JP2015516146A - 異常ヘモグロビン症の治療のための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[0001]本出願は、PCT国際特許出願として2013年2月22日に出願され、そしてその開示が、全体として本明細書に援用される、2012年2月24日出願の米国仮特許出願第61/603,231号に優先権を請求する。
[0002]本出願には、「配列表54428.0006WOU1_ST25」と題され、そして2013年2月22日に作成され、そして174キロバイト(KB)のサイズを有するtxtファイルとしての電子形式の配列表が含まれる。txtファイル「配列表54428.0006WOU1_ST25」の内容は、本明細書に援用される。
[0003]本開示は、一般的に、遺伝病の治療に関する。より具体的には、本開示は、グロビン遺伝子の発現を改変するための、ホーミングエンドヌクレアーゼに、そしてCas9エンドヌクレアーゼに基づく組成物および方法を含む、エンドヌクレアーゼに基づく組成物および方法を提供し、該組成物および方法は、サラセミア、鎌状赤血球症、および他の異常ヘモグロビン症の治療に有用である。
[0004]異常ヘモグロビン症、例えばサラセミアおよび鎌状赤血球症は、非常に蔓延している遺伝的赤血球障害であり、世界中で、重大な健康上の負荷を引き起こしている。重度のヘモグロビン障害を有する人々が、毎年、130万人を超えて生まれる。世界中で5%の人々がキャリアーであるが、サラセミアおよび鎌状赤血球症(SCD)の臨床的に重度の型に関しては、出生率は、それぞれ、千人あたり0.44人および1.96人である。
[0033]本開示の特定の側面は、以下の図を考慮するとよりよく理解されるであろう:
定義
[0072]本明細書において、用語「異常ヘモグロビン症」は、異常構造、異常機能またはヘモグロビン分子の1またはそれより多いグロビン鎖の発現改変を生じる、遺伝的欠陥のクラスを指す。異常ヘモグロビン症は、遺伝性単一遺伝子障害である。一般的な異常ヘモグロビン症には、サラセミアおよび鎌状赤血球症が含まれる。
[0077]本明細書において、用語「ホーミングエンドヌクレアーゼ」または「HE」は、ゲノムにおいて1回しか生じないために十分に長く、そしてランダムであり、非常に低い確率(例えば7x1010bpごとに1回)である認識配列によって特徴付けられる、制限エンドヌクレアーゼのクラスを指す。
[0085]上に論じるように、そして以下に例示するように、本開示は、ヒトにおいて臨床的利益を有することが示された、ターゲティングされる細胞において一過性にまたは持続性に発現されてもよい、1またはそれより多いエンドヌクレアーゼ(単数または複数)をコードするポリヌクレオチドを含む組成物および方法であって、1またはそれより多いホーミングエンドヌクレアーゼ(単数または複数)(HE(単数または複数))、例えば1またはそれより多いI−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ(単数または複数)、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ(単数または複数)、および/またはI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼ(単数または複数)、ならびに/あるいは1またはそれより多いRNAガイド鎖と組み合わせた1またはそれより多いCas9エンドヌクレアーゼ(単数または複数)を含む、前記エンドヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを含む組成物および方法を提供する。例示的なエンドヌクレアーゼは:(a)Bcl11aコード領域またはBcl11a遺伝子制御領域を破壊し;(b)HbFサイレンシングDNA制御要素または経路、例えばBcl11a制御HbFサイレンシング領域を破壊し;(c)1またはそれより多いγ−グロビン遺伝子プロモーター(単数または複数)を突然変異させて、γ−グロビン遺伝子の発現増加を達成し;(d)1またはそれより多いδ−グロビン遺伝子プロモーター(単数または複数)を突然変異させて、δ−グロビン遺伝子の発現増加を達成し;そして/または(e)1またはそれより多いβ−グロビン遺伝子突然変異(単数または複数)を修正することによって、胎性ヘモグロビン産生に影響を及ぼす決定的なゲノム領域をターゲティングする。本明細書開示の組成物および方法は、β−サラセミアおよび鎌状赤血球症を含む異常ヘモグロビン症の治療に有用性を見出す。
[0098]鎌状赤血球マウスモデルにおけるBcl11aのノックアウトは疾患を寛解させ、この経路の臨床的関連を支持する。Xuら, Science 334:993−6(2011)。さらに、ヒトβ−グロビン遺伝子座に渡るYAC導入遺伝子を含有するマウスを用いて、HbFのBcl11a仲介サイレンシングにおける混乱をモデリングする。これらのマウスにおける内因性Bcl11a遺伝子のヘテロ接合性およびホモ接合性ノックアウトは、対照における0.24%に比較して、それぞれ、20および76%の総β様mRNAを含むγ−グロビンmRNAを生じる。Sankaranら, Nature 460:1093−7(2009)。これは、Bcl11aは可変抵抗器として作用し、HbF抑制の度合いを調節することを示唆する。これと一致して、Bcl11a中の機能突然変異の減少は、上昇したレベルのHbFならびに臨床的サラセミアおよび/または鎌状赤血球症表現型の軽減を生じる。Galanelloら, Blood 114:3935−7(2009)。
[00102]上に要約するように、特定の態様内で、本開示は、遺伝病、例えばサラセミアおよび/または鎌状赤血球症を含む異常ヘモグロビン症を治療し、そして/または寛解させるための組成物および方法を提供する。これらの態様の特定の側面には、β−グロビン遺伝子座またはδ−グロビン遺伝子座内のHbFサイレンシング要素または経路を破壊する、1またはそれより多いホーミングエンドヌクレアーゼ(単数または複数)をコードするポリヌクレオチドの一過性発現が含まれ、それによってγ−またはδ−グロビン遺伝子などの内因性遺伝子の発現を療法レベルまで増加させる。
[00111]他の態様内で、本開示は、臨床的利益を提供するため、ゲノム編集を通じて、患者ゲノム内の1またはそれより多い天然存在突然変異(単数または複数)を再現するための組成物および方法を提供する。より具体的には、本開示は、ゲノム編集を通じたサラセミアおよび/または鎌状赤血球症(SCD)突然変異の直接修正を達成するための組成物および方法を提供する。
[00124]さらなる態様内で、本開示は、本明細書記載の1またはそれより多いHE、Cas9、TALEN、および/またはTREX2ヌクレアーゼを送達するための系、特に非組込みベクター系を提供する。造血幹細胞(HSC)の療法的遺伝子編集には3つの主要な困難がある:(1)ヌクレアーゼ試薬を一過性にHSCに送達しなければならない;(2)ヌクレアーゼを受け入れる細胞において、遺伝子編集効率が高くなければならない;そして(3)療法効果に十分なレベルまで、遺伝子編集HSCを生着させなければならない。これらの困難は、多様なベクター形成アプローチを使用することによって克服可能である。
[00134]さらなる態様内で、本開示は、修正された細胞の効率的な生着、ならびにスクリーニングおよび臨床適用のための人工多能性幹細胞(iPSC)の使用を可能にするため、修飾造血幹細胞(HSC)のex vivo拡大のための組成物および方法を提供する。これらの態様の特定の側面内で、自己HSC、自己遺伝子修飾HSC、ES、およびiPSC由来HSCの効率的な拡大のための組成物および方法を提供する。正常ドナーから得られた動員末梢血CD34+を用い、造血性増殖因子を補充した血清不含培地中でDelta1を利用する臍帯血拡大方法論を使用してもよい。1またはそれより多いさらなる試薬と組み合わせてこれらの組成物および方法を用いて、造血幹細胞/前駆細胞の生存および増殖を増進してもよい。他の側面内で、これらの組成物および方法は、修正iPSC由来HSCを含む長期再増殖細胞の増進された拡大のため、内皮細胞共培養を使用してもよい。
[00142]別の態様内で、本開示は、対症療法を提供するための組成物および方法であって、遺伝子修正自己HSCの移植後、移植後好中球減少症を抑止し、そして転帰を改善する、オフザシェルフ細胞療法を提供する。ex vivo拡大された凍結保存臍帯血(CB)幹細胞/前駆細胞を、例えば、対症療法の手段として、自己CD34+遺伝子修正細胞での骨髄破壊的HCTを経ている、サラセミアおよび/または鎌状赤血球症患者に投与してもよい。
in vitro区画化(IVC)を用いたI−HjeMI、I−CpaMI、およびI−OnuIに基づくBcl11a遺伝子ターゲティングホーミングエンドヌクレアーゼの選択
[00155]大腸菌における発現のためにコドン最適化されている、親LAGLIDADGホーミングエンドヌクレアーゼ(LHE)、I−HjeMIのオープンリーディングフレーム(ORF)(図14;配列番号28; Jacobyら, Nucl. Acids Res. 40(11):4954−4964(2012); Taylorら, Nucl. Acids Res. 40(Web Server issue):W110−6(2012))を、pET21−a(+)(図11; Merck KGaAのEMD Millipore(Novagen)部門)のNcoIおよびNotI制限部位の間にクローニングした。部位特異的飽和突然変異誘発をI−HjeMIのORF内に導入するため、縮重コドン5’−NNK−3’(すべての20アミノ酸をコードする)を含有するプライマーを用いて、両端に隣接断片と重複する領域のおよそ20塩基対の領域を持つ、部分的ORFを含有するDNA断片をPCR増幅した。こうしたPCRプライマーを用いて突然変異されたアミノ酸残基を表2に示す。アガロースゲルからの抽出によってPCR産物を精製し、そして続く周期のPCRにおいて、選択しようとする変異体エンドヌクレアーゼのターゲット部位2コピーを含有する配列と組み合わせた。組み立てが成功したDNA断片を再び、ゲル抽出によって精製し、そしてin vitro区画化(IVC)において、ライブラリーとして用いた。
IVCにおける飽和突然変異誘発に供するアミノ酸位
BCL11A遺伝子ターゲットの(−)および(+)ハーフ部位に関与するI−HjeMI変異体エンドヌクレアーゼのN末端およびC末端ハーフドメインをコードするDNA断片を組み立てて、そして全長BCL11A遺伝子ターゲット部位を切断するヌクレアーゼのプールを、3周期のIVCを通じて選択した(図13)。
細菌における2プラスミド遺伝子除去切断アッセイを用いたBCL11A遺伝子ターゲティングI−HjeMI変異体の活性の最適化
[00161]Doyonら, J. Am. Chem. Soc. 128(7):2477−2484(2006)の方法論にしたがって、細菌細胞における2プラスミド選択系を用いて、IVCディスプレイ選択(上記実施例1に開示する)を用いた選択において得られるI−HjeMI変異体の活性を最適化した。エンドヌクレアーゼ遺伝子のORFを、pENDO(図12、Doyonら, J. Am. Chem. Soc. 128(7):2477−2484(2006))発現プラスミドのNcoIおよびNotI部位の間に挿入した。4コピーのBCL11A遺伝子ターゲットを含有するpCcdBレポータープラスミド(図31、Doyonら, J. Am. Chem. Soc. 128(7):2477−2484(2006); Takeuchiら, Nucl. Acids Res. 37(3):877−890(2009);およびTakeuchiら, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 10.1073/pnas.1107719108(2011))を宿するNovaXGF(EMD Millipore(Novagen))コンピテント細胞を、I−HjeMI変異体をコードするpEndoプラスミドのプールで形質転換した。形質転換体を2xYT培地(16g/Lトリプトン、10g/L酵母エキス、および5g/L NaCl)中、37℃で30分間増殖させ、そして次いで、100μg/mLカルベニシリンおよび0.02%L−アラビノース(I−HjeMI変異体の発現をあらかじめ誘導するため)を補充した2xYT培地で10倍希釈した。培養を30℃で15時間増殖させた後、細胞を採取し、滅菌水中に再懸濁し、そして非選択プレート(1xM9塩、1%グリセロール、0.8%トリプトン、1mM MgSO4、1mM CaCl2、2μg/mLチアミン、および100μg/mLカルベニシリン)および選択プレート(すなわち、0.02%L−アラビノースおよび0.4mM IPTGを補充して毒性CcdBタンパク質の発現を誘導した非選択プレート)の両方の上にスプレッドした。30℃で30〜40時間インキュベーションした後、選択プレート上の生存コロニーからpEndoプラスミドを抽出した。
2プラスミド切断アッセイにおいて試験したBCL11A遺伝子ターゲティングエンドヌクレアーゼの活性
[00163]例示的なBCL11A遺伝子ターゲティングエンドヌクレアーゼ(BCL11Ahje;図17、配列番号31)、その触媒的に不活性である変異体(BCL11Ahje D18N)、およびその親LHE I−HjeMI(図14、配列番号28)の活性を、I−HjeMIのターゲット部位(I−HjeMIターゲット)またはBCL11A遺伝子ターゲット(TCCAAGTGATGTCTCGGTGGTG(配列番号39;下線ヌクレオチドは、親LHE I−HjeMIのターゲット部位のものとは異なる))のいずれかの4コピーを含有するpCcdBレポータープラスミド(Doyonら, J. Am. Chem. Soc. 128(7):2477−2484(2006))を宿する細菌細胞において測定した。pCcdBレポータープラスミドは、「細胞死制御B」(「ccdB」、IPTGの添加によって誘導可能な、細菌における毒性タンパク質)をコードする。レポータープラスミド中のターゲット部位の切断は、レポータープラスミドのRecBCD仲介性分解、およびIPTGを含有する選択培地上での対応する細胞生存を導く。選択プレート上のコロニー数を非選択プレート上のコロニー数で、割ることによって、生存率を決定した。エラーバーは、3回の独立の実験の±S.D.を指す。
内因性ヒトBCL11A遺伝子でのターゲティング化突然変異誘発の検出
[00164]HEK293T細胞(1.6x105)を、トランスフェクションの24時間前に、12ウェルプレート中に植え付け、そしてBCL11A遺伝子ターゲティングヌクレアーゼおよびTREX2の発現プラスミド各0.5μgでトランスフェクションした。トランスフェクション48時間後、トランスフェクションした細胞を溶解し、そしてQuick−gDNA MiniPrepキット(Zymo Research)を用いて、ゲノムDNAを抽出した。BCL11A遺伝子ターゲットに渡るおよそ500bp断片を、以下のプライマー対を用いて、50ngの抽出ゲノムからPCR増幅した: Bcl11A_up1、5’− GCT GGA ATG GTT GCA GTA AC −3’(配列番号66); Bcl11A_down1、5’− CAA ACA GCC ATT CAC CAG TG −3’(配列番号67)。PCRアンプリコンを、組換えタンパク質を過剰発現する大腸菌から精製した0.5μMのBCL11A遺伝子ターゲティングヌクレアーゼを含みまたは含まず、1xBSA(New England Biolabs)を加えた1xNEB緩衝液4中で37℃で2時間インキュベーションした。5x停止溶液(50mM Tris−HCl(pH7.5)、5mM EDTA、0.5% SDS、25%グリセロール、0.1オレンジGおよび0.5mg/mLプロテイナーゼK)を添加することによって、反応を停止させた。室温で15分間インキュベーションした後、各試料の半分を、TAE中にエチジウムブロミドを含有する1.6%アガロースゲル上で分離した(上部パネル)。各試料の残りを、DNA Clean & Concentrator−5キット(Zymo Research)を用いて精製し、そして以下のプライマー対を用いた第二の周期のPCR中、テンプレートとして用いた: Bcl11A_up2、5’− CTG CCA GCT CTC TAA GTC TCC −3’(配列番号68); Bcl11A_down2、5’− TGC AAC ACG CAC AGA ACA CTC −3’(配列番号69)。PCR産物を再び、上述の条件下で、BCL11A遺伝子ターゲティングヌクレアーゼで消化し、そして1.6%アガロースゲル上で分析した(下部パネル)(図30を参照されたい)。
in vitro区画化を用いたI−OnuIに基づく胎性ヘモグロビンサイレンシング領域ターゲティングエンドヌクレアーゼの選択
[00165]フレンチHPFH欠失において破壊される、成体赤血球細胞におけるHbFサイレンシング領域内のBcl11a占有の領域を含む350bp領域(配列番号2)全体に均一に分布する例示的なホーミングエンドヌクレアーゼ(HE)ターゲット配列を表4に提示する。これらのターゲット配列は、それに対する非常に活性が高いエンドヌクレアーゼ変異体のプールが単離され、そして配列決定されている、DNA配列モジュールを含む。
ヒト胎性グロビンサイレンシング領域に対するターゲティング化ホーミングエンドヌクレアーゼを生成するIVCにおける飽和突然変異誘発に供されるアミノ酸位
[00168]図23は、ヒト胎性グロビンサイレンシング領域由来の「ハーフターゲット」を用いた切断アッセイの結果を提示する。増幅バンドは、切断されたハーフ部位(相補的二重鎖オリゴヌクレオチドおよび対応するオーバーハングssDNAとの連結によって捕捉される)および切断されたDNA産物の生成に関与する酵素変異体の配列の両方を含有する。「ハーフ部位」エンドヌクレアーゼライブラリーの濃縮の完了に際しての最終段階には、gグロビンサイレンシング領域ターゲットの左(L)および右(R)ハーフ部位に関与する、I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼのN末端およびC末端ハーフドメインをコードするDNA断片の集合が含まれる。全長ヒト胎性グロビンサイレンシング領域ターゲットを切断するプールから、活性I−OnuIエンドヌクレアーゼを選択する。
遺伝子ターゲティング化エンドヌクレアーゼの特異性および活性を増加させるためのTALアンカーのN末端融合を伴うMegaTALホーミングエンドヌクレアーゼ
[00169]TALアンカーのN末端融合を使用して、1またはそれより多いホーミングエンドヌクレアーゼ、例えば1またはそれより多いI−HjeMI、I−CpaMI、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼを含む、遺伝子ターゲティング化エンドヌクレアーゼの特異性および活性を増加させてもよい。RVDプラスミドライブラリーおよびデスティネーションベクターを用いて、Cermakら, Nucl. Acids Res. 39:e82−e82(2011)に記載されるGolden Gate組み立て戦略を用いて、MegaTALを構築する(MegaTAL:5.5RVD+Y21−AniIのヌクレオチドおよびアミノ酸配列に関しては、図24、配列番号35および図25、配列番号36を参照されたい)。
Bcl11aが制御する胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域を破壊するためのCas9に基づくエンドヌクレアーゼ系
[00173]細菌が適応免疫のために使用するクラスター化された規則的間隔の短いパリンドロームリピート(CRISPR)系の機構が最近、理解されてきたことによって、哺乳動物細胞のゲノム編集を可能にする強力なツールの開発が導かれてきており:(a)Bcl11aコード領域を破壊し;(b)HbFサイレンシングDNA制御要素または経路、例えばBcl11a制御HbFサイレンシング領域を破壊し;(c)1またはそれより多いγ−グロビン遺伝子プロモーター(単数または複数)を突然変異させて、γ−グロビン遺伝子の発現増加を達成し;(d)1またはそれより多いδ−グロビン遺伝子プロモーター(単数または複数)を突然変異させて、δ−グロビン遺伝子の発現増加を達成し;そして/または(e)1またはそれより多いβ−グロビン遺伝子突然変異(単数または複数)を修正するため、これを本明細書に開示する異常ヘモグロビン症の治療のための組成物および方法で使用することも可能である。細菌CRISPR系は、Jinekら, Science 337:816−821(2013); Congら, Science(Jan. 3, 2013)(印刷前のEpub);およびMaliら, Science(Jan. 3, 2013)(印刷前のEpub)に記載される。
一般的Cas9ガイドRNAの配列要素
例示的Cas9ガイドRNAに関するターゲット特異的配列
エンドヌクレアーゼを発現するためのベクター系
[00177]NSG、鎌状赤血球およびサラセミア・マウスモデルのため、移植前に、ヒトCD34細胞またはマウス骨髄有核細胞を、蛍光マーカーとともに形質導入して、フローサイトメトリーに基づく細胞の濃縮を可能にする。適切な形質導入法には、以下が含まれる:
[00178]AAV6ベクター。AAV6血清型組換えAAVベクターは、小さい組換えテンプレートに加えて、プロモーター−HE−エクソヌクレアーゼまたはプロモーター−TAL−HE融合−エクソヌクレアーゼカセットを送達するのに十分な4.5kbペイロードを提供する。あるいは、これらは、Cas9およびガイドRNAを所持可能である。さらに、本発明者らは、すべての既知のAAVキャプシドのヒトCD34+臍帯血細胞の最も効率的な形質導入を提供し、そしてHSCにおける一過性遺伝子発現の有意なレベルを仲介することが可能である。
効率的な遺伝子ターゲティングのためのホーミングおよびCas9エンドヌクレアーゼの性質決定
[00185]臨床的影響に関して、個々のターゲティング化細胞における、および細胞集団における、グロビン遺伝子発現レベル、赤血球形成および幹細胞機能に対するターゲティングの効果、ならびにモデル生物における血液学的パラメータおよび臓器機能に対する影響を評価することによって、効率的な遺伝子ターゲティングが立証される。
臨床等級CD34+造血幹細胞
[00196]正常ヒトドナー由来のCD34+細胞を、フィブロネクチンペプチドCH−296を含む培養プレートに接着させて、そして20のMOIで、8時間離れて2回、G−CSF、SCF、IL−3、IL−6、FLT−3、およびTPOを含有する培地中、上述のRSCS−MCS−PG−WZに基づくレンチウイルスベクターに感染させた。これは、〜80%の細胞感染を生じる。Douyのプロトコルを用いて、形質導入細胞を赤血球細胞に分化させる。Giarratanaら, Nat. Biotechnol. 23(1):69−74(2005)。上記のqRT−PCRアッセイは、4%の□−グロビン/□−+β−グロビン比を生じる。この低い比は、ゲノム編集に続く増加の高感度の検出を可能にする。
Claims (96)
- 異常ヘモグロビン症を治療するための組成物であって、ホーミングエンドヌクレアーゼ(HE)およびCRISPRエンドヌクレアーゼからなる群より選択される1またはそれより多いエンドヌクレアーゼ(単数または複数)を含み、
前記エンドヌクレアーゼ(単数または複数)が、各々、Bcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位からなる群より選択されるヌクレオチド配列に結合する、前記組成物。 - 前記エンドヌクレアーゼが、前記Bcl11aコード領域または前記Bcl11a遺伝子制御領域に結合するHEである、請求項1の組成物。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項2の組成物。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項3の組成物。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号28または配列番号29のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に、1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、Y20、S22、T24、K26、G27、K28、T31、E33、G35、E37、S59、R61、R63、N64、E65、I66、M68、S70、R70、R72、R74、S109、N110、A121、S123、N124、N135、S137、S154、L158、N159、D162、D163、I166、I168、S168、D170、I193、L195、R202、K204、およびT206からなる群より選択される、請求項4の組成物。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号31または配列番号32のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項5の組成物。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号33またはその変異体のアミノ酸配列を含み、前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域に特異的に結合可能である、請求項6の組成物。
- 前記エンドヌクレアーゼがCRISPRエンドヌクレアーゼであり、前記CRISPRがRNAガイド鎖およびCas9エンドヌクレアーゼを含み、前記RNAガイド鎖が胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域への前記Cas9エンドヌクレアーゼ結合を仲介する、請求項1の組成物。
- 前記RNAガイド鎖が、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、および配列番号54からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項8の組成物。
- 前記Cas9エンドヌクレアーゼが、配列番号37または機能性Cas9エンドヌクレアーゼをコードするその変異体のヌクレオチド配列にコードされる、請求項9の組成物。
- 前記エンドヌクレアーゼが、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なHEである、請求項1の組成物。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項11の組成物。
- 前記HEがI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項12の組成物。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼをコードする配列番号34のヌクレオチド配列の変異体にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項13の組成物。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、L26、R28、R30、N32、S40、E42、G44、Q46、A70、S72、S78、K80、およびT82からなる群より選択される、請求項14の組成物。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、F182、N184、I186、S190、K191、Q197、V199、S201、K225、K227、D236、V238、およびT240からなる群より選択される、請求項15の組成物。
- TALエフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、TAL−HE、またはTREX2タンパク質をさらに含む、請求項1の組成物。
- 異常ヘモグロビン症の治療のための組成物であって、ホーミングエンドヌクレアーゼ(HE)およびCas9エンドヌクレアーゼからなる群より選択される1またはそれより多いエンドヌクレアーゼ(単数または複数)をコードする1またはそれより多いポリヌクレオチドを含み、
前記エンドヌクレアーゼ(単数または複数)の各々が、Bcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位からなる群より選択されるヌクレオチド配列に結合する、前記組成物。 - 前記エンドヌクレアーゼが、前記Bcl11aコード領域または前記Bcl11a遺伝子制御領域に結合するHEである、請求項18の組成物。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項19の組成物。
- 前記HEがI−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項20の組成物。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号28または配列番号29のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、Y20、S22、T24、K26、G27、K28、T31、E33、G35、E37、S59、R61、R63、N64、E65、I66、M68、S70、R70、R72、R74、S109、N110、A121、S123、N124、N135、S137、S154、L158、N159、D162、D163、I166、I168、S168、D170、I193、L195、R202、K204、およびT206からなる群より選択される、請求項21の組成物。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号31または配列番号32のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項22の組成物。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号33またはその変異体のアミノ酸配列を含み、前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域に特異的に結合可能である、請求項23の組成物。
- 前記エンドヌクレアーゼがCRISPRエンドヌクレアーゼであり、前記CRISPRがRNAガイド鎖およびCas9エンドヌクレアーゼを含み、前記RNAガイド鎖が胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域への前記Cas9エンドヌクレアーゼの結合を仲介する、請求項24の組成物。
- 前記RNAガイド鎖が、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、および配列番号54からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項25の組成物。
- 前記Cas9エンドヌクレアーゼが、配列番号37または機能性Cas9エンドヌクレアーゼをコードするその変異体のヌクレオチド配列にコードされる、請求項26の組成物。
- 前記エンドヌクレアーゼが、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なHEである、請求項18の組成物。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項28の組成物。
- 前記HEが、I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項29の組成物。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼをコードする配列番号34のヌクレオチド配列の変異体にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項30の組成物。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、L26、R28、R30、N32、S40、E42、G44、Q46、A70、S72、S78、K80、およびT82からなる群より選択される、請求項31の組成物。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、F182、N184、I186、S190、K191、Q197、V199、S201、K225、K227、D236、V238、およびT240からなる群より選択される、請求項31の組成物。
- TALエフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、TALE−HE融合タンパク質、および/またはTREX2ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項18の組成物。
- ホーミングエンドヌクレアーゼ(HE)およびCRISPRエンドヌクレアーゼからなる群より選択されるエンドヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドであって、前記エンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位からなる群より選択されるヌクレオチド配列に結合する、前記ポリヌクレオチド。
- 前記エンドヌクレアーゼが、前記Bcl11aコード領域または前記Bcl11a遺伝子制御領域に結合するHEである、請求項35のポリヌクレオチド。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項36のポリヌクレオチド。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項37のポリヌクレオチド。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号28または配列番号29のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に、1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、Y20、S22、T24、K26、G27、K28、T31、E33、G35、E37、S59、R61、R63、N64、E65、I66、M68、S70、R70、R72、R74、S109、N110、A121、S123、N124、N135、S137、S154、L158、N159、D162、D163、I166、I168、S168、D170、I193、L195、R202、K204、およびT206からなる群より選択される、請求項38のポリヌクレオチド。25. 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号31または配列番号32のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項24のポリヌクレオチド。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号33またはその変異体のアミノ酸配列を含み、前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域に特異的に結合可能である、請求項39のポリヌクレオチド。
- 前記エンドヌクレアーゼが、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なHEである、請求項40のポリヌクレオチド。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項41のポリヌクレオチド。
- 前記HEがI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項35のポリヌクレオチド。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼをコードする配列番号34のヌクレオチド配列の変異体にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項43のポリヌクレオチド。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換の各々が、L26、R28、R30、N32、S40、E42、G44、Q46、A70、S72、S78、K80、およびT82からなる群より選択される、請求項44のポリヌクレオチド。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、F182、N184、I186、S190、K191、Q197、V199、S201、K225、K227、D236、V238、およびT240からなる群より選択される、請求項45のポリヌクレオチド。
- TALエフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、TALE−HE融合タンパク質、および/またはTREX2ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項35のポリヌクレオチド。
- Cas9エンドヌクレアーゼの、Bcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位への結合を仲介するRNAガイド鎖をコードするポリヌクレオチド。
- 前記RNAガイド鎖が、Cas9エンドヌクレアーゼの胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域への特異的結合を仲介する、請求項48のポリヌクレオチド。
- 前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域が、配列番号1のヌクレオチド配列を含む、請求項49のポリヌクレオチド。
- 前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域が、配列番号2のヌクレオチド配列を含む、請求項50のポリヌクレオチド。
- 前記RNAガイド鎖が、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、および配列番号54からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項50または請求項51のポリヌクレオチド。
- ベクター、ならびにホーミングエンドヌクレアーゼ(HE)およびCRISPRエンドヌクレアーゼからなる群より選択されるエンドヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを含むベクター系であって、前記エンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位からなる群より選択されるヌクレオチド配列に結合する、前記ベクター系。
- 前記ベクターが、AAV6、修飾アデノウイルスベクター、組込み不全レンチウイルスベクター(IDLV)、および組込み不全泡沫状ウイルスベクター(IDFV)からなる群より選択される、請求項53のベクター系。
- 前記エンドヌクレアーゼが、前記Bcl11aコード領域または前記Bcl11a遺伝子制御領域に結合するHEである、請求項53のベクター系。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項55のベクター系。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項56のベクター系。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号28または配列番号29のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に、1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、Y20、S22、T24、K26、G27、K28、T31、E33、G35、E37、S59、R61、R63、N64、E65、I66、M68、S70、R70、R72、R74、S109、N110、A121、S123、N124、N135、S137、S154、L158、N159、D162、D163、I166、I168、S168、D170、I193、L195、R202、K204、およびT206からなる群より選択される、請求項57のベクター系。25.前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号31または配列番号32のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項24のポリヌクレオチド。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号31または配列番号32のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項58のベクター系。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号33またはその変異体のアミノ酸配列を含み、前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域に特異的に結合可能である、請求項59のベクター系。
- 前記エンドヌクレアーゼが、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なHEである、請求項53のベクター系。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項61のベクター系。
- 前記HEがI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項62のベクター系。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼをコードする配列番号34のヌクレオチド配列の変異体にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項63のベクター系。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、L26、R28、R30、N32、S40、E42、G44、Q46、A70、S72、S78、K80、およびT82からなる群より選択される、請求項64のベクター系。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、F182、N184、I186、S190、K191、Q197、V199、S201、K225、K227、D236、V238、およびT240からなる群より選択される、請求項64のベクター系。
- TALエフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、TALE−HE融合タンパク質、および/またはTREX2ヌクレアーゼをコードするヌクレオチドをさらに含む、請求項53のベクター系。
- ベクター、ならびにBcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位からなる群より選択されるヌクレオチド配列へのCas9エンドヌクレアーゼの結合を仲介するRNAガイド鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター系。
- 成体ヒトβ−グロビン遺伝子座内の前記ヌクレオチド配列が、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域である、請求項68のベクター系。
- 前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域が、配列番号1のヌクレオチド配列を含む、請求項69のベクター系。
- 前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域が、配列番号2のヌクレオチド配列を含む、請求項69のベクター系。
- 前記RNAガイド鎖が、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、および配列番号54からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項70または請求項71のベクター系。
- ホーミングエンドヌクレアーゼ(HE)およびCRISPRエンドヌクレアーゼからなる群より選択される1またはそれより多いエンドヌクレアーゼ(単数または複数)をコードするポリヌクレオチドを含む細胞であって、前記エンドヌクレアーゼ(単数または複数)の各々が、Bcl11aコード領域、Bcl11a遺伝子制御領域、成体ヒトβ−グロビン遺伝子座、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域、Bcl11a制御HbFサイレンシング領域、γ−グロビン遺伝子プロモーター、δ−グロビン遺伝子プロモーター、およびβ−グロビン遺伝子突然変異部位からなる群より選択されるヌクレオチド配列に結合する、前記細胞。
- 前記細胞が幹細胞である、請求項73の細胞。
- 前記細胞が、造血幹細胞(HSC)、人工多能性幹細胞(iPSC)、胚性幹(ES)細胞、および赤血球前駆細胞からなる群より選択される幹細胞である、請求項73の細胞。
- 前記細胞が、造血幹細胞(HSC)、人工多能性幹細胞(iPSC)、および赤血球前駆細胞からなる群より選択される幹細胞である、請求項73の細胞。
- 前記エンドヌクレアーゼが、前記Bcl11aコード領域に特異的に結合可能なHEである、請求項73の細胞。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項77の細胞。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項78の細胞。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号28または配列番号29のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に、1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、Y20、S22、T24、K26、G27、K28、T31、E33、G35、E37、S59、R61、R63、N64、E65、I66、M68、S70、R70、R72、R74、S109、N110、A121、S123、N124、N135、S137、S154、L158、N159、D162、D163、I166、I168、S168、D170、I193、L195、R202、K204、およびT206からなる群より選択される、請求項79の細胞。25。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号31または配列番号32のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項80の細胞。
- 前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号33またはその変異体のアミノ酸配列を含み、前記I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼが、Bcl11aコード領域に特異的に結合可能である、請求項81の細胞。
- 前記CRISPRエンドヌクレアーゼがCas9エンドヌクレアーゼおよびRNAガイド鎖を含み、前記RNAガイド鎖が胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域への前記Cas9エンドヌクレアーゼの結合を仲介する、請求項73の細胞。
- 前記RNAガイド鎖が、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、および配列番号54からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項83の細胞。
- 前記Cas9エンドヌクレアーゼが、配列番号37または機能性Cas9エンドヌクレアーゼをコードするその変異体のヌクレオチド配列にコードされる、請求項84の細胞。
- 前記エンドヌクレアーゼが、胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に結合するHEである、請求項73の細胞。
- 前記HEが、I−HjeMIホーミングエンドヌクレアーゼ、I−CpaMIホーミングエンドヌクレアーゼ、およびI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼからなる群より選択される、請求項86の細胞。
- 前記HEが、I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼである、請求項87の細胞。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、前記胎性ヘモグロビン(HbF)サイレンシング領域に特異的に結合可能なI−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼをコードする配列番号34のヌクレオチド配列の変異体にコードされるアミノ酸配列を含む、請求項88の細胞。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、L26、R28、R30、N32、S40、E42、G44、Q46、A70、S72、S78、K80、およびT82からなる群より選択される、請求項89の細胞。
- 前記I−OnuIホーミングエンドヌクレアーゼが、配列番号34のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列内に1またはそれより多いアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換が、F182、N184、I186、S190、K191、Q197、V199、S201、K225、K227、D236、V238、およびT240からなる群より選択される、請求項89の細胞。
- TALエフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、TALE−HE融合タンパク質、および/またはTREX2ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項73の細胞。
- ゲノム編集幹細胞であって、ホーミングエンドヌクレアーゼおよび修正テンプレートの導入によって生成される、前記ゲノム編集幹細胞。
- 前記修正テンプレートが、グロビン遺伝子座内の重要な制御配列またはコード配列の修飾を可能にするヌクレオチド配列を含む、請求項93のゲノム編集幹細胞。
- 前記幹細胞が、造血幹細胞(HSC)、人工多能性幹細胞(iPSC)、胚性幹(ES)細胞、および赤血球前駆細胞からなる群より選択される、請求項93のゲノム編集幹細胞。
- 前記幹細胞が、造血幹細胞(HSC)、人工多能性幹細胞(iPSC)、および赤血球前駆細胞からなる群より選択される、請求項93のゲノム編集幹細胞。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019508051A (ja) * | 2016-03-14 | 2019-03-28 | エディタス・メディシン、インコーポレイテッド | β異常ヘモグロビン症を治療するためのCRISPR/CAS関連方法および組成物 |
JP2019525759A (ja) * | 2016-07-25 | 2019-09-12 | ブルーバード バイオ, インコーポレイテッド | Bcl11aホーミングエンドヌクレアーゼバリアント、組成物、および使用方法 |
JP2020505934A (ja) * | 2017-02-06 | 2020-02-27 | ノバルティス アーゲー | 異常ヘモグロビン症の治療用組成物及び方法 |
Families Citing this family (154)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2734621B1 (en) | 2011-07-22 | 2019-09-04 | President and Fellows of Harvard College | Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity |
US11021737B2 (en) | 2011-12-22 | 2021-06-01 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions and methods for analyte detection |
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KR101833589B1 (ko) | 2012-02-24 | 2018-03-02 | 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 | 이상혈색소증 치료를 위한 조성물 및 방법 |
DE202013012242U1 (de) | 2012-05-25 | 2016-02-02 | Emmanuelle Charpentier | Zusammensetzungen für die durch RNA gesteuerte Modifikation einer Ziel-DNA und für die durch RNA gesteuerte Modulation der Transkription |
KR102218562B1 (ko) * | 2012-08-29 | 2021-02-19 | 상가모 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 유전적 병태를 치료하기 위한 방법 및 조성물 |
CN109554350B (zh) | 2012-11-27 | 2022-09-23 | 儿童医疗中心有限公司 | 用于胎儿血红蛋白再诱导的靶向bcl11a远端调控元件 |
PL3138910T3 (pl) | 2012-12-06 | 2018-01-31 | Sigma Aldrich Co Llc | Oparta na CRISPR modyfikacja i regulacja genomu |
SG10201707569YA (en) | 2012-12-12 | 2017-10-30 | Broad Inst Inc | Delivery, Engineering and Optimization of Systems, Methods and Compositions for Sequence Manipulation and Therapeutic Applications |
WO2014099744A1 (en) | 2012-12-17 | 2014-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Rna-guided human genome engineering |
US10138509B2 (en) | 2013-03-12 | 2018-11-27 | President And Fellows Of Harvard College | Method for generating a three-dimensional nucleic acid containing matrix |
WO2014150624A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Caribou Biosciences, Inc. | Compositions and methods of nucleic acid-targeting nucleic acids |
KR102210319B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-02-01 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | 특정 게놈 좌위에 대한 유전적 및 후성적 조절 단백질의 rna-안내 표적화 |
WO2014204578A1 (en) | 2013-06-21 | 2014-12-24 | The General Hospital Corporation | Using rna-guided foki nucleases (rfns) to increase specificity for rna-guided genome editing |
US10760064B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-09-01 | The General Hospital Corporation | RNA-guided targeting of genetic and epigenomic regulatory proteins to specific genomic loci |
WO2014165825A2 (en) | 2013-04-04 | 2014-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems |
CN105683376A (zh) * | 2013-05-15 | 2016-06-15 | 桑格摩生物科学股份有限公司 | 用于治疗遗传病状的方法和组合物 |
US20140356956A1 (en) | 2013-06-04 | 2014-12-04 | President And Fellows Of Harvard College | RNA-Guided Transcriptional Regulation |
WO2014197568A2 (en) | 2013-06-04 | 2014-12-11 | President And Fellows Of Harvard College | Rna-guideded transcriptional regulation |
EP3011032B1 (en) | 2013-06-17 | 2019-10-16 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for targeting and modeling diseases and disorders of post mitotic cells |
BR112015031608A2 (pt) | 2013-06-17 | 2017-08-22 | Massachusetts Inst Technology | Aplicação e uso dos sistemas crispr-cas, vetores e composições para direcionamento e terapia hepáticos |
RU2716421C2 (ru) | 2013-06-17 | 2020-03-11 | Те Брод Инститьют Инк. | Доставка, применение и применения в терапии систем crispr-cas и композиций для целенаправленного воздействия на нарушения и заболевания с использованием вирусных компонентов |
JP2016528890A (ja) * | 2013-07-09 | 2016-09-23 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | CRISPR/Cas系を用いるゲノム編集の治療用の使用 |
SG10201913015XA (en) | 2013-07-10 | 2020-02-27 | Harvard College | Orthogonal cas9 proteins for rna-guided gene regulation and editing |
US11306328B2 (en) | 2013-07-26 | 2022-04-19 | President And Fellows Of Harvard College | Genome engineering |
US9163284B2 (en) | 2013-08-09 | 2015-10-20 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease |
US9388430B2 (en) | 2013-09-06 | 2016-07-12 | President And Fellows Of Harvard College | Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
US9526784B2 (en) | 2013-09-06 | 2016-12-27 | President And Fellows Of Harvard College | Delivery system for functional nucleases |
US9340799B2 (en) | 2013-09-06 | 2016-05-17 | President And Fellows Of Harvard College | MRNA-sensing switchable gRNAs |
DK3066201T3 (en) | 2013-11-07 | 2018-06-06 | Editas Medicine Inc | CRISPR-RELATED PROCEDURES AND COMPOSITIONS WITH LEADING GRADES |
SI3068881T1 (sl) * | 2013-11-13 | 2019-05-31 | Children's Medical Center Corporation | Z nukleazo posredovano uravnavanje izražanja genov |
AU2014350051A1 (en) * | 2013-11-18 | 2016-07-07 | Crispr Therapeutics Ag | CRISPR-Cas system materials and methods |
US9074199B1 (en) | 2013-11-19 | 2015-07-07 | President And Fellows Of Harvard College | Mutant Cas9 proteins |
US10787684B2 (en) | 2013-11-19 | 2020-09-29 | President And Fellows Of Harvard College | Large gene excision and insertion |
BR112016013201B1 (pt) | 2013-12-12 | 2023-01-31 | The Broad Institute, Inc. | Uso de uma composição compreendendo um sistema crispr-cas no tratamento de uma doença genética ocular |
EP3079726B1 (en) | 2013-12-12 | 2018-12-05 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using particle delivery components |
US11053481B2 (en) | 2013-12-12 | 2021-07-06 | President And Fellows Of Harvard College | Fusions of Cas9 domains and nucleic acid-editing domains |
US9963689B2 (en) | 2013-12-31 | 2018-05-08 | The Regents Of The University Of California | Cas9 crystals and methods of use thereof |
WO2015105928A1 (en) | 2014-01-08 | 2015-07-16 | President And Fellows Of Harvard College | Rna-guided gene drives |
CN113265394A (zh) | 2014-02-13 | 2021-08-17 | 宝生物工程(美国) 有限公司 | 从核酸的初始集合中耗尽靶分子的方法、以及用于实践其的组合物和试剂盒 |
US9938521B2 (en) | 2014-03-10 | 2018-04-10 | Editas Medicine, Inc. | CRISPR/CAS-related methods and compositions for treating leber's congenital amaurosis 10 (LCA10) |
US11339437B2 (en) | 2014-03-10 | 2022-05-24 | Editas Medicine, Inc. | Compositions and methods for treating CEP290-associated disease |
US11141493B2 (en) | 2014-03-10 | 2021-10-12 | Editas Medicine, Inc. | Compositions and methods for treating CEP290-associated disease |
JP2017511132A (ja) * | 2014-03-26 | 2017-04-20 | ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッドThe Brigham and Women’s Hospital, Inc. | ヒト造血幹/前駆細胞のエクスビボ拡大のための組成物および方法 |
WO2015148860A1 (en) * | 2014-03-26 | 2015-10-01 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating beta-thalassemia |
US11242525B2 (en) | 2014-03-26 | 2022-02-08 | Editas Medicine, Inc. | CRISPR/CAS-related methods and compositions for treating sickle cell disease |
AU2015249381B2 (en) | 2014-04-25 | 2020-04-30 | Children's Medical Center Corporation | Compositions and methods to treating hemoglobinopathies |
US10077453B2 (en) | 2014-07-30 | 2018-09-18 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 proteins including ligand-dependent inteins |
US11071289B2 (en) * | 2014-08-14 | 2021-07-27 | Biocytogen Boston Corp | DNA knock-in system |
CN106714826A (zh) | 2014-09-07 | 2017-05-24 | 西莱克塔生物科技公司 | 用于减弱基因表达调节抗病毒转移载体免疫应答的方法和组合物 |
WO2016044416A1 (en) * | 2014-09-16 | 2016-03-24 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering and correction in hematopoietic stem cells |
US10370673B2 (en) | 2014-09-26 | 2019-08-06 | Purecircle Sdn Bhd | Single nucleotide polymorphism (SNP) markers for stevia |
JP7068821B2 (ja) | 2014-12-03 | 2022-05-17 | アジレント・テクノロジーズ・インク | 化学修飾を有するガイドrna |
EP3985115A1 (en) | 2014-12-12 | 2022-04-20 | The Broad Institute, Inc. | Protected guide rnas (pgrnas) |
WO2016094874A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Escorted and functionalized guides for crispr-cas systems |
WO2016094880A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of crispr systems and compositions for genome editing as to hematopoietic stem cells (hscs) |
EP3230452A1 (en) | 2014-12-12 | 2017-10-18 | The Broad Institute Inc. | Dead guides for crispr transcription factors |
EP3702456A1 (en) | 2014-12-24 | 2020-09-02 | The Broad Institute, Inc. | Crispr having or associated with destabilization domains |
WO2016118726A2 (en) | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for identification of highly specific nucleases |
US10626372B1 (en) | 2015-01-26 | 2020-04-21 | Fate Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation |
WO2016135557A2 (en) * | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
WO2016135559A2 (en) * | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of human genetic diseases including hemoglobinopathies |
CN107787367B (zh) | 2015-04-06 | 2021-10-26 | 里兰斯坦福初级大学理事会 | 用于crispr/cas介导的基因调控的化学修饰的引导rna |
US10155938B2 (en) * | 2015-04-14 | 2018-12-18 | City Of Hope | Coexpression of CAS9 and TREX2 for targeted mutagenesis |
CN104805118A (zh) * | 2015-04-22 | 2015-07-29 | 扬州大学 | 一种苏禽黄鸡胚胎干细胞特定基因进行靶向敲除方法 |
CN108026566A (zh) * | 2015-05-04 | 2018-05-11 | 特拉维夫大学拉莫特有限公司 | 用于使dna片段化的方法和试剂盒 |
WO2016182917A1 (en) * | 2015-05-08 | 2016-11-17 | Children's Medical Center Corporation | Targeting bcl11a enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction |
WO2016182959A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-11-17 | Editas Medicine, Inc. | Optimized crispr/cas9 systems and methods for gene editing in stem cells |
EP3307887A1 (en) | 2015-06-09 | 2018-04-18 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for improving transplantation |
US11555207B2 (en) | 2015-06-17 | 2023-01-17 | The Uab Research Foundation | CRISPR/Cas9 complex for introducing a functional polypeptide into cells of blood cell lineage |
EP3310932B1 (en) * | 2015-06-17 | 2023-08-30 | The UAB Research Foundation | Crispr/cas9 complex for genomic editing |
EP3436575A1 (en) | 2015-06-18 | 2019-02-06 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
US9926546B2 (en) | 2015-08-28 | 2018-03-27 | The General Hospital Corporation | Engineered CRISPR-Cas9 nucleases |
WO2017040348A1 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | The General Hospital Corporation | Engineered crispr-cas9 nucleases |
US9512446B1 (en) | 2015-08-28 | 2016-12-06 | The General Hospital Corporation | Engineered CRISPR-Cas9 nucleases |
US9897378B2 (en) | 2015-10-08 | 2018-02-20 | Nyc Designed Inspirations Llc | Cosmetic makeup sponge/blender container |
IL310721A (en) | 2015-10-23 | 2024-04-01 | Harvard College | Nucleobase editors and their uses |
CA3003433A1 (en) * | 2015-10-27 | 2017-05-04 | Children's Hospital Medical Center | Use of mapk inhibitors to reduce loss of hematopoietic stem cells during ex vivo culture and/or genetic manipulation |
CN108474022A (zh) | 2015-11-03 | 2018-08-31 | 哈佛学院董事及会员团体 | 用于包含三维核酸的基质容积成像的设备和方法 |
US20180273609A1 (en) * | 2015-11-04 | 2018-09-27 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
US10858628B2 (en) | 2015-11-04 | 2020-12-08 | Fate Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation |
CN108368520B (zh) | 2015-11-04 | 2023-01-17 | 菲特治疗公司 | 多能细胞的基因组工程改造 |
BR112018013065A2 (pt) * | 2015-12-28 | 2018-12-11 | Intellia Therapeutics Inc | composições e métodos para o tratamento de hemoglobinopatias |
MX2018009126A (es) | 2016-01-27 | 2019-08-21 | Oncorus Inc | Vectores virales oncoliticos y usos de estos. |
WO2017147278A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | The Children's Medical Center Corporation | Customized class switch of immunoglobulin genes in lymphoma and hybridoma by crispr/cas9 technology |
EP3219799A1 (en) | 2016-03-17 | 2017-09-20 | IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH | Conditional crispr sgrna expression |
JP6974349B2 (ja) * | 2016-04-18 | 2021-12-01 | クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | ヘモグロビン異常症の処置のための材料及び方法 |
CA3022290A1 (en) | 2016-04-25 | 2017-11-02 | President And Fellows Of Harvard College | Hybridization chain reaction methods for in situ molecular detection |
WO2017191503A1 (en) * | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
US10767175B2 (en) | 2016-06-08 | 2020-09-08 | Agilent Technologies, Inc. | High specificity genome editing using chemically modified guide RNAs |
US11078481B1 (en) | 2016-08-03 | 2021-08-03 | KSQ Therapeutics, Inc. | Methods for screening for cancer targets |
CA3032699A1 (en) | 2016-08-03 | 2018-02-08 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
AU2017308889B2 (en) | 2016-08-09 | 2023-11-09 | President And Fellows Of Harvard College | Programmable Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
CN106244555A (zh) * | 2016-08-23 | 2016-12-21 | 广州医科大学附属第三医院 | 一种提高基因打靶的效率的方法及β‑球蛋白基因位点的碱基原位修复方法 |
WO2018039438A1 (en) | 2016-08-24 | 2018-03-01 | President And Fellows Of Harvard College | Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing |
US11078483B1 (en) | 2016-09-02 | 2021-08-03 | KSQ Therapeutics, Inc. | Methods for measuring and improving CRISPR reagent function |
IL265045B2 (en) | 2016-09-08 | 2023-09-01 | Bluebird Bio Inc | Variants of endonuclease pd-1, compositions and methods of use |
CN110214180A (zh) | 2016-10-14 | 2019-09-06 | 哈佛大学的校长及成员们 | 核碱基编辑器的aav递送 |
WO2018119359A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection |
CA3050514A1 (en) | 2017-01-27 | 2018-08-02 | Children's Hospital Medical Center | Methods of enhancing engraftment activity of hematopoietic stem cells |
EP3592853A1 (en) | 2017-03-09 | 2020-01-15 | President and Fellows of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
US11542496B2 (en) | 2017-03-10 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
EP3596217A1 (en) | 2017-03-14 | 2020-01-22 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies |
CN110914426A (zh) | 2017-03-23 | 2020-03-24 | 哈佛大学的校长及成员们 | 包含核酸可编程dna结合蛋白的核碱基编辑器 |
CA3059956A1 (en) | 2017-04-21 | 2018-10-25 | The General Hospital Corporation | Variants of cpf1 (cas12a) with altered pam specificity |
US20210222201A1 (en) * | 2017-04-24 | 2021-07-22 | Seattie Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Homology directed repair compositions for the treatment of hemoglobinopathies |
WO2018209158A2 (en) | 2017-05-10 | 2018-11-15 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/rna-guided nuclease systems and methods |
WO2018209320A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation |
WO2018218135A1 (en) | 2017-05-25 | 2018-11-29 | The Children's Medical Center Corporation | Bcl11a guide delivery |
WO2018218166A1 (en) | 2017-05-25 | 2018-11-29 | The General Hospital Corporation | Using split deaminases to limit unwanted off-target base editor deamination |
EP3635120A1 (en) * | 2017-06-02 | 2020-04-15 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) | Recombinant lentiviral vector for stem cell-based gene therapy of sickle cell disorder |
US11866726B2 (en) | 2017-07-14 | 2024-01-09 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites |
CA3070299A1 (en) | 2017-07-26 | 2019-01-31 | Oncorus, Inc. | Oncolytic viral vectors and uses thereof |
CN111801345A (zh) | 2017-07-28 | 2020-10-20 | 哈佛大学的校长及成员们 | 使用噬菌体辅助连续进化(pace)的进化碱基编辑器的方法和组合物 |
US11319532B2 (en) | 2017-08-30 | 2022-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising Gam |
WO2019070974A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Bluebird Bio, Inc. | PCSK9 ENDONUCLEASE VARIANTS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE |
MX2020003838A (es) | 2017-10-13 | 2020-08-06 | Selecta Biosciences Inc | Metodos y composiciones para atenuar las respuestas de inmunoglobulina m del vector de transferencia antiviral. |
AU2018352592A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-06-04 | Beam Therapeutics, Inc. | Uses of adenosine base editors |
US20210180091A1 (en) * | 2017-10-26 | 2021-06-17 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
CN109722414A (zh) * | 2017-10-27 | 2019-05-07 | 博雅辑因(北京)生物科技有限公司 | 一种高效制备成熟红细胞的方法以及用于制备成熟红细胞的培养基 |
CN111629747A (zh) * | 2017-12-05 | 2020-09-04 | 沃泰克斯药物股份有限公司 | Crispr-cas9修饰的cd34+人血色素干细胞和祖细胞及其用途 |
US11268077B2 (en) | 2018-02-05 | 2022-03-08 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
WO2019150196A1 (en) | 2018-02-05 | 2019-08-08 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
AU2019225251A1 (en) | 2018-02-26 | 2020-10-15 | AnTolRx, Inc. | Tolerogenic liposomes and methods of use thereof |
US10968257B2 (en) | 2018-04-03 | 2021-04-06 | The Broad Institute, Inc. | Target recognition motifs and uses thereof |
US11981892B2 (en) | 2018-04-16 | 2024-05-14 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for improved gene editing |
CA3098435A1 (en) * | 2018-04-27 | 2019-10-31 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Talen-based and crispr/cas-based gene editing for bruton's tyrosine kinase |
US20200102563A1 (en) * | 2018-10-02 | 2020-04-02 | Exosome Therapeutics, Inc. | Exosome loaded therapeutics for treating sickle cell disease |
KR20210102925A (ko) * | 2018-12-10 | 2021-08-20 | 블루버드 바이오, 인코포레이티드. | 호밍 엔도뉴클레아제 변이체 |
EP3898958A1 (en) | 2018-12-17 | 2021-10-27 | The Broad Institute, Inc. | Crispr-associated transposase systems and methods of use thereof |
WO2020163396A1 (en) | 2019-02-04 | 2020-08-13 | The General Hospital Corporation | Adenine dna base editor variants with reduced off-target rna editing |
AU2020223060B2 (en) * | 2019-02-13 | 2023-04-13 | Beam Therapeutics Inc. | Compositions and methods for treating hemoglobinopathies |
AU2020242032A1 (en) | 2019-03-19 | 2021-10-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and compositions for editing nucleotide sequences |
CN110042124A (zh) * | 2019-04-25 | 2019-07-23 | 国家卫生健康委科学技术研究所 | 基因组碱基编辑增加人红细胞中胎儿血红蛋白水平的试剂盒及应用 |
CN111939271A (zh) * | 2019-04-30 | 2020-11-17 | 博雅辑因(北京)生物科技有限公司 | 一种血红蛋白病治疗有效性预测方法 |
AU2020265060A1 (en) * | 2019-04-30 | 2021-12-16 | Edigene (Guangzhou) Inc. | Method for predicting effectiveness of treatment of hemoglobinopathy |
MX2021014566A (es) | 2019-05-28 | 2022-03-22 | Selecta Biosciences Inc | Métodos y composiciones para la respuesta inmune atenuada anti-vector de transferencia viral. |
CN114072518A (zh) * | 2019-06-28 | 2022-02-18 | Asc治疗公司 | 用于治疗地中海贫血或镰状细胞病的方法和组合物 |
CA3153197A1 (en) | 2019-10-03 | 2021-04-08 | Ryan T. Gill | Crispr systems with engineered dual guide nucleic acids |
EP4058586A4 (en) * | 2019-11-15 | 2024-04-10 | Univ Leland Stanford Junior | TARGETED INTEGRATION AT THE ALPHA-GLOBIN LOCUS IN HUMAN HEMATOPOIETIC STEM AND PROGENITOR CELLS |
CN112979823B (zh) * | 2019-12-18 | 2022-04-08 | 华东师范大学 | 一种用于治疗和/或预防β血红蛋白病的产品及融合蛋白 |
CA3177481A1 (en) | 2020-05-08 | 2021-11-11 | David R. Liu | Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence |
JP2023526007A (ja) * | 2020-05-13 | 2023-06-20 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | β-ヘモグロビン異常症の処置のための塩基編集アプローチ |
CN116887853A (zh) * | 2020-12-21 | 2023-10-13 | 2赛文缇生物公司 | 用于定点诱变的组合物和方法 |
AU2022235341A1 (en) | 2021-03-12 | 2023-09-21 | Mendus B.V. | Methods of vaccination and use of cd47 blockade |
WO2022256448A2 (en) | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Artisan Development Labs, Inc. | Compositions and methods for targeting, editing, or modifying genes |
CN113481184A (zh) * | 2021-08-06 | 2021-10-08 | 北京大学 | 融合蛋白以及其使用方法 |
WO2023039586A1 (en) | 2021-09-10 | 2023-03-16 | Agilent Technologies, Inc. | Guide rnas with chemical modification for prime editing |
WO2023064367A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-04-20 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector igm responses |
US20230279442A1 (en) | 2021-12-15 | 2023-09-07 | Versitech Limited | Engineered cas9-nucleases and method of use thereof |
WO2023167882A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Artisan Development Labs, Inc. | Composition and methods for transgene insertion |
WO2023172624A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-09-14 | Selecta Biosciences, Inc. | Immunosuppressants in combination with anti-igm agents and related dosing |
CN114457119B (zh) * | 2022-04-11 | 2022-08-12 | 中吉智药(南京)生物技术有限公司 | 慢病毒载体在制备治疗β-地中海贫血药物中的应用 |
EP4273242A1 (en) * | 2022-05-03 | 2023-11-08 | ETH Zurich | Crispr-based modification of human hbd gene |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010534070A (ja) * | 2007-07-23 | 2010-11-04 | セレクティス | ヒトヘモグロビンベータ遺伝子からのdna標的配列を切断するメガヌクレアーゼ変異型及びその使用 |
WO2011156430A2 (en) * | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Generation and expression of engineered i-onui endonuclease and its homologues and uses thereof |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020182673A1 (en) * | 1998-05-15 | 2002-12-05 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypedies and therapeutic uses thereof |
JP2006518372A (ja) | 2003-01-28 | 2006-08-10 | セレクティス | 脊椎動物の体組織においてエクスビボかつイントトで相同的組換えを誘発するためのメガヌクレアーゼの使用およびその応用 |
WO2007049095A1 (en) | 2005-10-25 | 2007-05-03 | Cellectis | Laglidadg homing endonuclease variants having mutations in two functional subdomains and use thereof |
WO2008010009A1 (en) | 2006-07-18 | 2008-01-24 | Cellectis | Meganuclease variants cleaving a dna target sequence from a rag gene and uses thereof |
US20100086533A1 (en) | 2007-02-19 | 2010-04-08 | Cellectis | Laglidadg homing endonuclease variants having novel substrate specificity and use thereof |
ES2738980T3 (es) * | 2008-09-15 | 2020-01-28 | Childrens Medical Ct Corp | Modulación de BCL11A para el tratamiento de hemoglobinopatías |
ES2748430T3 (es) * | 2011-02-28 | 2020-03-16 | Seattle Childrens Res Institute | Endonucleasas de acoplamiento con enzimas de procesamiento de extremos que impulsan la interrupción génica de alta eficiencia |
KR101833589B1 (ko) | 2012-02-24 | 2018-03-02 | 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 | 이상혈색소증 치료를 위한 조성물 및 방법 |
KR102218562B1 (ko) * | 2012-08-29 | 2021-02-19 | 상가모 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 유전적 병태를 치료하기 위한 방법 및 조성물 |
-
2013
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2014
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-
2018
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2019
- 2019-05-13 IL IL266582A patent/IL266582A/en unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010534070A (ja) * | 2007-07-23 | 2010-11-04 | セレクティス | ヒトヘモグロビンベータ遺伝子からのdna標的配列を切断するメガヌクレアーゼ変異型及びその使用 |
WO2011156430A2 (en) * | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Generation and expression of engineered i-onui endonuclease and its homologues and uses thereof |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
BLOOD, vol. 117, no. 15, JPN6015048541, 2011, pages 3945 - 3953, ISSN: 0003206775 * |
MOLECULAR BIOSYSTEMS, vol. 8, no. 4, JPN6015048542, 3 February 2012 (2012-02-03), pages 1255 - 1263, ISSN: 0003206776 * |
SCIENCE, vol. 337, JPN6015048545, 2012, pages 816 - 821, ISSN: 0003568277 * |
SCIENCE, vol. 339, JPN6015048543, 15 February 2013 (2013-02-15), pages 823 - 826, ISSN: 0003206777 * |
SCIENCE, vol. 339, JPN6015048544, 15 February 2013 (2013-02-15), pages 819 - 823, ISSN: 0003568276 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019508051A (ja) * | 2016-03-14 | 2019-03-28 | エディタス・メディシン、インコーポレイテッド | β異常ヘモグロビン症を治療するためのCRISPR/CAS関連方法および組成物 |
JP2019525759A (ja) * | 2016-07-25 | 2019-09-12 | ブルーバード バイオ, インコーポレイテッド | Bcl11aホーミングエンドヌクレアーゼバリアント、組成物、および使用方法 |
JP2020505934A (ja) * | 2017-02-06 | 2020-02-27 | ノバルティス アーゲー | 異常ヘモグロビン症の治療用組成物及び方法 |
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