JP2011523547A - ペプチド結合トリプトファンとポリペプチド結合トリプトファンの混合物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、トリプトファンを含んでなる組成物に関する。
脳内セロトニンレベルは、気分、俊敏さ、覚醒状態、入眠と睡眠の質、抗不安効果、うつ病、情動反応制御、食欲、および性行動と関連付けられている。脳内セロトニンレベルの変化と天然アミノ酸L−トリプトファン(TrpまたはW)の可用性とを関連付ける、多数の出版物が存在する。この相関のために血漿トリプトファンレベルを増大させる方法が注目されている。1人あたり1グラム/日前後のトリプトファン量は、臨床的に有意な効果を生じることが報告されている(Markusら,Am.JClin.Nutr2005年;81,1026〜1033頁)。血漿トリプトファンレベルを増大させる一方法は、乳清タンパク質αラクトアルブミンに富んだタンパク質製剤を摂取することを伴う。αラクトアルブミン製剤は容易に入手でき、トリプトファン濃度が比較的高い。しかし例えばDE 4130284およびJP 2279700のようなαラクトアルブミンそのものを提供するアプローチでは、脳のトリプトファンおよびセロトニンレベルの主要決定因子が血漿トリプトファン濃度だけではなく、いわゆるTrp/LNAA比(FernstromおよびWurtman.Science 1971年,173,149〜152頁)であることを考慮していない。このTrp/LNAA比は、血漿中の大型中性アミノ酸(LNAA:すなわちチロシン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、およびバリンの和)レベルに対するトリプトファンのモル比に相当する。これらのLNAAは、恐らく血液脳関門を超える同一輸送機序を使用することから、脳への取り込みに関してトリプトファンと競合する。したがって脳トリプトファン濃度を増大させる最も効果的なやり方は、Trp/LNAA比の高い製剤を供給することである。いくつかの公報、特に国際公開第02/46210号パンフレットは、改善されたTrp/LNAA比を有するαラクトアルブミンからのペプチド画分製剤に言及する。
本発明は、
好ましくは水溶性であり0.1を超え、好ましくは0.15を超えるTrp/LNAA比を有する、ペプチド結合トリプトファン組成物、および/または遊離トリプトファン;および
好ましくは水溶性であり0.15を超えるTrp/LNAA比を有するポリペプチド結合トリプトファン組成物
を一緒にし、好ましくは混合するステップを含んでなるトリプトファン含有組成物を製造する方法に関する。
本トリプトファン含有組成物は2つの明確に区別できる画分を含んでなり、それは経口摂取されると長期間にわたり血漿中の高Trp/LNAA比を可能にする。1つの画分はペプチド結合トリプトファン、ひいては易吸収性の低分子量ペプチドまたは遊離トリプトファンの形態のトリプトファン含有ペプチドを含んでなる。トリプトファン含有ペプチドの場合、この画分はトリプトファン包含ジペプチドおよびトリペプチドを高比率で含む。他方の画分は、ポリペプチド結合トリプトファン、ひいては好ましくは未変化タンパク質形態のトリプトファン含有ポリペプチドを含んでなり、それは経口摂取後にそのペプチド結合トリプトファンを非常に緩慢にしか放出しない。したがって本明細書は、経口摂取時に、トリプトファン含有ペプチド画分のみを使用した場合と比べて、高い血中Trp/LNAAレベルを迅速に引き起こし長期間にわたって維持する、これらの2つのトリプトファンに富む画分の新しい組み合わせについて記載する。低分子量画分中に存在するペプチド結合トリプトファンは好ましくは鶏卵リゾチームに由来し、ポリペプチド結合トリプトファン画分またはより大きな分子量画分は好ましくはリゾチームであり、例えば未変化鶏卵リゾチーム、またはTrp/LNAA比の高い未変化タンパク質などの別のポリペプチド結合トリプトファン源である。好ましくはトリプトファン含有ポリペプチドは、胃条件下でタンパク質分解に抵抗し得るタンパク質である。有利にはプロテアーゼ抵抗性試験(材料と方法を参照されたい)で記載されるように、未変化リゾチームのような未変化タンパク質などのポリペプチド結合トリプトファンは、胃条件下でタンパク質分解に抵抗し得る。
[材料]
取引名「Protex 6L」のサブチリシンはオランダ国ライデンのジェネンコア(Genencor(Leiden,The Netherlands))から、ペプシンはシグマ(Sigma)から、およびトリプシン/キモトリプシンの混合物(Porcine PEM)はデンマーク国バウスベアのノボザイム(Novozymes(Bagsvaerd,Denmark)から得た。リゾチームは、Delvozyme L(22%乾燥物質)または乾燥Delvozyme G顆粒のどちらかとして、オランダ国デルフト(Delft)のDSM Food Specialitiesから得た。
ヒト胃内で、その消化吸収率を試験するためにMcIlvaine緩衝液(0.2Mクエン酸+Na2HPO4)pH4.0の中で、5%(w/w)未変化タンパク質溶液をペプシン(シグマ;未変化タンパク質に対して1%w/wペプシン)と共に37℃で2時間インキュベートした。プロテアーゼ抵抗性の程度は、ペプシンインキュベーションによる影響を受けないタンパク質の百分率と定義される。「影響なし」はペプシンインキュベーションの結果としてタンパク質の分子量が変化しないことを意味し;「タンパク質百分率」は消化時間後の曲線下面積を100倍して消化前曲線下面積で除したものを意味し;「曲線下面積」は使用した定量分析法(以下参照)によって提供される初期分子量を有するタンパク質の面積である。分子量は、下文に明記するプロトコルに従ったSDS−PAGEとそれに続く染色によって比較される。ゲル染色後、イソジェン・ライフ・サイエンス(Isogen Life Science;
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)からのOptiGoイメージングシステムを使用してデジタル画像を作成し、Windows XP上で作動するNonlinear Dynamics Ltd(www.nonlinear.com)からのTotallab TL 100、バージョン2006ソフトウェアを使用した、選択されるタンパク質バンドの定量分析がそれに続く。ペプシンインキュベーション後に、元の分子量のタンパク質が依然として50%を超えれば、タンパク質は本明細書に従ってプロテアーゼ抵抗性である。
使用するリゾチーム製剤の純度はSDS−PAGEによってチェックした。SDS−PAGEおよび染色のための使用材料は全て、米国カリフォルニア州カールスバッドのインビトロジェン(Invitrogen(Carlsbad,CA,US))から購入した。サンプルは製造業者の説明書に従ってSDS緩衝液を使用して調製し、製造業者の説明書に従ってMES−SDS緩衝系を使用して12%Bis−Trisゲル上で分離した。染色は、Simply Blue Safe Stain(コロイドクーマシーG250)を使用して実施した。加水分解前、リゾチームは分子量約14kDaの単一バンドとしてゲル上に出現した。
オランダ国ブレダ(Breda)のThermo ElectronからのP4000ポンプに連結している、オランダ国ブレダのThermo Electronからのイオントラップ質量分光計を使用したHPLCを使用して、本発明に従った方法により生成される酵素的タンパク質加水分解産物中のトリプトファン含有ペプチド(主にジペプチドおよびトリペプチド)の存在を判定した。米国マサチューセッツ州ベッドフォードのミリポア(Millipore(Bedford,MA,USA)からのミリQ水(溶液A)中の0.1%ギ酸およびアセトニトリル中の0.1%ギ酸(溶液B)の溶出勾配と組み合わせた、ベルギーのVarian BelgiumからのInertsil 3 ODS 3.3μm、150×2.1mmカラムを使用して、形成したペプチドを分離した。勾配は100%の溶液Aで始めてそのまま10分間保ち、25分間で20%のBに直線的に増大させ、即座に開始条件にして、安定化のためにそのまま15分間保った。使用した注入量は50μLであり、流速は200μL/分であり、カラム温度は55℃に保った。注入サンプルのタンパク質濃度は、約50μg/ミリリットルであった。関心のあるペプチドの同定は、約30%の最適衝突エネルギーを使用して関心のあるペプチド専用のMS/MSを使用した、滞留時間およびプロトン化分子に基づいた。特定のトリプトファン含有ペプチドの定量化は、外部標準法を使用して実施した。
実施例6または実施例11に記載されるようにして、van Eijkら(J.Chromatogr.1993年:620:143〜148頁)に従って、血漿中のアミノ酸プロフィールをHPLCによって分析した。
様々なタンパク質分解混合物とのインキュベーション中に得られる加水分解度(DH)は、迅速なOPA試験(Nielsen,P.M.;Petersen,D.;Dambmann,C.Improved method for determining food protein degree of hydrolysis.Journal of Food Science 2001年,66,642〜646頁)を使用してモニターした。
総ケルダール窒素は、フローインジェクション分析によって測定した。TKN法カセット5000−040を装着したTecator FIASTAR 5000フローインジェクションシステム、SOFIAソフトウェアを実行するペンティアム4コンピュータ、およびTecator 5027オートサンプラーを使用して、タンパク質含有溶液から放出されたアンモニアを590nmで定量化した。方法のダイナミックレンジ(0.5〜20mgN/l)に対応するサンプル量を95〜97%硫酸およびKjeltabと共に消化管に入れ、200℃で30分間と、それに続く360℃で90分間の消化プログラムの対象とした。FIASTAR 5000システム中への注入後に窒素ピークを測定し、それから測定タンパク質量を推測し得る。
プロテアーゼ処理タンパク質サンプルのペプチド粒度分布の分析は、高圧ポンプ、10〜100μLのサンプルを注入できる注射器、および214nmでカラム溶出物をモニターできるUV検出器を装着した自動化HPLCシステム上で行った。
[実施例1]
[鶏卵リゾチームはペプシンまたはトリプシン/キモトリプシンのどちらによっても切断されない]
ヒト胃腸管内における消化吸収率を試験するために、鶏卵リゾチームをペプシンならびにトリプシンおよびキモトリプシン混合物と共に、生体外でインキュベートした。双方のインキュベーションは、胃(ペプシン)および十二指腸(トリプシン/キモトリプシン)に一般的なpH条件下で実施した。このために5%(w/w)リゾチーム溶液を酵素(リゾチームタンパク質に対して1%w/wの酵素)と共に、37℃で2時間インキュベートした。進行中のタンパク質加水分解の結果としての大きなpH変化を防止するために、インキュベーションはMcIlvaine緩衝液(添加0.2Mクエン酸+Na2HPO4)中で実施した。成功裡のタンパク質分解は少なくとも10%のDH値をもたらすことが予期され得るので、37℃で2時間の加水分解後に得られる低DH値は(表1参照)、リゾチーム分子が胃および十二指腸および空腸内の消化条件を模倣する条件下で分解され得ないことを実証する。したがって未変化鶏卵リゾチーム分子内に存在するトリプトファン残基は胃腸管内で遊離せず、未変化鶏卵リゾチーム中に存在するトリプトファン分子が、摂取直後の血漿トリプトファンレベルに寄与し得ないことが暗示される。
[鶏卵リゾチームは上昇したpH値でサブチリシンによって効率的に切断される]
非生理学的pHおよび酵素条件下における、酵素加水分解に対するリゾチームの感受性を試験するために、アルカリ性pH条件下でリゾチーム溶液を微生物サブチリシン(EC 3.4.21.62)と共に生体外でインキュベートした。このために、1グラムのリゾチームタンパク質あたり12.5μLのProtex 6L存在下で、5%(w/w)リゾチーム溶液をpH7.0、8.0および9.0でインキュベートした。インキュベーションは1M NaOHを使用してpHを絶えず調節しながら、60℃で3時間にわたり実施した。インキュベーションからは、いかなる顕著な沈殿物もないわずかに濁った溶液が生じた。サブチリシン活性を不活性化する加熱工程後に、材料と方法セクションに記載されるプロトコルに従って様々なインキュベーションのDH値を測定した。生理学的条件下で得られる結果(実施例1参照)とは対照的に、サブチリシンを使用したアルカリ性インキュベーション条件は完全なリゾチーム加水分解をもたらす。pH7.0のインキュベーションからは6.3のDH、pH8.0のインキュベーションからは11.2のDH、およびpH9.0のインキュベーションからは16.4のDHが得られた。引き続く反応生成物のSDS−PAGE分析は、リゾチーム分子全体が分解したこと、すなわち大型分子量断片がサブチリシンインキュベーションを乗り切らなかったことを示唆した。さらにダイセル(Daicel)からのCrownpak CR+カラム上での加水分解産物のHPLC分析は、pH9.0での長時間の加熱後でさえ、トリプトファン含有ペプチドの顕著なラセミ化が起きなかったことを明らかにした。
[Protexを使用したリゾチーム加水分解および形成ペプチドのアイデンティティ]
10%(w/w)純粋リゾチームを含有する溶液をNaOHを使用してpH8.2に調節し、52℃に加熱した。存在するタンパク質1gあたり25μLのProtexを添加することで、加水分解を開始した。絶え間なく撹拌してpHを8.2に保ったまま加水分解を5.5時間にわたって継続し、目に見える沈殿物のないほぼ透明な溶液を得た。Protex活性を不活性化する加熱工程後、DH分析のためにサンプルを採取した。溶液のDHはほぼ30%と判明した。加熱処理溶液を10kDaフィルター上で限外濾過膜して、完全に透明な液体を得た。この透明液体をLC/MS分析のため、存在するペプチドおよびタンパク質の分子量分布のため、ならびにイオン交換クロマトグラフィーのために使用した。
[加水分解産物のトリプトファン含量を増大させる]
リゾチームは、驚くほど多量の塩基性アルギニンおよびリジン残基を包含する。さらにリゾチーム分子は、かなりの数の酸グルタメートおよびアスパラギン酸残基を包含する。このデータを使用して、高Trp/LNAA比を特色とする加水分解産物に向けた革新的で簡潔な精製経路を考案した。しかしこの精製経路の必須要件は、アルギニンまたはリジン残基またはグルタメートまたはアスパラギン酸残基のいずれかもまた含有するペプチド中に、非常にわずかなトリプトファン残基のみが出現することである。実施例3に示すように、本明細書で使用される特定の加水分解経路は、アルギニン残基を含有するわずかなトリプトファン含有ペプチドのみを生じ、リジン、グルタメートまたはアスパラギン酸残基を含有するペプチドは生じない。
[ジペプチドSer−Trpの化学合成]
標準ペプチド技術に従ってジペプチドSer−Trpを合成した。最初の工程では、無水炭酸法(J.Am.Chem.Soc.1967年,5012頁)を通じてZ−Ser−OHおよびTrp−OMeをカップリングし、保護されたジペプチドZ−Ser−Trp−OMeを得た。このためにはTrp−OMe・HClをテトラヒドロフラン(THF)に懸濁し、引き続いてN−メチルモルホリン(NMM)を添加した。混合物を1時間撹拌し、引き続いてテトラヒドロフラン/ジメチルホルムアミド(THF/DMF)中のZ−Ser溶液に添加した。NMMの第2の化学当量を添加して混合物を−15℃に冷却した。初期温度が−15℃を超えないような速度で、イソブチルクロロギ酸を添加した。引き続いて混合物を3時間撹拌し、周囲温度になるまで放置して沈殿したNMM・HClを濾過により除去した。濾液を4℃で一晩保持した後、あらゆる追加的沈殿物を濾過して濾液を真空内で濃縮した。残基をカラムクロマトグラフィー(SiO2、酢酸エチル/ヘプタン)によって精製した。合わせた画分を濃縮して水洗して、あらゆる残りのDMFを除去して真空内で濃縮した。
[健康なボランティアにおける血漿Trp/LNAA比および気分に対する異なるトリプトファン源の効果]
本研究の目的は、健康なボランティアにおいて、異なるトリプトファン含有製剤の摂取後に、血漿Trp/LNAAプロフィールおよび気分について調査することであった。
以下の製剤を試験した。
未変化αラクトアルブミン(材料と方法参照)
加水分解カゼイネート(DH>20%;材料と方法参照)
高Trp/LNAA比のTrp−濃縮リゾチーム加水分解産物(実施例4参照)
合成SWジペプチド(実施例5)
遊離L−トリプトファン(材料と方法参照)
血漿Trp/LNAA比に対する被験者内因子としての条件および時間の最初の反復測定分散分析からは、時間および条件の主要な著しい効果、および条件×時間の著しい相互作用が明らかになった。血漿Trp/LNAA比の最大の著しい増大は、「SYN」(60分後に263%の増大)および「WEPS」(90分後に255%の増大)を提供した後に見られた(図1参照)。これらの2つの製品の後のTrp/LNAAの増大は「TRP」(120分後に191%の増大)または「ALAC」(120分後に67%の増大)どちらの摂取後よりも、顕著により早くより高かった。「REF」の摂取後、60分から始まって210分(−27%)までTrp/LNAAに著しい低下があった。
「非常にそう思わない」から「非常にそう思う」に及ぶ視覚的アナログ尺度として、気分状態のプロフィール質問票オランダ語短縮版の筆記バージョン(WaldおよびMellenbergh,Ned Tijdschr Psychol 1990年:45:86〜90頁)を使用して、様々な参加者の気分変化を測定した。POMSは、落ち込んだ気分状態を指す、怒り、抑うつ、疲労、および緊張から前向きな気分に関わる活気に及ぶ、気分のための5つの異なる下位尺度を含んでなる。
[大規模なリゾチーム加水分解]
大規模リゾチーム加水分解手順は、小さな修正を加えて本質的に実施例3で記載される手順に従った。7.3%(w/w)の純粋リゾチームを含有する溶液を65℃に加熱した後、NaOHを使用してpHをpH8.2に調節した。乾燥物質1gあたり25μLのProtex 6Lを添加することにより、加水分解を開始した。連続撹拌しながらpHを8.2に温度を53℃に保ちながら、加水分解を2時間継続した。次にpH値を9.0に増大させてインキュベーションをさらに3.5時間続行し、いくらかの沈殿物がある溶液を得た。次に溶液のpHを4.5に低下させて、溶液を4℃未満に冷却した。完全に透明な製品を得るために、液体をZ 2000フィルター(Pall)上で濾過し、引き続いてナノ濾過を通じて過剰な水と塩を除去した。次に得られた濃縮物に120℃で7秒間のUHT処理を施し、蒸発させて最後に噴霧乾燥し、乾燥形態のリゾチーム加水分解産物を得た。このようにして得られた製品は約0.19のモル濃度Trp/LNAA比を有する。
[リゾチーム加水分解産物を組み込んだ飲料を調製する]
以下のレシピは、無脂肪リゾチーム加水分解産物含有イチゴ飲料の調製を例証する。10グラムのリゾチーム加水分解産物粉末(実施例7に従って調製した)に、40グラムのグルコース、2.4グラムのクエン酸、0.38グラムのリンゴ酸、0.15グラムのスクラロース、およびオランダ国ザーンダム(Zaandam)のButeressenceからの0.5グラムのイチゴ香料を添加した。この粉末混合物は1Lの水に容易に溶解して、高Trp/LNAAおよび高Tyr/BCAA比の即席飲料が得られる。粉末混合物は、例えば小袋充填に適する。様々な既知の技術を使用した、包装された液体製品も製造し得る。
[ストレスを受けやすいおよびストレス抵抗性の健康なボランティアにおけるストレス後能力に対するリゾチーム加水分解産物の効果]
本研究の目的は、血漿Trp/LNAAレベルおよびストレス能力後課題に対するその帰結の観点から、実施例7に記載される手順に従って調製されたリゾチーム加水分解産物の効果をプラセボ(カゼインタンパク質加水分解産物;実施例6参照)と比較することであった。使用された能力試験は、個人の「覚醒状態」および「眼・運動制御」の側面に対処することが知られている。
[リゾチームおよびαラクトアルブミンのプロテアーゼ抵抗性]
βラクトグロブリンと共に、αラクトアルブミンは乳清の主要タンパク質構成物を形成する。その高Trp/LNAA比のために、単離されたαラクトアルブミン画分ならびにαラクトアルブミン加水分解産物は、血漿トリプトファンレベルを高めるために人気が高まっている。αラクトアルブミンおよび鶏卵リゾチームはどちらも極めて高いTrp/LNAA比を有するが、その他の点ではこれらの2つの分子はかなり異なる。本明細書によれば、高Trp/LNAA比があるペプシン抵抗性分子は、高血漿Trp/LNAA比を長期にわたり維持するために必須である。ここで本出願人は、鶏卵リゾチームとは異なり、αラクトアルブミンがペプシン抵抗性でないことを実証する。これは以下の実験で例証された。ヒト胃内の条件を模倣するために、5%(w/w)のリゾチームおよびダビスコ(Davisco)からの乳清タンパク質(Bipro)の溶液をペプシン(リゾチームまたは乳清タンパク質に対して1重量%のペプシン(シグマ))と共に、McIlvaine緩衝液(0.2Mクエン酸+Na2HPO4)中においてpH4、37℃で2時間インキュベートした。インキュベーション後、双方の溶液を80℃で5分間加熱して反応を終結させ、少量のサンプルをSDS−PAGEにかけて(材料と方法参照)、様々なペプシン処理分子の完全性を試験した。
[リゾチーム加水分解産物と未変化分子を組み合わせることで高Trp/LNAAレベルを延長させる]
ペプチド結合およびポリペプチド結合トリプトファン組成物併用の利点を実証するために、15人の健常人が参加する研究を実施した。排除基準は次のとおりであった。研究者の自由裁量で慢性および現在の病気;精神障害の既往;選択的セロトニン再取り込み阻害剤(SSRI)の使用;トリプトファン、エフェドリン、またはセイヨウオトギリソウを含有する栄養補給剤などの中枢神経系を標的とする栄養補給剤の使用;卵アレルギー;薬物濫用;同時に治験薬または市販品が関与するあらゆるその他の研究への参加;人工甘味料不耐性;研究者の自由裁量で胃腸の機能を妨げるあらゆる(既往)胃腸疾患;制酸薬などの胃腸管標的とする医薬品の使用。最後に女性では妊娠または医学的に認められない避妊法の使用もまた排除基準である。
異なる処置の受け入れ間に少なくとも3日間の休薬期間を設けて、無作為化二重盲検交叉デザインに従って実研究を施した。
リチウムヘパリン血液管内におよそ5mlの血液を採取し、振って即座に氷上にのせた。サンプルを引き続いて遠心分離し、750μlの血漿を5−SSA(4mg/100ml血漿)と混合した。
3種の異なる処置における時間の変数としての血漿Trp/LNAA比を図10に示す。3種の処置は全てTrp/LNAA比の増大を生じた。リゾチーム加水分解産物の摂取に続いて、最速(15分以内)および最も急激な増大が観察された。未変化リゾチームははるかにより緩慢なTrp/LNAA比の増大を生じたが、経時的なTrp/LNAA比の低下もまた、はるかにより緩慢であった。未変化および加水分解リゾチームの混合物からは、中間の結果が生じた。
[リゾチーム加水分解産物と未変化リゾチームとを合わせると最終製品の味を改善する]
リゾチーム加水分解産物と未変化分子を混合すると、最終製品の味覚の印象にかなりの変化が起きることが気付かれた。以下の加水分解産物と未変化分子との比は、200mlの水あたり4グラムの最終濃度で調製された。
100%リゾチーム加水分解産物
70%リゾチーム加水分解産物 30%リゾチーム
50%リゾチーム加水分解産物 50%リゾチーム
30%リゾチーム加水分解産物 70%リゾチーム。
Claims (14)
- 好ましくは水溶性であり、0.1を超え、好ましくは0.15を超えるTrp/LNAA比を有する、ペプチド結合トリプトファン組成物、および/または遊離トリプトファン;および
好ましくは水溶性であり、0.15を超えるTrp/LNAA比を有するポリペプチド結合トリプトファン組成物
を一緒にするステップを含んでなる、トリプトファン含有組成物を製造する方法。 - トリプトファン含有ペプチドが、リゾチームまたはαラクトアルブミン、好ましくはリゾチーム、好ましくは鶏卵リゾチームを加水分解して5〜45のDHを有する加水分解産物を調製し、任意に加水分解産物を分画、濃縮または精製することにより得られる、請求項1に記載の方法。
- 組成物が(ジペプチドとして)AWまたは(トリプチドとして)GNWを含んでなり、好ましくはAWおよびGNWを含んでなる、請求項1または2に記載の方法。
- ポリペプチド結合トリプトファンがリゾチームである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 10〜90%、好ましくは20〜80%のトリプトファンがペプチド結合トリプトファンおよび/または遊離トリプトファンとして存在し、10〜90%、好ましくは20〜80%のトリプトファンがポリペプチド結合トリプトファンとして存在する、トリプトファンを含んでなる組成物。
- 30モル%を超え、好ましくは40モル%を超え、より好ましくは50モル%を超え、なおもより好ましくは60モル%を超え、さらにより好ましくは70モル%を超、最も好ましくは80モル%を超えるペプチド結合トリプトファンが、ジペプチドまたはトリペプチドの形態で存在する、請求項5に記載の組成物。
- 30モル%を超え、好ましくは40モル%を超え、より好ましくは50モル%を超え、なおもより好ましくは60モル%を超え、さらにより好ましくは70モル%を超え、最も好ましくは80モル%を超えるポリペプチド結合トリプトファンが、好ましくはリゾチームである未変化タンパク質として存在する、請求項5または6に記載の組成物。
- 好ましくは水溶性である少なくとも1つのトリプトファン含有ペプチドを含んでなり、または好ましくは水溶性であるペプチド結合トリプトファン画分が少なくとも0.10、好ましくは少なくとも0.15、より好ましくは0.15〜1.8.のTrp/LNAA比を有する、請求項5〜7のいずれか一項に記載の組成物。
- (ジペプチドとして)AWまたは(トリペプチドとして)GNWを含んでなり、好ましくはAWおよびGNWを含んでなる、請求項5〜8のいずれか一項に記載の組成物。
- ジペプチドまたはトリペプチドから選択される、少なくとも1つ、好ましくは少なくとも2つの異なるトリプトファン含有ペプチドを含んでなり、ジペプチドまたはトリペプチドから選択されるトリプトファン含有ペプチドが、(それぞれ)少なくともジペプチドおよびトリペプチドの総量の5モル%の量で存在する、請求項5〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- リゾチーム加水分解産物、好ましくは鶏卵リゾチーム加水分解産物の水溶性画分を含んでなる、請求項5〜10のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項1または2の方法によって得られる、請求項5〜11のいずれか一項に記載の組成物。
- 好ましくは薬剤である栄養補助食品が、好ましくは気分、認知力、食欲、俊敏さ、覚醒状態、入眠と睡眠の質、抗不安効果、うつ病、情動反応制御または性行動を予防または治療し改善するために使用され、または食品、飼料、栄養補助食品の調製において成分として使用される、好ましくは薬剤である栄養補助食品として使用するための請求項5〜12のいずれか一項に記載の組成物またはリゾチーム、または好ましくは薬剤である栄養補助食品としての請求項5〜12のいずれか一項に記載の組成物またはリゾチームの使用、または好ましくは薬剤である栄養補助食品の調製における請求項5〜12のいずれか一項に記載の組成物またはリゾチームの使用。
- 請求項5〜12のいずれか一項に記載の組成物またはリゾチーム摂取直前の、または請求項5〜12のいずれか一項に記載の組成物またはリゾチーム摂取なしの血漿Trp/LNAA比と比べて、15〜240分間、好ましくは30〜240分間にわたり血漿Trp/LNAA比を増大させる、請求項5〜12のいずれか一項に記載の組成物またはリゾチームの使用。
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