JP2010515458A - 血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 - Google Patents
血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010515458A JP2010515458A JP2009545600A JP2009545600A JP2010515458A JP 2010515458 A JP2010515458 A JP 2010515458A JP 2009545600 A JP2009545600 A JP 2009545600A JP 2009545600 A JP2009545600 A JP 2009545600A JP 2010515458 A JP2010515458 A JP 2010515458A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- transwell
- smc
- hemodynamic
- flow
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 108
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 title claims abstract description 67
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 title claims description 144
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 title abstract description 23
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title abstract description 11
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 title description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 title description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 101
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 41
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 41
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims description 10
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 21
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 18
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 11
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 11
- 230000004087 circulation Effects 0.000 abstract description 9
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 abstract description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 description 48
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 29
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 21
- 230000000778 atheroprotective effect Effects 0.000 description 21
- 101001139134 Homo sapiens Krueppel-like factor 4 Proteins 0.000 description 19
- 102100020677 Krueppel-like factor 4 Human genes 0.000 description 19
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 16
- 230000004044 response Effects 0.000 description 16
- 101000817629 Homo sapiens Dymeclin Proteins 0.000 description 15
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 15
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 15
- 108010081823 Myocardin Proteins 0.000 description 15
- 102100030217 Myocardin Human genes 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 102000008052 Nitric Oxide Synthase Type III Human genes 0.000 description 14
- 108010075520 Nitric Oxide Synthase Type III Proteins 0.000 description 14
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 14
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 14
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 13
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 description 13
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 12
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 11
- 102100022056 Serum response factor Human genes 0.000 description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000002487 chromatin immunoprecipitation Methods 0.000 description 8
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 8
- 101001139146 Homo sapiens Krueppel-like factor 2 Proteins 0.000 description 7
- 102100020675 Krueppel-like factor 2 Human genes 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 7
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- -1 Argon Ion Chemical class 0.000 description 6
- 230000036523 atherogenesis Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 5
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 102100021489 Histone H4-like protein type G Human genes 0.000 description 5
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 5
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 5
- 102100036691 Proliferating cell nuclear antigen Human genes 0.000 description 5
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 5
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 5
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 5
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003592 biomimetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 4
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 4
- 102000000018 Chemokine CCL2 Human genes 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 108010071563 Proto-Oncogene Proteins c-fos Proteins 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 102100029761 Cadherin-5 Human genes 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000007568 Proto-Oncogene Proteins c-fos Human genes 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 108010018828 cadherin 5 Proteins 0.000 description 3
- 210000001326 carotid sinus Anatomy 0.000 description 3
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 3
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 3
- ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M Alexa Fluor 546 Chemical compound [H+].[Na+].CC1CC(C)(C)NC(C(=C2OC3=C(C4=NC(C)(C)CC(C)C4=CC3=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=C2C=3C(C(=C(Cl)C=1Cl)C(O)=O)=C(Cl)C=1SCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 2
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 2
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 description 2
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 2
- 108010068426 Contractile Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000002585 Contractile Proteins Human genes 0.000 description 2
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000207 pro-atherogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000541 pulsatile effect Effects 0.000 description 2
- 238000012755 real-time RT-PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 101150023453 smc gene Proteins 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- ACTRVOBWPAIOHC-XIXRPRMCSA-N succimer Chemical compound OC(=O)[C@@H](S)[C@@H](S)C(O)=O ACTRVOBWPAIOHC-XIXRPRMCSA-N 0.000 description 2
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 1
- FFRVQTGCNAGNJO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-2-pyrrolidin-1-ylethanamine Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C(CN)N1CCCC1 FFRVQTGCNAGNJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010058207 Anistreplase Proteins 0.000 description 1
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- SOGAXMICEFXMKE-UHFFFAOYSA-N Butylmethacrylate Chemical compound CCCCOC(=O)C(C)=C SOGAXMICEFXMKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 229940123150 Chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 229940122204 Cyclooxygenase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000015689 E-Selectin Human genes 0.000 description 1
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 1
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100510266 Homo sapiens KLF4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101150070299 KLF4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010017123 Kruppel-Like Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004434 Kruppel-Like Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005604 Myosin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010084498 Myosin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 229910020700 Na3VO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 description 1
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- WBNUCLPUOSXSNJ-ZDUSSCGKSA-N Sibrafiban Chemical compound C1CC(OCC(=O)OCC)CCN1C(=O)[C@H](C)NC(=O)C1=CC=C(C(=N)NO)C=C1 WBNUCLPUOSXSNJ-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229960003318 alteplase Drugs 0.000 description 1
- 229960000528 amlodipine Drugs 0.000 description 1
- HTIQEAQVCYTUBX-UHFFFAOYSA-N amlodipine Chemical compound CCOC(=O)C1=C(COCCN)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC=C1Cl HTIQEAQVCYTUBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000002583 anti-histone Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003529 anticholesteremic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127226 anticholesterol agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Substances [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 description 1
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 description 1
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 1
- 229940047495 celebrex Drugs 0.000 description 1
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- 230000003081 coactivator Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229960001425 deferoxamine mesylate Drugs 0.000 description 1
- 229920006237 degradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- IDDIJAWJANBQLJ-UHFFFAOYSA-N desferrioxamine B mesylate Chemical compound [H+].CS([O-])(=O)=O.CC(=O)N(O)CCCCCNC(=O)CCC(=O)N(O)CCCCCNC(=O)CCC(=O)N(O)CCCCCN IDDIJAWJANBQLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229960002768 dipyridamole Drugs 0.000 description 1
- IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N dipyridamole Chemical compound C=12N=C(N(CCO)CCO)N=C(N3CCCCC3)C2=NC(N(CCO)CCO)=NC=1N1CCCCC1 IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960000610 enoxaparin Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004049 epigenetic modification Effects 0.000 description 1
- 230000006718 epigenetic regulation Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- VJDOPFARMOLELX-ZDUSSCGKSA-N ethyl 3-[[(3s)-1-(4-carbamimidoylphenyl)-2-oxopyrrolidin-3-yl]carbamoylamino]propanoate Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)NCCC(=O)OCC)CCN1C1=CC=C(C(N)=N)C=C1 VJDOPFARMOLELX-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- KANJSNBRCNMZMV-ABRZTLGGSA-N fondaparinux Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NS(O)(=O)=O)[C@@H](OC)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O4)NS(O)(=O)=O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O2)NS(O)(=O)=O)[C@H](C(O)=O)O1 KANJSNBRCNMZMV-ABRZTLGGSA-N 0.000 description 1
- 229960001318 fondaparinux Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 229940080856 gleevec Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005732 intercellular adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229950010645 lanoteplase Drugs 0.000 description 1
- 108010051044 lanoteplase Proteins 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 1
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- IRAXRQFCCSHQDX-WBVHZDCISA-N methyl (2s)-2-(butoxycarbonylamino)-3-[[2-[(5r)-3-(4-carbamimidoylphenyl)-4,5-dihydro-1,2-oxazol-5-yl]acetyl]amino]propanoate Chemical compound O1[C@@H](CC(=O)NC[C@H](NC(=O)OCCCC)C(=O)OC)CC(C=2C=CC(=CC=2)C(N)=N)=N1 IRAXRQFCCSHQDX-WBVHZDCISA-N 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 1
- 229950005805 monteplase Drugs 0.000 description 1
- 108010075698 monteplase Proteins 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229960001597 nifedipine Drugs 0.000 description 1
- HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N nifedipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229950002383 orbofiban Drugs 0.000 description 1
- 230000003534 oscillatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 108010085108 pamiteplase Proteins 0.000 description 1
- 229950003603 pamiteplase Drugs 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 238000000059 patterning Methods 0.000 description 1
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009120 phenotypic response Effects 0.000 description 1
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000000557 podocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002599 prostaglandin synthase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108010051412 reteplase Proteins 0.000 description 1
- 229960002917 reteplase Drugs 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000003590 rho kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001020 rhythmical effect Effects 0.000 description 1
- RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N rofecoxib Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C1=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)OC1 RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950002267 roxifiban Drugs 0.000 description 1
- 238000005488 sandblasting Methods 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 229950005747 sibrafiban Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 230000004938 stress stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005346 succimer Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960003425 tirofiban Drugs 0.000 description 1
- COKMIXFXJJXBQG-NRFANRHFSA-N tirofiban Chemical compound C1=CC(C[C@H](NS(=O)(=O)CCCC)C(O)=O)=CC=C1OCCCCC1CCNCC1 COKMIXFXJJXBQG-NRFANRHFSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940087652 vioxx Drugs 0.000 description 1
- QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N wortmannin Chemical compound C1([C@]2(C)C3=C(C4=O)OC=C3C(=O)O[C@@H]2COC)=C4[C@@H]2CCC(=O)[C@@]2(C)C[C@H]1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N 0.000 description 1
- QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N wortmannin Natural products COCC1OC(=O)C2=COC(C3=O)=C2C1(C)C1=C3C2CCC(=O)C2(C)CC1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/069—Vascular Endothelial cells
- C12N5/0691—Vascular smooth muscle cells; 3D culture thereof, e.g. models of blood vessels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/28—Vascular endothelial cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2521/00—Culture process characterised by the use of hydrostatic pressure, flow or shear forces
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2007年1月10日出願の米国仮特許出願第60/879,710号からの 35 U.S.C. § 119(e) に基づく優先権を主張し、その内容は引用により本明細書に取り込まれる。
適用なし
適用なし
発明の分野
本発明は一般的に、細胞(例えば、内皮細胞)上でのインビトロの流体解析(例えば、血行力学)のための装置および方法に関する。より具体的には、本発明は、培養皿環境中で1より多くの異なる細胞型を物理的に分離することを可能にし、一方で内側の細胞表面がシミュレートされた血行力学的流動パターンに曝される装置の使用方法に関する。
アテローム性動脈硬化は、動脈の病変形成および管腔狭窄によって特徴づけられる血管の炎症性疾患である。内皮細胞(EC)および平滑筋細胞(SMC)の局所的表現型は、血管疾患の進行において重要な意味を有する。初期のアテローム発生の間には、内皮が活性化され、接着分子の発現、リポタンパク質に対する透過性およびサイトカイン産生の増大をもたらす。かかる環境変化は、形態的変化、増大した増殖および遊走ならびに静止状態の SMC を定義するマーカーの減少した発現によって特徴づけられる“表現型転換”を起こすように SMC を促し得る。
本発明の一つの側面は、これらに限定されないが、ヒトの循環をモデルとした血行力学的(すなわち、血流)パターンを培養状態のヒト/動物細胞に適用するために用いられるインビトロの生体力学モデルである。本モデルは、非観血的磁気共鳴画像法を用いてヒトの循環から直接測定され、コーンの回転を制御するモーターに変換される血行力学的流動パターンを再現する。コーンは流体(すなわち、細胞培養の培地)中に浸され、プレート表面上で増殖する細胞の表面に近接させられる。コーンの回転は、流体上で運動量を変換し、プレートまたは細胞表面に対する経時変化するせん断応力を作り出す。本モデルは、生体内で内皮細胞(血管を裏打ちする細胞)に対して与えられる生理学的な血行力学的な力を最も密接に模倣し、より単純化された非生理学的流動パターンの適用に限られていたこれまでの流動装置を乗り越える。
アテローム性動脈硬化
アテローム性動脈硬化は、乱れた、時間平均の低い、振動性の壁せん断応力によって特徴づけられる動脈の領域、例えば分岐および曲率の高い領域において優先的に発達する。生体内のアテローム易発性領域およびインビトロでの内皮に対するアテローム易発性せん断応力は、下流の炎症性標的の活性化および調節によって示される炎症促進性の準備刺激を誘導し得る。EC および SMC は、アテローム硬化性の現象を開始する間に表現型調節または“転換”を受けることが知られている2つの主要な細胞型であるが、EC に対する血行力学的な力が SMC におけるこの過程を調節するかまたはこれに貢献するか否かについては本発明まで不明であった。EC に適用されるヒト由来アテローム易発性せん断応力は、クロマチンレベルでの後成的な修飾を介して、EC および SMC における炎症促進性の表現型ならびに SMC におけるアテローム生成促進性の(proatherogenic)表現型転換を調節する。これは、メカノトランスクリプショナルカップリング(mechanotranscriptional coupling)と呼ばれる過程である。
以下は、本発明を用いる方法の例であり、本発明の範囲を本実施例中に記載される正確な方法に限定することを意図するものではない。
初代 ヒト EC および SMC を、臍帯から単離し、展開し、細胞の源として用いた。ヒト EC を、前述の通りに臍帯静脈から単離し(ヒト臍帯静脈 EC)、その後、前述の通りに同様の方法を用いて静脈から SMC を単離した。
図 1 に示される通り、多孔質のトランズウェル膜(厚さ 10 μmで、孔の直径 0.4 μmのポリカーボネート、no. 3419、Corning)を、上面および底面について、0.1% ゼラチンで最初に被覆した。トランズウェルを反転させ、SMC を 2 時間の間、底面上に 10,000 細胞/cm2 の密度でプレーティングした。次いでトランズウェルを元に戻し、48時間の間、ウェルを低血清増殖培地(2% FBS、2 mM L-グルタミンおよび 100 U/ml ペニシリン-ストレプトマイシンが補充された M199)中に保持した。次いで、同じ培地条件のもとでさらに24時間の間、EC を膜の上面に 80,000 細胞/cm2 の密度でプレーティングした。血行力学的流動実験のために、2つの皿を並行して調製した。
図 2 に示される通り、ヒトの循環からモデル化された動脈の流動パターンを用いるこの過程の新規な共培養インビトロモデルを、ヒト EC に適用した。コーンおよびプレート装置の一つのバージョンは、コーンが(タイミングベルト接続を介して一方の側へ向かうのではなく)モーターによって直接的に駆動される直接駆動である。このモデルを、75-mm-直径のトランズウェル共培養皿(厚さが 10 μmで、孔の直径が 0.4 μmのポリカーボネート、Corning)を組み込むよう改変した。さらなる改変は、トランズウェル皿を安全に保持するための土台、トランズウェル区画の内側にフィットするためのより小さなコーン(直径が 71.4 mmでコーン角度が 1°) ならびに EC および SMC 層の両方に対して連続的に培地を交換するための培養流動環境への直接的接近手段を提供する、トランズウェルの内側および外側チャンバーの両方についての流入管および流出管のための特別な取付けブラケットを含んだ。コーンの回転を介して、系は EC/SMC 共培養の EC 層に対して血行力学的せん断応力をかける。
24時間の血行力学的流動パターンの適用の後、SMC および EC を、Ca2+/Mg2+ を伴う PBS で2回リンスした。膜を保持皿から取り除き、反転させた。小さく柔軟な細胞スクレーパーを用いて、SMC を 皿の中心へ向かって穏やかに掻き集めた。次いで、1 ml のPBS を用いて細胞を無菌の表面上へすすぎ落とし、その後、細胞を氷上で微量遠心管に移した。膜を反転させ、無菌の表面上に平らに置き、EC を 1 ml のPBS 中で掻き集めた後、氷上で別々の微量遠心管に移した。管を遠心し、PBS を除去した。TRIzol 試薬 (Invitrogen)を用いて全 RNA を抽出し、iScript cDNA 合成キット(Bio-Rad)を用いて逆転写した。Beacon Designer 2.0 を用いて、平滑筋α-アクチン(SMαA)、ミオカルディン、平滑筋ミオシン重鎖(SMMHC)、VCAM-1、単球走化性タンパク質-1 (MCP-1)、内皮型一酸化窒素合成酵素(eNOS)、アンジオポエチン(angiopoiten)受容体 Tie2、IL-8 およびクルッペル様転写因子(KLF2 および KLF4)についてプライマーを設計した。表 1 は、各々のヒト遺伝子について用いられたセンスおよびアンチセンスプライマーを示す。mRNA の発現を、AmpliTaq Gold (Applied Biosystems)、SYBR green (Invitrogen) および iCycler (Bio-Rad)を用いるリアルタイム RT-PCR を介して解析した。
血管の SMC および EC を、リアルタイム PCR で記載した通りに回収し、RIPA バッファー(1% ノニデット P-40、Na-デオキシコーレート、1 mM EDTA、1 mM PMSF、1 mM Na3VO4、1 mM NaF、1 μg/ml アプロチニン、1 μg/ml ロイペプチン および 1 μg/ml ペプスタチン)中で溶解した。全タンパク質ライセートを、7.5% SDS-PAGE ゲル上で分離し、ポリビニル誘導体膜上にブロットした。一次抗体 [SMαA (Sigma、1:1,000)、eNOS (BD Transduction Laboratories、0.1 μg/ml)、VCAM-1 (R&D Systems、1:500) および PCNA (Cell Signaling、1:1,000)] を、室温で1時間または 4 ℃で一晩、ブロットと共にインキュベートした。セイヨウワサビ ペルオキシダーゼ結合 二次抗体 [ヤギ 抗ウサギ、ヤギ 抗マウス (Santa Cruz Biotechnology、1:5,000) および ロバ 抗ヤギ (1:5,000)] を、室温で1時間、ブロットと共にインキュベートした。AlphaImager 8900 および AlphaEaseFC ソフトウェアを、それぞれブロット画像の獲得および濃度測定解析のために用いた。
共培養されたトランズウェルを調製し、異なる血行力学的環境に曝露した。4、8、12 および 24 時間後に、膜の各チャンバーについて、流動実験の間を通じて灌流された培地を氷上で回収した(すなわち、アテローム易発性およびアテローム保護性の流動からの EC および SMC 培養上清)。その後、ELISA (GE Healthcare)を介して IL-8 分泌タンパク質についてアッセイされるまで、サンプルを -80℃で保管した。タンパク質の濃度を、分光光度計(spectrophometer)を用いて 450 nm で決定し、1時間あたりの回収された培地の体積に対して規準化した。
流動パターンの適用後、クロマチン免疫沈降(ChIP)を、タンパク質:DNA 相互作用の定量的解析を可能にする改変を伴って、前述の通りに行った(30)。各実験からの流出培地に 1% ホルムアルデヒドを補充し、次いで、24 時間の流動の後すぐに 10 分間、細胞と共にインキュベートした。抗体は、ウサギ ポリクローナル 抗血清応答因子(SRF; Santa Cruz Biotechnology、5 μg/ml) および 抗ヒストン H4 アセチル化 (Upstate Biotechnologies、5 μg/ml) を包含した。回収された DNA を、製造者の推奨にしたがって、picogreen 試薬 (Molecular Probes) を用いて蛍光によって定量化した。リアルタイム PCR を、ChIP 実験からの 1 ng のゲノム DNA について、小さな改変を伴って前述の通りに行った。リアルタイム PCR プライマーを、SMαA、SMMHC、c-fos CArG の 5'- CC(a/T)6GG (CArG) エレメントに隣接するように設計した。表 1 は、ChIP 解析のために用いたプライマーを示す。タンパク質:DNA 相互作用/濃縮の定量化を、以下の式によって決定した: 2(Ct Ref - Ct IP) - 2(Ct Ref - Ct 抗体なし対照)、ここで、Ct Ref は基準閾値サイクル(Ct)であり、Ct IP は免疫沈降物の Ct である。ChIP データは、一緒にプールされ2つ1組で解析された5から6の独立した実験を代表する。
免疫蛍光(IF)のために、トランズウェル膜を、表面調製物(en face preparation)および横断面の両方について、4% パラホルムアルデヒド中で固定した。表面調製物を、0.2% Triton X-100 中で透過処理した。SMC のための一次抗体を、1切れのパラフィルム上にピペットで滴下し [Cy3-SMαA (Sigma、4 μg/ml) および SMMHC (Biomedical Technologies、1:100)]、サンプル ウェルを上に置いた。次いで、EC のための一次抗体 [血管内皮カドヘリン(VE-cad; Santa Cruz Biotechnology、2 μg/ml)] をウェルの内側へ直接添加し、両方の抗体を同時に1時間インキュベートした。同様に、二次抗体 [Cy2 ロバ 抗ヤギ (Jackson ImmunoResearch、4 μg/ml) および Alexa fluor546 ヤギ 抗ウサギ (Molecular Probes、6 μg/ml)] を必要なだけサンプルに添加し、1 時間インキュベートした。4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール(DAPI; Molecular Probes)と共に Prolong Gold Antifade 試薬を大きなカバースリップに添加し、その上にウェルを降ろすことによって、サンプルをマウントした。DAPI の別の液滴をウェルの内側に添加し、22-mm-直径のカバースリップを上に置いて、凝固させた。画像化を可能にするため、マウントされたサンプルからメスを用いて保持ウェルを取り除いた。z-軸を通して EC 層から SMC 層まで表面サンプル(en face sample)を画像化するために、共焦点顕微鏡法を用いた (Nikon Eclipse Microscope TE2000-E2 および Melles Griot Argon Ion Laser System no. 35-IMA-840)。
流動の方向に対する EC および SMC の配向を、IF 染色されたサンプルの共焦点顕微鏡法を用いて定量化した。血行力学的流動の後、共培養を上記の通りに固定し、75-mm-直径の皿からの二等辺三角形のサンプルを、皿の中心を向いた三角形の印(pointing)の頂点と共に切り取った。この方法は、流動の方向に対する正確な配向を確立した。次いで、サンプルを上記の通りに染色し、2つのカバースリップの間にマウントした。画像化のために、流動の方向が全てのサンプルにわたって一貫するよう、三角形の頂点が右を向いた状態でサンプルを共焦点のステージ上に置いた。膜の距離のみによって分離された同じ位置において、EC および SMC の画像を撮った。
リアルタイム RT-PCR 結果は、アテローム保護性流動と比較してのアテローム易発性流動のサンプルについてのサイクル増幅回数の誘導倍率(fold induction)として報告され、内因性に発現する遺伝子 β2-ミクログロブリンに対して規準化される。血行力学的流動パターンと時間の関数として発現レベルまたは形態の変化における有意性を決定するため、スチューデントの t-検定を mRNA、配向および伸長のデータについて行った。条件あたり少なくとも3つの独立した実験からのデータを解析のために用い、P<0.05 で評価した。
EC/SMC共培養プレーティングおよび増殖条件の最適化
ヒト EC および SMC のプレーティングのための共培養条件を、各々の細胞型が血行力学的流動の適用の前にコンフルエンスに達するよう最適化した。図 4 は、EC 播種後24時間の EC および SMC のコンフルエントな層を示す。より具体的には、図 4 は、コンフルエントな状態を示す24時間共培養された EC (左) および SMC (右) を示す (上、表面(en face)画像; 下、横断面)。EC は、VE-cad の連続的な末梢性の染色によって示される通り、接着結合(adheren junctions)を形成し、その古典的な多角形の形態を保持したが、一方で SMC は伸長し、典型的な“起伏(hill and valley)”形成においてランダムに配向した。単独でプレーティングされた SMC においては、低血清培地 (10% FBS と比較して 2% FBS) が SMC マーカー SMαA およびミオカルディンの mRNA 発現を増大させ、より分化した SMC 表現型を示した (2% FBS での規準化された遺伝子発現: SMA、2.51 ± 0.36 およびミオカルディン、2.07 ± 0.05; 10% FBS での規準化された遺伝子発現: SMA、0.69 ± 0.23 およびミオカルディン、0.54 ± 0.14; 図 9 を参照)。
生体内での EC および SMC の形態は、EC が血行力学的流動の方向に伸長および整列し、SMC が動脈の長軸および血流の方向に対して垂直の方向を向いた状態で、高度に整えられている。しかし、複雑な流動の領域、例えば動脈の分岐における内皮は、より多角形であまり整列せず、SMC は流れに対し一貫して垂直に整列するわけではない。内皮上の血行力学的流動が EC および SMC に対して形態的変化を誘導するかどうか決定するために、両方の細胞型について以下の SF 測定値を決定した: 1) 伸長における変化 および 2) 流動の方向に対する配向角度の測定値。図 6-8 に示される通り、アテローム保護性の流動と比較して、アテローム易発性の流動の適用後に、細胞の形状(SF)および細胞配向の両方において有意差が観察された。SF は細胞伸長の程度を示し、1 の値は円(すなわち、伸長なし)を特定し、より 0 に近い値は伸長した細胞を特定する。代表的な IF 画像を図 6 に示す。これまでに確立された通り、アテローム易発性の流動に曝された EC は、より多角形の形状を維持し(SF = 0.75 ± 0.002)、一方アテローム保護性条件下の EC は、より伸長した (SF = 0.64 ± 0.015)。EC/SMC の形態および配向を、流動の後、免疫蛍光によって決定した。EC を血管内皮カドヘリン(VE-カドヘリン)について染色し、SMC を平滑筋α-アクチン(SMαA)について染色した。図 6 における矢印は正味の流動の方向を示し、棒は 50 μm に等しい。
流動実験後に各々の細胞層から回収された RNA およびタンパク質の純度を、リアルタイム RT-PCR およびウエスタンブロット解析によって、EC および SMC に特異的なタンパク質(それぞれ eNOS および SMαA; 図 11 および図 12)の存在について評価した。検出可能な mRNA またはタンパク質レベルでの相互汚染は無かった。
SMαA および SMMHC を含む SMC 選択性の収縮性タンパク質をコードする遺伝子のプロモーター領域の多くは、SRF に結合する CArG シス調節性エレメントを含有する。SMαA、SMMHC および c-fos プロモーターの 5'-CArG プロモーター領域における SRF の結合およびヒストン H4 アセチル化が血行力学的流動によって後成的なレベルで調節されるかどうか決定するために、ChIP 実験を行った。結果は、SMαA および SMMHC に関して、アテローム保護性の流動と比較して、アテローム易発性の流動に対する応答におけるヒストン H4 アセチル化および SRF 結合の減少を示した(図 19)。逆に、c-fos CArG 領域に対するヒストン H4 アセチル化および SRF 結合は、流動条件の間で統計的に異ならなかった(図 19)。この後成的なフィンガープリントは、PDGF-BB に対する応答における SMC でのインビトロの実験および急性血管傷害に対する応答におけるインビボの実験と同一であった。
薬剤は、アクチノマイシン-D、バチマスタット(batimistat)、c-myc アンチセンス、デキサメタゾン、パクリタキセル、タキサン、シロリムス、タクロリムスおよびエベロリムス、未分画のヘパリン、低分子量ヘパリン、エノキサパリン(enoxaprin)、ビバリルジン、チロシンキナーゼ阻害剤、グリベック、ワートマニン、PDGF 阻害剤、AG1295、rho キナーゼ阻害剤、Y27632、カルシウムチャンネルブロッカー、アムロジピン、ニフェジピン、および ACE 阻害剤、合成多糖、チクロピジン(ticlopinin)、ジピリダモール、クロピドグレル、フォンダパリヌクス、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、r-ウロキナーゼ、r-プロウロキナーゼ、rt-PA、APSAC、TNK-rt-PA、レテプラーゼ、アルテプラーゼ、モンテプラーゼ、ラノテプラーゼ(lanoplase)、パミテプラーゼ、スタフィロキナーゼ、アブシキシマブ、チロフィバン、オルボフィバン(orbofiban)、ゼミロフィバン、シブラフィバン(sibrafiban)、ロキシフィバン(roxifiban)、抗再狭窄剤、抗血栓形成剤、抗生物質、抗血小板剤、抗凝固剤、抗炎症剤、抗腫瘍剤、抗高血圧剤、キレート剤、ペニシラミン、トリエチレンテトラミン ジヒドロクロライド、EDTA、DMSA (サクシマー)、デフェロキサミン メシレート、コレステロール降下剤、スタチン、HDL を上昇させる剤、シクロオキシゲナーゼ(cyclyoxygenase)阻害剤、セレブレックス(Celebrex)、ビオックス(Vioxx)、放射性造影剤、放射性同位体、プロドラッグ、抗体断片、抗体、生細胞、治療薬送達ミクロスフェアもしくはミクロビーズ、ならびにそれらのあらゆる組み合わせを含む群から選択され得る。
Claims (22)
- 血行力学的パターンを培養状態の細胞に適用する方法であって、以下の工程を含む方法:
第1のセットの細胞をトランズウェル上にプレーティングする工程;
第2のセットの細胞を前記トランズウェル上にプレーティングする工程、ここで、前記第1のセットの細胞は前記第2のセットの細胞から分離される;
前記トランズウェルに流体を添加する工程;
一定期間、前記流体の回転を起こす工程、ここで、前記培地はこれによってせん断力を前記第2のセットの細胞に及ぼす。 - 前記第1のセットの細胞および前記第2のセットの細胞が、膜によって分離される、請求項1に記載の方法。
- 前記第1のセットの細胞をインキュベートする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のセットの細胞をインキュベートする工程をさらに含む、請求項3に記載の方法。
- 第3のセットの細胞をプレーティングする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のセットの細胞が、ペトリ皿の底面上にプレーティングされる、請求項5に記載の方法。
- 追加の前記流体を定期的に添加し、トランズウェルから前記流体の一部を定期的に除去する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 追加の前記流体を連続的に添加し、トランズウェルから前記流体の一部を連続的に除去する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記流体が薬剤を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記一定期間の後に前記第1のセットの細胞および前記第2のセットの細胞を解析する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記回転力が、前もって測定された血行力学的パターンに対応する、請求項1に記載の方法。
- 前記第1のセットの細胞が、内皮細胞または平滑筋細胞のいずれかからなる、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のセットの細胞が、内皮細胞または平滑筋細胞のいずれかからなる、請求項1に記載の方法。
- 血行力学的パターンを培養状態の細胞に適用する方法であって、以下の工程を含む方法:
対象の血行力学的パターンをモニターする工程;
前記血行力学的パターンを電子的指示のセットへとモデル化する工程;
前記電子的指示に基づいて、トランズウェル上の細胞の複数のセットに対してせん断応力をもたらすために装置を使用する工程。 - 前記モニターする工程が、超音波の使用を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記モニターする工程が、磁気共鳴画像法の使用を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記せん断応力が、前記血行力学的パターンと連動して一定期間にわたって変動する、請求項14に記載の方法。
- 以下を含む血行力学的流動装置:
電子コントローラー;
前記電子コントローラーを介して操作されるモーター;
前記モーターによって回転させられる、前記モーターに接続したコーン;
膜を備えたトランズウェル、ここで、前記コーンは前記トランズウェル中の培地に少なくとも部分的に浸され、前記コーンは前記培地に対して回転力を及ぼす;
前記トランズウェルに培地を添加するための流入管; および
前記トランズウェルから培地を回収するための流出管。 - 前記トランズウェルが、膜のいずれかの側に細胞のセットを受け入れることができる、請求項16に記載の装置。
- 前記トランズウェルが、さらなる細胞のセットをペトリ皿の底面において受け入れることができる、請求項17に記載の装置。
- 前記培地が、前記細胞のセットに対してせん断力を及ぼす、請求項17に記載の装置。
- 前記培地が、少なくとも1つの薬剤を含む、請求項16に記載の装置。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US87971007P | 2007-01-10 | 2007-01-10 | |
US60/879,710 | 2007-01-10 | ||
PCT/US2008/000355 WO2009038594A2 (en) | 2007-01-10 | 2008-01-10 | Use of an in vitro hemodynamic endothelial/smooth muscle cell co-culture model to identify new therapeutic targets for vascular disease |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011247696A Division JP2012080888A (ja) | 2007-01-10 | 2011-11-11 | 血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010515458A true JP2010515458A (ja) | 2010-05-13 |
JP2010515458A5 JP2010515458A5 (ja) | 2011-06-30 |
JP5666134B2 JP5666134B2 (ja) | 2015-02-12 |
Family
ID=40382544
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009545600A Active JP5666134B2 (ja) | 2007-01-10 | 2008-01-10 | 血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 |
JP2011247696A Pending JP2012080888A (ja) | 2007-01-10 | 2011-11-11 | 血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011247696A Pending JP2012080888A (ja) | 2007-01-10 | 2011-11-11 | 血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7811782B2 (ja) |
EP (1) | EP2118268B1 (ja) |
JP (2) | JP5666134B2 (ja) |
CN (1) | CN101680018B (ja) |
CA (1) | CA2675147C (ja) |
HK (1) | HK1136319A1 (ja) |
WO (1) | WO2009038594A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015516154A (ja) * | 2012-04-18 | 2015-06-11 | ヘモシアー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーHemoShear, LLC | 病理学的状態または生理学的状態に対するInvitroモデル |
JP2016535591A (ja) * | 2013-10-21 | 2016-11-17 | ヘモシアー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーHemoShear, LLC | 腫瘍微細環境のための試験管内モデル |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008127732A2 (en) | 2007-04-12 | 2008-10-23 | The General Hospital Corporation | Biomimetic vascular network and devices using the same |
US9595206B2 (en) * | 2008-02-11 | 2017-03-14 | The General Hospital | System and method for in vitro blood vessel modeling |
IT1397084B1 (it) * | 2009-12-17 | 2012-12-28 | Fond Irccs Ca Granda Ospedale Maggiore Policlinico | Metodo di co-coltura tridimensionale di podociti e cellule endoteliali e relativo sistema di co-coltura in vitro |
CN101974405B (zh) * | 2010-09-30 | 2013-02-13 | 广州大学 | 一种血液流动模拟装置 |
US9107983B2 (en) | 2010-10-27 | 2015-08-18 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Osteoconductive matrices comprising statins |
US8877221B2 (en) | 2010-10-27 | 2014-11-04 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Osteoconductive matrices comprising calcium phosphate particles and statins and methods of using the same |
CN101985599A (zh) * | 2010-11-15 | 2011-03-16 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 体外光调控的细胞共培养装置 |
WO2012170417A2 (en) | 2011-06-06 | 2012-12-13 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Methods and compositions to enhance bone growth comprising a statin |
WO2013012498A1 (en) | 2011-06-14 | 2013-01-24 | Hemoshear, Llc | Electric cell- substrate impedance sensing (ecis) of biological samples in shear stress flow |
CN102517214A (zh) * | 2012-01-13 | 2012-06-27 | 王秀梅 | 一种评价细胞迁移行为的细胞培养器 |
EP2626432B1 (en) * | 2012-02-08 | 2014-11-12 | Universitätsklinikum Freiburg | Method for the diagnosis of myeloid neoplasias and solid tumors and diagnostic kits |
JP2014100249A (ja) * | 2012-11-19 | 2014-06-05 | Toshiba Corp | 血管解析装置、医用画像診断装置、血管解析方法、及び血管解析プログラム |
ES2731529T3 (es) | 2012-12-18 | 2019-11-15 | Biocant Associacao De Transferencia De Tecnologia | Población celular diferenciada de células endoteliales derivadas de células madre pluripotentes humanas, composición, sistema, kit y usos de la misma |
US20140295483A1 (en) * | 2013-04-01 | 2014-10-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Apparatus and method for in-vitro drug screening for cancer metastasis |
RU2017110275A (ru) | 2014-10-06 | 2018-11-15 | Органово, Инк. | Сконструированные ткани почки, матрицы на их основе и способы их получения |
US10598166B2 (en) | 2015-09-09 | 2020-03-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Atherofluidics-on-chip |
WO2019071249A1 (en) * | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Emory University | METHODS AND SYSTEMS FOR DETERMINING HEMODYNAMIC INFORMATION FOR ONE OR MORE ARTERIAL SEGMENTS |
CN107629997A (zh) * | 2017-10-13 | 2018-01-26 | 中国科学院大学 | 体外泡沫细胞形成模型及其在动脉粥样硬化研究中的应用 |
CN108424852B (zh) * | 2018-03-14 | 2021-04-27 | 张洪剑 | 模拟血管壁受力作用的transwell细胞培养装置 |
CN108485973A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-09-04 | 上海长海医院 | 一种细胞共培养平板流动腔及其流体切应力刺激方法 |
CN112251326A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-01-22 | 贵州师范学院 | 切胶纯化同位素标记核酸探针的装置及刀具 |
CN115369070A (zh) * | 2022-09-05 | 2022-11-22 | 西南交通大学 | 体外动脉粥样硬化斑块模型、制备方法及应用 |
CN115651840B (zh) * | 2022-12-13 | 2023-03-10 | 清华大学 | 可非侵入式超声激励和长时程成像的细胞培养装置 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000515376A (ja) | 1996-07-19 | 2000-11-21 | ニュー イングランド メディカル センター ホスピタル インク. | 血管保護剤の同定方法 |
Family Cites Families (42)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4169233A (en) * | 1978-02-24 | 1979-09-25 | Rockwell International Corporation | High performance CMOS sense amplifier |
KR100213602B1 (ko) * | 1988-05-13 | 1999-08-02 | 가나이 쓰도무 | 다이나믹형 반도체 기억장치 |
US5028810A (en) * | 1989-07-13 | 1991-07-02 | Intel Corporation | Four quadrant synapse cell employing single column summing line |
DE69328743T2 (de) * | 1992-03-30 | 2000-09-07 | Mitsubishi Electric Corp | Halbleiteranordnung |
JP3488730B2 (ja) * | 1993-11-05 | 2004-01-19 | 株式会社ルネサステクノロジ | 半導体集積回路装置 |
US5455791A (en) * | 1994-06-01 | 1995-10-03 | Zaleski; Andrzei | Method for erasing data in EEPROM devices on SOI substrates and device therefor |
JP3549602B2 (ja) * | 1995-01-12 | 2004-08-04 | 株式会社ルネサステクノロジ | 半導体記憶装置 |
JPH0982814A (ja) * | 1995-07-10 | 1997-03-28 | Denso Corp | 半導体集積回路装置及びその製造方法 |
JPH10208484A (ja) * | 1997-01-29 | 1998-08-07 | Mitsubishi Electric Corp | 半導体記憶装置のデータ読出回路及び半導体記憶装置 |
US5889293A (en) * | 1997-04-04 | 1999-03-30 | International Business Machines Corporation | Electrical contact to buried SOI structures |
JP3699823B2 (ja) * | 1998-05-19 | 2005-09-28 | 株式会社東芝 | 半導体装置 |
US6072217A (en) * | 1998-06-11 | 2000-06-06 | Sun Microsystems, Inc. | Tunable threshold SOI device using isolated well structure for back gate |
US6417697B2 (en) * | 2000-02-02 | 2002-07-09 | Broadcom Corporation | Circuit technique for high speed low power data transfer bus |
US6599694B2 (en) * | 2000-12-18 | 2003-07-29 | Cytokinetics, Inc. | Method of characterizing potential therapeutics by determining cell-cell interactions |
JP3982218B2 (ja) * | 2001-02-07 | 2007-09-26 | ソニー株式会社 | 半導体装置およびその製造方法 |
JP3884266B2 (ja) * | 2001-02-19 | 2007-02-21 | 株式会社東芝 | 半導体メモリ装置及びその製造方法 |
US6759282B2 (en) * | 2001-06-12 | 2004-07-06 | International Business Machines Corporation | Method and structure for buried circuits and devices |
US6838723B2 (en) * | 2002-08-29 | 2005-01-04 | Micron Technology, Inc. | Merged MOS-bipolar capacitor memory cell |
US7030436B2 (en) * | 2002-12-04 | 2006-04-18 | Micron Technology, Inc. | Embedded DRAM gain memory cell having MOS transistor body provided with a bi-polar transistor charge injecting means |
US6965143B2 (en) * | 2003-10-10 | 2005-11-15 | Advanced Micro Devices, Inc. | Recess channel flash architecture for reduced short channel effect |
CA2544726C (en) * | 2003-11-07 | 2018-06-26 | University Of Connecticut | Artificial tissue systems and uses thereof |
JP4795653B2 (ja) * | 2004-06-15 | 2011-10-19 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | 半導体記憶装置 |
US7190616B2 (en) * | 2004-07-19 | 2007-03-13 | Micron Technology, Inc. | In-service reconfigurable DRAM and flash memory device |
US7196921B2 (en) * | 2004-07-19 | 2007-03-27 | Silicon Storage Technology, Inc. | High-speed and low-power differential non-volatile content addressable memory cell and array |
US7560361B2 (en) * | 2004-08-12 | 2009-07-14 | International Business Machines Corporation | Method of forming gate stack for semiconductor electronic device |
KR100663359B1 (ko) * | 2005-03-31 | 2007-01-02 | 삼성전자주식회사 | 리세스 채널 트랜지스터 구조를 갖는 단일 트랜지스터플로팅 바디 디램 셀 및 그 제조방법 |
US20060267064A1 (en) * | 2005-05-31 | 2006-11-30 | Infineon Technologies Ag | Semiconductor memory device |
JP4967264B2 (ja) * | 2005-07-11 | 2012-07-04 | 株式会社日立製作所 | 半導体装置 |
JP4800700B2 (ja) * | 2005-08-01 | 2011-10-26 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | 半導体装置およびそれを用いた半導体集積回路 |
US7314794B2 (en) * | 2005-08-08 | 2008-01-01 | International Business Machines Corporation | Low-cost high-performance planar back-gate CMOS |
JP4413841B2 (ja) * | 2005-10-03 | 2010-02-10 | 株式会社東芝 | 半導体記憶装置及びその製造方法 |
JP4822791B2 (ja) * | 2005-10-04 | 2011-11-24 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | 半導体記憶装置 |
JP5054919B2 (ja) * | 2005-12-20 | 2012-10-24 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | 半導体集積回路装置 |
US7304903B2 (en) * | 2006-01-23 | 2007-12-04 | Purdue Research Foundation | Sense amplifier circuit |
JP4762036B2 (ja) * | 2006-04-14 | 2011-08-31 | 株式会社東芝 | 半導体装置 |
KR100843055B1 (ko) * | 2006-08-17 | 2008-07-01 | 주식회사 하이닉스반도체 | 플래쉬 메모리 소자 및 그의 제조방법 |
US7560344B2 (en) * | 2006-11-15 | 2009-07-14 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Semiconductor device having a pair of fins and method of manufacturing the same |
JP4869088B2 (ja) * | 2007-01-22 | 2012-02-01 | 株式会社東芝 | 半導体記憶装置及びその書き込み方法 |
JP5019436B2 (ja) * | 2007-02-22 | 2012-09-05 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | 半導体集積回路 |
US8012814B2 (en) * | 2008-08-08 | 2011-09-06 | International Business Machines Corporation | Method of forming a high performance fet and a high voltage fet on a SOI substrate |
KR101623958B1 (ko) * | 2008-10-01 | 2016-05-25 | 삼성전자주식회사 | 인버터 및 그의 동작방법과 인버터를 포함하는 논리회로 |
KR101522400B1 (ko) * | 2008-11-10 | 2015-05-21 | 삼성전자주식회사 | 인버터 및 그를 포함하는 논리소자 |
-
2008
- 2008-01-10 JP JP2009545600A patent/JP5666134B2/ja active Active
- 2008-01-10 CA CA2675147A patent/CA2675147C/en active Active
- 2008-01-10 EP EP08831890.2A patent/EP2118268B1/en active Active
- 2008-01-10 WO PCT/US2008/000355 patent/WO2009038594A2/en active Application Filing
- 2008-01-10 CN CN200880007760.8A patent/CN101680018B/zh active Active
- 2008-01-10 US US12/007,483 patent/US7811782B2/en active Active
-
2010
- 2010-03-30 HK HK10103272.1A patent/HK1136319A1/xx unknown
- 2010-10-11 US US12/901,944 patent/US8871461B2/en active Active
-
2011
- 2011-11-11 JP JP2011247696A patent/JP2012080888A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000515376A (ja) | 1996-07-19 | 2000-11-21 | ニュー イングランド メディカル センター ホスピタル インク. | 血管保護剤の同定方法 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
JPN6011007066; Endothelium vol. 13, 2006, 171-180 * |
JPN6011007067; Endothelium vol. 11, 2004, 45-57 * |
JPN6011007069; Blood vol. 101, 2003, 2667-2674 * |
JPN6011007070; Circ. Res. vol. 95, 2004, 841-847 * |
JPN6011007072; J. Appl. Physiol. vol. 92, 2002, 957-961 * |
JPN6014017746; Debbie Bronneberg, et al.: MMP-2 and MMP-9 Regulation of a Vascular Coculture System under Shear Stress , 2003, URL:http://www.mate.tue.nl/mate/pdfs/289 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015516154A (ja) * | 2012-04-18 | 2015-06-11 | ヘモシアー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーHemoShear, LLC | 病理学的状態または生理学的状態に対するInvitroモデル |
JP2018183185A (ja) * | 2012-04-18 | 2018-11-22 | ヘモシアー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーHemoShear, LLC | 病理学的状態または生理学的状態に対するIn vitroモデル |
JP2020127412A (ja) * | 2012-04-18 | 2020-08-27 | ヘモシアー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーHemoShear, LLC | 病理学的状態または生理学的状態に対するIn vitroモデル |
JP2016535591A (ja) * | 2013-10-21 | 2016-11-17 | ヘモシアー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーHemoShear, LLC | 腫瘍微細環境のための試験管内モデル |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101680018B (zh) | 2017-03-15 |
US8871461B2 (en) | 2014-10-28 |
JP2012080888A (ja) | 2012-04-26 |
EP2118268A2 (en) | 2009-11-18 |
US7811782B2 (en) | 2010-10-12 |
CA2675147C (en) | 2012-09-11 |
WO2009038594A2 (en) | 2009-03-26 |
CN101680018A (zh) | 2010-03-24 |
EP2118268A4 (en) | 2011-09-21 |
WO2009038594A3 (en) | 2009-12-30 |
US20090053752A1 (en) | 2009-02-26 |
CA2675147A1 (en) | 2009-03-26 |
JP5666134B2 (ja) | 2015-02-12 |
HK1136319A1 (en) | 2010-06-25 |
EP2118268B1 (en) | 2015-07-08 |
US20110059480A1 (en) | 2011-03-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5666134B2 (ja) | 血管疾患の新たな治療標的を同定するためのインビトロの血行力学的内皮/平滑筋細胞共培養モデルの使用 | |
JP2010515458A5 (ja) | ||
Hastings et al. | Atherosclerosis-prone hemodynamics differentially regulates endothelial and smooth muscle cell phenotypes and promotes pro-inflammatory priming | |
Cucullo et al. | A new dynamic in vitro model for the multidimensional study of astrocyte–endothelial cell interactions at the blood–brain barrier | |
Akimoto et al. | Laminar shear stress inhibits vascular endothelial cell proliferation by inducing cyclin-dependent kinase inhibitor p21 Sdi1/Cip1/Waf1 | |
Jones et al. | A neuron-astrocyte co-culture system to investigate astrocyte-secreted factors in mouse neuronal development | |
Ye et al. | The contractile strength of vascular smooth muscle myocytes is shape dependent | |
AU2014279568B2 (en) | Tissue structure and manufacturing method therefor | |
US20200172874A1 (en) | Primary culture method | |
Li et al. | Anisotropic ridge/groove microstructure for regulating morphology and biological function of Schwann cells | |
US20240010960A1 (en) | Formation of arrays of planar intestinal crypts possessing a stem/proliferative cell compartment and differentiated cell zone | |
Jaslove et al. | Transmural pressure signals through retinoic acid to regulate lung branching | |
WO2013012498A1 (en) | Electric cell- substrate impedance sensing (ecis) of biological samples in shear stress flow | |
JP2006314318A (ja) | InVitro腫瘍脈管形成モデル | |
Stevenson et al. | Identification of three regimes of behavior for cell attachment on topographically patterned substrates | |
WO2017200111A1 (ja) | ヒト由来細胞を含むヘテロスフェロイド | |
Peel et al. | Effect of cell–cell interactions on the observable strength of adhesion of sheets of cells | |
JP7011832B2 (ja) | 腎臓様組織の製造方法 | |
Paloschi et al. | Utilization of an Artery‐on‐a‐Chip to Unravel Novel Regulators and Therapeutic Targets in Vascular Diseases | |
Buchanan et al. | Are there roles for heterogeneous ribosomes during sleep in the rodent brain? | |
JP2007053972A (ja) | 高分子膜を用いた重層化細胞培養物の作製方法 | |
Lane et al. | Stress models for the study of intermediate filament function | |
Mack et al. | A high-throughput system to probe and direct biological functions driven by complex hemodynamic environments | |
Goeckel et al. | CXCR3-CXCL11 signaling restricts angiogenesis and promotes pericyte recruitment | |
CA2913559C (en) | Tissue structure and preparation method thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20110107 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110107 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20110107 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20110204 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110215 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20110516 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110712 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111111 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20120123 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20120323 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20140120 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140801 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140806 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140905 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140910 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141006 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20141006 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20141210 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5666134 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |