JP2008505742A - シラン処理シリカフィルター媒体を用いてサンプル内の成分を分離する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明ではシラン処理シリカ媒体を用いて、種々の濁り生成性物質および粒子状物質をアルコール、果実および野菜飲料から除去する。
Royらl(J.Chrom.Sci.22:84-86(1984))はイオン交換(DEAE、カルボキシ、およびスルホン)シリカをグリシドキシプロピルシリルシリカのエポキシ官能基を用いて調製するほう法を開示する;イオン交換シリカはカラムクロマトグラフィーにおいて牛血清アルブミンおよびウシγ-グロブリンを分離するのに用いられる。
本発明は1以上の目的成分をサンプルから分離する方法に関する。本発明の1の実施形態は:下記工程:(a)サンプルを処理されたシリカフィルター媒体でろ過する、(b)シリカフィルター媒体上への粒子の捕捉および目的可溶性成分の結合を同時に行う、および(c)結合された目的可溶性成分をシリカフィルター媒体から溶出する、を含む。この実施形態においては、目的分子は始めにシリカフィルター媒体へ結合し、およびその後溶出により回収される。任意に、不溶性目的成分を粒子状物質から回収してもよい。
[式中、R1は典型的にはシリカフィルター媒体表面上の活性基と反応する加水分解性部分(例えば、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アリールオキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、アミノアシル、またはアシルアミノ、アルキルエステル、もしくはアリールエステル)であり、好ましい加水分解性部分はアルコキシ基、例えばメトキシまたはエトキシ基である;
1<X <3、1より多いシロキサン結合はフィルター粒子とシランの間に形成される;
R2は処理工程においてフィルター表面と反応しない炭素含有部分であり、例えば、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルキルシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、またはアリールアルカリルである、
R3は表面の反応が終了した後にシリコン原子に化学的に結合して残る有機部分であり、好ましくはろ過課程において目的成分と相互作用しうるものである;例えばR3は水素、アルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、アリールアルカリル、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アリールオキシ、アミノ、アルキルエステル、アリールエステル、カルボキシ、スルホネート、シアノ、アミノアシル、アシルアミノ、エポキシ、ホスホネート、イソチオウロニウム、チオウロニウム、アルキルアミノ、4級アンモニウム、トリアルキルアンノミウム、アルキルエポキシ、アルキル尿素、アルキルイミダゾール、またはアルキルイソチオウロニウムであってよい;
ここで、前記アルキル、アルケニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、および複素環基上の水素はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、またはシアノと置換されていてもよい。
R5、R6、R8は独立して水素、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、エーテル、エステルまたはアリールアルカリル;
R4、R7、R9は置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、またはアリールアルカリル基であって、2つの共有結合を形成できる基である。]
シラン反応シリカフィルター媒体は好ましくは目的とする成分と反応する官能性部分を有している。官能性部分としては4級アンモニウム、エポキシ、アミノ、尿素、メタクリレート、イミダゾール、スルホネートおよびその他の生物分子と反応することが知られている基が例示される。さらに該官能性部分はさらに良く知られた方法によってさらなる新しい官能基を生成して他の相互作用を起こすべく、反応されていてもよい。4級アンモニウムまたはスルホネート基を官能基として有するシラン反応粒子フィルター媒体を得るための一般的な反応式を下記に示す。
スキーム1 4級アンモニウム官能性フィルターエイドの合成
スキーム1 スルホネート−官能性シリカフィルター媒体の合成
R2は独立して置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、またはアリールアルカリル;
R3は水素、アルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、アリールakアリール、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、アリールオキシ、アミノ、アルキルエステル、アリールエステル、カルボキシ、スルホネート、シアノ、アミノアシル、アシルアミノ、エポキシ、ホスホネート、イソチオウロニウム、チオウロニウム、アルキルアミノ、4級アンモニウム、トリアルキルアンノミウム、アルキルエポキシ、アルキル尿素、アルキルイミダゾール、またはアルキルイソチオウロニウム;(ここで前記アルキル、アルケニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、および複素環上の水素は任意にハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシ、またはシアノで置換されていてもよい);
R5、R6およびR8は独立して水素、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、またはアリールアルカリル;
R4、R7、R9は置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルカリル、アルキルシクロアルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、複素環、シクロアルカリル、シクロアルケニルアリール、アルクシクロアルカリル、アルクシクロアルケニルアリール、またはアリールアルカリル基であって、2つの共有結合を形成可能な基である;
(ここで前記シリカフィルターはもみ殻灰またはカラスムギ殻灰である)]
からなる群から選択される式で示されるものを提供する。
バッチ工程における、トリアルコキシシランを用いたもみ殻灰媒体(tRHA)の処理
別のタイプの処理ずみシリカフィルター媒体の調製
AEAPTMS:N-(2-アミノエチル)-3-アミノプロピルトリメトキシシラン
親水性4級アンモニウム官能性フィルターエイド(フィルター媒体サンプル40および42)製造のための二段階法
親水性スルホネート-官能性フィルターエイド(フィルター媒体サンプル41)
製造のための二段階法
2段階法の処理条件および組成
表面積および多孔度はマイクロメトリクス(Micrometrics、登録商標)ASAP 2010アナライザーを用いて行った。分析の前にサンプルを吸引下、150℃で圧力が一定になるまで脱気した。分析工程において、N2ガスを77°Kにてサンプルに吸着させ表面積を吸着したガスの体積から計算した。BETパラメーターはBET等式をASAP-2010ソフトウエアを用いて積分して求めた。表面積は0.05<P/Po <0.3の範囲で等温線の吸着ブランチより計算した。BarrettJoynerHalenda 分析を用いて孔体積および孔直径を計算した。
NMR
特定の官能基および分子構造の同定は29Si 固体NMR分光分析をUnity Plus 400MHz 分光分析機でバリアンVT CPMASプローブおよび7mmのモーターを用いて行った。
炭素-水素-窒素(CHN)
CHN含量はロバートソン・マイクロライト・ラボラトリーズによて燃焼分析法を用いて測定した。この分析で得られる情報から、表面上の処理レベルを計算した。
CHN含量はロバートソン・マイクロライト・ラボラトリーズによて燃焼分析法を用いて測定した。この分析で得られる情報から、表面上の処理レベルを計算した。
シリカフィルターの組成および各種処理条件並びにその特徴分析
表5A-5D はもみ殻灰の各種処理条件および組成、並びにその特性を示す。
表5A-5D はもみ殻灰の各種処理条件および組成、並びにその特性を示す。
タンパク質結合および放出のための表面処理もみ殻灰
目的
表面処理もみ殻灰(RHA)を用いてタンパク質の結合および放出を試験する。タンパク質溶液は粒子状物質を含まない、Micrococcus luteus 発酵物より誘導されたものである。
表6にフィルター媒体サンプルおよびその表面処理をまとめた。
1. 各サンプルを2g秤量して50mLの円錐管へ投入した。
2. 25mL の25mM トリス-HCL、pH 8.4バッファーを添加した。
3. サンプルおよびバッファーを一晩反転させながら混合した。
4. 各ぬらしたサンプルを15mL の円錐チューブへ移し、次いで2500g にて5分間遠心分離し、上清をデカンテーションした。得られたサンプルを以下の結合試験に供した。
5. タンパク質試験溶液の説明および手順:
ソース:下記工程により回収されたMicrococcus luteus 粒子成分フリー濃縮培地:
・発酵培養物を200ppm のリゾチーム(ニワトリ卵白由来)を用いて溶菌した。
・溶菌培養物をポリカチオン性ポリマーを用いて凝集させ、およびろ過して粒子成分を除去した。
・粒子成分を含有する培養物は限外ろ過により水を除いて濃縮した(Prep/Scale(登録商標)TFF、Millipore)。
7. 5mLのタンパク質試験溶液を表面処理もみ殻灰を含有する各チューブへ添加した。
8. チューブを90分間反転させて混合した。
9. 混合したチューブを2500gにて5分間遠心し、上清をデカンテーションした。回収されたフラクションを「濾液」または「FT」とした。
10. 5mLの25mM トリス-HCl pH 8.4バッファーを各チューブへ添加し、45分間反転により混合した。
11. チューブを2500g で5分間遠心し、上清をデカンテーションした。回収されたフラクションを「洗浄」とした。
12. 5mLの溶離バッファー(25mM トリス-HCl pH 8.4、2M NaCl含有)を添加し、30分間混合した。
13. 0.5mLの0.5M NaOH を各チューブへ添加した。
14. チューブを90分間反転させて混合した。
15. チューブを2500gにて5分間遠心し、上清をデカンテーションした。回収されたフラクションを「溶離物」とした。
16. 全フラクションをSDS-PAGEゲル電気泳動(NuPAGE 電気泳動システム、米国特許第5,578,180、NOVEX electrophoresis GmbH、Germany の手順)にかけた。
図1A(未決号成分の結合および分析)
未結合サンプルが濾液および溶離物の分析により検出されたことは、全てのまたは一部の結合サンプルが溶離プロセスにおいて遊離されることを示す。
処理RHAサンプル4は選択的に97kd 近傍およびそれ以上のもの55.4と36.5kdの間、21kd近傍および14.4kd近傍のタンパク質を結合する。HQ50の場合と同様14.4kd未満のバンドが結合されなかったのは注目すべきである。全てのタンパク質のバンド強度は未処理もみ殻灰およびFW12と比して低いものであり、処理RHAの結合がより多いことを示す。
FW12溶離物は痕跡量のタンパク質であって、物理的にトラップされ、持ち越された液体由来のものであると考えられる(レーン番号2)。
HQ50に捕捉されていた全てのタンパク質が放出された(レーン番号4)。
サンプル4からの溶離物は116kd以上、55Kd近傍およびそれ以下および6kd近傍のタンパク質バンドであった。36.5kd以上のバンドは明らかに結合したままである(レーン番号5)。
タンパク質結合および放出のための表面処理もみ殻灰
目的:
さらなる表面処理もみ殻灰を用いてタンパク質の結合および放出を試験する。タンパク質溶液は粒子状物質を含まない、Micrococcus luteus 発酵物より誘導されたものである。
実施例6と同じ。
サンプル7タンパク質結合および放出(図2A)
21.5kd近傍を除き、55kd以下の全てのMWのバンドを選択的に結合した(レーン2対レーン3)。
洗浄は濾液と類似のプロファイルを示した。
溶離物は55kd近傍の非常に軽いバンドを有するが、あまり多くのバンドを有していない。他のバンドは明らかに強く結合し、用いた条件では溶離しなかった。
上記サンプル7と同様の結果。7.
14kd未満のものを除きほとんど全てのタンパク質を結合した(レーン1対レーン2)。
洗浄フラクションにはタンパク質バンドが検出できなかった。
溶離物フラクションのほとんどが55kd近傍のバンドであり、他のバンドは結合したままである。これは、55kd近傍のバンドの選択的放出を示し、バンド強度に基づくタンパク質純度は>90+%であった。
上記サンプル9と同様の結果。
サンプル11タンパク質の結合および放出(図2C)
いくつかの低分子量バンドを除きほとんど全てのバンドを結合した。これは選択的なタンパク質の結合を示す。(レーン1対レーン3)洗浄フラクションにはタンパク質バンドは検出されなかった。
明らかに他の表面処理もみ殻灰に比して強い結合能を有する。
サンプル12タンパク質の結合および放出(図2C)
上記サンプル9と同様の結果。
ユニークなタンパク質の結合および放出が表面処理もみ殻灰で認められた。選択的結合が観察された(サンプル7およびサンプル8)。選択的放出(サンプル9およびサンプル10)によりタンパク質純度が>90%のフラクションが得られた。
タンパク質の結合および放出のための表面処理もみ殻灰
目的
さらなる表面処理もみ殻灰を用いてタンパク質の結合および放出の試験を行う。本試験のデザインはイオン交換をベースとする。タンパク質溶液は粒子状物質を含まない、Micrococcus luteus 発酵物より誘導されたものである。
表8にフィルター媒体サンプルおよびその表面処理をまとめた。
1. 各表面処理もみ殻灰を2g秤量して50mLの円錐管へ投入し、40mLの平衡バッファー(25mM トリス-HCl pH 8.4)を添加した。チューブを30分間反転させて混合した。
2. チューブを2500xg で5分間遠心し、上清をデカンテーションした。
3. タンパク質試験溶液源:粒子成分フリー濃縮培地は実施例1と同様の手順で調製し、次いで1010ppmのプロテアーゼにて消化した。
4. 上記溶液は24部の25mM トリス-HCl pH 8.4バッファーにて調節した。
5. 20mLのタンパク質試験溶液各調製された表面処理もみ殻灰へ添加した。
6. サンプルを反転させて30分間混合した。
7. サンプルを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。回収されたフラクションを「濾液またはFT」とした。
8. 20mLの25mM トリス-HCl pH 8.4バッファーをサンプルへ添加し、反転により15分間混合した。
9. サンプルを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。回収されたフラクションを「洗浄」とした。
10. 20mLの溶離バッファー(25mM トリス-HCl pH 8.4、1M NaCl含有)を各サンプルへ添加し、およびサンプルを反転させて30分間混合した。
11. サンプルを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。回収されたフラクションを“溶離物#1”とした。
12. ステップ9および10を10mLの同じ溶離バッファー+50mM NaOH.を用いて繰り返した。回収されたフラクションを“溶離物#2”とした。
13. 全ての全てのフラクションをSDS-PAGE電気泳動にて分析した。
サンプル14タンパク質の結合および放出(図3A)
・ 濾液フラクションは比較的低いタンパク質バンド強度を示した、これはサンプル14が比較的良い結合能を有することを意味する(レーン番号6対レーン番号1)。
・ 14.4kd 未満のバンドは濾液中に残り、選択的結合であることが示された。
・ 結合タンパク質の一部は1M NaClで溶離された。
・ NaOH を1M NaClを含有するバッファーに添加し、結合タンパク質を溶離した。
・ 全ての投入したタンパク質が結合した(レーン番号3対レーン番号2)。
・ 少量の結合タンパク質のみが1M NaClにて溶離された(レーン番号5)、これは結合がイオン交換によって行われたのではないことを示唆する。
・ 苛性成分を1M NaCl 溶離バッファーへ添加したところ、結合タンパク質が溶離できた。
・ 挙動はサンプル14と類似していた。
・ レーン番号7濾液フラクションに見られるように、比較的良好な結合を示した。
・ 選択的に14kd未満のタンパク質を結合しなかった。
・ 溶離には高NaCl/NaOH 比が必要であった。
サンプル18タンパク質の結合および放出(図3C)
・ レーン番号1濾液フラクションに示されるように、比較的良好な結合が得られた。
・ 選択的に14kd未満のタンパク質を結合しなかった。
・ 溶離には高NaCl/NaOH 比が必要であった。
・ 結果はサンプル17と類似していた。
・ 低いタンパク質を有するレーン番号7濾液フラクションに見られるように、比較的良好な結合を示した。
・ 選択的に14kd未満のタンパク質を結合しなかった。
・ ほとんどの結合タンパク質は1MNaClにて溶離された。
・ NaOHを1M NaCl 含有バッファーへ添加すると、さらに55kd 近傍のバンドが溶離された。
・ レーン番号3濾液フラクションの低いタンパク質バンドから、比較的良好な結合であることが示される
・ 洗浄操作において漏出が認められた(レーン番号4)。
・ 選択的に14kd未満のタンパク質を結合しなかった(レーン番号3)。
・ 結合タンパク質は主に1MNaClにて溶離された(レーン番号5)。
・ 結果はサンプル19と類似していた。
上記の試験した表面処理もみ殻灰サンプルを、陰イオン交換に基づく結合および高塩濃度および/または高pHによる放出条件下で試験した場合に、3つの一般的な結合/放出挙動が観察された:
比較的良好な結合、溶離剤NaCl/NaOH:
サンプル14(3-(N-スチリルメチル-2-アミノエチルアミノ)-プロピルトリメトキシシランハイドロクロライド処理)
サンプル13(3-(N-スチリルメチル-2-アミノエチルアミノ)-プロピルトリメトキシシランハイドロクロライド処理)
サンプル17(3-アミノプロピルトリメトキシシラン処理)
サンプル18(3-アミノプロピルトリメトキシシラン処理)
比較的良好な結合、溶離剤NaCl:
サンプル19(N-(2-アミノエチル)-3-アミノプロピルトリメトキシシラン処理)
サンプル20(N-(2-アミノエチル)-3-アミノプロピルトリメトキシシラン処理)
結合/溶離試験は陰イオン交換挙動を調べるためにデザインしたものである。観察結果はRHA表面処理と関連した。
サンプル17およびサンプル18についても種々の挙動を調べた。
サンプル19およびサンプル20は陰イオン交換性の作用を結合および溶離において示す。
タンパク質の結合および放出のための表面処理もみ殻灰(カチオン交換)
目的
表面処理もみ殻灰を用いてタンパク質の結合および放出を試験する。タンパク質溶液はAspergillus niger 発酵産物より得た粒子フリーの溶液である。
表9にサンプルの番号および表面処理についてまとめた。
1. 2gの各表面処理もみ殻灰を50mLの円錐管へ投入し、40mLの平衡バッファー(100mM 酢酸ナトリウム、pH 4.0)を添加した。チューブを30分間反転させて混合した。
2. チューブを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。
3. タンパク質試験溶液の説明および調製:
a. ソース:Aspergillus niger 粒子フリーの濃縮培養液で、下記工程にて得たものである:
i 培養液をろ過して細胞を除いた。
ii 細胞フリーの培養液を限外ろ過(脱水(Prep/Scale(登録商標)TFF、Millipore)して脱水した。
b. 上記溶液を14部の100mM 酢酸ナトリウム、pH 4.0バッファーで調節した。
4. 20mLのタンパク質試験溶液を各調製された表面処理もみ殻灰へ添加した。
5. サンプルを反転させて7分間混合した。
6. サンプルを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。集めたフラクションを「濾液」または「FT」とする。.
7. 20mLの100mM 酢酸ナトリウムpH 4.0バッファーを各サンプルへ添加し、サンプルを15分間反転しながら混合した。
8. サンプルを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。集められたフラクションを「洗浄#1」と名付けた。
9. ステップ7および8を繰り返し、集めたフラクションを“洗浄#2”と名付けた。
10. 20mLの溶離バッファー(100mM 酢酸ナトリウムpH 4.0buffer、1M NaCl含有)を添加し、サンプルを反転させて60分間混合した。
11. サンプルを2500g にて5分間遠心し、上清をデカンテーションした。集めたフラクションを「溶離物#1」とした。
12. ステップ9および10を10mLの同じ溶離バッファー+50mM NaOHを用いて繰り返した。回収されたフラクションを“溶離物番号2”とした。
全てのフラクションをSDS-PAGE電気泳動にて分析した。
サンプル41タンパク質の結合および溶離(図4A)
・ 選択的に97kd近傍および31kd未満のバンドを結合する。
・ 「洗浄#1および#2」それぞれにはタンパク質バンド全く無いあるいは比較的低い強度のものしか認められなかった(レーン番号3およびレーン番号4それぞれ参照)。これは、結合が特異的で強かったことを意味する。
・ 結合タンパク質は1M NaCl含有バッファーにて溶離した。
未処理RHAタンパク質の結合および溶離(図3A)
・ 97kd近傍および31kd未満のバンドは濾液中には存在しなかった。しかしながら、溶離物#1または溶離物#2のいずれにもタンパク質は溶離されなかった。
・選択的に97kdおよび31kd未満のバンドを結合した。
・ 「洗浄#1および#2」それぞれにはタンパク質バンド全く無いあるいは比較的低い強度のものしか認められなかった(レーン番号3およびレーン番号4それぞれ参照)。これは、結合が特異的で強かったことを意味する。
・ 結合タンパク質は1M NaCl含有バッファーにて溶離した。
表面処理もみ殻灰サンプル41はポジティブコントロールと非常に良く似た結合および溶離性能を示した。
タンパク質の結合および溶離のための表面処理されたシリカフィルター媒体(イオン交換)
目的:
表面処理シリカフィルター媒体を用いてタンパク質の結合および放出の試験を行う。本試験のデザインはイオン交換をベースとする。タンパク質溶液は粒子状物質を含まない、Micrococcus luteus 発酵物より誘導されたものである。
表10にサンプル番号と表面処理をまとめた。
サンプル29、サンプル30およびCelPure P100は実施例8と同じ手順で行い、下記の変化をつけた:
タンパク質試験溶液は100X(対25X)に希釈した。
ステップ4および5を繰り返し、集めた洗浄フラクションを「洗浄#2」とした。
用いた試験条件下ではタンパク質試験溶液の量は過剰であった。その結果、全ての濾液フラクションはフィードした試験溶液と同様のタンパク質バンドパターンを示した。各試験したシリカフィルター媒体サンプルのタンパク質結合能の定性的な解析をする努力はしなかった。下記結果は溶離物フラクションのみのものである。
ほとんどの結合タンパク質は1M NaClにて溶離された(レーン番号5)。
ほとんどの結合タンパク質は1M NaClにて溶離された(レーン番号5)。
有意な量のタンパク質は1M NaClでは溶離されなかった。
両方の溶離物フラクションにはタンパク質を含有しており、その組成は各フラクションで類似しているようである(レーン番号5は1M NaCl溶離物およびレーン番号6は高pH溶離物)。
溶離フラクションは特に14.4kd未満のタンパク質を含有していた。
1Mで溶離して得た溶離物フラクションには97kd近傍、55kd近傍およびそれ未満および特に14.4kdと6kdの間のバンド(レーン番号10)が含まれていた。
サンプル40および42(表面処理もみ殻灰)およびサンプル29および34(表面処理珪藻土)は未処理の対象物と比較してより高いタンパク質-結合能を示す。
動的タンパク質の結合および溶離のための表面処理もみ殻灰(イオン交換)
目的:
表面処理もみ殻灰サンプル9を用いて動的タンパク質の結合および溶離を試験する。本試験はイオン交換に基づきデザインされたものである。タンパク質溶液は粒子状物質を含まない、Micrococcus luteus 発酵物より誘導されたものである。
1. 6gのサンプル9を50mL円錐管へ投入した。
2. 50mLの平衡バッファー(25mM トリス-HCl pH 8.4)を添加し、サンプルを反転させて30分間混合した。
3. サンプルを2500gで5分間遠心し、上清をデカンテーションした。
4. 30mLの平衡バッファーを添加し、サンプルを反転させながら良く混合した。
5. サンプルを重力流カラムへ注いだ。
6. 表面処理もみ殻灰を放置して落ち着かせ、10mL容積にパックした。
7. プレフィルターをパック層上へ載せた。
8.20mlの平衡バッファーを添加した。
9. 25mLのタンパク質試験溶液を添加した(実施例6と同じ方法で調製)。
10. 濾液フラクションを15mL円錐チューブに取った。
11. 30mLの平衡バッファーを添加し、「洗浄」フラクションを15mlの円錐管へ集めた。
12. 下記工程を連続して行って、表11に示した複数の溶離物の選択および回収をした:
a 0.2M NaCl を含む平衡バッファーを添加した。
b 2M NaCl を含む平衡バッファーを添加した。
c 0.1M NaOH を添加した。
13. 全てのフラクションをSDS-PAGE電気泳動にて分析した。
・ 適用した溶液は容量を超えたものであったので、顕著な急騰がFT フラクションに認められた(レーン3、4および5)
・ 表面処理もみ殻灰サンプル9は良好な流動性を有していた。上記全てのステップを重力による流動にて容易に実施可能であった。
・ 図6は10mLをロードした場合に、フィードした溶液は10mL のパックしたサンプル9を明らかに突破したことを示す。
・ 試験した結合条件下において、サンプル9は明らかに選択的に96kd近傍、55kd近傍、55kd未満の2つのバンド、および14.4kdと6kdの近傍およびその間のバンドを選択的に結合した。
. 下記結果が3つの溶離ステップにて観察された:
*3つのバンド(97kd近傍、55kd近傍、および14.4kd未満)が0.2Mで溶離された。
*2M NaClで、97kd近傍および55kd近傍のバンドが溶離された。
*0.1M NaOHで、55kd近傍、31kd未満のバンドおよび14.4kd近傍のタンパク質が溶離された。
表11に結合試験で回収されたフラクションをまとめた。
本実施例は表面処理もみ殻灰がタンパク質の結合および溶離のための重力流れのみで処理できるパック層クロマトグラフィーの態様で、およびフィルターエイドとして有用であることを示すものである。結合および溶離性質はバッチ態様と同じである。本実施例はまた、複数の溶離バッファーを採用することにより、選択的溶出が可能であることも示す。
同時に粒子を捕捉し、可溶性成分を捕捉/溶離するための表面処理もみ殻灰
目的:
同時に粒子状物質のろ過とタンパク質の結合および溶離を行う表面処理もみ殻灰の性質を調べる。表面処理もみ殻灰のサンプル番号はサンプル19であり、イオン交換性能を有することを確認したものである(実施例8参照)。未処理もみ殻灰をまた、並べて試験した。
平衡バッファー:25mM トリス-HCl、pH 8.4.
凝集Micrococcus luteus 培養液を「フィード」といい、下記のとおり調製した:
・ 収穫後、培養物を100ppm リゾチーム(ニワトリ卵白)で溶菌した。
・ 溶菌下培養物をポリカチオン性ポリマーにて凝集させた。
・ 試験前に凝集させたサンプルを1部の平衡バッファーで希釈した。
1. 表面処理もみ殻灰試料:
・ 5gの未処理RHAを50mlの円錐管2本にそれぞれ投入した。
・ 40mL の平衡バッファーを添加し、円錐管を反転させながら30分間混合した。
2. 未処理もみ殻灰のステップ番号1でチューブを2500xgで5分間遠心し、上清をデカンテーションしした。
3. 50mLの調製した試験溶液「フィード」を各調製したもみ殻灰へ添加した。
4. チューブを30分間室温にて反転させて混合した。
5. 1mLのサンプルを卓上型遠心分離器を用いて遠心分離し(4min)上清を集めた(「ベンチFT」とする)。
6. 0.45μmの250mL-Nalgenユニットをろ過のために調製した。
・ 該ユニットを家庭用吸引装置のアウトレットにつないだ。
・ 他のもみ殻灰を50mLの平衡バッファーへ懸濁した。
・ 懸濁物をろ過ユニットへ注ぎ、家庭用吸引装置をかけてプレコート(ケーキ)を調製した。
・ ろ液溜めを空にした。
・ ろ液溜めを再度つないでろ過試験に備えた。
7. ステップ4で得たタンパク質溶液もみ殻灰混合物を調製したろ過ユニットに投入し、ろ過を開始するために再度吸引をかけた。回収したろ過サンプルを「FTろ液」とした。
8. 吸引を止め、50mLの平衡バッファーを添加し、攪拌して混合した。再度吸引を行いろ過を開始した。ろ過されたサンプルを集め、「洗浄」とした。
9. ステップ8を50mLの溶離バッファーを用い、15分間混合した後吸引をかけてろ過した。ろ過されたサンプルを集め、「溶離物」とした。
10. 全てのフラクションをMES移動バッファーを用いた4-12%トリス-ビスSDS-PAGE ゲル電気泳動にかけた(操作については別添のエクセルファイル参照)。
11. 未処理もみ殻灰についてステップ1-10を繰り返した。
1. 表面処理もみ殻灰サンプル19は明らかに未処理もみ殻灰より薄いケーキ厚を有していた。
2. 両方のもみ殻灰の全ての回収したフラクション(FT濾液、洗浄および溶離物)は清澄で、粒子状物質を含んでいなかった。
3. 表面処理もみ殻灰サンプル19は未処理もみ殻灰のろ過速度に匹敵する粒子ろ過速度有している:
・ サンプル19:12.8mL/分
・ 未処理RHA:14.0mL/分
4. サンプル19は未処理RHAより良い捕捉および溶離を示した:
・ 未処理RHA(図7A)
* 「FT濾液」(レーン番号4)はフィード(レーン番号2)と非常によく似たプロファイルであった。全てのバンドはフィードよりほんの少し薄く、これはもみ殻灰の調整のために用いたバッファーの影響である。
* もみ殻灰内に物理的にトラップされたタンパク質溶液を置き換え、これを「洗浄」フラクション(非常にかすかなタンパク質バンドを含む、レーン番号5参照)とした。
* 溶離物(レーン番号6)中にはタンパク質が痕跡量しかなかった。
5. サンプル19(図7B)
・ タンパク質の良好な結合および結合タンパク質の良好な回収が可能であった。
「FT濾液」フラクション(レーン番号4)中のタンパク質バンドは非常に少ないかまたは全く無かった。「ベンチFT」上清(レーン番号3)には「FT濾液」と比べるとかすかなタンパク質認められ、これはケーキを通り抜ける際にタンパク質が捕捉されたことを示す。
・ 洗浄(レーン番号5)のタンパク質バンドは非常に少ないかまたは全く無かった。
・ 溶離物(レーン番号6)はフィードと類似のパターンであるがほんの少し強度の弱いバンドパターンを示した。
表面処理もみ殻灰は、投入されたタンパク質溶液から可溶性目的タンパク質をイオン交換により捕捉し、同時に粒子状物質を分離した。捕捉されたタンパク質は次いで表面処理もみ殻灰から、高塩濃度バッファーにより溶離して溶出することができる。
表面処理もみ殻灰プレコートおよび本体内にトラップされた粒子状物質、
表面処理もみ殻灰へ結合した非タンパク質成分、および
表面処理もみ殻灰へ結合し、溶離されるタンパク質成分。
粒子状成分の捕捉と可溶性成分の捕捉/溶離の両方を行うための表面処理もみ殻灰
目的:
・ 実施例12をAspergillus niger 培養液を用い、実施例12と同じ表面処理もみ殻灰(サンプル19)と未処理もみ殻灰を用いて繰り返す。
Aspergillus niger 培養液を4部のDI水で希釈し、pHを8.06へNaOHを用いて調節した。
・ 実施例12と同様の手順。試験溶液の体積は100mLとした。
表面処理もみ殻灰サンプル19は未処理もみ殻灰に匹敵するろ過スピードを示した。
未処理RHA洗浄(レーン番号5)にはサンプル19(レーン番号10)より多くのタンパク質が含まれている。
本実施例は表面処理もみ殻灰はAspergillus niger 由来のフィードタンパク質溶液から、イオン交換による可溶性目的タンパク質の捕捉と粒子状物質の分離を同時に行ったことを示す。捕捉されたタンパク質は次いで表面処理もみ殻灰より高塩濃度のバッファーにて溶離して、抽出することができる。
表面処理もみ殻灰プレコートおよび本体内にトラップされた粒子状物質、
表面処理もみ殻灰へ結合した非タンパク質成分、および
表面処理もみ殻灰へ結合し、溶離されるタンパク質成分。
材料
MilliQ H2O
タンパク質溶液(ろ過されたカタラーゼDFC)
50mL オークリッジチューブ
Sorval SA600ローターを有するSorval RC 5B プラス遠心分離器
BCA タンパク質アッセイキット(Pierce)
Compat-Able タンパク質アッセイ試薬セット(Pierce)
予め希釈したタンパク質アッセイ標品、牛血清アルブミンフラクションV セット(Pierce)
5μm シリンジフィルター(Sartoris、Minisart、番号17594)
手順:
1. 1gの各シラン処理もみ殻灰サンプル番号54-67を50mLオークリッジチューブへ投入した。
2. 20mLのMilliQ H2O を各チューブへ投入した。.
3. 各チューブの内容物を8rpmにて反転させながら10分、室温にて混合した。
4. 各チューブを16,000rpm、にて15分間遠心した。
5. 上清を注意深くプラスチック製の移動ピペットを用いて除いた。.
6. 1部のタンパク質溶液を24部のMilliQ H2O(フィード)で希釈した。
7. 10mL フィードを各チューブへ投入した。(10%w/v固形分)。
8. 各チューブを室温にて2時間、8rpmにて反転させつつインキュベートした。
9. 各チューブを16,000rpm、15℃にて30分間遠心した。.
10. 各上清を0.45μm シリンジフィルターでろ過した。
11. フィードおよびろ過上清(ステップ10)中のタンパク質濃度をマイクロタイタープレート法に沿ってBCA アッセイにて測定した。結果を表12として示した。
フィード物質のタンパク質濃度は該フィード物質をサンプル番号54〜67と混合し、遠心し、ろ過した後には減少した。この結果はシラン処理シリカサンプル番号54〜67および未処理RHAの全てがフィードタンパク質溶液からタンパク質を結合させたことを意味する。
殺菌性活性試験(Bacillus subtilis )
試験微生物:Bacillus subtilis
試験フィルター媒体:フィルター媒体サンプル43、44、4およびFW12(未処理珪藻土)
手順:
・ Bacillus subtilis培養液を滅菌PBSにて〜104CFU/mLへと希釈した(1OD≒5*108CFU/mL の基準を培養液中の CFU/mL値を決めるのに用いた)。
・ 0.5gフィルター媒体/5mL 液体(10%固形分)を用いた。
・ 希釈培養物サンプルの連続的希釈(滅菌0.9%w/v NaCl中)をLAプレート上に播き、実際に用いたCFU/mLを決定した。プレートを34℃で一晩培養した。
2. フィルター媒体および希釈細菌サンプル(またはPBSコントロール)を滅菌した125mL バッフルフラスコ内で2時間半、30℃、200rpmにて攪拌した。
3. 処理したサンプルの液体部分(2)をLAプレート上に播き(各サンプルにつき5プレート、1のプレートをコントロールとする)一晩34℃にてインキュベートした。
4. プレート上の細菌を計数した。
表13に結果をまとめた。細菌をサンプル4および44のフィルターと混合することによって、CFUは減少したが、これはフィルター媒体サンプル4および44が抗微生物活性を有し、接触することにより細菌を殺したことを意味する。
PBS:リン酸緩衝生理食塩水(細胞が浸透圧ショックによって溶菌されるのを防止)
CFU:コロニー形成ユニット(生細胞数)
TFTC:少なすぎてカウント不能
CFU/mLは:平均±差(プレート数)で示す[差は平均と平均から最も遠い値との差である].
20300コロニーのプレートのみ計数した。
殺菌性活性試験(Bacillus subtilis)
試験微生物:Bacillus subtilis
被検フィルター媒体:フィルター媒体サンプル1、4、6、44、および45.
Bacillus subtilis の培養液を滅菌PBSで希釈して〜104CFU/mLとした。
0.5g フィルター媒体/5mL 液体(10%固体)を用いた。
1. サンプルの培養液を連続的希釈したもの(滅菌0.9%w/v NaCl)をLAプレートに播き、実際に用いるCFU/mLを決定した。プレートを一晩34℃にてインキュベートした。
2. フィルター媒体および希釈細菌サンプル(15mL 液体)を滅菌した250mL バッフルフラスコ内で混合した。各フィルター媒体それぞれにつき2つのフラスコを用いた。
(細菌サンプルではなくPBSを投入したサンプルもまた下記フィルター媒体サンプルに含まれる:サンプル1、6および45)
3. 上記を2時間、30℃、250rpmにて混合した。
4. 処理サンプル(液体部分)をLAプレート上に播いた(各サンプル4または5プレート)。プレートを一晩、34℃にてインキュベートした。
4. プレート上の細菌を計数した。
結果を表14にまとめた。細菌とフィルター媒体サンプル1、4、6、44、および45とを混合することによってCFUは有意に減少した。
殺菌活性およびろ過試験(Lactobacillus brevis)。
試験微生物:Lactobacillus brevis
被検フィルター媒体:サンプル4、43、45およびFW12.
0.5gのフィルター媒体/5mL培養物(10%固体)を用いた。
1. Lactobacillus brevis の一晩培養物を2段階で希釈して〜105CFU/mLとした(1OD600≒2.7*108CFU/mLを基準)―第1段の希釈は滅菌ラクトバチルスMRS培地にて行い、第2段の希釈を滅菌PBSにて行った。
2. 培養物の段階的希釈物(0.9%w/v NaCl内)を調製した(第2段の希釈)。
3. 希釈されたサンプルをラクトバチルスMRS培地プレート上に播き、実際の開始CFU/mLを決定した。
4. フィルター媒体および希釈細菌サンプル(10mL 液体)を滅菌125mL バッフルフラスコ内へ投入し、パラフィルムで密封し、2時間15分室温にてオービットシェイカー上で混合した(~60rpm)。
5. 処理サンプルの段階希釈物(0.9%w/v NaCl内)を調製し、ラクトバチルスMRS培地プレート上に播いた。
6. 選択されたサンプル/サンプル4、43および45の希釈物を5μm フィルターでろ過した。
7. ろ過したサンプルをLactobacillus brevis 培地プレート上に置き、キャンドルジャー内で30℃にて2日間培養した。
8. プレートを計数した。
結果を表15にまとめた。CFUはサンプル4、43、および45と細菌を混合することによって減少した。5μmのフィルターでろ過することにより、CFUはさらに減少した。
抗菌活性試験(E.coli)。
試験微生物:E.coli(MG1655)
試験フィルター媒体:FW12、サンプル43、1、4、6、44および45.
0.5g フィルター媒体/5mL フィード(=10%固体)。
1. E.coli 培養物(未だ定常期に至らず)を2段階で希釈して〜105CFU/mL(1OD600≒5*108CFU/mLを基準)とした第1段の希釈はthe first滅菌LB培地を用い、第2段の希釈は滅菌PBS(これがフィード)にて行った。
2. フィードの段階希釈物(0.9%w/v NaCl)を調製した。
3. 100μLの希釈フィードサンプルをLAプレート上に播き、実際の開始CFU/mLを決定した。
4. フィルター媒体および10mLフィードを滅菌125mL バッフルフラスコ内へ投入し2時間、25℃、200rpm(4分の3インチストローク)にて混合した。
5. 混合サンプルの段階的希釈物(0.9%w/v NaCl内)を調製し、それぞれ100μl をLAプレートに播き、30℃で一晩培養した。
6. プレートの計数を行った。.
結果を表16にまとめた。
殺菌活性およびろ過試験(Lactobacillus brevis)。
試験微生物:Lactobacillus brevis 保存株(ATCC番号14869)
試験フィルタ媒体:サンプル43、4、および44
0.5gのフィルター媒体/5mL フィード(=10%固体)
1. Lactobacillus brevis 培養物を〜105CFU/mL(1OD600≒2.7*108CFU/mLを基準)へと、2段階で希釈した。第1段階の希釈は滅菌Lactobacillus MRS 培地で行い、第2段階は滅菌PBS(これがフィードである)で行った。
2. フィードの段階希釈物(0.9%w/v NaCl)を調製した。
3. 希釈したサンプル100μLLactobacillus MRS培地プレート上へ播き、実際の開始CFU/mLを決定した。
4. フィルター媒体および5mLフィードを滅菌した15mL円錐チューブへ投入し、2時間、25℃、250rpm(2分の1インチストローク)混合した。
5. 混合サンプルの段階的希釈物(0.9%w/v NaCl内)を調製し、Lactobacillus MRS 培地プレート上へ播いた(各100μl)。
6. 全サンプルを5μmシリンジフィルターでろ過した。
7. ろ過サンプルの段階的希釈物(0.9%w/v NaCl内)を調製し、Lactobacillus MRS 培地プレート上へ播いた。
8. プレートをキャンドルジャー内で30℃にて2日間インキュベートした。
9. プレートの計数を行った。.
結果を表17にまとめた。CFUはサンプル4、43、および44と細菌を混合することによって減少した。5μmのフィルターでろ過することにより、CFUはさらに減少した。
抗菌活性試験(Lactobacillus brevis)
試験した微生物::Lactobacillus brevis
試験したフィルター媒体:サンプル48、50、51、および52.
1. Lactobacillus brevis(グラム陽性)培養物をMRS寒天培地上に画線し、好気条件下26℃にて十分に増殖するまでインキュベートした。
2. MRSプレートから取ったコロニーを0.1%ペプトンで希釈して5x 104CFU/mLとなるようにして作業用種菌菌液を調製した。
3. 0.5gフィルター媒体を30mLガラス管中の接種菌液へ添加した。(5%)。
4. ガラス管を密封し、室温にて30分間、混合(8反転/分)。しながらインキュベートした。
5. 1:10の段階的希釈物を0.9%NaClにて調製し、細菌集団を数えるためにMRS寒天と共に流し平板法にてプレートを作成した。
6. プレートを26℃、好気条件下(GasPak)にて十分な数へと増殖するまでインキュベートした。
7. 20-200コロニーを有するプレートの計数を行った。結果を表18にまとめた。
抗菌活性試験(Acetobacter pasteurianus(グラム陰性))
試験した微生物::Acetobacter pasteurianus(グラム陰性)
試験したフィルター媒体:サンプル48、50、51、および52。
1. Acetobacter pasteurianus(グラム陰性)培養物をMRS寒天上に画線し、好気条件下27℃十分に増殖するまでインキュベートした。
2. 寒天培地上のコロニー1mlループを99mlnoMRS培地へ添加し、27℃でインキュベートして培養物をストックした。
3. 作業用接種菌液をMRS ストック培養物のアリコートをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)または0.1%ペプトンにて希釈して調製した。
4. 0.5gのフィルター媒体を10mL 接種菌液へ30mLのガラス管中で添加した。
5. ガラス管を密封し、室温にて30分間、混合(8反転/分)。しながらインキュベートした。
6. 1:10の段階的希釈物を0.1%ペプトンにて調製し、細菌集団を数えるためにMRS寒天と共に流し平板法にてプレートを作成した。
7. プレートを27℃、好気条件下(GasPak)にて十分な数へと増殖するまでインキュベートした。
20−200コロニーを有するプレートの計数を行った。結果を表18にまとめた。
抗菌活性試験(Saccharomyces diastaticus(酵母))
試験した微生物::Saccharomyces diastaticus(酵母)
試験したフィルター媒体:サンプル48、50、および51.
1. Saccharomyces diastaticus(酵母)培養物をYM寒天培地上へ画線し、好気条件、30℃にて十分に増殖するまでインキュベートした。
2. 作業用接種菌液をYMプレート上のコロニーをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)にて3x 104CFU/mLを目標として希釈し、調製した。
3. 0.5gのフィルター媒体を10mL 接種菌液へ30mLのガラス管中で添加した。
4. ガラス管を密封し、室温にて30分間、混合(8反転/分)。しながらインキュベートした。
5. 1:10の段階的希釈物を0.9%NaClにて調製し、細菌集団を数えるためにMRS寒天と共に流し平板法にてプレートを作成した。
6.プレートを30℃、好気条件下(GasPak)にて十分な数へと増殖するまでインキュベートした。
7. 20-200コロニーを有するプレートの計数を行った。結果を表18にまとめた。
Claims (32)
- 下記工程:
(a) 粒子状および可溶性物質を含有するサンプルを、表面上の活性基が1以上のシランと反応されているシリカフィルター媒体でろ過する、
(b) 同時に粒子状物質の捕捉および目的とする可溶性成分のシリカフィルター媒体への結合を行う、および
(c) 目的成分をシリカフィルター媒体より溶離する、
を含有する、1以上の目的成分をサンプルより分離する方法。 - 下記工程:
(a) 粒子状および可溶性物質を含有するサンプルを、表面上の活性基が1以上のシランと反応されているシリカフィルター媒体でろ過する、
(b) 同時に粒子状物質の捕捉および望ましくない可溶性成分のシリカフィルター媒体上への結合を行う、
(c) ろ液を回収する、および
(d) ろ液より目的可溶性成分を回収する
を含有する、1以上の目的成分をサンプルより分離する方法。 - 下記工程:
(a) 粒子状および可溶性物質を含有するサンプルを、表面上の活性基が1以上のシランと反応されているシリカフィルター媒体でろ過する、
(b) 同時に粒子状物質の捕捉および第1の可溶性目的成分のシリカフィルター媒体上への結合を行う、
(c) ろ液を回収する、
(d) 結合している第1の可溶性目的成分をシリカフィルター媒体より溶離させる、および
(e) 第1の可溶性目的成分を回収する
を含有する、可溶性成分をサンプルより分離する方法。 - さらに可溶性目的成分をろ液流から精製する工程を含む、請求項2または3記載の方法。
- 前記粒子状物質が物理的封じ込めおよび/またはシリカフィルター媒体への結合により捕捉される、請求項1〜3いずれかに記載の方法
- 前記粒子状物質が微生物、沈殿物、封入体または結晶である、請求項@〜@いずれかに記載の方法。
- 前記微生物がグラム陽性細菌、グラム陰性細菌、菌類、酵母、カビ、またはウイルスである、請求項6記載の方法。
- ろ過工程の前に前記サンプルを前記シリカフィルター媒体と前混合する工程を有する、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- 前記可溶性成分がシリカフィルター媒体へ静電、疎水性、または親水性相互作用によって結合される、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- 前記可溶性成分がポリペプチド、脂質、炭水化物、リポタンパク質、多糖、糖、脂肪酸、またはポリヌクレオチドである、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- 前記表面の活性基がドライまたはウエット工程により1以上のシランと反応されている、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- 前記シリカフィルター媒体がマクロポーラスシリカである、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- 前記シリカフィルター媒体が精製または未精製もみ殻灰、カラスムギ殻灰、または珪藻土である、請求項12記載の方法。
- 下記の群:アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アリールオキシ、アミノ、カルボキシ、シアノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルキルエステル、アリールエステルから選択され、シリカフィルター媒体上の活性基と反応している1以上の加水分解性部分を有するものである、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- 前記シランが4級アンモニウム、アリール、エポキシ、アミノ、アミド、スルフリル、尿素、イソシアノ、ウレタン、エーテル、メタクリレート、イミダゾール、カルボニル、イソチオリウム、スルホネートおよびホスホネートからなる群から選択されるさらなる官能基部分を有している、請求項14記載の方法。
- 前記アリール部分を有するシランが2-ヒドロキシ-4-(3-トリエトキシシリルプロポキシ)-ジフェニルケトンまたは((クロロメチル)フェニルエチル)トリメトキシシランである、請求項15記載の方法。
- 前記アミノ部分を有するシランが2-(トリメトキシシリルエチル)ピリミジン、N-(3-トリメトキシシリルプロピル)ピロール、またはトリメトキシシリルプロピルポリエチレンイミンである請求項15記載の方法。
- 前記尿素部分を有するシランがN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタンである請求項15記載の方法。
- 前記スルフヒドリル部分を有するシランが3-メルカプトプロピルトリエトキシシランである、請求項15記載の方法。
- 前記カルボニル部分を有するシランが3-(トリエトキシシリル)プロピルコハク酸無水物である、請求項15記載の方法。
- 前記イソシアノ部分を有するシランがトリス(3-トリメトキシシリルプロピル)イソシアヌレートまたは3-イソシアナートプロピルトリエトキシシランである請求項15記載の方法。
- 前記エーテル部分を有するシランがビス[(3-メチルジメトキシシリル)プロピル]-ポリプロピレンオキシドである請求項15記載の方法。
- 前記エポキシ部分を有するシランが2-(3,4-エポキシシクロヘキシル)エチルトリメトキシシランである、請求項15記載の方法。
- 前記イミダゾール部分を有するシランがN-(3-トリエトキシシリルプロピル)-4,5-ジヒドロイミダゾールである、請求項15記載の方法。
- 前記スルホネート部分を有するシランが2-(4-クロロスルホニルフェニル)-エチルトリクロロシランである、請求項15記載の方法。
- 前記イソチオウリウム(isothiourium)部分を有するシランがトリメトキシシリルプロピルイソチオウロニウムクロライドである、請求項15記載の方法。
- 前記アミド部分を有するシランがトリエトキシシリルプロピルエチル-カルバメート、N-(3-トリエトキシシリルプロピル)-グルコンアミドまたはN-(トリエトキシシリルプロピル)-4-ヒドロキシブチルアミドである、請求項15記載の方法。
- 前記ウレタン部分を有するシランがN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタンまたはO-(プロパルギルオキシ)-N-(トリエトキシシリルプロピル)ウレタンである、請求項15記載の方法。
- 前記シランが下記:3-(トリメトキシシリル)プロピル-エチレンジアミントリ酢酸トリナトリウム塩;トリメトキシシリルプロピル-エチレンジアミントリ酢酸トリナトリウム塩および3-(トリヒドロキシシリル)プロピルメチルリン酸ナトリウム塩、からなる群から選択されるイオン性シランである、請求項15記載の方法。
- 前記1以上のシランが3−アミノプロピルトリメトキシシランおよびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;3−トリヒドロシリルプロピルメチルリン酸ナトリウム塩およびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;N−トリメトキシシリルプロピル−N,N,N−Cl、トリメチルアンモニウムクロリドおよび(3−グリシドキシプロピル)トリメトキシシラン;3−トリヒドロシリルプロピルメチルリン酸ナトリウム塩およびビス−(2−ヒドロキシエチル)−3−アミノイソプロピルトリエトキシシラン;3−(N−スチリルメチル−2−アミノエチルアミノ)−プロピルトリメトキシシランハイドロクロライドおよびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;2−(トリメトキシシリルエチル)ピリジンおよびN−(3−トリエトキシシリルプロピル)−グルコンアミド;N−トリメトキシシリルプロピル−N,N,N−Cl、トリメチルアンモニウムクロリドおよびN−(3−トリエトキシシリルプロピル)−グルコンアミド;N−トリメトキシシリルプロピル−N,N,N−Cl、トリメチルアンモニウムクロリドおよび2−ヒドロキシ−4−(3−トリエトキシシリルプロポキシ)−ジフェニルケトン;3−メルカプトプロピルトリエトキシシランおよびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;3−(トリエトキシシリル)プロピルコハク酸無水物およびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;トリメトキシシリルプロピル−エチレンジアミン、トリ酢酸トリナトリウム塩およびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;2−(4−クロロスルホニルフェニル)−エチルトリクロロシランおよびN−(トリエトキシシリルプロピル)−O−ポリエチレンオキシドウレタン;および2−(4−クロロスルホニルフェニル)−エチルトリクロロシランおよびビス−(2−ヒドロキシエチル)−3−アミノイソプロピルトリエトキシシランからなる群から選択される、請求項1記載の方法。
- もみ殻灰またはカラスムギ殻灰の表面活性基が下記2-ヒドロキシ-4-(3-トリエトキシシリルプロポキシ)-ジフェニルケトン、((クロロメチル)フェニルエチル)トリメトキシシラン、2-(トリメトキシシリルエチル)ピリミジン、N-(3-トリメトキシシリルプロピル)ピロール、トリメトキシシリルプロピルポリエチレンイミン、N-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン、3-メルカプトプロピルトリエトキシシラン、3-(トリエトキシシリル)プロピルコハク酸無水物、トリス(3-トリメトキシシリルプロピル)イソシアヌレートまたは3-イソシアナートプロピルトリエトキシシラン、ビス[(3-メチルジメトキシシリル)プロピル]-ポリプロピレンオキシド、2-(3,4-エポキシシクロヘキシル)エチルトリメトキシシラン、N-[3-(トリエトキシシリル)プロピル]イミダゾールまたはN-(3-トリエトキシシリルプロピル)-4,5-ジヒドロイミダゾール、2-(4-クロロスルホニルフェニル)-エチルトリクロロシラン、トリメトキシシリルプロピルイソチオウロニウムクロリド、トリエトキシシリルプロピルエチル-カルバメート、N-(3-トリエトキシシリルプロピル)-グルコンアミドまたはN-(トリエトキシシリルプロピル)-4-ヒドロキシブチルアミド、N-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタンまたはO-(プロパルギルオキシ)-N-(トリエトキシシリルプロピル)ウレタン、3-(トリメトキシシリル)プロピル-エチレンジアミントリ酢酸トリナトリウム塩;トリメトキシシリルプロピル-エチレンジアミン、トリ酢酸トリナトリウム塩および3-(トリヒドロキシシリル)プロピルメチルリン酸ナトリウム塩からなる群から選択される1以上のシランと反応されているシラン処理もみ殻灰またはカラスムギ殻灰。
- もみ殻灰またはカラスムギ殻灰の表面活性基が下記3-アミノプロピルトリメトキシシランおよびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;3-トリヒドロシリルプロピルメチルホスフォネート、ナトリウム塩およびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;N-トリメトキシシリルプロピル-N,N,N-Cl、トリメチルアンモニウムクロライドおよび(3-グリシドキシプロピル)トリメトキシシラン;3-トリヒドロキシシリルプロピルメチルフォスホネート、ナトリウム塩およびビス-(2-ヒドロキシエチル)-3-アミノイソプロピルトリエトキシシラン;3-(N-スチリルメチル-2-アミノエチルアミノ)-プロピルトリメトキシシランハイドロクロライドおよびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;2-(トリメトキシシリルエチル)ピリミジンおよびN-(3-トリエトキシシリルプロピル)-グルコンアミド;N-トリメトキシシリルプロピル-N,N,N-Cl、トリメチルアンモニウムクロライドおよびN-(3-トリエトキシシリルプロピル)-グルコンアミド;N-トリメトキシシリルプロピル-N,N,N-Cl、トリメチルアンモニウムクロライドおよび2-ヒドロキシ-4-(3-トリエトキシシリルプロポキシ)-ジフェニルケトン;3-メルカプトプロピルトリエトキシシランおよびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;3-(トリエトキシシリル)プロピルコハク酸無水物およびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;トリメトキシシリルプロピル-エチレンジアミン、トリ酢酸、トリナトリウム塩およびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;2-(4-クロロスルホニルフェニル)-エチルトリクロロシランおよびN-(トリエトキシシリルプロピル)-O-ポリエチレンオキシドウレタン;および2-(4-クロロスルホニルフェニル)-エチルトリクロロシランおよびビス-(2-ヒドロキシエチル)-3-アミノイソプロピルトリエトキシシランからなる群から選択される1以上のシランと反応されているシラン処理もみ殻灰またはカラスムギ殻灰。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017512634A (ja) * | 2014-03-21 | 2017-05-25 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 水処理用のファウリング耐性膜 |
JP2018516828A (ja) * | 2015-03-19 | 2018-06-28 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | グアニジン官能化パーライト粒子、この粒子を含有する物品、並びにこの粒子及び物品の使用方法 |
Families Citing this family (46)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7264728B2 (en) * | 2002-10-01 | 2007-09-04 | Dow Corning Corporation | Method of separating components in a sample using silane-treated silica filter media |
US20050197496A1 (en) * | 2004-03-04 | 2005-09-08 | Gtc Biotherapeutics, Inc. | Methods of protein fractionation using high performance tangential flow filtration |
EP1804950B1 (en) * | 2004-10-01 | 2016-06-01 | Phenomenex, Inc. | Ph stable chromatographic media using templated multilayer organic/inorganic grafting |
EP1807171A1 (en) * | 2004-10-15 | 2007-07-18 | Cuno Incorporated | Pleated multi-layer filter media and cartridge |
US20060130159A1 (en) * | 2004-12-09 | 2006-06-15 | Nick Masiello | Method of purifying recombinant MSP 1-42 derived from Plasmodium falciparum |
US7828967B2 (en) * | 2005-12-14 | 2010-11-09 | Shaw Mark D | Water purification system |
US7531632B2 (en) * | 2006-02-16 | 2009-05-12 | Gtc Biotherapeutics, Inc. | Clarification of transgenic milk using depth filtration |
US7514010B2 (en) * | 2007-03-08 | 2009-04-07 | Salmon Daniel J | Water filtering method and apparatus |
CN101883485A (zh) * | 2007-10-02 | 2010-11-10 | 世界矿物公司 | 经由包括功能颗粒载体材料的表面处理的方法而增强的保留能力和由其制得的功能颗粒载体材料 |
US20100323073A1 (en) * | 2008-01-22 | 2010-12-23 | Jie Lu | Freshwater diatomaceous earth products containing reduced soluble metal levels, processes for reducing soluble metal levels in freshwater diatomaceous earth products, and methods of using the same |
CN102083898B (zh) * | 2008-05-05 | 2013-08-14 | 英默里斯筛选矿物公司 | 有机-中和的硅藻土及其制备方法和应用 |
DE102009006007B4 (de) * | 2009-01-23 | 2015-03-12 | Axagarius Gmbh & Co. Kg | Verwendung von zwitterionischen Adsorbentien für die Flüssigchromatographie, Chromatographiesäule mit solchen Adsorbentien sowie deren Verwendung |
US8551339B2 (en) * | 2009-03-06 | 2013-10-08 | Heritage Environmental Services Llc | Use of silica for the removal of organosilanes |
JP5193925B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2013-05-08 | 太陽ホールディングス株式会社 | 熱硬化性樹脂組成物及びその硬化物 |
US9272260B2 (en) * | 2009-08-14 | 2016-03-01 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Methods of synthesis and purification by use of a solid support |
US8138117B2 (en) * | 2009-09-08 | 2012-03-20 | Battelle Memorial Institute | Functionalized sorbent for chemical separations and sequential forming process |
US8858821B2 (en) * | 2010-12-14 | 2014-10-14 | King Abdulaziz City For Science And Technology | Magnetic extractants, method of making and using the same |
EP2652491B1 (en) | 2010-12-15 | 2017-11-29 | Baxalta GmbH | Eluate collection using conductivity gradient |
SG191781A1 (en) | 2010-12-30 | 2013-08-30 | Lab Francais Du Fractionnement | Glycols as pathogen inactivating agents |
US9731221B2 (en) | 2011-05-25 | 2017-08-15 | Cidra Corporate Services, Inc. | Apparatus having polymer surfaces having a siloxane functional group |
PE20142002A1 (es) * | 2011-05-25 | 2014-12-21 | Cidra Corporate Services Inc | Tecnicas para transportar perlas o burbujas sinteticas en una celda o columna de flotacion |
GB201115823D0 (en) | 2011-09-13 | 2011-10-26 | Novel Polymer Solutions Ltd | Mineral processing |
JP5702699B2 (ja) * | 2011-10-26 | 2015-04-15 | 信越化学工業株式会社 | リソグラフィー用レジスト組成物の製造方法、レジスト保護膜形成用組成物の製造方法、ケイ素含有レジスト下層膜形成用組成物の製造方法、及び有機レジスト下層膜形成用組成物の製造方法 |
US11628381B2 (en) | 2012-09-17 | 2023-04-18 | W.R. Grace & Co. Conn. | Chromatography media and devices |
MY195756A (en) * | 2012-09-17 | 2023-02-09 | Grace W R & Co | Functionalized Particulate Support Material and Methods of Making and Using the Same |
GB2508350A (en) * | 2012-11-28 | 2014-06-04 | Phosphonics Ltd | A process for the selective removal of a catalyst from a liquid phase |
US9620344B2 (en) * | 2013-06-25 | 2017-04-11 | Purdue Research Foundation | Mass spectrometry analysis of microorganisms in samples |
PL3016729T3 (pl) | 2013-07-05 | 2020-09-07 | Laboratoire Français Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Société Anonyme | Matryca do chromatografii powinowactwa |
WO2015039170A1 (en) * | 2013-09-20 | 2015-03-26 | Medisotec | Multifunctional sorbent materials and uses thereof |
ES2929099T3 (es) | 2014-05-02 | 2022-11-24 | Grace W R & Co | Material de soporte funcionalizado y métodos de fabricación y uso de material de soporte funcionalizado |
US11028337B1 (en) * | 2014-05-15 | 2021-06-08 | Freshfry Llc | Structure including rice hull ash and reinforcing binder for adsorbing contaminants from cooking oil |
US11840797B1 (en) | 2014-11-26 | 2023-12-12 | Microban Products Company | Textile formulation and product with odor control |
US10391433B2 (en) | 2014-12-19 | 2019-08-27 | Ep Minerals, Llc | Opaline biogenic silica/expanded perlite composite products |
US10444127B2 (en) * | 2015-04-29 | 2019-10-15 | Recep Avci | Biyo trap |
JP2018517559A (ja) | 2015-06-05 | 2018-07-05 | ダブリュー・アール・グレース・アンド・カンパニー−コーンW R Grace & Co−Conn | 吸着性バイオプロセス清澄化剤並びにその製造及び使用方法 |
EP3377191B1 (en) | 2015-11-18 | 2023-05-31 | Imerys Filtration Minerals, Inc. | Cationic composite silicate filter aids |
MY186792A (en) | 2016-02-04 | 2021-08-20 | Ind Tech Res Inst | Method for separating hydrolysis product of biomass |
US11709155B2 (en) * | 2017-09-18 | 2023-07-25 | Waters Technologies Corporation | Use of vapor deposition coated flow paths for improved chromatography of metal interacting analytes |
CN111239311A (zh) * | 2018-11-28 | 2020-06-05 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种婴幼儿排泄物中酸性糖及酸性糖衍生物的分析方法 |
ES2727673B2 (es) | 2019-02-18 | 2021-03-03 | Univ Valencia Politecnica | Procedimiento de adsorcion de nitratos mediante silice modificada activa a partir de ceniza de paja de arroz |
CN110029105A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-07-19 | 成都罗宁生物科技有限公司 | 一种提取微生物dna的试剂盒及其方法 |
US11571681B2 (en) | 2020-02-05 | 2023-02-07 | King Fahd University Of Petroleum And Minerals | Aminated siliceous adsorbent from rice husk ash and a method of capturing carbon dioxide |
WO2022104112A1 (en) * | 2020-11-12 | 2022-05-19 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for advancing reactions between multiple chambers of a testing device |
CN112755985B (zh) * | 2020-12-28 | 2023-08-25 | 纳谱分析技术(苏州)有限公司 | 一种液相色谱分离介质及其制备方法和应用 |
WO2022162251A1 (es) | 2021-01-27 | 2022-08-04 | Fundació Institut De Ciències Fotòniques | Membrana de polipropileno (pp) recubierta con un organometoxisilano, procedimiento para su fabricación y usos |
US20220341826A1 (en) * | 2021-04-22 | 2022-10-27 | Innovaprep Llc | Prefilters for particle concentrators |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63137668A (ja) * | 1986-11-28 | 1988-06-09 | Jgc Corp | 蒸留酒の品質改善方法 |
JP2000007785A (ja) * | 1998-06-19 | 2000-01-11 | Seiwa Kasei Kk | シラン化合物共重合組成物およびその製造方法 |
WO2002038758A1 (en) * | 2000-11-13 | 2002-05-16 | Promega Corporation | Lysate clearance and nucleic acid isolation using silanized silica matrices |
WO2002046710A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Foundation For Research And Technology-Hellas | An imaging method and apparatus for the non-destructie analysis of paintings and monuments |
US6712974B1 (en) * | 1997-01-10 | 2004-03-30 | Advanced Minerals Corporation | Filterable composite adsorbents |
Family Cites Families (64)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5776353A (en) * | 1996-02-16 | 1998-07-07 | Advanced Minerals Corporation | Advanced composite filtration media |
US3684467A (en) * | 1970-04-08 | 1972-08-15 | Clayton A Smucker | Terpolymer binder composition |
US3680699A (en) * | 1970-07-17 | 1972-08-01 | Johns Manville | Method of water filtration |
US3810843A (en) * | 1971-05-28 | 1974-05-14 | Gen Electric | Silicone-silica compositions |
US3865728A (en) * | 1971-11-12 | 1975-02-11 | Dow Corning | Algicidal surface |
DE2313073C2 (de) * | 1973-03-16 | 1984-11-29 | Istvan Prof. Dr. 6600 Saarbruecken Halasz | Verfahren zur chemischen Modifizierung von Oberflächen anorganischer Festkörper und deren Verwendung |
US4187120A (en) * | 1978-05-30 | 1980-02-05 | Ecodyne Corporation | Method for purification of polyhydric alcohols |
US4290892A (en) * | 1978-10-23 | 1981-09-22 | Varian Associates, Inc. | Anion exchange chromatographic separation of polyfunctional compounds |
US4238334A (en) * | 1979-09-17 | 1980-12-09 | Ecodyne Corporation | Purification of liquids with treated filter aid material and active particulate material |
US4322542A (en) * | 1980-01-17 | 1982-03-30 | Varian Associates, Inc. | Strong anion exchange composition |
US4645567A (en) * | 1980-02-04 | 1987-02-24 | Cuno, Inc. | Filter media and method of making same |
US4298500A (en) * | 1980-05-05 | 1981-11-03 | Varian Associates, Inc. | Mixed phase chromatographic compositions |
US4473474A (en) * | 1980-10-27 | 1984-09-25 | Amf Inc. | Charge modified microporous membrane, process for charge modifying said membrane and process for filtration of fluid |
US4379931A (en) * | 1981-07-01 | 1983-04-12 | Dow Corning Corporation | Metal extraction from solution and novel compounds used therefor |
US4594158A (en) * | 1981-09-03 | 1986-06-10 | Rohm And Haas | Filter aid materials bearing anion exchange resins |
US4734208A (en) * | 1981-10-19 | 1988-03-29 | Pall Corporation | Charge-modified microfiber filter sheets |
PH18548A (en) * | 1982-09-08 | 1985-08-09 | Unilever Nv | Calcined silicas and their use in beer clarification |
US4619911A (en) * | 1983-01-24 | 1986-10-28 | Molly Maguire, Inc. | Sorbant and process using rice hull ash compositions |
US4571389A (en) * | 1983-01-24 | 1986-02-18 | Molly Maguire, Inc. | Rice hull ash compositions |
US4724207A (en) * | 1984-02-02 | 1988-02-09 | Cuno Incorporated | Modified siliceous chromatographic supports |
US4682992A (en) * | 1984-06-25 | 1987-07-28 | Potters Industries, Inc. | Microbicidal coated beads |
US4645605A (en) | 1984-07-13 | 1987-02-24 | Agritec, Inc. | Filtration with biogenetic silica |
DE3570089D1 (en) | 1984-11-26 | 1989-06-15 | Pq Corp | Prevention of chill haze in beer |
CH663728A5 (fr) * | 1985-06-10 | 1988-01-15 | Battelle Memorial Institute | Procede de purification de substances bioactives par adsorption biospecifique. |
US5240602A (en) | 1987-06-08 | 1993-08-31 | Chromatochem, Inc. | Chromatographic material |
US5277813A (en) * | 1988-06-17 | 1994-01-11 | S.A.C. Corporation | Shielded stationary phases |
US5019173A (en) * | 1988-09-29 | 1991-05-28 | Dow Corning Corporation | Cleaning method for water containing vessels and systems |
US5073281A (en) * | 1989-05-08 | 1991-12-17 | Paules John R | Pelletized rice hull ash and bentonite clay insulation |
US5013459A (en) * | 1989-11-09 | 1991-05-07 | Dow Corning Corporation | Opthalmic fluid dispensing method |
US5073195A (en) * | 1990-06-25 | 1991-12-17 | Dow Corning Corporation | Aqueous silane water repellent compositions |
JPH05212241A (ja) | 1992-02-04 | 1993-08-24 | Mitsubishi Heavy Ind Ltd | 水銀除去剤及びその製造方法 |
DE4207183A1 (de) * | 1992-03-06 | 1993-09-09 | Schips Ag | Vorrichtung zum zufuehren von naehgut, insbesondere mit sich einrollenden kanten |
US5360633A (en) * | 1993-01-14 | 1994-11-01 | Uncle Ben's, Inc. | Rice hull ash |
JP3229116B2 (ja) | 1994-03-10 | 2001-11-12 | 日本バイリーン株式会社 | カートリッジフィルタ及びその製造方法 |
JPH08119619A (ja) | 1994-10-26 | 1996-05-14 | Tokuyama Corp | シリカ粒子の表面処理方法 |
US5637229A (en) * | 1995-02-17 | 1997-06-10 | Enviroguard, Inc. | Self flocculating separation medium and method |
US5888397A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-30 | Arch Develop. Corp. | Process for recovering chaotropic anions from an aqueous solution also containing other ions |
ATE327774T1 (de) | 1996-03-21 | 2006-06-15 | Bayer Corp | Verwendung von strukturierten tiefenfiltern zur entfernung von viren |
US6375735B1 (en) * | 1996-05-06 | 2002-04-23 | Agritec, Inc. | Precipitated silicas, silica gels with and free of deposited carbon from caustic biomass ash solutions and processes |
US5714000A (en) * | 1996-05-06 | 1998-02-03 | Agritec, Inc. | Fine-celled foam composition and method |
SE9601789D0 (sv) | 1996-05-10 | 1996-05-10 | Pharmacia Biotech Ab | Beverage stabilization |
EP0814156B1 (en) | 1996-06-18 | 2003-03-05 | The Institute Of Physical & Chemical Research | Method for the purification of DNA |
US5856429A (en) * | 1996-06-28 | 1999-01-05 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Polyamide compositions for removal of polyphenols from liquids |
US5628910A (en) * | 1996-06-28 | 1997-05-13 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Polyamide compositions for removal of polyphenols from liquids |
JP3165787B2 (ja) | 1996-07-29 | 2001-05-14 | 株式会社トクヤマ | 無機粒子の表面処理方法 |
US5886429A (en) * | 1997-12-11 | 1999-03-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Voltage sag/swell testing station |
US6521290B1 (en) * | 1998-05-18 | 2003-02-18 | Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. | Silica particles surface-treated with silane, process for producing the same and uses thereof |
US6071410A (en) * | 1998-11-16 | 2000-06-06 | Varian, Inc. | Recovery of organic solutes from aqueous solutions |
US6686035B2 (en) * | 1999-02-05 | 2004-02-03 | Waters Investments Limited | Porous inorganic/organic hybrid particles for chromatographic separations and process for their preparation |
WO2000048706A1 (en) | 1999-02-18 | 2000-08-24 | Lecigel Llc | Clarification of carbohydrate hydrolysates |
US6310110B1 (en) * | 1999-07-30 | 2001-10-30 | Michael A. Markowitz | Molecularly-imprinted material made by template-directed synthesis |
US6649083B1 (en) * | 1999-08-12 | 2003-11-18 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Combined porous organic and inorganic oxide materials prepared by non-ionic surfactant templating route |
GB9919127D0 (en) | 1999-08-13 | 1999-10-13 | Avecia Ltd | Filter |
GB2355711B (en) * | 1999-10-27 | 2003-12-24 | Agilent Technologies Inc | Porous silica microsphere scavengers |
US6528034B1 (en) * | 1999-11-09 | 2003-03-04 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Ultra-stable lamellar mesoporous silica compositions and process for the prepration thereof |
US6749813B1 (en) * | 2000-03-05 | 2004-06-15 | 3M Innovative Properties Company | Fluid handling devices with diamond-like films |
JP4372331B2 (ja) | 2000-11-07 | 2009-11-25 | 電気化学工業株式会社 | シリカ微粉の表面改質法 |
US6765041B1 (en) | 2000-11-27 | 2004-07-20 | Millenium Inorganic Chemicals, Inc. | Organo-acid phosphate treated pigments |
US6641648B2 (en) | 2001-04-17 | 2003-11-04 | Foster-Miller, Inc. | Passive filtration system |
US6713643B2 (en) * | 2001-05-24 | 2004-03-30 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Ultrastable organofunctional microporous to mesoporous silica compositions |
US6833075B2 (en) * | 2002-04-17 | 2004-12-21 | Watervisions International, Inc. | Process for preparing reactive compositions for fluid treatment |
US7264728B2 (en) * | 2002-10-01 | 2007-09-04 | Dow Corning Corporation | Method of separating components in a sample using silane-treated silica filter media |
CA2500466C (en) | 2002-10-01 | 2013-02-26 | Dow Corning Corporation | Method of separating components in a sample using silane-treated silica filter media |
US7201841B2 (en) * | 2003-02-05 | 2007-04-10 | Water Visions International, Inc. | Composite materials for fluid treatment |
-
2004
- 2004-04-23 US US10/830,935 patent/US7264728B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
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-
2012
- 2012-09-04 JP JP2012194495A patent/JP2013049054A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63137668A (ja) * | 1986-11-28 | 1988-06-09 | Jgc Corp | 蒸留酒の品質改善方法 |
US6712974B1 (en) * | 1997-01-10 | 2004-03-30 | Advanced Minerals Corporation | Filterable composite adsorbents |
JP2000007785A (ja) * | 1998-06-19 | 2000-01-11 | Seiwa Kasei Kk | シラン化合物共重合組成物およびその製造方法 |
WO2002038758A1 (en) * | 2000-11-13 | 2002-05-16 | Promega Corporation | Lysate clearance and nucleic acid isolation using silanized silica matrices |
WO2002046710A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Foundation For Research And Technology-Hellas | An imaging method and apparatus for the non-destructie analysis of paintings and monuments |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017512634A (ja) * | 2014-03-21 | 2017-05-25 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 水処理用のファウリング耐性膜 |
JP2018516828A (ja) * | 2015-03-19 | 2018-06-28 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | グアニジン官能化パーライト粒子、この粒子を含有する物品、並びにこの粒子及び物品の使用方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US7264728B2 (en) | 2007-09-04 |
US7850012B2 (en) | 2010-12-14 |
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