após a segunda infecção. Assim, esses estudos sequenciais de infecção revelaram que a população sobrevivente inicial de gonococos não era mais resistente ao tratamento de células PEX com carbamazepina do que o inóculo de infecção inicial. Todos os ensaios foram realizados em triplicado em 3 ocasiões separadas com N. gonorrhoeae cepa MS11. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana.

[0049] A Figura 17 é uma representação gráfica que descreve a Aderência de HIV dependente de CR3 a Células CHO.

Um ensaio de aderência fluorométrico foi usado para determinar a capacidade do HIV de se ligar às células CHO de um modo dependente de CR3. Unidades arbitrárias de fluorescência (eixo y), indicativas de aderência, foram registradas 2 h após o desafio de células CHO-neo e CHO-CR3 com HIV marcado com fluorescência (10 ng de equivalente de proteína de capsídeo de HIV p24 em 100 µL de meio de cultura F12) Duas cepas de HIV foram testadas, NLAD8 (também conhecido como NL4-3 AD8) e NL4-3, cada uma das quais ligada a células CHO que expressam CR3, mas não expressam CR3. A este respeito, a fluorescência registrada para células CHO- neo que foram desafiadas com HIV não foi significativamente diferente (p ≥ 0,12) das células não infectadas. Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. O teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da adesão do HIV dependente de CR3 às células CHO.

[0050] A figura 18 é uma representação gráfica que mostra o efeito da carbamazepina na adesão às células HIV CHO. Um ensaio de adesão fluorométrica foi usado para determinar o efeito da carbamazepina na adesão do HIV ao

CR3. Unidades arbitrárias de fluorescência (eixo y), indicativas de aderência, foram registradas 2 h após o desafio de células CHO-neo e CHO-CR3 com HIV marcado com fluorescência (10 ng de equivalente de proteína de capsídeo de HIV p24 em 100 µL de meio de cultura F12) cepas, NLAD8 e NL4-3. Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da adesão ao HIV dependente de CR3. Uma diminuição significativa (p ≤ 0,0001) dependente da dose na adesão do HIV às células CHO-CR3, mas não às células CHO-neo, foi observada para ambas as cepas na presença de concentrações crescentes de carbamazepina. A presença de 1 µM de carbamazepina diminuiu a adesão do HIV às células CHO-CR3 para um nível que não foi significativamente diferente do registrado para as células CHO-neo (p ≥ 0,061 para NL4-3; p ≥ 0,8 para NLAD8) ou células não infectadas (p ≥ 0,067).

[0051] A Figura 19 é uma representação gráfica que mostra o efeito da carbamazepina na adesão às células HIV PEX. Um ensaio de adesão fluorométrica foi usado para determinar o efeito da carbamazepina na adesão do HIV ao CR3. Unidades arbitrárias de fluorescência (eixo y), indicativas de aderência, foram registradas 2 h após o desafio de células epiteliais cervicais humanas primárias (ou seja, PEX) com HIV marcado com fluorescência (10 ng de equivalente de proteína p24 do capsídeo do HIV em 100 µL de F12 meios de cultura), cepas, NLAD8 e NL4-3. Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da adesão dependente de CR3. Uma diminuição significativa (p ≤ 0,0001) dependente da dose na adesão do HIV NLAD8 e NL4-3 às células PEX foi observada na presença de concentrações crescentes de carbamazepina.

[0052] A Figura 20 é uma representação gráfica que mostra o efeito do tratamento de dose única com metildopa de células PEX infectadas com isolados de N. gonorrhoeae de baixa passagem. Para estabelecer a infecção, as células PEX foram desafiadas com N. gonorrhoeae por 90 min usando os isolados de passagem baixa observados. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 h ou 48 h na presença ou ausência de DMSO (1%, controle de veículo), metildopa (10 µM, Md) ou ceftriaxona (0,5 µg/mL, controle positivo, Cfx). A porcentagem de N. gonorrhoeae que sobreviveu ao tratamento com metildopa ou ceftriaxona (eixo y) foi determinada como uma função das bactérias que sobreviveram ao tratamento com DMSO no mesmo ponto de tempo (definido como 100%, não mostrado). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-

Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana. O tratamento com metildopa resultou em uma diminuição significativa (p  0,0001) na capacidade de sobrevivência de cada cepa testada. Mais de 99% de morte gonocócica ocorreu com um tratamento de 24h com metildopa 10 µM.

[0053] A Figura 21 é uma representação gráfica que mostra o efeito do tratamento de dose única com metildopa de células PEX infectadas com N. gonorrhoeae multirresistente.

As células PEX foram desafiadas com as cepas de N.

gonorrhoeae multirresistentes durante 90 min para estabelecer a infecção. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 h ou 48 h na presença ou ausência de DMSO (1%, controle de veículo), metildopa (10 µM, Md) ou ceftriaxona (0,5 µg/mL, controle positivo; Cfx). A porcentagem de N. gonorrhoeae que sobreviveu ao tratamento com metildopa ou ceftriaxona (eixo y) foi determinada como uma função das bactérias que sobreviveram ao tratamento com DMSO no mesmo ponto de tempo (definido como 100%, não mostrado). Os dados apresentados são o resultado de 3 ensaios separados realizados em triplicado. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da sobrevivência bacteriana. O tratamento com metildopa resultou em uma diminuição significativa (p  0,0001) na capacidade de sobrevivência de cada cepa multirresistente testada. Mais de 99% de morte gonocócica ocorreu com um tratamento de 24h com metildopa 10 µM.

[0054] A Figura 22 é uma representação gráfica que mostra o efeito da carbamazepina em N. gonorrhoeae na ausência de células humanas. Ensaios de difusão em poços foram realizados nos quais as cepas de N. gonorrhoeae foram espalhadas uniformemente pela superfície de placas de agar GC em uma densidade de cultura de 107 bactérias por mL. Os poços foram então perfurados dentro da superfície do ágar em que carbamazepina (Cz; 100 pM a 100 μM, conforme observado), 0,2 μg/mL de ceftriaxona (Cfx), 10 μg/mL de ciprofloxacina (Cip) ou 1% DMSO (controle de veículo) foi adicionado. Após uma incubação durante a noite (37ºC, 5% CO2), a inibição do crescimento de N. gonorrhoeae foi medida como o diâmetro (mm) da área de limpeza ao redor (e inclusive de) cada poço em cada placa de ágar, ou seja, a zona de inibição (ZOI).

Para placas de ágar em que um ZOI não era visível, os dados foram registrados como o diâmetro do poço (6 mm), conforme indicado. Os ensaios foram realizados em triplicado em 3 ocasiões separadas. Os dados são apresentados como a média e a variância dos valores médios obtidos para cada ensaio; a significância estatística foi determinada usando um teste t de Student. Enquanto os antibióticos tradicionais, ceftriaxona e ciprofloxacina, tiveram um efeito direto na morte de gonococos, a carbamazepina não teve efeito sobre N.

gonorrhoeae na ausência de células humanas. Isso é consistente com um mecanismo de morte dependente de CR3 e mediado pelo hospedeiro.

[0055] A Figura 23 é uma representação gráfica que mostra o efeito da metildopa em N. gonorrhoeae na ausência de células humanas. Ensaios de difusão em poços foram realizados nos quais as cepas de N. gonorrhoeae foram espalhadas uniformemente pela superfície de placas de agar GC em uma densidade de cultura de 107 bactérias por mL. Os poços foram então perfurados dentro da superfície do ágar em que metildopa (Md; 100 pM a 100 μM, conforme observado), 0,2 μg/mL de ceftriaxona (Cfx), 10 μg/mL de ciprofloxacina (Cip) ou 1% de DMSO (controle de veículo) foi adicionado. Após uma incubação durante a noite (37ºC, 5% CO2), a inibição do crescimento de N. gonorrhoeae foi medida como o diâmetro (mm) da área de limpeza ao redor (e inclusive de) cada poço em cada placa de ágar, ou seja, a zona de inibição (ZOI).

Para placas de ágar em que um ZOI não era visível, os dados foram registrados como o diâmetro do poço (6 mm), conforme indicado. Os ensaios foram realizados em triplicado em 3 ocasiões separadas. Os dados são apresentados como a média e a variância dos valores médios obtidos para cada ensaio; a significância estatística foi determinada usando um teste t de Student. Enquanto os antibióticos tradicionais,

ceftriaxona e ciprofloxacina, tiveram um efeito direto na morte de gonococos, a metildopa não teve efeito sobre N.

[0056] A Figura 24 é uma representação gráfica que mostra o efeito do ácido flufenâmico em N. gonorrhoeae na ausência de células humanas. Ensaios de difusão em poços foram realizados nos quais as cepas de N. gonorrhoeae foram espalhadas uniformemente pela superfície de placas de agar GC em uma densidade de cultura de 107 bactérias por mL. Os poços foram então perfurados na superfície do ágar ao qual foram adicionados ácido flufenâmico (100 pM a 100 μM, conforme observado), 0,2 μg/mL de ceftriaxona, 10 μg/mL de ciprofloxacina ou 1% de DMSO (controle de veículo). Após uma incubação durante a noite (37ºC, 5% CO2), a inibição do crescimento de N. gonorrhoeae foi medida como o diâmetro (mm) da área de limpeza ao redor (e inclusive de) cada poço em cada placa de ágar, ou seja, a zona de inibição (ZOI).

Para placas de ágar em que um ZOI não era visível, os dados foram registrados como o diâmetro do poço (6 mm), conforme indicado. Os ensaios foram realizados em triplicado em 3 ocasiões separadas. Os dados são apresentados como a média e a variância dos valores médios obtidos para cada ensaio; a significância estatística foi determinada usando um teste t de Student. Enquanto os antibióticos tradicionais, ceftriaxona e ciprofloxacina, tiveram um efeito direto na morte de gonococos, o ácido flufenâmico não teve efeito sobre N. gonorrhoeae na ausência de células humanas em concentrações de ≤ 1 µM.

[0057] Algumas figuras e textos contêm representações ou entidades coloridas. Ilustrações coloridas estão disponíveis no Requerente mediante solicitação ou em um Escritório de Patentes apropriado. Uma taxa pode ser cobrada se obtida de um Escritório de Patentes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

1. Definições

[0058] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado como comumente entendido por técnicos no assunto à qual a invenção pertence. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais preferidos são descritos. Para os fins da presente invenção, os seguintes termos são definidos abaixo.

[0059] Os artigos "um" e "uma" são usados neste documento para se referir a um ou mais de um (isto é, a pelo menos um) do objeto gramatical do artigo. A título de exemplo, “um elemento” significa um elemento ou mais de um elemento.

[0060] Conforme usado neste documento, "e/ou" refere- se a e abrange todas e quaisquer combinações possíveis de um ou mais dos itens listados associados, bem como a falta de combinações quando interpretada na alternativa (ou).

[0061] Conforme usado neste documento, a menos que especificado de outra forma, o termo "alquila" inclui grupos alifáticos saturados, incluindo grupos alquila de cadeia linear (por exemplo, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, etc.) e grupos alquila de cadeia ramificada (isopropila, terc-butila, iso-butila, sec-butila, etc.). A expressão "alquila Cx-y", em que x é 1-2 e y é 2-6 indica um grupo alquila (cadeia linear ou ramificada) contendo o número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, o termo C1- 4 alquila inclui metila, etila, propila, butila, iso- propila, terc-butila, sec-butila e iso-butila. Em algumas modalidades, um alquila de cadeia linear ou de cadeia ramificada tem 4 ou menos átomos de carbono (ou seja, C1-4).

Em algumas modalidades, um alquila de cadeia linear ou de cadeia ramificada tem 3 ou menos átomos de carbono (ou seja, C1-3). Onde indicado, um grupo alquila pode ser substituído por um, dois ou três substituintes. Substituintes opcionais não limitativos para um grupo alquila incluem halo; CF3; ORa; SRa; NRaRb; e CORc; em que Ra e Rb são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e C1-4alquil e Rc é C1- 4alquil ou Rc é fenila opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes selecionados de halogênio, CF3, OH ou alquila OC1-4.

[0062] Conforme usado neste documento, a menos que especificado de outra forma, o termo "alquileno" inclui grupos de ligação alifáticos saturados, incluindo grupos alquil de cadeia linear (por exemplo, metileno, etileno, propileno, butileno, etc.) e grupos alquila de cadeia ramificada (iso-propileno, terc-butileno, iso-butileno, sec- butileno). A expressão "alquileno Cx-y", em que x é 1-2 e y é 2-4 indica um grupo alquileno (cadeia linear ou ramificada) contendo o número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, o termo C1 4 alquileno inclui metileno, etileno, propileno, butileno, iso-propileno, terc-butileno, sec- butileno e iso-butileno. Em alguns exemplos, um alquileno de cadeia linear ou de cadeia ramificada tem 4 ou menos átomos de carbono (isto é, C1-4). Em alguns exemplos, um alquileno de cadeia linear ou de cadeia ramificada tem 3 ou menos átomos de carbono (ou seja, C1-3). Em alguns exemplos preferidos, o grupo de ligação alquileno é propileno ou sec- butileno.

[0063] Os termos "administração simultaneamente" ou "administrando simultaneamente" ou "coadministração" e semelhantes referem-se à administração de uma única composição contendo dois ou mais agentes, ou a administração de cada agente como composições separadas e/ou entregues por rotas separadas simultaneamente ou simultaneamente ou sequencialmente dentro de um período de tempo curto o suficiente para que o resultado eficaz seja equivalente ao obtido quando todos esses agentes são administrados como uma única composição.

Por "simultaneamente" entende-se que os agentes são administrados substancialmente ao mesmo tempo e,

desejavelmente, juntos na mesma composição.

Por

"contemporaneamente" entende-se que os agentes são administrados próximo no tempo, por exemplo, um agente é administrado dentro de cerca de um minuto a cerca de um dia antes ou depois do outro.

Qualquer momento contemporâneo é útil.

No entanto, será frequentemente o caso que quando não administrados simultaneamente, os agentes serão administrados dentro de cerca de um minuto a cerca de oito horas e adequadamente dentro de menos de cerca de uma a cerca de quatro horas.

Quando administrados simultaneamente, os agentes são administrados adequadamente no mesmo local no sujeito.

O termo "mesmo local" inclui a localização exata,

mas pode estar dentro de cerca de 0,5 a cerca de 15 centímetros, de preferência de cerca de 0,5 a cerca de 5 centímetros.

O termo "separadamente", conforme usado neste documento, significa que os agentes são administrados em um intervalo, por exemplo, em um intervalo de cerca de um dia a várias semanas ou meses. Os agentes podem ser administrados em qualquer ordem. O termo "sequencialmente", conforme usado neste documento, significa que os agentes são administrados em sequência, por exemplo, em um intervalo ou intervalos de minutos, horas, dias ou semanas. Se apropriado, os agentes podem ser administrados em um ciclo de repetição regular.

[0064] O termo "agente antimicrobiano", Conforme usado neste documento, refere-se a qualquer agente com atividade antimicrobiana, ou seja, a capacidade de inibir ou reduzir o crescimento e/ou matar um micróbio, por exemplo, em pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, em pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 90% ou mais, em comparação com a ausência de um agente antimicrobiano. O termo "agente antimicrobiano" abrange agentes que inibem ou reduzem o crescimento e/ou matam um micróbio, interagindo diretamente com o micróbio e/ou células do hospedeiro em que o micróbio reside ou está localizado. Exemplos não limitativos de agentes antimicrobianos incluem uma nanopartícula de prata, uma pequena molécula, um peptídeo, um peptidomimético, um anticorpo ou um fragmento do mesmo, um ácido nucleico, uma enzima (por exemplo, uma metaloendopeptidase antimicrobiana tal como lisostafina), um fármaco aptâmero, um antibiótico, um produto químico ou qualquer entidade que pode inibir o crescimento e/ou matar um micróbio. Exemplos de um peptídeo antimicrobiano que podem ser incluídos nas composições aqui descritas, incluem, mas não estão limitados a, mefloquina, venturicidina A, antimicina, mixotiazol, estigmatelina, diuron, iodoacetamida, hidrato de telurito de potássio, aDL- vinilglicina, N-etilimida, L-allicina, diariquinolina, cloreto de betaína aldeído, acivcina, psicofuraina, butionina sulfoximina, ácido diaminopemélico, ácido 4-fosfo- D-eritronidroxâmico, motexafina gadolínio e/ou xicitrina ou versões modificadas ou análogos dos mesmos. Os agentes antimicrobianos representativos incluem antibióticos, antifúngicos, antiprotozoários, antimaláricos, antituberculóticos e antivirais e quaisquer misturas dos mesmos.

[0065] Ao longo desta especificação, a menos que o contexto exija de outra forma, as palavras "compreende", "compreende" e "compreendendo" serão entendidas como implicando a inclusão de uma etapa ou elemento ou grupo de etapas ou elementos, mas não a exclusão de qualquer outra etapa ou elemento ou grupo de etapas ou elementos. Assim, o uso do termo "compreendendo" e semelhantes indica que os elementos listados são necessários ou obrigatórios, mas que outros elementos são opcionais e podem ou não estar presentes. Por "consistindo em" significa incluindo e limitado a tudo o que segue a frase "consistindo em". Assim, a frase “consistindo em” indica que os elementos listados são obrigatórios ou obrigatórios e que nenhum outro elemento pode estar presente. Por "consistindo essencialmente em" significa incluir quaisquer elementos listados após a frase e limitados a outros elementos que não interferem ou contribuem para a atividade ou ação especificada na divulgação para os elementos listados. Assim, a frase "consistindo essencialmente em" indica que os elementos listados são necessários ou obrigatórios, mas que outros elementos são opcionais e podem ou não estar presentes, dependendo se afetam ou não a atividade ou ação dos elementos listados.

[0066] Os termos "polipeptídeo CR3", "receptor complementar 3" e "CR3" são usados indistintamente aqui para se referir a um polipeptídeo heterodímero que compreende uma cadeia alfa de 165 kDa (CD11b; integrina αM), não covalentemente ligada a um beta de 95 kDa cadeia (CD18; integrina β2). CR3, que também é conhecido também como Mac- 1, integrina αMβ2 ou CD11b/CD18, é um membro da família de integrinas β2 (CD18). CR3 é um receptor de reconhecimento de padrões, capaz de reconhecer e se ligar a muitas moléculas encontradas nas superfícies de patógenos invasores. O principal local de ligação ao ligante em CR3 é o domínio inserido na subunidade αM (domínio I), assim denominado porque é inserido, em sequência, entre os terminais N e C do domínio maior da hélice β de sete lâminas.

[0067] Conforme usado neste documento, o termo "célula que expressa o polipeptídeo CR3" refere-se a uma célula que expressa um polipeptídeo CR3. As células representativas que expressam um polipeptídeo CR3 incluem células mieloides, como monócitos (por exemplo, macrófagos incluindo macrófagos circulantes e macrófagos residentes em tecidos, como células de Kupffer), neutrófilos, mastócitos e células dendríticas, bem como células linfóides, incluindo leucócitos, como natural killer células e células T citotóxicas, bem como células epiteliais, como células epiteliais cervicais, células epiteliais retais e células epiteliais faríngeas.

[0068] Por "quantidade eficaz", no contexto de tratamento ou prevenção de uma condição, entende-se a administração de uma quantidade de um agente ou composição a um indivíduo em necessidade de tal tratamento ou profilaxia, seja em uma dose única ou como parte de uma série, que é eficaz para a prevenção de incorrer em um sintoma, controlando esses sintomas e/ou tratando os sintomas existentes dessa condição. A quantidade eficaz irá variar dependendo da saúde e condição física do indivíduo a ser tratado, o grupo taxonômico do indivíduo a ser tratado, a formulação da composição, a avaliação da situação médica e outros fatores relevantes. Espera-se que a quantidade caia em uma faixa relativamente ampla que pode ser determinada por meio de testes de rotina. Os sintomas não limitantes de infecções por patógenos incluem doença febril aguda, mal- estar, fadiga, dor de cabeça, rubor, diarreia, náusea, vômito, tosse, dor abdominal, mialgias e, na doença grave, produção de mediadores pró-inflamatórios, incluindo citocinas pró-inflamatórias e vazamento vascular.

[0069] Conforme usado neste documento, o termo "célula epitelial" abrange todas as células que revestem um órgão, incluindo, mas não se limitando a, células endoteliais, células mesoteliais e células uroteliais, que podem ser escamosas, colunares ou cuboidais. Células escamosas simples podem ser encontradas revestindo o sangue vasos, vasos linfáticos, o mesotélio das cavidades do corpo e o ramo delgado ascendente do rim. As células escamosas estratificadas são encontradas revestindo o palato duro, o dorso da língua, a gengiva, o esôfago, o reto, o ânus, a pele, o colo do útero, a vagina, os grandes lábios, a orofaringe, a córnea e o orifício da uretra externa. Células colunares simples podem ser encontradas nos ductos das glândulas submandibulares, gengiva aderida, ductuli, epidídimo, ducto deferente, vesícula seminal, laringe, traqueia, nariz, uretra membranosa, uretra peniana, estômago, intestino delgado e grosso, reto, vesícula biliar , epitélio ductal e lobular, trompas de falópio, útero, endométrio, colo do útero, ducto ejaculatório, glândulas bulbouretrais e próstata. As células epiteliais colunares estratificadas podem ser encontradas nos ductos das glândulas submandibulares inseridas na gengiva, no ducto epidídimo, no ducto deferente, vesícula seminal, laringe, traquéia, nariz, uretra membranosa e uretra peniana. Células cuboidais simples podem ser encontradas nos folículos tireoidianos, ependima, ovários, túbulos retos, rete testis, bronquíolos respiratórios e nos túbulos contorcidos proximal e distal do rim. Células cuboidais estratificadas podem ser encontradas nos dutos das glândulas sudoríparas.

[0070] O termo "expressão" refere-se à biossíntese de um produto gênico. Por exemplo, no caso de uma sequência de codificação, a expressão envolve a transcrição da sequência de codificação em mRNA e a tradução de mRNA em um ou mais polipeptídeos. Por outro lado, a expressão de uma sequência não codificadora envolve a transcrição da sequência não codificante em um transcrito apenas.

[0071] Conforme usado neste documento, o termo "halogênio" inclui flúor, bromo, cloro e iodo. Da mesma forma, o termo "halo" inclui flúor, cloro, bromo e iodo. Em alguns exemplos, halo é de preferência cloro.

[0072] Conforme usado neste documento, salvo indicação em contrário, o termo "heterocicloalquila" refere-se a grupos alifáticos cíclicos saturados contendo de 3 a 8 membros, incluindo pelo menos um átomo N endocíclico e, opcionalmente, incluindo ainda um ou dois outros heteroátomos em que um heteroátomo substitui um átomo de carbono endocíclico. Os heteroátomos preferidos são nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em algumas modalidades, um heteroátomo é nitrogênio ou oxigênio. A porção heterocicloalquila pode ser monocíclica ou pode ser um sistema de anel fundido ou em ponte. De preferência, a porção heterocicloalquila é monocíclica. Exemplos de anéis heterocicloalquila formados quando R1 e R2 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados formam um anel de 3 a 8 membros, incluem pirrolidinila e piperidinila. Outros exemplos incluem aziridinila, azetidinila e azepinila. Em algumas modalidades, o anel heterocicloalquila tem 4 a 6 membros, de preferência 5 ou 6 membros. Além do átomo de N, o anel heterocíclico pode incluir um ou mais heteroátomos endocíclicos adicionais selecionados de O, S e N para substituir um átomo de carbono, por exemplo, morfolinila e piperazinil. Um anel de piperazinil pode ser substituído em um átomo C ou N endocíclico. Substituintes opcionais para um grupo heterocicloalquila incluem C1-4alquil opcionalmente substituído por ORd, SRd, CF3, NRdRe ou halogênio; em que Rd e Re são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e alquila C1-4.

[0073] Conforme usado neste documento, os termos "modulando", "regulando" e seus equivalentes gramaticais referem-se a um efeito de alteração de uma atividade ou efeito biológico (por exemplo, ligação de um ligante ao domínio alfa da subunidade I de um polipeptídeo CR3). Por exemplo, um ligando de um determinado receptor pode modular a atividade desse receptor aumentando/estimulando ou diminuindo/inibindo a atividade ou efeito do receptor. No contexto da ligação do ligante ao domínio da subunidade alfa I de um polipeptídeo CR3, o ligante pode modular a atividade do polipeptídeo CR3 inibindo a entrada de um patógeno em uma célula que expressa o polipeptídeo CR3.

[0074] Conforme usado neste documento, a menos que definido de outra forma, o termo "opcionalmente substituído" refere-se à substituição de um átomo de hidrogênio em um grupo, por exemplo, um grupo alquila, fenila ou heterocicloalquila, com uma fração de não hidrogênio, conforme detalhado neste documento. Qualquer grupo substituído pode conter um, dois, três ou mais substituintes opcionais. Em alguns exemplos, um grupo substituído terá um substituinte.

[0075] Também deve ser entendido que as definições dadas às variáveis das fórmulas genéricas aqui descritas resultarão em estruturas moleculares que estão de acordo com as definições da química orgânica padrão e valências de átomos.

[0076] Conforme usado neste documento, o termo "célula imune" se refere a uma célula pertencente ao sistema imune.

As células imunes incluem células de origem hematopoiética, tais como, mas não se limitando a linfócitos T (células T), linfócitos B (células B), células exterminadoras naturais (NK), granulócitos, neutrófilos, macrófagos, monócitos, células dendríticas e formas especializadas de qualquer dos anteriores, por exemplo, células Kupffer, células dendríticas plasmocitóides, células de Langerhans, células plasmáticas, células T assassinas naturais (NKT), células T auxiliares e linfócitos T citotóxicos (CTL).

[0077] O termo "ligante", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer molécula que é capaz de se ligar a um receptor.

[0078] Os termos "paciente", "sujeito", "hospedeiro" ou "indivíduo" usados indistintamente neste documento, referem- se a qualquer sujeito, particularmente um sujeito vertebrado, e ainda mais particularmente um sujeito mamífero, para o qual terapia ou profilaxia é desejada.

Animais vertebrados adequados que se enquadram no escopo da invenção incluem, mas não estão restritos a, qualquer membro do subfilo Chordata incluindo primatas (por exemplo, humanos, macacos e chimpanzés, e inclui espécies de macacos, como do gênero Macaca (por exemplo, macacos cynomolgus, como Macaca fascicularis e/ou macacos rhesus (Macaca mulatta)) e babuínos (Papio ursinus), bem como saguis (espécies do gênero Callithrix), macacos-esquilo (espécies do gênero Saimiri) e micos (espécies de o gênero Saguinus), bem como espécies de macacos, como chimpanzés (Pan troglodytes), roedores (por exemplo, ratos, ratos, cobaias), lagomorfos (por exemplo, coelhos, lebres), bovinos (por exemplo, gado), ovinos (por exemplo, ovelhas), caprinos (por exemplo, cabras), suínos (por exemplo, porcos), equinos (por exemplo, cavalos), caninos (por exemplo, cães), felinos (por exemplo, gatos), aves (por exemplo, galinhas, perus, patos, gansos, aves de companhia, como canários , periquitos etc.), mamíferos marinhos (por exemplo, golfinhos, baleias), répteis (por exemplo, cobras, sapos, lagartos etc.) e peixes. Em modalidades específicas, o sujeito é um primata, como um ser humano. No entanto, será entendido que os termos “paciente”, “sujeito”, “hospedeiro” ou “indivíduo” não implicam que os sintomas estejam presentes.

[0079] Por "transportador farmaceuticamente aceitável" entende-se um veículo farmacêutico composto por um material que não é biologicamente ou de outra forma indesejável, ou seja, o material pode ser administrado a um sujeito junto com o agente ativo selecionado sem causar qualquer ou uma reação adversa substancial. Os transportadores podem incluir excipientes e outros aditivos, tais como diluentes, detergentes, agentes corantes, agentes molhantes ou emulsionantes, agentes tamponantes de pH, conservantes, agentes de transfecção e semelhantes.

[0080] O termo "sal farmaceuticamente aceitável", conforme usado neste documento, é um termo amplo e deve receber seu significado comum e habitual para um técnico no assunto (e não deve ser limitado a um significado especial ou personalizado), e refere-se, sem limitação, a derivados dos compostos divulgados em que o composto original é modificado pela conversão de um ácido ou porção de base existente na sua forma de sal (por exemplo, por reação do grupo de base livre com um ácido orgânico adequado). Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, sais de ácidos minerais ou orgânicos de resíduos básicos, tais como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos, tais como ácidos carboxílicos; e similar.

Sais de adição de ácido representativos incluem acetato, adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforossulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, hemisulfato, heptonato, hexanoato, bromidrato, cloridrato, hidroiodeto, 2-hidroxi- etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2- naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3- fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato,

estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato,

toluenossulfonato, undecanoato, sais de valerato e semelhantes.

Sais representativos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio,

magnésio e semelhantes, bem como amônio não tóxico, amônio quaternário e cátions de amina, incluindo, mas não se limitando a amônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio,

metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina,

etilamina e semelhantes.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente divulgação incluem os sais não tóxicos convencionais do composto original formado, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente divulgação podem ser sintetizados a partir do composto original que contém uma fração básica ou ácida por métodos químicos convencionais.

Geralmente, esses sais podem ser preparados fazendo reagir as formas de ácido ou base livres destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriado em água ou num solvente orgânico, ou numa mistura dos dois; geralmente, meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila são preferidos.

Listas de sais adequados podem ser encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 17.sup.th ed., Mack

Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418,

Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, PH

Stahl e CG Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, e Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977), cada um dos que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade.

[0081] Conforme usado neste documento, o termo "solvato" é um complexo de estequiometria variável formado por um soluto [nesta invenção, um composto de Fórmulas (I), (II) ou (III)] e um solvente. De preferência, tais solventes não devem interferir com a atividade biológica do soluto. Os solventes podem ser, a título de exemplo, água, acetona, etanol ou ácido acético. Os métodos de solvatação são geralmente conhecidos na técnica. Será apreciado que o solvato é preferencialmente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, um solvato é um hidrato, por exemplo, um mono-, di- ou tri-hidrato. Os compostos de Fórmulas (I), (II) e (III) podem estar na forma de um solvato, por exemplo, um hidrato, tal como um monohidrato ou dihidrato, ou um sesqui-hidrato.

[0082] O termo "receptor" refere-se a uma proteína associada à célula que se liga a uma molécula bioativa denominada "ligante". Essa interação medeia o efeito do ligante na célula. Os receptores podem ser ligados à membrana, citosólicos ou nucleares; monomérico (por exemplo, receptor de hormônio estimulador da tireóide, receptor beta- adrenérgico) ou multimérico (por exemplo, receptor de complemento 3, receptor de PDGF, receptor de hormônio de crescimento, receptor de IL-3, receptor de GM-CSF, receptor de G-CSF, receptor de eritropoietina e receptor de IL-6). Os receptores ligados à membrana são caracterizados por uma estrutura de múltiplos domínios compreendendo um domínio de ligação ao ligante extracelular e um domínio efetor intracelular que está tipicamente envolvido na transdução de sinal. Em certos receptores ligados à membrana, o domínio extracelular de ligação ao ligante e o domínio efetor intracelular estão localizados em polipeptídeos separados que compreendem o receptor funcional completo.

[0083] Como usado neste documento, uma "molécula pequena" refere-se a um composto que tem um peso molecular inferior a 3 quilodaltons (kDa) e, normalmente, inferior a 1,5 quilodaltons e, adequadamente, inferior a cerca de 1 quilodalton. As moléculas pequenas podem ser ácidos nucleicos, peptídeos, polipeptídeos, peptidomiméticos, carboidratos, lipídeos ou outras moléculas orgânicas (contendo carbono) ou inorgânicas. Como aqueles versados na técnica apreciarão, com base na presente descrição, extensas bibliotecas de misturas químicas e/ou biológicas, muitas vezes extratos de fungos, bactérias ou algas, podem ser rastreados com qualquer um dos ensaios da invenção para identificar compostos que modulam uma bioatividade. Uma "pequena molécula orgânica" é um composto orgânico (ou composto orgânico complexado com um composto inorgânico (por exemplo, metal)) que tem um peso molecular de menos de 3 quilodaltons, menos de 1,5 quilodaltons, menos de cerca de 1 kDa ou até menos de cerca de 0,5 kDa.

[0084] Conforme usado neste documento, os termos "tratamento", "tratar" e semelhantes referem-se à obtenção de um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser terapêutico em termos de uma cura parcial ou completa para uma doença ou condição (por exemplo, uma malignidade hematológica) e/ou efeito adverso atribuível à doença ou condição. Estes termos também cobrem qualquer tratamento de uma condição ou doença em um mamífero, particularmente em um humano, e incluem: (a) inibir a doença ou condição, isto é, interromper seu desenvolvimento; ou (b) aliviar a doença ou condição, isto é, causar a regressão da doença ou condição.

[0085] Cada modalidade aqui descrita deve ser aplicada mutatis mutandis a cada uma das modalidades, a menos que especificamente indicado de outra forma.

2. Compostos, composições e artigos para modular as interações de patógenos com células que expressam polipeptídeo CR3

[0086] A presente invenção é baseada em parte na identificação de não carboidratos, ligantes de pequenas moléculas do domínio alfa da subunidade I de CR3, que são capazes de inibir a ligação de patógenos com células que expressam polipeptídeo CR3 e/ou a entrada de patógenos naquelas células. Em algumas modalidades, esses ligantes também são capazes de tratar células que expressam polipeptídeo CR3 que já foram infectadas com um patógeno.

Notavelmente, porque esses ligantes não agem no patógeno, mas bloqueiam as interações patógeno-domínio CR3 I, eles podem servir em algumas modalidades como novos agentes para inibir ou tratar infecções com patógenos que são resistentes a antimicrobianos, como antibióticos. Os ligantes têm utilidade na inibição ou tratamento de infecções patogênicas de uma variedade de células que expressam polipeptídeo CR3, incluindo células imunes e células epiteliais. A célula pode ser uma célula imune, exemplos ilustrativos das quais incluem células mieloides, como monócitos (por exemplo, macrófagos incluindo macrófagos circulantes e macrófagos residentes em tecidos, como células de Kupffer), neutrófilos, mastócitos e células dendríticas, bem como células linfóides, incluindo leucócitos, como células exterminadoras naturais e células T citotóxicas. Alternativamente, a célula pode ser uma célula epitelial, exemplo representativo da qual inclui células epiteliais cervicais, células epiteliais retais e células epiteliais faríngeas. Com base nessas descobertas, a presente invenção fornece métodos, composições e artigos para inibir interações de patógenos com células que expressam CR3 e para inibir ou tratar infecções patogênicas.

2.1. Ligantes polipeptídicos CR3

[0087] Os métodos, composições e artigos da presente invenção apresentam ligantes de moléculas pequenas, não carboidratos, do domínio alfa da subunidade I de CR3. Em algumas modalidades, o ligante é um composto de dibenzoazepina de Fórmula (I): (I) em que: R é hidrogênio, hidroxila, alquila NHC1-4, alquila OCOC1-4 ou oxo; X e Y são independentemente hidrogênio ou halogênio; Z é alquila C1-4, CONR1R2, alquileno C1-4NR1R2, alquileno C1-4 (NO) R1R2 ou quinuclidinila; R1 e R2 são independentemente hidrogênio ou alquila C1- 6 opcionalmente substituído; ou R1 e R2 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados formam um anel de heterocicloalquila de 3 a 8 membros que pode ser opcionalmente substituído; e a ligação C10-C11 é uma ligação simples ou dupla; em que quando R é oxo, a ligação C10-C11 é uma ligação simples, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0088] Em algumas modalidades, R é hidrogênio, hidroxila, NHCH3, OCOCH3 ou oxo. Em alguns exemplos, R é hidrogênio.

[0089] Em algumas modalidades, X e Y são independentemente hidrogênio ou Cl.

[0090] Exemplos representativos de substituintes Z incluem CH3, CO R1R2, alquileno C3-4 R1R2 ou 3-quinuclidinila.

Um substituinte Z particular é CONH2.

[0091] Em algumas modalidades, R1 e R2 são hidrogênio.

Quando R1 e R2 são alquila C1-c6, em algumas modalidades eles são independentemente alquila C1-4.

[0092] Em algumas modalidades particulares, a porção NR1R2 nos compostos de Fórmula (I) ou (Ia) é metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, n-butilamino, metil-etilamino, dietilamino, di-n-propilamino, di-n- butilamino, metil-n-butilamino, pirrolidinil, piperidinil, piperazinil ou morfolinil.

[0093] Certos exemplos representativos de Z incluem alquila C1-4, por exemplo CH3; CONH2; C3-4alquileno NR1R2, em que R1 e R2 são independentemente CH3 ou hidrogênio opcionalmente substituído; 3-quinuclidinila. Exemplos particulares de Z incluem CH3, CONH2, (CH2)3NHCH3; (CH2)3N(CH3)2; (CH2)3(NO)(CH3)2; CH2CH2(CH3)CH2N(CH3)2; (CH2) 3N (CH3) CH2CO (4-clorofenil); (CH2) 3 (piperazinoetanol) e 3- quinuclidinila.

[0094] Um composto particular de Fórmula (I) é carbamazepina [5H-dibenzo [b, f] azepina-5-carboxamida; CAS 298-46-4]:

[0095] Outros exemplos de compostos de dibenzoazepina de Fórmula (I) incluem: a) Oxcarbazepina 11,10-di-hidro-10-oxo-5H-dibenzo (b, f) azepina-5- carboxamida]; b) acetato de eslicarbazepina [(S)-10-acetoxi-10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f] azepina-5-carboxamida]; c) Clomipramina [3-(3-cloro-10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepin-5- il)-N, N-dimetilpropan-1-amina]; d) Desipramina

[3-(10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepin-5-il)-N-

metilpropan-1-amina];

e) Imipramina

[3- (10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepin-5-il)-N, N-

dimetilpropan-1-amina];

f) Imipraminóxido

[3-(5,6-di-hidrobenzo[b][f]benzazepina-11-il)-N, N-

dimetilpropan-1-amina N-óxido];

g) Lofepramina

[N-(4-clorobenzoilmetil)-3-(10,11-di-hidro-5H-dibenzo

[b, f]azepin-5-il)-N-metil-propan-1-amina];

h) Metapramina

(±)-10,11-di-hidro-N, 5-dimetil-5H-dibenz[b, f]azepin-

10-amina];

i) Opipramol

[4-[3-(5H-dibenz[b, f]azepin-5-il)propil]-1-

piperazinetanol];

j) Quinupramina

[(±)-11-quinuclidin-3-il-5,6-di-

hidrobenzo[b][1]benzazepina, também conhecido como

11-(1-azabiciclo[2.2.2]octan-3-il)-5,6-di-hidrobenzo

[b][1]benzazepina]; e k) Trimipramina

[(±)-3-(10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepin-5-il)-N,

N-2-trimetilpropan-1-amina].

[0096] Em modalidades particulares, o composto de Fórmula (I) é um composto representado por um composto de Fórmula (Ia): (Ia) em que: X e Y são independentemente hidrogênio ou halogênio; R1 e R2 são independentemente hidrogênio ou alquila C1- 6; ou R1 e R2 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados formam um anel de heterocicloalquila de 3 a 8 membros; ou um derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0097] Em uma modalidade preferida, o composto de Fórmula (Ia) é carbamazepina.

[0098] Em outras modalidades, o ligante de molécula pequena não carboidrato é um composto derivado de ácido antranílico de Fórmula (II):

(II) em que: R3 é alquila C1-6, halogênio ou trifluorometila; e R4 e R5 são independentemente hidrogênio, halogênio, trifluorometila ou alquila C1-6; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0099] Os compostos de Fórmula (II) também são conhecidos como fenamatos.

[00100] Em algumas modalidades, quando qualquer um dos substituintes R3, R4 ou R5 é halogênio, preferencialmente é Cl.

[00101] Adequadamente, quando qualquer um dos substituintes R3, R4 ou R5 é alquila C1-6, é alquila C1-4, tal como CH3, C2H5 ou C3H7, preferencialmente CH3.

[00102] Em algumas modalidades, um de R4 e R5 é hidrogênio.

[00103] Em algumas modalidades, R4 e R5 são hidrogênio. Em exemplos não limitativos, R3 é trifluorometila.

[00104] Um exemplo particular de um composto de Fórmula (II) é o ácido flufenâmico [2{[3-(trifluorometila) fenil]amina} ácido benzóico]:

[00105] Outros exemplos de compostos de Fórmula (II) incluem: a) Ácido mefenâmico [Ácido 2- (2,3-dimetilfenil) aminobenzóico]; b) Ácido meclofenâmico Ácido[2-[(2,6-dicloro-3-metilfenil)amino]benzóico]; e c) Ácido tolfenâmico Ácido[2-[(3-cloro-2-metilfenil) amino]benzóico].

[00106] Em outras modalidades, o não carboidrato, ligante de pequena molécula é um composto derivado fenilpropiônico de Fórmula (III): (II) em que: R6 é hidrogênio, CH3 ou CHF2;

R7 é hidrogênio ou NH2; R8 é hidrogênio ou OH; R9 é hidrogênio ou alquila C1-4; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

[00107] Em algumas modalidades, R6 é CH3.

[00108] Em algumas modalidades, R8 é OH.

[00109] Adequadamente, quando R9 é alquila C1-4, é C2H5 ou CH3.

[00110] Em algumas modalidades, R9 é hidrogênio.

[00111] Adequadamente, R6 e R8 não são ambos hidrogênios.

[00112] Um composto preferido de Fórmula (III) é metildopa[(S)-2-amino-3-(3,4-dihidroxifenil)-2-metil-ácido propanóico]: .

[00113] Outros exemplos de compostos de Fórmula (III) incluem: a) Carbidopa [Ácido(S)-3-(3,4-di-hidroxifenil)-2-hidrazino-2- metilpropanóico]; b) Metildopa metil éster

[(2S)-2-amino-3-(3,4-di-hidroxifenil)-2-metil- propanoato de metilo]; c) Éster etílico de metildopa [(2S)-2-amino-3-(3,4-di-hidroxifenil)-2-metil- propanoato de etilo]; d) Levodopa Ácido[(S)-2-amino-3-(3,4-di-hidroxifenil) propanóico]; e) Etilevodopa (éster etílico de Levodopa) Ácido[(S)-2-amino-3-(3,4-di-hidroxifenil) propanóico]; f) Metirosina, (α-metiltirosina) [Ácido(2S)-2-amino-3-(4-hidroxifenil)propanóico]; e g) α-Difluorometildopa [(2S)-2-amino-2-(3,4-dihidroxifenil)metil-3,3- difluoro-ácido propanóico]

[00114] Será apreciado que as estruturas de alguns dos compostos desta invenção podem incluir centros assimétricos, incluindo átomos de carbono assimétricos. Deve ser entendido em conformidade que os isômeros decorrentes de tal assimetria (por exemplo, todos os enantiômeros, estereoisômeros, rotâmeros, tautômeros, diastereômeros ou racematos) estão incluídos no escopo desta invenção. Esses isómeros podem ser obtidos na forma substancialmente pura por técnicas de separação clássicas ou por síntese estereoquimicamente controlada. Além disso, as estruturas e outros compostos e porções discutidos neste pedido também incluem os tautômeros do mesmo.

[00115] Os compostos de Fórmulas (I), (II) e (III), como aqui descritos, podem ser adquiridos de fontes comerciais, tais como fabricantes ou fornecedores de produtos químicos bem conhecidos do especialista.

Alternativamente, os compostos podem ser sintetizados a partir de materiais de partida disponíveis comercialmente e/ou intermediários sintéticos usando vias sintéticas reconhecidas na técnica. Muitos dos compostos descritos são moléculas de fármacos conhecidas, também denominadas ingredientes farmacêuticos ativos (APIs), e receberam aprovação regulatória para indicações alternativas àquelas aqui descritas. As rotas sintéticas para moléculas de fármacos, tais como aquelas abrangidas pelos compostos de Fórmulas (I), (II) e (III), são aqui referenciadas ou são descritas em, por exemplo, Ruben Vandanyan e Victor Hruby (2006) Synthesis of Essential Drugs (Elsevier Science) ou Ruben Vandanyan e Victor Hruby (2016) Synthesis of Best- Seller Drugs (Academic Press), e suas referências.

[00116] Os compostos de Fórmula (I) estão prontamente disponíveis em fontes comerciais ou podem ser preparados por vias sintéticas bem conhecidas na técnica. Por exemplo, os compostos de Fórmula (Ia) são divulgados na Patente US nº

2.948.718 (Geigy Chemical Corporation) que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Outros compostos de Fórmula (I) podem ser obtidos de fornecedores comerciais. Alternativamente, um composto de Fórmula (I) pode ser preparado por vias sintéticas publicadas, tais como as descritas abaixo, ou por vias análogas às descritas na literatura.

[00117] Por exemplo, um composto de Fórmula (I) pode ser sintetizado pela reação do intermediário correspondente (IV): (IV) em que X, Y e R são como definidos acima para compostos de Fórmula (I); com um composto Cl-Z; em que Z é um substituinte conforme descrito neste documento para compostos de Fórmula (I).

[00118] As condições para tal reação são bem conhecidas na técnica e incluem o uso de um reagente, tal como hidreto de sódio.

[00119] Um composto de Fórmula (I) em que Z é CONR1R2 pode ser preparado pela reação de um composto de Fórmula (V) com fosgênio para fornecer o intermediário de cloreto de carbonil correspondente que é então reagido com a amina necessária (HNR1R2) para formar um composto de Fórmula (EU).

Alternativamente, os compostos de Fórmula (I) em que R1 e R2 são alquila ou R1 e R2 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados formam um grupo heterocicloalquila podem ser sintetizados pela reação do intermediário (IV) com o cloreto de ácido carbâmico apropriado (ClCONR1R2) Quando R1 é um substituinte alquila e R2 é hidrogênio, o intermediário (IV) pode ser reagido com o isocianato de alquila apropriado (O=C=NR1).

[00120] Os intermediários de Fórmula (IV) estão disponíveis em fontes comerciais ou podem ser prontamente preparados por métodos publicados para a preparação de compostos de dibenzoazepina.

Carbamazepina [5H-dibenzo [b, f] azepina-5-carboxamida, também conhecida como 2-azatriciclo- [9.4.0.03,8] pentadeca- 1 (15), 3,5,7,9,11,13-heptaeno -2-carboxamida] pode ser adquirido, por exemplo, Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc [CAS Nº 298-46-4]. A carbamazepina pode ser sintetizada de acordo com a via descrita na Patente US nº 2.948.718 (Geigy Chemical Corporation) ou Patente US nº 6.245.908 (Jubilant Organosys Ltd).]

[00121] Os seguintes compostos também estão disponíveis comercialmente em vários fabricantes e fornecedores de produtos químicos, tais como Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc e semelhantes.

[00122] A oxcarbazepina [11,10-di-hidro-10-oxo-5H- dibenzo(b, f)azepina-5-carboxamida] está comercialmente disponível [CAS nº 28721-07-5]. Pode ser sintetizado de acordo com a via descrita na Patente GB nº 1310571 (Ciba- Geigy AG) ou no Pedido de Patente US nº 20030004154.

[00123] O acetato de eslicarbazepina [(S)-10-acetoxi- 10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepina-5-carboxamida] está disponível comercialmente [CAS nº 236395-14-5]. Pode ser sintetizado de acordo com a via descrita na Patente US nº 5753646 (Bial Portela CA e SA).

[00124] Clomipramina [3-(3-cloro-10,11-di-hidro-5H- dibenzo[b, f]azepina-5-il) -N, N-dimetilpropan-1-amina] [CAS nº 303-49-1] está disponível comercialmente como seu sal cloridrato [CAS nº 17321-77-6]. A clomipramina pode ser sintetizada de acordo com a via descrita na Patente US nº

3.515.785 (Geigy Chemical Corp).

[00125] Desipramina [3-(10,11-di-hidro-5H-dibenzo [b, f]azepina-5-il)-N-metilpropan-1-amina][CAS nº 50-47-5] está comercialmente disponível na forma de um sal cloridrato [CAS nº 58-28-6]. A desipramina pode ser preparada de acordo com o método sintético da Patente US nº 3.454.554 (Colgate Palmolive Co).

[00126] Imipramina [3-(10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepin-5-il)-N, N-dimetilpropan-1-amina][CAS nº 50-49-7] está disponível comercialmente como o sal cloridrato [CAS nº

113-52-0], como um sal pamoato [CAS nº 10075-24-8] ou como o derivado de N-óxido, Imipraminóxido [CAS nº 6829-98-7]. A imipramina pode ser sintetizada usando a via descrita na Patente US nº 2.554.736 (JR Geigy AG).

[00127] Lofepramina [N-(4-clorobenzoilmetil)-3- (10,11-di-hidro-5H-dibenzo[b, f]azepin-5-il)-N-metila- propan-1-amina] [CAS nº 23047- 25-8] está comercialmente disponível em, por exemplo, Key Organics, Camelford, UK como um sal cloridrato [CAS nº 26786-32-3]. Pode ser preparado usando a rota descrita em WO 2008/139484.

[00128] Metapramina [(±)-10,11-di-hidro-N, 5- dimetil-5H-dibenz[b, f]azepin-10-amina] está comercialmente disponível a partir de várias fontes. [CAS nº 21730-16-5].

Pode ser preparado de acordo com o procedimento descrito na Patente US nº 3,622,565 (Rhone-Poulenc SA).

[00129] Opipramol [4-[3-(5H-dibenz[b, f]azepin-5-il) propil]-1-piperazinetanol] [CAS nº 315-72-0] está comercialmente disponível como a base livre [CAS Nº 315-72- 0] e como o sal dicloridrato [CAS nº 909-39-7]. O opipramol pode ser preparado de acordo com o método de DE 1142870B (JR Geigy AG).

[00130] Quinupramina [(±)-11-quinuclidin-3-il-5,6- di-hidrobenzo[b] [1]benzazepina, também conhecida como 11- (1-azabiciclo[2.2.2]octan-3-il)-5,6-di-hidrobenzo[b][1] benzazepina] [CAS nº 31721-17-2] está comercialmente disponível como um sal cloridrato ou um sal tartarato.

[00131] Trimipramina [(±)-3-(10,11-di-hidro-5H- dibenzo[b, f]azepin-5-il)-N, N-2-trimetilpropan-1-amina] [CAS nº 739-71-9] está disponível comercialmente como seu sal maleato [CAS Nº 521-78-8].

[00132] Outros exemplos de compostos de Fórmula (I) podem ser preparados de acordo com vias análogas às descritas acima.

[00133] Os compostos de Fórmula (II) estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser facilmente preparados por vias sintéticas conhecidas para a preparação de derivados de ácido antranílico, por exemplo, através da reação bem conhecida de 4-bromobenzoato de potássio com a anilina apropriada substituída com o R3 necessário, Substituintes R4 e R5.

[00134] O ácido flufenâmico [2{[3-(trifluorometil) fenil]amino}ácido benzóico] [CAS nº 530-78-9] está prontamente disponível a partir de fontes comerciais e pode ser obtido, por exemplo, da Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc. O ácido flufenâmico pode ser sintetizado usando vias sintéticas publicadas, tais como o método descrito na Patente US nº 4.980.498 (Merckle GmbH).

[00135] O ácido mefenâmico [ácido 2-(2,3- dimetilfenil)aminobenzóico] [CAS nº 61-68-7] pode ser obtido de fornecedores comerciais, como Merck KGaA ou Sigma-

Aldrich, Inc. Também pode ser sintetizado usando metodologia tal como descrito na Patente US nº 3.138.636 (Parke Davis and Co, LLC) ou CN 105949075.

[00136] O ácido meclofenâmico [2-[(2,6-dicloro-3- metilfenil)amino]ácido benzoico] está disponível como o sal de sódio, meclofenato de sódio, por exemplo, Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc [CAS nº 67254- 91-5]. A síntese do ácido meclofenâmico é descrita, por exemplo, em US nº 3.313.848 (Parke Davis and Co, LLC).

[00137] O ácido tolfenâmico [2-[(3-cloro-2- metilfenil)amino]ácido benzóico] está disponível na Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc (CAS nº 13710-19-5). A síntese do ácido tolfenâmico é descrita na Patente US nº 4.092.430 (Ciba-Geigy Corp).

[00138] Outros exemplos de compostos de Fórmula (II) podem ser preparados a partir do 4-bromobenzoato correspondente e anilina substituída de acordo com vias análogas às descritas acima.

[00139] Os compostos de Fórmula (III) estão prontamente disponíveis em fontes comerciais ou podem ser preparados por vias de síntese publicadas.

[00140] A metildopa está prontamente disponível em fontes comerciais, como Cayman Chemical, Merck KGaA ou Sigma- Aldrich, Inc na forma de metildopa sesqui-hidratado] [CAS nº 41372-08-1], cloridrato de metildopa metil éster [CAS nº

5123-53- 5] e éster etílico de metildopa [CAS nº 6014-30-8].

A metildopa pode ser sintetizada de acordo com a via descrita na Patente US nº 2.868.818 (Merck & Co Inc)

[00141] A carbidopa está disponível em fontes comerciais, por exemplo Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc, na forma de carbidopa monohidratada [CAS nº 38821-49-7]. A carbidopa pode ser sintetizada de acordo com a via descrita na Patente US nº 3.462.536 (Merck & Co Inc).

[00142] α-Difluorometildopa pode ser preparada de acordo com o método de G. Zbinden et al., Inhibition of 5- hydroxytryptophan nephrotoxicity by α-Difluorometildopa, um inibidor de L-aminoácido descarboxilase, Toxicology Letters, Vol 5, Issue 2, February 1980, pp125-129.

[00143] Levodopa está prontamente disponível em uma variedade de fornecedores comerciais, como Sigma-Aldrich, Inc. [CAS Nº 59-92-7] e Etilevodopa (éster etílico de Levodopa) está disponível em, por exemplo, Merck KGaA ou Sigma-Aldrich, Inc [CAS nº. 37178-37-3]. A levodopa pode ser sintetizada de acordo com métodos publicados, tais como a via descrita na Patente US nº 4.962.223 (MURST).

[00144] A metirosina, (α-metiltirosina) está comercialmente disponível em, por exemplo, Sigma-Aldrich, Inc. [CAS nº 672-87-7]. Pode ser sintetizado usando a via descrita, por exemplo, na Patente US nº 2.868.818 (Merck & Co, Inc).

[00145] Os sais farmaceuticamente aceitáveis são descritos em, por exemplo, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use; Editado por P. Heinrich Stahl e Camile G. Wermuth. VHCA, Verlag Helvetica Chimica Acta, Zürich, Suíça, e Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha. 2002. Seus métodos de preparação são bem conhecidos na técnica.

[00146] Os sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados a partir de ácidos inorgânicos e orgânicos. Exemplos de ácidos inorgânicos incluem ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes. Exemplos de ácidos orgânicos incluem ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malônico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p- toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido pamóico e semelhantes. Por exemplo, um grupo amina dos compostos da invenção pode sofrer reação com um ácido, por exemplo ácido clorídrico, para formar um sal de adição de ácido, por exemplo, um cloridrato ou um dicloridrato. Exemplos de sais de compostos de Fórmula (I) incluem metanossulfonato, cloridrato, bromidrato, acetato, (L)-tartato, fosfato e sulfato. Exemplos de sais de compostos de Fórmula (II)

incluem cloridrato, dicloridrato, maleato e pamoato.

Exemplos de sais de compostos de Fórmula (III) incluem cloridrato.

[00147] Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados a partir de bases inorgânicas e orgânicas. Contra-íons correspondentes derivados de bases inorgânicas incluem os sais de sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio e magnésio. As bases orgânicas incluem aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural e aminas cíclicas, incluindo isopropilamina, trimetil amina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2- dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperazina, piperidina e N- etilpiperidina. Por exemplo, quando o composto da invenção possui um grupo de ácido carboxílico ou um grupo fenol, o composto pode sofrer reação com uma base para formar o sal de adição de base. Um sal particular é um sal de sódio.

2.2. Composições Farmacêuticas

[00148] Embora seja possível que, para uso em terapia, um composto aqui descrito possa ser administrado em uma forma não diluída, no entanto, é preferível apresentar um composto de Fórmula (I), (II) ou (III) como uma composição farmacêutica.

[00149] Uma composição farmacêutica pode compreender um composto de Fórmula (I), (II) ou (III) e um veículo farmaceuticamente aceitável. Os transportadores devem ser “aceitáveis” no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da composição e não deletérios para o destinatário dos mesmos.

[00150] De acordo com a invenção, um composto conforme descrito é administrado sob um regime terapêutico que não é tóxico para o sujeito.

[00151] As composições farmacêuticas da presente invenção ou as composições usadas nos métodos da presente invenção podem ser formuladas e administradas usando métodos conhecidos na técnica. As técnicas para formulação e administração podem ser encontradas, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Loyd V.

Allen, Jr (Ed), The Pharmaceutical Press, Londres, 22ª edição, setembro de 2012.

[00152] As composições da invenção podem ser formuladas para administração por qualquer via. Em algumas modalidades, a composição é formulada para administração oral. Uma composição oral pode estar na forma de comprimidos, cápsulas, pós, grânulos ou preparações líquidas. Em algumas modalidades, a composição é formulada para administração tópica. Uma composição tópica pode estar na forma de um creme, loção, pomada ou gel. Em algumas modalidades, a composição é formulada para administração parenteral, por exemplo, por via intramuscular, intratecal, intraperitoneal, intravaginal, intrauterina, intravesical ou intravenosa.

[00153] As dosagens unitárias adequadas e as dosagens diárias máximas de um composto de fórmula (I), (II) ou (III) podem ser determinadas de acordo com as doses unitárias e as doses diárias máximas usadas convencionalmente.

Consequentemente, pode ser administrado a um paciente em uma dosagem diária de, por exemplo, de 250 mg a 750 mg a cada 6 horas a 500 mg a 1 g a cada 6 a 8 horas, com uma dose máxima de aproximadamente 50 mg/Kg/dia ou 4 g/dia.

[00154] Um composto de Fórmula (I), (II) ou (III), como aqui descrito, pode ser o único ingrediente ativo administrado ao sujeito. No entanto, será apreciado que o composto pode ser administrado com outro agente terapêutico (por exemplo, um agente antimicrobiano). Por exemplo, o composto pode ser administrado com um ou mais outros agentes terapêuticos em combinação. A combinação pode permitir a administração simultânea (por exemplo, administração separada, sequencial ou simultânea) do composto com o(s) outro(s) ingrediente(s) ativo(s). A combinação pode ser fornecida na forma de uma composição farmacêutica. A administração com um ou mais outros ingredientes ativos está dentro do escopo da invenção. Em modalidades específicas, um composto de Fórmula (I), (II) ou (III), conforme descrito neste documento, pode ser administrado simultaneamente com um agente antimicrobiano, que inclui, sem limitação,

compostos que matam ou inibem o crescimento de microrganismos, como vírus, bactérias, levedura, fungos,

protozoários etc. e, portanto, incluem antibióticos,

antifúngicos, antiprotozoários, antimaláricos,

antituberculóticos e antivirais.

Antibióticos ilustrativos incluem quinolonas (por exemplo, amifloxacina, cinoxacina,

ciprofloxacina, enoxacina, fleroxacina, flumequina,

lomefloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina,

levofloxacina, lomefloxacina, ácido oxolínico, pefloxacina,

rosoxacina, temafloxacina, tosufloxacina, esparfloxacina,

clinafloxacina, gatifloxacina, gatifloxacina,

gatifloxacina; gemifloxacina; e garenoxacina),

tetraciclinas, glicilciclinas e oxazolidinonas (por exemplo,

clortetraciclina, demeclociclina, doxiciclina, limeciclina,

metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, tetraciclina,

tigeciclina; linezolida, eperozolid), glicopéptidos,

aminoglicósidos (por exemplo, amicacina, arbecacina,

butirosina, dibecacina, fortimicins, gentamicina, canamicina

, meomicina, netilmicina, ribostamicina, sisomicina,

espectinomicina, estreptomicina, tobramicina), -lactamas

(por exemplo, imipenem, meropenem, biapenem, cefaclor,

cefadroxil, cefamandol, cefatrizina, cefazedona, cefazolina,

cefixima, cefonoxima, cefixima, cefonicoxima, cefoperazona,

ceforanida, cefotaxima, cefotiam, cefpimizole, cefpiramida,

cefpodoxima, cefsulodina, ceftazidima, cefteram, ceftezole,

ceftibuteno, ceftizoxima, ceftriaxona, cefuroxima,

cefuzonam, cephaacetrile, cefalexina, cefaloglicina,

cefaloridina, cefalotina, cefapirina, cefradina,

cefinetazole, cefoxitina, cefotetano, azthreonam, carumonam,

flomoxef, moxalactam, amidinocillin, amoxicilina,

ampicilina, azlocilina, carbenicilina, benzilpenicilina,

carfecillin, cloxacilina, dicloxacilina, meticilina,

mezlocilina, nafcilina, oxacilina, penicilina G,

piperacilina, sulbenicilina, ticarcilina, temocillin,

cefditoreno, SC004, KY-020, cefdinir, ceftibuten, FK-312, S-

1090, CP-0467, BK-218, FK-037, DQ-2556, FK-518, cefozopran,

ME1228, KP-736, CP-6232, Ro 09-1227, OPC -20000, LY206763),

rifamicinas, macrolídeos (por exemplo, azitromicina,

claritromicina, eritromicina, oleandomicina, rokitamicina,

rosaramicina, roxitromicina, troleandomicina), cetólidos

(por exemplo, telitromicina, cetromicina), cumermicinas,

lincosamidas (por exemplo, clindamicina, lincomicina) e cloranfenicol.

Antivirais representativos incluem sulfato de abacavir, aciclovir sódico, cloridrato de amantadina,

amprenavir, cidofovir, mesilato de delavirdina, didanosina,

efavirenz, famciclovir, fomivirsen sódico, foscarnet sódico,

ganciclovir, indinaviril sulfato, mesilato de delavirdina,

didanosina, efavirenz, famciclovir, fomivirsen sódico,

foscarnet sódico, ganciclovir, indinaviril sulfato, mesilato de delavirdina, didanosina, efavirenz, famciclovir,

fomivirsen sódico, foscarnet sódico, ganciclovir,

indinaviril sulfato, mesilato de delavirdina, ossilato de lamivudina, lamivudamil, nivudapiril, fosfato de lamivudina,

lamivudamil, lamivudamil, nivivudamil, nivudapilam,

nivivudam ribavirina, cloridrato de rimantadina, ritonavir,

saquinavir, mesilato de saquinavir, estavudina, cloridrato de valaciclovir, valganciclovir, zalcitabina, zanamivir e zidovudina.

Exemplos não limitativos de antiprotozoários incluem atovaquona, cloridrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, metronidazol, cloridrato de metronidazol e isetionato de pentamidina.

Os anti-helmínticos podem ser pelo menos um selecionado de mebendazol, pamoato de pirantel,

albendazol, ivermectina e tiabendazol.

Antifúngicos ilustrativos podem ser selecionados a partir de anfotericina

B, complexo de anfotericina B colesteril sulfato, complexo lipídico de anfotericina B, anfotericina B lipossomal,

bifonazol, butoconazol, clordantoína, clorfenesina,

ciclopirox olamina, clotrimazol, eberconazol, econazol,

fluconazol, flucitosina, flutrimazol, griseofulvina microsize, griseofulvina ultramicrosize, itraconazol,

isoconazol, itraconazol, ceturoconazol, nifonazol,

nistatina, cloridrato de terbinafina, tioconazol, terconazol e ácido undecenóico. Exemplos não limitativos de antimaláricos incluem cloridrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, doxiciclina, sulfato de hidroxicloroquina, cloridrato de mefloquina, fosfato de primaquina, pirimetamina e pirimetamina com sulfadoxina. Os antituberculóticos incluem, mas não estão restritos a clofazimina, cicloserina, dapsona, cloridrato de etambutol, isoniazida, pirazinamida, rifabutina, rifampicina, rifapentina e sulfato de estreptomicina.

[00155] Como será prontamente apreciado por aqueles versados na técnica, a via de administração e a natureza do transportador farmaceuticamente aceitável dependerão da natureza da condição e do mamífero a ser tratado. Acredita- se que a escolha de um transportador ou sistema de entrega particular e a via de administração podem ser facilmente determinados por um especialista na técnica. Na preparação de qualquer formulação que contenha o composto, deve-se tomar cuidado para garantir que a atividade do composto não seja destruída no processo e que o composto seja capaz de atingir seu local de ação sem ser destruído. Em algumas circunstâncias, pode ser necessário proteger o composto por meios conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, microencapsulação ou revestimento (tal como o uso de revestimento entérico). Da mesma forma, a via de administração escolhida deve ser tal que o composto atinja o seu local de ação.

[00156] Os técnicos no assunto podem facilmente determinar as formulações apropriadas para os compostos da presente invenção usando abordagens convencionais. A identificação de intervalos de pH preferidos e excipientes adequados, por exemplo antioxidantes, é rotina na técnica.

Os sistemas tampão são rotineiramente usados para fornecer valores de pH de uma faixa desejada e incluem tampões de ácido carboxílico, por exemplo, acetato, citrato, lactato e succinato. Uma variedade de antioxidantes estão disponíveis para tais formulações, incluindo compostos fenólicos, como BHT ou vitamina E, e agentes redutores, como metionina ou sulfito.

[00157] Os compostos como aqui descritos, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, podem ser preparados em formas de dosagem parenteral, incluindo aquelas adequadas para administração intravenosa, intratecal e intracerebral ou epidural. As formas farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções ou dispersões injetáveis estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis. Devem ser estáveis nas condições de fabricação e armazenamento e podem ser preservados contra a redução ou oxidação e a ação contaminante de microrganismos, como bactérias ou fungos.

[00158] O solvente ou meio de dispersão para a solução injetável ou dispersão pode conter qualquer um dos solventes convencionais ou sistemas transportadores para o composto e pode conter, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol e polietilenoglicol líquido, e semelhantes), suas misturas adequadas e óleos vegetais. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento como a lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de surfactantes. A prevenção da ação de microrganismos pode ser realizada quando necessário pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e semelhantes.

Em muitos casos, será preferível incluir agentes para ajustar a osmolaridade, por exemplo, açúcares ou cloreto de sódio.

De preferência, a formulação para injeção será isotônica com sangue. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida pelo uso nas composições de agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina. As formas farmacêuticas adequadas para uso injetável podem ser administradas por qualquer via apropriada, incluindo intravenosa, intramuscular, intracerebral, intratecal, injeção epidural, administração intravesicular ou infusão.

[00159] As soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando o composto ativo na quantidade necessária no solvente apropriado com vários dos outros ingredientes, tais como aqueles enumerados acima, conforme necessário, seguido por esterilização por filtração.

Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando os vários ingredientes ativos esterilizados em um veículo estéril que contém o meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são a secagem a vácuo ou a liofilização de uma solução previamente esterilizada por filtração do ingrediente ativo mais quaisquer ingredientes adicionais desejados.

[00160] Outras formas farmacêuticas incluem formulações orais e entéricas de um composto de Fórmula (I), (II) ou (III), em que o composto ativo pode ser formulado com um diluente inerte ou com um carreador comestível, ou pode ser encerrado em ou cápsula de gelatina mole, ou pode ser prensada em comprimidos, ou pode ser incorporada diretamente com o alimento da dieta. Para administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e usado na forma de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais ou sublinguais, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, bolachas e semelhantes. A quantidade de composto ativo em tais composições terapeuticamente úteis é tal que será obtida uma dosagem adequada.

[00161] Os comprimidos, trociscos, pílulas, cápsulas e semelhantes também podem conter os componentes listados a seguir: um aglutinante como goma, acácia, amido de milho ou gelatina; excipientes como fosfato dicálcico; um agente desintegrante, como amido de milho, amido de batata, ácido algínico e semelhantes; um lubrificante como o estearato de magnésio; e um agente edulcorante, tal como sacarose, lactose ou sacarina, pode ser adicionado ou um agente aromatizante.

Quando a forma de dosagem unitária é uma cápsula, pode conter, além dos materiais do tipo acima, um veículo líquido.

Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou de outra forma modificar a forma física da unidade de dosagem. Por exemplo, comprimidos, pílulas ou cápsulas podem ser revestidos com goma-laca, açúcar ou ambos.

Um xarope ou elixir pode conter o composto ativo e um agente edulcorante, conservante, corante ou aromatizante.

[00162] Qualquer componente usado na preparação de qualquer forma de dosagem unitária deve ser farmaceuticamente puro e substancialmente não tóxico nas quantidades empregadas.

[00163] A presente invenção também se estende a quaisquer outras formas adequadas para administração, por exemplo, aplicação tópica, como cremes, espumas, sabonetes, loções, sprays e géis; formulações entéricas, como supositórios; ou composições adequadas para inalação ou administração intranasal, por exemplo soluções, aerossóis, pós secos, suspensões ou emulsões. Em modalidades específicas, os compostos da presente invenção são formulados para aplicação tópica na pele ou cavidade corporal, como espumas, cremes, lavagens, géis, sprays, supositórios, pessários, loções, pomadas, óvulos, tampões ou aerossol. As aplicações tópicas podem ser fornecidas por meio de um artigo a ser usado ou colocado em um sujeito. Por exemplo, o artigo pode ser uma luva, dispositivo intrauterino, distribuidor vaginal, anel vaginal ou um dispositivo contraceptivo, como um dispositivo do tipo barreira intravaginal, esponja intravaginal, preservativo masculino ou feminino.

[00164] Os veículos e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis incluem todos e quaisquer solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e de retardamento da absorção e semelhantes. O uso de tais meios e agentes para substâncias farmacêuticas ativas é bem conhecido na técnica.

Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional seja incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêuticas é contemplado. Ingredientes ativos suplementares também podem ser incorporados nas composições.

[00165] Pode ser vantajoso formular as composições na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma de dosagem unitária, como aqui utilizada, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para os sujeitos mamíferos a serem tratados; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmaceuticamente aceitável necessário. A especificação para as novas formas de unidade de dosagem da invenção são ditadas por e diretamente dependentes de (a) as características únicas do material ativo e o efeito terapêutico particular a ser alcançado, e (b) as limitações inerentes à técnica de composição de ativos materiais para o tratamento de doenças em sujeitos vivos com uma condição de doença em que a saúde corporal é prejudicada.

[00166] Como mencionado acima, o ingrediente ativo principal pode ser composto para administração conveniente e eficaz em quantidades terapeuticamente eficazes com um veículo farmaceuticamente aceitável adequado em forma de dosagem unitária. Uma forma de dosagem unitária pode, por exemplo, conter o composto ativo principal em quantidades que variam de 0,25 μg a cerca de 200 mg. Expresso em proporções, o composto ativo pode estar presente em cerca de 0,25 μg a cerca de 200 mg/mL de transportador. No caso de composições contendo ingredientes ativos suplementares, as dosagens são determinadas por referência à dose usual e modo de administração dos referidos ingredientes.

3. Métodos para modular as interações de patógenos com células que expressam polipeptídeo CR3

[00167] Os compostos e composições da presente invenção têm utilidade na inibição de uma interação (por exemplo, ligação e/ou entrada) de um patógeno com uma célula que expressa o polipeptídeo CR3 e na inibição ou tratamento de uma infecção de um sujeito (por exemplo, um sujeito do sexo masculino ou um sujeito do sexo feminino) com um patógeno que interage com a célula que expressa o polipeptídeo CR3. Numerosas células que expressam polipeptídeo CR3 são conhecidas na técnica, incluindo, por exemplo, células imunes e células epiteliais. Exemplos representativos de células imunes incluem células mieloides, como monócitos (por exemplo, macrófagos incluindo macrófagos circulantes e macrófagos residentes em tecidos, como células de Kupffer), neutrófilos, mastócitos e células dendríticas, bem como células linfóides que incluem leucócitos, como células assassinas naturais e células T citotóxicas.

Exemplos não limitativos de células epiteliais incluem células epiteliais cervicais, células epiteliais retais e células epiteliais faríngeas.

[00168] Uma gama de patógenos interage com células que expressam polipeptídeo CR3, incluindo bactérias, fungos,

protozoários e vírus.

[00169] Exemplos não limitativos de bactérias, incluindo bactérias patogênicas, pertencem aos gêneros Bacillus, Bordetella, Borrelia, Brucella, Campylobacter, Chlamydia, Chlamydophila, Clostridium, Corynebacterium, Enterobacter, Enterococcus, Escherichia, Francisella, Haemophilus, Helicobacter, Legionella, Leptospira, Listeria, Mycobacterium, Mycoplasma, Neisseria, Pseudomonas, Rickettsia, Salmonella, Shigella, Staphylococcus, Streptococcus, Treponema, Vibrio e Yersinia. Exemplos não limitativos de espécies bacterianas patogênicas específicas incluem uma cepa de Bacillus anthracis, uma cepa de uma cepa de Bordetella pertussis, uma cepa de uma cepa de Borrelia burgdorferi, uma cepa de uma cepa de Brucella abortus, uma cepa de uma cepa de Brucella canis, uma cepa de uma cepa de Brucella melitensis, uma cepa de uma cepa de Brucella suis, uma cepa de uma cepa de Campylobacter jejuni, uma cepa de Chlamydia pneumonia, uma cepa de Chlamydia trachomatis, uma cepa de Chlamydophila psittaci, uma cepa de Clostridium botulinum, uma cepa de Clostridium difficile, uma cepa de Clostridium perfringens, uma cepa de Clostridium tetani, uma cepa de Corynebacterium diphtheria, uma cepa de Enterobacter sakazakii, uma cepa de Enterococcus faecalis, uma cepa de Enterococcus faecium, uma cepa de Escherichia coli, uma cepa de Francisella tularensis, uma cepa de Haemophilus influenza, uma cepa de Helicobacter pylori, uma cepa de Legionella pneumophila, uma cepa de Leptospira interrogans, uma cepa de Listeria monocytogenes, uma cepa de Mycobacterium leprae, uma cepa de Mycobacterium tuberculosis, uma cepa de Mycobacterium ulcerans, uma cepa de Mycoplasma pneumonia, uma cepa de Neisseria gonorrhoeae, uma cepa de Neisseria meningitides, uma cepa de Pseudomonas aeruginosa, uma cepa de Rickettsia rickettsia, uma cepa de Salmonella typhimurium e Salmonella typhimurium , uma variedade de Shigella sonnei, uma cepa de Staphylococcus aureus, uma cepa de Staphylococcus epidermidis, uma cepa de Staphylococcus saprophyticus, uma cepa de Streptococcus agalactiae, uma cepa de Streptococcus pneumonia, uma cepa de Streptococcus pyogenes, uma cepa de Treponema pallio, uma cepa de Vibridum, uma cepa de Yersinia enterocolitica e uma cepa de Yersinia pestis.

[00170] Exemplos representativos de fungos, incluindo fungos patogênicos, pertencem aos gêneros Aspergillus, Candida, Cryptococcus, Histoplasma, Pneumocystis e Stachybotrys. Exemplos não limitativos de espécies de fungos patogênicos específicos incluem uma cepa de Aspergillus clavatus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Candida albicans, Cryptococcus albidus, Cryptococcus gattii, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus neoformans neoformanus charumiscumis, Pneumococcus caracolis, Histoplasma capsulatis, Pneumoccus charis e Stumocistis, Pneumococcumis,

Pneumocystii carateris, Pneachocystiii e Stumocystbis, Pneumoccumis cumcistis, Pneumococcus caracolis, pneumocystiii e Stumocystbisbis, Pneumococcpsulatis, Pneumoccumisumis, pneumocystiii e Stumocystbis.

[00171] Exemplos não limitativos de protozoários, incluindo protozoários patogênicos, pertencem aos gêneros Acanthamoeba, Balamuthia, Cryptosporidium, Dientamoeba, Endolimax, Entamoeba, Giardia, lodamoeba, Leishmania, Naegleria, Plasmodium, Sappinia, Toxoplasma, Trichomonas e.

Exemplos não limitativos de espécies de protozoários patogênicos específicos incluem uma cepa de Acanthamoeba spp., Balamuthia mandrillaris, Cryptosporidium canis, Cryptosporidium fells, Cryptosporidium hominis, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium parvum, Dientamoeba fragilis, Endolimax nana, Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni, Entamoeba histolytica, Entamoeba coli, Entamoeba moshkovskii, Giardia lamblia, lodamoeba butschlii, Leishmania, Leishmania aethishmania, mexicana, Leishmania, Leishmania, Leishmania, mexicana, Leishmania, Leishmania, Leishmania, mexicana , Leishmania tropica, Naegleria fowleri, Plasmodium falciparum, Plasmodium knowlesi, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax, Sappinia diploidea, Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis, Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi.

[00172] Exemplos representativos de vírus, incluindo vírus patogênicos, podem ser selecionados a partir de

Picornavírus (por exemplo, vírus da poliomielite, vírus da febre aftosa), Calicivírus (por exemplo, vírus SARS, vírus da peritonite infecciosa felina), Togavírus sindbis vírus,

vírus da encefalite equina, chikungunya vírus, vírus da rubéola, vírus do rio Ross, vírus da diarreia bovina, vírus da cólera suína), flavivírus (por exemplo, vírus da dengue,

vírus do Nilo Ocidental, vírus da febre amarela, vírus da encefalite japonesa, vírus da encefalite de St.

Louis, vírus da encefalite transmitida por carrapatos), Coronavírus (por exemplo, coronavírus humano (resfriado comum), vírus da gastroenterite suína), Rhabdovírus (por exemplo, vírus da raiva, vírus da estomatite vesicular), Filovírus (por exemplo, vírus de Marburg, vírus Ebola.), Paramixovírus (por exemplo, vírus do sarampo, vírus da cinomose canina , vírus da caxumba, vírus da parainfluenza, vírus sincicial respiratório, vírus da doença de Newcastle, vírus da peste bovina), Orthomyxovírus (por exemplo, vírus da influenza humana, vírus da influenza aviária, vírus da influenza equina), Bunya vírus (por exemplo, hantavírus, vírus

LaCrosse, vírus da febre de Rift Valley), Arenavírus (por exemplo, vírus Lassa, vírus Machupo), Reovírus (por exemplo,

reovírus humanos, rotavírus humano), Birnavírus (por exemplo, vírus infeccioso bursal, vírus da necrose pancreática de peixes) , Retrovírus (por exemplo, HIV 1, HIV 2, HTLV-1, HTLV-2, vírus da leucemia bovina, vírus da imunodeficiência felina, vírus do sarcoma felino, vírus do tumor mamário de camundongo), Hepadnavírus (por exemplo, vírus da hepatite B.), Parvovírus (por exemplo, parvovírus B humano, parvovírus canino, vírus da panleucopenia felina) Papovavírus (por exemplo, papilomavírus humano, SV40, papilomavírus bovino), Adenovírus (por exemplo, adenovírus humano , adenovírus bovino, adenovírus suíno), vírus Herpes (por exemplo, vírus herpes simplex, vírus varicela-zoster, vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa, citomegalovírus humano, herpesvírus humano 6) e Poxvírus (por exemplo, vaccinia, fowlpoxvírus, poxvírus de guaxvírus, vírus da varíola vírus, vírus do musculum contagiosum).

[00173] Como os compostos e composições da presente invenção são capazes de inibir a interação do patógeno com uma célula que expressa o polipeptídeo CR3, eles são úteis em métodos de inibir ou tratar uma infecção de um sujeito com um patógeno que interage com uma célula que expressa o polipeptídeo CR3, em que uma quantidade eficaz de um não carboidrato, ligante de molécula pequena da invenção é administrada ao sujeito, para assim inibir ou tratar a infecção do sujeito com o patógeno.

[00174] Os modos de administração, as quantidades de ligando administradas e as composições contendo ligando,

para utilização nos métodos da presente invenção, são rotineiros e estão ao alcance dos profissionais da área. Se uma infecção, particularmente uma infecção patogênica, foi tratada ou inibida, é determinado medindo um ou mais parâmetros de diagnóstico indicativos do curso da doença, em comparação com um controle adequado. No caso de um experimento com animal, um "controle adequado" é um animal não tratado com um inibidor de ligante da invenção ou tratado com a composição farmacêutica sem o inibidor de ligante. No caso de um sujeito humano, um "controle adequado" pode ser o indivíduo antes do tratamento ou pode ser um humano (por exemplo, um controle de mesma idade ou semelhante) tratado com um placebo. De acordo com a presente invenção, o tratamento ou inibição do desenvolvimento de uma infecção inclui e abrange, sem limitação: (1) prejudicar, anular, reduzir, prevenir ou interromper o desenvolvimento da infecção em um sujeito; (2) tratar uma infecção em um sujeito; ou (3) prevenir o desenvolvimento de uma infecção em um sujeito que tem uma predisposição para a infecção, mas ainda não foi diagnosticado com a infecção e, portanto, o tratamento constitui o tratamento profilático da infecção.

[00175] As composições e métodos da presente invenção são, portanto, adequados para o tratamento de um indivíduo que foi diagnosticado com uma infecção, que é suspeito de ter uma infecção, que é conhecido como suscetível e que é considerado susceptível de desenvolver uma infecção, ou que é considerado provável para desenvolver uma recorrência de uma infecção tratada anteriormente.

[00176] Para que a invenção possa ser facilmente compreendida e posta em prática, modalidades preferidas particulares serão agora descritas por meio dos seguintes exemplos não limitativos.

Exemplos Exemplo 1 Triagem de Bibliotecas de Fármacos Para Identificar Fármacos que Ligam Cr3 e Triagem para um Subconjunto de Fármacos que Bloqueiam Cr3 Píli de Neiseria Gonorrheaeae e Interação de Cr3 HIV

[00177] Um domínio I recombinante (domínio rI) de CD11b humano foi testado quanto à ligação a 3141 compostos aprovados pela FDA. A triagem inicial dos compostos a 1 μM identificou 30 compostos que se ligaram com alta afinidade (ver, Figuras 1-3 que ilustram a identificação de carbamazepina, ácido flufenâmico e metildopa, respectivamente).

[00178] Estes 30 compostos foram triados quanto à afinidade de ligação e capacidade de bloquear a pili de tipo selvagem de MS11 de N. gonorrhoeae e a ligação do HIV ao domínio rI humano em experimentos de RPS de competição direta (ver, Figuras 4-6 que ilustram curvas de ressonância plasmônica de superfície para carbamazepina, flufenâmico ácido e metildopa, respectivamente). Apenas 6 dos 30 compostos se ligaram com alta afinidade e foram capazes de bloquear completamente as interações com pili de MS11. Apenas 4 dos 30 compostos de ligação foram capazes de bloquear a interação do HIV com o domínio rI humano. Apenas 3 desses compostos de bloqueio (ou seja, carbamazepina, ácido flufenâmico e metildopa) atenderam aos nossos critérios para uso atual e segurança em humanos. Os 3 fármacos mostrados na Tabela 1 podem bloquear as interações entre CR3 ou domínio I humano recombinante e ambos pili de MS11 de N. gonorrhoeae e HIV.

TABELA 1: COMPOSTOS DA TRIAGEM DE FÁRMACOS COM AFINIDADE ABAIXO DE 1 µM QUE PODERIA BLOQUEAR A CEPA DE PILI DE MS11 DE NEISSERIA GONORRHOEAE PURIFICADO E/OU INTERAÇÕES DE HIV

COM DOMÍNIO RI HUMANO EM EXPERIMENTOS DE RESSONÂNCIA DE PLASMON DE SUPERFÍCIE.

Composto KD Bloqueio de pili Bloqueio de HIV de MS11 em RPS em RPS CARBAMAZEPINA 2.12 nM Sim Sim METILDOPA 1.01 nM Sim Sim ÁCIDO FLUFENÂMICO 6.66 nM Sim Sim

[00179] As tabelas 2 e 3 mostram a atividade relativa dos 3 compostos na inibição da ligação do domínio rI humano a Neisseria gonorrhoeae de pili deMS11 ou HIV WITO derivado de células T primárias, respectivamente.

TABELA 2: LIGAÇÃO DE BLOQUEIO DE FÁRMACOS DE PILI DE MS11 DE NEISSERIA GONORRHOEAE a RI-DOMAIN EM ENSAIOS DE COMPETIÇÃO 1:1.

UR de UR de UR de % de Nome do fármaco Pili + Pili Fármaco inibição

FÁRMACO CARBAMAZEPINA 30.918 4.358 4.675 98.97% ÁCIDO FLUFENÂMICO 30.918 4.627 10.872 79.80% METILDOPA 30.918 4.578 8.003 88.92%

[00180] Os dados na Tabela 2 mostram que na competição 1:1, os fármacos bloqueiam a ligação do domínio I a pili de MS11 de Neisseria gonorrhoeae. A carbamazepina mostra a melhor inibição com o bloqueio de ~ 99% do acúmulo de unidades de ressonância (UR) observado. Fármaco ou fármaco e pili fluíram a 100 nM.

TABELA 3: LIGAÇÃO DE BLOQUEIO DE FÁRMACO DE CÉLULAS T

PRIMÁRIAS DERIVADAS DE HIV WITO PARA DOMÍNIO RI EM ENSAIOS DE COMPETIÇÃO 1:1.

UR de UR de % de Nome do fármaco UR de Pili Pili + Fármaco inibição

FÁRMACO CARBAMAZEPINA 60.941 0.227 1.772 97.09% ÁCIDO FLUFENÂMICO 60.941 0.473 8.857 85.47% METILDOPA 60.941 0.296 3.692 93.94%

[00181] Os dados na Tabela 3 mostram que em competição 1:1, os fármacos bloqueiam a ligação do domínio I ao HIV WITO derivado de células T primárias. A carbamazepina mostra a melhor inibição com ~ 97% de bloqueio do acúmulo de RU observado. O fármaco ou fármaco e o domínio rI fluíram a 1 µM.

Materiais e métodos Reagentes PilE (proteína pili)

[00182] Pili purificado de cepa de tipo selvagem de MS11 de N. gonorrhoeae isogênica contendo uma mutação pglA::kan descrita em Jennings et al (2011, Cell Microbiol.

13 (6): 885-96) foi preparado com base no método Stimson previamente descrito et al (1995, Mol Microbiol 17: 1201- 1214), seguido de purificação adicional por eletroeluição de monômeros de pili. Resumidamente, as amostras foram separadas em um gel de poliacrilamida a 12% e eletroeluídas em tampão de corrida SDS em um Mini Gel Eluter (Bio-Rad) a 100 mA por 30 min. As diferentes frações foram coletadas e 20uL de cada uma foi analisada usando a análise de Western immunoblot com o anticorpo anti-pili para determinar quais frações continham pili, então a pureza avaliada por 12% de gel de poliacrilamida e coomassie. A concentração de pili purificada foi determinada por ensaio BCA.

[00183] HIV: HIV WITO purificado Keele et al (2008, Proc Natl Acad Sci US A. 105 (21): 7552-7), Salazar-Gonzalez et al (2009, J Exp. Med. 206 (6): 1273-89) de células HEK- 293T que foram transfectadas com plasmídeo de DNA proviral.

HIV WITO foi ainda amplificado a partir da infecção de células mononucleares do sangue periférico ativadas por PHA [PBMCs]), conforme descrito anteriormente Jones et al (2010, J Biol. Chem. 285 (24): 18603-14), Garcia-Minambres et al (2017, Immunol Cell Biol. 95 (5): 478-48). Em resumo, o vírus foi purificado a partir de ultracentrifugação e a quantidade e infectividade do HIV foram medidas por ELISA de proteína p24 de HIV e infecção em células repórter TZM-bl como descrito anteriormente Jones et al (2010, supra), Garcia- Minambres et al (2017, supra). Os vírus purificados foram então usados para análises de bloqueio de RPS.

Bibliotecas de fármacos

[00184] Uma combinação de duas bibliotecas, bibliotecas Microsource-CPOZ (2400 fármacos) e ML Drug (741 fármacos), incluindo fármacos aprovados pela FDA, foram adquiridas da Compounds Australia (Compounds Australia; Griffith Institute for Drug Discovery, Griffith University, Building N75, Brisbane Innovation Park, Don Young Road, Nathan QLD 4111).

Fármacos para ensaios pós-triagem

[00185] Todos os fármacos para ensaios celulares pós- triagem (i.e., após o Exemplo 1) foram obtidos de SIGMA Aldrich (St Louis, Missouri): ácido flufenâmico, número de catálogo F9005-10G, carbamazepina, número de catálogo C4024- 1G; metildopa, número de catálogo 1426002-500MG.

Métodos Ressonância de plasma de superfície (RPS)

[00186] As análises de SPR foram realizadas usando um sistema Biacore S200 (GE Healthcare Life Sciences, Parramatta, NSW AUS). As amostras foram analisadas a 25° C em solução salina tamponada com fosfato (PBS), a uma taxa de fluxo de 10 μL/min e usando cinética de ciclo único. Domínio rI humano conforme descrito em DuMont et al (2013, Proc Nat Acad Sci. 110 (26): 10794-9), domínio I recombinante de camundongo (domínio rI de camundongo) conforme descrito em DuMont et al (2013, Proc Nat Acad Sci. 110 (26): 10794-9) e receptor de complemento humano recombinante 3 (rCR3; R&D Systems, Minneapolis, MN) foram imobilizados em células separadas de um chip sensor series S CM5 usando um kit de captura NHS (ambos da GE Healthcare Life Sciences) para experimentos de pili purificados usando métodos previamente descritos em DuMont et al (2014, Infect Immun. 82: 1268-76).

Alternativamente, para experimentos em que oligossacarídeos livres com estruturas semelhantes ao pili-glicano foram examinados; domínio rI humano e rCR3 foram imobilizados em células separadas de um chip sensor. Uma imobilização em branco foi usada como um controle/referência (célula de fluxo 1) em todos os chips. Pili de MS11 de tipo selvagem (liga- se ao domínio rI e rCR3) e pili de MS11 pglA (não tem galactose terminal, não se liga ao domínio rI humano ou rCR3)

e duas cepas de HIV, NL4-3 e NLAD8 foram diluídas em série de 2 μM a 0,125 μM em PBS. Ligantes de glicano de controle positivo semelhantes em estrutura ao glicano gonocócico ligado à pilina, α1-3 galactobiose (Dextra Laboratories, Reading, Reino Unido, número de catálogo G203), ou a glicanos de superfície do HIV, α1-3, α1-3, α1-6 manopentaose (Dextra Laboratories, Reading, UK, número de catálogo M536), foram diluídos em série de 2 μM a 0,0078 μM em PBS e incluídos no protocolo de triagem para confirmar a funcionalidade do domínio rI humano imobilizado, domínio rI de camundongo e rCR3 humano ao longo do ensaio. Os pontos de dados de afinidade foram obtidos 15s após a injeção para evitar um sinal artefatual resultante do transporte em massa. Os sensogramas SPR foram analisados usando o software de avaliação Biacore (GE Healthcare Life Sciences) para determinar constantes de dissociação (isto é, KD).

Triagem de fármacos reaproveitadas contra o domínio rI humano de CD11b

[00187] O domínio rI humano foi imobilizado em um chip sensor CM5 com uma célula de fluxo de controle em branco, conforme descrito acima. Uma combinação de duas bibliotecas, incluindo fármacos aprovados pela FDA, Microsource-CPOZ (2400 fármacos) e ML Drug (741 fármacos), foi adquirida na Compounds Australia. Cada fármaco foi preparado até 1 µM em DMSO a 10% em uma placa de 384 poços imediatamente antes do uso no sistema Biacore S200. Um novo chip biossensor foi feito para cada placa de 384 poços selecionados. Foi realizado um ensaio de ligação de tela de injeção de concentração única (sim/não). A ligação foi determinada com base em uma mudança de unidade de resposta igual às unidades de resposta corrigidas de peso molecular do glicano de controle positivo na estabilidade da fase de ligação do ciclo de dissociação. Os “acertos” foram verificados novamente em uma faixa de concentração de 1,6 nM a 1 µM para definir o KD da interação. Qualquer fármaco com um valor KD> 1 µM foi descartada da análise. Os ensaios KD para determinar as interações de alta afinidade foram ainda mais refinados usando intervalos de concentração mais baixos do composto para obter a afinidade final, conforme descrito nas legendas das figuras.

[00188] Para determinar se os fármacos com interações de alta afinidade com o domínio rI humano poderiam inibir a interação com pili de MS11 ou HIV, o ensaio de competição entre HIV WITO derivado de células T primárias pili de MS11 de e N. gonorrhoeae e os fármacos foram realizados como descrito Mubaiwa et al (2017, Sci Rep. 7 (1): 5693). A análise de competição RPS de pili de MS11 de N. gonorrhoeae e interação de domínio rI humano foi realizada com domínio rI humano imobilizado em uma superfície de chip sensor CM5 (baixa imobilização - ~ 3500RU em comparação com ~ 14000RU para triagem inicial e cálculos KD). Pili, fármaco ou fármaco e pili purificados por MS11 de N. gonorrhoeae fluíram a 100 nM sobre o domínio I e as unidades de resposta das interações foram registradas.

[00189] Para a análise de competição SPR da interação do HIV com o domínio rI humano, HIV WITO derivado de células T primárias foi imobilizado em uma superfície de chip sensor C1. O domínio rI humano, fármaco ou fármaco e o domínio rI humano fluíram a 1 µM sobre o VIH imobilizado e as unidades de resposta das interações foram registadas. Qualquer fármaco que não pudesse competir com o vírus ou a ligação do pili ao domínio rI também foi descartada. Os fármacos restantes foram avaliados quanto à segurança conhecida em humanos e às concentrações terapêuticas conhecidas para determinar se o fármaco seria testado, e em que concentrações, em modelos de células in vitro. Todos os sensorgramas de SPR e gráficos de resultados foram analisados com o software de avaliação Biacore S200 (GE Healthcare Life Sciences).

EXEMPLO 2

A CARBAMAZEPINA BLOQUEIA ADERÊNCIA A CÉLULAS CHO

[00190] A cepa de MS11gfp de N. gonorrhoeae foi usada em ensaios de bloqueio de fármacos. A cepa parental, MS11 Schoolnik et al (1984, J Exp Med, 159: 1351-1370), Segal et al (1985, Cell 40: 293-300), foi originalmente isolada de um paciente com cervicite gonocócica não complicada e é comumente usada para estudar a patogênese gonocócica.

MS11gfp abriga o plasmídeo de expressão da proteína fluorescente verde (GFP), pCmGFP (número de acesso do GeneBank FJ172221) Srikhanta et al (2009, PLoS Pathog. 5 (4): e1000400) e, portanto, expressa GFP Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354-63).

[00191] A capacidade da carbamazepina para bloquear a aderência da cepa de MS11gfp de N. gonorrhoeae às células CHO-neo ou CHO-CR3 foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico. Os ensaios foram realizados essencialmente conforme descrito por Jen et al (2013, PLoS Pathog. 9 (5): e1003377). A este respeito, células CHO-neo ou CHO-CR3 foram semeadas em uma placa de 96 poços e deixadas crescer até a confluência. Os gonococos MS11gfp foram então usados para desafiar (1 h) células CHO simultaneamente com, ou sem, várias concentrações de carbamazepina (como observado). A intensidade da fluorescência (485/528 nm), correspondente à aderência bacteriana, foi registrada usando um leitor de microplacas Synergy HT Multi-mode (BioTek Instruments, Winooski, VT EUA). O ensaio foi realizado em triplicado em 3 ocasiões separadas. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da média calculada de aderência bacteriana.

[00192] Durante a infecção natural, mais de 92% de N.

gonorrhoeae estão associados ao colo uterino feminino por meio de uma interação com CR3 Edwards et al (2001, Cell Microbiol. 2001 3 (9): 611-22). A interação N. gonorrhoeae- CR3 ocorre apenas através do domínio I, requer pilus gonocócico Edwards et al (2002, Cell Microbiol. 4 (9): 571- 84), e é mediada pelo glicano ligado à pilina Jennings et al (2011, Cell Microbiol. 13 (6): 885-96). Portanto, para examinar a capacidade da carbamazepina de bloquear a interação de gonococos com o domínio rI humano de CR3, os inventores realizaram ensaios de aderência fluorométricos.

As células que expressam CR3 (CHO-CR3) e não expressam (CHO- neo) CHO foram semeadas em placas de microtitulação e a aderência gonocócica foi quantificada fluorometricamente, conforme descrito anteriormente Jen et al (2013, supra). Uma diminuição dependente da dose na adesão de MS11gfp a CHO- CR3, mas não células CHO-neo, ocorreu quando a carbamazepina foi incluída no ensaio (Figura 7). A presença de 1 µM de carbamazepina diminuiu a aderência gonocócica às células CHO-CR3 a um nível que não foi significativamente diferente do registrado para as células CHO-neo (p  0,057). Apenas os níveis de fundo de fluorescência foram registrados para os ensaios realizados usando células CHO-neo que foram incubadas com MS11gfp. Assim, esses dados demonstram que, em concentrações micromolares, a carbamazepina pode bloquear a aderência dos gonococos às células que expressam CR3.

EXEMPLO 3

METHYLDOPA BLOQUEIA ADERÊNCIA A CÉLULAS CHO

[00193] A cepa MS11gfp de N. gonorrhoeae foi usada em ensaios de bloqueio de fármacos, como para o Exemplo 2. A capacidade da metildopa para bloquear a aderência da cepa de MS11gfp de N. gonorrhoeae a células CHO-CR3 ou CHO-neo foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico. Os ensaios foram realizados essencialmente como descrito no Exemplo 2. Notavelmente, uma diminuição dependente da dose na aderência de MS11gfp a CHO-CR3, mas não células CHO-neo, ocorreu quando a metildopa foi incluída no ensaio (Figura 8). A presença de metildopa 100 µM diminuiu a aderência gonocócica às células CHO-CR3 a um nível que não foi significativamente diferente do registrado para as células CHO-neo (p  0,23). Apenas os níveis de fundo de fluorescência foram registrados para os ensaios realizados usando células CHO-neo que foram incubadas com MS11gfp.

Assim, esses dados demonstram que, em concentrações micromolares, a metildopa pode bloquear a aderência dos gonococos às células que expressam CR3.

EXEMPLO 4

O ÁCIDO FLUFENÂMICO BLOCA ADERÊNCIA A CÉLULAS CHO

[00194] A cepa Ms11gfp de N. gonorrhoeae foi usada em ensaios de bloqueio de fármacos, como para o Exemplo 2. A capacidade do ácido flufenâmico para bloquear a aderência da cepa MS11gfp de N. gonorrhoeae a células CHO-CR3 ou CHO-neo foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico. Os ensaios foram realizados essencialmente como descrito no Exemplo 2. A inspeção da Figura 9 mostra que uma diminuição dependente da dose na aderência de MS11gfp a CHO-CR3, mas não a células CHO-neo, ocorreu quando o ácido flufenâmico foi incluído no ensaio. Apenas os níveis de fundo de fluorescência foram registrados para os ensaios realizados usando células CHO-neo que foram incubadas com MS11gfp.

Assim, esses dados demonstram que, em concentrações micromolares, o ácido flufenâmico pode bloquear a aderência dos gonococos às células que expressam CR3.

EXEMPLO 5

BLOQUEIO DA ADERÊNCIA DE CARBAMAZEPINA À CÉLULAS HUMANAS, EPITELIAIS DO COLO DO ÚTERO PRIMÁRIO (PEX)

[00195] Durante a infecção natural, mais de 92% de N.

gonorrhoeae estão associados ao colo uterino feminino por meio de uma interação com CR3 (Edwards et al., 2001, Cell Microbiol. 2001 3 (9): 611-22). A interação N. gonorrhoeae- CR3 ocorre exclusivamente através do domínio I, requer pilus gonocócico (Edwards et al., 2002. Cell Microbiol. 4 (9): 571-84) e é mediada pelo glicano ligado à pilina (Jennings et al 2011. Cell Microbiol. 13 (6): 885-96). Portanto, os presentes inventores examinaram a capacidade da carbamazepina para bloquear a interação de gonococos com o domínio I de CR3 na mucosa cervical.

[00196] Resumidamente, seis cepas de N. gonorrhoeae foram usadas nos experimentos. Estes incluíram a cepa de laboratório, MS11; os isolados de passagem baixa, 1291, UT38097, LT38885, PID-26 e SK92-679; todos os quais foram transformados com o plasmídeo de expressão da proteína fluorescente verde (GFP), pCmGFP (número de acesso do GenBank FJ172221) Srikhanta et al (2009, PLoS Pathog. 5 (4): e1000400) e, assim, expressou GFP Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354-63). Estas cepas exibem diversas sequências de aminoácidos de pili e estruturas de glicosilação de pilina. A capacidade da carbamazepina em bloquear a aderência de N. gonorrhoeae às células epiteliais cervicais primárias (PEX) humanas foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico. Os ensaios foram realizados essencialmente conforme descrito por Jen et al (2013, supra). A este respeito, as células PEX foram semeadas em uma placa de 96 poços e deixadas crescer até a confluência. Os gonococos foram então usados para desafiar (1h) células PEX simultaneamente com, ou sem, várias concentrações de carbamazepina (100 pM, 10 nM, 1 µM ou 100 µM, como observado) ou DMSO a 1% (controle de veículo). As células PEX não infectadas tratadas com DMSO 1% serviram como um controle para a fluorescência de fundo. A intensidade da fluorescência (485/528 nm), correspondente à aderência bacteriana, foi registrada usando um leitor de microplacas Synergy HT Multi-mode (BioTek Instruments, Winooski, VT EUA). O ensaio foi realizado em triplicado em 3 ocasiões separadas. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da média calculada de aderência bacteriana.

[00197] Os resultados apresentados na Figura 10 revelam que uma diminuição dependente da dose na aderência às células PEX ocorreu para todas as cepas testadas quando a carbamazepina foi incluída no ensaio. A este respeito, ocorreu uma inibição de aderência superior a 95% na presença de 1 µM de carbamazepina para todas as cepas testadas. Assim, esses dados demonstram que a carbamazepina bloqueia a aderência dos gonococos às células que expressam CR3.

EXEMPLO 6

METHYLDOPA BLOQUEIA A ADESÃO ÀS CÉLULAS PEX HUMANAS

[00198] A capacidade da metildopa de bloquear a aderência da epa MS11gfp de N. gonorrhoeae a células epiteliais cervicais primárias humanas foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico, conforme descrito no Exemplo 5. A inspeção da Figura 11 revela que uma diminuição dependente da dose na aderência de MS11gfp a PEX células ocorreram quando a metildopa foi incluída no ensaio. A este respeito, ocorreu aproximadamente 85% de inibição da adesão na presença de metildopa 10 nM. Os dados obtidos com a utilização de metildopa 1 µM não foram significativamente (p 0,234) diferentes dos obtidos para células PEX não infectadas tratadas com veículo (DMSO). Assim, esses dados demonstram que a metildopa bloqueia a aderência dos gonococos às células que expressam CR3.

EXEMPLO 7

BLOQUEIO DA ADERÊNCIA DE ÁCIDO FLUFENÂMICO A CÉLULAS PEX HUMANAS

[00199] A capacidade do ácido flufenâmico para bloquear a aderência a cepa MS11gfp de N. gonorrhoeae a células epiteliais cervicais primárias humanas foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico, conforme descrito no Exemplo 5. Os resultados mostrados na Figura 11 mostram que uma diminuição dependente da dose em MS11gfp a aderência às células PEX ocorreu quando o ácido flufenâmico foi incluído no ensaio. A este respeito, ocorreu aproximadamente 70% de inibição da aderência na presença de ácido flufenâmico 10 nM. Assim, esses dados demonstram que a metildopa bloqueia a aderência dos gonococos às células que expressam CR3.

EXEMPLO 8

A CARBAMAZEPINA PODE TRATAR UMA INFECÇÃO ESTABELECIDA POR N. GONORRHOEAE EM CÉLULAS PEX

[00200] As cepas de N. gonorrhoeae usadas em ensaios de sobrevivência incluem MS11 Schoolnik et al (1984, supra),

Segal et al (1985, supra) e 1291 Apicella et al (1974, J Infect Dis. 130 (6): 619-25), Dudas e Apicella (1988, Infect Immun. 56 (2): 499-504), que são comumente usados para estudar a patogênese gonocócica. Também foi examinado um painel de isolados clínicos de baixa passagem (Figura 14; isto é, cepas de N. gonorrhoeae LT38097, UT38885, PID-26 e SK92-679). As cepas 1291 e LT38097 são isolados uretrais masculinos; as cepas MS11 e UT38885 foram obtidas de mulheres com cervicite gonocócica não complicada; a cepa PID-26 foi obtida de uma paciente com doença inflamatória pélvica; e a cepa SK92-679 é um isolado de sangue de um paciente com infecção disseminada. As cepas de N. gonorrhoeae resistentes a antibióticos testadas foram obtidas na Public Health England e compreendiam WHO-L, WHO-M, WHO-X (H041), WHO-Y (F89) e WHO-Z (A8806), ver Figura 15. Para uso, as bactérias foram colhidas durante a noite (37 ° C, 5% CO2), culturas em placa de ágar GC-IsoVitaleX e enumeradas espectrofotometricamente, como previamente descrito Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354-63). Os estudos de infecção foram realizados usando uma multiplicidade de infecção de 100 Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354-63).

[00201] As células PEX foram desafiadas com as cepas de N. gonorrhoeae observadas por 90 min. Para ensaios de sobrevivência de dose única, o meio de infecção foi então removido, as células foram enxaguadas três vezes e meio fresco contendo 1% de DMSO (controle de veículo), carbamazepina (100 pM-100 µM, conforme observado) ou ceftriaxona (0,1 µg/mL ou 0,5 µg/mL, controle positivo) foi adicionado. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24h ou 48h. Nos tempos de pós-tratamento indicados, o meio de infecção foi removido, as monocamadas de células PEX foram enxaguadas três vezes, lisadas e a N.

gonorrhoeae viável foi enumerada por contagem de unidades formadoras de colônia após o plaqueamento de diluições em série dos lisados de células PEX (por exemplo, ver 12 ) Em alguns experimentos (ou seja, dois ensaios de sobrevivência de dose, por exemplo, ver Figura 13), uma segunda dose de carbamazepina foi adicionada 24 horas após a adição da primeira dose de carbamazepina.

[00202] Os resultados apresentados nas Figuras 12 a 16 demonstram que a carbamazepina pode tratar células PEX que têm uma infecção estabelecida com uma variedade de cepas de N. gonorrhoeae, incluindo cepas multirresistentes.

EXEMPLO 9 O HIV SE LIGA A CÉLULAS CHO EM UMA MODA CR3-DEPENDENTE, E A CARBAMAZEPINA PODE BLOQUEAR A LIGAÇÃO DO HIV A CR3 NAS CÉLULAS CHO-CR3

[00203] As cepas de HIV NL4-3 e NLAD8 foram utilizadas no bloqueio de aderência a células CHO por fármacos.

[00204] Estudos de PSR indicaram que o domínio rI humano de CR3 pode se ligar ao HIV. Para testar a capacidade do HIV de se ligar às células CHO de um modo dependente de CR3, e para testar a capacidade da carbamazepina em bloquear a aderência do HIV às células CHO-CR3 ou CHO-neo, foi usado um ensaio de aderência fluorométrico, essencialmente conforme descrito por Jen et al. (2013, supra). A este respeito, células CHO-neo ou CHO-CR3 foram semeadas em uma placa de 96 poços e deixadas crescer até a confluência. HIV marcado com fluorescência (10 ng de proteína da cápside de HIV p24 equivalente de HIV em 100 µL de meio de cultura F12) foi então usado para desafiar (2 h) células CHO simultaneamente com, ou sem, várias concentrações de carbamazepina (como observado). A intensidade da fluorescência (485/528 nm), correspondente à adesão das células HIV, foi registrada usando um leitor de microplacas Synergy HT Multi-mode (BioTek Instruments, Winooski, VT EUA). O ensaio foi realizado em triplicado em 3 ocasiões separadas. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal- Wallis foi usada para determinar a significância estatística da média calculada de adesão às células virais.

[00205] Os ensaios de adesão fluorométrica foram realizados com as cepas de HIV NL4-3 e NLAD8. As células que expressam CR3 (CHO-CR3) e não expressam (CHO-neo) CHO foram semeadas em placas de microtitulação e a aderência gonocócica foi quantificada fluorometricamente, conforme descrito por Jen et al. (2013, supra). A adesão de ambas as cepas de HIV às células CHO só foi observada quando CR3 estava presente, expresso nas células CHO-CR3 (Figura 17), pois não houve diferença estatisticamente significativa entre a adesão às células CHO-neo e o controle não infectado (NL4-3, P 0,37; NLAD8 P = 0,12).

[00206] Tendo estabelecido a ligação dependente de CR3 do HIV às células CHO, os inventores examinaram a seguir a capacidade da carbamazepina para bloquear a interação das cepas de HIV NL4-3 e NLAD8 com o domínio I de CR3 usando ensaios de adesão fluorométrica. As células que expressam CR3 (CHO-CR3) e não expressam (CHO-neo) CHO foram semeadas em placas de microtitulação e a aderência ao HIV foi quantificada fluorometricamente, conforme descrito por Jen et al. (2013, supra). Uma diminuição dependente da dose na aderência das cepas de HIV NL4-3 e NLAD8 com CHO-CR3, mas não com células CHO-neo, ocorreu quando a carbamazepina foi incluída no ensaio (ver Figura 18). A presença de 1 µM de carbamazepina diminuiu a aderência das células NL4-3 e NLAD8 às células CHO-CR3 a um nível que não foi significativamente diferente do registrado para as células CHO-neo (p  0,061).

Apenas os níveis de fundo de fluorescência foram registrados para os ensaios realizados usando células CHO-neo que foram incubadas com NL4-3 e NLAD8. Assim, esses dados demonstram que, em concentrações de 1 µM, a carbamazepina pode bloquear a aderência das células NL4-3 e NLAD8 às células que expressam CR3.

EXEMPLO 10

A CARBAMAZEPINA BLOQUEIA A ADERÊNCIA DO HIV ÀS CÉLULAS PEX

[00207] As cepas de HIV NL4-3 e NLAD8 foram usadas no bloqueio de fármacos da adesão às células PEX.

[00208] A capacidade da carbamazepina de bloquear a aderência do HIV às células PEX humanas foi avaliada usando um ensaio de aderência fluorométrico, essencialmente conforme descrito por Jen et al. (2013, supra). A este respeito, as células PEX foram semeadas em uma placa de 96 poços e deixadas crescer até a confluência. HIV marcado com fluorescência (10 ng de proteína da cápside de HIV p24 equivalente de HIV em 100 µL de meio de cultura F12) foi então usado para desafiar (2 h) células PEX simultaneamente com, ou sem, várias concentrações de carbamazepina (como observado). A intensidade da fluorescência (485/528 nm), correspondente à adesão das células HIV, foi registrada usando um leitor de microplacas Synergy HT Multi-mode (BioTek Instruments, Winooski, VT EUA). O ensaio foi realizado em triplicado em 3 ocasiões separadas. Uma análise de variância de amostra k de Kruskal-Wallis foi usada para determinar a significância estatística da média calculada de adesão às células virais.

[00209] A Figura 19 mostra que uma diminuição dependente da dose nas cepas de HIV NL4-3 e aderência de células NLAD8 com células PEX ocorreu quando a carbamazepina foi incluída no ensaio. A presença de 100 µM de carbamazepina diminuiu a associação de células NL4-3 com células PEX em 88,53% +/- 0,37 (valor P vs controle não infectado = 0,01) e para NLAD8 em 87,98% +/- 0,48 (valor P vs controle não infectado = 0,0065). Redução significativa na adesão celular é observada em todas as concentrações até 100pM de carbamazepina (para NL4-3 59,65% +/- 0,41 uma redução e para NLAD8 59,65% +/- 0,24). Assim, esses dados demonstram que a carbamazepina pode bloquear a aderência das células NL4-3 e NLAD8 às células que expressam CR3.

EXEMPLO 11

TRATAMENTO DE METILDOPA DE DOSE ÚNICA DE CÉLULAS PEX INFECTADAS COM ISOLADOS DE N. GONORRHOEAE DE BAIXA PASSAGEM

[00210] A capacidade de uma única dose de metildopa foi avaliada para inibir a sobrevivência de isolados de N.

gonorrhoeae de baixa passagem em células PEX desafiadas com esses isolados. Para estabelecer a infecção, as células PEX foram desafiadas com N. gonorrhoeae por 90 min usando os isolados de passagem baixa observados. As infecções foram então autorizadas a prosseguir por mais 24 h ou 48 h na presença ou ausência de DMSO (1%, controle de veículo),

metildopa (10 µM, Md) ou ceftriaxona (0,5 µg/mL, controle positivo, Cfx). A inspeção da Figura 20 revela que o tratamento das células PEX infectadas com uma única dose de metildopa resultou em uma diminuição significativa (p 0,0001) na capacidade de cada cepa testada para sobreviver, com mais de 99% de morte gonocócica ocorrendo após 24h, Tratamento com metildopa 10 µM.

EXEMPLO 12

TRATAMENTO COM METILDOPA DE DOSE ÚNICA DE CÉLULAS PEX INFECTADAS COM N. GONORRHOEAE MULTI-RESISTENTE A FÁRMACOS

[00211] A capacidade de uma única dose de metildopa para inibir a sobrevivência de cepas de N. gonorrhoeae multirresistentes em células PEX infectadas foi avaliada usando um ensaio de sobrevivência análogo ao descrito no Exemplo 11. A inspeção da Figura 21 revela que o tratamento das células PEX infectadas com uma única dose de metildopa resultou em uma diminuição significativa (p 0,0001) na capacidade de cada cepa multirresistente testada para sobreviver, com mais de 99% de morte gonocócica ocorrendo após 24h, 10 µM de tratamento com metildopa.

EXEMPLO 13 EFEITO DA CARBAMAZEPINA SOBRE N. GONORRHOEAE NA

AUSÊNCIA DE CÉLULAS HUMANAS

[00212] A carbamazepina foi incubada diretamente com cepas de N. gonorrhoeae em meio de crescimento bacteriano para avaliar se tinha algum efeito inibitório ou de morte direto nas bactérias nas concentrações que foram usadas nos ensaios de bloqueio e morte realizados na presença de células humanas. Notavelmente, enquanto os antibióticos tradicionais, ceftriaxona e ciprofloxacina, tiveram um efeito direto na morte de gonococos, a carbamazepina não teve efeito sobre N. gonorrhoeae na ausência de células humanas (ver, Figura 22). Isso é consistente com um mecanismo de morte mediado pelo hospedeiro dependente de CR3.

EXEMPLO 14 EFEITO DA METILDOPA SOBRE N. GONORRHOEAE NA AUSÊNCIA DE

CÉLULAS HUMANAS

[00213] A metildopa foi incubada diretamente em cepas de N. gonorrhoeae em meio de crescimento bacteriano para avaliar se tinha qualquer efeito de morte direta ou inibidor nas bactérias em concentrações que foram usadas nos ensaios de bloqueio e morte que foram conduzidos na presença de células humanas. Consistente com os efeitos observados com a carbamazepina, a metildopa não teve efeito sobre N.

gonorrhoeae na ausência de células humanas, enquanto os antibióticos tradicionais, ceftriaxona e ciprofloxacina, tiveram um efeito direto na morte de gonococos (ver Figura 23). Isso é consistente com um mecanismo de morte mediado pelo hospedeiro dependente de CR3.

EXEMPLO 15

EFEITO DO ÁCIDO FLUFENÂMICO SOBRE N. GONORRHOEAE NA AUSÊNCIA DE CÉLULAS HUMANAS

[00214] O ácido flufenâmico foi incubado diretamente com cepas de N. gonorrhoeae em meio de crescimento bacteriano para avaliar se ele tinha qualquer efeito inibitório ou de morte direta nas bactérias em concentrações que foram usadas nos ensaios de bloqueio e morte realizados na presença de células humanas. Consistente com os efeitos observados com carbamazepina e metildopa, o ácido flufenâmico não teve efeito sobre N. gonorrhoeae na ausência de células humanas, enquanto os antibióticos tradicionais, ceftriaxona e ciprofloxacina, tiveram um efeito direto na morte de gonococos (ver Figura 24). Isso é consistente com um mecanismo de morte mediado pelo hospedeiro dependente de CR3.

Materiais e métodos Reagentes Bactérias, HIV e culturas celulares

[00215] As células PEX foram adquiridas a partir de tecido cervical cirúrgico e mantidas como descrito anteriormente Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354- 63). Os tecidos cervicais desidentificados foram obtidos da Human Tissue Resource Network (Columbus, OH EUA). Células de ovário de hamster chinês (CHO) (isto é, CHO-neo, célula-mãe de controle de vetor e CHO-CR3, células que expressam o receptor do complemento tipo 3 (CR3) foram descritas Ingalls et al (1997, J Immunol. 159 (1): 433 -8). As células CHO foram mantidas em meio F12 de Ham (Gibco, Grand Island, NY EUA) suplementado com 5% de soro fetal bovino mais 0,5 mg/mL de G418 (ambos da Gibco).

[00216] Onze cepas de N. gonorrhoeae foram usadas em nossos experimentos. Estes incluíram a cepa de laboratório, MS11; os isolados de passagem baixa, 1291, UT38097, LT38885, PID-26 e SK92-679; bem como as cepas resistentes a antibióticos, WHO-L, WHO-M, WHO-X, WHO-Y e WHO-Z. Para uso, as bactérias foram colhidas durante a noite (37 ° C, 5% CO2), culturas em placa de ágar GC-IsoVitaleX e enumeradas espectrofotometricamente, como previamente descrito Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354-63). Os estudos de infecção foram realizados usando uma multiplicidade de infecção de 100, conforme descrito em Edwards et al (2000, Infect Immun 68 (9): 5354-63).

[00217] HIV purificado derivado de células de mamíferos (tais como HEK-293T, SupT1-CCR5) como descrito anteriormente Jones et al (2010, J Biol. Chem. 285 (24): 18603-14), Garcia-Minambres et al (2017, Immunol. Cell Biol.

95 (5): 478-48). Duas cepas de HIV foram usadas para essas experiências (NL4-3 e NLAD8 - Adachi et al (1986, J Virol.

59 (2): 284-91), Freed et al (1995, J Virol. 69 (6): 3949- 54). Em resumo, os vírus foram purificados a partir de ultracentrifugação e a quantidade e infectividade do HIV foram medidas por ELISA de proteína p24 de HIV e infecção em células repórter TZM-bl como descrito anteriormente Jones et al (2010, J Biol. Chem. 285 (24): 18603-14), Garcia-Minambres et al (2017, Immunol. Cell Biol. 95 (5): 478-48). Vírus purificados foram então usados para ensaios de aderência celular. O HIV também foi marcado por fluorescência com qualquer EGFP-Vpr ou mCherry-Vpr como descrito anteriormente Pereira et al (2011, PLoS One 6 (2): e17016).

Métodos Ensaio de adesão fluorométrica

[00218] A capacidade dos compostos ou controles negativos para bloquear a aderência da cepa MS11gfp de N.

gonorrhoeae à células PEX, CHO-CR3 ou células CHO-neo foi avaliada usando um ensaio de placa de microtitulação fluorométrico. Os ensaios foram realizados essencialmente conforme descrito por Jen et al. (2013, Plos Pathog 9 (5): e1003377). A este respeito, gonococos que expressam GFP foram usados para desafiar (1 h) células PEX ou CHO imediatamente após a adição do composto. A intensidade da fluorescência (485/528 nm), correspondente à aderência bacteriana, foi registrada usando um leitor de microplacas Synergy HT Multi- mode (BioTek Instruments, Winooski, VT EUA). Poços em branco, desprovidos de células PEX ou CHO, também foram inoculados com bactérias e serviram como um controle para a ligação não específica. O ensaio foi realizado em triplicado em 3 ocasiões separadas. Um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística da média calculada de aderência bacteriana.

[00219] A divulgação de cada patente, pedido de patente e publicação citada neste documento é incorporada neste documento por referência em sua totalidade.

[00220] A citação de qualquer referência neste documento não deve ser interpretada como uma admissão de que tal referência está disponível como "Técnica Anterior" para o pedido instantâneo.

[00221] Ao longo do relatório descritivo, o objetivo foi descrever as modalidades preferidas da invenção sem limitar a invenção a qualquer modalidade ou coleção específica de recursos. Aqueles versados na técnica, portanto, apreciarão que, à luz da presente divulgação, várias modificações e mudanças podem ser feitas nas modalidades particulares exemplificadas sem se afastar do escopo da presente invenção. Todas essas modificações e mudanças devem ser incluídas no escopo das reivindicações anexas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para inibir ou tratar uma infecção de um sujeito com um patógeno que interage com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende, consiste ou consiste essencialmente em administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio I de subunidade alfa de CR3, em que o ligante não extermina diretamente o patógeno, mas inibe a interação do patógeno com a célula, inibindo ou tratando, assim, a infecção do sujeito com o patógeno.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a interação compreende um ou ambos dentre ligação do patógeno à célula e inserção do patógeno na célula.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula imune.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a célula imune é selecionada a partir de células mieloides, como monócitos (por exemplo, macrófagos que incluem macrófagos circulantes e macrófagos residentes em tecido, como células Kupffer), neutrófilos, mastócitos e células dendríticas, assim como células linfoides que incluem leucócitos, como células exterminadoras naturais e células T citotóxicas.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula epitelial.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a célula epitelial é selecionada a partir de células epiteliais cervicais, células epiteliais falopianas, células epiteliais endométricas, células epiteliais retais e células epiteliais faríngicas.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o patógeno é selecionado a partir de bactérias (por exemplo, Neisseria, Streptococcus, Mycobacterium, Staphylococcus, Bordetella, Escherichia e Pseudomonas), fungos (por exemplo, Candida e Cryptococcus), protozoários (por exemplo, Toxoplasma) e vírus (por exemplo, flavivírus, ortomixovírus, paramixovírus, retrovírus, coronavírus, filovírus, arenavírus, rabdovírus e herpesvírus).

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o patógeno é de uma espécie Neisseria.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a espécie Neisseria é Neisseria gonorrhoeae.

10. Método, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que a espécie Neisseria é resistente a multifármacos.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o patógeno é um retrovírus.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o retrovírus é o vírus de imunodeficiência humana (HIV).

13. Método, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz é uma que inibe a transmissão do vírus para o sujeito e/ou disseminação do vírus no sujeito.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o ligante é formulado para a entrega oral.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o ligante é formulado para a entrega sistêmica.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o ligante é formulado para a entrega tópica.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o ligante é formulado para entrega intrauterina.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o ligante é administrado simultaneamente com um agente antimicrobiano.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o agente antimicrobiano é selecionado a partir de antibióticos, antifúngicos, antiprotozoários, antipalúdicos, antituberculóticos e antivirais.

20. Composição tópica para uso na inibição ou tratamento de uma infecção com um patógeno que interaja com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que a composição é caracterizada pelo fato de que compreende, consiste ou consiste essencialmente em um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio I de subunidade alfa de CR3, em que o ligante não extermina diretamente o patógeno, mas inibe a interação do patógeno com a célula e, opcionalmente, um carreador farmaceuticamente aceitável.

21. Composição tópica, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que o ligante de molécula pequena é formulado para aplicação tópica na cavidade da pele ou do corpo.

22. Composição tópica, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que o ligante é formulado como uma espuma, creme, enxaguante, gel, spray, supositório, pessário, loção, pomada, óvulo, tampão ou aerossol.

23. Composição tópica, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que o ligante está compreendido em um artigo (por exemplo, revestido em uma superfície do artigo), como um dispositivo contraceptivo.

24. Composição tópica, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o dispositivo contraceptivo é um dispositivo intrauterino, uma barreira intravaginal, uma esponja intravaginal, um preservativo masculino ou um preservativo feminino.

25. Composição tópica para uso na terapia intrauterina ou profilaxia de uma infecção com um patógeno que interage com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que a composição é caracterizada pelo fato de que compreende, consiste ou consiste essencialmente em um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio I de subunidade alfa de CR3, em que o ligante não extermina diretamente o patógeno, mas inibe a interação do patógeno com a célula e, opcionalmente, um carreador farmaceuticamente aceitável.

26. Artigo para uso na inibição ou tratamento uma infecção com um patógeno que interage com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que artigo é caracterizado pelo fato de que compreende um não carboidrato, ligante de molécula pequena do domínio I de subunidade alfa de CR3 em uma quantidade suficiente para inibir ou tratar a infecção em um indivíduo que utilize o artigo, em que o ligante não extermina diretamente o patógeno, mas inibe a interação do patógeno com a célula e, opcionalmente, um carreador farmaceuticamente aceitável.

27. Artigo, de acordo com a reivindicação 26, sendo que o artigo é caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de uma luva, um dispositivo intrauterino, um aplicador vaginal, um anel vaginal, um dispositivo do tipo barreira intravaginal, uma esponja intravaginal, um preservativo masculino e um preservativo feminino.

28. Artigo, de acordo com a reivindicação 26, sendo que o artigo é caracterizado pelo fato de que é um dispositivo contraceptivo.

29. Artigo, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dispositivo contraceptivo é um dispositivo intrauterino, uma barreira intravaginal, uma esponja intravaginal, um preservativo masculino ou um preservativo feminino.

30. Artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 29, caracterizado pelo fato de que o patógeno é um vírus, por exemplo, um vírus envelopado, em que os exemplos representativos incluem ortomixovírus, paramixovírus, retrovírus, coronavírus, filovírus, arenavírus, rabdovírus e herpesvírus.

31. Artigo, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o vírus é um retrovírus, como vírus de imunodeficiência humana (HIV).

32. Composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de que compreende, ainda, um agente antimicrobiano.

33. Composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o agente antimicrobiano é selecionado a partir de antibióticos, antifúngicos, antiprotozoários, antipalúdicos, antituberculóticos e antivirais.

34. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que o ligante é um composto de dibenzoazepina de Fórmula (I): (I) em que:

R é hidrogênio, hidroxila, NHC1-4alquila, OCOC1-4alquila ou oxo; X e Y são, independentemente, hidrogênio ou halogênio; Z é C1-4 alquila, CONR1R2, C1-4alquilenoNR1R2, C1- 4alquileno(NO)R1R2 ou quinuclidinila; R1 e R2 são, independentemente, hidrogênio ou C1- 6alquila opcionalmente substituída; ou R1 e R2, em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual os mesmos são fixados, formam um anel de heterocicloalquila de 3 a 8 membros que pode ser opcionalmente substituído; e A ligação C10-C11 é uma ligação única ou dupla; em que, quando R é oxo, a ligação C10-C11 é uma ligação única; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

35. Método, composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é selecionado a partir de carbamazepina, oxcarbazepina, acetato de eslicarbazepina, clomipramina, desipramina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, metapramina, opipramol, quinupramina e trimipramina.

36. Método, composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é carbamazepina.

37. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 36, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é administrado em uma dosagem que não é eficaz para tratar epilepsia.

38. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 37, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é administrado em uma dosagem que não é eficaz para tratar dor neuropática.

39. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 38, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é administrado em uma dosagem que não é eficaz para tratar um distúrbio bipolar.

40. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que o ligante é um composto de derivado de ácido antranílico de Fórmula (I): (II) em que: R3 é C1-6alquila, halogênio ou trifluorometila; e R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio, halogênio,

trifluorometila ou C1-6alquila; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

41. Método, composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido antranílico é selecionado a partir de ácido flufenâmico, ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico e ácido tolfenâmico.

42. Método, composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 40 ou 41, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido antranílico é ácido flufenâmico.

43. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 42, caracterizado pelo fato de que o patógeno, cuja infecção é inibida ou tratada com o composto derivado de ácido antranílico, é diferente de uma bactéria Gram-positiva.

44. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 43, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido antranílico é administrado em uma dosagem que não é eficaz para fornecer analgesia.

45. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 44, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido antranílico é administrado em uma dosagem que não é eficaz para tratar inflamação.

46. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que o ligante é um composto de derivado de ácido fenilpropiônico de Fórmula (I): (III) em que: R6 é hidrogênio, CH3 ou CHF2; R7 é hidrogênio ou NH2; R8 é hidrogênio ou OH; R9 é hidrogênio ou C1-4alquila; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

47. Método, composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido fenilpropiônico é selecionado a partir de metildopa, carbidopa, éster metílico de metildopa, éster etílico de metildopa, levodopa, etilevodopa (éster etílico de levodopa), metirosina, (α-metiltirosina) e α- difluorometildopa.

48. Método, composição ou artigo, de acordo com a reivindicação 46 ou 47, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido fenilpropiônico é metildopa.

49. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 48, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido fenilpropiônico é administrado em uma dosagem que não é eficaz para tratar hipertensão.

50. Método, composição ou artigo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 49, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido fenilpropiônico é administrado em uma dosagem que não é eficaz para tratar infarto.

51. Método para inibir ou tratar uma infecção de um sujeito com um patógeno que interage com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende, consiste ou consiste essencialmente em administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto derivado de ácido fenilpropiônico de Fórmula (III): (III)

em que: R6 é hidrogênio, CH3 ou CHF2; R7 é hidrogênio ou NH2; R8 é hidrogênio ou OH; R9 é hidrogênio ou C1-4alquila; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

52. Método, de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido fenilpropiônico é selecionado a partir de metildopa, carbidopa, éster metílico de metildopa, éster etílico de metildopa, levodopa, etilevodopa (éster etílico de levodopa), metirosina, (α-metiltirosina) e α- difluorometildopa.

53. Método, de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido fenilpropiônico é metildopa.

54. Método para inibir ou tratar uma infecção de um sujeito com um patógeno que interage com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende, consiste ou consiste essencialmente em administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto de dibenzoazepina de Fórmula (I):

(I) em que: R é hidrogênio, hidroxila, NHC1-4alquila, OCOC1-4alquila ou oxo; X e Y são, independentemente, hidrogênio ou halogênio; Z é C1-4 alquila, CONR1R2, C1-4alquilenoNR1R2, C1- 4alquileno(NO)R1R2 ou quinuclidinila; R1 e R2 são, independentemente, hidrogênio ou C1- 6alquila opcionalmente substituída; ou R1 e R2, em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual os mesmos são fixados, formam um anel de heterocicloalquila de 3 a 8 membros que pode ser opcionalmente substituído; e A ligação C10-C11 é uma ligação única ou dupla; em que, quando R é oxo, a ligação C10-C11 é uma ligação única; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

55. Método, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é selecionado a partir de carbamazepina, oxcarbazepina,

acetato de eslicarbazepina, clomipramina, desipramina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, metapramina, opipramol, quinupramina e trimipramina.

56. Método, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o composto de dibenzoazepina é carbamazepina.

57. Método para inibir ou tratar uma infecção de um sujeito com um patógeno que interage com um polipeptídeo de receptor complementar 3 (CR3) de uma célula que expressa polipeptídeo CR3, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende, consiste ou consiste essencialmente em administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto derivado de ácido antranílico de Fórmula (II): (II) em que: R3 é C1-6alquila, halogênio ou trifluorometila; e R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio, halogênio, trifluorometila ou C1-6alquila; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

58. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido antranílico é selecionado a partir de ácido flufenâmico, ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico e ácido tolfenâmico.

59. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o composto derivado de ácido antranílico é ácido flufenâmico.

60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 59, caracterizado pelo fato de que o patógeno é selecionado a partir de bactérias (por exemplo, Neisseria, Streptococcus, Mycobacterium, Staphylococcus, Bordetella, Escherichia e Pseudomonas), fungos (por exemplo, Candida e Cryptococcus), protozoários (por exemplo, Toxoplasma) e vírus (por exemplo, flavivírus, ortomixovírus, paramixovírus, retrovírus, coronavírus, filovírus, arenavírus, rabdovírus e herpesvírus).

61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 59, caracterizado pelo fato de que o patógeno é de uma espécie Neisseria.

62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que a espécie Neisseria é Neisseria gonorrhoeae.

63. Método, de acordo com a reivindicação 61 ou 62, caracterizado pelo fato de que a espécie Neisseria é resistente a multifármacos.

64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 59, caracterizado pelo fato de que o patógeno é um retrovírus.

65. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que o retrovírus é o vírus de imunodeficiência humana (HIV).

66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 65, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado simultaneamente com um agente antimicrobiano.

67. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o agente antimicrobiano é selecionado a partir de antibióticos, antifúngicos, antiprotozoários, antipalúdicos, antituberculóticos e antivirais.