JP2008530063A

JP2008530063A - 不飽和ジピロメテン−ボロンホウ素炭素

Info

Publication number: JP2008530063A
Application number: JP2007554605A
Authority: JP
Inventors: ユルリッチ，ジル; ジーゼル，レーモン; ゴーゼ，クリスティーヌ
Original assignee: サントルナシオナルドゥラルシェルシェサイアンティフィク（セエヌエールエス）; ユニベルシテルイパストゥールドゥストラスブール
Priority date: 2005-02-15
Filing date: 2006-02-14
Publication date: 2008-08-07
Anticipated expiration: 2026-02-14
Also published as: ES2449072T3; WO2006087459A2; US7897786B2; US20080102534A1; FR2882056B1; FR2882056A1; EP1848725B1; WO2006087459A3; JP5171267B2; EP1848725A2

Abstract

本発明は、式（Ｉ）の不飽和ジピロメテンボロンホウ素炭素及び蛍光又は蛍光若しくはエレクトロルミネセント解析のためのその使用、に関する。蛍光特性は配列−Ｎ−Ｂ−Ｎ−を含んで成る６個の炭素原子の中心にある環によって供され、Ｒ¹〜Ｒ⁷は化合物の特性（蛍光発光波長、蛍光量子収率）の変更を可能にし、置換基Ｓ¹及びＳ²の少なくとも一方は発色団の末端基を有しており、これが、発色置換基Ａと近い波長で分子が励起するのを可能にし、これは、好ましくは、紫外線のものに近い波長を有する発色置換基であって、ストークスシフトを強力に増大させるもの、から選択される。

Description

本発明は、不飽和ジピロメテン−ボロンホウ素炭素、及び蛍光又はエレクトロルミネセント解析のためのその使用、に関する。

蛍光標識は、免疫学、分子生物学、医療診断の分野において定性的又は定量的な測定を行うのに、又はＤＮＡチップに現在しばしば使用されている。

蛍光標識として使用されうる化合物に要求される特性の１つに、化合物の励起と発光の間のエネルギー差であるストークスシフトの増大がある。低ストークスシフトの標識を用いると、残留励起光を排除するための特定のフィルターを使用することが必要となり、これは測定感度を低下させる。

蛍光標識として使用することができる、従来技術における多数の化合物の例として、特に、二フッ化ジピロメテンボロン（以後、ＢＯＤＩＰＹと称する）があり、ＵＳ４，７７４，３３９は、色素特性を有し、且つ自身の吸収及び蛍光特性によって検出され得る生体分子又はポリマーの官能基と安定な蛍光生成物を形成することができる官能基を含むＢＯＤＩＰＹ化合物を説明している。ＵＳ５，１８７，２８８は、約５２５ｎｍ超の波長にて最大の吸収ピークを有し、電気的に中性で、光安定性があり、そして多くの場合、高度に蛍光性があるＢＯＤＩＰＹ化合物を説明している。ＵＳ５，２４８，７８２は、色素特性を有し、且つヘテロアリール置換基を有するＢＯＤＩＰＹ化合物を説明している。ＵＳ５，２７４，１１３は、約５２５ｎｍ超の波長にて最大の吸収ピークを有し、且つ核酸、タンパク質、炭水化物、及び他の生体化合物に対し化学的に反応性があるＢＯＤＩＰＹ化合物を説明している。ＵＳ５，３３８，８５４は、二フッ化ジピロメテンボロン由来の蛍光性脂肪酸類似体であり、且つ約４８０ｎｍ超の波長にて最大の吸収ピークを有する化合物を記載している。ＵＳ５，４５１，６６３は、約５２５ｎｍ超の波長にて最大の吸収ピークを有し、且つ核酸、タンパク質、炭水化物、及び他の生体化合物に対し化学的に反応性がある蛍光色素化合物を記載している。ＵＳ４，９１６，７１１は、ＢＯＤＩＰＹ化合物を用いてレーザー光を作り出すための方法を記載している。ＵＳ５，１８９，０２９は、３つの特定のＢＯＤＩＰＹ化合物を用いて癌を処置する方法を記載している。ＵＳ５，４４６，１５７は、ＢＯＤＩＰＹ化合物ファミリーについて言及している。ＵＳ５，８５２，１９１は、高い蛍光性があり、そして光吸収性の青色の蛍光色素であり、且つ種々の生物学的利用及び非生物学的利用において使用されうる二ハロゲン化ジピロメテンボロンを記載している。ＵＳ５，４４６，１５７は、別のＢＯＤＩＰＹ化合物ファミリーについて言及している。

前文で言及した化合物の多くは、蛍光特性を有している。しかしながら、それらは全て比較的低いストークスシフト（Δｖ≒５００〜６００ｃｍ^-1）を有しており、これは、それらを標識として使用すると、それらの感度は使用するフィルターによっては最適でないことを意味している。

本発明者は、ジピロメテンボロンの二フッ化型化合物のボロン上のフッ素原子の少なくとも１つを適当な置換基で置換することで、同等の重フッ化化合物と比較して実質的により高いストークスシフトを有する化合物であって、蛍光又はエレクトロルミネセント解析のための標識として使用する場合に顕著に向上した感度をその結果有する化合物が得られることを見出した。

本発明の目的は、高ストークスシフト、高蛍光量子収率、及び高モル吸光係数の化合物であって、励起波長及び発光波長をモニタリングすることができる化合物、を提供することである。前記化合物は、蛍光標識又はエレクトロルミネセンスとして使用するのに特に適している。

本発明の化合物は、一般式（Ｉ）

（・置換基Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ⁷それぞれが、その他の置換基から独立して、Ｈ、−Ｌ−Ｈ遊離基、−Ｇ遊離基及び−Ｌ−Ｇ遊離基から成る群から選択され、
又は２つの置換基Ｒ³及びＲ⁴が一緒に二価の遊離基Ｚ³⁴を形成し、そして／あるいは２つの置換基Ｒ⁶及びＲ⁷が一緒に二価の遊離基Ｚ⁶⁷を形成し、前記二価の遊離基が、それらが結合する炭素原子と一緒に、単環又は二環式の縮合環から成る群から選択される構造であって、各環が５又は６個の原子を有し、且つ炭素原子と、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される多くとも２つのヘテロ原子とを含んで成る、構造を形成するようなものであり；
・Ｌが、単結合から成るか、あるいはアルキレン基及び直鎖又は分枝鎖アルケニレン基であって、任意にそれらの鎖に１又は複数の酸素原子を含んで成り、エーテル遊離基を形成するもの、単環又は多数の縮合若しくは非縮合環を含んで成るアルキニレン及びアリーレンから選択される１又は複数のセグメントから成る結合基、であり；
・Ｇが官能基であり；
・置換基Ｓ¹及びＳ²がそれぞれ独立してＦ；置換基Ｒ¹〜Ｒ⁷について定義された群から選択される遊離基；あるいは式−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ、を表し、ここで、Ｌ’は単結合又はＬについて定義した群から選択される遊離基であり、そしてＡは発色団あるいは、生体分子、無機化合物、高分子有機化合物又は非高分子有機化合物、と結合することができる官能基、であり；Ｓ¹及びＳ²のうちの少なくとも一方が−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ遊離基である）
に相当する。

蛍光特性は、基本的に、配列−Ｎ−Ｂ−Ｎ−を含んで成る６個の炭素原子の中心にある環によって、本発明の分子に対し与えられる。

置換基Ｒ¹〜Ｒ⁷（必要に応じ、以後Ｒⁱと集合的に称される）を選択することで、化合物の特性、例えば蛍光発光波長、蛍光量子収率、可溶性及び双極子モーメントを、結合基Ｌ又は末端基Ｈ若しくはＧの選択により変更することが可能となる。

結合基Ｌは、好ましくは、単結合、１〜１０個の炭素原子、特に１〜６個の炭素原子を有するアルキレンセグメント、及び／又はフェニレンセグメント、及び／又は２〜４個の炭素原子を有するアルキニレンセグメント、及び／又は２〜４個の炭素原子を有するアルケニレンセグメント、及び／又は１〜１２個の酸素原子を有するポリエーテルセグメント［例えば、ポリ（エチレンオキシド）セグメント］、から成る。

末端の官能基Ｇは、前記化合物に対し、必要な特性を賦与することが意図されている。これは：
・化合物の水溶性を増大させる極性基（例えば、アミド、スルホン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、第四級アンモニウム、ヒドロキシル、ホスホン酸塩、ポリオキシエチレン基）；
・蛍光分子の吸収波長及び発光波長をシフトさせる電子供与基及び電子吸引基（例えば、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、ペルフルオロアルキル、アミド、ニトロフェニル、置換トリアジノ、スルホンアミド、アルケニル及びアルキニル基）。この場合、結合基Ｌは、２〜４個の炭素原子を有するアルケニレン又はアルキニレンセグメントから選択されると解される；
・本発明の化合物が生体分子にグラフトするのを可能にして、媒体中に存在する化合物が検出されて定量されるのを可能にする標識化合物を形成させる、反応性官能基（例えば、本発明の化合物を抗体にグラフトすることで得られる化合物は、相当の抗原が検出されるのを可能にする）；
・媒体中で検出されるべき有機又は無機化合物と反応することができ、検出されるべき前記化合物と強い結合（共有結合又はイオン結合）又は弱い結合（水素結合）を形成する官能基、
から選択されうる。

置換基Ｓ¹及びＳ²は、必要に応じて、以後集合的にＳⁱと称される。

末端基Ａが発色団である置換基Ｓⁱは、分子が、発色置換基Ａと近い波長で励起するのを可能にし、これは、好ましくは、紫外線のものに近い波長を有する発色置換基であって、ストークスシフトを強力に増大させるもの、から選択される。この効果は、２つの置換基Ｓⁱが発色性の末端基を有する場合に強調される。

１つの態様において、置換基Ｓⁱのうち少なくとも１つは−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ基であり、ここで、Ｌ’は単結合又は１〜１０個の炭素原子を有するアルキレンセグメント又は１〜１２個の炭素原子を有するポリエーテルセグメントであり、そしてＡは：
・任意に置換基を持つ芳香環を有するアリール遊離基（例えば、ｐ−トルイル、スチレニル、ピリジニル、オリゴピリジニル（特に、ビピリジニル及びテルピリジニル）、チエニル、又はピロリル）、
・少なくとも２つの縮合環を有するアリール遊離基（例えば、ナフチル、ピレニル、アントラセニル、フェナントレニル、キノリル、フェナントロニル、ペリレニル、フルオレニル、カルバゾリル及びアクリジニル）であって、（例えば、スルホナート(sulphonato)、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、エーテル及びハロゲン遊離基から選択される）少なくとも１つの置換基を任意に持つ遊離基；
・色素特性を有する遊離基、例えばクマリニル、ヒドロキシクマリニル、アルコキシクマリニル、トリスルホナートピレニル、シアニン、スチリルピリジニウム、ナフタルイミジニル又はフェニルフェンアントリジウム(phenylphenanthridium)遊離基、
から選択される。

本発明の化合物が、別の化合物と結合することが意図される場合、置換基Ｓⁱのうち少なくとも１つは−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ基であり、あるいは置換基Ｒⁱの少なくとも１つは−Ｌ−Ｇ基であり、Ａ又はＧは、本発明の化合物が前記の他の化合物と結合するのを可能にする遊離基である。好ましい態様において、Ｌ’又はＬは単結合又は１〜１０個の炭素原子を有するアルキレン又は１〜１２個の炭素原子を有するポリエーテルセグメントである。

１つのＳⁱ遊離基だけが−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ型のものである場合、第二の遊離基Ｓⁱは有利にはＦ、任意に置換基を持つ単環のアリール遊離基及び少なくとも二環式の縮合環を含んで成るアリール遊離基、から選択される。

本発明の化合物が、高分子化合物と結合することが意図されている場合、遊離基Ａ又は遊離基Ｇは、好ましくはＨ、トリアルキルシリル、又は架橋基、例えばメタクリラート、ビニル、スチリル、アニリノ、ピロリル、チオフェニル、フリル、イソシアネート又はエポキシド基から選択される。高分子は、例えばポリスチレン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエポキシド、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルクロリド）、又は天然の高分子、例えばセルロース、ラテックス又は天然の織物繊維であってもよい。

本発明の化合物が生体分子と結合することが意図されている場合、遊離基Ａ又は遊離基Ｇは、好ましくは、スクシニミジルエステル、スルホスクシニミジルエステル、イソチオシアネート、イソシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、ハロスルホニル、ホスホラミダイト、アルキルイミダート、アリールイミダート、ハロゲン酸(halogenoacid)、置換ヒドラジン、置換ヒドロキシルアミン及びカルボジイミド、から成る群から選択される。生体分子は、例えばタンパク質、ヌクレオチド又は抗体であってもよい。

媒体中の存在及び量が検出され、そして決定されるべきである有機化合物又は金属塩と相互作用することができる官能基Ａ又はＧは、検出されるべき当該化合物と強い結合（共有結合又はイオン結合）又は弱い結合（水素結合）を形成することができる官能基である。この型の遊離基の例には、アミノ、ウレイド、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、カルボニル又はクラウンエーテル基がある。特に、クラウンエーテル遊離基は、アルカリイオンの検出を可能にする。

本発明の化合物は無機化合物と結合することができ、これは、具体的には光学又は光電子デバイス（例えば、発光ダイオード又は光起電デバイス）の製造のためである。無機化合物は、例えば、シリカ、アルミナ、ゼオライト、金属、シリコン又は酸化チタン、であってもよい。この場合、遊離基Ａ又は基Ｇは、無機材料と強力な結合を形成することができる官能基から選択される。例えば、カルボキシラート基は、前記化合物が、酸化チタン、ゼオライト又はアルミナ上にグラフトすることを可能にし；チオール又はチオエーテル基は前記化合物が金属（例えばＡｕ又はＡｇ）に結合するのを可能にし；シロキサン基は前記化合物がシリカ及びシリコンの酸化表面と結合するのを可能にする。

本発明の化合物がその蛍光又はルミネセンス特性を理由に使用されることが意図される場合、発色性末端基Ａを持つ少なくとも１つの置換基Ｓⁱ及びグラフト基を持つ少なくとも１つの置換基Ｓⁱ又はグラフト基を持つ少なくとも１つの置換基Ｒⁱを含んで成る化合物が最も好ましくは使用される。

本発明の化合物の特定のファミリーは、対称化合物、すなわち、Ｒ²とＲ⁵が同一で、Ｒ³とＲ⁶が同一で、Ｒ⁴とＲ⁷が同一でＳ¹とＳ²が同一な、式（Ｉ）に相当する化合物を含んで成る。それらは以下の式（ＩＩ）で表すことができる：

別の特定の化合物ファミリーは、各五環の２つの置換が一緒にビラジカルを形成している一般式（Ｉ）に相当する。これらの化合物は、以下の式（ＩＩＩ）で表すことができる：

（ここで、置換基Ｒ⁸ⁱ及びＲ^9jは、置換基Ｒ¹〜Ｒ⁷について定義された群から互いに独立して選択される）。

このタイプの化合物は、多数のインドール基から得ることができ、これらは当業者に知られており、市販されている。

本発明の化合物（Ｉ）は、通常、相当の二フッ化ジピロメテンボロンから得られ、これは、Ｓ¹とＳ²がそれぞれＦを表す、式（Ｉ）と同一の式（Ｉ’）に相当する。所望の置換基Ｒ¹〜Ｒ⁸がジピロメテンボロン（Ｉ’）から直接得ることができない場合、化合物（Ｉ）は、当業者に知られている適当な反応で修飾される。

不斉化合物（Ｉ）は、相当の二フッ化ジピロメテンボロン（Ｉ’）から得られる。この場合、（Ｉ’）は、ケトピロールとピロールとを、酸（例えば、ＨＢｒ又はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））の存在下で、以下の反応パターンに従い反応させることで得ることができ、この詳細なオペレーションモードについては、前述したＵＳ４，７７４，３３９に具体的に記載されている。

（Ｉ’）は、続いて、原子Ｆを所望の置換基で置換する適当な試薬の作用にかけられる。当該試薬は、−２０℃〜４０℃の間の適温にある、有機金属化合物（例えば、有機マグネシウム又は有機リチウム化合物）／無水溶媒（ＴＨＦ等）から選択されうる。Ｘはハロゲン原子である。２つの同一のＳⁱを有する化合物（Ｉ）を調製するために、２当量のＳの有機金属化合物、Ｓⁱ−ＭＸが使用される。２つの異なるＳⁱを有する化合物（Ｉ）を調製するために、２つの有機金属化合物Ｓ¹−ＭＸ及びＳ²−ＭＸの１／１混合物が使用され、そして所望の生成物がクロマトグラフィーで分離される。

対称化合物（ＩＩ）は、相当の二フッ化ジピロメテンボロン（ＩＩ’）から得ることができ、これ自体は、以下の反応パターンに従い、適切なピロールから得られる：

同様の方法がＵＳ５，１８９，０２９及びＵＳ５，４４６，１５７に記載されている。当該方法は、ピロールとＲ¹ＣＯＣｌとを適当な溶媒（例えば、ジクロロエタン又はトルエン）中で反応させ、続いて、得られた塩酸ピロロメテンを、同一の溶媒中で三フッ化ホウ素エーテル(trifluoroboron etherate)と塩基の存在下反応させて二フッ化ジピロロメテンボロン（ＩＩ’）を得ることに存する。（ＩＩ’）は、続いて、適当な試薬の作用にかけられて、Ｆ原子が所望の置換基で置換される。当該試薬は、対称化合物（Ｉ）を調製する方法の相当の段階で使用するものと同一のタイプのものであり、そして反応条件は同様のものである。

対称であるか不斉のものであるかによって、化合物（ＩＩＩ）は、ピロール又は２つの適切なピロールから得られ、ここで、一方のものの上にある置換基Ｒ³及びＲ⁴、そして他方のものの上にあるＲ⁶及びＲ⁷は、一緒に、適切なビラジカルＺ³⁴、そしてＺ⁶⁷をそれぞれ形成する。原子Ｆは、続いて、（ＩＩ）型化合物を生成するものと類似の方法で置換される。

市販されており、そして出発生成物として使用されうるピロール上の置換基Ｒⁱは、非常に変化に富む。置換基の型の例には、アルキル、フェニル又はエステルが含まれる。それらを修飾することで、所望の置換基Ｒⁱを得ることができる。例えば：
−エステル末端基は、加水分解することで、相当の酸を生成することができ、これは続いて、スクシンイミドの形態で、例えば、タンパク質上にグラフトするための調製において活性化してもよく；
−ニトロフェニル基を還元することで（例えば、適当な触媒の存在下水素による）、相当の芳香族アミンを生成することができ、これは、続いて、チオホスゲンで活性化することでイソチオシアネートが得られ、このタイプの遊離基は、ＯＨ基を持つ化合物をグラフト化させる；
−既知の方法によって予め保護されている活性末端基は、保護されなくてもよい。例えば、ピロール上のＢｏｃで保護されたアミンは、所望の化合物（Ｉ）上で保護されない。

本発明を以下の実施例で説明するが、それらに限定されない。

実施例１〜２０において調製される化合物は、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＲ⁷がそれぞれメチルを表し、Ｒ³とＲ⁶がそれぞれエチル（実施例１〜１７及び２０）又は水素（実施例１８及び１９）を表す一般式（Ｉ）に相当する。使用する二フッ化化合物、式Ｉ’又はＩＩ’の一方に相当し、そして文献に記載されている化合物である。調製した１９個の化合物の置換基Ｓ¹、Ｓ²及びＲ¹の具体的な選択については以下の表１に列記する。前記化合物は、それぞれ蛍光発光波長、ローダミン６Ｇ（実施例１〜１７及び２０の化合物）及びフルオレセイン（実施例１８及び１９の化合物）の点で類似体である。

実施例１
化合物１の調製
化合物１は、以下の反応パターンに従い調製される：

ジフルオロボラジピロメテンとして使用する出発材料４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンを、以下のオペレーションモードに従い調製した。１ｇ（１２．７ミリモル）の塩化アセチル及び０．６７ｇの３−エチル−２，４−ジメチルピロールを無水ジクロロメタン中に導入し、そして周囲温度で１日攪拌した。続いて、無水石油エーテルを添加し、そして一晩攪拌した後に得られた沈殿を濾過し、続いてこれをトルエンに溶解させた。１．６ｍｌのトリエチルアミン（１．６ｍｌ）をその後添加し、続いて２ｍｌのＢＦ₃Ｅｔ₂Ｏ（２ｍｌ）を更に添加し、そして溶液を８０℃に１５分間加熱した。有機相を洗浄し（３×２０ｍｌの水）、そしてこれをシリカゲル上でのクロマトグラフィーにかけた後（ヘキサン／ジクロロメタン、６：４）、０．５ｇの化合物１’が得られた。

ｎ−ブチルリチウム（１．５５Ｍ／ヘキサン。０．４４ｍｌ）をアルゴン下でｐ−エチニルトルエン（８０μＬ、０．６３ミリモル）の無水ＴＨＦ液に−７８℃で添加した。混合物を１時間−７８℃で攪拌し、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。このようにして得られた浅黄色の溶液をカニューレでジフルオロボラジピロメテン１’（１００ｍｇ、０．３１ミリモル）の無水ＴＨＦ溶液内に移した。当該溶液を周囲温度で５分間攪拌し、続いて水を添加した。この溶液をジクロロメタンで抽出した。エバポレーション跡、有機性の残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーによって精製し（CH₂Cl₂／シクロヘキサン、２０：８０）、そして化合物１が橙色粉末の形態で得られた（１１０ｍｇ、６９％）。

化合物１のキャラクタリゼーション

C₃₆H₃₉BN₂について算出した元素分析: C, 84.70 ; H, 7.70 ; N, 5.49. 実測値: C, 84.64 ; H, 7.62 ; N, 5.32

図１は、単結晶Ｘ線回折で得られた化合物１の構造を示す。

図２は、ＵＳ５，４４６，１５７に記載の、出発化合物である４，４−ジフルオロ１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンの、吸収スペクトル（実線で示したもの。Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１５ｎｍ）を示す。

実施例２
化合物２の調製
化合物２は、以下の反応パターンに従い調製される：

出発材料として使用するジフルオロボラジピロメテン１’は、実施例１のものと同一である。

ｎ−ブチルリチウム（ｎ−ヘキサン中１．４Ｍ、０．９４ｍｌ）をアルゴン下トリメチルシリルアセチレン（０．１７４ｍｌ、１．２６ミリモル）／無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）に−７８℃で添加した。混合物を続いて−７８℃で１時間攪拌し、次に、周囲温度で３０分間攪拌した。浅黄色の溶液をカニューレでジフルオロボラジピロメテン（０．２ｇ、０．３３ミリモル）の無水ＴＨＦ（４０ｍｌ）溶液に移した。当該溶液をその後出発材料が完全に消失するまで（ＴＬＣでモニタリング）周囲温度で１５分間攪拌した。水を添加し（１０ｍｌ）、そして溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。エバポレーション後、有機性の残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）、そしてその後ＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中で再結晶化して純粋な化合物３が得られた（０．２１ｇ、７０％）。

化合物２のキャラクタリゼーション

実施例３
化合物３の調製
化合物３は、以下の反応パターン３に従い調製した。

水酸化ナトリウム溶液（３４５ｍｇ、５ｍｌのエタノール中２０当量）を化合物２（２１０ｍｇ、０．４３ミリモル）の５ｍｌＣＨ₂Ｃｌ₂溶液に添加した。個の混合物を２日間周囲温度で攪拌して出発材料を完全に消失させた。水（１０ｍｌ）を続いて添加し、そして溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した（５０ｍｌ）。エバポレーション後、有機性の材料をシリカカラム上でのクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、３０：７０）、そして次にＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中で再結晶化した。純粋な化合物４が橙色の結晶形態で得られた（９２ｍｇ、６０％）；

図３は、単結晶Ｘ線回折により得られた、化合物４の構造を示す。

実施例４
化合物４の調製
化合物４は、以下の反応パターンに従い調製する。

ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．５５Ｍ、０．４４ｍｌ）を１−エチニルピレン（１４２ｍｇ、０．６３ミリモル）の無水ＴＨＦ液に対しアルゴン下７８℃で添加した。混合物を１時間−７８℃で攪拌し、続いて３０分間周囲温度で攪拌した。このようにして得られた溶液をカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン（１００ｍｇ、０．３１ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。当該溶液を３０分間周囲温度で攪拌して、出発材料が消失した後（ＴＬＣでモニタリング）、水を添加した。前記の溶液をジクロロメタンで抽出した。エバポレーション後、有機性残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーによって精製し（CH₂Cl₂／シクロヘキサン、２０：８０）、そして化合物５が橙色粉末の形態で得られた（７６ｇ、３０％）。

化合物４のキャラクタリゼーション

C₅₄H₄₃BN₂について算出した元素分析：C, 88.76, H, 5.93, N, 3.83. 実測値：C, 88.57,; H, 5.77,; N, 3.65.

図４は、単結晶Ｘ線回折により得られた、化合物４の構造を示す。

図５は、化合物４の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１５ｎｍ）を示す。

図６は、３７０ｎｍにλ_excを、そして９４％の量子収率を有する化合物の発光スペクトルを示す。

実施例５
化合物５の調製

４，４−ジフルオロ−８−（（１−ピレニルエチニル）−４−フェニル）−１，３，５，７−テトラメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンは、１−エチニル−ピレンと４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（ｐ−ヨードフェニル）−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン２’との間での園頭カップリングにより、以下のオペレーションモードに従い調製した。２ｇ（７．５ミリモル）のｐ−ヨード−ベンゾイルクロリド及び２．２４ｍｌ（１６．５ミリモル）の３−エチル−２，４−ジメチル−ピロールを４０℃で１日攪拌した。続いて、６．９ｍｌのトリエチルアミン及び７．６ｍｌのＢＦ₃Ｅｔ₂Ｏを添加した。混合物を一晩攪拌し。そして有機相を続いて水で洗浄した。１．２ｇの化合物２’がアルミナ上でのクロマトグラフィー（ヘキサン／ジクロロメタン、７：３）及びヘキサン／ジクロロメタン混合物中での再結晶により得られた。

ｎ−ブチルリチウム（ｎ−ヘキサン中で１．５５Ｍ、０．１１ｍｌ）を、１−エチニルピレン（３７ｍｇ、０．１７ミリモル）の無水ＴＨＦ溶液（１０ｍｌ）に対し、アルゴン下７８℃で添加した。混合物を−７８℃で１時間、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。暗緑色の溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−８−（（１−ピレニルエチニル）−４−フェニル）−１，３，５，７−テトラメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン（５０ｍｇ、０．０８５ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。当該溶液を３０分間周囲温度で攪拌して、出発材料が完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水（５ｍｌ）を添加し、そして当該溶液をCH₂Cl₂で抽出した。エバポレーション後、有機性残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーによって精製し（CH₂Cl₂／シクロヘキサン、３０：７０）、そして次にCH₂Cl₂／ヘキサン中で再結晶化することで化合物５が得られた（４３ｍｇ、２０％）。

化合物５のキャラクタリゼーション

C₇₇H₅₃BN₂について算出した元素分析：C, 90.9; H, 5.2; N, 2.75. 実測値：C, 90.6; H, 4.9; N, 2.48.

実施例６
化合物６の調製
化合物６は以下の反応パターンに従い調製される。

４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（ｐ−ヨードフェニル）−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン２’は、以下のオペレーションモードに従い調製した。

ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．５５Ｍ、０．２６ｍｌ）を、１−エチニルピレン（８９ｍｇ、０．３９ミリモルの無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に対し、アルゴン下７８℃で添加した。この混合物を１時間−７８℃で攪拌し、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。
このようにして得られた暗緑色の溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（ｐ−ヨードフェニル）−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン２’（１００ｍｇ、０．１９ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。当該溶液を１５分間周囲温度で攪拌して、出発材料が完全に消失させた後（ＴＬＣでモニタリング）、水（１０ｍｌ）を添加した。前記溶液をジクロロメタン（２０ｍｌ）で抽出した。エバポレーション跡、有機性の残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーによって精製し（CH₂Cl₂／シクロヘキサン、９０：１０〜７０：３０のグラジエントを用いる）、そしてCH₂Cl₂／ヘキサン混合物中で再結晶化することで、化合物６が橙色の結晶形態で得られた（１３２ｍｇ、７６％）。

化合物６のキャラクタリゼーション

C₅₉H₄₄BIN₂について算出した元素分析：C, 77.13; H, 4.83; M, 3.05. 実測値：C, 76.81; H, 4.51; N, 2.75.

実施例８
化合物７の調製
化合物７は、以下の反応パターンに従い調製した：

化合物６（０．１ｇ、０．１１０ミリモル）及びヘプチン酸エステル（０．０２５ｇ、０．１６５ミリモル）の溶液を３０分間ＴＨＦ／ｉＰｒ₂ＮＨ（１０／１．５ｍｌ）混合物中で脱気した。Ｐｄ（ＩＩ）Ｃｌ₂（ＰＰｈ₃）₂（４ｍｇ、６モル％）及びＣｕＩ（２ｍｇ、１０モル％）をその後添加し、そして混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。反応が完了した後、５０ｍｌの水を添加し、そして有機相をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）で抽出し、そしてＭｇＳＯ₄で脱水した。エステルは、アルミナカラム上でのクロマトグラフィーでの精製（溶出剤：シクロヘキサン／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ８０：３０）、続くＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中での再結晶化後に得られた（得られた量：０．０９ｇ、９１％）。当該エステルは、続いてＥｔＯＨ／ＴＨＦ溶液（１０／１０ｍｌ）中６０℃で１２時間過剰量の１ＭＮａＯＨ溶液（９．７ｍｌ、１ミリモル）の存在下で加熱した。希塩酸溶液を添加してｐＨを４に低下させ、これにより所望の酸の沈殿がもたらされた。続いて生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍｌ）で抽出し、そして２回水（５０ｍｌ）で洗浄し、続いてＭｇＳＯ₄で脱水した。純粋な酸がＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中での生成物の再結晶化後に得られた（７９ｍｇ、８７％の収率）。

化合物７のキャラクタリゼーション

C₆₇Ha₇BN₂O₂について算出した元素分析：HCl: C, 83.01; H, 6.03; N, 2.89. 実測値: C, 83.08; H, 5.95; N, 2.88

実施例８
化合物９は、活性化した酸性基を有しており、これにより、化合物はタンパク質又はアミノ残基を含む別の生体分子上にグラフトされるようになる。

化合物８の調製
化合物８は、以下の反応パターンに従い調製した：

酸７（３０ｍｇ、０．０３３ミリモル）／１０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂をジメチルアミノピリジンをジメチルアミノピリジン（８．４ｍｇ、０．０６６ミリモル）、ＥＤＣＩ（１２ｍｇ、０．０６６ミリモル）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（７．２ｍｇ、０．０６６ミリモル）の存在下添加した。この混合物を周囲温度で攪拌し、そして反応をＴＬＣプレートでモニタリングした。化合物８が完全に消失した後（１時間）、混合物を水（１０ｍｌ）で洗浄し、そして次にＭｇＳＯ₄上で脱水した。純粋な生成物は、シリカカラム上でのクロマトグラフィーによる精製（溶出液：ＣＨ₂Ｃｌ₂）、続くＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中での再結晶化の後に得られた（得られた量：０．０１８ｇ、５４％）。

化合物８のキャラクタリゼーション

C₇₀H₅₆BN₃O₄.CH₂Cl₂について算出した元素分析：C, 77.60; H, 5.32; N, 3.82. 実測値：C 77.54; H, 5.28; N, 3.72.

図７は、化合物９の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１５ｎｍ）を示す。

図８は、３７２ｎｍにλ_excを、そして９８％の量子収率を有する化合物８の発光スペクトルを示す。

実施例９
化合物９の調製
化合物９の調製方法は、本発明の化合物にとって特定の官能基Gと、タンパク質のもの（リジン等）か、又は本発明の化合物を用いて標識されうる修飾オリゴヌクレオチドのものでありうるアミノ基との反応を示す。例えば、本発明の化合物に対する特定のタンパク質の結合は、当該タンパク質に特異的な生体の受容体が検出されるのを可能にする。

化合物９は、以下の反応パターンに従い調製した：

化合物８（１０ｍｇ、０．００９９ミリモル）を１時間１０ｍｌのｎ−プロピルアミン中で攪拌した；溶媒を続いて蒸発させ、そして生じた固体をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）で抽出し、続いて、水（２０ｍｌ）で２回洗浄した。純粋な生成物が、シリカカラム上でのクロマトグラフィー（溶出液のグラジエント：ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨを１００／０〜９５／５）による精製後に得られた（７ｍｇ、７４％）。

化合物９のキャラクタリゼーション

FAB⁺ （ピークの性質、相対強度）：958.2 ([M]⁺, 100) ;

C₆₉H₆₀BN₃O.CH₂Cl₂について算出した元素分析: C, 80.61 ; H, 5.99 ; N, 4.03. 実測値: C, 80,44 ; H, 5,87 ; N, 3,85.

実施例１０
化合物１０の調製
化合物１０は、以下の反応に従い調製した。

１−エチニルピレン（７１ｍｇ、０．３１ミリモル、１当量）及びトリメチルシリルアセチレン（８７μＬ、０．３２ミリモル、１当量）を、それぞれ５ｍｌの無水ＴＨＦを含む２つの異なるシュレンク管内に据え、そして次にｎ−ブチルリチウム（１．３４Ｍ、０．２３ｍｌ）を各管に−７８℃で添加した。２つの溶液を続いて−７８℃で１時間、そして周囲温度で３０分間維持した。２つの溶液を同時に、カニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン１’（１００ｍｇ、０．３１ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を続いて周囲温度で１０分間攪拌して出発材料を完全に消失させた。水を続いて添加し（５ｍｌ）、そして溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）を用いて抽出した。溶媒のエバポレーション後、有機性残渣をシリカカラム上でのクロマトグラフィーで精製した（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）。ＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中での再結晶化後、化合物１０（４７ｍｇ、２５％）が得られた。

化合物１０のキャラクタリゼーション

実施例１１
化合物１１は、パラジウムとの園頭カップリングにより芳香族ハロゲン化物とカップリングすることができる真のアセチレン基Ｓｉを有する化合物である。

化合物１１の調製
化合物１１は、以下の反応パターンに従い調製した。

５ｍｌのＭｅＯＨ中のＮａＯＨ（２８ｍｇ、５当量）を１０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中の化合物１０（８５ｍｇ、０．１４ミリモル）の溶液に添加した。当該溶液を周囲温度で４日間攪拌して出発材料を完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水を添加し（１０ｍｌ）、そしてこの溶液をジクロロメタン（５０ｍｌ）で抽出した。エバポレーション後、有機性残渣をシリカカラム上でのクロマトグラフィー（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、３０：７０）で精製し、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中での再結晶化することで化合物１１（４９ｍｇ、６７％）が得られた。

化合物１１のキャラクタリゼーション

実施例１２
化合物１２の調製
化合物１２は、以下の反応パターンに従い調製した。

ｎ−ブチルリチウム（１．７４Ｍ、０．１８ｍｌ）を２−エチニルフルオレン（９５ｍｇ、０．３１ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に対し、アルゴン下７８℃で添加した。この混合物を−７８℃で１時間、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。この溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン１’（５０ｍｇ、０．１６ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を続いて周囲温度で３０分間攪拌して出発材料を完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水を続いて添加し（５ｍｌ）、そしてこの混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）を用いて抽出した。エバポレーション後、有機性材料をシリカカラム上でのクロマトグラフィーで精製した（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）。ＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中での再結晶化後、化合物１２（５０ｍｇ、３８％）が得られた。

化合物１２のキャラクタリゼーション

実施例１３
化合物１３の調製
化合物１３は、以下の反応パターンに従い調製した。

ｎ−ブチルリチウム（１．７４Ｍ、９３μＬ）を、１−エチニルペリレン（４５ｍｇ、０．１６ミリモル）の無水ＴＨＦ（５ｍｌ）溶液に対し、アルゴン下７８℃で添加した。この混合物を−７８℃で１時間、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。この溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン（１００ｍｇ、０．０８２ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を続いて周囲温度で３０分間攪拌して出発材料を完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水を続いて添加し（５ｍｌ）、そしてこの混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）を用いて抽出した。エバポレーション後、有機性材料をシリカカラム上でのクロマトグラフィーで精製した（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）。ＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中での再結晶化後、所望の生成物が得られた（２０ｍｇ、１５％）。

化合物１３のキャラクタリゼーション

図９は、化合物１３の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５２６ｎｍ）を示す。

図１０は、４６２ｎｍにλ_excを、そして９４％の量子収率を有する化合物１３の発光スペクトルを示す。

実施例１４
化合物１４の調製
化合物１４は、以下の反応パターンに従い調製した。

ｎ−ブチルリチウム（１．５５Ｍ、０．４４ｍｌ）を２−エチニルナフタレン（９６ｍｇ、０．６２ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に対し、アルゴン下７８℃で添加した。この混合物を−７８℃で１時間、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。この溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン１’（１００ｍｇ、０．３１ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を続いて２０℃で５分間攪拌した。水を添加し（５ｍｌ）、そしてこの混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍｌ）を用いて抽出した。エバポレーション後、有機性残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーで精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、１０：９０）、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中で再結晶することで純粋な化合物１５（１３０ｍｇ、７２％）が生成した。

化合物１４のキャラクタリゼーション

FAB⁺ m/z （ピークの性質、相対強度）： 583,1 ([M+H]⁺, 100), 431.2 ( [M-naphta-≡-]⁺, 15) ;

C₄₂H₃₉BN₂について算出した元素分析： C, 86.59 ; H, 6.75 ; N, 4,81. 実測値: C, 86.32 ; H, 6.52 ; N, 4.62.

実施例１５
化合物１５の調製
化合物１５は、以下の反応パターンに従い調製した。

４，４−ジフルオロ−８−（２，２’：６’，２”−テルピリジン−４’−イル）−１，３，５，７−テトラメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンは、以下のオペレーションモードに従い調製した。０．５ｇ（１．９１ミリモル）の４’−（ホルミル−２，２’：６’，２”−テルピリジン）及び０．５７ｍｌ（４．２ミリモル）の３−エチル−２，４−ジメチル−ピロールをトリフルオロ酢酸中１週間周囲温度で攪拌し、続いて０．４２ｇ（１．９ミリモル）のジシアノジクロロキノンを添加し、そして混合物を更に４時間攪拌した。０．５ｍｌのトリエチルアミン及び０．３５ｍｌのＢＦ₃．Ｅｔ₂Ｏを続いて添加し、そしてこの溶液を更に１日攪拌した。最後に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ₃溶液で洗浄し、有機相を乾燥させ、続いてアルミナ上でのクロマトグラフィーにかけることで（ヘキサン／ジクロロメタン、７：３）、０．７３ｇの化合物３’が生成した。

ｎ−ブチルリチウム（１．５５Ｍ、０．１５ｍｌ）を無水ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１−エチニルピレン（４１ｍｇ、０．１７９ミリモル）に対し、アルゴン下７８℃で添加した。この混合物を１時間−７８℃で攪拌し、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。暗緑色の溶液を、カニューレで４，４−ジフルオロ−８−（２，２’：６’，２”−テルピリジン−４’−イル）−１，３，５，７−テトラメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン３’（４８ｍｇ、０．０８９ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に移した。当該溶液を周囲温度で１０分間攪拌して、出発材料を完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水を続いて添加し（５ｍｌ）、そしてこの混合物をジクロロメタンＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）を用いて抽出した。エバポレーション後、有機性画分をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーで精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中で再結晶化することで、所望の生成物１５が生成した（２５ｍｇ、３０％）。

化合物１５のキャラクタリゼーション

FAB⁺ m/z （ピークの性質、相対強度）: 948,2 ( [M+H]⁺, 100) , 722,2 ( [M-pyr-≡-]⁺, 20) ;

C₆₈H₅₀BN₅について算出した元素分析: C, 86.16 ; H, 5.32 ; N, 7.39, 実測値: C, 85.95 ; H, 5.12 ; N, 7.27.

実施例１６
この化合物は、オキサゾリンの形態で保護されており、且つ、当業者に知られている方法で保護され得ない酸性基を有する。

化合物１６の調製
化合物１６は、以下の反応パターンに従い調製した。

６−オキサゾリン−ヘキサ−１−イン（４７ｍｇ、０．３１ミリモル）及びｐ−エチニルトルエン（４０μＬ、０．３１ミリモル）を、２つの異なるシュレンク管においてアルゴン下無水ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解した。ｎ−ブチルリチウム（ｎ−ヘキサン中１．３４Ｍ、０．２３ｍｌ）を各シュレンク管に−７８℃で添加し、そして２つの溶液を−７８℃で１時間、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。この溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン１’（１００ｍｇ、０．３１ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を続いて２０℃で５分間攪拌して、出発材料を完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水を添加し（５ｍｌ）、そしてこの溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）を用いて抽出した。エバポレーション後、有機性材料をシリカカラム上でのクロマトグラフィーで精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中で再結晶することで純粋な化合物１６が得られた（２２ｍｇ、１３％）。

化合物１６のキャラクタリゼーション

実施例１７
化合物１７は以下の反応パターンに従い調製した。

フェニル−１−エチニル−４−オキサゾリン（３５ｍｇ、０．２０ミリモル）及び１−エチニルピレン（４５ｍｇ、０．２ミリモル）を、２つの異なるシュレンク管においてアルゴン下無水ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解した。臭化エチルマグネシウム（ＴＨＦ中１．０Ｍ、０．２ｍｌ）を各シュレンク管に−７８℃で添加し、そして２つの溶液を周囲温度で３時間攪拌した。２つの陰イオン性の溶液を同時に、カニューレで４，４−ジフルオロ−８−（４−ヨードフェニル）−１，３，５，７−テトラメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン２’（１００ｍｇ、０．２ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を加熱して一晩還流させ、二フッ化型の出発生成物を完全に消失させた（ＴＬＣでモニタリング）。水（５ｍｌ）を続いて添加し、そしてこの溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）を用いて抽出した。エバポレーション後、有機性材料をシリカカラム上でのクロマトグラフィーで精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、２０：８０）、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中で再結晶することで化合物１７が生成した（３５ｍｇ、２６％）。

化合物１７のキャラクタリゼーション

図１１は、化合物１７の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１６ｎｍ）を示す。

図１２は、３８０ｎｍにλ_excを、そして５３％の量子収率を有する化合物１７の発光スペクトルを示す。

化合物１８の調製
化合物１８は、以下の反応パターンに従い調製する。

４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（ｐ−ヨードフェニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン４’は、以下のオペレーションモードに従い調製した。１．１７ｇのｐ−ヨードベンゾイルクロリド及び１ｍｌの２，４−ジメチル−ピロールを１日周囲温度で攪拌した。３．７ｍｌのトリエチルアミン及び４．５ｍｌのＢＦ₃Ｅｔ₂Ｏを続いて添加した。この混合物を一晩攪拌し、そして有機相を続いて水で洗浄した。アルミナ上でのクロマトグラフィー（ヘキサン／ジクロロメタン、７：３）及びヘキサン／ジクロロメタン混合物中での再結晶化により、０．９ｍｇの化合物４’が生成した。

ｎ−ブチルリチウムの１．２７Ｍヘキサン溶液（０．３０４ｍｌ）を、１−エチニルピレン（１００ｍｇ、０．４４ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に対し、アルゴン下７８℃で添加した。混合物をを−７８℃で１時間、続いて周囲温度で３０分間攪拌した。このようにして得られた溶液を続いてカニューレで４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−（ｐ−ヨードフェニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン（８０ｍｇ、０．１７６ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に移した。この溶液を続いて１５分間周囲温度で攪拌して、出発材料を完全に消失させ（ＴＬＣでモニタリング）、続いて水を添加した（１０ｍｌ）。前記溶液をジクロロメタン（２０ｍｌ）で抽出した。エバポレーション後、有機性残渣をアルミナカラム上でのクロマトグラフィーで精製し（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、９０：１０〜７０：３０のグラジエント）、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン混合物中で再結晶することで橙色の結晶形態の化合物７が得られた（７６ｍｇ、５０％）。

化合物２０のキャラクタリゼーション

実施例１９
実施例１９の化合物の調製
化合物１９は、以下の反応パターンに従い調製する。

化合物１８（０．０７ｇ、０．０８１ミリモル）及びヘプチン酸エステル（０．０２５ｇ、０．１６２ミリモル）の溶液を３０分間ＴＨＦ／ｉＰｒ₂ＮＨ混合物（１０／１．５ｍｌ）中で脱気した。Ｐｄ（ＩＩ）Ｃｌ₂（ＰＰｈ₃）₂（４ｍｇ、６モル％）及びＣｕＩ（２ｍｇ、１０モル％）を続いて添加し、そしてこの混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。反応完了後、５０ｍｌの水を添加し、そして有機相をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）で抽出し、そしてＭｇＳＯ₄で脱水した。エステルは、アルミナカラム上でのクロマトグラフィー（溶出液：シクロヘキサン／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ８０／３０）により精製し、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中で再結晶した後に得られた（得られた量：０．０６ｇ、８３％）。

化合物１９のキャラクタリゼーション

図１３は、化合物１９の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５０１ｎｍ）を示す。

図１０は、３６９ｎｍにλ_excを、そして４０％の量子収率を有する化合物１９の発光スペクトルを示す。

実施例２０
化合物２０の調製
化合物２０は、化合物３及びハロゲン化アリールから以下の反応パターンに従い調製される。この反応は、置換基Ｓ１及びＳ２を修飾することを意図した、化合物３に対する園頭カップリングの一例である。

５７ｍｇ（０．１８ミリモル）の化合物３及び９２ｍｇ（０．３６ミリモル）の９−ブロモアントラセンを含むベンゼン／ｉＰｒ₂ＮＨ溶液（５０：５０）を２０分間シュレンク管内で脱気した。１２．５ｍｇ（６モル％）の［Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄］を続いて添加し、そして混合物を窒素雰囲気のもと１６時間６０℃で加熱した。溶媒を蒸発させた後、残渣を支持体上のクロマトグラフィーにかけ（ＣＨ₂Ｃｌ₂／シクロヘキサン、１０：９０）、続いてＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン中で再結晶化することで、純粋な化合物２０が生成した（３１ｍｇ、２５％）。

化合物２０のキャラクタリゼーション

FAB⁺ m/z （ピークの性質、相対強度）：683.2 ([M+H]⁺, 100) ;

C₅₀H₄₃BN₂について算出した元素分析: C, 87.96/ H, 6.35; N, 4,10. 実測値: C, 87.63; H, 5.97; N, 3.81.

化合物１〜２０の蛍光特性を決定した。以下の表は、吸収波長λ_abs、発光波長λ_em、式ΔＳ＝（１／λ_abs）−（１／λ_em）に従うストークスシフトΔＳ、及びジクロロメタン中２０℃で測定したモル吸光係数ε、及び相対量子収率Φ、を示す。相対粒子収率Φは、ローダミン６Ｇを用い水中で（Φ＝７６％、λ_exc＝４８８ｎｍ）参照として測定する。熱量測定によるこの量子収率の正確な測定方法はJ. Phys. Chem, 93, 1979, 2581に記載されている。紫外／青の領域に発色団を有さない化合物１，２，３，及び１６の化合物を除き、実施例に記載の全ての化合物が、それらを３２０〜４６０ｎｍで励起させた場合に３，０００〜１２，３００ｃｍ^-1のストークスシフトを有し、そして最高の蛍光量子収率を有している。

化合物１’、２’及び３’のΔＳを比較のために示す。
・化合物１’は、４，４−ジフルオロ−１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンを指しており、これは実施例１，４及び１０〜１３で得られた化合物と比較するためのものである。

・化合物２’は、化合物４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（ｐ−ヨードフェニル）−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンを指しており、これは実施例７，８及び１７で得られた化合物と比較するためのものである。

・化合物３’は、化合物４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（２，２’：６’，２”−テルピリジン−４’−イル）−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンを指しており、これは実施例１４で得られた化合物と比較するためのものである。

・化合物４’は、化合物４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−８−（ｐ−ヨードフェニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンを指しており、これは実施例１８及び１９で得られた化合物と比較するためのものである。

化合物１’、２’、３’及び４’と本発明の化合物の特性を比較すると、原子Ｆを−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ置換基で置換した結果、通常ΔＳが少なくとも１０倍増大することが示されている。更に、化合物６と１８を比較すると、３７０ｎｍでの単一励起のもと化合物それぞれについて２つの異なる発光が示されている。この特性が、本発明の分子を多色標識に使用するのに非常に適したものとならしめている。

図１は、単結晶Ｘ線回折で得られた化合物１の構造を示す。図２は、ＵＳ５，４４６，１５７に記載の、出発化合物である４，４−ジフルオロ１，３，５，７，８−ペンタメチル−２，６−ジエチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンの、吸収スペクトル（実線で示したもの。Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λexc＝５１５ｎｍ）を示す。図３は、単結晶Ｘ線回折により得られた、化合物４の構造を示す。図４は、単結晶Ｘ線回折により得られた、化合物４の構造を示す。図５は、化合物４の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１５ｎｍ）を示す。図６は、３７０ｎｍにλ_excを、そして９４％の量子収率を有する化合物の発光スペクトルを示す。図７は、化合物９の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１５ｎｍ）を示す。図８は、３７２ｎｍにλ_excを、そして９８％の量子収率を有する化合物８の発光スペクトルを示す。図９は、化合物１３の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５２６ｎｍ）を示す。図１０は、４６２ｎｍにλ_excを、そして９４％の量子収率を有する化合物１３の発光スペクトルを示す。図１１は、化合物１７の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５１６ｎｍ）を示す。図１２は、３８０ｎｍにλ_excを、そして５３％の量子収率を有する化合物１７の発光スペクトルを示す。図１３は、化合物１９の吸収スペクトル（実線、Ａで表す）及び発光スペクトル（破線、Ｅで表す）（λ_exc＝５０１ｎｍ）を示す。図１４は、３６９ｎｍにλ_excを、そして４０％の量子収率を有する化合物１９の発光スペクトルを示す。

Claims

一般式（Ｉ）に相当する化合物

（ここで、
・置換基Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ⁷それぞれが、その他の置換基から独立して、Ｈ、−Ｌ−Ｈ遊離基、−Ｇ遊離基及び−Ｌ−Ｇ遊離基から成る群から選択され、
あるいは、２つの置換基Ｒ³及びＲ⁴が一緒に二価の遊離基Ｚ³⁴を形成し、そして／あるいは２つの置換基Ｒ⁶及びＲ⁷が一緒に二価の遊離基Ｚ⁶⁷を形成し、前記二価の遊離基が、それらが結合する炭素原子と一緒に、単環又は二環式の縮合環から成る群から選択される構造であって、各環が５又は６個の原子を有し、且つ炭素原子と、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される多くとも２つのヘテロ原子とを含んで成る、構造を形成するようなものであり；
・Ｌが、単結合から成るか、あるいはアルキレン基及び直鎖又は分枝鎖アルケニレン基であって、任意にそれらの鎖に１又は複数の酸素原子を含んで成り、エーテル遊離基を形成するもの、単環又は多数の縮合若しくは非縮合環を含んで成るアルキニレン及びアリーレンから選択される１又は複数のセグメントから成る結合基、であり；
・Ｇが官能基であり；
・置換基Ｓ¹及びＳ²がそれぞれ独立してＦ；置換基Ｒ¹〜Ｒ⁷について定義された群から選択される遊離基；あるいは式−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ、を表し、ここで、Ｌ’は単結合又はＬについて定義した群から選択される遊離基であり、そしてＡは発色団あるいは、生体分子、無機化合物、高分子有機化合物又は非高分子有機化合物、と結合することができる官能基、であり；Ｓ¹及びＳ²のうちの少なくとも一方が−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ遊離基であると解される）。
結合基Ｌが、単結合、１〜１０個の炭素原子を有するアルキレンセグメント、フェニレンセグメント、２〜４個の炭素原子を有するアルキニレンセグメント、２〜４個の炭素原子を有するアルケニレンセグメント、及び１〜１２個の酸素原子を有するポリエーテルセグメント、から選択される少なくとも１つのセグメントから成ることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
遊離基Ｇが極性基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
極性基が、アミド、スルホン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、第四級アンモニウム、ヒドロキシル、ホスホン酸塩の基及びポリオキシエチレンセグメントから選択されることを特徴とする、請求項３に記載の化合物。
基Ｇが電子供与基又は電子吸引基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
基Ｇが、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、ペルフルオロアルキル、アミド、ニトロフェニル、置換トリアジノ、スルホンアミド、アルケニル及びアルキニル基から選択され、そして結合基Ｌが２〜４個の炭素原子を有するアルケニレン又はアルキニレンセグメントから選択されることを特徴とする、請求項５に記載の化合物。
遊離基Ｇが、前記化合物を生体分子上にグラフト化させる反応性官能基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
遊離基Ｇが、有機化合物又は無機化合物と反応して、前記化合物と強い結合（共有結合又はイオン結合）又は弱い結合（水素結合）を形成することができる官能基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
置換基Ｓ¹及びＳ²のうち少なくとも１つが−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ基（ここで、Ａは発色団である）であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
置換基Ｓ¹及びＳ²のそれぞれが−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ基（ここで、Ａは発色団である）であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
Ｌ’が単結合又は１〜１０個の炭素原子を有するアルキレンセグメント又は１〜１２個の炭素原子を有するポリエーテルセグメントであり、そしてＡが：
・任意に置換基を持つ芳香環を有するアリール遊離基、
・少なくとも２つの縮合環を有し、任意に少なくとも１つの置換基を持つアリール遊離基；
・色素特性を有する遊離基、
から選択される発色性の遊離基を表すことを特徴とする、請求項９又は１０に記載の化合物。
任意に置換基を持つ芳香環を有するアリール遊離基が、ｐ−トルイル、スチレニル、ピリジニル、オリゴピリジニル、チエニル、及びピロリル、から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の化合物。
少なくとも２つの縮合環を有するアリール遊離基が、ナフチル、ピレニル、アントラセニル、フェナントレニル、キノリル、フェナントロニル、ペリレニル、フルオレニル、カルバゾリル及びアクリジニルから選択され、少なくとも１つの置換基を任意に持つことを特徴とする、請求項１１に記載の化合物。
色素特性を有する遊離基が、クマリニル、ヒドロキシクマリニル、アルコキシクマリニル、トリスルホナートピレニル、シアニン、スチリルピリジニウム、ナフタルイミジニル及びフェニルフェンアントリジウム(phenylphenanthridium)遊離基、から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の化合物。
置換基Ｓ¹及びＳ²のうちの少なくとも一方が−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ基であり、あるいは置換基Ｒ¹〜Ｒ⁷の少なくとも１つが−Ｌ−Ｇ基であり、ここで、Ａ又はＧが、前記化合物を別の化合物と結合させる遊離基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
Ｌ’又はＬが単結合又は１〜１０個の炭素原子を有するアルキレン又は１〜１２個の炭素原子を有するポリエーテルセグメントであることを特徴とする、請求項１５に記載の化合物。
遊離基Ａ又は遊離基Ｇが、Ｈ、トリアルキルシリル、又は架橋基から選択されることを特徴とする、高分子と結合することができる、請求項１５に記載の化合物。
架橋基がメタクリラート、ビニル、スチリル、アニリノ、ピロリル、チオフェニル、フリル、イソシアネート及びエポキシド基から選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の化合物。
遊離基Ａ又は遊離基Ｇがスクシニミジルエステル、スルホスクシニミジルエステル、イソチオシアネート、イソシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、ハロスルホニル、ホスホラミダイト、アルキルイミダート、アリールイミダート、ハロゲン酸(halogenoacid)、置換ヒドラジン、置換ヒドロキシルアミン、カルボジイミド、から成る群から選択される、生体分子と結合することができる、請求項１５に記載の化合物。
官能基Ａ又はＧが、検出されるべき当該化合物と強い結合（共有結合又はイオン結合）又は弱い結合（水素結合）を形成することができる官能基であることを特徴とする、有機化合物と結合することができる、請求項１５に記載の化合物。
官能基Ａ又はＧが、アミノ、ウレイド、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、カルボニル又はクラウンエーテル遊離基から選択されることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
遊離基Ａ又は遊離基Ｇが、無機材料と強力な結合を形成することができる官能基から選択されることを特徴とする、無機化合物と結合することができる、請求項１５に記載の化合物。
基Ａ又はＧがカルボキシラート基であることを特徴とする、酸化チタン、ゼオライト又はアルミナと結合することができる、請求項２２に記載の化合物。
Ａ又はＧがチオール基又はチオエーテル基であることを特徴とする、金属と結合することができる、請求項２２に記載の化合物。
基Ａ又はＧがシロキサン基であることを特徴とする、シリカ及びシリコンの酸化表面と結合することができる、請求項２２に記載の化合物。
置換基Ｓ¹及びＳ²の一方が−Ｃ≡Ｃ−Ｌ’−Ａ遊離基であり、他方の置換基がＦ、任意に置換基を持つ単環のアリール遊離基及び少なくとも二環式の縮合環を含んで成るアリール遊離基、から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
対称であり、且つ式（ＩＩ）

に相当することを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
置換基Ｒ³とＲ⁴が一緒にそれらを持つ五員環と環を形成し、そして置換基Ｒ⁵とＲ⁷が一緒にそれらを持つ五員環と環を形成することを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
式（ＩＩＩ）

（ここで、置換基Ｒ⁸ⁱ及びＲ^9jは、置換基Ｒ¹〜Ｒ⁷について定義された群から互いに独立して選択される）
に相当することを特徴とする、請求項２８に記載の化合物。
蛍光標識としての、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
エレクトロルミネセント材料としての、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。